專利名稱：有效的阿司匹林前藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及有效的阿司匹林前藥，其對(duì)濕氣和胃腸道腔中的環(huán)境穩(wěn)定，但在吸收 過程中和之后迅速分解釋放阿司匹林和/或一氧化氮(NO)。
背景技術(shù)：
阿司匹林是世界上應(yīng)用最廣泛的藥物之一。常規(guī)應(yīng)用與所有心血管的危險(xiǎn)群體中 的死亡危險(xiǎn)的減少有關(guān)。它是抗炎、鎮(zhèn)痛和退燒藥并用于對(duì)抗心血管疾病，并且據(jù)預(yù)測(cè)具有 預(yù)防結(jié)直腸癌、食管癌、胃癌和肺癌(例如Chan 2005)以及中風(fēng)、阿爾茨海默病(Etminan 等，2003)及其它形式的癡呆。一些模型預(yù)測(cè)50歲以上的人每天消費(fèi)阿司匹林活到90歲的 概率將加倍(Morgan，2003)。與阿司匹林使用相關(guān)的主要副作用是胃腸道的副作用。阿司匹林在幾乎一半患者 中引起消化不良并且使胃腸道出血的危險(xiǎn)乘三倍。內(nèi)窺鏡對(duì)照研究表明在所有阿司匹林的 劑量都會(huì)增加出血的危險(xiǎn)，甚至在預(yù)防心肌梗塞(MI)中相對(duì)低的劑量下。在一項(xiàng)研究中， 在低劑量阿司匹林10-300mg/天)下10%的患者12周之后有內(nèi)窺鏡檢查的潰瘍，其中一例 在IOmg/天的劑量下出現(xiàn)(Cryer & Feldman，1999，Cryer2002)。若干研究顯示出血在治療 開始5至30天之后出現(xiàn)，表示不適合。顯著的是，胃腸道副作用的危險(xiǎn)限制了有高血栓事 件概率的患者群體使用阿司匹林在隨機(jī)群體中嚴(yán)重胃腸道損害的危險(xiǎn)高于阿司匹林可預(yù) 防的死亡的危險(xiǎn)。還有，沒有可靠的與劑量相關(guān)的數(shù)據(jù)證明阿司匹林能用于癌的預(yù)防使用， 然而，似乎可能高于它在發(fā)揮預(yù)防心臟病發(fā)作中的作用所需要的最適劑量因此很可能會(huì)增 加更大的胃腸道毒性的危險(xiǎn)。盡管絕對(duì)危險(xiǎn)低(1_2%)，但它的普遍和迅速增長(zhǎng)的消費(fèi)導(dǎo) 致阿司匹林誘發(fā)的胃腸道毒性為公眾健康所關(guān)注(Morgan，2003 ；Laheij 2001 ；Newton et al，2004)。很多阿司匹林的GI毒性作用已經(jīng)被認(rèn)識(shí)。腸壁通過保護(hù)層保護(hù)免于粗糙的腔容 物。該屏障部分通過兩種環(huán)加氧酶(C0X-1 & C0X-2)得以維持。阿司匹林的心血管保護(hù) 作用產(chǎn)生于它對(duì)血小板環(huán)加氧酶C0X-1的抑制，而它的細(xì)胞保護(hù)作用歸因于它使環(huán)加氧酶 C0X-2乙?；莫?dú)特能力，其使得花生四烯酸偏離PGE2( —種癌啟動(dòng)子)，向HETE( —種癌 抑制因子)分流。C0X-2在GIT中還具有傷口愈合作用。阿司匹林在吸收過程中通過腸道 時(shí)抑制這些酶，因此減弱它們的保護(hù)作用。因此其生物化學(xué)方面的毒性由阿司匹林局部抑 制C0X-1和C0X-2產(chǎn)生，這導(dǎo)致通常調(diào)節(jié)胃酸分泌和血流的前列腺素(PGE2，PGI2)的抑制。 還有明顯的化學(xué)方面的阿司匹林毒性。阿司匹林為疏水性酸(PKa 3.5)。它在低pH值下為 脂溶性，并且它能破壞覆蓋上皮細(xì)胞的疏水層從而允許腔容物進(jìn)入，產(chǎn)生刺激，最后導(dǎo)致潰 瘍。這可能是比生物化學(xué)方面更重要的毒性原因。在一項(xiàng)最近的研究中，給大鼠施用口服 阿司匹林引起胃損傷，而經(jīng)皮下給予該藥物時(shí)沒有胃損傷，盡管有證據(jù)表明從兩種途徑抑 制C0X(Mahita，2006)。藥物誘發(fā)的胃腸道毒性很復(fù)雜并且受試者的常常自相矛盾的發(fā)現(xiàn)， 但該特定的研究表明化學(xué)毒性是顯著的。胃腸道毒性的問題已被醫(yī)藥界關(guān)注多年，但內(nèi)窺鏡檢查的研究表明常規(guī)的解決方 案如腸溶衣或緩沖至少是不充分的(Kelly et al, 1996, Walker et al，2007)。因而建立輸送阿司匹林或處理其胃腸道作用的新途徑是公眾健康的重要問題并且是明顯的商業(yè)機(jī)會(huì)。對(duì)該問題潛在的有價(jià)值的解決方案是設(shè)計(jì)能延遲阿司匹林從存在于胃腸道直至 吸收進(jìn)入血漿內(nèi)釋放的阿司匹林衍生物。此種衍生物應(yīng)適當(dāng)稱為前藥。前藥是本身無活性 但在代謝時(shí)形成活性試劑的治療劑(Albert，1958)。阿司匹林前藥作為降低其胃毒性的方 法研究了多年(Jones，1985)。最初的阿司匹林前藥基本原理建議例如用酯阻斷阿司匹林羧酸，將有效地消除由 阿司匹林羧酸與胃粘膜之間直接接觸引起的化學(xué)方面的胃毒性。如果該模式正確就可預(yù)見 到在通過胃腸道上皮細(xì)胞過程中被激活的阿司匹林酯顯示出胃毒性大大減少，即使在上皮 細(xì)胞內(nèi)發(fā)生藥物釋放。當(dāng)阿司匹林毒性的生物化學(xué)方面更廣泛地被理解時(shí)，該前藥基本原理被細(xì)化。與 阿司匹林相反，其酯不具有抑制COX的能力。因此它們?cè)谕ㄟ^腸壁過程中將不阻斷保護(hù)性 前列腺素的合成。那么，吸收之后，血液中酯酶將分解酯，釋放阿司匹林。隨后該藥物通過 體循環(huán)到達(dá)腸但濃度低得多；阿司匹林在體內(nèi)迅速代謝并且半衰期只有20分鐘。值得懷疑 的是COX依賴性粘膜防御系統(tǒng)的有效阻斷要求相當(dāng)高濃度的阿司匹林。這是因?yàn)榘⑺酒チ?是COX酶之一(C0X-1)的弱抑制劑和另一種COX酶(C0X-2)的非常弱的抑制劑。換而言之， 阿司匹林在吸收期抑制保護(hù)性酶，但它在吸收后分布至整個(gè)身體之后不可能達(dá)到阻斷兩種 酶所需的濃度(一種類似的藥代動(dòng)力學(xué)觀點(diǎn)解釋了阿司匹林對(duì)血小板血栓烷A2的選擇性 抑制超過對(duì)心臟中內(nèi)皮前列環(huán)素的抑制(Pedersen A. K. & FitzGerald G. A. 1984))。因?yàn)榘⑺酒チ智八庻ヮ惒粫?huì)引起局部刺激因此期望它們具有較低的GI毒性，第 一避免阿司匹林以高濃度通過GI，第二分布后的濃度可能能夠保留C0X-2依賴性保護(hù)功能 的完整。此種阿司匹林酯前藥的想法是吸引人的，因?yàn)榇朔N前藥在通過保護(hù)屏障的過程中 非酸性并且不會(huì)使其分解。還期望它們對(duì)調(diào)節(jié)屏障的生物化學(xué)機(jī)構(gòu)具有較小影響，不管是 在上皮內(nèi)還是特別在進(jìn)入血流之后的后續(xù)階段被激活。這有下列益處即避免阿司匹林相關(guān) 的GI不良作用。該藥更安全，因?yàn)樵谕ㄟ^胃腸道之后才被激活(

圖1)。從臨床的觀點(diǎn)看與阿司匹林有關(guān)的另一個(gè)問題是其對(duì)濕氣不穩(wěn)定并因此不能在 溶液中配制。阿司匹林的水溶液在兒科醫(yī)學(xué)和老年醫(yī)學(xué)中是特別希望的。對(duì)阿司匹林的不 穩(wěn)定主要作用因素為自身催化的形式，最先被Jencks和Pierre (1958)描述。阿司匹林具 有羧基和乙?；?。羧基能激活附近的水分子產(chǎn)生攻擊乙酰基的氫氧根。通過形成阿司匹林 酯羧基被掩蔽不能參加自身催化。阿司匹林酯類通常比阿司匹林穩(wěn)定并因此有可能以多種 不能應(yīng)用于阿司匹林的有用方式進(jìn)行配制。阿司匹林酯類的第二個(gè)優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)由實(shí)驗(yàn)非常確 定。另一方面，避免阿司匹林毒性的假說理論從來沒有被檢驗(yàn)過，因?yàn)閺膩頉]有適宜 的阿司匹林酯類前藥候選物。這是因?yàn)榘⑺酒チ瞩ヮ惽八幒茈y設(shè)計(jì)。對(duì)乙酰氨基酚-貝諾 酯的阿司匹林酯上市約30年直至發(fā)現(xiàn)其對(duì)人的給藥劑量不產(chǎn)生阿司匹林釋放(Williams 等，1989)。與阿司匹林酯及相關(guān)衍生物的問題是代謝問題。阿司匹林酯在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為水楊酸 而不是阿司匹林(Nielsen & Bundgaard，1989)。阿司匹林酯在人組織和血液中通過如圖2 所示的可能的途徑代謝。有效的阿司匹林前藥吸收之后應(yīng)在釋放阿司匹林的載體基團(tuán)上裂 解。阿司匹林酯的迅速水解發(fā)生在血液和血漿中(t1/2< 1分鐘)，卻不是在希望的阿司匹
11林-載體酯鍵(圖2中的位置B)。相反，乙?；呀?圖2中的A)且所導(dǎo)致的產(chǎn)物為水楊 酸酯，最終為水楊酸。該生物化學(xué)途徑不能產(chǎn)生阿司匹林。水楊酸與阿司匹林的比例通常 大于99 1，不管載體基團(tuán)是否相同(用于與藥物羧酸形成酯的前藥的醇組分在前藥術(shù)語 中被稱為載體)。如果你從酸藥物形成酯，你連接的部分阻斷酸化學(xué)但會(huì)賦予新實(shí)體它自己 的一些物理化學(xué)特性(參見圖2)。該問題作為制藥學(xué)的難題和商業(yè)機(jī)會(huì)引起關(guān)注。在這方 面有基本的學(xué)術(shù)和專利文獻(xiàn)(參見Gilmer等，2002和其中參考文獻(xiàn))。然而大多數(shù)在文獻(xiàn) 中稱為阿司匹林前藥的化合物實(shí)際上在體外或在體內(nèi)不起阿司匹林前藥的作用，相反它們 釋放相應(yīng)的水楊酸酯(Nielsen & Bundgaard，1989)。為了使阿司匹林酯起前藥的作用，在血液中的水解必須在載體酯鍵發(fā)生。設(shè)計(jì)挑 戰(zhàn)是酯化阿司匹林在人血漿的存在下導(dǎo)致錯(cuò)誤的酯基水解。該問題最先被Bimgaard和 Nielsen (1989)解釋。當(dāng)阿司匹林進(jìn)入血流時(shí)其乙?；蝗搜獫{中占優(yōu)勢(shì)的酯酶(丁酰膽 堿酯酶(BuChE))水解，結(jié)果形成水楊酸。阿司匹林在血液pH下帶負(fù)電而丁酰膽堿酯酶處 理帶負(fù)電的底物時(shí)實(shí)際上不是處于最有效的狀態(tài)。通過酯化阿司匹林，負(fù)電荷(其抑制代 謝)被脫除并且乙酰基變?yōu)楹玫枚嗟亩□Ｄ憠A酯酶底物。因此引入新酯基會(huì)大大加速存在 的乙?；サ拇x速度。例如，阿司匹林在稀釋的血漿中的半衰期為一小時(shí)左右，但阿司匹 林酯經(jīng)歷同樣的脫乙酰過程的半衰期小于一分鐘天然乙酸苯酯如阿司匹林酯是丁酰膽堿 酯酶最有效的水解底物類型之一。依據(jù)基礎(chǔ)酶學(xué)對(duì)這的解釋是阿司匹林酯比阿司匹林本身 適合該酶。Bundgaard認(rèn)為為了使代謝在正確的位置發(fā)生，載體基團(tuán)必須具有競(jìng)爭(zhēng)性的與 乙?；パa(bǔ)的結(jié)構(gòu)即它必須至少是與乙酰基一樣有吸引力的BuChE酶底物。甚至更好的載 體基團(tuán)可出現(xiàn)促進(jìn)它們自己水解與此同時(shí)抑制鄰近乙酰基的水解。丁酰膽堿酯酶根據(jù)其水 解膽堿酯的功效而命名。Nei 1 sen和Bungaard研究了阿司匹林的2-羥乙酰胺酯，其中載體 基團(tuán)設(shè)計(jì)成模擬膽堿的使得它的脫離可成功地與乙?；飧?jìng)爭(zhēng)。該2-羥乙酰胺只部分 成功，最成功的實(shí)例在期望的和無價(jià)值的方向(圖2中的途徑A和B)中都水解50%左右。 Nielsen和Bundgaard的工作建立了重要的原理成功的阿司匹林前藥要求以超過優(yōu)先乙 ?；姆绞竭m合人血漿酯酶的載體基團(tuán)。這被證明是高要求，對(duì)此高要求的響應(yīng)僅僅是部 分滿足的。然而，除本文中描述的技術(shù)之外，2-羥乙酰胺是甚至在一定程度上可以被稱作實(shí) 際的阿司匹林前藥的唯一已知化合物。另一個(gè)曾被偶爾采用的策略是設(shè)計(jì)這樣的酯類，其中阿司匹林-載體鍵不穩(wěn)定以 致在酯酶能攻擊乙?；皵嗔?。與該方法相關(guān)的問題是阿司匹林已經(jīng)在其乙酰基上對(duì)水 及其它親核試劑的水解相當(dāng)不穩(wěn)定。引入第二化學(xué)活性的酯具有提高乙酰基反應(yīng)活性的作 用(以及增加另一個(gè)不穩(wěn)定的位置)。被有意用來被化學(xué)刺激物如水裂解的阿司匹林酯因 此具有明顯的缺點(diǎn)它們很可能在貯存期間遭遇這樣的刺激并因此在貨架期對(duì)降解敏感。 這就首先否定了阿司匹林酯前藥的優(yōu)點(diǎn)之一-它們比阿司匹林對(duì)濕氣穩(wěn)定。被設(shè)計(jì)成響應(yīng) 于一般的化學(xué)刺激能裂解的前藥還在它們吸收之前將會(huì)遇到的GIT環(huán)境中易于分解。隨著所謂的一氧化氮(NO)-阿司匹林的出現(xiàn)對(duì)阿司匹林前藥方面的關(guān)注得到 加強(qiáng)，一氧化氮-阿司匹林是一種阿司匹林酯但具有附著于載體基團(tuán)的釋放NO的部分。 開發(fā)NO-阿司匹林的主要理論基礎(chǔ)是NO促進(jìn)粘膜防御，抵消了由阿司匹林引起的損傷 (Fiorucci和DelSoldato，2003)。該概念現(xiàn)在在生物醫(yī)學(xué)團(tuán)體中被很好地接受。一氧化 氮和阿司匹林還具有互補(bǔ)的藥理作用，有時(shí)具有協(xié)同的藥理作用，所以可預(yù)見這種組合顯示出比單獨(dú)的阿司匹林更大范圍的藥理作用。NO釋放保護(hù)胃不受阿司匹林通過促進(jìn)血流 和減少白血球粘附而誘發(fā)的胃侵蝕，而其通過GMP途徑的抗血栓性能增強(qiáng)由阿司匹林抑制 C0X-1引起的抗血小板作用。因而在生成阿司匹林和一氧化氮共同的前藥的嘗試中將它們 以酯的形式連接被認(rèn)為是合理的。NCX-4016 (NicOx SA，法國)是一種NO-阿司匹林藥物的 原型化合物(W0 95/030641，W097/16405, W097/16405, W00044705)。它在體內(nèi)生成 NO 并 具有抗血小板的作用。在若干動(dòng)物模型中NCX-4016表現(xiàn)出比阿司匹林更大的胃耐受性。 NCX-4016在1996開始臨床前開發(fā)并且自2002已經(jīng)對(duì)心血管疾病(例如外周動(dòng)脈阻塞性疾 病(PAOD) (Phase II))、結(jié)腸癌癥預(yù)防(期I)和癌疼痛的治療進(jìn)行評(píng)價(jià)。NCX-4016是過去十年最廣泛推銷的藥物開發(fā)之一，被認(rèn)為是顯著的生物醫(yī)學(xué)進(jìn) 展(參見例如Levin，2004)。然而，作為NO-阿司匹林前藥的形式，NCX-4016似乎具有明 顯的設(shè)計(jì)缺陷。對(duì)阿司匹林酯前藥的關(guān)鍵檢驗(yàn)是當(dāng)將它在人血漿或血液中溫育時(shí)它能否 水解為阿司匹林或其水楊酸酯。NCX-4016是取代苯酚的阿司匹林酯。沒有關(guān)于NCX-4016 在人血漿中的水解模式的公開數(shù)據(jù)，但有關(guān)于類似的酯類-乙酰氨基酚的阿司匹林酯(貝 諾酯-Williams等，1989)、guicaol的阿司匹林酯(Qu等，1990)、以及苯酚的阿司匹林酯 (Nielsen & Bundgaard，1989 ；也參見表8)。這些化合物中在相關(guān)的生物基質(zhì)中溫育時(shí)沒有 一個(gè)產(chǎn)生超過0. 5 %的阿司匹林。因此沒有NCX4016能夠或會(huì)產(chǎn)生阿司匹林的直接證據(jù)。關(guān) 于該化合物的體內(nèi)和體內(nèi)代謝只涉及水楊酸代謝物(Carini等，2002)。而且，用NCX-4016 抑制COX不如用阿司匹林抑制COX強(qiáng)烈。這是一個(gè)重大缺陷，因?yàn)檠“錍OX-抑制需要 很完全地阻止人血小板凝聚。另一項(xiàng)最近的研究表明NCX-4016可以直接作用于它的靶點(diǎn) 而不釋放阿司匹林(Corazzi等，2005)。最近已經(jīng)有許多設(shè)計(jì)能在人組織中釋放阿司匹 林和一氧化氮的化合物的其它努力。結(jié)果令人失望。所有報(bào)道的化合物進(jìn)行沿典型的水 楊酸途徑的水解，不釋放大量的阿司匹林，盡管它們可能釋放一氧化氮(Gilmer等，2007 ； Valezquez 等，2005 ；Cena 等，2003)。國際公開號(hào)W09403421描述了臨床上應(yīng)用的硝酸異山梨酯的水楊酸酯類，ISMN。 所描述的化合物是阿司匹林單硝酸異山梨醇酯(ISMNA)并對(duì)其在經(jīng)皮貼劑方面的應(yīng)用遠(yuǎn) 景進(jìn)行了討論。
該化合物據(jù)說它的抗心絞痛和血小板洗滌性能是有用的。據(jù)報(bào)道化學(xué)水解研究表 明降解產(chǎn)生單硝酸-異山梨醇酯(ISMN)、水楊酸和表現(xiàn)為洗滌血小板和抗絞痛活性的阿司 匹林。然而，人們未預(yù)期ISMNA能充當(dāng)可行的阿司匹林前藥，因?yàn)槌?-羥乙酰胺之外沒有 別的阿司匹林酯已經(jīng)顯示出能充當(dāng)阿司匹林前藥，這些化合物特別有意地設(shè)計(jì)成能與血漿 BuChE互補(bǔ)。然而ISMNA證明是一種在兔組織在體外有效的血小板凝聚抑制劑，并且后來 顯示ISMNA被兔血漿酯酶轉(zhuǎn)化為阿司匹林。將它在狗的口服研究中得到檢驗(yàn)，其中以兩個(gè) 阿司匹林的藥理學(xué)標(biāo)志將它與阿司匹林比較血栓素(一種刺激血小板聚集的生物化學(xué)物質(zhì))的生物合成的抑制和血小板凝聚的功能抑制。ISMNA顯示出對(duì)兩個(gè)標(biāo)記物有弱作用， 表明在狗中它只釋放少量的阿司匹林。通過在狗血液中溫育ISMNA并監(jiān)測(cè)它的水解，我們 能證明由于狗和兔血液中的酯酶差異它不能被狗酯酶有效地轉(zhuǎn)化為阿司匹林。后來ISMNA 在人血漿中兩者之中任一個(gè)都不被有結(jié)果地水解。在人血漿溶液和在體外人血液中，ISMNA 產(chǎn)生> 90%水楊酸和< 10%阿司匹林。作為血小板凝聚的抑制劑ISMNA在人全血和人富 含血小板的血漿中比阿司匹林有效性差很多(在富含血小板的血漿中的花生四烯酸人血 小板凝聚中，與阿司匹林5 μ M相比，它的IC50是85 μ Μ)。該結(jié)果教導(dǎo)對(duì)于阿司匹林的酯， 抑制血小板凝聚或血栓素合成的能力與產(chǎn)生阿司匹林的能力有關(guān)一種無效的前藥傾向于 一種無效的血小板凝聚抑制劑。低水平的阿司匹林釋放和效力不足阻止阿司匹林單硝酸異 山梨醇酯(ISMNA)成為用于人的可行的藥物候選物。國際公開號(hào)W09817673公開了異山梨醇的雙阿司匹林酯和異山梨醇的兩種單阿 司匹林酯，即2-阿司匹林-異山梨醇酯和5-阿司匹林-異山梨醇酯。雙阿司匹林-異山 梨醇酯(ISDA)，W09817673的主要主題似乎與曾試驗(yàn)的許多其它早期的酯前藥候選物沒有不同。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員不會(huì)期望雙阿司匹林-異山梨醇酯(ISDA)充當(dāng)可行的阿司 匹林前藥并且沒有化學(xué)或生物化學(xué)方面的理由相信水解會(huì)導(dǎo)致乙酰基裂解之外的任何東 西從而最終為水楊酸。因此特別令人驚奇的是什么時(shí)侯我們能在我們自己的實(shí)驗(yàn)室證明 在富含血小板的兔血漿中ISDA抑制血小板凝聚。在口服施用于一組狗之后它對(duì)血栓素合 成也具有抑制作用(Gilmer等，2003)。該阿司匹林樣性能表明ISDA在血漿的水解產(chǎn)生一 些阿司匹林。ISDA顯示出當(dāng)在磷酸鹽緩沖的人血漿溶液中溫育時(shí)經(jīng)歷快速的水解產(chǎn)生大 約60%阿司匹林(Gilmer等，2002)。剩余40%的化合物沿?zé)o價(jià)值的水楊酸途徑水解。該 研究表明存在于人血漿中的特異性酶催化阿司匹林從異山梨醇雙阿司匹林酯(ISDA)中釋 放。證實(shí)了丁酰膽堿酯酶是相關(guān)的人血漿酶。密切相關(guān)的馬血漿丁酰膽堿酯酶只產(chǎn)生11% 阿司匹林。Gilmer等(2001,2002)進(jìn)一步描述了阿司匹林單硝酸異山梨醇酯(ISMNA)和雙 阿司匹林-異山梨醇酯(ISDA)的水解特性和生物學(xué)效應(yīng)。Nielsen和Bungaard的雙阿司匹林酯ISDA和2_羥乙酰胺酯是化學(xué)文獻(xiàn)唯一的能 夠在人血漿中以顯著的程度充當(dāng)阿司匹林前藥的酯類。不產(chǎn)生水解產(chǎn)物阿司匹林的化合物 應(yīng)更好地歸類為水楊酸前藥。例如，在本申請(qǐng)的上下文中，ISMNA只在兔組織中是阿司匹林 前藥，而在人血液中它是水楊酸前藥。迫切需要更好的阿司匹林前藥化合物，因?yàn)樗鼈兊膬?nèi)在治療潛力以及對(duì)既能釋放 阿司匹林又能釋放一氧化氮的需求。釋放一氧化氮的阿司匹林酯類首先必須是一種能在關(guān)鍵的血漿水解模型中轉(zhuǎn)化為阿司匹林的酯。特別地希望提供這樣的阿司匹林前藥化合物 其能抵抗水的水解和α -糜蛋白酶，還能在人血漿的存在下快速水解釋放阿司匹林和潛在 的其它藥理學(xué)活性基團(tuán)特別是一氧化氮。發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明，提供一種具有如通式(Γ)中所示通式結(jié)構(gòu)的阿司匹林異山梨醇酯化 合物 其中Y為C1-C8烷基酯、C1-C8烷氧基酯、C3-Cltl環(huán)烷基酯、芳基酯、C1-C8烷基芳基酯或-C (0) 其中Rlf為含至少一個(gè)取代環(huán)系碳的雜原子的5-元芳香環(huán)或非芳香5-元環(huán)，其可不被
