專利名稱：：用于治療腫瘤的聯(lián)合用藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于治療腫瘤的聯(lián)合用藥物，尤其涉及包含有錳卟啉的用于治療腫瘤的聯(lián)合用藥物。
背景技術(shù)：
：近年來我國每年新增腫瘤患者160萬-170萬人，總數(shù)在450萬人左右。其發(fā)病率和死亡率均呈現(xiàn)上升趨勢。國家衛(wèi)生部發(fā)布的《2009年中國衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)提要》顯示，2008年部分市縣前十位疾病死亡專率中，惡性腫瘤居于首位，已成為危害人類健康的頭號殺手。盡管己存在許多抗腫瘤藥物，而且有更多的化合物已被發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤作用，如二氯乙酸鹽和色甘酸鈉。但是，大多數(shù)抗腫瘤藥物由于缺乏理想的選擇性，在抑制或殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對人體正常組織細(xì)胞也具有抑制或損傷作用，因而具有較多的副作用，如蒽環(huán)類抗癌抗生素阿霉素的心臟毒性、順鉑加環(huán)磷酰胺化療方案所致骨髓毒性的作用、順鉑治療卵巢癌或睪丸癌所誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性及其腎毒性等。因此，如何在保持和提高抗腫瘤藥物療效的同時(shí)，減小其毒性作用是抗腫瘤藥物研發(fā)的重點(diǎn)。金屬卟啉是目前正在研發(fā)的一類超氧化物歧化酶(SOD)模擬物，其中包括多種錳葉啉，可催化性清除自由基，用于治療自由基過多引起的疾病。在多種錳卟啉中，錳(m)-5,10，15,20-四-[3-[2-(2-甲氧乙氧基)乙氧基]苯基]-卟啉氯化物(公開在中國專利CN1450066A中，公開日2003年10月22日)作為小分子催化性抗氧化劑，可以消除體內(nèi)過多的氧自由基，預(yù)防和治療由于有害過氧化物的存在而引起的疾病。目前，尚未有將將錳葉啉同抗腫瘤藥物聯(lián)合使用用于治療腫瘤的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一類用于^療腫瘤的聯(lián)合用藥物。一種用于治療腫瘤的聯(lián)合用藥物，包括錳卟啉以及色甘酸鈉且任選的可以包括一種或多種可藥用載體，其中錳卟啉與色甘酸鈉的質(zhì)量配比以l:115為佳。一種用于治療腫瘤的聯(lián)合用藥物，包括錳卟啉以及二氯乙酸或其藥學(xué)上可接受的鹽且任選的可以包括一種或多種可藥用載體，其中錳卟啉與二氯乙酸的質(zhì)量配比以h110為佳。一種用于治療腫瘤的聯(lián)合用藥物，包括錳卟啉以及任一種抗腫瘤藥物且任選的可以包括一種或多種可藥用載體。所述抗腫瘤藥物為阿霉素或其可藥用的鹽、氯尼達(dá)明或其可藥用的鹽、鉑類抗腫瘤藥物中的任一種。所述鉑類抗腫瘤藥物為卡鉑、雙環(huán)柏、順鉑、奧沙利鉑中的任一種。所述抗腫瘤藥物為除氧氮磷環(huán)類藥物外的烷化劑。所述垸化劑為氮芥、卡莫司汀、尼莫司汀、丙卡巴肼、尿嘧啶氮芥、替莫唑胺、苯丙氨酸氮芥中的任一種或其可藥用的鹽。上述錳卟啉與阿霉素的質(zhì)量配比以1:16為佳，錳葉啉與氯尼達(dá)明的質(zhì)量配比以1:7.520為佳，錳卟啉與卡鉑的質(zhì)量配比以1:210為佳，錳卟啉與順鉑的質(zhì)量配比以1:l4為佳，錳卟啉與氮芥的質(zhì)量配比以1:0.56為佳，錳卟啉與卡莫司汀的質(zhì)量配比以1:l9為佳，錳卟啉與丙卡巴肼的質(zhì)量配比以l:512為佳，錳卟啉與替莫唑胺的質(zhì)量配比以1:2230為佳。