專利名稱：：用水包油－油包固體制備的pla/plga殼－核微球及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及的是一種制藥
技術(shù)領(lǐng)域：
的制備殼一核微球及其制備方法，尤其是一種用水包油一油包固體(S-0-W)制備PLA(聚乳酸)/PLGA(聚乳酸一羥基乙酸)殼一核微球的方法。
背景技術(shù)：
：制藥行業(yè)從藥物發(fā)現(xiàn)，到臨床的應(yīng)用，最后一個環(huán)節(jié)是藥物制劑。其中有一部分藥物需要長期給藥才能治愈；還有一部分需要靶向等局部給藥。要達到這些目的，原料藥必須要制備成相應(yīng)的劑型。例如需要長期給藥但在體內(nèi)的半衰期短的藥物，宜制備成PLA劑型；對于一些腫瘤的治療，需要一些藥物靶向于病照，例如靶向于腫瘤血管的栓塞微球制劑等;基因重組技術(shù)用于治療蛋白的表達和生產(chǎn)的20多年以來，到目前為止，已有30多個蛋白藥物產(chǎn)品投入臨床使用，近200個在審批和研發(fā)過程中，涌現(xiàn)出一批諸如安進(Amgen)、基因技術(shù)(Genentech)等一批新的大型醫(yī)藥公司。相對于蛋白大分子藥物本身的快速發(fā)展，其劑型技術(shù)進展緩慢。一方面，蛋白大分子藥物口服不吸收、體內(nèi)半衰期短，需要注射給藥；另一方面，許多何爾蒙、細胞因子類的蛋白藥物治療周期長，長期而頻繁地注射成為必須，也影響患者順應(yīng)性的主要原因。緩釋蛋白藥物的劑型的研發(fā)，由于在制備微粒過程導致活性的損失諸如W/0/W法制備的微球易突釋等缺點。發(fā)展制備具有活性保護的蛋白微球又可以提高包封率和減少突釋的方法勢在必行。人們?yōu)榱藴p少突釋研究了制備雙層微球，但是到目前還是不能解決這一難題。經(jīng)對現(xiàn)有技術(shù)文獻的檢索發(fā)現(xiàn)，MengShi等發(fā)表的"DoublewalledPLA/PLGAmicrospheres:encapsulationofwater-solubleandwater—insolubleproteinsandtheirreleaseproperties"《JournalofControlledRelease》89(2003)167-177],[MengShi等，雙層P0E/PLGA微球包封水溶性和水不溶性蛋白和它們的釋放特點，控制釋放雜志，89(2003)167-177],MengShi等人在該文獻報道了利用W/0/W方法把牛血清白蛋白(BSA)和環(huán)孢霉素A(CyA)的包封在PLGA/PLA殼一核微球里。該文獻利用w/o/w最見的復(fù)乳法來制備雙層微球，而復(fù)乳法的油水界面是公認的蛋白殺手，導致水溶性的蛋白在該界面的聚集，同樣致使包封率也不高，存在不完全釋放和突釋。MoritaT.等在《JournalofControlledRelease》(控制釋放雜志)(2000年，第69期，第435頁到第444頁)上發(fā)表的"ProteinencapsulationintobiodegradablemicrospheresbyanovelS/0/Wemulsionmethodusingpoly(ethyleneglycol)asaproteinmicronizationadjuvant"(用聚乙二醇作為蛋白微粉化的賦形劑(表面活性劑)，然后用水包油一油包固體的方法把蛋白微囊包在生物可降解的微球里)，該文獻報道了利用新S/0/W乳化法制備載蛋白微球。只是改變了表面活性劑以前報道較多的是用PVA，在這篇文獻改用PEG。但仍不能克服包封率低，存在突釋和不完全釋放的缺點。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種用水包油一油包固體制備的PLA/PLGA殼一核微球及其制備方法，使其制備的微粒表面光滑圓整，均勻度好，顆粒規(guī)整無粘連；包封率高，突釋小，載藥量高。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明所涉及的用水包油一油包固體制備的PLA/PLGA殼一核微球，包括藥物、聚乳酸和/或聚乳酸一羥基乙酸、或/和藥用輔料，它們的重量百分比含量為藥物0.01-50%、聚乳酸和/或聚乳酸—羥基乙酸20-99.99%、藥用輔料為0_30%。這種微球載藥量可控、包封率高、沒有突釋放和不完全釋放。所述的藥物包括小分子藥物和大分子藥物。所述的小分子藥物指的主要是化學藥物，大分子藥物主要是指生物大分子藥物，尤其指蛋白大分子藥物、疫苗、抗體、核酸、或脂質(zhì)體藥物。