取代或被至少一個(gè)釋放一氧化氮的基團(tuán)取代。本發(fā)明還涉及本文中描述的化合物的藥學(xué)可接受的鹽和/或水合物。本文中所用的術(shù)語“烷基”包括一系列通式RC(O)R化合物的單價(jià)基團(tuán)中的任何 基團(tuán)，或更具體地_0C(0)CnH2n+1，其為由脂肪族烴衍生的酯。烷酯鏈的烷基鏈可為直鏈或支 鏈，其中甲基(-CH3)表示C1烷基，乙基(-C2H5)表示C2烷基，丙基(-C3H7)表示C3烷基，丁 基(-C4H9)表示C4烷基而戊基(-C5H7)表示C5烷基。術(shù)語“烷氧酯”包括具有通式RC(O)OR的基團(tuán)，或更具體地-0C(0)0CnH2n+1，其中 CnH2n+1為可為直鏈或支鏈的烷基鏈，其中甲基(-CH3)表示C1烷基，乙基(-C2H5)表示C2烷 基，丙基(-C3H7)表示C3烷基，丁基(-C4H9)表示C4烷基而戊基(-C5H7)表示C5烷基。術(shù)語“環(huán)烷基酯”意味上式的CnH2n+1基團(tuán)為環(huán)烷基如環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷等。術(shù)語“芳基酯”指RC (0) Ar，其中Ar表示由簡(jiǎn)單芳環(huán)例如苯環(huán)、甲苯、二甲苯、苯甲 酸、苯甲酸酯、煙酸酯、氯苯或其它鹵代苯基團(tuán)衍生的任何官能團(tuán)或取代基。術(shù)語“5元雜環(huán)的酯”，表示以-以0)01^表示的任何酯官能團(tuán)，Rlf為含至少一個(gè) 取代環(huán)系碳的雜原子的5-元芳香或非芳香5-元環(huán)。適宜地Rlf基團(tuán)可選自苯硫基、噻二 唑啉、吡咯、咪唑、噻唑、吡唑、4，5- 二氫化吡咯、咪唑啉-2-酮、吡嗪、4，5- 二氫噻吩和咪唑 啉-2-硫酮。優(yōu)選的Rlf為雜環(huán) 本發(fā)明優(yōu)選的-C(O)ORlf基團(tuán)為異噁唑甲酸酯、噁唑甲酸酯或噻二唑甲酸酯。
適宜地，所有這些化合物在人血漿中都在一定程度上主動(dòng)地釋放阿司匹林。取決 于所選取代基Y的性質(zhì)，一些化合物已經(jīng)顯示出比其它化合物較好的活性，而一些化合物 活性較差。一些化合物除釋放阿司匹林外還釋放No。適宜地，本發(fā)明的優(yōu)選化合物具有在人血漿中釋放大于或等于15%阿司匹林的活 性。本發(fā)明化合物中釋放一氧化氮的基團(tuán)可包括硝酸酯、C1-C8烷基硝酸酯、C3-Cltl環(huán)烷 基硝酸酯或C1-C8烷基硝酸酯。在一實(shí)施方式中，阿司匹林異山梨醇酯化合物具有如通式(I)中所示的通式結(jié)構(gòu) 其中Y為C1-C8烷基酯、C1-C8烷氧基酯、C3-C10環(huán)烷基酯、C1-C8環(huán)烷氧基酯，其可不被取代或 被ONO2取代；或芳基酯或C1-C8烷基芳基酯，其可不被取代或被至少一個(gè)釋放一氧化氮的基 團(tuán)取代。然而，最優(yōu)選為具有包含5-元雜環(huán)的酯的化合物，其可選自噁唑甲酸酯、異噁唑 甲酸酯和噻二唑甲酸酯。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，阿司匹林異山梨醇酯化合物具有如通式(I)中所示的通式 結(jié)構(gòu) 其中Y為C1-C8烷基酯或C1-C8烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或
C3-C10環(huán)烷基酯或C1-C8環(huán)烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或未取代或取代的芳基酯、烷基芳基酯、苯甲酸酯、煙酸酯、噁唑甲酸酯、 異噁唑甲酸酯、噻二唑甲酸酯基團(tuán)，其可被包括下列中的至少一個(gè)基團(tuán)取代羥 基(hydroxide)、-Cl、-Br、C1-C8 烷基、芐基、C1-C8 烷氧基、芐基氧基、-NHC(O) R、-NH2、-NO2、-ONO2、-(CH2) n0N02、-OC(O) [ (CH2)m]環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2)nONO2 或 C1-C5鹵代烷基酯，
其中R為C1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8, m = 3_10。根據(jù)本發(fā)明，提供一種具有如通式(Γ)中所示通式結(jié)構(gòu)的阿司匹林異山梨醇酯化 合物 其中Y為-C (0) ORlf，其中Rlf為含至少一個(gè)取代環(huán)系碳的雜原子的5-元芳香或非芳香5-元 環(huán)，其可不被取代或被至少一個(gè)釋放一氧化氮的基團(tuán)取代。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，釋放一氧化氮的基團(tuán)可選自-NO2、-ONO2、- (CH2) n0N02、-OC (0) [ (CH2) J 環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2) n0N02。特別地，優(yōu)選的化合物包括具有如通式(I*)中所示通式結(jié)構(gòu)的阿司匹林異山梨
醇酯化合物 其中Y為 其中X和Y獨(dú)立地選自0、S和N。在另一實(shí)施方式中，提供一種具有如通式(I)中所示通式結(jié)構(gòu)的化合物 其中Y為C1-C8烷基酯或C1-C8烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或未取代或取代的芳基酯、烷基芳基酯、苯甲酸酯、煙酸酯、噁唑甲酸酯、異噁唑甲酸 酯、噻二唑甲酸酯基團(tuán)，其可被包括下列中的至少一個(gè)基團(tuán)取代羥基、-Cl、-Br、(；-仏烷 基、芐基、C1-C8 烷氧基、鄰-芐基氧基、-NHC(O)R, -NH2, -NO2, -ONO2, -(CH2)nONO2, -OC(O) [(CH2) J 環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2) n0N02 或 C1-C5 鹵代烷基酯，其中R為C1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8, m = 3_10。其它優(yōu)選的化合物以通式(I)中所示通式結(jié)構(gòu)說明 其中Y為C1-C8烷基酯或C1-C8烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或C3-C10環(huán)烷基酯或C1-C8環(huán)烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或未取代或取代的芳基酯、烷基芳基酯、苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被包括下 列中的至少一個(gè)基團(tuán)取代羥基、C1-C8烷基、芐基、C1-C8烷氧基、芐基氧基、-NHC (0) R、-NH2、-NO2、-ONO2、-(CH2) n0N02、-OC(O) [ (CH2)m]環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2)nONO2 或 C1-C5鹵代烷基酯，其中R為C1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8, m = 3_10。其它優(yōu)選的化合物以通式(I)中所示通式結(jié)構(gòu)說明 其中Y為C1-C8烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或C3-C10環(huán)烷基酯或C1-C8環(huán)烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或未取代或取代的苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被包括下列中的至少一個(gè)基團(tuán)取 代羥基、C1-C8 烷基、芐基、C1-C8 烷氧基、芐基氧基、-NHC(O)R、-NH2, -NO2, -ONO2, -(CH2) n0N02、-OC (0) [ (CH2) J 環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2) n0N02 或 C1-C5 鹵代烷基酯，其中R為C1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8, m = 3-10。其它優(yōu)選的化合物以通式(I)中所示通式結(jié)構(gòu)說明
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其中Y為C1-C8烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或未取代或取代的苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被包括下列中的至少一個(gè) 基團(tuán)取代羥基、-Cl、-Br、C1-C8烷基、芐基、C1-C8烷氧基、鄰-芐基氧基、-NHC(O) R、-NH2、-NO2、-ONO2、-(CH2) n0N02、-OC(O) [ (CH2)m]環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2)nONO2 或 C1-C5鹵代烷基酯，其中R為C1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8, m = 3-10。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，阿司匹林異山梨醇酯化合物可具有如通式(I)中所示的通 式結(jié)構(gòu) 其中Y為C1-C8烷基酯或C1-C8烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或未取代或取代的芳基酯、烷基芳基酯、苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被包括下列中 的至少一個(gè)基團(tuán)取代羥基、-Cl、-Br、C1-C8烷基、芐基、C1-C8烷氧基、芐基氧基、-NHC(O) R、-NH2、-NO2、-ONO2、-(CH2) n0N02、-OC(O) [ (CH2)m]環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2)nONO2 或 C1-C5鹵代烷基酯，其中R SC1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8，m = 3-10。在芐氧基取代基用 于芳基環(huán)上的情況下，優(yōu)選其為鄰_芐氧基取代基。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，阿司匹林異山梨醇酯化合物可具有如通式(I)中所示 的通式結(jié)構(gòu) 其中Y為C1-C8烷基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或未取代或取代的苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被包括下列中的至少一個(gè)基團(tuán)取 代羥基、C1-C8 烷基、芐基、C1-C8 烷氧基、芐基氧基、-NHC(O)R、-NH2, -NO2, -ONO2, -(CH2) n0N02、-OC (0) [ (CH2) J 環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2) n0N02 或 C1-C5 鹵代烷基酯，其中R SC1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8，m = 3-10。在芐氧基取代基用 于芳基環(huán)上的情況下，優(yōu)選其為鄰_芐氧基取代基。在還有其它的實(shí)施方式中，阿司匹林異山梨醇酯化合物可具有如通式(I)中所示 的通式結(jié)構(gòu) 其中Y為未取代或取代的苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被下列基團(tuán)中的至少一個(gè) 取代羥基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、芐基氧基、-(CH2)nONO2 (η = 1-8)，C3-C10環(huán)烷基酯或 鹵代烷基酯。在化合物上有芐氧基取代基的情況下，其優(yōu)選為鄰芐氧基。適宜地，本發(fā)明的化合物可具有如通式(I)中所示的通式結(jié)構(gòu) 其中Y為未取代或取代的苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被下列基團(tuán)中的至少一個(gè) 取代羥基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、鄰-芐基氧基、-(CH2)nONO2 (η = 1-8)、C3-C10環(huán)烷基 酯或鹵代烷基酯。在鹵代烷基酯基是該化合物特征的情況下，鹵素取代基可為Cl、Br或F。在化合物包含鹵代烷基酯的實(shí)施方式中，鹵素取代基適宜地為Cl、Br或F。氯和 溴為最優(yōu)選的鹵素取代基。然而，特別優(yōu)選含Br取代基的鹵代烷基酯。
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適宜地，本發(fā)明的化合物具有與人羧酸酯酶的活性位點(diǎn)的高度互補(bǔ)性，并由此控 制沿理想的途徑水解釋放阿司匹林。有利地，該化合物能夠被一種以上的人酶激活，因?yàn)槿绻麑?duì)于一種酶患者有異常 的酶功能，另一種酶很可能補(bǔ)償并釋放阿司匹林。此外，這類阿司匹林前藥化合物在胃腸道腔的條件下是穩(wěn)定的，但在吸收進(jìn)入血 流內(nèi)之后迅速分解為阿司匹林。因?yàn)樗鼈儗?duì)濕氣穩(wěn)定并由此能夠成功地用于可能遭遇濕氣的配制劑中，其它優(yōu)點(diǎn) 由這些化合物而產(chǎn)生。由于種種理由包括溶液形式的配制劑和經(jīng)皮形式的可能性，濕氣穩(wěn) 定的阿司匹林前藥是有利的。阿司匹林經(jīng)皮輸送的問題之一是來自皮膚的濕氣導(dǎo)致貼劑中 的儲(chǔ)存的阿司匹林的水解。適宜地，這類濕氣穩(wěn)定的化合物將不需要用于貯藏的保護(hù)性的 防潮藥物包裝。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，基團(tuán)Y可選自 本發(fā)明的化合物，當(dāng)通式(I)中Y表示這些特定結(jié)構(gòu)的任何結(jié)構(gòu)時(shí)，在人血漿中化 合物以不同的程度釋放阿司匹林，因此所有化合物都是活性化合物。然而，特別優(yōu)選含選自下列的Y取代基的化合物 因?yàn)榘@些基團(tuán)中任何基團(tuán)的化合物都顯示出在人血漿中釋放大于等于15% 阿司匹林的活性。
在另一優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物包括具有阿司匹林釋放活性大于等于 15%水平的化合物，基于在將候選酯加入到37°CpH7. 4(磷酸鹽緩沖劑)緩沖的人血漿之后 于阿司匹林產(chǎn)生峰值通過HPCL測(cè)量的初始酯摩爾濃度的百分比的阿司匹林量。在特定的實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物可具有如通式(I)中所示的通式結(jié)構(gòu) 其中Y為未取代或取代的苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被下列基團(tuán)中的至少一個(gè) 取代羥基、甲基、芐氧基、甲氧基、-NHC(O) CH3、-OC(O) CH2Br、-NO2、-OAc. -CH2ONO2。在芐氧 基取代基用于芳基環(huán)上的情況下，優(yōu)選其為鄰-芐氧基取代基。在特定的實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物可具有如通式(I)中所示的通式結(jié)構(gòu) 其中Y為未取代或取代的苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被下列基團(tuán)中的至少一個(gè) 取代羥基、-Cl、甲基、芐氧基、甲氧基、-NHC (0) CH3、-OC (0) CH2Br、-NO2、-CH2ONO2。在芐氧基 取代基用于芳基環(huán)上的情況下，優(yōu)選其為鄰_芐氧基取代基。最優(yōu)選的阿司匹林異山梨醇酯化合物具有以下結(jié)構(gòu)之一的結(jié)構(gòu) 作為備選，阿司匹林異山梨醇酯化合物可具有選自下列中任何一個(gè)結(jié)構(gòu) 另一方面，本發(fā)明為藥物提供具有如通式(II)中所示通式結(jié)構(gòu)的載體化合物 其中Y為C1-C8烷基酯、C1-C8烷氧基酯、C3-Cltl環(huán)烷基酯、芳基酯、C1-C8烷基芳基酯或-C (0) 其中Rlf為含至少一個(gè)取代環(huán)系碳的雜原子的5-元芳香環(huán)或非芳香5-元環(huán)，其可不被
取代或被至少一個(gè)釋放一氧化氮的基團(tuán)取代，且X為藥物分子。在此方面，優(yōu)選的實(shí)施方式為藥物提供具有如通式(II)中所示通式結(jié)構(gòu)的載體 化合物 其中Y為C1-C8烷基酯、C3-Cltl環(huán)烷基酯、芳基酯或C1-C8烷基芳基酯，其可不被取代或被至少 一個(gè)釋放一氧化氮的基團(tuán)取代，且X為藥物分子。本發(fā)明優(yōu)選的載體可具有如通式(II)中所示的通式結(jié)構(gòu) 其中Y為C1-C8烷基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或C3-C10環(huán)烷基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或未取代或取代的芳基酯、烷基芳基酯、苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被包括下 列中的至少一個(gè)基團(tuán)取代羥基、C1-C8烷基、芐基、C1-C8烷氧基、芐基氧基、-NHC (0) R、-NH2、-NO2、-ONO2、-(CH2) n0N02、-OC(O) [ (CH2)m]環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2)nONO2 或 C1-C5鹵代烷基酯，其中R為C1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8, m = 3-10。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明的載體可具有如通式(II)中所示的通式結(jié)構(gòu) 其中Y為C3-C10環(huán)烷基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或未取代或取代的苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被包括下列中的至少一個(gè)基團(tuán)取 代羥基、C1-C8 烷基、芐基、C1-C8 烷氧基、芐基氧基、-NHC(O)R、-NH2, -NO2, -ONO2, -(CH2) n0N02、-OC (0) [ (CH2) J 環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2) n0N02 或 C1-C5 鹵代烷基酯，其中R為C1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8, m = 3-10。在包含鹵代烷基酯官能團(tuán)的化合物中，鹵素取代基可為Cl、Br或F，然而更特別優(yōu) 選Br。有利地，本發(fā)明的阿司匹林前藥化合物能抵抗水解和α-糜蛋白酶，還將在人血 漿的存在下釋放阿司匹林和潛在地其它藥理活性部分。除阿司匹林之外本發(fā)明的優(yōu)選的化 合物還釋放一氧化氮。因此在這方面，本發(fā)明的化合物是有利的，因?yàn)樗鼈兲峁┝烁玫陌⑺酒チ智八?化合物，特別是能既釋放阿司匹林又釋放一氧化氮的前藥化合物。能既釋放阿司匹林又釋 放氧化亞氮(NO)的前藥裝置特別有利。此種化合物很可能比它們各自的組分毒性更低但 有更廣譜的藥理作用和功效，因?yàn)樵谛难芗膊『桶┑膽?yīng)用中阿司匹林和一氧化氮有協(xié)同 效應(yīng)。釋放一氧化氮的阿司匹林酯類首先必須是一種能在關(guān)鍵的血漿水解模型或類似 的生物學(xué)相關(guān)的模型中轉(zhuǎn)化為阿司匹林的酯。本發(fā)明的載體可具有釋放一氧化氮的基團(tuán)， 包括硝酸酯、C1-C8烷基硝酸酯、C3-C10環(huán)烷基硝酸酯或C1-C8烷基硝酸酯。其它優(yōu)點(diǎn)由下列事實(shí)產(chǎn)生本發(fā)明的前藥在典型的消化蛋白酶的存在下和對(duì)粘膜 CAC0-2細(xì)胞中存在的酶是穩(wěn)定的，但可被人酯酶特別是BuChE和CE-2水解為阿司匹林。在 這方面，載體可具有通式(II)中所示的通式結(jié)構(gòu) 其中Y為C1-C8烷基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或C3-C10環(huán)烷基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或未取代或取代的芳基酯、烷基芳基酯、苯甲酸酯、煙酸酯、噁唑甲酸酯、異噁唑甲酸 酯、噻二唑甲酸酯基團(tuán)，其可被包括下列中的至少一個(gè)基團(tuán)取代羥基、-Cl、-Br、(；-仏烷 基、芐基、C1-C8 烷氧基、芐基氧基、-NHC (0) R、-NH2、-NO2、-ONO2、- (CH2) n0N02、-OC (0) [ (CH2) J 環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2)nONO2 或 C「C5 鹵代烷基酯，其中R為C1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8, m = 3-10且X為藥物分子。
