專利名稱：：一種生何首烏和制何首烏的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明一種中藥質(zhì)量控制方法，尤其涉及一種生何首烏及制何首烏的質(zhì)量控制方法；
背景技術(shù)：
：何首烏始載于《日華子本草》，為蓼科植物何首烏(尸o/;^oww附wwfey7on/附r/柳6)的干燥塊^f艮，主產(chǎn)于河南、山東、湖北、四川、江蘇、廣西等地，多為野生，亦有栽培，是著名的生熟異治的中藥，有生何首烏和制何首烏之分；生何首烏其性平，味甘、苦；歸心、肝、大腸經(jīng)；制何首烏其性微溫、味甘、澀，歸肝、腎經(jīng);生何首烏截癡解毒，潤(rùn)腸通便；制何首烏功善補(bǔ)益精血，固腎烏須；李時(shí)珍在《本草綱目》中記載"凡諸名山,深山產(chǎn)者,即大而佳也"；目前生、制何首烏藥材市場(chǎng)需求量與日倶增，以次充好的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，這嚴(yán)重影響了生、制何首烏在海內(nèi)外的聲譽(yù)；現(xiàn)有中藥何首烏的主要質(zhì)量控制方法，是釆用2005年版的《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定的性狀檢查，顯微鑒定，理化鑒別和一種指標(biāo)成分(2,3,4，,5-四羥基二苯乙烯-2-O-P-D-吡喃葡萄糖香)含量的測(cè)定。這種質(zhì)量控制方法中的外觀性狀鑒別(包括顯微鑒定)，主觀因素強(qiáng)，檢測(cè)結(jié)果不客觀準(zhǔn)確，誤差大。并且何首烏的藥效并不只與單一成分有關(guān)，而是由多種活性成份確定，單一的成分含量測(cè)定方法存在局限性，不能準(zhǔn)確地反映何首烏的藥效。因此，現(xiàn)有的中藥何首烏的質(zhì)量控制方法不能滿足生產(chǎn)與利用的需要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的就是提供一種生何首烏和制何首烏的質(zhì)量控制方法，該方法判定依據(jù)多樣，既能實(shí)現(xiàn)對(duì)生、制何首烏主要化學(xué)成分的定性檢測(cè)，又測(cè)定兩種主要成分的含量，實(shí)現(xiàn)對(duì)藥材質(zhì)量的全方位監(jiān)控；其^r測(cè)結(jié)果可靠、準(zhǔn)確，減少了為質(zhì)量達(dá)標(biāo)而人為處理的可能性。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)其發(fā)明目的，所采用的技術(shù)方案是一種生何首烏和制何首烏的質(zhì)量控制方法，由以下步驟構(gòu)成A、指紋圖譜比較Al、建立生何首烏或制何首烏標(biāo)準(zhǔn)指紋圖i普取生何首烏或制何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材的粉末0.1-0.3克，溶于8ml的丙酮中，超聲處理0.5-1小時(shí)后過(guò)濾，取濾液，重復(fù)三次，合并濾液，添加丙酮，定容至25ml,得標(biāo)準(zhǔn)藥材的丙酮溶液，精密量取5ml丙酮溶液，待丙酮揮干后，得干粉，取干粉溶于甲醇得曱醇溶液，甲醇溶液用孔徑為0.45微米的微孔濾膜過(guò)濾后，得生何首烏或制何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材溶液；吸取生何首烏或制何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材溶液，注入高效液相色譜儀，建立起生何首烏或制何首烏標(biāo)準(zhǔn)藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；A2、制作待測(cè)生何首烏或制何首烏的指紋圖譜將Al步中的標(biāo)準(zhǔn)生何首烏或制何首烏藥材的粉末替換為待測(cè)的生何首烏或制何首烏藥材的粉末，然后采用A1步完全相同的操作，制得生何首烏或制何首烏待測(cè)藥材的指紋圖語(yǔ)；A3、圖譜比較計(jì)算出A2步的指紋圖傳與Al步的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度；若指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度>0.