所述錳卟啉為錳(III)-5，10,15,20-四-[3-[2-(2-甲氧乙氧基)乙氧基]苯基]-卩卜啉氯化物。本發(fā)明還公開了錳卟啉在制備與抗腫瘤藥物一起給藥的治療腫瘤的聯(lián)合用藥物中的用途。所述錳卟啉的有效治療劑量為0,150mg/Kg體重，優(yōu)選0.015mg/Kg體重。所述可藥用的鹽包括酸加成的鹽，比如鹽酸、富馬酸、馬來酸、檸檬酸、琥珀酸等。所述可藥用載體為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知和常用的，如丸劑、片劑、膠囊劑等中的填充劑或載體物質(zhì)，這些物質(zhì)通常被保健專家認(rèn)可用于這一目的且作為藥劑的非活性成分。所述聯(lián)合用藥物可以制成任意劑型。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明所述的聯(lián)合使用包括以下兩種方式一是將猛卟啉及可聯(lián)合使用的藥物分別制成單獨(dú)的制劑，兩種制劑的劑型可以不同，并且可聯(lián)合使用的藥物可以采用其現(xiàn)有劑型。在使用時(shí)可以將這兩種藥物先后使用，也可以同時(shí)服用。將兩種藥物先后使用時(shí)，錳卟啉的單獨(dú)制劑可以首先服用。依次給藥時(shí)，給予第二種組分時(shí)第一種組分應(yīng)該還未喪失其在體內(nèi)的有效作用。二是將上述錳卟啉及可聯(lián)合使用的藥物制成單一的復(fù)方制劑，使用時(shí)同時(shí)服用。配制藥物組合物及使用時(shí)，需要產(chǎn)生作用的錳卟啉及可聯(lián)合用藥物的劑量可以改變，且最終由醫(yī)務(wù)人員決定，所考慮的因素包括患者年齡及疾病性質(zhì)和嚴(yán)重程度。本申請的發(fā)明人做了一系列相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，實(shí)驗(yàn)證明，將錳卟啉與上述可聯(lián)合使用的藥物聯(lián)合用藥，可以提高腫瘤治療效果，并可以降低其毒性，延長實(shí)驗(yàn)動物的存活時(shí)間。錳卟啉本身并沒有抗腫瘤的作用，但將其與抗腫瘤藥物聯(lián)合用藥后，卻可以顯著地增強(qiáng)抗腫瘤藥物的療效，并降低其毒副作用，取得了意想不到的效果。下面通過附圖和具體實(shí)施方式作詳細(xì)的說明。圖1為體內(nèi)TUN-EL標(biāo)記法測定的胰腺癌細(xì)胞凋亡率示意圖(％，20X);其中，ANS組胰腺癌細(xì)胞凋亡率(4.7±1.5)，B色甘酸鈉組胰腺癌細(xì)胞凋亡率(10。4±1.8)，C錳卟啉+色甘酸鈉組胰腺癌細(xì)胞凋亡率(22.1±3。4)。圖2為各組裸大鼠皮下接種人肺癌A549細(xì)胞后腫瘤直徑變化曲線示意圖3為錳卟啉與順鉑聯(lián)合用藥物對肺腺癌小鼠移植瘤腫瘤生長的影響示意圖。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1錳卟啉卡莫司汀復(fù)方注射液配方如下錳卟啉400mg卡莫司汀3.5g聚乙二醇150ml注射用水_加至250ml'_制成50支制備工藝西林瓶、膠塞先粗洗，后用經(jīng)0.45um微孔濾膜濾過的注射用水精洗至可見異物合格，然后烘干備用。向配液灌中加入處方量的錳卟啉，聚乙二醇50ml，使其完全溶解，作為溶液l。在另一配液灌中加入處方量的卡莫司汀，聚乙二醇100ml，使其完全溶解，作為溶液2。將溶液2合并加入溶液1中，8(TC加熱10分鐘，冷卻加注射用水至全量，混勻。實(shí)施例2錳卟啉與色甘酸鈉聯(lián)合用藥物對小鼠胰腺癌的治療作用評價(jià)人胰腺癌MIAPaCa-2細(xì)胞懸液調(diào)整至每毫升5X106個(gè)細(xì)胞，0.2ml細(xì)胞懸液(含lX106個(gè)細(xì)胞)接種于30只免疫復(fù)合缺陷雌鼠胰腺，1周后隨機(jī)分為三組，對照組(NS)每天尾靜脈注射生理鹽水0.2ml，色甘酸鈉組每天尾靜脈注射色甘酸鈉30mg/kg體重，錳卩卜啉+色甘酸鈉組每天尾靜脈注射錳卟啉2mg/kg體重，色甘酸鈉30mg/kg體重。