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適宜地，本發(fā)明的載體因?yàn)樗鼈兣c人酯酶活性位點(diǎn)的互補(bǔ)性控制正確位點(diǎn)的水解。在特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明的載體可具有如通式(II)中所示的通式結(jié)構(gòu) 其中Y為 C3-C10環(huán)烷基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或未取代或取代的苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被包括下列中的至少一個(gè)基團(tuán)取 代羥基、-Cl、C1-C8 烷基、芐基、C1-C8 烷氧基、芐基氧基、-NHC (0) R、-NH2、-NO2、-ONO2、- (CH2) n0N02、-OC (0) [ (CH2) J 環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2) n0N02 或 C1-C5 鹵代烷基酯，其中R為C1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8, m = 3-10。在包含鹵代烷基酯官能團(tuán)的優(yōu)選化合物中，鹵素取代基可為Cl、Br或F，然而Br為 更特別優(yōu)選的取代基。在另一個(gè)有利的實(shí)施方式中，載體化合物可選自其中X為前藥形式的待運(yùn)送的藥物分子。本發(fā)明的另一方面，提供一種包含如本文中所述的載體化合物的藥物化合物。另一方面，本發(fā)明還提供一種包含如上定義的化合物和至少一種藥學(xué)可接受的載 體或賦形劑的藥物組合物。在具體的方面，本發(fā)明的化合物和/或組合物可以以阿司匹林沒有效果的水平用 于體內(nèi)或體外以減少組成型血小板乙二醇-蛋白表達(dá)。本發(fā)明的化合物和/或組合物還可用于體內(nèi)或體外以誘導(dǎo)阿司匹林樣的作用。阿
27司匹林樣的作用，例如，為降低抗血小板活性或抑制COX產(chǎn)物如血栓素A2或丙二醛。有利 地，本發(fā)明優(yōu)選的化合物比阿司匹林本身更有效，并且是人血小板凝聚的更強(qiáng)抑制劑和COX 下游產(chǎn)物(如血栓素A2和丙二醛)以及組成型血小板糖蛋白表達(dá)的更強(qiáng)抑制劑。另一方面本發(fā)明的化合物可用于制備治療包括心血管和腦血管疾病、疼痛、發(fā)熱、 炎癥、癌、阿爾茨海默病或癡呆的疾病或病癥或癥狀的藥物。阿司匹林通過在吸收過程中化學(xué)刺激腸壁細(xì)胞和通過干擾它的保護(hù)屏障的分泌 而導(dǎo)致胃出血。該問題的解決方案是通過化學(xué)連接掩蔽基團(tuán)使阿司匹林變得暫時(shí)惰性，遠(yuǎn) 離易損壞的胃腸道表面，其中掩蔽基團(tuán)后來在吸收過程中被脫除。開發(fā)該技術(shù)的關(guān)鍵挑戰(zhàn) 是找到在血液中可預(yù)見地和準(zhǔn)確地脫除的掩蔽基團(tuán)，是沒有其他人曾克服的障礙。本質(zhì)上 本發(fā)明提供一種被機(jī)體激活的惰性形式的阿司匹林。在該設(shè)計(jì)的進(jìn)一步細(xì)化中，將一氧化氮前體引入載體基團(tuán)中提供能釋放NO以及 阿司匹林的其它化合物。因此此種雙重前藥在兩個(gè)不同水平上潛在地介入病理過程。硝 基_阿司匹林方法已被廣泛接受，但本文中描述的技術(shù)是唯一的能證實(shí)地在人組織中既產(chǎn) 生阿司匹林又產(chǎn)生NO的技術(shù)。對(duì)雙阿司匹林-異山梨醇酯(ISDA，表2中的16)在人血液中的水解進(jìn)行研究以弄 清楚它如何產(chǎn)生阿司匹林。雙阿司匹林-異山梨醇酯(ISDA，16)有4個(gè)酯基，一個(gè)位于兩個(gè)阿司匹林部分的 每一個(gè)上，一個(gè)將這些部分中的每一個(gè)與異山梨醇核連接。其阿司匹林產(chǎn)生數(shù)據(jù)的簡(jiǎn)單解 釋是位置2或5上的兩個(gè)阿司匹林酯之一被酯酶直接從ISDA分離釋放阿司匹林。這在一定 程度上是真實(shí)的但真實(shí)的機(jī)理可能更令人感興趣和意想不到。ISDA中的4個(gè)酯基易于被酯 酶水解產(chǎn)生潛在的復(fù)雜的系列酯代謝物。最終所有的這些都水解為異山梨醇和水楊酸。可 對(duì)該水解級(jí)聯(lián)后進(jìn)行色譜分析，其可以分離和測(cè)量它們進(jìn)展和衰變時(shí)的每一種代謝物。進(jìn) 行了許多實(shí)驗(yàn)，其中將ISDA加入生物培養(yǎng)基中，使反應(yīng)在順序的時(shí)點(diǎn)中止并通過HPLC測(cè)量 代謝物混合物。該數(shù)據(jù)隨時(shí)間過程變化的曲線稱為水解進(jìn)展曲線。ISDA的進(jìn)展曲線顯示在 圖3A和3B中。該曲線顯示隨時(shí)間ISDA的消失和阿司匹林的出現(xiàn)。對(duì)這些曲線進(jìn)行仔細(xì)的 檢查揭示兩個(gè)事件在母體ISDA已經(jīng)消失后阿司匹林濃度繼續(xù)升高，其次是它的峰在另一 個(gè)代謝物的升高和消失之后。這是一個(gè)令人驚奇的和非常顯著的發(fā)現(xiàn)，表明阿司匹林在將 ISDA加入到人血漿之后出現(xiàn)，可能不是由ISDA本身釋放而是由ISDA的代謝物釋放。因此， 所有ISDA的潛在代謝物被獨(dú)立地合成并作為阿司匹林前藥通過將它們?cè)谘獫{中溫育之后 將它們通過HPLC水解來通過HPLC評(píng)價(jià)。這些物質(zhì)中之一，2-阿司匹林-5-水楊酸-異山 梨醇酯(ISAS，2)，證明是迄今為止在關(guān)鍵的人血漿模型中已知的最有效的前藥(圖4A和 B)。在人血漿中它大量轉(zhuǎn)化為阿司匹林和載體5-水楊酸-異山梨醇酯。它在純化的BuChE 溶液中幾乎僅僅沿此途徑水解(圖4B)。該結(jié)果總體上表明雙阿司匹林-異山梨醇酯(ISDA，16)充當(dāng)真正的阿司匹林前 藥，其代謝物2-阿司匹林-異山梨醇酯5-水楊酸(ISAS，2)的前體。經(jīng)發(fā)現(xiàn)人血漿BuChE首先選擇性地脫除雙阿司匹林-異山梨醇酯(ISDA)的連接 在5位上的阿司匹林酯的乙?；?，從而產(chǎn)生2-阿司匹林-5-水楊酸-異山梨醇酯(ISAS)。 人BuChE然后有效地從2-阿司匹林-5-水楊酸-異山梨醇酯(ISAS)分離阿司匹林。ISDA沿 其它的平行路線水解(為了清楚而見圖5是這種路線的簡(jiǎn)化版)，它不跟2-阿司匹林-5-水
28楊酸-異山梨醇酯(ISAS) —樣有效地代謝成阿司匹林，在生物學(xué)分析中也沒有發(fā)現(xiàn)它有 效。ISAS在血漿中的阿司匹林釋放速率為85% (t1/22分鐘)而ISDA沿阿司匹林途徑水解 60%左右，剩余40%沿?zé)o價(jià)值的水楊酸途徑進(jìn)行。事實(shí)上因?yàn)镮SDA含兩個(gè)連接的阿司匹林 分子其總產(chǎn)率嚴(yán)格地說是30%。使用特異性酶抑制劑和純化的酶溶液我們能毫無疑問地建 立人血漿中的酶，其與丁酰膽堿酯酶一樣負(fù)責(zé)ISAS的唯一精確的活化(例如圖5)。在國際公開號(hào)W09817673中沒有描述2-阿司匹林-5-水楊酸-異山梨醇酯 (ISAS)。盡管它是一種潛在的代謝物但是沒有人能夠預(yù)期它將是一種前藥。其它ISDA的 實(shí)際或潛在的代謝物(例如5-阿司匹林酯，2-阿司匹林酯或2-水楊酸-5-阿司匹林酯) 各自被合成和表征。這些代謝物中沒有一個(gè)在人血漿中起阿司匹林前藥的作用。有利地，作為被膠原蛋白(圖6)、ADP和花生四烯酸誘發(fā)的人血小板凝聚的抑制 劑ISAS (2)比阿司匹林明顯有效，因此它抑制COX下游產(chǎn)物包括血栓素A2和丙二醛。它還 以阿司匹林沒有效果的濃度減弱組成型血小板糖蛋白表達(dá)。2-阿司匹林-5-水楊酸-異 山梨醇酯(ISAS)比阿司匹林更大的效力，盡管從藥物開發(fā)觀點(diǎn)看是希望的，但它是難題和 正在進(jìn)行研究的課題。還表明2-阿司匹林-5-水楊酸-異山梨醇酯(ISAS)需要通過酯酶 激活而發(fā)揮其藥理作用它不具有內(nèi)在的生物活性并因此是一種前藥。盡管ISAS以半衰期 <2分鐘在人血液中水解，但它在典型的消化蛋白酶的存在下和對(duì)CAC0-2細(xì)胞中存在的酯 酶是穩(wěn)定的。它在人全血中以IC5tl為17 μ M抑制花生四烯酸的血小板凝聚(阻抗法)。在 該模型中阿司匹林的IC50是25 μ M。ISAS還通過洗滌過的血小板有效地阻止體內(nèi)TXA2合 成(TXB2/全血)和MDA合成。酶研究表明2-阿司匹林-5-水楊酸-異山梨醇酯(ISAS)被兩種人酶特異性地 激活人血漿中的BuChE，以及速率不及快速地，但以相同的途徑Α/Β比率被存在于腸上皮 微粒體中的人羧酸酯酶-2(CE-2)激活。兩種酶能夠由2-阿司匹林-異山梨醇酯5-水楊 酸(ISAS)釋放阿司匹林的觀察結(jié)果在臨床上相關(guān)并且有益如果患者一種酶功能異常，另 一種酶可能補(bǔ)償并釋放阿司匹林。該設(shè)計(jì)的另一優(yōu)點(diǎn)是該化合物在胃腸道腔的環(huán)境下是穩(wěn) 定的但在吸收之后快速分解為易于表征的代謝物水楊酸、異山梨醇、當(dāng)然還有阿司匹林。 (在這方面CE-2和BuChE的優(yōu)先底物的相似性非常令人驚奇)。該化合物的其它優(yōu)點(diǎn)是其 載體最后代謝為水楊酸和異山梨醇、要么無害要么是制藥學(xué)易于表征的化合物。盡管ISAS 本身有重要的藥物價(jià)值但其發(fā)現(xiàn)具有超越一般性的價(jià)值。ISAS及其產(chǎn)生和在血漿中阿司匹 林釋放的動(dòng)力學(xué)模型描述于我們最近的論文中(Moriarty等2008)。2-阿司匹林-5-水楊酸-異山梨醇酯(ISAS)充當(dāng)阿司匹林前藥，因?yàn)樵撉八幏肿?的5-水楊酸-異山梨醇酯部分與人羧酸酯酶的活性位點(diǎn)有高度互補(bǔ)性。正是因?yàn)槿绱怂?進(jìn)行非?？焖俚乃狻SAS的5-水楊酸-異山梨醇酯部分或載體基團(tuán)成功地促進(jìn)其自身 從阿司匹林脫離，同時(shí)抑制阿司匹林乙酰基的水解。這為阿司匹林和潛在地其它羧酸藥物提出了新的和高效的載體類型。這是對(duì)本發(fā)明的重要理解。 問題是是否可能改變5_水楊酸_異山梨醇酯結(jié)構(gòu)使其具有改善的藥物特性同時(shí) 保存其酯酶互補(bǔ)性。此外有證據(jù)表明在5-位的取代模式對(duì)于阿司匹林釋放至關(guān)重要，因?yàn)?ISMNA(其中5-水楊酸被硝酸酯取代)在人血漿中不是阿司匹林前藥。結(jié)論是5-硝酸酯 與生產(chǎn)性人酯酶的鍵接不相容。制備了大約25個(gè)化合物，其中5-位有系統(tǒng)地變化以試驗(yàn) 5_基團(tuán)對(duì)載體基團(tuán)的阿司匹林釋放特性的影響(圖7和表2)。新的阿司匹林酯類通過將 它們?cè)谌搜獫{溶液中溫育并測(cè)量相對(duì)于被加到血漿溶液中的化合物摩爾量所產(chǎn)生的阿司 匹林的量來進(jìn)行試驗(yàn)。這些酯類經(jīng)歷不同程度的沿A和B途徑的特征性的快速水解，其中 一些釋放速率接近ISAS的生產(chǎn)能力(表2和圖7)。一系列的25種酯的阿司匹林釋放特性與一些在圖7中作為具有阿司匹林釋放百 分比的結(jié)構(gòu)式的經(jīng)選擇的實(shí)例一起如表2所示。它表明5-位的基團(tuán)顯著地影響水解的方 向(圖8和圖9中的實(shí)例)。 非取代的化合物(2-阿司匹林-異山梨醇酯，17)不是阿司匹林前藥，表明阿司匹 林釋放要求5-取代。一般發(fā)現(xiàn)5-苯甲酸酯和煙酸酯發(fā)生顯著的阿司匹林釋放。在脂族酯 取代的情況下占優(yōu)勢(shì)的水解部位在常見的乙酰基酯位置上(參見表2中的化合物4，5，23)。 還發(fā)現(xiàn)2-和3-位上苯基被取代的芳基酯是最有生產(chǎn)價(jià)值的。例如，化合物1沿阿司匹林 生產(chǎn)途徑經(jīng)歷水解60%左右。
所發(fā)現(xiàn)的最有效的化合物是ISAS，它在純化的丁酰膽堿酯酶的存在下幾乎完全轉(zhuǎn) 化為阿司匹林和在人血液中轉(zhuǎn)化80%左右。ISDA的代謝物2-阿司匹林_5_水楊酸-異山梨醇酯(ISAS，2)屬于新一族的經(jīng)取 代的5-芳香酯化合物，其在人酯酶的存在下充當(dāng)阿司匹林前藥。不知道為什么在鄰或間位 進(jìn)一步取代的苯甲酸酯化合物如此成功，但很可能是由于該酶在活性位點(diǎn)上的有利排列。 這種酶進(jìn)攻位置的遠(yuǎn)距離控制不常見。 因此，可以發(fā)現(xiàn)某些異山梨醇-型載體基團(tuán)促進(jìn)正確位置上的水解，導(dǎo)致阿司匹 林在人血液中釋放(上面的b)。某些取代的異山梨醇化合物當(dāng)在人血液中溫育時(shí)以顯著的 量釋放阿司匹林。選擇性水解由載體基團(tuán)和存在于血漿中的人丁酰膽堿酯酶之間以及腸上 皮細(xì)胞內(nèi)的CE-2的高特異性相互作用所產(chǎn)生。認(rèn)識(shí)到如果5-位被適當(dāng)?shù)厝〈敲窗⑺酒チ值漠惿嚼娲减ツ軌虺洚?dāng)阿司匹林前 藥對(duì)本發(fā)明至關(guān)重要。最有效的取代基是5-芳基酯，其在苯環(huán)的_2或-3位被進(jìn)一步取代。 此種基團(tuán)促進(jìn)阿司匹林在遠(yuǎn)距離的異山梨醇-2-位上釋放而不是乙酰基水解?；衔?是 最有效的和研究最多的前藥，其引導(dǎo)了阿司匹林前藥的新的有效載體類別的鑒別。然而本 發(fā)明包括和預(yù)見到在5位上不同取代但在血漿酶的存在下同樣有效地轉(zhuǎn)化為阿司匹林的 其它化合物。特別地，在既能釋放阿司匹林又能釋放一氧化氮NO的前藥裝置方面有極大的 商業(yè)和學(xué)術(shù)意義。由于對(duì)于生產(chǎn)性水解的結(jié)構(gòu)要求(或控制在酯酶部位內(nèi))被確定，設(shè)計(jì)阿司匹林 和一氧化氮兩者的前藥的挑戰(zhàn)仍在繼續(xù)。SAR表明5-苯甲酸-異山梨醇酯載體基團(tuán)可容忍 在苯環(huán)上進(jìn)一步用硝氧基取代而不影響其水解控制特性。不幸地芳香硝酸酯是苯酚的不穩(wěn) 定硝酸酯，容易歧化鄰硝基苯酚。相反許多2-阿司匹林-5-苯甲酸-異山梨醇酯的硝氧基 甲基衍生物被制成擬合下面模式的化合物這些包括表2中的化合物20-23。
在關(guān)鍵的人血漿水解模型中對(duì)于這些化合物在人血漿中產(chǎn)生阿司匹林的能力進(jìn)行了檢測(cè)。與前面的模型一致，發(fā)現(xiàn)鄰位和間位取代的硝氧基甲基化合物在人血漿中釋放 阿司匹林。對(duì)位取代的化合物不釋放阿司匹林。成功的化合物在人腸微粒體的存在下還 釋放大量的阿司匹林，似乎由CE-2酶介導(dǎo)，遵循與先導(dǎo)ISAS相同的模式(圖9)。這種模 式的優(yōu)點(diǎn)是在患者BuChE活性低的情況下，CE-2能夠釋放阿司匹林以及貢獻(xiàn)一氧化氮的部 分。已經(jīng)在體外膠原蛋白誘導(dǎo)的血小板凝集中試驗(yàn)了化合物20，發(fā)現(xiàn)它在凝集的抑制中比 阿司匹林更強(qiáng)。在PRP中它還是更強(qiáng)的ADP誘導(dǎo)的血小板凝集的抑制劑。然而，因?yàn)樗€ 釋放NO所以可預(yù)見它對(duì)于阿司匹林無效的病理性刺激有抑制凝集的作用。阿司匹林只抑 制血栓素依賴性凝集即僅僅一種刺激的血小板凝集。它對(duì)高劑量膠原蛋白凝集或?qū)DP的 凝集幾乎沒有作用。已經(jīng)表明一氧化氮能減弱阿司匹林的胃毒性和促進(jìn)潰瘍治愈。能既釋 放阿司匹林又釋放一氧化氮的化合物在癌癥預(yù)防、治療中和在心血管疾病治療中具有明顯 的潛力。糖蛋白整聯(lián)蛋白受體GPIIb/IIIa的活化對(duì)于血小板凝集的發(fā)生至關(guān)重要。此外 P-選擇蛋白從α _顆粒到血小板表面膜的易位分別構(gòu)成血小板粘附的基礎(chǔ)。我們已經(jīng)測(cè)量 了這些受體在不同的化合物濃度下的凝集。圖32-36表明pro-asa和硝基-asa明顯降低 GPIIb/IIIa的活化和P-選擇蛋白的易位。GPIIb/IIIa的活化是刺激或抑制凝集的受控動(dòng) 態(tài)相互作用的途徑。一氧化氮介導(dǎo)主要的抑制劑途徑并調(diào)節(jié)GPIIb/IIIa功能。阿司匹林 在與ISAS(2)或和硝酸酯化合物31-32同樣的濃度下不抑制血小板活化。本發(fā)明還提供包含本發(fā)明的化合物的藥物組合物，其可為膠囊或片劑的形式適于 口服給藥或適于經(jīng)皮給藥例如以透皮貼劑的形式。該組合物還可為栓劑或水基配制劑的形 式。本發(fā)明還提供所述化合物實(shí)現(xiàn)抗血小板活性和/或其它阿司匹林型活性如解熱 和/或抗炎活性的用途。在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方式中組合物包括另一種藥物實(shí)體，特別是治療油，典 型地為魚油如鱈魚肝油，或植物油如月見草油。在這種情況下組合物可為裝有包括活性成 分的填充物的具有保留殼的膠囊形式。填充物可包括抗沉降劑如選自膠體二氧化硅、氫化 植物油(任選地與蜂蠟結(jié)合)、高熔點(diǎn)偏甘油酯、和/或卵磷脂中一種或多種物質(zhì)的抗沉降 劑。填充物還可包括抗氧化劑如選自D-α維生素Ε、D-α維生素E醋酸酯、混合的生育酚 和抗壞血酸中的一種或多種物質(zhì)的抗氧化劑。殼可為明膠殼。附圖簡(jiǎn)述圖1 阿司匹林毒性避免理論圖2 —種成功的阿司匹林前藥必須以比鄰_乙酰基A位上更大的速率進(jìn)行酯B位 上的水解。圖3Α和3Β 在10%人血漿(ρΗ 7. 4，37°C )中ISDA的水解進(jìn)展曲線顯示通過 HPLC測(cè)量的在順序的時(shí)點(diǎn)時(shí)母體和它的一些代謝物的濃度ISDA( ·)，阿司匹林(■)，水 楊酸(ο)，2/5-阿司匹林-2/5-水楊酸-異山梨醇酯(□)，雙水楊酸異山梨醇酯( )和 5_水楊酸-異山梨醇酯(Δ)。相對(duì)于母體ISDA的消失阿司匹林峰值延遲表明代謝物負(fù) 責(zé)其產(chǎn)生。該曲線圖用忽略的ISDA曲線再繪制。圖4A :2-阿司匹林-5-水楊酸-異山梨醇酯ISAS (2)在50%人血漿(ρΗ 7.4)中 于37°C的水解進(jìn)展曲線ISAS( □)，雙水楊酸異山梨醇酯( )，5_水楊酸-異山梨醇酯 (Δ )，阿司匹林(■)和水楊酸(ο)。
