專利名稱：：克感利咽口服液在制備防治禽流行性感冒中藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及防治禽流行性感冒的藥物。
背景技術(shù)：
：禽流感是禽流行性感冒的簡稱，它是由甲型流感病毒的其中一種亞型〔也稱禽流感病毒)引起的傳染性疾病，被國際獸疫局定為甲類傳染病。禽流感主要在鳥類中間傳播，偶可感染至人，其臨床表現(xiàn)與人類流行性感冒相似，但人禽流感癥狀重、并發(fā)癥多、病死率高，疫苗接種無效，與普通流感有一定區(qū)別。目前防治流感的最有效手段是接種流感疫苗，但至今仍為開發(fā)出供臨床應(yīng)用的的禽流感病毒疫苗，從而加大了防治的難度。由于目前尚無確切的抗病毒藥物，所以西藥對(duì)流感病毒的治療主要是抑制病毒復(fù)制。臨床應(yīng)用的抗流感藥已有20余種，它們對(duì)于禽流行性感冒所引起的各種癥狀具有緩解或消除作用，但最終還需靠人的自身免疫力治愈，且大多數(shù)的西藥都可能導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用。中醫(yī)藥從整體觀入手，辨證論治，認(rèn)為流感是在機(jī)體內(nèi)火伏里的基礎(chǔ)上外邪入里引發(fā)的。通過復(fù)方治療流感，既可清除內(nèi)熱，又可疏散外表風(fēng)寒之邪，表里同治，還可整體調(diào)節(jié)人體的免疫機(jī)能，達(dá)到扶正驅(qū)邪的目的，使流感得到徹底有效的治療。臨床上己有數(shù)十種治療流感的中成藥問世，如板藍(lán)根顆粒、抗病毒口服液、荊防敗毒散等。研究人員對(duì)中藥防治禽流行性感冒進(jìn)行了大量的研究，李艷華等報(bào)道貫眾、板藍(lán)根、黃芪、柴胡、連翹、黃連、金銀花、黃芩及甘草配制的復(fù)方中藥在體內(nèi)和體外對(duì)禽流感病毒均有一定抑制作用，具有延長感染雞的存活時(shí)間和增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用(李艷華等，復(fù)方中藥防治禽流感試驗(yàn)，中國獸醫(yī)雜志，2005年第6期14頁)。克感利咽口服液(國藥準(zhǔn)字Zl0970100)是一種治療感冒的中藥制劑，其有效成分由以下重量份的原料藥制成金銀花72份、黃芩72份、荊芥72份、梔子(炒制)72份、連翹72份、玄參72份、僵蠶(姜制)43份、地黃108份、射干22份、桔梗43份、薄荷43份、蟬蛻43份、防風(fēng)43份和甘草22份。該口服劑具有疏風(fēng)清熱，解毒利咽的作用，用于風(fēng)熱外侵、邪熱內(nèi)擾證者，對(duì)于治療流行性感冒有顯著效果，但目前尚未有該克感利咽口服液有防治禽流行性感冒的報(bào)道。雖然王國霞等人報(bào)道金銀花提取物體外在3.9mg/ml(即每毫升相當(dāng)于3.9mg生藥)時(shí)具有抑制禽流感病毒復(fù)制的作用(王國霞等，黃芪、金銀花提取物體外抗禽流感病毒的試驗(yàn)研究，中獸醫(yī)學(xué)雜志，2005年第3期46頁)，但本發(fā)明人的研究顯示金銀花單方對(duì)于體內(nèi)防治禽流行性感冒并無顯效。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供克感利咽口服液在制藥中的新用途。克感利咽口服液在制藥中的新用途是克感利咽口服液在制備防治禽流行性感冒中藥中的應(yīng)用；所述的克感利咽口服液為國家正式批準(zhǔn)生產(chǎn)和上市的中成藥，國藥準(zhǔn)字號(hào)為Z10970100,其每1000ml中所含的有效成分由以下原料制得金銀花72g、黃芩72g、荊芥72g、梔子72g、連翹72g、玄參72g、僵蠶43g、地黃108g、射干22g、桔梗43g、薄荷43g、蟬蛻43g、防風(fēng)43g和甘草22g;其中，所述的梔子為經(jīng)炒制的梔子，所述僵蠶為經(jīng)姜制的僵蠶。本發(fā)明所述克感利咽口服液還可含有聚山梨酯80、甜菊苷和苯甲酸鈉等輔料。