連續(xù)注射3周后處死動物，解剖提取腫瘤，測定腫瘤體積(V4/6X:iX長X高X寬)。腫瘤組織置于4'C三聚甲醛中固定2-4h，包埋于鳥氨酸胺甲?；D(zhuǎn)移酶復(fù)合物中，液氮速凍，-8(TC冷藏。切成5um厚的組織切片行CD31免疫組化染色。細(xì)胞增殖情況腫瘤組織切片用PBS液沖洗，采用過氧化酶標(biāo)記的鏈霉卵白素免疫組織化學(xué)法。每批染色均設(shè)陰性對照(以PBS置換一抗作陰性對照)。光鏡下觀察結(jié)果。每片觀察5個(gè)高倍視野，統(tǒng)計(jì)陽性細(xì)胞數(shù)所占的百分?jǐn)?shù)。增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)為顆粒型或彌漫型棕色陽性，定位于癌細(xì)胞核內(nèi)，胞漿一般不著色。部分核分裂細(xì)胞顯示整個(gè)細(xì)胞的陽性反應(yīng)。TUNE熒光法測定胰腺癌細(xì)胞凋亡率:將對照組及各實(shí)驗(yàn)組的腫瘤標(biāo)本在體積測量后取出，10%福爾馬林液固定，TUNEL標(biāo)記檢測。凋亡細(xì)胞可被dUTP標(biāo)記，熒光顯微鏡下呈熒光陽性。分別在至少5個(gè)有代表性的100倍視野下計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞中的凋亡細(xì)胞，計(jì)算各組凋亡率。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值土標(biāo)準(zhǔn)差表示，單因素各組間樣本均數(shù)的多重比較采用單因素方差分析和LSD-t檢驗(yàn)。用SPSS10.0軟件分析結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下腫瘤體積見表l。LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行組間的多重比較各治療組平均腫瘤體積均顯著低于NS組(P〈0.05)，錳卟啉+色甘酸鈉組平均腫瘤體積顯著低于色甘酸鈉組(P<0.05)。表1猛卟啉與色甘酸鈉聯(lián)合用藥物對小鼠胰腺癌的治療作用評價(jià)(n=10)組別腫瘤體積(咖3)增殖指數(shù)(％)凋亡率a)NS組1042.20±235.1922.05±2,074.7±1.5色甘酸鈉組710.56±167.47"13.24±2.95''10.4±1.8a錳口卜啉+色甘酸鈉組265.60±19.36"9.01±2.63"'h22.l土3.4"a:與對照組相比P〈0.05;、與色甘酸鈉組相比P<0.05。胰腺癌細(xì)胞增殖指數(shù)見表1。胰腺癌細(xì)胞增殖指數(shù)多組間比較方差分析F=26.47，P=0.000。LSD-1檢驗(yàn)進(jìn)行組間的多重比較各治療組癌細(xì)胞增值指數(shù)均明顯低于NS組(P<0.05):錳卟啉+色甘酸鈉組細(xì)胞增殖指數(shù)顯著低于NS組和色甘酸鈉組(P〈0.05)。胰腺癌細(xì)胞凋亡率見表l、圖l。細(xì)胞凋亡率多組間比較方差分析F:60.22，P=0.000。LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行組間的多重比較各治療組細(xì)胞凋亡率顯著高于對照組(P〈0.05);錳葉啉+色甘酸鈉組細(xì)胞增殖指數(shù)顯著高于NS組和色甘酸鈉組(P〈0.05)。