所述的蛋白大分子藥物為促紅細胞生成素(EP0)、重組人粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、疫苗、干擾素(IFN)、生長激素(GH)、胰島素(Insulin)、表皮生長因子(EGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-e)、胰島素樣生長因子(IGF)、血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)、血小板生長因子(PDGF)、內(nèi)皮生長因子(EGF)、神經(jīng)生長因子(NGF)、骨衍生性生長因子(BDGF)、骨形成蛋白(BMP)、組織多肽抗原(TPA)、抗體(antibody)、凝血因子VIII(VIII)、或凝血因子IX遺傳因子。所述的核酸為反義核苷酸(anti-RNA)、小分子RNA(RNAi)或基因(DNA)。所述的輔料指的主要是可以注射用級別，尤其是小糖類(蔗糖、海藻糖、葡萄糖、麥芽糖、或乳糖)、多羥基類化合物(甘露醇、山梨醇、甘油、1，2—丙二醇、赤鮮糖醇、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚環(huán)氧乙垸、或聚吡咯烷酮)、多糖類化合物(葡聚糖、海藻酸鈉、殼聚糖、淀粉、纖維素、或環(huán)糊精物質(zhì))、氨基酸化合物(甘氨酸、賴氨酸、精氨酸、谷氨酸或組氨酸)、或無機鹽類物質(zhì)(鋅鹽、鈣鹽、銅鹽、鎂鹽、或鉬鹽)的一種或任意組合。本發(fā)明所涉及的用水包油一油包固體制備的PLA/PLGA殼一核微球的制備方法，是將藥物顆粒分散在PLA和/或PLGA的有機溶液中，并攪拌或漩渦等使之分散均勻形成混懸液；然后將混懸液加到外油相，再攪拌或漩渦形成微球，最后把它轉(zhuǎn)移到大水相中固化；然后離心收集微球，凍干保存。本發(fā)明上述方法具體包括以下步驟①將藥物或藥物和藥用輔料制備成藥物顆粒；②將藥物顆粒加入到PLA和PLGA的有機溶液、或把親水性的藥物顆粒與PLGA的有機溶液混和后，再與PLA的有機溶液混和；或把疏水性的藥物顆粒與PLA先混和，再與PLGA的有機溶液混和；形成混懸液，即油相一l(O,)中攪拌或漩渦等使之均勻分散形成均勻的混懸液；③將完成步驟②形成微球的混懸液滴加到氯化鈉溶液和表面活性劑的水溶液乳化，形成復(fù)乳；④然后將步驟③的復(fù)乳轉(zhuǎn)移到氯化鈉溶液固化；⑤將完成步驟④的樣品凍干得到PLA/PLGA殼一核微球。所述的藥物顆粒，指的是親水性的藥物顆粒，或藥物載入到輔料中制備的顆粒，或疏水性的藥物通過制劑的方法制備成不溶于有機溶劑的顆粒；7所述的藥物顆粒，其藥物顆粒的粒徑大小在O.2—10Mmra，優(yōu)選O.5—5Mmm。所述的藥物顆粒，其占藥物顆粒總重量的0.2-50%;優(yōu)選1-20%(w/w)。所述的油相一(0)為PLA和/或PLGA的有機溶液；所述的PLA和/或PLGA的有機溶液為PLA和PLGA的有機溶液添加0.1_20%(w/w)聚乙二醇(PEG)或泊洛沙姆(poloxmer);PLA和PLGA的二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚垸、氯仿、或丙酮有機溶液，以二氯甲烷、乙酸乙酯、或乙腈中一種或它們的任意組合的有機溶液為佳；所述的PLA和/或PLGA的有機溶液濃度為PLA的重量占總油相的百分比濃度為0.5-80%(w/w)，其中以5-30%(w/w)為佳；PLGA的重量總油相的百百分比濃度為20—99.5%(w/w)，其中以70_95%為佳；所述的表面活性劑為聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、泊洛沙姆(poloxmer)、聚三梨醇、乙基纖維素(EC)、或吐溫；所述的表面活性劑聚乙烯醇(PVA)的濃度為0.5—10%(w/w)或含0.5—10%(w/w)氯化鈉等鹽溶液、聚乙二醇(PEG)的濃度為0.5—20%(w/w)或含0.5—10%(w/w)氯化鈉的鹽溶液、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)濃度為O.5—20%(wAv)或含O.5—10%(w/w)氯化鈉等鹽溶液、泊洛沙姆(poloxmer)濃度為0.5_20%(w/w)或含O.5—10%(w/w)氯化鈉等鹽溶液、聚三梨醇濃度為0.5—20%(w/w)或含0.5—10%(w/w)氯化鈉等鹽溶液、或乙基纖維素(EC)濃度為0.5—20%(w/w)或含0.5—10%(w/w)氯化鈉等鹽溶液；所述微球的粒徑為l-500陶，以10-100Mm為佳。