卯0，將對(duì)應(yīng)的待測(cè)藥材進(jìn)行以下步驟的操作；否則為不合格，結(jié)束操作；B、2，3,4，，5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苷指標(biāo)成分的含量測(cè)定Bl、對(duì)照品溶液的制備精密稱取3.2-3.4mg的2,3,4，，5-四羥基二苯乙烯-2-0-0-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)照品，置于10ml容量瓶中，力。50%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配得濃度為0.32-0.34g/L的對(duì)照品溶液；B2、待測(cè)品溶液的制備稱取生何首烏或者制何首烏粉末0.28,置于100ml錐形瓶中，加入50%乙醇25ml，稱定質(zhì)量，加熱回流30min,;改冷，再稱定質(zhì)量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，上清液用0.45pm微孔濾膜濾過(guò)，即得生何首烏或制何首烏的《寺測(cè)品溶液；B3、待測(cè)品含量的測(cè)定精密量取相同體積的對(duì)照品溶液和待測(cè)品溶液，采用高效液相色譜法測(cè)出待測(cè)品溶液中2，3，4，,5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苷的含量，并換算出待測(cè)生何首烏或者制何首烏中的2,3，4，,5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苷成分占整個(gè)待測(cè)藥材干物質(zhì)的百分含量；C、大黃素指標(biāo)成分的含量測(cè)定Cl、對(duì)照品溶液的制備精密稱取大黃素2.8-3.2mg，置100ml容量瓶中，加曱醇溶解并稀釋至IOOml，搖勻；C2、待測(cè)品溶液的制備精密稱取生何首烏或者制何首烏粉末各0.15g，置100ml錐形瓶中，精密加甲醇25ml，稱定質(zhì)量，加熱回流lh，冷卻，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)；精密量取濾液5ml，置100ml錐形瓶中，揮去甲醇，力口8%鹽酸10ml，超聲處理2min,再加氯仿10ml,力口熱回流1h,冷卻；回流液移置分液漏斗中，用少量氯仿洗滌100ml錐形^L，并入分液漏斗中，分取下層的氯仿液；上層的鹽酸液再用氯仿提取及分取3次，每次氯仿用量8-12ml，合并氯仿液，移至100ml錐形瓶中，揮去氯仿至干；殘?jiān)蛹状既芙?，?0ml容量瓶中定容，用0.45jum微孔濾膜濾過(guò)，即得待測(cè)生何首烏或者制何首烏粉末的待測(cè)品溶液；C3、待測(cè)品含量的測(cè)定精密量取相同體積的對(duì)照品溶液和待測(cè)品溶液，采用高效液相色譜法測(cè)出待測(cè)品溶液中大黃素的含量，并換算出待測(cè)生何首烏或者制何首烏中的大黃素成分占整個(gè)待測(cè)藥材干物質(zhì)的百分含量；D、判定指標(biāo)成含量若待測(cè)的生何首烏藥材中2，3,4，，5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苷的百分含量>3.00°/。且大黃素的百分含量>0.050%,則判定待測(cè)的生何首烏藥材合格，否則不合格若待測(cè)的制何首烏藥材中2，3,4，，5-四羥基二苯乙烯-2-OI3-D-吡喃葡萄糖苷含量>1.93%且大黃素的含量>0.067%,則判定待測(cè)的制何首烏藥材合格，否則不合格。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是一、指紋圖語(yǔ)比較采用室溫超聲提取法，提取何首烏的有效成分，避免了何首烏的主要有效成分一二苯乙烯苷(SG)類化合物在熱溶劑中的分解，并且采用丙酮為溶劑，其提取效果最好1、何首烏主要的活性成分二苯乙烯苷類(SG)、蒽醌類等化合物均能被有效地提取出來(lái)；2、蛋白質(zhì)、多糖等污染色譜柱的大分子雜質(zhì)不進(jìn)入待測(cè)品溶液，從而不對(duì)色譜柱造成污染，延長(zhǎng)色語(yǔ)柱的使用壽命。指紋圖譜的各成分峰的光學(xué)純度均高達(dá)98%以上。如生首烏的2,3,4，，5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苷(THSG)主峰的純度高達(dá)99%;而用甲醇和50%的甲醇提取時(shí)則僅為70%左右。3、使何首烏的主要療效成分在指紋圖譜中均有對(duì)應(yīng)的特征峰，而何首烏的蛋白質(zhì)、多糖等非特征成分則在指紋圖譜的特征峰中不出現(xiàn)。