以上結(jié)果提示，色甘酸鈉在體內(nèi)可顯著抑制胰腺癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞凋亡，從而抑制胰腺癌生長，而錳卟啉與色甘酸鈉的聯(lián)合用藥物可以提高色甘酸鈉對胰腺癌的抑制作用。實(shí)施例3錳卟啉與二氯乙酸鈉聯(lián)合用藥物對大鼠肺癌的治療作用評價(jià)人肺癌A549細(xì)胞懸液調(diào)整至每毫升15Xl(f個(gè)細(xì)胞，取0.2ml(3乂106個(gè)細(xì)胞)左前肢腋窩皮下注射接種于30只雄性成年裸大鼠，接種二周后隨機(jī)分為三組，對照組(NS)每天尾靜脈注射生理鹽水0.2ml,二氯乙酸鈉組將二氯乙酸鈉以0.075g/L溶于喂飼用水中，每天自由攝取)，錳卟啉+二氯乙酸鈉組除給予含二氯乙酸鈉的喂飼用水外，每天尾靜脈注射錳口卜啉2mg/kg體重。每周用游標(biāo)卡尺測量各組動物腫瘤的最大直徑至給藥后四周，后處死裸大鼠，結(jié)果見圖2。由數(shù)據(jù)可知，給藥組均可顯著逐漸抑制腫瘤的生長，其中錳葉啉+二氯乙酸鈉組抑制效果優(yōu)于二氯乙酸鈉組及NS組。實(shí)施例4錳卟啉與阿霉素聯(lián)合用藥物對實(shí)體瘤的治療作用評價(jià)健康昆明種小鼠30只，體重20-24g，雌雄兼用。瘤細(xì)胞接種無菌抽取荷H-22肝癌小鼠第7天腹水，用生理鹽水稀釋10倍，于受試小鼠右前肢腋窩皮下注射0.2ml。所有小鼠隨機(jī)分為3組，每組10只，雌雄各半。對照組(NS)尾靜脈注射生理鹽水0.2ml;阿霉素組(ADR)，尾靜脈注射高劑量阿霉素8mg/kg體重；錳卟啉+ADR組尾靜脈注射低劑量ADR4mg/kg體重，尾靜脈注射錳卟啉2mg/kg體重。各組小鼠均于接種瘤細(xì)胞后第2天開始實(shí)驗(yàn)，NS組和ADR組每周給藥2次，連續(xù)2周。錳卟啉+ADR組每次注射阿霉素前1h，尾靜脈注射錳卟啉。瘤細(xì)胞接種后第14天以脫臼法處死小鼠，用天平稱重，再分離瘤體用電子天平稱瘤重，計(jì)算瘤重/體重比值。抑瘤率按照公式(NS組瘤重-給藥組瘤重)/NS組瘤重X100%計(jì)算。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見表2。其中錳卟啉+ADR組的腫瘤抑制效果顯著由于ADR組和NS組。表2各組小鼠平均瘤重、瘤重/體重及抑瘤率(n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>:與NS組相比P〈0.05:b:與ADR組相比P<0.05。實(shí)施例5錳卟啉與阿霉素(ADR)聯(lián)合用藥物對腹水型腫瘤的治療作用評價(jià)S^腹水型荷瘤小鼠接種后7天，抽取乳白色粘稠腹水，稀釋后調(diào)整瘤細(xì)胞數(shù)為每ml2X107個(gè)細(xì)胞。將0.2ml瘤細(xì)胞懸液(含瘤細(xì)胞約4X106個(gè))接種于每只昆明種小鼠(30只，雌雄各半，體重18-24g)前肢腋下皮下組織。將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為3組，對照組(NS)尾靜脈注射生理鹽水0.2ml;ADR組，尾靜脈注射高劑量ADR8mg/kg體重；錳卟啉+ADR組尾靜脈注射低劑量ADR4mg/kg體重，錳卟啉2mg/kg體重。接種瘤細(xì)胞懸液24h后，各給藥組按照總劑量的1/5尾靜脈注射給藥，連續(xù)給藥5d，每次給藥容積為0.2ml。給藥后觀察動物生存時(shí)間，按下列公式計(jì)算各給藥組動物生命延長率(％):(給藥組動物平均存活天-NS組動物平均存活天數(shù))/NS組動物平均存活天數(shù)X100%。