本發(fā)明選擇了合適比例和濃度的PLGA和PLA的混合材料，使水溶性的藥物顆粒或油溶性的藥物通過制劑的方法制備成油不溶的顆粒，避免用常規(guī)的W/0和W/0/W的包封率不高，及S/0/0的突釋嚴重，造成的環(huán)境污染的缺點；采用該方法制備微球，其粒徑的大小可以根據(jù)不同需要，進行控制，不污染環(huán)境；可以避免對藥物的治療的作用影響，尤其是那些物理化學性質(zhì)不穩(wěn)定的，對油水界面敏感的藥物，如生物大分子藥物如蛋白質(zhì)大分子藥物、DNA、RNA或siRNA藥物。微粒的表面光滑圓整，顆粒規(guī)整無粘連，粒徑可以根據(jù)需要進行調(diào)控從lym到500um，其凍干粉劑為白色細膩、疏松，不會塌陷、不粘連，再分散性良好?？梢赃\用到各種藥物緩釋或控釋微球的制備及疫苗的佐劑。具體實施例方式下面對本發(fā)明的實施例作詳細說明本實施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護范圍不限于下述的實施例。采用本發(fā)明方法制備載藥的微球，其中制備藥物顆粒時，對與小分子藥物可以是常規(guī)的碾磨法、沉淀法、粉碎法或造粒法；對于生物大分子藥物可以是水相一水相乳液法、低溫噴霧干燥法、相分離法、超臨界法或金屬離子與生物大分子形成的復(fù)合物的方法。實施例一載有小分子藥物顆粒PLA/PLGA殼一核微球的制備(1)將小分子藥物或小分子藥物和藥用輔料制備成藥物顆粒；本實施例中，采用的小分子藥物是腫瘤化療類藥物(腫瘤化療藥物選自阿霉素、環(huán)磷酰胺、更生霉素、博萊霉素、柔紅霉素、阿霉素、表阿霉素、絲裂霉素、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、卡鉑、卡莫司汀(BCNU)、司莫司汀、順鉑、依托泊苷、喜樹堿及其衍生物、苯芥膽甾醇、紫杉醇及其衍生物、多西紫杉醇及其衍生物、長春堿、長春新堿、它莫西芬、依托泊苷、哌泊舒凡、環(huán)磷酰胺或氟他胺及其衍生物；緩釋微球可載有上述藥物中的一種或幾種；)或抗生素類藥物(抗生素類藥物選自環(huán)孢素、左氧氟沙星、氧氟沙星、或鹽酸依匹斯汀；緩釋微球可載有上述藥物中的一種或幾種)。本實施例中，采用的藥用輔料是葡聚糖、海藻酸鈉、殼聚糖、淀粉、纖維素、環(huán)糊精、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚環(huán)氧乙垸、聚吡咯烷酮、蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、賴氨酸、鋅鹽、鈣鹽、銅鹽、鎂鹽、鉬鹽、或組氨酸上述藥物中的一種或幾種。本實施例中，具體配比如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>氧氟沙星淀粉100%、80%、40%、20%、0.1%鹽酸依匹斯汀乳糖100%、80%、40%、20%或0%鹽酸依匹斯汀纖維素100%、80%、40%、20%或0%左氧氟沙星甘氨酸100%、80%、40%、20%或0%氧氟沙星庶糖100%、80%、40%、20%或0%氧氟沙星賴氨酸100%、80%、40%、20%或0%鹽酸依匹斯汀海藻糖100%、80%、40%、20%或0%鹽酸依匹斯汀組氨酸100%、80%、40%、20%或0%(2)按照小分子藥物顆粒和PLGA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比為1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:IO等比例攪拌、漩渦或超聲l一5分鐘形成均勻得混懸液，再把PLA的有機溶液加到上述混懸液中，再攪拌、漩渦或超聲l一5分鐘形成均勻得混懸液，即油包固體(S/0)乳液；或把藥物分子顆粒和PLA的二氯甲烷、乙腈或乙酸乙酯溶液重量比為1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:IO等比例攪拌、漩渦或超聲1一5分鐘形成均勻得混懸液，再把PLGA的有機溶液加到上述混懸液中，再攪拌、漩渦或超聲l—5分鐘形成均勻得混懸液，即油包固體(S/0)乳液；(3)把步驟(2)得乳液滴加到1—10%(w/w)氯化鈉和1—腦(w/w)的表面活性劑水溶液并攪拌、漩渦或超聲0.l—5分鐘形成復(fù)乳；(4)把步驟(3)的復(fù)乳滴加到濃度為1一10%(w/w)的1000ml氯化鈉溶液固化1—4小時；(5)把步驟(4)得到的離心收集微球，并用水洗滌3—5次，凍干后得到微球。