圖4B :2_阿司匹林-5-水楊酸-異山梨醇酯ISAS的用純化人血清BuChE于pH 7. 4和37°C的水解進(jìn)展曲線2-阿司匹林-5-水楊酸-異山梨醇酯(□ )，5_水楊酸-異 山梨醇酯(Δ)，阿司匹林(■)，水楊酸(ο)和雙水楊酸異山梨醇酯( )。圖5 :ISDA首先進(jìn)行5-阿司匹林酯的乙?；簧系乃?70% )釋放ISAS (2)，其 主要水解為阿司匹林和5-水楊酸-異山梨醇酯。通過血漿膽堿酯酶(BuChE)的生產(chǎn)干預(yù) 的主要位置以紅線標(biāo)明。注意這對(duì)酯酶相對(duì)穩(wěn)定。ISDA的水解也與不釋放阿司匹林但釋放 異山梨醇和水楊酸的平行無價(jià)值的途徑一起在進(jìn)行(30% )。圖6 顯示ISAS(2)和阿司匹林(ASA)體外抑制膠原蛋白誘導(dǎo)的人血小板凝集的 濃度-反應(yīng)曲線。還顯示了抑制凝集50%的藥物濃度(IC5Q)。ISAS比ASA對(duì)凝集明顯更 有效(數(shù)據(jù)是平均值士S，D p<0.01，n = 4)。6B顯示ISAS (2)、釋放一氧化氮的前藥31、 32,33和阿司匹林的相對(duì)抑制曲線。6顯示在用ISAS、化合物31-33或阿司匹林溫育之后 PRP的凝集％。該圖顯示膠原蛋白的凝集百分比而不是在三種不同的濃度下用5種化合物， 阿司匹林，ISAS和三種異構(gòu)硝酸酯31、32、33對(duì)膠原蛋白凝集的抑制百分比(_P < 0. 05)圖7 在表2的人血漿溶液中溫育的備選5-酯的實(shí)例。％值表示發(fā)生在A位點(diǎn)釋 放水楊酸酯、和在B位點(diǎn)釋放阿司匹林的水解的量。該圖說明在2位上阿司匹林釋放對(duì)遠(yuǎn) 距離的5位上酯結(jié)構(gòu)的依賴性。圖8 5-取代基‘R’決定性地影響水解途徑圖9:顯示在源自人腸上皮細(xì)胞的微粒體的存在下溫育之后2-阿司匹 林-5-(3-硝氧基甲基)_苯甲酸-異山梨醇酯的消失和阿司匹林、水楊酸和硝酸酯_取代 的異山梨醇載體的釋放。圖10 由ISMN通過與帶保護(hù)基的水楊酸偶合之后脫芐基合成ISAS2。圖11 :2_阿司匹林酯-5-(3-硝氧基-甲基)苯甲酸-異山梨醇酯21制備的合成 路線圖12 :2_氯甲基苯甲酰氯制備的合成路線圖13 硝酸酯_取代的5-酯的直接合成圖14:通過用氯甲基苯甲酸酯酯化和鹵化物與硝酸銀的交換合成2-阿司匹 林_異山梨醇酯的3-硝氧基苯甲酸酯圖15 在HLM中2-阿司匹林酯-5-水楊酸-異山梨醇酯(ISAS，2)產(chǎn)生9. 4μΜ阿 司匹林。圖16 在HIM中2-阿司匹林酯-5-水楊酸-異山梨醇酯(ISAS，2) (1. 04x1 (T4M) 產(chǎn)生27 μ M的阿司匹林。圖17:在加入2-阿司匹林酯-5-水楊酸-異山梨醇酯(ISAS，2)之前用有效的 BChE抑制劑HLM溫育5分鐘產(chǎn)生16 μ m阿司匹林。圖18 在含異0ΜΡΑ(10 μ Μ)的HLM中的2_阿司匹林酯_5_水楊酸-異山梨醇酯 (ISAS，2) (1. Ixl(T4M)產(chǎn)生 8. 5 μ M 的阿司匹林。圖19 在含BNPP (14 μ Μ)的HIM中的2_阿司匹林酯_5_水楊酸-異山梨醇酯 (ISAS，2) (1. 04x1 O^4M)。圖20 在50%人血漿中的2-阿司匹林-5-(3_硝氧基-甲基)苯甲酸-異山梨醇 酯(21) (2. 5x1 O^4M)產(chǎn)生26 μ M的阿司匹林。
圖21 在80%人血漿中的2-阿司匹林-5-(3_硝氧基-甲基)苯甲酸-異山梨醇 酯(21) (Ixl(T4M)產(chǎn)生21 μ M的阿司匹林。圖22:在含異OMPA的HLM (14. 4 μ m)中的2_阿司匹林_5_ (3_硝氧基-甲基)苯 甲酸-異山梨醇酯(21) (Ixl(T4M)產(chǎn)生1.4μΜ的阿司匹林。圖23 在HIM中2-阿司匹林-5-(3_硝氧基-甲基)苯甲酸-異山梨醇酯(21) (1·05χ1(Γ4Μ)產(chǎn)生20 μ M的阿司匹林。圖24 在含異OMPA的HIM(14 μ m)中2-阿司匹林-5_(3_硝氧基-甲基)苯甲 酸-異山梨醇酯(21) (1. Ixl(T4M)產(chǎn)生12. 7μ M的阿司匹林。圖25 在50%人血漿中2-阿司匹林-5-(2-硝氧基-甲基)苯甲酸-異山梨醇酯 (20) (Ixl(T4M)產(chǎn)生 10. 3μπι 阿司匹林。圖26 在HIM中2-阿司匹林-5-(2_硝氧基-甲基)苯甲酸-異山梨醇酯(20) (Ixl(T4M)產(chǎn)生21. 7μ M的阿司匹林。圖27 在50%人血漿中2_阿司匹林_5_ (4_硝氧基-甲基)苯甲酸-異山梨醇酯 (22) (Ixl(T4M)產(chǎn)生2μ M的阿司匹林。圖28:在H IM中2-阿司匹林-5-(4-硝氧基-甲基)苯甲酸-異山梨醇酯(22) (Ixl(T4M)產(chǎn)生9. 97 μ M阿司匹林。圖29 在HIM (40 μ g/ml)中2_乙酰氧苯甲酸苯酯(阿司匹林的苯酚酯) (1. 09x1 O^4M)產(chǎn)生7· 7μ M阿司匹林。圖30 在HIM (20 μ g/ml)中2_乙酰氧苯甲酸苯酯(1. 09x1 (T4M)產(chǎn)生5· 3μ M阿司匹林。圖31 :5個(gè)試驗(yàn)化合物在三種不同濃度下體外對(duì)響應(yīng)于ADP的血小板凝集的抑制。 零濃度是被媒介物，DMSO抑制。圖32 在洗滌過的血小板中用試驗(yàn)化合物2、31_33、阿司匹林處理響應(yīng)于膠原蛋 白的PAC-I表達(dá)。該圖顯示在洗滌過的血小板中PAC-I糖蛋白表達(dá)百分比。在該制劑中幾 乎沒有酯酶，所以該數(shù)據(jù)說明本發(fā)明前藥的酯酶在體外抑制血小板功能之前需要活化。圖33 在含試驗(yàn)化合物2、31_33、阿司匹林的富含血小板的血漿中響應(yīng)于膠原蛋 白的PAC-I表達(dá)。該圖顯示在富含血小板的血漿中糖蛋白表達(dá)的程度。糖蛋白表達(dá)需要在 整個(gè)凝集過程中血小板的交聯(lián)，該數(shù)據(jù)表明本發(fā)明的化合物在血漿制劑中在抑制該表達(dá)方 面比阿司匹林更有效。圖34 在含試驗(yàn)化合物2、31_33、阿司匹林的富含血小板的血漿中響應(yīng)于膠原蛋 白的P-選擇蛋白的表達(dá)。選擇蛋白是另一種糖蛋白，其表達(dá)與血小板活化有關(guān)。本發(fā)明的 化合物在血漿制劑中在抑制血小板活化方面遠(yuǎn)比阿司匹林有效。圖35 在含試驗(yàn)化合物2、31_33、阿司匹林的洗滌過的血小板中響應(yīng)于膠原蛋白 的P-選擇蛋白的表達(dá)。此處再一次在洗滌過的血小板中糖蛋白表達(dá)有一定的衰減(與膠 原蛋白存在顯著性差異(_Ρ <0.001)。然而在缺少酯酶的洗滌過的血小板懸浮液中化合 物不與阿司匹林一樣有效。發(fā)明詳述一般實(shí)驗(yàn)方法材料5-ISMN得自Sifa Ltd。純化人血清丁酰膽堿酯酶(EC 3. 1. 1. 8)，兔肝羧酸酯酶(EC 3. 1. 1. 1)，BNPP (雙-4-硝基苯基磷酸酯)，異OMPA (四異丙基焦磷酰胺)，合并的 (pooled)人肝微粒體，3-氯甲基苯甲酰氯，4-氯甲基苯甲酰氯，硝酸銀，苯酞，二氯三苯基 膦和 HPLC 級(jí)溶劑得自 Sigma-Aldrich0 膠原蛋白和 ADP 獲自 Chronolog(Havertown, PA, U. S. Α)。別藻藍(lán)蛋白(APC)-綴合的抗高親和性GPIIb/II Ia (PAC-I-APC)的單克隆抗體和 APC-綴合的抗人血小板P選擇蛋白(CD62P)的單克隆抗體購自BD Biosciences (Oxford, UK)。所有其它溶劑和試劑都是分析級(jí)。合并的人腸微粒體得自英國境內(nèi)的BD Gentest0本發(fā)明的化合物很容易由阿司匹林單硝酸異山梨醇酯(ISMNA)制備，它自己按照 Gilmer等2001通過用乙?；畻铛Ｂ弱セ瘑蜗跛?異山梨醇酯(ISMN)來制備。所述硝 酸酯在氫氣下通過用碳載鈀處理被選擇性地脫除產(chǎn)生關(guān)鍵中間體2-阿司匹林-異山梨醇 酯。這些化合物還可以通過將異山梨醇選擇性地5-酯化之后在2-位上連接阿司匹林酯基 團(tuán)(異山梨醇的5-位盡管靠?jī)?nèi)但對(duì)酰化反應(yīng)比2-外位更活潑，因?yàn)?-0H被分子內(nèi)的H-鍵 活化))而獲得。在2-阿司匹林-5-水楊酸-異山梨醇酯(ISAS)的情況下用水楊酸直接酰化將被 水楊酸-OH和異山梨醇-OH之間的競(jìng)爭(zhēng)復(fù)雜化。因此首先用標(biāo)準(zhǔn)DCC偶聯(lián)方法引入苯甲基 醚保護(hù)的水楊酸，然后在還原條件下脫除苯甲基保護(hù)(圖10)。本發(fā)明的其它酯化合物能夠通過用DCC偶聯(lián)直接酰化或在叔堿如三乙胺的存在 下通過用適宜的?；忍幚韥碇苽?。硝氧基取代的酯可通過與適當(dāng)取代的酸直接連接來制 備。作為備選，硝氧基取代的化合物可通過首先用具有氯或溴的酸酯化隨后可通過用在乙 腈中的AgNO3處理被硝酸根取代而獲得。試驗(yàn)實(shí)施例異山梨醇-2-阿司匹林-5-酯的合成分子式如圖2所示。2-阿司匹林-5-[2-甲基苯甲酸]-異山梨醇酯1向2-阿司匹林-異山梨醇酯17(0. 2g，0.65mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液中加 入三乙胺(0. Ilml,0. 98mmol)和2-甲苯酰氯(0. 09ml,0. 72mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫 下攪拌24小時(shí)然后用水(2x25ml)、HCl (lm,25ml)和飽和NaHCO3水溶液洗滌，之后經(jīng)無 水MgSO4干燥。在真空中除去溶劑得到0.41g棕色油狀粗制品。通過以己烷和乙酸乙酯 (2 1)作為洗脫劑進(jìn)行柱層析純化得到黃色油狀產(chǎn)品。將該產(chǎn)品在乙醇中重結(jié)晶得到白 色固體的化合物 1(0. Ilg,39. 6% )熔點(diǎn) 104-106 0C ο IRvmax (KBr) =2987. 1 和 2922. 8 (C-H 伸縮),1762.O 和 1718. 1(C = 0)，1259.5 和 1199. 8(C(0)OR 芳族的),1072. 4(C-O-C) CnT1-HRMS:理論值449. 1212(M++23)，實(shí)測(cè)值449. 1238 (M++23)，1H NMR δ (CDCl3) 2. 38 (3Η, s, 0C0CH3)，2. 65 (3Η，s, ArCH3), 4. 01 (1H, dd, J 5. 52 禾口 5. 52Hz, IS6_H[a])， 4. 12 (3H, m, ISlH[a β]和 IS6H[ β ])，4· 66 (1Η，d, J 4. 52Hz, ISH-3)，5. 04 (1H，t, J 5. 04 和 5. OHz, ISH-4)，5· 41 (1H, q, J 5. 52，5. 52 和 5. 52Hz, ISH-5)，5. 47 (1H, d, J 2. OHz, ISH-2)，7. 13 (1H, dd, J 1. 0 禾口 1. OHz, ArH-4)，7. 33 (1H, t, J 7.0 禾口 6. 52Hz, Ar H-2)， 7. 59 (1H, t, J 6.52 禾口 6. 52Hz, ArH-3) ,8. 02 (1H, dd, J 1.52 禾口 2.0Hz，ArH-1). 13C NMR PPm(CDCl3) :20. 43 (Ar-CH3), 21. 12 (OCOCH3), 70. 29 (ISC-I), 72. 72 (ISC—6)，73. 81 (0C(0) Ar)，78. 22 (ISC-4)，80. 52 (ISC-2)，85. 63 (ISC-3)，122. 32 (Ar1C-I)，123. 38 (Ar1CD， 125. 58 (Ar1CI 禾口 Ar2C-4)，128. 46 (Ar2C-2 禾口 Ar2C-5)，130. 19 (Ar2C-3)，133. 78 (Ar1C-S)，140. 08 (Ar2C-I)，150 26 (Ar1C-S)，163. 12 (ArOCOMe)，169. 15 (ArCOOR)2-阿司匹林-5-水楊酸-異山梨醇酯，ISAS，2將2-芐基氧苯甲酸(364. 8mg= 1. 6mmol)溶于無水DCM(20mls)中并攪拌。加 入2-阿司匹林-5-0H-異山梨醇酯(500mg = 1. 6mmol)和10% DMAP。將燒瓶冷卻至0°C 并加入DCC(340mg，1. 6mmol)。繼續(xù)攪拌5分鐘并讓溫度在攪拌過夜的狀態(tài)下回到室溫。 將反應(yīng)物過濾并將濾液用0. IM HCl、5% NaHCO3和水洗滌。經(jīng)硫酸鈉干燥并蒸干至油狀。 將該產(chǎn)物經(jīng)己烷/乙酸乙酯(2 1)柱層析純化得到白色產(chǎn)品(Rf = 0.4，228mg)。將該 產(chǎn)品溶于甲醇/乙酸乙酯(1 1)中。加入Pd/C并將反應(yīng)物在氫氣下攪拌過夜。將反 應(yīng)物過濾并濃縮。將油狀物經(jīng)己烷/乙酸乙酯(1 1)柱層析純化得到白色固體(107mg Rf = 0. 67).). 1HNMR δ (CDCL) 400ΜΗζ :2· 38 (3Η, s, OCOCH3)，4· 02 (4Η，m, ISH-I, ISH-I', ISH-6 和 ISH-6，)，4· 63 (1Η, d, ISH-3)，5· 03 (1Η, t, ISH-4)，5· 43 (2Η, dd, ISH—2，ISH—5)， 6. 91 (1H, t, Ar-H)，7. 01 (1H, d, Ar-H)，7. 1 (1H, d, Ar-H)，7. 28 (1H, t, Ar-H)，7. 48 (1H, t, Ar-H)，7. 53 (1H, t, Ar-H)，7. 89 (1H, d, ArH)，8. 00 (1H, d, ArH)，10. 61 (1H，s, OH)。-C NMR ppm(CDCL) 400MHz 20. 51 (OCOCH3)，70. 46 (ISC-I)，72. 78 (ISC—6) ,74. 31 (ISC—5)，
77.91 (ISC-2) ,80. 69 (ISC—4)，85. 70(ISC_3) ,117. 30 (Ar2C-I) ,118. 90，123. 41,125. 65， 129. 47，131. 42，133. 94，135. 65，150. 24 (AriC-2)，163. 12 (ArOCOCH3)，168. 87 (ArC(O) OR)。2-阿司匹林-5-[3-甲基苯甲酸]-異山梨醇酯3在0°C下將2-阿司匹林-異山梨醇酯17(0. 2g，0. 65mmol)溶于甲苯(15ml)中， 向其中加入DCC(0. 13g，0. 65mmol)和DMAP (0. 08g，0. 07mmol)。10分鐘之后使反應(yīng)容器返 回到室溫，然后加入3-甲苯甲酸(0. 09g)并攪拌24小時(shí)。用HCl (30ml, 1M)、NaHCO3飽和 水溶液(30ml)、飽和鹽水溶液(30ml)和水(3x30ml)洗滌后將反應(yīng)混合物無水Na2SO4干 燥并在真空中除去溶劑得到透明的油狀粗制品。通過以己烷和乙酸乙酯(3 2)作為洗 脫劑進(jìn)行柱層析純化得到白色晶體化合物3(0. 12g，43. 2% )熔點(diǎn)96-980C 0 IRvmax(KBr) 2987. 1 和 2922. 8 (C-H 伸縮)，1762. 0 和 1718. 1 (C = 0)，1259. 5 和 1199. 8 (C(O) OR,芳 族的)，1072. 4 (C-O-C) cnT1 · HRMS 理論值449. 1212 (M++23)，實(shí)測(cè)值449. 1234 (M++23)， 1H NMR δ (CDCl3) 2. 36 (3Η, s, OCOCH3), 2. 433H, s, ArCH3) , 4. 09 (4H, m, IS1-H2[ α + β ] 和 IS6-H2[a+3])，4.65(lH，d, J 5. OHz, ISH-3) ,5. 04(1Η, t, J5. 04 和 5. OHz, ISH-4), 5. 43 (2Η, m, ISH-5 和 ISH-2)，7. 12 (1H, d, J 8. OHz，ArH-4)，7. 35 (3H, m, ArH-2)，7. 58 (1H, q, J 1.0，6.56 和1. 48Hz，ArH-3)，8· 01 (1H，dd，J 1· 0 和 1· 52Hz，ArH—1) · 13C NMR PPm(CDCl3) :20. 42 (ArCH3), 20. 79 (OCOCH3), 70. 39 (ISC-I), 72. 77 (ISC-6)，73. 92(ISC_5)，
78.19 (ISC-4)，80. 66 (ISC-2)，85. 66 (ISC-3)，122. 35 (Ar1C-I)，123. 39 (Ar1CD， 125. 57 (Ar1C-B)，126. 45 (Ar1CI)，12. 89 (Ar2C-4)，129. 80 (Ar2C-5)，131. 37 (Ar2C-3)， 133. 77 (Ar2C-I)，150. 25 (Ar1C-S)，163. 15 (ArOCOCH3)，165. 58 (ISOCOAr)，169. 12 (ArOCO)。2-阿司匹林-5-醋酸-異山梨醇酯4向2-阿司匹林-異山梨醇酯17(0. 2g，0.65mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中加 入三乙胺(0.09ml，0.65mmol)和乙酸酐(0. 06ml，0. 65mmol)。將反應(yīng)容器在室溫下攪拌 24小時(shí)之后用水(2x20ml)、HCl (1M，30ml)和NaHCO3飽和水溶液(30ml)洗滌并經(jīng)MgSO4 干燥。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑得到0.52g粗制品。通過以己烷和乙酸乙酯(3 2)作 為洗脫劑進(jìn)行柱層析純化得到白色結(jié)晶物質(zhì)化合物4(0. lg，43.8% )。熔點(diǎn)96-98°C。IRvmax (KBr) 2966. 9 和 2928. 6 (C-H 伸縮)，1751. 6 和 1734. 0 (C = 0)，1607. 8 (C = C 伸縮)， 1262. 0 和 1193. 9(C(0)0R 芳族的)，1082. 5 (C-O-C) cm-1. HRMS 理論值373. 0899 (M++23)， 實(shí)測(cè)值373· 0877(M.+23) ,1H NMR δ (CDCl3) :2. 13 (3H，s，IS-OCOCH3)，2. 37 (3H，s， Ar-OCOCH3), 3. 85 (1H, q, J 5. 52,4. 52 和 4. 96Hz, IS6 α-H)，3· 99 (1H，q, J 6. 0,3. 52 和 6.04Hz，IS6 3-H)，4. 10 (2H, t, J 3. 52 禾口 2. OHz, ISlH2 [ α + β ])，4. 59 (1H，d, J 4. 52Hz, ISH-3)，4· 90 (1H, t, J 5. 0 和 5. 04Hz, ISH-4)，5· 19 (1H, d, J 5. 52Hz, ISH-5)，5. 44 (1H, d, J 5. 52Hz, ISH-2)，7. 12 (1H, d, J 8. 04Hz, ArH-4)，7. 33 (1H, t, J 7. 52 和 7. 56Hz, ArH-2)， 7. 59 (1H, m, ArH-3), 8. 01 (1H, dd, J 6. 04Hz，ArH-1) · 13C 匪R ppm (CDCl3) :20. 43 (ArOCOCH3)， 20. 18 (IS-OCOCH3) ,69. 91 (ISC-2) , 72. 78 (ISC-6) , 73. 52 (ISC-5)，78345 (ISC-3)， 80. 32 (ISC-I)，122. 29 (ArC-5)，123. 39 (ArC-I)，125. 58 (ArC-3)，131. 36 (ArC-2)， 133. 81 (ArC-4)，154. 32 (ArC-6)，167. 15 (OCOAr)，168. 48 (ArOCOCH3)，171. 27 (OCOCH3)。2-阿司匹林-5-丙酸-異山梨醇酯5將2-阿司匹林-異山梨醇酯17(0. 3g，0.98mmol)溶于二氯甲烷(20ml)溶液中， 向其中加入丙酸酐(0. 14ml，1.07mmol)和三乙胺(0. 09ml，1. 07mmol)。將該混合物在室 溫下攪拌24小時(shí)，之后用HCl (30ml, 1M)、NaHCO3飽和水溶液(30ml)和水(2x30ml)洗滌。 將反應(yīng)物經(jīng)無水Na2SO4干燥并在真空中除去溶劑得到黃色油狀粗制品(0. 19g)。通過以 己烷和乙酸乙酯(5 2)作為洗脫劑進(jìn)行柱層析純化得到白色晶體產(chǎn)品(0.3g，84.3%) 熔點(diǎn) 54-56 °C。IRvmax(KBr) 2989. 0 禾Π 2933. 0 (C-H 伸縮)，1764. 0 禾Π 1734. 5 (C = 0)， 1606. 3 (C = C 伸縮)，1254.3 和 1193. 6 (C (0) 0R，芳族的)，1080. 6 (C-O-C) cnT1. HRMS 理論 值387· 1056(M++23)，實(shí)測(cè)值387· 1069(M++23). 1H NMR δ (CDCl3) 1. 19 (3Η, t, J 8. 04 禾口 7. 52Hz, CH3)，2. 37 (3H, s, OCOCH3)，2. 44 (2H, q, J 7. 52，8. 04 和 7. 52Hz, OCH2)，3. 86 (1H, q, J 5. 52，4. 52 和 5. 04Hz, IS6 α -H)，3. 98 (1Η, q, J 5. 52,4. 04 和 6. OHz, IS6 β -H)，4. 08 (2Η, m, ISlH2[a +β ]) ,4. 59(1H, d, J 4. 52Hz, ISH-3)，4. 91 (1Η，t, J 5.0 禾口 5. 04, ISH-4),