在標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中有6個(gè)峰值高的特征峰，經(jīng)鑒定分別為二苯乙烯苷、大黃素吡喃葡萄糖苷、大黃酚吡喃葡萄^t苷、大黃素曱醚吡喃葡萄^t苷、大黃素、大黃素甲醚。因此本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了對(duì)生、制何首烏六個(gè)主要化學(xué)成分的定性沖僉測(cè)，并且使其六個(gè)主要成分，成為已知化合物；其^^測(cè)結(jié)果更可靠、準(zhǔn)確。二、指標(biāo)成分的含量測(cè)定由于指紋圖譜相似度差異的程度與藥材中的化合物含量差異不成比例關(guān)系，不能體現(xiàn)指紋圖譜的指標(biāo)成分的化學(xué)性質(zhì)和具體含量。而昆明種小鼠的肝臟毒性基因表達(dá)譜、藥效改變與化學(xué)成分的變化關(guān)系實(shí)驗(yàn)所獲得的結(jié)果表明，2，3,4，,5-四羥基二苯乙烯-2-0-(3-D-吡喃葡萄糖苷和大黃素這兩種物質(zhì)是確定生、制何首烏藥效和毒性的根本原因。因此，本發(fā)明在進(jìn)行指紋圖譜對(duì)藥材進(jìn)行定性檢測(cè)的基礎(chǔ)上，還對(duì)兩種最主要的指標(biāo)成分2，3,4，,5-四羥基二苯乙烯-2-0-(3-D-吡喃葡萄糖苷和大黃素的含量進(jìn)行測(cè)定，確保其含量符合要求。從而本發(fā)明的質(zhì)量控制方法，既重視指紋圖譜在整體輪廓上的相似性，又能體現(xiàn)指標(biāo)成分的具體含量，克服了指紋圖譜的局限性，增加了對(duì)何首烏中藥質(zhì)量的控制途徑和手段，降低了為質(zhì)量達(dá)標(biāo)而人為處理的可能性，使本發(fā)明的質(zhì)量控制方法的中藥信息表達(dá)能力強(qiáng)，對(duì)何首烏的質(zhì)量控制更加有效、穩(wěn)定和可控。上述生何首烏標(biāo)準(zhǔn)藥材為直接采自四川峨眉山的川產(chǎn)生何首烏；制何首烏標(biāo)準(zhǔn)藥材為川產(chǎn)生^T首烏采用清蒸法或黑豆制法炮制而得。8這樣可使制得的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的峰值高，具有4艮好的代表性；且測(cè)試出的指標(biāo)成分的含量高；從而建立起高質(zhì)量的何首烏指紋圖譜，確定較高的指標(biāo)成分含量，從而提高中藥何首烏的質(zhì)量。上述的Al和A2步中用高效液相色譜儀對(duì)標(biāo)準(zhǔn)藥材溶液以及待測(cè)藥材溶液進(jìn)行測(cè)試時(shí)，均選用290nm波長(zhǎng)作為高效液相色譜儀的指紋圖語(yǔ)的檢測(cè)波長(zhǎng)。290nm波長(zhǎng)作為高效液相色譜儀的指紋圖譜的檢測(cè)波長(zhǎng)，可以充分發(fā)揮高效液相色譜儀的功能。在290nm處較小的色譜峰有強(qiáng)的吸收，能充分體現(xiàn)生、制首烏中的主要指標(biāo)的化合物。即二苯乙燁苷類、蒽醌類化合物化合物均以290nm為最大吸收波長(zhǎng)，從而在290nm波長(zhǎng)下，各色譜峰分離良好，主要成分達(dá)到了基線分離；響應(yīng)高，形成的指紋圖譜效果好。通過(guò)比較各定量成分在210nm-500nm范圍內(nèi)的色譜圖及UV掃描最大吸收波長(zhǎng)，發(fā)現(xiàn)320nm是二苯乙烯苷類化合物的最大吸收波長(zhǎng)，290nm是蒽醌類化合物的最大吸收波長(zhǎng)。由于二本乙烯苷類含量較高，且在320nm與290nm吸收無(wú)明顯差異，因此選擇290nm能體現(xiàn)生、制首烏的主要成分，而且主要成分基線分離。據(jù)上，似應(yīng)選擇290nm。為進(jìn)一步細(xì)化上述結(jié)果，我們按前述色譜條件分別考察了200nm、254nm、268nm、296nm、320nm、290nm六個(gè)檢測(cè)波長(zhǎng)下的分離譜圖，發(fā)現(xiàn)在290nm波長(zhǎng)下，各色譜峰分離良好，主要成分達(dá)到了基線分離；在此波長(zhǎng)下響應(yīng)亦較高。根據(jù)以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最終選定290nm作為指紋圖語(yǔ)的沖企測(cè)波長(zhǎng)。下面結(jié)合附圖和具體的實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明；圖1為本發(fā)明實(shí)施例一的生何首烏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。