本實施例得到的微球，具體的組分配比見下表:藥物顆粒PLGA/PLA的重量比藥物顆粒占微球的重量百分比藥物顆粒PLGA/PLA的重量比藥物顆粒占微球的的重量百分比阿霉素顆粒1、1/2、1/3、1/4、1/5、2、3、4或520%、60%、80%、70%、或99.9卡鉑顆粒1、1/2、1/3、1/4、1/5、2、3、4或520%、60%、80%、70%、或99.99%阿霉素顆粒1、1/2、1/3、1/4、1/5、2、3、4或520%、60%、80%、70%、或99.99%卡莫司汀顆粒1、1/2、1/3、1/4、1/5、2、3、4或520%、60%、80%、70%、或99.99%阿霉素顆粒1、1/2、1/3、1/4、1/5、2、3、4或520%、60%、80%、70%、或99.99%司莫司汀顆粒1、1/2、1/3、1/4、1/5、2、3、4或520%、40%、80%、70%、或99.99%11<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>這種方法制備的微球可以用于需要長期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤的血管栓塞微球。這種方法制備的微球包封率高最少可以達到80%以上，突釋非常小和幾乎沒有不完全釋放，可以達到零級釋放。實施例二載有生物大分子藥物顆粒PLA/PLGA殼-核微球的制備(l)將生物大分子藥物或生物大分子藥物和藥用輔料制備成藥物顆粒；本實施例中，采用的生物大分子藥物是促紅細胞生成素(EP0)、重組人粒細胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細胞-巨噬細胞集落剌激因子(GM-CSF)、疫苗、干擾素(INF)、生長激素(GH)、胰島素(Insulin)、表皮生長因子(EGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-e)、胰島素樣生長因子(IGF)、血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)、血小板生長因子(PDGF)、內(nèi)皮生長因子(ECGF)、神經(jīng)生長因子(NGF)、骨衍生性生長因子(BDGF)、骨形成蛋白(BMP)、組織多肽抗原(TPA)、抗體(antibody)、凝血因子VIII(VIII)、IX遺傳因子、反義核苷酸(anti-RNA)、小分子RNA(RNAi)、SiRNA、基因(DNA);緩釋微球可載有上述藥物中的一種或幾種。本實施例中，采用的藥用輔料是葡聚糖、海藻酸鈉、殼聚糖、淀粉、纖維素、環(huán)糊精、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚環(huán)氧乙烷、聚吡咯垸酮、蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、賴氨酸、或組氨酸上述藥物中的一種或幾種；本實施例中具體的組成配比如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>4或599.99%4或599.99%BMP1、1/2、1/3、1/4、1/5、2、3、4或520%、60%、80%、70%、或99.99%G-CSF1、1/2、1/3、1/4、1/5、2、3、4或520%、60%、80%、70%、或99.99%TPA1、1/2、1/3、1/4、1/5、2、3、4或520%、60%、80%、70%、或99.99%GM-CSF1、1/2、1/3、1/4、1/5、2、3、4或520%、60%、80%、70%、或99.99%這種方法制備的微球可以用于需要頻繁注射給藥、長期治療的疾病，尤其是需要局部治療的疾病如腫瘤、各種病因引起的貧血、侏儒等重大疾病的治療。這種方法制備的微球包封率高最少可以達到80%以上，突釋非常小和幾乎沒有不完全釋放，可以達到零級釋放。同時可以使生物大分子藥物在整個制備過程和治療過程保持高活性即不失活。實施例三載有干擾素(IFN)藥物微粒PLA/PLGA殼-核微球的制備(l)將干擾素和藥用輔料制備成藥物顆粒；具體配比如下:藥物藥用輔料藥物占顆粒的重量百分比藥物藥用輔料藥物占顆粒的重量百分比IFN葡聚糖80%、50%、25%、10%或5%IFN環(huán)糊精和蔗糖(9:1)、(7:1)、(6:1)、(5:1)或(3:1)100%、80%、50%、25%或10%IFN葡聚糖、鋅鹽和80%、50%、25IFN聚乙二醇、殼聚糖和100%、80%、50海藻糖(9:1:1)%、10%或5%山梨醇(8:1:1)或(5:1:1)%、25%或10%IFN葡聚糖和海藻糖(9:1)80%、50%、25%、10%或5%IFN葡聚糖、甘氨酸和甘露醇(8:1:1)或(6:1:1)50%、40%、30%、25%、15%10%或5%IFN葡聚糖、鎂鹽和100%、80%、50IFN聚