上述克感利咽口服液的制備方法由以下步驟組成(1)取金銀花、荊芥、防風(fēng)和薄荷用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集；(2)取黃芩加65%乙醇提取2次，每次2小時(shí)，回收乙醇，加水適量煮沸，趁熱濾過，濾液備用；(3)將步驟(2)黃芩用乙醇提取后的藥渣及步驟(1)金銀花、荊芥、防風(fēng)和薄荷提取揮發(fā)油后的藥渣與梔子、連翹、玄參、僵蠶、地黃、射干、桔梗、蟬蛻和甘草加水煎煮2次，第一次2小時(shí)，第二次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液與步驟(1)所得水溶液合并，濃縮至在70。C時(shí)相對(duì)密度為1.061.11，加入乙醇使醇含量達(dá)60%(v/v)，靜置，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至在7(TC時(shí)相對(duì)密度為1.161.20，加入步驟(2)所得濾液，濃縮，干燥，得藥粉；(4)將步驟(1)所得到的揮發(fā)油和步驟(3)所得到的藥粉混合，加入去離子水至1000ml，分裝，滅菌，即得。上述方法中的步驟(4)中，還可以取適量聚山梨酯80、甜菊苷和苯甲酸鈉等輔料與步驟(1)所得到的揮發(fā)油和步驟(3)所得到的藥粉一道混合。本發(fā)明所涉及的克感利咽口服液除了具有治療普通感冒的作用外，還可抗禽流感病毒，抑制禽流感病毒致小鼠肺部炎癥，并能降低禽流感病毒感染小鼠的死亡率并延長其存活時(shí)間，具有顯著的防治禽流行性感冒的作用。當(dāng)所述的克感利咽口服液用于防治禽流行性感冒時(shí)，其用法如下每次20毫升，一日3次，7天一個(gè)療程；兒童每次10毫升，一日3次，7天一個(gè)療程。為了更好地理解本發(fā)明，下面將通過實(shí)施例和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步闡明所述克感利咽口服液在防治禽流感中的效果。具體實(shí)施例方式1、受試藥物克感利咽口服液，由廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)為080404。具體制備方法由以下步驟組成(1)取金銀花72g、荊芥72g、防風(fēng)43g和薄荷43g用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集；(2)取黃芩72g加65X(v/v)乙醇提取2次，每次2小時(shí)，回收乙醇，加水適量煮沸，趁熱濾過，濾液備用；(3)將步驟(2)黃芩乙醇提取后的藥渣及步驟(1)金銀花、荊芥、防風(fēng)和薄荷提取揮發(fā)油后的藥渣與梔子72g、連翹72g、玄參72g、僵蠶43g、地黃108g、射干22g、桔梗43g、蟬蛻43g和甘草22g加水煎煮2次，第一次2小時(shí)，第二次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液與金銀花經(jīng)蒸餾后的水溶液合并，濃縮至在70'C時(shí)相對(duì)密度為1.06-1.21，加入乙醇使醇含量達(dá)60%(v/v)，靜置，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至在7(TC時(shí)相對(duì)密度為1.06-1.21，加入步驟(2)黃芩乙醇提取液，濃縮，干燥，得藥粉；(4)將步驟(1)所得到的揮發(fā)油和步驟(3)所得到的藥粉與聚山梨酯805g、甜菊苷0.5g和苯甲酸鈉2g混合，加入去離子水至1000ml，分裝成100支，每支10ml，滅菌，即得。對(duì)照藥物h達(dá)菲(即磷酸奧司他韋膠囊)，由瑞士巴塞爾豪夫邁.羅氏有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為B1212。對(duì)照藥物2:金銀花提取物，由以下方法制備得到取金銀花72g用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集；金銀花提取揮發(fā)油后的藥渣加水煎煮2次，第一次2小時(shí)，第二次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液與金銀花經(jīng)蒸餾后的水溶液合并，濃縮至在7(TC時(shí)相對(duì)密度為1.06-1.21，加入乙醇使醇含量達(dá)60%(v/v)，靜置，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至在7(TC時(shí)相對(duì)密度為1.06-1.21濃縮，干燥，得藥粉；將所得到的揮發(fā)油和所得到的藥粉與聚山梨酯805g、甜菊苷lg和苯甲酸鈉2g混合，加入去離子水至1000ml，分裝成IOO支，每支10ml，滅菌即可。