圖2為本發(fā)明實(shí)施例一的待測(cè)的生何首烏的指紋圖。圖3為本發(fā)明實(shí)施例二的制何首烏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。圖4為本發(fā)明實(shí)施例二的待測(cè)制何首烏的指紋圖語(yǔ)。各圖中，橫軸為時(shí)間，單位為分鐘(minutes);縱軸為吸收度，單位為毫吸收單位(mAU)。圖1、3中特征峰旁邊的數(shù)字，是該特征峰的編號(hào)。具體實(shí)施方式實(shí)施例一本發(fā)明的一種具體實(shí)施方式為一種生何首烏和制^r首烏的質(zhì)量控制方法，由以下步驟構(gòu)成A、指紋圖譜比較Al、建立生何首烏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖語(yǔ)本例中的生何首烏標(biāo)準(zhǔn)藥材為直接采自四川峨眉山的川產(chǎn)生何首烏。取生何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材的粉末0.2克，溶于8ml的丙酮中，超聲處理0.5小時(shí)后過(guò)濾，取濾液，重復(fù)三次(含本次)，合并濾液，添加丙酮，定容至25ml，得標(biāo)準(zhǔn)藥材的丙酮溶液，精密量取5ml丙酮溶液，待丙酮揮干后，得干粉，取干粉溶于2ml甲醇得曱醇溶液，曱醇溶液用孔徑為0.45微米的微孔濾膜過(guò)濾后，得生何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材溶液；吸取生何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材溶液，注入高效液相色譜儀，建立起60分鐘的生何首烏標(biāo)準(zhǔn)藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。圖1即為本例方法制得的生首烏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。A2、制作待測(cè)生何首烏的指紋圖語(yǔ)本例的待測(cè)生首烏購(gòu)于廣東德慶。將A1步中的標(biāo)準(zhǔn)生何首烏藥材的粉末替換為待測(cè)的生何首烏藥材的粉末，然后采用Al步完全相同的操作，制得生何首烏待測(cè)藥材的指紋圖譜；圖3是本例測(cè)得的購(gòu)于廣東德慶的待測(cè)藥材的指紋圖鐠。A3、圖譜比較計(jì)算出A2步的待測(cè)指紋圖語(yǔ)與Al步的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖語(yǔ)的相似度；若待測(cè)指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖i普相似度>0.900，將對(duì)應(yīng)的待測(cè)藥材進(jìn)行以下步驟的操作；否則為不合格，結(jié)束操作。本例中計(jì)算相似度時(shí)，直接采用中國(guó)國(guó)家藥監(jiān)局指定的"中藥色語(yǔ)圖分析和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)"軟件進(jìn)行計(jì)算。本例中，將圖1所示的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜與圖2所示的待測(cè)指紋圖譜的相似度經(jīng)計(jì)算為0.988,大于規(guī)定值0.900。判定該待測(cè)藥材為初步合格產(chǎn)品，再進(jìn)行以下步驟的測(cè)試。在本例的指紋圖譜檢測(cè)中，色譜柱為，hypersilC18(5nm,4.6mmx250mm);檢測(cè)波長(zhǎng)，2卯證；流動(dòng)相流速，lmL/min，流動(dòng)相由乙腈和水組成；進(jìn)樣量為10juL;梯度洗脫；流動(dòng)相的組成與梯度設(shè)置如下表<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>圖l的用本例方法制作的生首烏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖語(yǔ)中有6個(gè)峰值高的特征峰。經(jīng)鑒定4號(hào)峰為二苯乙烯苷、5號(hào)峰為大黃素吡喃葡萄糖苷、6號(hào)峰為大黃酚吡喃葡萄糖苷、7號(hào)峰為大黃素曱醚吡喃葡萄糖苷、IO號(hào)峰為大黃素、11號(hào)峰為大黃素曱醚。