環(huán)氧乙垸和蔗糖50%、40%、30海藻糖(9:1:1)%、25%或腦(9:1)、(8:1)或(3:1)%、25%、15%10%或5%IFN葡聚糖、鋅鹽和80%、50%、25IFN聚吡咯垸酮和甘氨酸50%、40%、30甘露醇(9:0.5:%或10%(5:1)%、25%、15%101)%或5%IFN聚乙二醇和鋅100%、80%、50IFN葡聚糖和賴氨酸(9:50%、40%、30鹽(9:1)%、25%或腦1)、(8:1)或(3:1)%、25%、15%10%或5%18<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>這種方法制備的IFN微球可以用于需要頻繁注射給藥、長期治療抗病毒如肝炎；可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。這種方法制備的微球包封率高最少可以達到80%以上，突釋非常小和幾乎沒有不完全釋放，可以達到零級釋放。同時可以使IFN藥物在整個制備過程和治療過程保持高活性即不失活。實施例四促紅細胞生成素(EP0)藥物顆粒PLA/PLGA殼-核微球的制備(l)將EP0和藥用輔料制備成藥物顆粒；具體配比如下-<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>(2)促紅細胞生成素(EP0)藥物顆粒和PLGA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它們的混合溶液重量比為1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:IO等比例攪拌、漩渦或超聲1—5分鐘形成均勻得混懸液，再把PLA的有機溶液加到上述混懸液中，再攪拌、漩渦或超聲l一5分鐘形成均勻得混懸液，即油包固體即油包固體(S/0)乳液；步驟(3)、(4)、(5)的實施與實施例一相同。本實施例得到的微球，具體的組分配比如下表<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>EP01、1/2、1/3、1/4、1/5、2、3、4或520%、60%、80%、70%、或99.99%這種方法制備的EP0微球可以用于需要頻繁注射給藥、長期治療各種原因引起的盆血如腫瘤治療引起的腎衰盆血；可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。這種方法制備的微球包封率高最少可以達到80%以上，突釋非常小和幾乎沒有不完全釋放，可以達到零級釋放。同時可以使EPO藥物在整個制備過程和治療過程保持高活性即不失活。實施例五粒細胞集落剌激因子G-CSF藥物顆粒PLA/PLGA殼-核微球的制備(l)將粒細胞集落剌激因子G-CSF和藥用輔料制備成藥物顆粒；具體配比如下:藥物藥用輔料藥物占顆粒的重量百分比藥物藥用輔料藥物占顆粒的重量百分比G-CSF葡聚糖80%、50%、25%、10%或5%G-CSF環(huán)糊精和蔗糖(9:1)、(7:1)、(6:1)、(5:1)或(3:1)100%、80%、50%、25%或10%G-CSF葡聚糖、鋅鹽和海藻糖(9:1:1)80%、50%、25%、10%或5%G-CSF聚乙二醇、殼聚糖和山梨醇(8:1:1)或(5:1:1)100%、80%、50%、25。％或10G-CSF葡聚糖和海藻糖(9:1)80%、50%、25%、10%或5%G-CSF葡聚糖、甘氨酸和甘露醇(8:1:1)或(6:1:1)50%、40%、30%、25%、15%10%或5%G-CSF葡聚糖、鎂鹽和海藻糖(9:1:1)100%、80%、50%、25%或10%G-CSF聚環(huán)氧乙烷和蔗糖(9:1)、(8:1)或(3:1)50%、40%、30%、25%、15%10%或5%G-CSF葡聚糖、鋅鹽和甘露醇(9:0.5:1)80%、50%、25%或10%G-CSF聚吡咯烷酮和甘氨酸(5:1)50%、40%、30%、25%、15%腦或5%G-CSF聚乙二醇和鋅鹽(9:1)100%、80%、50%、25%或腦G-CSF葡聚糖和賴氨酸(9:1)、(8:1)或(3:1)50%、40%、30%、25%、15%10%或5%G-CSF聚環(huán)氧乙垸和鋅鹽(9:1)100%、80%、50%、25%或10%G-CSF葡聚糖和組氨酸(8:1)50%、40%、30%、25%、15%10%或5%G-CSF聚乙二醇和鉬鹽(9:1)100%、80%、50%、25%或腦G-CSF聚乙二醇和賴氨酸(9:1)、(8:1)或(3:1)50%、40%、30%、25%、15%腦或5%G-CSF聚環(huán)氧乙烷和鈣鹽(9:1)100%、80%、50%、25%或10%G-CSF聚環(huán)氧