所得提取物每毫升含有由72mg金銀花提取出來的有效成分。2、實(shí)驗(yàn)材料KM小鼠，單一性別，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，SPF級(jí)別，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)粵監(jiān)證號(hào)2007A004,體重1315g。小鼠飼料為富含多種成分的配方。飼養(yǎng)環(huán)境室溫23±2°C，相對(duì)濕度75±10%。H9N2AIV由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)科技中心惠贈(zèng)。H9N2AIV鼠肺適應(yīng)株由本試驗(yàn)室經(jīng)昆明(KM)鼠傳代5次獲得，經(jīng)SPF雞胚傳代擴(kuò)增(一80'C保存)，KM鼠測定其小鼠半數(shù)致死量(LD50)。試驗(yàn)前，取毒種用流水沖浸融化，放冰水中保存，使用時(shí)稀釋。3、實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果(1)H9N2AIV對(duì)小鼠的半數(shù)致死劑量測定用滅菌肉湯將H9N2AIV稀釋成10—'，10-2，l(T，10-4，10—5等濃度的病毒液。KM種小鼠50只，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只，乙醚輕度麻醉后，滴鼻感染各個(gè)稀釋濃度的病毒，每鼠4滴，合約0.05mL，第3d開始記錄死亡小鼠的數(shù)量。根據(jù)Reed-Muench兩氏法計(jì)算，得到該病毒對(duì)小鼠的半數(shù)致死量(LD50)為10—2'896/0.05mL。(2)克感利咽口服液對(duì)小鼠禽流感病毒性肺炎的影響將體重13.015.Og的KM種小鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組，病毒對(duì)照組(即模型組)，陽性藥物組(達(dá)菲)，克感利咽口服液高、中、低劑量組，金銀花提取物高、中、低劑量組，15只/組。H9N2AIV感染小鼠的方法在乙醚輕度麻醉下，選用H9N2型禽流感病毒鼠肺適應(yīng)株15個(gè)LD50病毒濃度，滴鼻感染小鼠，用lmL注射器每只滴4滴，約0.05ml。從感染前l(fā)d丌始按擬定的劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)4d，病毒對(duì)照組以等容積蒸餾水灌胃。第6d稱取小鼠體重后解剖，肉眼觀察肺部病變，記錄肺部肝樣實(shí)變的程度，摘取全肺稱重，按式I計(jì)算肺指數(shù)值，按式II計(jì)算肺指數(shù)抑制率。肺指數(shù)知肺重(g)/小鼠體重(g)X100%(I)耐識(shí)翻率。/。=(病毒對(duì)照組平柳市微_藥物組平糊市指數(shù))纖(II)病毒對(duì)照組平均肺指數(shù)結(jié)果見表1和表2。正常對(duì)照組小鼠健康，體重增加，行為敏捷，毛發(fā)有光澤，呼吸正常。病毒對(duì)照組出現(xiàn)不同的發(fā)病經(jīng)過，一般在感染后第2d開始，小鼠食欲明顯下降，隨后逐漸出現(xiàn)甩頭，呼吸短促現(xiàn)象，并伴隨腹式呼吸，行動(dòng)遲緩無力，弓背，消瘦，體重減輕，第3d開始出現(xiàn)死亡，部分小鼠死前出現(xiàn)明顯的神經(jīng)癥狀，如打轉(zhuǎn)等。與病毒對(duì)照組相比較，藥物組動(dòng)物多數(shù)癥狀減輕，少數(shù)癥狀較重。小鼠感染H9N2AIV6d后被處死，解剖發(fā)現(xiàn)病毒對(duì)照組小鼠的肺部病變明顯，其肺指數(shù)與正常對(duì)照組比較具有顯著性差別(P〈0.01),表明H9N2AIV模型成功?？