這些峰中，4號(hào)峰二苯乙烯苷和IO號(hào)峰大黃素既是產(chǎn)生活性的主要成分，也是產(chǎn)生藥性和毒性的主要成分，6個(gè)表征何首烏藥材的主要成分特征峰，成為已知化合物。B、2，3,4，,5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苦指標(biāo)成分的含量測(cè)定Bl、對(duì)照品溶液的制備精密稱取3.3mg的2,3,4，,5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)照品，置于10ml容量瓶中，加50%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配得濃度為0.33g/L的對(duì)照品溶液；B2、待測(cè)品溶液的制備稱取廣東德慶的生何首烏粉末0.2g，置于100ml錐形瓶中，加入50%乙醇25ml，稱定質(zhì)量，加熱回流30min,放冷，再稱定質(zhì)量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，上清液用微孔濾膜(0.45pm)濾過(guò)，即得生何首烏的待測(cè)品溶液；B3、待測(cè)品含量的測(cè)定精密量取相同體積的對(duì)照品溶液和待測(cè)品溶液，采用高效液相色譜法測(cè)出待測(cè)品溶液中2,3,4，,5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苷的含量，并換算出待測(cè)生何首烏中的2,3,4，,5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苷成分占整個(gè)待測(cè)藥材干物質(zhì)的百分含量；具體換算關(guān)系為0.2g生何首烏粉末中2,3,4，,5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苷(THSG)的含量(b)=(待測(cè)品溶液的液相色語(yǔ)峰高度/對(duì)照品溶液的液相色語(yǔ)峰高度)x步驟B中THSG的稱取量x2.5;待測(cè)藥材中THSG的重量百分含量為bx1000/0,2x100%。C、大黃素指標(biāo)成分的含量測(cè)定Cl、對(duì)照品溶液的制備精密稱取大黃素3.0mg，置IOOml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至IOOml,搖勻；C2、待測(cè)品溶液的制備精密稱取產(chǎn)于廣東德慶的待測(cè)生何首烏粉末0.15g，置100ml錐形瓶中，精密加曱醇25ml，稱定質(zhì)量，加熱回流lh,冷卻，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)；精密量取濾液5ml，置100ml錐形瓶中，揮去曱醇，加8%鹽酸10ml，超聲處理2min,再加氯仿10ml，加熱回流1h，冷卻；回流液移置分液漏斗中，用少量氯仿洗滌100ml錐形瓶，并入分液漏斗中，分取下層的氯仿液；上層的鹽酸液再用氯仿提取及分取3次，每次氯仿用量8-12ml，合并氯仿液，移至100ml錐形jf瓦中，揮去氯仿至干；殘?jiān)蛹状既芙?，?0ml容量瓶中定容，用0.45jam微孔濾膜濾過(guò)，即得生何首烏粉末的供試品溶液；C3、待測(cè)品含量的測(cè)定精密量取相同體積的對(duì)照品溶液和待測(cè)品溶液，采用高效液相色譜法測(cè)出待測(cè)品溶液中大黃素的含量，并換算出待測(cè)生何首烏中的大黃素成分占整個(gè)待測(cè)藥材干物質(zhì)的百分含量；具體換算關(guān)系為0.15g生何首烏粉末中大黃素的含量(c)=(待測(cè)品溶液的液相色譜峰高度/對(duì)照品溶液的液相色語(yǔ)峰高度)/步驟C中大黃素的稱取量x10;待測(cè)藥材中大黃素的重量百分含量為cx1000/0.15x100%。D、判定指標(biāo)成分含量若待測(cè)的生何首烏藥材中2，3，4，，5-四羥基二苯乙烯-2-OP-D-吡喃葡萄糖苦的百分含量>3.00%且大黃素的百分含量>0.050%,則判定待測(cè)的生何首烏藥材合格，否則不合格。本例中進(jìn)行指標(biāo)成分含量測(cè)定時(shí)的色語(yǔ)條件為色譜柱HypersilC18柱(4.6mmx200mm,5;檢測(cè)波長(zhǎng)254nm;流速0.8ml/min;柱溫30°C;流動(dòng)相為曱醇和0.1%磷酸，二者的質(zhì)量比為85:15;理論i荅板數(shù)按大黃素峰計(jì)算不低于6000。用以上本例方法對(duì)上述購(gòu)于廣東德慶的待測(cè)藥材進(jìn)行的兩種指標(biāo)成分2,3，4，,5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苷(THSG)和大黃素指標(biāo)成分含量檢測(cè)結(jié)果如下表藥材名稱THSG(重量百分比0/。)