乙烷50%、40%、30%、25%、1523<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>GM-CSF葡聚糖和乳80%、60%、GM-CSF聚吡咯垸酮50%、40%、30糖(8:1)或50%、25%或%、25%、15%106:1腦%或5%GM-CSF葡聚糖和海60%、50%、GM-CSF葡聚糖、淀粉和海50%、40%、30藻糖(8:1)25%、腦或藻糖(8:1:1)、%、25%、15%10或6:15%(7:1:1)或(6:1:1)%或5%GM-CSF葡聚糖和乳60%、50%、GM-CSF葡聚糖、殼聚糖和50%、40%、30糖(8:1)或25%、10%或海藻糖(8:1:1)、%、25%、15%106:15%(7:1:1)或(6:1:1)%或5%GM-CSF葡聚糖和海60%、50%、GM-CSF葡聚糖、海藻糖和50%、40%、30藻酸鈉(9:1)25%、腦或海藻酸鈉(9:1:1)、%、25%、15%10或6:15%(8:1:1)或4:1:1%或5%GM-CSF葡聚糖和海60%、50%、GM-CSF葡聚糖、甘氨酸和50%、40%、30藻酸鈉(9:1)40%、20%、海藻酸鈉(9:1:1)、%、25%、15%10或6:110%或5%(8:1:1)或4:1:1GM-CSF殼聚糖和庶60%、50%、GM-CSF葡聚糖和山梨醇50%、40%、30糖(9:1)或40%、20%、(9:1)、(7:1)、%、25%、15%106:1腦或5%(6:1)、(5:1)或%或5%(3:1)GM-CSF淀粉和乳糖60%、50%、GM-CSF葡聚糖和乳糖(9:50%、40%、30(9:1)或6:40%、20%、1)、(7:1)、(6:1)、%、25%、15%10110%或5%。/0(5:1)或(3:1)%或5%GM-CSF纖維素和乳100%、80%、GM-CSF葡聚糖和甘氨酸50%、40%、30糖(9:1)或40%、20%、(9:1)、(7:1)、%、25%、15%106:1腦(6:1)、(5:1)或(3:1)%或5%GM-CSF葡聚糖和庶100%、80%、GM-CSF葡聚糖和賴氨酸50%、40%、30糖(9:1)或40%、20%、(9:1)、(7:1)、%、25%、15%106:1腦(6:1)、(5:1)或(3:1)%或5%GM-CSF淀粉和海藻100%、80%、GM-CSF葡聚糖和組氨酸50%、40%、30糖(9:1)或40%、20%、(9:1)、(7:1)、%、25%、15%106:1腦(6:1)、(5:1)或(3:1)%或5%(2)粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)藥物顆粒和PLGA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它們的混合溶液重量比為1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:IO等比例攪拌、漩渦或超聲1_5分鐘形成均勻得混懸液，27再把PLA的有機溶液加到上述混懸液中，再攪拌、漩渦或超聲1-5分鐘形成均勻得混懸液，即油包固體即油包固體(S/0)乳液；步驟(3)、(4)、(5)的實施與實施例一相同。本實施例得到的微球，具體的組分配比如下表:<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>這種方法制備的GM-CSF微球可以適用于癌癥化療和在用骨髓抑制療法時所引起的白細胞減少癥，亦適用于治療骨髓衰竭患者的白細胞低下，也可預(yù)防白細胞減少時可能潛在的感染并發(fā)癥，還能使感染引起的中性粒細胞減少的恢復(fù)加快?？梢詼p少注射的頻率和減輕病人的痛苦。這種方法制備的微球包封率高最少可以達到80%以上，突釋非常小和幾乎沒有不完全釋放，可以達到零級釋放。同時可以使GM-CSF藥物在整個制備過程和治療過程保持高活性即不失活。實施例七重組人生長激素(GH)藥物顆粒PLA/PLGA殼-核微球的制備(l)將重組人生長激素(GH)和藥用輔料制備成藥物顆粒；具體配比如下:<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>(2)血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)藥物顆粒和PLGA的二氯甲烷、乙腈、乙酸乙酯或它們的混合溶液重量比為1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10等比例攪拌、漩渦或超聲l一5分鐘形成均勻得混懸液，再把PLA的有機溶液加到上述混懸液中，再攪拌、漩渦或超聲1一5分鐘形成均勻得混懸液，即油包固體即油包固體(S/0)乳液；步驟(3)、(4)、(5)的實施與實施例一相同。