結(jié)果見表3，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值土標(biāo)準(zhǔn)差表示"表3各組動物生命延長率組別n平均存活天數(shù)(d)生命延長率(％)NS組1010.5±1.6—ADR組1021.4±3.4a104錳口卜啉+ADR組1026.8±4,3"155a:與NS組相比P〈0.01;b:與ADR組相比P<0.01。錳口卜啉+ADR組動物平均存活天數(shù)顯著長于NS組和ADR組。實(shí)施例6錳卟啉與氯尼達(dá)明(LND)聯(lián)合用藥物對腹水型腫瘤的治療作用評價(jià)SPF級C3H/Km小鼠，30只，12-14周齡，體重,30-35g，左腋下皮下接種RIF-1腫瘤細(xì)胞，2X1()5細(xì)胞每只，接種后10天左右，待腫瘤體積接近100mm3，隨機(jī)分為3組，對照組(NS)尾靜脈注射生理鹽水0.2ml，LND組尾靜脈注射氯尼達(dá)明40mg/kg體重，錳卟啉+LND組尾靜脈注射氯尼達(dá)明40mg/kg體重，錳卟啉2mg/kg體重。用游標(biāo)卡尺測量腫瘤體積，每2天測量一次，直至腫瘤體積為給藥時(shí)體積的四倍。以各組腫瘤體積生長至給藥時(shí)體積四倍的天數(shù)差異(與NS組相比)計(jì)算腫瘤生長延緩時(shí)間，數(shù)據(jù)以平均值士標(biāo)準(zhǔn)差表示。利用的體重減輕作為各治療組毒性定量指標(biāo)，體重減輕通過體重減去腫瘤重量計(jì)算，腫瘤重量(mg)按照(AXB2)K/2計(jì)算，其中A為瘤縱軸的長度(mm)、B為瘤垂直軸的寬(mm)、K為轉(zhuǎn)化系數(shù)，結(jié)果以百分?jǐn)?shù)(以分組時(shí)為基準(zhǔn))表示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。由所得數(shù)據(jù)可知，錳卟啉與LND聯(lián)合用藥物的腫瘤抑制效果顯著優(yōu)于LND和NS組，且其毒性小于LND和NS組。表4各組動物的腫瘤生長延緩時(shí)間組別n腫瘤生長延緩時(shí)間(天)體重減輕(％)NS組10—0LND組103.8±1.5a7.9錳U卜啉+LND組108.4±2。3a'b2,4a:與NS組相比P〈0。01;b:與LND組相比P<0.01。實(shí)施例7鎮(zhèn)卟啉與丙卡巴肼聯(lián)合用藥物對多發(fā)性骨髓瘤的治療作用評價(jià)動物:SCID小鼠，30只，6-7周齡，體重20-25g左右、雌雄各半細(xì)胞株與抗體IL-6依賴的人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株XG7、激發(fā)型gpl30mAbSCID小鼠的滲漏檢測用毛細(xì)管于SCID小鼠ELISA后靜脈叢釆血，分離血清，用ELISA法檢測鼠血清中IgG含量。腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng):人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株XG7培養(yǎng)于含3ug/ml的IL-6和10%FCS的RMPI-1640中，置于37°C、5%C02的細(xì)胞培養(yǎng)箱中。移植前一周，添加5ug/ml的激發(fā)型gP130mAb，連續(xù)培養(yǎng)一周，取對數(shù)生長期的XG7細(xì)胞備用。移植瘤動物模型建立及給藥取合格SCID小鼠，分別經(jīng)尾靜脈注射制備的XG7細(xì)胞0,5ml(lX107個(gè)細(xì)胞)，進(jìn)行初次接種。在初次接種的當(dāng)天，每只小鼠注射100g的激發(fā)型gpl30mAb，隨后每隔4天注射一次，每次50g，共5次。對5只形成實(shí)體腫瘤的小鼠，摘眼球取血，并摘取腫瘤，在無菌條件下，將新鮮腫瘤標(biāo)本浸泡于細(xì)胞培養(yǎng)液中，清除脂肪、纖維和壞死組織，然后剪碎腫瘤組織成3mm3左右，用套管針接種于SCID小鼠皮下。