5.20 (1Η, q, J 5. 04，6. 0 禾口 5. 52Hz, ISH-5)，5. 43 (1H, d, J 3. OHz, ISH-2)，7. 12 (1H, dd, J 1.0 禾口 1. 0Hz, ArH-4) ,7. 33 (1H, t, J 1. 0，6. 56 和 8. 0Hz，ArH-2), 7. 59 (1Η, t, J 6. 0 禾口
6.52Hz, ArH-3), 8. 01 (1Η, dd, J 1· 48 和 2· 0Hz，ArH-1) · 13C 匪R ppm (CDCl3) 8. 62 (CH2CH3), 20. 49 (COCH3)，26. 84 (OCOCH2)，70. 08 (ISC-2) 72. 72 (ISC-6)，73. 32 (ISC-5)，78. 12 (ISC-3)， 80. 37 (ISC-I)，85. 45 (ISC-4)，122. 22 (ArC-5) , 123. 41 (ArC-I)，125. 64 (ArC-3)， 131. 41 (ArC-2)，133. 89 (ArC-4)，150. 24 (ArC-6)，163. 09 (OCOAr)，169. 28 (OCOCH3)， 173. 40 (OCOCH2)。2-阿司匹林酯-5-苯甲酸-異山梨醇6向2-阿司匹林-異山梨醇酯17(1.0g，3. 25mmol)的二氯甲烷(20ml)中加入 苯甲酸(0. 59g,4. 88mmol), DCC (1. 34g,6. 49mmol)和 DMAP (0. 38g，3. llmmol)。將該混合 物在室溫下攪拌三小時(shí)之后濾出沉淀并用HCl (30ml, 1M)、Na2HCO3飽和水溶液(30ml)和 水(3x30ml)洗滌濾液。將其經(jīng)無水Na2SO4干燥并在真空中除去溶劑得到無色油狀物， 將其在乙醇中重結(jié)晶得到白色晶體產(chǎn)品(1. 13g,84.3% )熔點(diǎn)80-82°C。IRvmax(KBr) 2991. 1 和 2932. 9 (C-H,伸縮)，1762. 9 和 1720. 6 (C = 0)，1275. 5 和 1199. 1 (C (O)OR 芳族 的)，1078. 4 (C-O-C) cnT1 · HRMS 理論值435. 1056 (M++23)，實(shí)測(cè)值435. 1043 (M++23) · 1H NMR δ (CDCl3) 2. 37 (3Η, s, OCOCH3), 4. 07 (1Η, m, ISl α -H) ,4. 11 (3Η, m, IS6H[ α +]禾口
37ISl β -H)，4· 65 (1Η, d, J 5. OHz, ISH-5)，5· 05 (1H, t, J 5. 5 和 5. OHz, ISH-3)，5· 56 (1H, m, ISH-4)，7. 13 (1H, d, J 8. 04Hz, Ar1H-S 和 Ar1H-S)，7. 27 (1H, t, J 8. 04 和 6. 52Hz, Ar2H-和 Ar2H-5), 7. 33 (1Η, d, J 7. 56Hz, Ar1HD，7. 49 (2H, t, J 7. 52 和 7. 56Hz, Ar2H-5), 8. 01 (1H, d, J 7. 56Hz, Ar1HD，8· 12 (2H, d, J 7. 52Hz, Ar2H-2 禾口 Ar2H_6)。13C 匪R ppm (CDCl3) 20. 44 (OCOCH3)，70. 42 (ISC-I)，72. 79 (ISC-6)，73. 97 (ISC-5) 78. 16ISC-2)，80. 67 (ISC-4)， 85. 67 (ISC-3)，123. 39 (Ar1C-S)，125. 58 (AR1C-I)，128. 00 (Ar1C-S)，129. 31 (Ar2C_3 禾口 Ar2C-5), 131. 39 (Ar1C^ 禾口 Ar2C-6), 132. 82 (Ar2C-2 禾口 Ar2C-I), 133. 79 (Ar2C-4), 134. 81 (Ar1CD，154. 32 (Ar1CD，167. 10 (OCOCH3)，168. 2 (OCOAr1 和 0￡0Ar2)。2-阿司匹林-5-煙酸-異山梨醇酯7將2-阿司匹林-異山梨醇酯17 (0. 3g，0. 98mmol)在二氯甲烷(20ml)中在 DCC (0. 2g，0. 98mmol)和DMAP (0. 12g，0. 98mmol)的存在下于0°C攪拌10分鐘。使反應(yīng)容器 返回到室溫，加入煙酸(0. 12g,0. 98mmol)并攪拌24小時(shí)。反應(yīng)混合物用HCl (20ml，1M)、 NaHCO3飽和水溶液(20ml)、水(3x20ml)洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥并在真空中除去溶劑得到 粗油狀產(chǎn)品(0.95g)。通過以二氯甲烷和乙酸乙酯(95 5)作為洗脫劑經(jīng)硅土凝膠柱層析 純化得到白色晶體化合物 7 (0. 12g，29. 7% )熔點(diǎn) 94-960C。IRvmax (KBr) =3327. 6 (N = C)， 2929. 6 (C-H伸縮)，1731. 7 和 1718. 7 (C = 0)，1654. 4 (C = C 伸縮)，180. 7 和 1195. 9 (C (0) OR 芳族的)，1090. 4 (C-O-C) cm-1. HRMS 理論值436. 1008 (M++23)，實(shí)測(cè)值436. 1011 (M++23)。 1H NMR δ (CDCl3) 2. 36 (3Η, s, OCOCH3) ,4. 11 (9H, m, ISl-Hja+β]禾口 IS6_H2[ α + β ])， 6. 64 (1Η, d, J 4. 52Hz, ISH-3)，5. 05 (1H, t, J 5. 04 和 5. 52Hz, ISH-4)，5. 46 (2H, dd, J 2. 0 和 2.52Hz，ISH-5 和 ISH-2)，7. 11 (1H，d, J 8. 52Hz, Ar1H^), 7. 32 (1H, q, J 6. 52，8. 04 和 8.52Hz，Ar1H-S) ,7. 43 (1H, q, J 6. 53，8. 04 和 8. 52Hz，Ar1H-S), 7. 59 (1H, t, J 6. 04 和 6. 52Hz,Ar1H-4) ,8. 00(lH，dd，J 1. 52 和 2. 0Hz，Ar2H_5)，8. 34 (lH，m，Ar2H_6)，8. 82(lH，dd，J 2. 0 和 1. 48Hz，Ar2H-4)，9. 28(lH，d，J 2. 0Hz，Ar2H_2)。13C 匪R ppm (CDCl3) 20. 52 (OCOCH3),
79.32 (ISC-I)，72. 75 (ISC-6)，74. 38 (ISOC(O)Ar)，74. 43 (ISC-5)，78. 27 (ISC-4)，
80.60 (ISC-2)，85. 60 (ISC-3)，122. 26 (Ar1C-I)，122. 88 (Ar1CD，123. 38 (Ar2C_4)， 125. 57 (Ar1C-B)，131. 35 (Ar2C-6)，133. 83 (Ar1C-Z)，136. 68 (Ar1C-S)，150. 55 (Ar2C-5)， 153. 30 (Ar2C-I)，164. 13 (Ar1C-S)，164. 13 (Ar2C-3)，170. 59 (ArCOOR)。2-阿司匹林-5-[異煙酸]-異山梨醇酯8在0°C下將2-阿司匹林-異山梨醇酯17(0. 2g，0.65mmol)溶于二氯甲烷(20ml) 中，向其中加入DCC(0. 13g，0. 65mmol)和DMAP (0. 08g，0. 65mmol)。10分鐘后使反應(yīng)容器返 回到室溫然后加入異煙酸(0. 08g，0. 65mmol)并攪拌24小時(shí)。反應(yīng)混合物用HCl (20ml, 1M)、 NaHCO3飽和水溶液(20ml)、水(3x20ml)洗滌，經(jīng)無水MgSO4干燥并在真空中除去溶劑得到 白色粉末化合物 8(0. 17g，63. 1%)熔點(diǎn) 86-88 °C。IRvmax (KBr) :3327. 8 (N = C)，2929. 3 (C-H 伸縮)，1751·8 和 1710. 7 (C = 0), 1628. 0 (C = C 伸縮)，1249. 0 和 1194. 1(C(0)0R 芳族 的)，1082. 8 (C-O-C) cnT1 · HRMS 理論值436. 1008 (M++23)，實(shí)測(cè)值436. 1004 (M++23) · 1H NMR δ (CDCl3) 2. 37 (3Η, s, OCOCH3)，4. 09 (5H, m, IS1-H2[ α +β ]禾口 IS6_H2[ α + β ])， 4. 65 (1Η, d, J 4. 52Hz, ISH-3)，5. 05 (1H, t, J 5. 52 和 5. 04Hz, ISH-4)，5. 46 (2H, dd, J 5. 52 和 5. 04Hz, ISH-5 禾口 ISH-2)，7. 12 (1H, d, J 7. OfflzjAr1H^)，7. 33 (1H, m, Ar1H-S)，7. 59 (2H, t, J 6. 04 和 6. 04Hz, Ar1H-S 和 Ar1HD，7. 90 (1H, d, J 5. 04Hz, Ar2H-6), 8. 01 (H, dd, J 2. 0
38和 1. 52Hz, Ar2H-2), 8. 84 (1Η, s, Ar2H_5)，8· 98 (1H, s, Ar2H-3)。2-阿司匹林-5-芐氧基苯甲酸-異山梨醇酯9向2-阿司匹林-異山梨醇酯17(0. 27g，0.87mmol)的二氯甲烷(20ml)中加入芐 氧基苯甲酸(0. 20g，0. 87mmol)、DCC(0. 18g，0. 87mmol)和 DMAP(0. 01g，0. 09mmol)。將反 應(yīng)容器在室溫下攪拌24小時(shí)之后過濾并用HCl (30ml,0. 1M)、Na2HCO3飽和水溶液(30ml) 和水(2x30ml)洗滌濾液。經(jīng)無水Na2SO4干燥后，在真空中除去二氯甲烷得到0. 7g的無 色油狀粗制品。通過以己烷和乙酸乙酯(3 1)作為洗脫劑經(jīng)硅土凝膠柱層析純化得 到0.198白色晶體化合物9(41.5%)熔點(diǎn) 76-78 °C。IRvmax (KBr) 1772. 7 和 1726. 2 (C =0)，1276. 6 (C (0) OR 芳族的)，1078. 1 (C-O-C) cnT1· HRMS 理論值541. 1475 (M++23)，實(shí) 測(cè)值541. 1460(M++23)。1H NMR δ (CDCl3) 2. 05 (2Η, s, ArOCH2Ar), 2. 36 (3H, s, OCOCH3),
3.92 (1H, q, J 5. 0,5. 04 和 5. 0Hz，IS6 α -H) , 4. 02 (3Η, m, IS1H[ α + β ])，4· 13 (1Η，q, J7. 04,7. 0 禾口 7.56Hz，IS6H-β )，4. 62 (1H，d, J 5.0Hz，ISH-3)，5. 02 (1H，t, J 5.04 和 5.0Hz，ISH-4) ,5. 19 (2H, s, ISH-5)，5. 39 (2H，m，ISH-5)，7. 03 (2H，m，2x Ar-H) 7. 11 (1H, d, J 7. 56Hz, Ar-H) 7. 33 (2H, m, Ar-H)，7. 41 (2H, t, J 6. 04 和 7. 04Hz, Ar-H)，7. 48 (3H, m, Ar-H) 7. 58(lH，m，Ar-H)，7. 92(lH，dd，J 1. 52 和 2. 0Hz，Ar_H)8. 01(lH，dd，J 1. 48 和 2. OHz, Ar-H) .13C NMRppm(CDCl3) 20. 49 (OCOCH3), 70. 12 (ISC-6)，70. 19 (ISC-2)，72. 59 (ISC-5)， 73. 84 (ISC-3)，78. 28 (ArOCH2)，80. 48 (ISC-I)，85. 59 (ISC-4) , 113. 18 (Ar2C_5)， 119. 29 (Ar2C-I). 120. 10(Ar2C-3)，122. SO(Ar1C-S)，123. 41 (Ar1C-I)，125. 64 (Ar1C-S)， 126. 78 (Ar3C-2 禾Π Ar3C-6)，127. 51 (Ar3C-4)，128. 08 (ArsC-3 禾Π Ar3C-6)，128. 13 (Ar1CI)， 131. 44(Ar2C-2)，131. 81 (Ar1CD 133. 44 (Ar2C_4)，136. 09 (Ar3C-I)，150. 21 (Ar1CD， 157. 95 (Ar2C-6)，163. 16 (ArOC(O) Me)，165. 20 (ArC(O) OR)，169. 28 (ArC(O) OR)。2-阿司匹林酯-5_(2-氨基苯甲酸)_異山梨醇酯10將2-阿司匹林-異山梨醇酯17(0. 69g，2. 2mmol)溶于DCM(20mls)中，向其中加 ADCC(0. 44g，2. 2mmol)和 DMAP (0. 05g，0. 22mmol)并將反應(yīng)容器在 0°C下攪拌 10 分鐘。返 回到室溫后，加入鄰氨基苯甲酸(0. 29g，2. 2mmol)攪拌3小時(shí)。反應(yīng)混合物用HCl (20ml， 1M)、NaHCO3飽和水溶液(20ml)、飽和鹽水溶液(20ml)和水(2x20ml)洗滌，經(jīng)無水Na2SO4 干燥并在真空中除去溶劑得到黃色油狀粗產(chǎn)品。通過以己烷和乙酸乙酯(4 1)作為洗 脫劑經(jīng)硅土凝膠柱層析得到黃色固體化合物10(0.39g，41.5% )。在需要試驗(yàn)之前將產(chǎn) 品貯存在 0-4°C。熔點(diǎn) 150-152°C。IRvmax(KBr) :3443. 4(N-H 伸縮)，2920. 5 (C-H 伸縮)， 1742. 7 (C = 0)，1548. 0 (N-H 彎曲)，1220. 9 和 1158. 6 (C(O) OR,芳族的)，1047. 4 (C-O-C) cnT1· 1H NMR δ (CDCl3) 2. 07 (3Η, s, OCOCH3)，4. 04 (2H, m, NH2)，3. 88 (1H, q, J 5. 52，4. 52 和 5. OHz，ISH-1)，4. 16 (2H, m, ISH-2 和 ISH-5)，4. 69 (2H, dd, J 4. 52 和 4. 52，ISH-I 和 ISH-3)，
4.95 (1H, t, J 5. 04 和 5.0Hz，ISH-4) ,6. 69 (1H, t, J 57. 52 和 7. 52Hz，Ar2H_5)，6. 91 (1H， t, J 8· 0 和 7· 04，Ar2H-3) ,7. 01 (2Η, d, J 8. 52, Ar1H-S 和 Ar1H-S) ,7. 31 (1H, m, Ar2H-4)， 7. 51 (1H, m, Ar1HD，7. 82 (1H, dd, J 2. 0 禾口 2. 0Hz,Ar2H-2)，7. 92 (1H, d, J 7. 04，Ar1HD · 13C NMR PPm(CDCl3) 20. 13 (ArOCOCH3) ,69. 82 (ISC-I) ,70. 02 (ISC-5) , 75. 01 (ISC-2)， 75. 03 (ISC-6) , 79. 29 (ISC-3) ,81. 86 (ISC-4)，115. 02 (Ar2C_5)，117. 49 (Ar2C-I)， 119. 32(Ar2C-3)，121. 63^05)，123. SQ(Ar1C-I)，125. 42 (Ar1C-S)，130. 23 (Ar1CI)， 130. 59 (Ar2C-2)，133. 27 (Ar1C-C，133. 36 (Ar2C-4)，147. 99 (Ar2C-6)，154. 32 (Ar1C-B)，167. 02 (OCOAr)，167. 06 (OCOAr)，168. 92 (OCOCH3)。2-阿司匹林-5-[2‘-甲氧基]-苯甲酸-異山梨醇酯11在0°C下將2-阿司匹林-異山梨醇酯17(0. 2g，0. 65mmol)溶于甲苯(15ml)中， 向其中加入DMAP(0. 08g，0. 65mmol)和DCC(0. 13g，0. 65mmol)。10分鐘之后使反應(yīng)容器 返回到室溫，加入2-茴香酸(2-甲氧苯甲酸，0. 10g，0.65mmol)并攪拌12小時(shí)。反應(yīng)混 合物用HCl (20ml，1M)、NaHCO3飽和水溶液(20ml)、飽和鹽水溶液(20ml)和水(3x20ml) 洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥并在真空中除去溶劑得到油狀粗產(chǎn)品。通過以己烷和乙酸乙酯 (3 1)作為洗脫劑經(jīng)硅土凝膠柱層析純化得到白色晶體化合物11(0. 23g，79.8%)熔點(diǎn) 132-134°C。IRvmax (KBr) -.2920. 5 (C-H 伸縮)，1764. 9 和 1720. 4 (C = 0)，1253. 2 (C (0) OR,芳 族的),1075. 2 (C-O-C) cm-1. HRMS 理論值465. 1162(Μ++23),實(shí)測(cè)值465. 1131 (M++23)，1H 匪R δ (CDCl3) 2. 89 (3Η, s, OCOCH3) 3. 95 (3H, m, ArOCH3,4. 06 (1H, m, IS6-Hα ) ,4. 14(3Η, m, ISl-H2[a + β ]和 IS6-H3 )，4· 64(1H，d, J 5. OHz, ISH-3)，5. 03 (1Η，t, J 5.04 和 5·52Ηζ， ISH-4)，5. 40 (1Η, t, J 5. 0 和 5. 52Hz, ISH-5)，5. 45 (1H, d, J 2. OHz, ISH-2)，7. 01 (2H, q, J 4. 52, 2. 52 和 6. OHz，Ar2H-3 和 Ar2H-5)，7. 11 (1H，d，J 8. 04Hz，Ar1HD ,7. 31 (1H,m, Ar1H-S)， 7. 50 (1H, m, Ar1HD，7. 58 (1H, m, Ar1H-S)，7. 88 (1H, dd, J 2. 04 和 1. 52Hz，Ar2H-4)，8. 01 (1H， dd, J 1. 52 禾口 1. 48Hz，Ar2H-6). 13C NMR ppm (CDCl3) 20. 42 (ArOCOCH3), 55. 52 (ArOCH3), 70. 41(ISC-I)，72. 66 (ISC-6)，73. 69 (ISOCOAr)，76.58 (ISC-5).78.25 (ISC-4)， 80. 56 (ISC-2) ,85. 64(ISC_3)，111. 74(Ar2C_3) 118. 83 (Ar2C-I)，122. 39 (Ar2C_5)， 122. 91 (Ar1C-S)，123. 38 (Ar1C-I)，125. 42 (Ar1C-S)，125. 56 (Ar1C-Z)，131. 38 (Ar2C-6)， 133. 45 (Ar1CD，133. 75 (Ar2C-4)，150. 24 (Ar1C^)，159. 09 (Ar2C-6)，164. 79 (ArCOOR)， 169. 13 (ArOC(O) CH3)。2-阿司匹林-5-[3‘-甲氧基]-苯甲酸-異山梨醇酯12在0°C下將2-阿司匹林-異山梨醇酯17(0. 2g，0.65mmol)溶于甲苯(15ml)中，向 其中加入DMAP(0. 08g，0. 65mmol)和DCC(0. 13g，0. 65mmol)。10分鐘之后使反應(yīng)容器返回 到室溫，加入3-茴香酸(3-甲氧苯甲酸)(0. IOg, 0. 65mmol并攪拌12小時(shí)。反應(yīng)混合物用 HCl (20ml，1M)、NaHCO3飽和水溶液(20ml)、飽和鹽水溶液(20ml)和水(3x20ml)洗滌，經(jīng)無 水Na2SO4干燥并在真空中除去溶劑得到油狀粗產(chǎn)品。通過以己烷和乙酸乙酯(3 1)作為 洗脫劑經(jīng)硅土凝膠柱層析純化得到白色晶體化合物12(0. 23g，79. 8% )熔點(diǎn)125_128°C。 IRvmax (KBr) 2980. 9 (C-H 伸縮)，1768. 3 禾口 1723. 8 (C = 0)，1298. 5 禾口 1253. 5 (C (0) OR,芳 族的)，1075. 9 (C-O-C) cm—1. HRMS 理論值465. 1162(M++23)，實(shí)測(cè)值465. 1168 (M++23)，1H NMR δ (CDCl3) 2. 36 (3Η, s, OCOCH3) 3. 87 (3H, s, ArOCH3) ,4. 05 (1H, d, J 5. OHz, IS6_Ha)，