本實施例得到的微球，具體的組分配比如下表:藥物顆粒PLGA/PLA的重量比藥物顆粒占微球的重量百分比VEGF1、1/2、1/3、1/4、1/5、2、3、4或520%、60%、80%、70%、或99,99%這種方法制備的VEGF微球可以適用于用新生血管的形成治療促血管內(nèi)皮細胞生長?？梢詼p少注射的頻率和減輕病人的痛苦。這種方法制備的微球包封率高最少可以達到80%以上，突釋非常小和幾乎沒有不完全釋放，可以達到零級釋放。同時可以使GM-CSF藥物在整個制備過程和治療過程保持高活性即不失活。實施例九骨形成蛋白(BMP)藥物顆粒PLA/PLGA殼-核微球的制備(l)將骨形成蛋白(BMP)和多糖制備成藥物顆粒；具體配比為:藥物藥用輔料藥物占顆粒的藥物藥用輔料藥物占顆粒的重量百重量百分比分比BMP葡聚糖80%、50%、25BMP環(huán)糊精和蔗糖(9:1)、100%、80%、50%、%、10%或5%(7:1)、(6:1)、(5:1)25%或腦或(3:1)BMP葡聚糖、鋅鹽80%、50%、25證聚乙二醇、殼聚糖和100%、80%、50%、和海藻糖%、10%或5%山梨醇(8:1:1)或25%或10%(9:1:1)(5:1:1)腿P葡聚糖和海80%、50%、25證葡聚糖、甘氨酸和甘50%、40%、30%、藻糖(9:1)%、10%或5%露醇(8:1:1)或(6:1:1)25%、%15%10%或5BMP葡聚糖、鎂鹽100%、80%、50BMP聚環(huán)氧乙烷和蔗糖50%、40%、30%、和海藻糖%、25%或10(9:1)、(8:1)或25%、15%10%或5(9:1:1)%(3:1)%BMP葡聚糖、鋅鹽80%、50%、25BMP聚吡咯烷酮和甘氨酸50%、40%、30%、和甘露醇(9:%或10%(5:1)25%、15%10%或50.5:1)%腿P聚乙二醇和100%、80%、50BMP葡聚糖和賴氨酸(9:50%、40%、30%、鋅鹽(9:1)%、25%或101)、(8:1)或(3:1)25%、15%10%或533<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>(2)骨衍生性生長因子(BDGF)藥物顆粒和PLGA的二氯甲垸、乙腈、乙酸乙酯或它們的混合溶液重量比為h1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:IO等比例攪拌、漩渦或超聲l一5分鐘形成均勻得混懸液，再把PLA的有機溶液加到上述混懸液中，再攪拌、漩渦或超聲1—5分鐘形成均勻得混懸液，即油包固體即油包固體(S/0)乳液；步驟(3)、(4)、(5)的實施與實施例一相同。本實施例得到的微球，具體的組分配比如下:藥物顆粒PLGA/PLA的重量比藥物顆粒占微球的重量百分比BDGF1、1/2、1/3、1/4、1/5、2、3、4或520%、60%、80%、70%、或99.99%這種方法制備的BMP微球可以適用于用各種骨折后的治療。可以減少注射的頻率和減輕病人的痛苦。這種方法制備的微球包封率高最少可以達到80%以上，突釋非常小和幾乎沒有不完全釋放，可以達到零級釋放。同時可以使BDGF藥物在整個制備過程和治療過程保持高活性即不失活。38權(quán)利要求1、一種用水包油—油包固體制備的PLA/PLGA殼—核微球，其特征在于，包括藥物、聚乳酸和/或聚乳酸—羥基乙酸、或/和藥用輔料，它們的重量百分比含量為藥物0.01-50％、聚乳酸和/或聚乳酸—羥基乙酸20-99.99％、藥用輔料為0-30％。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的用水包油一油包固體制備的PLA/PLGA殼一核微球，其特征是，所述的藥物包括小分子藥物和大分子藥物，所述的小分子藥物指的是化學藥物，大分子藥物是指生物大分子藥物。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的用水包油一油包固體制備的PLA/PLGA殼—核微球，其特征是，所述的大分子藥物尤其指蛋白大分子藥物、疫苗、抗體、核酸、或脂質(zhì)體藥物，其中所述的蛋白大分子藥物為促紅細胞生成素、重組人粒細胞集落刺激因子、粒細胞-巨噬細胞集落剌激因子、疫苗、干擾素、生長激素、胰島素、表皮生長因子、成纖維細胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子、胰島素樣生長因子、血管內(nèi)皮細胞生長因子、血小板生長因子、內(nèi)皮生長因子、神經(jīng)生長因子、骨衍生性生長因子、骨形成蛋白、組織多肽抗原、抗體、凝血因子VIII、或凝血因子IX遺傳因子中一種；所述的核酸為反義核苷酸、小分子RNA或基因。