接種后15天，取30只合格SCID小鼠隨機(jī)分為三組，對照組(NS)尾靜脈注射0.2ml生理鹽水，丙卡巴肼組尾靜脈注射丙卡巴肼12mg/kg體重，錳卟啉+丙卡巴肼組尾靜脈注射丙卡巴肼12mg/kg體重，錳卟啉2mg/kg體重。給藥后20天處死小鼠，取出腫瘤，測定腫瘤最大長徑(a)及橫徑(d),根據(jù)公式V=ab2/2計(jì)算腫瘤體積。結(jié)果見表5，數(shù)據(jù)表明錳卟啉可顯著提高丙卡巴肼的抗腫瘤效果。表5各組動物多發(fā)性骨髓瘤體積(mm3)組別瘤體積NS組丙卡巴肼組錳卟啉+丙卡巴肼組a:與NS組相比P〈0.01;b:與丙卡巴肼組相比P<0.01。實(shí)施例8猛卟啉與替莫唑胺聯(lián)合用藥物對腦腫瘤治療作用的實(shí)驗(yàn)研究取對數(shù)生長期人腦腫瘤SF763細(xì)胞，生理鹽水調(diào)節(jié)濃度為1X107ml，對BALB/cA小鼠進(jìn)行接種，接種體積為0.025ml，接種點(diǎn)為一等邊三角形的頂點(diǎn)，底邊為右耳與右眼的連線，高為5mm左右，接種深度為2mm左右。將小鼠用4.35%三氯水合氯醛麻醉后，酒精消毒，用注射器接種。接種7天后，小鼠分別隨機(jī)分為3組，每組10只。對照組(NS)每天尾靜脈注射0.2ml生理鹽水，替莫唑胺(TMZ)組每天尾靜脈注射TMZ60.Omg/kg體重的劑量瘤內(nèi)注射，錳卟啉+TMZ組每天尾靜脈注射TMZ60.0mg/kg體重，錳卟啉2.0mg/kg體重，每兩日給藥一次。觀察和記錄動物死亡時(shí)間，記算平均生存天數(shù)和生命延長率，生命延長率以給藥組平均生存天數(shù)與對照組平均生存天數(shù)的差值除以對照組平均生存天數(shù)所得的百分?jǐn)?shù)計(jì)算。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6，數(shù)據(jù)表明錳B卜啉可顯著提高替莫唑胺的抗腫瘤效果。表6對腦腫瘤的治療作用組別生存時(shí)間(d)生命延長率(％)NS組21'5TMZ組39.3a82.8錳H卜啉+TMZ組56.1ab161:與NS組相比P〈0.01;b:與TMZ組相比P<0.01。實(shí)施例9錳卟啉與卡鉑聯(lián)合用藥物的抗腫瘤作用BABIMcnu/nu裸小鼠30只，SPF級，雌雄各半，6周齡，體重17_25g。裸小鼠皮下傳代的胃癌組織SGC-7901，種植時(shí)處死荷瘤鼠，皮膚消毒，完整分離、摘取腫瘤組織，浸入生理鹽水中，剪碎為約2imn直徑的腫瘤碎塊分別種植至30只裸鼠背部皮下。接種后第二周，動物隨機(jī)分成三組，對照組(NS)尾靜脈注射生理鹽水0.2ml，卡鉑組尾靜脈注射卡鉑6mg/kg體重，錳卟啉+卡鉑組尾靜脈注射卡鉑6mg/kg體重，錳卟啉3mg/kg體重，每周給藥兩次，治療第6周末斷頸處死小鼠，取完整腫瘤組織，測量皮下腫瘤的最大長徑(a)與橫徑(b)，根據(jù)公式V^bV2計(jì)算腫瘤體積，并計(jì)算抑瘤率，抑瘤率^治療組腫瘤體積-NS組腫瘤體積)/NS組腫瘤體積X100X，數(shù)據(jù)以平均值士標(biāo)準(zhǔn)差表示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7。錳卟啉可以顯著提高卡鉑的抗腫瘤效果。表7對裸小鼠皮下接種人胃癌SGC-7901的生長抑制作用組別n腫瘤體積(mm3)抑瘤率(％)NS組101609.55±41.23—卡鉬組101375,17±38.75"14.56錳卟啉+卡鉑組10871,26土38.84"45,87、與NS組相比P〈0.05;b:與TMZ組相比P^0.05實(shí)施例10錳卟啉與順鉑聯(lián)合用藥物的抗腫瘤作用4-5周齡T739雄性小鼠30只，SPF級，20g左右；LA795肺腺癌荷瘤鼠2只。