4.09 (2H, t, J 3. 0 和 2. 52Hz, ISl-H2[ a + β ])，4· 14 (2Η, d, J 7. 52Hz, IS6_H3 )，4· 64 (1Η, d, J 5. 04Hz, ISH-3)，5. 03 (1Η, t, J 5. 04 和 5. 52Hz, ISH-4)，5. 43 (1Η, q, J 5. 0，5. 52 和
5.52Hz, ISH-5)，5. 47 (1H, s, ISH-2)，7. 13 (2H, q, J 4. 52，2. 52 和 6. 0Hz，Ar2H_3 和 Ar2H-5)， 7. 33 (2H, m, Ar1HJ 禾口 Ar1H-S) ,7. 58 (2H, m, Ai^H-4 禾口 Ar1H-S) ,7. 69 (1H, d, J 7. 52Hz, Ar2H-4), 8. 01 (1H, dd, J 1. 52 禾口 1. 52Hz, Ar2H-6). 13C 匪R ppm(CDCl3) :20· 41 (ArOCOCH3)， 54. 99 (ArOCH3)，70. 43 (ISC-I)，72. 74 (ISC-6)，74. 05 (ISOCOAr)，76. 58 (ISC-5)， 78. 17(ISC-4)，80. 49 (ISC-2)，85. 67 (ISC-3), 113.96 (Ar2C_2)，119. 21(Ar2C_4)， 121. 67 (Ar1C-S)，122. 34 (Ar2C-6)，123. 38 (Ar1C-I)，125. 56 (Ar1C-S)，129. 03 (Ar2C-5)，
40130. 39 (Ar1C-Z)，131. 36 (Ar2C-I)，133. 77 (Ar1C^)，150. 24 (Ar1C^)，159. 20 (Ar2C-3)， 163. H(ArCOOR)，169. Il(ArOCOCH3)。2-阿司匹林-5-[4-甲氧基]-苯甲酸-異山梨醇酯13在0°C下將2-阿司匹林-異山梨醇酯17(0. 2g，0. 65mmol)溶于甲苯(15ml)中， 向其中加入DMAP(0. 08g，0. 65mmol)和DCC(0. 13g，0. 65mmol)。10分鐘之后使反應(yīng)容器 返回到室溫，加入4-茴香酸(4-甲氧苯甲酸)，(0. IOg,0. 65mmol)并攪拌12小時(shí)。反應(yīng) 混合物用HCl (20ml, 1M)、NaHCO3飽和水溶液(20ml)、飽和鹽水溶液(20ml)和水(3x20ml) 洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥并在真空中除去溶劑得到油狀粗產(chǎn)品。通過以己烷和乙酸乙酯 (2 1)作為洗脫劑經(jīng)硅土凝膠柱層析純化得到白色晶體產(chǎn)品(0. 17g，58.9%)熔點(diǎn) 141-144 0C ο IRvmax(KBr) :2994· 1 和 2936. 7 (C-H 伸縮)，1764.和 724. 9 (C = ))，1605. 8 (C =C 伸縮)，1260.5(((0)( ，芳族的)，1078. 6 (C-O-C) cnT1. HRMS 理論值465. 1162(M++23)， 實(shí)測(cè)值465. 1157(Μ"+23). 1H NMR δ (CDCl3) 2. 32 (3Η, s, OCOCH3)，3. 84 (3H，s, ArOCH3, 3. 99 (1H, m, IS6-Hα )，4. 07 (6H，m，ISl-Hja+β]禾口 IS6-Hβ )，4. 59 (1H，d, J 4. 52Hz, ISH-3) ,4. 98 (1H, t, J 5.52 和 5.0Hz，ISH-4)，5. 38 (1H，t，J 5.0 和 5. 52Hz, ISH-5)， 5. 43 (1H, d, J 2. 0Hz, ISH—2)，6. 91 (2H，d, J 8. 52Hz, Ar2H-3 禾口 Ar2H_5)，7. 08 (1H，d, J 8. 0Hz, Ar1HD，7. 28 (1H, t, J 7. 56 禾口 9. 52Hz, Ar1HD，7. 54 (1H, t, J 8. 0 禾口 7. 52Hz, Ar1H-S), 7. 99 (3H, q, J9. 0,7. 04 和 8. OfflzjAr1H-LAr2H^ 和 Ar2H_6) · 13C 匪R ppm(CDCl3) 20. 48 (Ar0C0CH3)，59. 83 (ArOCH3) , 70. 41 (ISC-I)，72. 82 (ISC-6)，73. 58 (ISOCOAr)， 76. 58 (ISC-5). 78. 26 (ISC-4)，80. 47 (ISC-2)，85. 46 (ISC-3)，113. 33 (Ar2C-3 和 Ar2C_5)， 121. 46 (Ar1C-S)，122. 35 (Ar2C-I)，123. 36 (Ar1C-I)，125. 54 (Ar1C-S)，131. 35 (Ai^C-2)， 133. 73 (Ar2C-2 和 Ar2C-6)，133. 76 (Ar1CM)，150. 23 (Ar1CD，163. 12 (ArOCH3 和 Ar2C-4)， 165. 09 (ArCOOR)，169. 08 (ArCOOR)，170. 52 (ArOCOCH3)。2-阿司匹林-5-[4-甲基苯甲酸]-異山梨醇酯14在0°C下將2-阿司匹林-異山梨醇酯17(0. 2g,0. 65mmol)溶于甲苯中，向其中加 入三乙胺(0. 13mls，0. 98mmol)和4-甲苯酰氯(0. 93ml,0. 78mmol)。使反應(yīng)容器返回到 室溫并攪拌10小時(shí)，然后用HCl (30ml, 1M)、NaHCO3、水(3x30ml)和飽和NaCl溶液(30ml) 洗滌。將反應(yīng)物經(jīng)無水Na2SO4干燥并用乙酸乙酯作為輔助溶劑在真空中除去溶劑得到粗 制品。通過以己烷和乙酸乙酯(9 1)作為洗脫劑進(jìn)行柱層析純化得到白色晶體化合物 14(0. Ig, 35. 99% )熔點(diǎn) 102-104°C。IRvmax(KBr) :2982. 7 和 2923. 6 (C_H伸縮)，1763. 9 和 1717. 8 (C = 0)，1608. 5 (C = C)，1275. 4 和 1202. 0 (C (0) OR)，1100. 3 (C-O-C)) cm-1. HRMS 理 論值449. 1212 (M++23)，實(shí)測(cè)值449. 1229 (M++23) ,1H NMR δ (CDCl3) 2. 19 (3Η, s, OCOCH3)， 2. 43 (3H, s, Ar-CH3),4. 05 (2H, d, J 5. OHz, ISlHja+β]禾口 IS6H2[ α + β ])，4. 09 (2H，t, J 4. 04 和 3. 52Hz，ISH-6)，4. 14(1H，t，J 7. 04 和 7. 52Hz，ISH-5)，4. 63 (1H，d, J 5.0Hz， ISH-3) ,5. 03 (1H, t, J 4.8 和 5.0，ISH-4) ,5. 44 (2H, m, ISH-2)，7. 11 (1H, d, J 8.04Hz， Ar-H), 7. 27 (2H, d, J 8. 56Hz, Ar-H) ,7. 33 (1H, t, J 7. 52 禾口 7. 52Hz, Ar-H), 7. 55 (1H, t, J 1. 52 禾口 6.04Hz，Ar-H), 8. 00 (3H, m, Ar-H). 13C NMR ppm(CDCl3) : 13. 71 (ArCH3)， 20. 54 (OCOCH3)，70. 49 (ISC-I) , 72. 75 (ISC-6) , 73. 78 (ISC-5) , 78. 13 (ISC-4)， 80. 72 (ISC-2)，85. 62 (ISC-3)，122. 25 (Ar1C-I)，123. 38 (Ar1CD，125. 64 (Ar1CD， 126. 26 (Ar1CI 禾口 Ar2C-4)，128. 74 (Ar2C-2 禾口 Ar2C-5)，129. 36 (Ar2C-6), 131. 42 (Ar2C-3)，133. 87 (Ar1C-S)，143. 62 (Ar2C-I)，15022 (Ar1C-S)，163. 15 (ArOCOCH3)，165. 48 (IS-OCOAr)， 169.27 (ArCOO)。2-阿司匹林-5-(4-硝基苯甲酸)_異山梨醇酯15(請(qǐng)注意化合物16不包括在本說明書內(nèi))在室溫下將2-阿司匹林-異山梨醇酯17(0. 2g，0.65mmol)溶于DCM(IOmls)中。 向反應(yīng)容器中加入4-硝基苯甲酰氯(0. 15g,0. 78mmol)和三乙胺(1. 12ml，0. 78mmol)。將 反應(yīng)物在室溫下攪拌48小時(shí)，之后用HCl (20ml, 1M)、NaHCO3飽和水溶液(25ml)、飽和鹽 水溶液(20ml)和水(2x20ml)洗滌，經(jīng)無水Na2SO4干燥并在真空中除去溶劑得到黃色油狀 粗產(chǎn)品。通過以己烷和乙酸乙酯(3 2)作為洗脫劑經(jīng)硅土凝膠柱層析純化得到無色油 狀物化合物15，將其在乙醇中重結(jié)晶得到白色晶體產(chǎn)品(0. 15g，50.5%).熔點(diǎn)66-68°C。 IRvmax(KBr) 1772. 7 和 1726. 2 (C = 0), 1276. 6 (C(O) OR,芳族的)，1078. 1 (C-O-C) cm-1. HRMS 理論值480. 0907 (M++23)，實(shí)測(cè)值480. 0922 (M++23)，1H 匪R δ (CDCl3) 2. 34 (3Η, s, OCOCH3)，4. 07 (4H, m, ISH-3)，4· 64 (1H, d, J 4. 52Hz, ISH-I 和 ISH-4)，5· 04 (1H, t, J 5. 04 和 5. 0Hz, ISH-5) ,5. 45 (2H, m, ISH-2 禾口 ISH-6)，7. 10 (1H, dd, J 1. 0 和 1. OHz, Ar1HD， 7. 31 (1H, m, Ar1H-S)，7. 53 (1H, m, Ar1HD，7. 99 (1H, dd, J 2. 04 和 1. 52Hz，Ar1H-S)，8. 25 (4H, dd, J 2. 0 禾口 2. 04Hz，Ar2H-2 和 Ar2H_6)，8. 31 (2H, dd, J 2. 0 禾口 2. 04Hz，Ar2H-3 和 Ar2H_5). 13C 匪R ppm (CDCl3) 20. 41 (ArOCOCH3)，70. 26 (ISC-I)，72. 76 (ISC-5)，74. 88 (ISC-2 和 ISC-6)，
80.52 (ISC-4)，85. 68 (ISC-3)，123. 16 (Ar1C-S)，123. 36 (Ar1C-I)，125. 58 (Ar2C_3 禾口 Ar2C-5)，130. 39 (Ar1CI)，131. 32 (Ar2C-2 和 Ar2C_6)，133. 87 (Ar1C-^，150. 32 (Ar2C-4)， 163. 07 (OCOAr)，163. 53 (OCOAr)，169. 09 (OCOCH3)。2-阿司匹林-5-0H-異山梨醇酯17將攪拌過的乙?；畻铛Ｂ鹊亩燃淄?160ml)溶液(m. w. 198. 60g/mol, 10. 9g =54. 9mmol)用三乙胺(m. w. 101. 19g/mol, d = 0. 726g/ml，9. Iml = 65. 4mmol)處理。將 混合物冷卻至0°C并加入5-IS麗(m. w. 191. 12g/mol, IOg = 52. 3mmol)。將燒瓶在室溫下攪 拌過夜并避光保存?；旌衔镉肏Cl (2M) ,5% NaHCO3和水洗滌，經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮至油狀 物。將該產(chǎn)物以熱乙醇重結(jié)晶(結(jié)晶可能很緩慢)得到IOg的黃色晶體。將該結(jié)晶溶于甲 醇/乙酸乙酯(1 1)中，加入Pd/C并與氫氣球連通。攪拌過夜并通過TLC監(jiān)測(cè)(己烷 /乙酸乙酯2 1)以確定反應(yīng)完成。將混合物過濾并除去溶劑。加入一些二氯甲烷然后 濃縮，加入乙醚，使其靜置10-15分鐘并濃縮至白色晶體(7. 4g)。1H NMR δ (CDCU 400MHz 2. 37 (3H, s, OCOCH3)，3. 6 (1H, m, ISH-6)，3. 9 (1H, m ISH-6' ) ,4. 07 (2H, 2xdd, ISH-I/H-I，)， 4. 3 (1H, q, ISH-3)，4. 58 (1H, d, ISH-4)，4. 69 (1H, m, ISH-2)，5. 45 (1H, d, ISH-5)，7. 11 (1H， d, Ar-H)，7. 28 (1H, t, Ar-H)，7. 57 (1H, t, Ar-H)，8. 00 (1H, dd, Ar-H). -C NMR ppm(CDClJ 400MHz :20. 48 (OCOCH3) ,71. 56 (ISC-I), 72. 91 (ISC-6) ,73. 11 (ISC-5), 78. 44 (ISC-2)，
81.56 (ISC-4)，85. 09 (ISC-3)，122. 18 (Ar2C_2/C_6)，123. 42，125. 66 (Ar2 C_4)，131. 37 (Ar1 C-4)，133. 95，150. 23 (Ar2OCO)，163. 03 (OCOArCH2ONO2)，169. 27 (ArC(O) OR)。2-阿司匹林-5- (3- (2-溴-乙酰氧基))-苯甲酸-異山梨醇酯18向2-阿司匹林-5-水楊酸-異山梨醇酯(0. 15g,0. 35mmol)和DBU(0. 052ml， 0. 35mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中加入溴乙酰氯(0. 03ml, 0. 35mmol)并將反應(yīng)混 合物攪拌過夜。反應(yīng)物用水(2x5ml)洗滌并在真空中除去溶劑得到無色油狀物化合物 18(0. 13g)。IRvmax (fi lm) cm-1 1765. 6 和 1724. 3 (C = 0)，1608. 1 (C = 0)，1288. 4 和 1251. 4 (C (O)OR)，1196. 9 和 1135.6 (C-O-C), 732. 6 (C-Br). HRMS 理論值531. 1013 (M+)； 實(shí)測(cè)值570· 4453(Μ++23). δ Η(400ΜΗζ ；CDCl3) 2. 37 (3Η, s, OCOCH3)，4. 07 (4H，m, ISl, 6-H)，4. 48 (2H, s, CH2)，-4. 63 (1H, m, IS4-H)，4. 98 (1H, m, IS3-H)，5. 40 (2H, m, IS2, 5-H)， 7. ll(lH，d，J8. 0和 7. 5Hz,Ar-H) ,7. 60(2H,m,2x ArH), 8. 11 (1Η，d，Jl. 5Hz，Ar_H)，8· 12 (1H, d, J 1. 5Hz, Ar-H) ； δ 13C(100MHz ；CDCl3) 20. 86 (OCOCH3), 40. 99 (CH2), 70. 47 (IS-C), 73. 24(IS6-C) ,74. 69 (IS4-C)，78. 40 (IS3-C)，81. 09 (IS5-C)，86. 07(IS2_C)，123. 61， 123. 83，126.01,126.65 和 131. 78，132. 21, 134. 26，134. 42，150. 23，150.69，163.5， 166.11，169. 55。2-阿司匹林-5-環(huán)丙酸-異山梨醇酯19將環(huán)丙燒羰基氯(m.w.104. 54g/mol, d = 1. 152g/ml,250y 1 = 2mmol)溶于 DCM(IOml)中。加入三乙胺(500μ1 = 6mmol)并將混合物冷卻至0°C。加入2-阿司匹 林-異山梨醇酯，17 (506. 2mg = 1. 6mmol)并將反應(yīng)物在室溫下攪拌過夜。用2M HCl (IOml)、 5% NaHCO3(IOml)和水(IOml)洗滌。經(jīng)硫酸鈉干燥并濃縮。通過(己烷/乙酸乙酯2 1) 柱層析 Rf = 0. 3 純化得到 396mg 的油狀物。1H 匪R δ (CDCl2) 400MHz 0. 9-1. 18 (2xdd 和 t，4H，2xC$)，2.32(3H，s, OCOCH3), 3. 78 (m, 1H, IsH-1)，3· 9 (m，1H，IsH-6) ,4. 06 (2H, d, ISH-I，and ISH-6' )，4. 5 (1H，d，ISH—3)，4. 83 (1H，t，ISH—4)，5. 12 (1H, q, IsH-2), 5. 38 (1H, s, H-5)，7. 06(1H, d, Ar-H)，7. 26 (1H, t, Ar-H)，7.52 (1H, t, Ar-H)，7. 95(1H, d, Ar-H)。 -C NMRppm (CDCL) 400MHz :9 和 10 (2χ￡Η2), 12. 15 (CH)，20. 43 (0C0￡H3)，69. 96 (ISC-I)， 72. 71(ISC-6),73. 40 (ISC-5),78. 14(ISC-2),80. 39 (ISC-4),85. 35 (ISC-3)， 122. 20 (ArC-6)，123. 37 (ArC-2)，125. 59 (ArC-4) , 131. 36 (ArC-3)，133. 86 (ArC-5)， 150. 19 (ArC-I)，163. 05 (Ar2OCO)，169. 18 (CH3OCOAr)，173. 78 (0C0 環(huán)丙烷)。2-阿司匹林-5- (ρ-氰基苯甲酸)-異山梨醇酯20使2-阿司匹林-異山梨醇酯17(200mg，0. 6mmol)和4_氰基苯甲酰氯(120mg， 0. 72mmol)按照GP2—起反應(yīng)在以EtOac Hex 1 4急驟層析之后得到213mg(81 % ) 的黃色油。1H NMR(CDCl3,400MHz) δ 8. 2 (2Η, d, J = 8. 5Hz)，8. 0(1H，dd, J = 8Hz, 1. 5Hz)， 7. 8 (2H, d, J = 10Hz)，7. 6 (1H, dt, J = 8Hz, 1. 5Hz)，7. 35 (1H, dt, J = 6. 5Hz, 1Hz)，7. 1 (1H, d, J = 8. 5Hz)，5. 45 (2H, m)，5. 05 (1H, t, J = 5Hz)，4. 65 (1H, d, J = 5Hz)，4. 1 (4H, m)， 2. 4(3H，s)。13C NMR(CDCl3 400MHz) δ 169. 3，163. 8，163. 1，150. 3，133. 9，132. 8，131. 9， 131. 4，129. 8，125. 7，123. 4，122. 1，117. 4，116. 3,85. 7,80. 7,80. 5,77. 9,76. 874. 8,72. 7， 70. 3，20. 5. HRMS (EI)C23H19O8N, [M+H]+ 理論值 438. 4068，實(shí)測(cè)值 438. 4183. Anal. C23H19O8N 理 論值 C 63. 16，H 4. 38，N :3· 20，實(shí)測(cè)值 C :63· 46，H :4· 51，N :2· 97。2-阿司匹林-5-(對(duì)-苯基苯酸酯)-異山梨醇酯21使2-阿司匹林-異山梨醇酯17(200mg，0. 6mmol)和4-苯基苯甲酰氯(156mg， 0. 72mmol) 一起反應(yīng)，在以EtOac Hex 1 4急驟層析之后得到185mg(65% )的無色油。 1H NMR (CDCl3,400MHz) δ 8. 2 (2Η, d, J = 8. 5Hz)，8. 0(1H，dd, J = 8Hz, 1. 5Hz)，7. 7 (2H，d, J = 8. 5Hz)，7. 65 (2H, d, J = 7Hz)，7. 6 (1H, dt, J = 8Hz, 1. 5Hz)，7. 5 (2H, t, J = 7. 5Hz)， 7. 45 (1H, t, J = 8Hz)，7. 35 (1H, dt, J = 6. 5Hz, 1Hz)，7. 1 (1H, d, J = 8. 5Hz)，5. 45 (2H, m) ,5. 05 (1H, t, J = 5Hz) ,4. 65 (1H, d, J = 5Hz)，4. 1 (4H, m)，2.4(3H，s). 13C NMR(CDCl3
43400MHz) δ 169. 3，165. 3，163. 1,150. 3，145. 6，139. 5，133. 9，131. 4，129. 8，128. 5，127. 8， 127. 7，126. 8，126. 7125. 7，123. 4，122. 1,85. 7,80. 7,78. 12,77. 2,76. 8 73. 9,72. 7,70. 5， 20. 5. HRMS (EI) C28H24O8, [Μ+Η]+ 理論值 489. 4933，實(shí)測(cè)值 489. 5021. Anal. C28H24O8 理論值 C 68. 85，H 4. 95，實(shí)測(cè)值 C 68. 88，H 5. 08。