大黃素(重量百分比％)生何首烏5.5120.09412與判定指標(biāo)成含量的標(biāo)準(zhǔn)相比，要求待測(cè)的生何首烏藥材中2，3,4，，5-四羥基二苯乙烯-2-O-P-D-吡喃葡萄糖苷的百分含量>3.00%且大黃素的百分含量>0.050%。因此，采用本例方法對(duì)購(gòu)于廣東德慶的生首烏藥材的檢測(cè)結(jié)果為合格。本發(fā)明在具體實(shí)施時(shí)，高效液相色語(yǔ)儀可選用島津LC-10A高效液相色語(yǔ)儀。實(shí)施例二本例與實(shí)施例一基本相同，不同的僅僅是將生首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材替換為制何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材，待測(cè)的生何首烏藥材替換為待測(cè)的制何首烏藥材。其中的制何首烏標(biāo)準(zhǔn)藥材采用四川峨眉山的川產(chǎn)生何首烏用清蒸法或黑豆制法進(jìn)行炮制而得；本例中實(shí)測(cè)的一具體待測(cè)藥材為購(gòu)買(mǎi)于廣東德慶的制何首烏藥材。圖3為用本例方法測(cè)得的制何首烏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。圖3可見(jiàn)，制何首烏的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中有6個(gè)峰值高的特征峰，經(jīng)鑒定4號(hào)峰為二苯乙烯苷、5號(hào)峰為大黃素吡喃葡萄糖苷、6號(hào)峰為大黃酚吡喃葡萄糖苷、7號(hào)峰為大黃素曱醚吡喃葡萄糖苷、IO號(hào)峰為大黃素、ll號(hào)峰為大黃素甲醚。這些峰中，4號(hào)峰二苯乙烯苷和IO號(hào)峰大黃素既是產(chǎn)生活性的主要成分，也是產(chǎn)生產(chǎn)生藥性和毒性的主要成分，6個(gè)表征何首烏藥材的主要成分特征峰，成為已知化合物。圖4是本法測(cè)得的制何首烏待測(cè)藥材指紋圖譜。采用中國(guó)國(guó)家藥監(jiān)局指定的"中藥色鐠圖分析和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)"軟件進(jìn)行相似度計(jì)算，相似度為0.965，待測(cè)指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度>0.900。采用本例方法測(cè)出的購(gòu)于廣東德慶的一具體待測(cè)制首烏的兩種指標(biāo)成分2,3，4，,5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苷(THSG)和大黃素的含量如下表所示藥材名稱THSG(重量百分比％)大黃素(重量百分比％)清蒸制何首烏3.8110.119豆制何首烏3.5380.126與判定指標(biāo)成含量的標(biāo)準(zhǔn)相比，該待測(cè)的制何首烏藥材中2，3,4，，5-四羥基二苯乙烯-2-O-13-D-吡喃葡萄糖苷的百分含量>1.93%且大黃素的百分含量>0.067%。由上表可見(jiàn)，本例所具體測(cè)試的待測(cè)制何首烏藥材為合格產(chǎn)品。實(shí)施例三本例與實(shí)施例一基本相同，不同的僅僅是在步驟A的指紋圖譜比較中，稱取的生何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材的粉末為0.1克，每次超聲處理的時(shí)間為1小時(shí)；步驟B中精密稱取的2,3,4，,5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)照品為3.2mg，步驟C中精密稱取的大黃素為2.8mg。實(shí)施例四本例與實(shí)施例一基本相同，不同的僅僅是在步驟A的指紋圖語(yǔ)比較中，稱取的生何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材的粉末為0.3克，每次超聲處理的時(shí)間為0.75小時(shí)；步驟B中精密稱取的2，3,4，，5-四羥基二苯乙烯-2-0-(3-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)照品為3.4mg,步驟C中精密稱取的大黃素為3.2mg。