處死荷瘤鼠，無菌條件下剝離瘤塊，按lg腫瘤組織加4ml生理鹽水放入表面皿中，剪碎腫瘤，研磨成勻漿液，過360目鋼網(wǎng)，制成腫瘤細(xì)胞懸液，倒入離心管，加生理鹽水，顯微鏡下調(diào)節(jié)細(xì)胞密度為2X10Vml，每只小鼠右后腿根部外側(cè)皮下注射0.2ml腫瘤細(xì)胞懸液，建立小鼠高轉(zhuǎn)移性腫瘤模型。接種4天后將30只實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分成3組，每組10只。對照組(NS)每只尾靜脈注射生理鹽水0.2ml,每日一次；順鉑組，順鉑2mg/(kg*d)溶于生理鹽水0.2ml尾靜脈注射，于接種后第4、11、18天各一次；錳卟啉+順鉑組，順鉑按順鉑組用藥量用藥，錳卟啉每日給藥劑量2mg/kg體重，給藥時(shí)間同順鉬組。用藥期間每2天用游標(biāo)卡尺測量小鼠皮下腫瘤最大長徑(a)和橫徑(b)，根據(jù)公式V=ab2/2計(jì)算腫瘤體積，結(jié)果如圖3所示，腫瘤接種后的第1-4天，移植瘤生長速度基本相同，成瘤率為100%，各組皮下移植瘤的體積逐漸增大，對照組移植瘤生長明顯快于給藥組，錳葉啉+順鉑組腫瘤生長最慢。提示錳卟啉可以提高順鉑對腫瘤的抑制作用。實(shí)施例11'錳卟啉與卡莫司汀聯(lián)合用藥物的抗腫瘤作用C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞接種于含有1596胎牛血清的1640培養(yǎng)液中，37°C，5%002培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。取對數(shù)生長期細(xì)胞，按每只鼠接種1X106細(xì)胞的量，將其稀釋與15ul細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)備用。30只Wistar大鼠，體重200-250g，麻醉鉆孔后用微量注射器垂直插入硬膜下5cm，將15ul細(xì)胞懸液緩慢注入(IOmin)，出針后骨蠟封閉骨孔，縫合皮膚。接種后5天，大鼠隨機(jī)分為三組，對照組(NS)每只尾靜脈注射生理鹽水0.2ml,每曰一次；卡莫司汀組，按卡莫司汀2mg/kg溶于0.2ml生理鹽水尾靜脈注射每日一次；錳口卜啉+卡莫司汀組，卡莫司汀按順卡莫司汀組用藥量用藥，錳卟啉每日給藥劑量2mg/kg體重。給藥后記錄各組動物存活時(shí)間。NS組接種后14-18天死亡，最長存活23天，平均存活17天；卡莫司汀組最短存活26天，大部分超過30天，2只存活超過80天，最長存活127天，平均存活62天；錳卟啉+卡莫司汀組最短存活42天，5只存活超過80天，2只已存活150天，仍未出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。可見錳卟啉可顯著提高卡莫司汀對鼠膠質(zhì)瘤的抑制作用。實(shí)施例12錳卟啉與氮芥聯(lián)合用藥物對HL-60白血病細(xì)胞的抑制作用將HL-60細(xì)胞置于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)體系中，在37°C、5%體積分?jǐn)?shù)的C02、飽和濕度下培養(yǎng)，48-72h傳代1次。取對數(shù)生長期h1-60細(xì)胞接種于96孔板，每孔接種約1。5Xl(f個(gè)細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分3組對照組(只加培養(yǎng)液)、氮芥組(氮芥的終濃度0.80mg/1)、錳卟啉+氮芥組(錳卟啉的終濃度為1.5mg/1，氮芥的終濃度同氮芥組)。