2-阿司匹林-5- (6-氯煙酸)-異山梨醇酯22使2-阿司匹林-異山梨醇酯17 (250mg, 0. 8mmol)和6_氯煙酰氯(230mg，0. 9mmol) 按照GP2 —起反應(yīng)，在以EtOac Hex 3 7急驟層析之后得到256mg(70% )的白色固體。 1H NMR (CDCl3,400MHz) δ 9. 3(1H s) 8. 9 (1Η，s)，8. 3 (2Η，d，J = 8. 5Hz)，8. 0 (1Η，dd，J = 8Hz， 1. 5Hz)，7. 6 (1H, dt, J = 8Hz, 1. 5Hz)，7. 45 (1H, t, J = 1Hz) 7. 35 (1H, dt, J = 6. 5Hz, 1Hz)，
7.1 (1H, d, J = 8. 5Hz)，5. 45 (2H, m)，5. 05 (1H, t, J = 5Hz)，4. 65 (1H, d, J = 5Hz)，4. 1 (4H, m)，2· 4(3H，s). 13C NMR(CDCl3 400MHz) δ 169. 3，164. 2，163. 1，153. 3，150. 5，150. 2，136. 8， 133. 9, 131. 4, 125. 7, 123. 4，123. 0，122. 2,85. 7,80. 6,77. 9,76. 8,74. 4, 72. 8,70. 4， 20. 5. HRMS (EI)C21H18ClNO8, [M+H]+ 理論值 448. 8304，實(shí)測(cè)值 448. 8295. Anal. C21H18ClNO8 理 論值 C 56. 32，H 4. 05，N :3· 13 實(shí)測(cè)值 C :56· 20，H :4· 21，N :3· 02。2-阿司匹林-5-(-2-氯-6-甲基-吡啶_4_酸)_異山梨醇酯23使2-阿司匹林-異山梨醇酯17(250mg，0. 8mmol)和2_氯_6_甲基吡啶_4_氨基 甲酰氯(247mg，0.9mmol)按照GP2 —起反應(yīng)，在以EtOac Hex 2 6急驟層析之后得到 196mg(53% )的白色泡沫。1HNMR(CDCl3,400ΜΗζ) δ 8. 0 (1Η, dd, J = 8Hz, 1. 5Hz), 7. 74(1H, s)，7. 68 (1H, s) 7. 6 (1H, dt, J = 8Hz, 1. 5Hz)，7. 45 (1H, t, J = 1Hz) 7. 35 (1H, dt, J = 6. 5Hz, 1Hz)，7. 1 (1H, d, J = 8. 5Hz)，5. 45 (2H, m)，5. 05 (1H, t, J = 5Hz)，4. 65 (1H, d, J = 5Hz)， 4. 1 (4H，m)，2. 65 (3H，s)，2. 4(3H，s). 13C NMR(CDCl3 400MHz) δ 169. 3，163. 1,151. 1,150. 2, 139. 3，134. 0,131. 4，125. 7，123. 4，122. 1，120. 8，120. 4,85. 7,80. 4,77. 8,77. 6,75. 1， 72. 8，70. 2，23. 8，20. 5. HRMS (EI)C22H20ClNO8, [M+H]+ 理論值 462. 8570，實(shí)測(cè)值 462. 8601. Anal. C22H20ClNO8 理論值 C 57. 21，H 4. 36，N 3. 03 實(shí)測(cè)值 C 56. 91，H 4. 38，N 2. 94。2-阿司匹林-5-(-3，5-乙氧苯甲酸)_異山梨醇酯24使2-阿司匹林-異山梨醇酯17(200mg，0. 65mmol)和3，5_乙氧苯甲酰氯(157mg， 0. 72mmol)按照GP2 —起反應(yīng)，在以EtOac Hex 1 4急驟層析之后得到296mg(74% ) 的粘性黃色油。1H NMR(CDCl3,400MHz) δ 8. 1 (1Η, d, J = 8Hz, Asp Η5)，7·6(1Η，dt, J = 8Hz, 1. 5Hz, Asp H4)，7. 35 (1H, t, J = IHz, Asp H3)，7. 2 (2H, d, 1Hz，苯 H2+6)，7. 1 (1H, d,
8.5Hz, Asp H2) ,6. 7(1H, t, J = 2. 25Hz，苯 H4)，5. 45 (2H, m, IS H5+H2)，5. 05 (1H, t, J = 5Hz, IS H4)，4. 65(lH，d，J = 5. 5Hz, IS H3)，4. 05 (8H，m，ISl-H2 [ α + β ]，IS6_H2 [ α + β ]，乙 氧基-CH2)，2.4 (3Η，s，Acet-CH3), 1.45 (6H，t，J = 3. 5Hz, Eto-CH3). 13C NMR(CDCl3 400MHz) δ 169. 8，165. 8，163. 6，160. 0，150. 7，134. 3，131. 9，131. 1，126. 1，123. 8，122. 7，107. 9， 106. 6,86. 1,81. 1,78. 6,76. 7,74. 5,73. 2,71. 0,63. 8,61. 2,20. 9，14. 8. HRMS(EI)C26H28O10, [Μ+Η] + 理論值 500. 4945，實(shí)測(cè)值 500. 4932. Anal. C26H28O10 理論值 C :62. 39，H :5. 64，實(shí)測(cè)值 C 62. 45，H 5. 792-阿司匹林-5-(-3-甲基-異噁唑-4-酸)_異山梨醇酯25使2-阿司匹林-異山梨醇酯17(200mg，0. 65mmol)和3_甲基-異噁唑_4_羧 酸(127mg，0. 72mmol)按照GPl —起反應(yīng)，在以EtOac Hex 1 3急驟層析之后得到
44228mg(83% )的白色泡沫。1H NMR(CDCl3,400ΜΗζ) δ 8. 55 (1Η，s，isox)，8. 0 (1Η，d，J = 8Hz， Asp H5)，7. 65 (1H, dt, J = 8Hz, 1. 5Hz, Asp H4)，7. 3 (1H, t, J = IHz, AspH3)，7. 1 (1H, d, 8. 5Hz, Asp H2)，5. 4(2H，m，IS H5+H2)，5. 0 (1H，t, J = 5Hz, IS H4) ,4. 6(1H, d, J = 5. 5Hz, IS H3)，4. 1(4H, m, ISl-H2[a + β ], IS6_H2[ a + β ])，3. 8 (3H，s, iSox-CH3) ,2. 35 (3H, s, Asp-acet-CH3). 13C NMR (CDCl3 400MHz) δ 169. 2，163. 0，160. 4，150. 2，149. 6，133. 9，131. 4， 125. 6，123. 4，122. 1,85. 6,80. 5,73. 9,72. 7,70. 2,33. 5,24. 5,20. 5，12. 3。2-阿司匹林-5- (-4-甲基-1，2，3-噻二唑_5_酸)-異山梨醇酯26使2-阿司匹林-異山梨醇酯17(200mg，0. 65mmol)和4-甲基_1，2，3_噻二 唑-5-羧酸一起反應(yīng)，在以EtOac Hex 1 3急驟層析之后得到228mg(83% )的淺桃紅 泡沫。1H NMR(CDCl3,400MHz) δ 8. 1 (1Η, d, J = 8Hz, Asp H5)，7· 7(1H，dt, J = 8Hz, 1. 5Hz, Asp H4)，7. 35(lH，t，J = lHz，Asp H3)，7. 15 (1H，d，8. 5Hz，Asp H2)，5. 5 (2H，m，IS H5+H2)， 5. 05 (1H, t, J = 5Hz, IS H4), 4. 65 (1H, d, J = 5. 5Hz, IS H3), 4. 1 (4H, m, ISl_H2[a + β ]， IS6-H2[a + β ])，3· 05(3H，s，thiad-CH3)，2· 4(3H，s，Asp-acet-CH3). 13C NMR(CDCl3 400MHz) δ 169. 7，163. 5，162. 9，159. 1，150. 7，134. 4，131. 8，126. 1，123. 8，122. 5,86. 2,80. 9,78. 2， 75. 9,73. 2,70. 8,21. 0，14. 1。2-阿司匹林-5-(N_Boc-異 nipecotate)-異山梨醇酯 27使2-阿司匹林-異山梨醇酯17(200mg，0. 65mmol)和4N_Boc-異哌啶酸氯(162mg， 0. 72mmol) 一起反應(yīng)，在以MeOH DCM 3 97急驟層析之后得到166mg(49% )的灰白色 油。1H 匪R(CDCl3,400MHz) δ 8. 1(1H，d, J = 8Hz, Asp H5)，7. 7(1H，dt, J = 8Hz, 1. 5Hz, AspH4)，7. 35 (1H, t, J = IHz, Asp H3)，7. 15 (1H, d, 8. 5Hz, Asp H2)，5. 5 (1H, d, J = 1. 5Hz IS H2)，5. 5，(1H, dd, J = 5Hz, lHz)4. 95 (1H, t, J = 5Hz, IS H4)，4. 65 (1H, d, J = 5. 5Hz, IS H3)，4. 1 (8H, m, ISl-H2 [α +β ], IS6_H2 [ α + β ]，4 nip H)，2· 6 (1Η, m, nip-methine-H)， 2. 4 (3H, s, Asp-Acet-CH3), 1. 7 (4Η, m, 4 nip H)，1· 5，(9H，s，t_Bu) · 13C NMR(CDCl3 400MHz) δ 173. 9，169. 8，163. 5，154. 7，150. 7，134. 4，131. 9，126. 1，123. 9，122. 6,85. 9,80. 7,79. 6， 78. 5,77. 2,76. 5,73. 9,73. 0,70. 7,42. 9,40. 9,28. 4,28. 1,27. 9,20. 9. HRMS(EI)C26H33O10N, [M+H] +理論值 520. 4616，實(shí)測(cè)值 520. 4631. Anal. C26H33OltlN理論值 C :60· 11，H :6· 40，N :2· 69 實(shí)測(cè)值 C :60. 15，H 6. 79，N :2· 762阿司匹林-5_(間-乙酰胺基苯甲酸)_異山梨醇酯28使2-阿司匹林-異山梨醇酯17(200mg，0. 65mmol)和m_乙酰胺基苯甲酸(128mg， 0. 72mmol) 一起反應(yīng)，在以MeOH DCM 3 97急驟層析之后得到202mg(66% )的白色固 體。1H NMR(CDCl3,400MHz) δ 8. 0 (3Η, m, Asp H5, Ar H2+4)，7· 85 (1Η, d, J = 8Hz, Ar H6)， 7. 6 (1H, dt, J = 8Hz, 1. 5Hz, Asp H4)，7. 45 (1H, t, J = 7. 5Hz, ArH5)，7. 35 (1H, t, J = IHz, Asp H3), 7. 15 (1H, d，8. 5Hz, Asp H2)，5. 5 (2H，m, IS H5+H2)，5. 05 (1H, t, J = 5Hz, IS H4) ,4. 65 (1H, d, J = 5. 5Hz, IS H3)，4. 1 (4H, m, ISl-H2[a + β ], IS6_H2[ a + β ])，2. 4(3H， s, Asp-Acet-CH3)，2. 2 (3H, Ar-acet-CH3). 13C NMR(CDCl3 400MHz) δ 169. 3，168. 0，165. 0， 163. 1, 150. 2，137. 7，133. 9，131. 4，129. 7，128. 9，125. 6，125. 0，124. 4，123. 4，122. 2， 120. 2,85. 7，m80. 7,78. 1,74. 12,72. 8,70. 4,60. 0,24. 2,20. 5，13. 8. HRMS (EI)C24H23O9N, [M+H]+理論值 470. 4392，實(shí)測(cè)值 470. 4403. Anal. C24H23O9N 理論值 C :61. 41，H :4. 93，N :2. 98 實(shí)測(cè)值 C :61. 52，H :5. 09，N :2. 86。
2-阿司匹林_5-(間-芐基氧苯甲酸)_異山梨醇酯29使2-阿司匹林-異山梨醇酯17(250mg，0. 8mmol)和m_芐基氧苯甲酸(182mg， 0. 88mmol)按照GPl —起反應(yīng)，在以EtOac Hex 1 2急驟層析之后得到346mg (85 % ) 的白色固體。1H NMR(CDCl3,400MHz) δ 8. 0(1H, d, J = 8Hz, Asp H5)，7. 7 (3H，m, Asp H4, Ar2H)，7. 35 (2H, m, Asp H3, ArH)，7. 1 (2H, m, Asp H2, ArH)，7. 25 (5H, m, BnH)，5. 5 (3H, m, IS H2, Bn-CH2) ,5. 05 (1H, t, J = 5Hz, IS H4) ,4. 65 (1H, d, J = 5. 5Hz, IS H3)，4.1(4H， m, IS1-H2[ α + β ], IS6_H2 [ α + β ])，2· 4 (3H，s, Asp-Acet-CH3). 13C NMR(CDCl3 400MHz) δ 169. 76，165. 2，163. 6，150. 7，135. 8，134. 4，133. 7，132. 9，131. 9，130. 8，130. 3，130. 2，
129.2，126. 1，123. 9，122. 7,97. 7,86. 1,81. 1,78. 5,74. 7,73. 2,70. 8,43. 9,20. 9. HRMS(EI) C29H26O9, [Μ+Η]+ 理論值 518. 4344，實(shí)測(cè)值 518. 4357. Anal. C29H26O9 理論值 C :67· 19，H :5· 05 實(shí)測(cè)值 C :67. 28，H 5. 09。2-阿司匹林-5-(對(duì)-芐基氧苯甲酸酯)_異山梨醇酯30使2-阿司匹林-異山梨醇酯(250mg，0. 8mmol)和m_芐基氧苯甲酸(182mg，
0.88mmol)按照GPl —起反應(yīng)，在以EtOac Hex 1 2急驟層析之后得到346mg(85% ) 的白色固體。1H NMR(CDCl3,400MHz) δ 8. 0(1H, d, J = 8Hz, Asp H5)，7· 7(1H，dt, J = 8Hz,
1.5Hz, AspH4), 7. 45(m，4H，ArH), 7. 35 (1H, t, J = IHz, Asp H3)，7. 25 (5H, m, BnH) 7. 1 (1H, d,8. 5Hz, Asp H2)，，5. 5(3H，m，IS H2，Bn-CH2)，5. 05 (1H，t，J = 5Hz, IS H4)，4. 65 (1H，d，J =5. 5Hz，IS H3)，4. 1 (4H, m, ISl-H2 [α +β ], IS6_H2 [α+β]), 2. 4 (3Η, s, Asp-Acet-CH3) · 13C NMR (CDCl3 400ΜΗζ) δ 169. 76，165. 2，163. 6，150. 7，136. 9，135. 2，133. 0，132. 2，131. 9，
130.8，130. 3，130. 2，129. 2，126. 1,123. 9，122. 7,97. 7,86. 1,81. 1,78. 5,74. 7,73. 2,70. 8， 43. 9,20. 9. HRMS (EI)C29H26O9, [Μ+Η]+ 理論值 518. 4344，實(shí)測(cè)值 518. 4338. Anal. C29H26O9 理論 值 C 67. 19，H 5. 05 實(shí)測(cè)值 C :67· 35，H :5· 18。2-阿司匹林-5-(2-硝氧基-甲基)苯甲酸-異山梨醇酯31將苯酞(m.w. 134. 13g/mol，5. 03g = 37mmol)和二氯三苯基膦(m. w. 333. 19g/mol, 12. 3g = 38mmol)于180°C加熱4小時(shí)，邊加熱邊攪拌[3]。在4小時(shí)的過程中觀察到顏色由 綠色變?yōu)樽厣LC (己烷/乙酸乙酯2 1)顯示3個(gè)斑點(diǎn)，NMR確定頂部斑點(diǎn)(Rf 0. 77) 為2-氯甲基苯甲酰氯，第二斑點(diǎn)(Rf 0. 57)為苯酞，底部斑點(diǎn)(Rf 0. 14)為三苯基膦。大 量的苯酞未反應(yīng)。將2-氯甲基苯甲酰氯(圖12) (m. w. 189. 04g/mol,600 μ 1)溶于二氯甲 烷(IOml)中。加入三乙胺(m. wlOl. 19g/mol, d = 0. 726g/ml,600y 1 = 4. 3mmol)并將 混合物冷卻至O0C0 C加入化合物17 (m. w. 308. 14g/mol，0. 5298g = 1. 7mmol)并將混合物 在避光保存的同時(shí)于室溫?cái)嚢柽^夜。混合物(綠色)用HCl (2M，10ml) >5% NaHCO3(IOml) 和蒸餾水(IOml)洗滌并經(jīng)硫酸鈉干燥。濃縮混合物產(chǎn)生769. 5mg棕色/綠色油。將此 油以己烷/乙酸乙酯(2 1)色譜分離結(jié)果得到419. 4mg的棕色固體(Rf 0. 38) 0 1H 匪R δ (CDCL) 400MHz :2· 38 (3Η, s, OCOCH3), 4. 03 (4Η, m, ISH-I, ISH-I', ISH—6 禾Π ISH—6，)， 4. 66 (1Η, d, ISH-3) ,5. 04 (2Η, m, CH2Cl) ,5. 10 (1Η, ss, ISH-4)，5. 42 (2Η，m, ISH-2/H-5)， 7. 12 (1H, d, Ar-H)，7. 28 (1H, m, Ar-H)，7. 42 (1H, m, Ar-H)，7. 6 (3H, m, Ar-H)，8. 01 (2H, dd, Ar-H) · 13c 腿 ppm(隱)4畫2 20. 51 (OCOCH3)，43. 95 (CH2Cl)，70. 15 (ISC-I)，72. 78 (ISC-6)， 74. 33 (ISC-5) , 78. 11 (ISC-2) , 80. 52 (ISC-4) , 85. 58 (ISC-3) , 122. 21 (Ar2C_2/ C-6)，123. 42，125. 65 (Ar2C_4)，128. 03 (Ar1CD，128. 07 (Ar1CD，130. 60 (Ar1C-S)，
46130. 73 (ArlC-I)，131. 43 (Ar1CD，133. 45 (Ar2C-5)，133. 92，138. 54，150. 25 (Ar2OCO)， 163. 12 (OCOArCH2ONO2)，165. 47 (ArOCOCH3)，169. 29 (ArC (0) OR)。將 400mg 溶于 CH3CN/ THF(6ml,4/2v/v)中并用 AgNO3 (m. w. 169. 87g/mol,0. 30g = 1. 7mmol)處理，回流 4 小時(shí) 之后在室溫下攪拌過夜，與此同時(shí)避光保存。將混合物過濾并濃縮。將此產(chǎn)物在乙酸乙 酯(IOml)和水(2ml)中重建。有機(jī)相用水(3x2ml)、鹽水(2ml)洗滌并經(jīng)硫酸鈉干燥。濃 縮，產(chǎn)生油狀物，以己烷/乙酸乙酯(2 1)色譜分離結(jié)果得到95mg的黃蠟樣物質(zhì)。1H 匪R δ (CDCL) 400MHz :2· 38 (3Η, s, OCOCH3), 4. 01 (4Η, m, ISH-I, ISH-I', ISH—6 禾口 ISH—6，)， 4. 65 (1H, d, ISH-3) ,5. 02 (1H, t, ISH—4)，5. 41 (2H，m, CH2), 5. 86 (2Η, ss, ISH-2/H—5)， 7. 11 (1Η, d, Ar-H), 7. 28 (1Η, t, Ar-H), 7. 49 (2Η, q, Ar-H), 7. 61 (2Η, q, Ar-H), 8. 01 (1Η, d, Ar-H)，8. 10 (1Η, d, Ar-H). nC NMR ppm(CDCL) 400ΜΗζ :20· 51 (OCOCH3)，70. 37 (CH2ONO2)，