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的用水包油一油包固體制備的PLA/PLGA殼一核微球，其特征是，所述的藥用輔料指的是是小糖類、多羥基類化合物、多糖類化合物、氨基酸化合物、或無機鹽類物質(zhì)的一種或任意組合，其中所述小糖類為蔗糖、海藻糖、葡萄糖、麥芽糖、或乳糖中一種；所述多羥基類化合物為甘露醇、山梨醇、甘油、1，2—丙二醇、赤鮮糖醇、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚環(huán)氧乙烷、或聚吡咯烷酮中一種；所述多糖類化合物為葡聚糖、海藻酸鈉、殼聚糖、淀粉、纖維素、或環(huán)糊精物質(zhì)中一種；所述氨基酸化合物為甘氨酸、賴氨酸、精氨酸、谷氨酸或組氨酸中一種；所述無機鹽類物質(zhì)為鋅鹽、鈣鹽、銅鹽、鎂鹽、或鉬鹽中一種。5、一種如權(quán)利要求1所述的用水包油一油包固體制備的PLA/PLGA殼一核微球的制備方法，其特征在于包括以下步驟①將藥物或藥物和藥用輔料制備成藥物顆粒；②將藥物顆粒加入到PLA和PLGA的有機溶液、或把親水性的藥物顆粒與PLGA的有機溶液混和后，再與PLA的有機溶液混和；或把疏水性的藥物顆粒與PLA先混和，再與PLGA的有機溶液混和；形成混懸液，即油相Oi中攪拌或漩渦使之均勻分散形成均勻的混懸液；③將完成步驟②形成微球的混懸液滴加到氯化鈉溶液和表面活性劑的水溶液乳化，形成復(fù)乳；④然后將步驟③的復(fù)乳轉(zhuǎn)移到氯化鈉溶液固化；⑤將完成步驟④的樣品凍干得到PLA/PLGA殼一核微球。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的用水包油一油包固體制備的PLA/PLGA殼一核微球的制備方法，其特征是，所述的藥物顆粒，其藥物顆粒的粒徑大小在0.2—10Pfflm，其重量占藥物顆?？傊亓康?.2-50%。7、根據(jù)權(quán)利要求5所述的用水包油一油包固體制備的PLA/PLGA殼一核微球的制備方法，其特征是，所述的PLA和/或PLGA的有機溶液為PLA和PLGA的有機溶液添加0.l—20%w/w聚乙二醇或泊洛沙姆；PLA和PLGA的二氯甲垸、乙酸乙酯、乙腈、庚垸、氯仿、或丙酮有機溶液。8、根據(jù)權(quán)利要求5所述的用水包油一油包固體制備的PLA/PLGA殼一核微球的制備方法，其特征是，所述的PLA和/或PLGA的有機溶液濃度為PLA的占總油相的重量百分比濃度為0.5-80%;PLGA占總油相的重量百分比濃度為20—99.5%。9、根據(jù)權(quán)利要求5所述的用水包油一油包固體制備的PLA/PLGA殼一核微球的制備方法，其特征是，所述的表面活性劑為聚乙烯醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、聚三梨醇、乙基纖維素、或吐溫，其中表面活性劑聚乙烯醇的濃度為—10%或含0.5—10%氯化鈉鹽溶液；聚乙二醇的濃度為0.5—20%或含0.5_10%氯化鈉的鹽溶液；聚乙烯吡咯烷酮濃度為0.5—20%或含0.5—10%氯化鈉鹽溶液；泊洛沙姆濃度為0.5—20%或含0.5—10%氯化鈉鹽溶液；聚三梨醇濃度為0.5一20%或含0.5—10%氯化鈉鹽溶液；乙基纖維素濃度為0.5—20%或含0.5—10%氯化鈉鹽溶液，以上濃度均為重量百分比濃度。10、根據(jù)權(quán)利要求5所述的用水包油一油包固體制備的PLA/PLGA殼一核微球的制備方法，其特征是，所述微球的粒徑為l-500Mni。全文摘要本發(fā)明涉及的是一種制藥
技術(shù)領(lǐng)域：
的用水包油—油包固體制備的PLA/PLGA殼—核微球及其制備方法，該微球包括藥物、聚乳酸和/或聚乳酸—羥基乙酸、或/和藥用輔料，重量百分比含量為藥物0.01-50％、聚乳酸和/或聚乳酸—羥基乙酸20-99.99％、藥用輔料為0-30％。本發(fā)明將藥物顆粒加到PLA和/或PLGA有機溶液中進行乳化，然后選擇親水性的有機溶劑再次乳化形成未硬化的球，最后在另一大油相硬化，除去有機溶劑并收集微球。本發(fā)明避免用常規(guī)的W/O和W/O/W的包封率不高，和S/O/O的突釋嚴重，及造成的環(huán)境污染的缺點，微球粒徑根據(jù)需要進行控制，不污染環(huán)境，可以運用到各種藥物緩釋或控釋微球的制備及疫苗的佐劑。文檔編號A61K9/16GK101461786SQ20091004502公開日2009年6月24日申請日期2009年1月8日優(yōu)先權(quán)日2009年1月8日發(fā)明者任甜甜,飛吳,袁偉恩,昊趙,拓金申請人:上海交通大學