每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，24、48、72h后檢測。檢測前4h加入5mg/mlMTT20u1，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，水平離心，吸干上清，加入DMSO150u1震蕩5min,490nm測定吸光度(OD值)。重復(fù)3次。計(jì)算細(xì)胞生長抑制率，吸光度以平均值土標(biāo)準(zhǔn)差表示，結(jié)果見表8。表8錳B卜啉與氮芥聯(lián)合用藥物對HL-60白血病細(xì)胞的抑制效果組別吸光度(OD)抑制率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>權(quán)利要求1.一種用于治療腫瘤的聯(lián)合用藥物，其特征在于包括錳卟啉以及色甘酸鈉且任選的可以包括一種或多種可藥用載體。2.—種用于治療腫瘤的聯(lián)合用藥物，其特征在于包括錳卟啉以及二氯乙酸或其藥學(xué)上可接受的鹽且任選的可以包括一種或多種可藥用載體。3.—種用于治療腫瘤的聯(lián)合用藥物，其特征在于包括錳卟啉以及任一種抗腫瘤藥物且任選的可以包括一種或多種可藥用載體。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于治療腫瘤的聯(lián)合用藥物，其特征在于所述抗腫瘤藥物為阿霉素或其可藥用的鹽、氯尼達(dá)明或其可藥用的鹽、鉑類抗腫瘤藥物中的任一種。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于治療腫瘤的聯(lián)合用藥物，其特征在于所述鉑類抗腫瘤藥物為卡鉑、雙環(huán)鉑、順鉑、奧沙利鉑中的任一種。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于治療腫瘤的聯(lián)合用藥物，其特征在于所述抗腫瘤藥物為除氧氮磷環(huán)類藥物外的烷化劑。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于治療腫瘤的聯(lián)合用藥物，其特征在于所述烷化劑為氮芥、卡莫司汀、尼莫司汀、丙卡巴肼、尿嘧啶氮芥、替莫唑胺、苯丙氨酸氮芥中的任一種或其可藥用的鹽。8.錳卟啉在制備與抗腫瘤藥物一起給藥的治療腫瘤的聯(lián)合用藥物中的用途。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于所述錳卟啉的有效治療劑量為0.150mg/Kg體重。10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于所述錳卟啉的有效治療劑量為0.15mg/Kg體重。全文摘要本發(fā)明公開了一類用于治療腫瘤的聯(lián)合用藥物，包括錳卟啉以及色甘酸鈉且任選的可以包括一種或多種可藥用載體，或包括錳卟啉以及二氯乙酸或其藥學(xué)上可接受的鹽且任選的可以包括一種或多種可藥用載體，或包括錳卟啉以及任一種抗腫瘤藥物且任選的可以包括一種或多種可藥用載體。本申請的發(fā)明人做了一系列相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，實(shí)驗(yàn)證明，將錳卟啉與上述可聯(lián)合使用的藥物聯(lián)合用藥，可以提高腫瘤治療效果，并可以降低其毒性，延長實(shí)驗(yàn)動物的存活時(shí)間，取得了意想不到的效果。文檔編號A61K31/194GK101601669SQ20091001627公開日2009年12月16日申請日期2009年7月8日優(yōu)先權(quán)日2009年7月8日發(fā)明者厲保秋申請人:山東弘立醫(yī)學(xué)動物實(shí)驗(yàn)研究有限公司