烁欣士诜焊摺⒅袆┝拷M對(duì)H9N2禽流感病毒所致小鼠肺炎病變均有明顯的抑制作用，與病毒對(duì)照組相比，肺指數(shù)明顯降低(P<0.01)，低劑量組有降低肺指數(shù)的作用，但與病毒對(duì)照組相比無顯著性差異(P〉0.05)。金銀花提取物在同樣的給藥劑量下未顯示具有降低肺指數(shù)的作用，與病毒對(duì)照組無顯著差異，未顯示抗禽流感的效果。6<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注:有該項(xiàng)。*表示與病毒對(duì)照組比較，？<0.05:**表示與病毒對(duì)照組比較，P<0.01,***表示P<0.001,"_"表示沒<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注*表示與病毒對(duì)照組比較，P<0.05:**表示與病毒對(duì)照組比較，P<0.01,***表示P<0.001,沒有該項(xiàng)。(3)本發(fā)明所述克感利咽口服液對(duì)感染H9N2型禽流感病毒小鼠的死亡保護(hù)實(shí)驗(yàn)將體重13.015.0g的KM種小鼠隨機(jī)分成分成TH常對(duì)照組，病毒對(duì)照組(即模型組)，陽性藥物組(達(dá)菲)，克感利咽口服液高、中、低劑量組，金銀花提取物高、中、低劑量組，15只/組。H9N2感染小鼠的方法:在乙醚輕度麻醉下，選用H9N2型禽流感病毒鼠肺適應(yīng)株2個(gè)LD50病毒濃度，滴鼻感染小鼠，用lmL注射器每只滴4滴，約0.05ml。感染前l(fā)d開始按擬定的劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)8d,病毒感染對(duì)照組以等體積蒸餾水灌胃。逐日觀察動(dòng)物發(fā)病和記錄死亡數(shù)，共觀察15d，然后按式III和IV計(jì)算死亡保護(hù)率和生命延長率。死亡保護(hù)率％=(病毒對(duì)照組死亡率一藥物組死亡率)/病毒對(duì)照組死亡率X100X(III)生命延長率。/。=(藥物組平均蹄天數(shù)—病翻照組平均存活天數(shù))x謂%(rv)卩病毒對(duì)照組平均存活天數(shù)結(jié)果見表3和表4。感染H9N2AIV小鼠臨床表現(xiàn)小鼠感染禽流感病毒后，大多發(fā)病在4d以后，聳毛、活動(dòng)減少、體重減輕、體溫下降等癥狀，從第5日開始出現(xiàn)死亡。'鼠出現(xiàn)與空白對(duì)照組相比較，病毒對(duì)照組小鼠死亡數(shù)明顯增加，平均存活時(shí)間顯著減少(P〈0.01)，表明模型H9N2AIV成功?？烁欣士诜焊鲃┝拷M均可減少小鼠死亡數(shù)，延長平均存活時(shí)間，提高死亡保護(hù)率和生命延長率的作用，高劑量組效果明顯(P<0.05)，中、低劑量組與病毒對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P〉0.05)。金銀花提取物在同樣的給藥劑量下未顯示具有保護(hù)小鼠，降低死亡率的作用，與病毒對(duì)照組無顯著差異，未顯示抗禽流感的效果。表3克感利咽口服液對(duì)感染H9N2AIV小鼠的死亡保護(hù)作用組別給藥方式死亡數(shù)/死亡保護(hù)平均存活時(shí)間生命延長(口服)總數(shù)率(％)(/d)率(％)空白對(duì)照組病毒對(duì)照組達(dá)菲克感高劑量組克感中劑量組克感低劑量組0.2mL/只,2次/天0.4mL/只，2次/大0.2mL/只，l次/天0.lmL/只，l次/天0/1511/150/156/159/1510/1510010045.4518.189.0815.OO土O.008.93±3.9215.OO士O.0011.73±4.2010.33±4.039.07±4.6367.9167.9131.3415.671.49注*表示與病毒對(duì)照組比較，P<0.05;林表示與病毒對(duì)照組比較，P<0.01;表示沒有該項(xiàng)。