實(shí)施例五本例與實(shí)施例二基本相同，不同的僅僅是在步驟A的指紋圖譜比較中，稱取的制何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材的粉末為0.1克，每次超聲處理的時(shí)間為1小時(shí)；步驟B中精密稱取的2,3,4，，5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)照品為3.2mg,步驟C中精密稱取的大黃素為3.2mg。實(shí)施例六本例與實(shí)施例二基本相同，不同的僅僅是在步驟A的指紋圖鐠比較中，稱取的制何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材的粉末為0.3克，每次超聲處理的時(shí)間為0.75小時(shí)；步驟B中精密稱取的2，3,4，,5-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)照品為3.4mg，步驟C中精密稱取的大黃素為2.8mg。權(quán)利要求1、一種生何首烏和制何首烏的質(zhì)量控制方法，由以下步驟構(gòu)成A、指紋圖譜比較A1、建立生何首烏或制何首烏標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜取生何首烏或制何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材的粉末0.1-0.3克，溶于8ml的丙酮中，超聲處理0.5-1小時(shí)后過(guò)濾，取濾液，重復(fù)三次，合并濾液，添加丙酮，定容至25ml，得標(biāo)準(zhǔn)藥材的丙酮溶液，精密量取5ml丙酮溶液，待丙酮揮干后，得干粉，取干粉溶于甲醇得甲醇溶液，甲醇溶液用孔徑為0.45微米的微孔濾膜過(guò)濾后，得生何首烏或制何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材溶液；吸取生何首烏或制何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材溶液，注入高效液相色譜儀，建立起生何首烏或制何首烏標(biāo)準(zhǔn)藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；A2、制作待測(cè)生何首烏或制何首烏的指紋圖譜將A1步中的標(biāo)準(zhǔn)生何首烏或制何首烏藥材的粉末替換為待測(cè)的生何首烏或制何首烏藥材的粉末，然后采用A1步完全相同的操作，制得生何首烏或制何首烏待測(cè)藥材的指紋圖譜；A3、圖譜比較計(jì)算出A2步的指紋圖譜與A1步的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度；若指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜相似度≥0.900，將對(duì)應(yīng)的待測(cè)藥材進(jìn)行以下步驟的操作；否則為不合格，結(jié)束操作；B、2，3，4’，5-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷指標(biāo)成分的含量測(cè)定B1、對(duì)照品溶液的制備精密稱取3.2-3.4mg的2，3，4’，5-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)照品，置于10ml容量瓶中，加50％乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配得濃度為0.32-0.34g/L的對(duì)照品溶液；B2、待測(cè)品溶液的制備稱取生何首烏或者制何首烏粉末0.2g，置于100ml錐形瓶中，加入50％乙醇25ml，稱定質(zhì)量，加熱回流30min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50％乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，上清液用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得生何首烏或制何首烏的待測(cè)品溶液；B3、待測(cè)品含量的測(cè)定精密量取相同體積的對(duì)照品溶液和待測(cè)品溶液，采用高效液相色譜法測(cè)出待測(cè)品溶液中2，3，4’，5-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量，并換算出待測(cè)生何首烏或者制何首烏中的2，3，4’，5-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷成分占整個(gè)待測(cè)藥材干物質(zhì)的百分含量；C、大黃素指標(biāo)成分的含量測(cè)定C1、對(duì)照品溶液的制備精密稱取大黃素2.8-3.2mg，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至100ml，搖勻；C2、待測(cè)品溶液的制備精密稱取生何首烏或者制何首烏粉末各0.15g，置100ml錐形瓶中，精密加甲醇25ml，稱定質(zhì)量，加熱回流1h，冷卻，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)；精密量取濾液5ml，置100ml錐形瓶中，揮去甲醇，加8％鹽酸10ml，超聲處理2min，再加氯仿10ml，加熱回流1h，冷卻；回流液移置分液漏斗中，用少量氯仿洗滌100ml錐形瓶，并入分液漏斗中，分取下層的氯仿液；上層的鹽酸液再用氯仿提取及分取3次，每次氯仿用量8-12ml，合并氯仿液，移至100ml錐形瓶中，揮去氯仿至干；殘?jiān)蛹状既芙?，?0ml容量瓶中定容，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得生何首烏或者制何首烏粉末的待測(cè)品溶液；C3、待測(cè)品含量的測(cè)定精密量取相同體積的對(duì)照品溶液和待測(cè)品溶液，采用高效液相色譜法測(cè)出待測(cè)品溶液中大黃素的含量，并換算出待測(cè)生何首烏或者制何首烏中的大黃素成分占整個(gè)待測(cè)藥材干物質(zhì)的百分含量；D、判定指標(biāo)成含量若待測(cè)的生何首烏藥材中2，3，4’，5-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的百分含量≥3.00％且大黃素的百分含量≥0.050％，則判定待測(cè)的生何首烏藥材合格，否則不合格若待測(cè)的制何首烏藥材中2，3，4’，5-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷含量≥1.93％且大黃素的含量≥0.067％，則判定待測(cè)的制何首烏藥材合格，否則不合格。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生何首烏和制何首烏的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述的生何首烏標(biāo)準(zhǔn)藥材為直接采自四川峨眉山的川產(chǎn)生何首烏；制何首烏標(biāo)準(zhǔn)藥材為川產(chǎn)生何首烏采用清蒸法或黑豆制法炮制而得。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生何首烏和制何首烏的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述的Al和A2步中用高效液相色譜儀對(duì)標(biāo)準(zhǔn)藥材溶液以及待測(cè)藥材溶液進(jìn)行測(cè)試時(shí)，均選用290nm波長(zhǎng)作為高效液相色譜儀的指紋圖譜的檢測(cè)波長(zhǎng)。全文摘要一種生何首烏和制何首烏的質(zhì)量控制方法，該方法包括以下步驟A.稱取生何首烏或制何首烏的標(biāo)準(zhǔn)藥材的粉末，溶于丙酮中，超聲處理后過(guò)濾，定容，揮干后，干粉溶于甲醇，甲醇溶液微孔過(guò)濾后，得標(biāo)準(zhǔn)藥材溶液。再用高效液相色譜法建立標(biāo)準(zhǔn)藥材的指紋圖譜；再采用同樣的方法，建立待測(cè)生何首烏或制何首烏的待測(cè)指紋圖譜；再根據(jù)待測(cè)指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度判定待測(cè)藥材是否合格；B.采用高效液相色譜法測(cè)定2，3，4’，5-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷及大黃素兩個(gè)指標(biāo)成分的含量。該法判定依據(jù)多樣，既能實(shí)現(xiàn)對(duì)生、制何首烏主要化學(xué)成分的定性檢測(cè)，又測(cè)定兩種主要成分的含量，其檢測(cè)結(jié)果可靠、準(zhǔn)確，減少了為質(zhì)量達(dá)標(biāo)而人為處理的可能性。文檔編號(hào)A61P3/00GK101554410SQ20091005902公開(kāi)日2009年10月14日申請(qǐng)日期2009年4月22日優(yōu)先權(quán)日2009年4月22日發(fā)明者吳曉青,妍童,蔣合眾申請(qǐng)人:西南交通大學(xué)