表4金銀花提取物對(duì)感染H9N2AIV小鼠的死亡保護(hù)作用Mfill給藥方式死亡數(shù)/死亡保護(hù)平均存活時(shí)間生命延長組別(口服)總數(shù)率(％)(/d)率(％)空白對(duì)照組—0/1010015.0067.91病毒對(duì)照組一10/10_5.8一達(dá)非0.2mL/只,2次/天3/107012.1108.60.4mL/只，2次/天9/945.455,91.7金銀花0.2mL/只，1次/天9/918.185.2_10.30.lmL/只，l次/天9/99,083.8一34.5注*表示與病毒對(duì)照組比較，P<0.05;**表示與病毒對(duì)照組比較，P<0.01;"—"表示沒有該項(xiàng)。結(jié)論由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可看出，克感利咽口服液對(duì)H9N2禽流感病毒所致小鼠肺炎病變有明顯的抑制作用，可減少H9N2感染的小鼠死亡數(shù)，延長平均存活時(shí)間，具有提高禽流感病毒感染小鼠的死亡保護(hù)率和生命延長率的作用，表明克感利咽口服液在體內(nèi)具有明顯抗禽流感病毒的作用。雖然有文獻(xiàn)報(bào)道金銀花提取物體外在3.9mg/ml時(shí)具有抑制禽流感病毒復(fù)制的作用，但上述對(duì)比試驗(yàn)顯示，與克感利咽同等給藥劑量(72mg/ml)的金銀花提取物未顯示防治禽流行性感冒的作用，這充分證明克感利咽方抗禽流感病毒的作用并非是由金銀花單方提供的，而是由其十四味藥共同作用的結(jié)果。權(quán)利要求1、克感利咽口服液在制備防治禽流行性感冒中藥中的應(yīng)用；所述的克感利咽口服液，每1000ml中所含的有效成分由以下原料制得金銀花72g、黃芩72g、荊芥72g、梔子72g、連翹72g、玄參72g、僵蠶43g、地黃108g、射干22g、桔梗43g、薄荷43g、蟬蛻43g、防風(fēng)43g和甘草22g；其中，所述的梔子為經(jīng)炒制的梔子，所述僵蠶為經(jīng)姜制的僵蠶。2、如權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其中所述的克感利咽口服液的制備方法由以下步驟組成(1)取金銀花、荊芥、防風(fēng)和薄荷用水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集；(2)取黃芩加65%乙醇提取2次，每次2小時(shí)，回收乙醇，加水適量煮沸，趁熱濾過，濾液備用；(3)將步驟(2)黃苳用乙醇提取后的藥渣及步驟(1)金銀花、荊芥、防風(fēng)和薄荷提取揮發(fā)油后的藥渣與梔子、連翹、玄參、僵蠶、地黃、射干、桔梗、蟬蛻和甘草加水煎煮2次，第一次2小時(shí)，第二次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液與步驟(1)所得水溶液合并，濃縮至在70。C時(shí)相對(duì)密度為1.061.11,加入乙醇使醇含量達(dá)60%(v/v)，靜置，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至在7CTC時(shí)相對(duì)密度為1.161.20，加入步驟(2)所得濾液，濃縮，干燥，得藥粉；(4)將步驟(1)所得到的揮發(fā)油和步驟(3)所得到的藥粉與適量的聚山梨酯80、甜菊苷和苯甲酸鈉混合，加入去離子水至1000ml，分裝，滅菌，即得。全文摘要本發(fā)明涉及克感利咽口服液在制備防治禽流行性感冒中藥中的應(yīng)用；所述的克感利咽口服液為國家正式批準(zhǔn)生產(chǎn)和上市的中成藥，其國藥準(zhǔn)字號(hào)為Z10970100，它由以下原料藥制成的有效成分與適量的聚山梨酯80、甜菊苷和苯甲酸鈉混合加水至去離子水至1000ml制得金銀花72g、黃芩72g、荊芥72g、梔子72g、連翹72g、玄參72g、僵蠶43g、地黃108g、射干22g、桔梗43g、薄荷43g、蟬蛻43g、防風(fēng)43g和甘草22g。本發(fā)明所涉及的克感利咽口服液可抗禽流感病毒，抑制禽流感病毒致小鼠肺部炎癥，并能降低禽流感病毒感染小鼠的死亡率并延長其存活時(shí)間，具有顯著的防治禽流行性感冒的作用。文檔編號(hào)A61P31/16GK101564475SQ200910039349公開日2009年10月28日申請日期2009年5月8日優(yōu)先權(quán)日2009年5月8日發(fā)明者耿李,蘇子仁,賴小平申請人:廣州中醫(yī)藥大學(xué)