72.78 (ISC-I) , 73. 46 (ISC-6) , 74. 30 (ISC-5) , 78. 01 (ISC-2) , 80. 61 (ISC-4)， 85. 64(ISC-3)，122. 19 (Ar2C_2/C_6)，123. 40，125. 66 (Ar2C_4)，128. 76 (Ar1CI)， 129. 77 (Ar1CD，129. 85 (Ar1C-S)，130. 30 (ArlC-I)，131. 41 (Ar1CD，132. 44 (Ar2C-5)， 133. 25，133. 93，150. 23 (Ar2OCO)，163. 12 (OCOArCH2ONO2)，164. 71 (ArOCOCH3), 169. 28 (ArC(O) OR)。3-阿司匹林-5-(3-硝氧基-甲基)苯甲酸-異山梨醇酯32將3-氯甲基苯甲酰氯(m. w 189. 04g/mol，d = 1. 33g/ml，500 μ 1 = 3. 5mmol)溶于 二氯甲烷(IOml)中。加入三乙胺(m. w. 101. 19g/mol，d = 0. 726g/ml，600y 1 = 4. 3mmol) 并將混合物冷卻至0°C。加入化合物17 (m. w. 308. 14g/mol,0. 511g = 1. 6mmol)，并將混 合物于室溫?cái)嚢柽^夜，與此同時(shí)避光保存?；旌衔镉肏Cl (2M，10ml)、5% NaHCO3(IOml) 和蒸餾水(IOml)洗滌并經(jīng)硫酸鈉干燥。濃縮混合物產(chǎn)生1. 18g油。將此油以己烷/乙 酸乙酯(3 1)色譜分離結(jié)果得到903. 4mg的油(Rf 0.2)。1H匪R δ (CDCU 400MHz 2. 37 (3H, s, OCOCH3), 4. 06 (4H, m, ISH-I, ISH-I', ISH—6 禾Π ISH—6，) ,4. 65 (3H, ds, ISH-3 和 CH2Cl)，5. 03(1H, t, ISH-4)，5. 43(2H, dd, ISH-2，ISH-5)，7. 10(1H, d, Ar-H)，7. 32(1H, t, Ar-H)，7. 47 (1H, t, Ar-H)，7. 57 (2H, m, Ar-H)，8. 00 (2H, m, Ar-H)，8. 10 (1H, s, Ar-H). -C NMR ppm(CDCU) 400MHz 20. 49 (OCOgi3) ,45. 01 (CH2Cl) ,70. 41 (ISC-I)，72. 76 (ISC—6)， 74. 20 (ISC-5) , 78. 04 (ISC-2) , 80. 64 (ISC-4) , 85. 63 (ISC-3) , 122. 18 (Ar2C_2/ C-6)，123. 39，125. 67 (Ar2C_4) , 128. 61 (Ar1CD，129. 28 (Ar1CD，129. 36 (Ar1C-S)， 129. 52 (ArlC-I)，131. 41 (Ar1CD，133. 02 (Ar2C-5)，133. 93，137. 57，150. 20 (Ar2OCO)， 163. 16 (OCOArCH2ONO2)，164. 94 (ArOCOCH3)，169. 37 (ArC(O) OR)。將此油溶于 CH3CN/ THF(6ml,4/2v/v)中并用 AgN03(m. w. 169. 87g/mol，0. 67g = 3. 9mmol)處理，回流 4 小 時(shí)之后在室溫下攪拌過夜，與此同時(shí)避光保存。將混合物過濾并濃縮。將此產(chǎn)物在乙酸 乙酯(IOml)和水(2ml)中重建。有機(jī)相用水(3x2ml)、鹽水(2ml)洗滌并經(jīng)硫酸鈉干 燥。濃縮，產(chǎn)生油狀物，以己烷/乙酸乙酯(1 1)色譜分離結(jié)果得到184. 3mg的黃蠟樣 物質(zhì)。1H 匪R δ (CDCl2) 400MHz 2. 38 (3H, s, OCOCH3), 4. 09 (4H, m, ISH-I, IsH-I', IsH-6 和 ISH-6，)，4· 65(1H，d, ISH-3) ,5. 05 (1H, t, ISH—4)，5. 5 (4H，dd, ISH-2, ISH-5 和 CH2)， 7. 12 (1H, d, Ar-H)，7. 29 (1H, t,Ar-H)，7. 50 (3H, m, Ar-H)，7. 65 (1H, d, Ar-H)，8. 01 (2H, broad s, Ar-H). -C NMR ppm (CDCU 400ΜΗζ :20· 51 (OCOCH3)，70. 37 (CH2ONO2)，72. 78 (ISC-I)，
73.46 (ISC-6) , 74. 30 (ISC-5) , 78. 01 (ISC-2) , 80. 61 (ISC-4) , 85. 64 (ISC-3)，122. 19 (Ar2C-2/C-6)，123. 40，125. 66 (Ar2C_4)，128. 76 (Ar1CD，129. 77 (Ar1CD，
129.85 (Ar1C-S)，130. 30 (ArlC-I)，131. 41 (Ar1CD，132. 44 (Ar2C-5)，133. 25，133. 93， 150. 23 (Ar2OCO)，163. 12 (OCOArCH2ONO2)，164. 71 (ArOCOCH3)，169. 28 (ArC(O) OR)。2-阿司匹林-5-(4-硝氧基-甲基)苯甲酸-異山梨醇酯33將4-氯甲基苯甲酰氯(m. w 189. 04g/mol，650 μ 1)溶于 dichloromethane (IOml) 中。加入三乙胺(m.w. 101. 19g/mol, d = 0. 726g/ml,600y 1 = 4. 3mmol)并將混合物 冷卻至0°C。加入化合物17 (m. w. 308. 14g/mol，0. 5320g = 1. 7mmol)，并將混合物于 室溫?cái)嚢柽^夜，與此同時(shí)避光保存?；旌衔镉肏Cl (2M，10ml)、5% NaHCO3(IOml)和蒸 餾水(IOml)洗滌并經(jīng)硫酸鈉干燥。將混合物濃縮并以己烷/乙酸乙酯(2 1)色譜 分離結(jié)果得到 IOOmg 的白色固體原藥。1HNMR δ (CDCL) 400MHz 2. 35 (3Η, s, OCOCH3)，
4.04 (4H, m, ISH—1，IsH—1，，IsH-6 禾口 ISH—6，)，4. 6 (4H，m, ISH—3 禾口 Qi2Cl, imp),
5.04 (1H, d, ISH-4) ,5. 42 (2H, t, ISH-2，ISH-5)，7. 09 (1H，d, Ar-H) ,7. 26 (1H, t，Ar-H)， 7. 47 (2H, m, Ar-H) ,7. 51 (1H, q, Ar-H)，8. 00 (1H, d, Ar-H)，8. 06 (2H, m, Ar-H). -C NMR ppm(CDCL) 400MHz 20. 51 (OCOCH3) ,44. 87 (CH2Cl) , 70. 47 (ISC-I) , 72. 76 (ISC-6)， 74. 11 (ISC-5)，78. 05 (ISC-2)，80. 67 (ISC-4)，85. 64 (ISC-3) , 122. 22 (Ar2C_2/ C-6)，123. 40，125. 65 (Ar2C_4)，128. 53 (Ar1CD，128. 96 (Ar1CD，129. 77 (Ar1C-S)，
130.16 (ArlC-I)，130. 56 (Ar1CD，131. 43 (Ar2C-5)，139. 91, 142. 23，150. 23 (Ar2OCO)， 163. 14(OCOArCH2ONO2)，164. 91 (ArOCOCH3)，169. 31 (ArC(O)OR)。將此固體原藥溶于 CH3CN/ THF(6ml,4/2v/v)中并用 AgNO3(m. w. 169. 87g/mol，75mg = 0. 4mmol)處理，回流 4 小時(shí)之 后在室溫下攪拌過夜，與此同時(shí)避光保存。將混合物過濾并濃縮。將此產(chǎn)物在乙酸乙酯 (IOml)和水(2ml)中重建。有機(jī)相用水(3x2ml)、鹽水(2ml)洗滌并經(jīng)硫酸鈉干燥。濃 縮，產(chǎn)生油狀物，以己烷/乙酸乙酯(2 1)色譜分離結(jié)果得到28. 3mg的灰白色固體。1H 匪R δ (CDCL) 400MHz :2· 35 (3Η, s, OCOCH3), 4. 04 (4Η, m, ISH-I, ISH-I', ISH-6 禾口 ISH—6，)， 4. 62 (1H，d, ISH-3)，5. 01 (1H, t, ISH-4)，5. 41 (2H, m, CH2)，5. 48 (2H, s, ISH-2/H-5)， 7. 09 (1H, d, Ar-H)，7. 31 (1H, t, Ar-H)，7. 48 (2H, d, Ar-H)，7. 55 (1H, t, Ar-H)，8. 00 (1H, d, Ar-H)，8. 10 (2H, d, Ar-H)。-C 匪R ppm(CDCU) 400MHz 20. 51 (OCOCH3)，70. 44 (CH2ONO2)， 72. 76 (ISC-I) , 73. 18 (ISC-6) , 74. 23 (ISC-5) , 78. 02 (ISC-2) , 80. 65 (ISC-4)， 85. 65 (ISC-3) , 122. 19 (Ar2C_2/C_6) , 123. 41, 125. 66 (Ar2C_4) , 128. 17 (Ar1CI)， 129. 85 (Ar1CD，129. 92 (Ar1C-S)，131. 41 (ArlC-I)，133. 93 (Ar1CD，137. 19 (Ar2C-5)， 150. 24 (Ar2OCO)，163. 14 (OCOArCH2ONO2)，164. 75 (ArOCOCH3)，169. 29 (ArC(O) OR)。2-阿司匹林-5-(硝氧基)_醋酸-異山梨醇酯34向2-阿司匹林-異山梨醇酯17(0.49g，1.6mmOl)的二氯甲烷(IOml)溶液中加 Λ DCC(0. 33g, 1. 6mmol), DMAP(0. 02g,0. 16mmol)和硝氧基乙酸(0. 19g，1. 6mmol)。將混 合物在室溫下攪拌過夜之后過濾并用HCl(2xl0ml，0. 1M)、NaHCO3飽和水溶液(2x10ml) 和水(2x10ml)洗滌濾液。經(jīng)無水Na2SO4干燥后，在真空中除去二氯甲烷得到油狀粗制 品。通過以己烷和乙酸乙酯(5 2)作為洗脫劑經(jīng)硅土凝膠柱層析純化得到無色油狀化 合物 23(0. 38g)。IRvmax (film) cnT1 :1759. 0 禾Π 1727. 5 (C = 0)，1643. 6 (NO2)，1287. 7 (NO2)， 1256. 3 (C (0) 0R,芳族的)，1193. 5 (C-O-C) · HRMS 理論值 411. 0802 (M+)，實(shí)測(cè)值(M+) · δ H(400MHz ；CDCL3) 2. 36 (3H, s, OCOCH3), 2. 68 (1H, d, J 7. 52Hz, IS—H)，3. 61 (1H，q, J6.04，3. 52 和 6Hz, IS-H)，3. 92 (1H，q, J 6. 04，3. 52 和 6Hz, IS-H)，4. 12 (2H，m，IS-H2),
4.33(lH，m，IS-H2). 4. 58 (1H, d, J4Hz, IS-H) ,4. 67 (1H, t, J 5 和 5. 04Hz, IS-H) ,5. 44 (2Η, s, OCH2O)，7. 11 (1Η, d, J 8. 04Hz,Ar-H)，7. 33 (1H, t, J 8 和 7. 52Hz,Ar-H)，7. 59 (1H, t, 7. 06 和 8. 26Hz, Ar-H), 8. 01 (1Η, d, J 6. 52Hz, Ar-H). δ 13C(100MHz ；CDCL3) :20· 91 (OCOCH3)，(CH2)， 72. 36 (IS-C) ,73. 41 (IS-C) ,73. 69 (IS-C) ,78. 96 (IS-C) ,82. 04(IS_C)，85· 64 (IS-C)，
122.77 (ArC-I)，123. 89，126. 07，131. 81 和 134. 31 (芳族次甲基)，150. 74 (CO)， 163. 51 (ArOC (O)Me)，169. 59 (ArC (O) OR)。2-阿司匹林-5-單硝酸-異山梨醇酯ISMNA向 IS-5-MN(5g，26. 65mmol)的甲苯(100ml)溶液中加入三乙胺(5. 52ml, 3. 96mmol)和乙?；畻铛Ｂ?6. 31g，31. 74mmol)。使反應(yīng)物返回到室溫并攪拌6小時(shí)， 之后用水(2x50ml)、HCl (lM，2x50ml)、NaHCO3 飽和水溶液(2x50ml)和鹽水(IOOml)洗滌。 有機(jī)相經(jīng)Na2SO4干燥并在真空中除去溶劑得到油狀產(chǎn)品。將此產(chǎn)品從乙醇中結(jié)晶得到
5.42g 白色晶體產(chǎn)品。(58. 05% )熔點(diǎn) 82-840C ο IRvmax(KBr) 1757. 6 和 1733. 4 (C = 0)， 1651. 8 (NO2)，1261. 4 (C(O) OR,芳族的)，915. 5 (ONO2) cnT1. HRMS 理論值376. 0645 (M++23)， 實(shí)測(cè)值376. 0640(M++23). 1H NMR δ (CDCl3) :2· 37 (3Η，s，OCOCH3)，3· 93 (1Η，dd，J 6.0，11. 5 和 6·0Ηζ，IS6a-H),4. 09 (3Η, m, ISlH [α β]和 IS6H[3])，4. 58 (1H, d, J 4. 5Hz, IS3-H)， 5. 03 (1H, t, J 5. 0 和 5. 5Hz, IS4-H)，5. 38 (1H, m, IS5-H)，5. 45 (1H, d, J 3. OHz, IS2-H)，
7.12 (1H, d, J 8. 0Hz, Ar-H)，7. 33 (1H, t, J 7. 5 和 8. OHz, Ar-H)，7. 60，(1H, t, J 7. 5 和
8.0Hz, Ar-H), 8. 01 (1H, d, J 7. 5Hz, Ar-H). 13C 匪R ppm(CDCl3) 20. 40 (OCOCH3)，68. 88 和 72. 84 (ISC-1 禾口 ISC-6)，77. 50 (ISC-5)，80. 83 (ISC-4) ,81. 08 (ISC-2)，122. 19 (ArC-I)，
123.41，125. 61，131. 37，133. 92 (芳族次甲 S ), 150. 24 (ArC-2), 163. 09 (ArOCO (Me)), 169. 17 (ArC(O)OR)。實(shí)驗(yàn)方法使用血漿/酶溶液進(jìn)行水解研究通過用含磷酸鹽緩沖劑ρΗ 7. 4的血漿稀釋制備合并的血漿/血清溶液(4ml)(例 如對(duì)于10%溶液，將0. 4ml的血漿/血清加入到3. 6ml的磷酸鹽緩沖劑ρΗ 7. 4中)。在血 漿/血清樣品以37 士 0. 5°C平衡之后加入100μ 1試驗(yàn)化合物在乙腈中的原液(Ixl(T4M)并 在指定的時(shí)間間隔移出250 μ 1等分試樣。將樣品轉(zhuǎn)入裝有500 μ 1的2% w/vZnS04. 7H20 的溶液(水乙腈，1 1) 1.5ml Eppendorf管中。將試管渦動(dòng)2分鐘，然后在室溫下以 10，OOOrpm離心3分鐘。吸出上清液并通過HPLC進(jìn)行分析。參考當(dāng)天在相同的濃度范圍和在 相同的實(shí)驗(yàn)條件下作的標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定試驗(yàn)化合物和代謝物的濃度。為了模擬藥物腸吸收之 后通過期間的條件將所選擇的化合物在源自人肝(HLM)和腸上皮細(xì)胞(HIM)的微粒體的存 在下在磷酸鹽緩沖劑中于37°C溫育。還以RPHPLC通過測(cè)量介質(zhì)中藥物和代謝物的濃度的 時(shí)間函數(shù)測(cè)定這些酯在這些條件下的代謝走向。參與的酶的同一性通過在血漿(BuChE)的 情況下使用純化的酶和通過在對(duì)羧酸酯酶的BuChE和BNPP的酯酶特異性抑制劑-isoOMPA 的存在下重復(fù)水解實(shí)驗(yàn)證實(shí)。采用Ellman測(cè)定法測(cè)定血漿和微粒體的樣品的BuChE活性 (Ellman 等，1964)。HPLC 操作使用由Empower軟件控制的Waters 600泵和控制器、Waters 717自動(dòng)取樣器和 Waters 2996光二極管矩陣檢測(cè)器構(gòu)成的系統(tǒng)進(jìn)行高壓液相色譜。使用Hichrom Nucleosil
49C18柱(4. 0x250mm)。使用之前將移動(dòng)相過濾并在整個(gè)檢測(cè)期間用氦噴射。最終所用的梯 度法如下表1 用于水解檢測(cè)的梯度法 針對(duì)線性、精確度和對(duì)于LOQ和LOD代謝物驗(yàn)證該方法。研究出一種對(duì)阿司匹林和水楊酸良好分離的方法是一項(xiàng)漫長(zhǎng)的工作，因?yàn)樽畛踹x 擇spherisorb ODS C18柱以及緩沖劑pH 3. 19產(chǎn)生拖尾和不良分離(選擇pH 3. 19的緩 沖劑是因?yàn)樗咏谒鼈兊腜Ka-阿司匹林是3. 5而水楊酸是2. 97[2])。該問題最后通過使 用hichromnucleosil柱和pH 2. 5緩沖劑來解決。由于阿司匹林是一種pKa為3. 5的弱酸， 將緩沖劑PH降低至其pKa下則因?yàn)榛衔镒兊酶杷軠p少滯留。Tnucleosil柱得到 優(yōu)良的峰形和兩種化合物的拆分。最初使用一水合物鹽，其在18分鐘產(chǎn)生大的緩沖劑峰。 使用二水合物鹽消除了該峰。盡管在接近該工作的尾端時(shí)一些大的緩沖劑峰又開始出現(xiàn)。還有測(cè)定血小板凝集抑制、TXB2血小板GP2B3A表達(dá)、MDA的方法以及證明這些主 要化合物具有阿司匹林樣活性的相應(yīng)的數(shù)據(jù)。全血凝集研究將500 μ 1等分試樣的血液與500 μ 1的生理鹽水混合并在Chrono-Log全血凝集 測(cè)定儀型號(hào)591/592的溫育孔中于37°C溫育10分鐘。然后將樣品轉(zhuǎn)入到檢測(cè)孔中，建立基 線并加入適宜體積的試劑。用記錄在圖表記錄儀上的阻抗輸出監(jiān)測(cè)6分鐘內(nèi)的凝集。檢測(cè) 抑制劑時(shí)，在加入刺激劑之前(邊加邊攪拌10分鐘)將全血用在DMSO中的適宜濃度的抑制 劑于37°C預(yù)溫育指定的時(shí)間長(zhǎng)度。采用了三種不同的聚集試劑，AA(0. 5mM),ADP(IOyM)和 膠原蛋白(5yg/ml)。在觀察到在抑制劑的存在下而沒有凝集反應(yīng)的情況下采用沒有抑制 劑存在進(jìn)行的對(duì)照實(shí)驗(yàn)。高濃度的DMS0(0.25%以上)能誘導(dǎo)血小板胞質(zhì)的離子化鈣的濃 度依賴性變化。在各實(shí)驗(yàn)之前采用PRP進(jìn)行控制獲得正常的聚集反應(yīng)。還將樣品用10 μ 1 DMSO于37°C溫育10分鐘以確保它對(duì)凝集反應(yīng)沒有抑制作用。檢測(cè)ISAS的兩種代謝物水 楊酸和異山梨醇以確定它們是否對(duì)血小板具有抑制作用。在該模型中ISAS表現(xiàn)出在對(duì)所 有的凝集刺激的血小板凝集的抑制中比阿司匹林或ISDA明顯的更大的效力。富含血小板的血漿血小板凝集從研究之前至少14天沒有服用任何已知影響血小板功能的藥物的健康志愿者 身上收集血液。如前所述由血液制備富含血小板的血漿(PRP)和洗滌過的血小板懸浮液 (2. 5xl08 血小板 /ml)。通過如前所述的光集合度測(cè)定測(cè)量血小板凝集。簡(jiǎn)而言之，將PRP和洗滌過的血鈣的生物發(fā)光-凝集測(cè)定儀(Chronolog Corp, Havertown, PA, USA)、和(BIO/DATA公司)中并在加入凝集試劑之前于37°C溫育10分鐘， 邊加邊以900r. p. m攪拌。凝集由添加激動(dòng)劑啟動(dòng)，并通過Aggro-Link軟件監(jiān)測(cè)至少6分 鐘。對(duì)于使用抑制劑的實(shí)驗(yàn)，凝集在用這些化合物預(yù)溫育10分鐘之后啟動(dòng)。為研究ADP的凝集效力，作出濃度-反應(yīng)(0.3-10UM)曲線。還用不同濃度的膠原 (3-5yg/ml)誘導(dǎo)血小板凝集。激動(dòng)劑的次最大(submaximal)濃度，即產(chǎn)生最大凝集的約 95%的濃度用來研究抑制劑的凝集作用。結(jié)果以最大光透射的變化表示，100%表示僅含血 小板介質(zhì)的光透射。TXB2合成的抑制阿司匹林通過減弱環(huán)加氧酶介導(dǎo)的PGH2合成來抑制血小板凝集，其在細(xì)胞中通 過血栓素合酶轉(zhuǎn)化為強(qiáng)效的凝集劑TXA2。TXA2非常容易消失并且不適于直接測(cè)量但其代謝 物TXB2通常被認(rèn)為提供有用的母體指數(shù)。組織的體內(nèi)或體外阿匹林治療反映在TXB2的抑 制上。為了將本發(fā)明的化合物與阿司匹林在這方面比較讓未處理的全血在阿司匹林或試驗(yàn) 化合物的存在下在1小時(shí)過程內(nèi)于37°C凝結(jié)。然后將樣品離心。收集血清并用得自Cayman Chemicals的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)試劑盒進(jìn)行TXB2測(cè)量。實(shí)驗(yàn)自產(chǎn)生TXB2合成完 全抑制的值開始以遞減濃度的阿司匹林進(jìn)行。在這些檢測(cè)中ISAS明顯比阿司匹林更有效， 這反映在低的IC5tl上。流細(xì)胞計(jì)數(shù)法為了分析個(gè)體的血小板表面上的表達(dá)和使由樣品制備操作所引起的血小板活化 最小化，不采用攪拌或渦流步驟。通過流細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)量在存在和不存在抑制劑下血小板 表面上的活化GPIIb/IIIa和P-選擇蛋白的豐度。血小板樣品首先用激動(dòng)劑膠原蛋白或 ADP活化。當(dāng)血小板凝聚達(dá)到50%最大光透射時(shí)通過用生理鹽水10倍稀釋來終止反應(yīng)。 靜止的血小板用作對(duì)照。在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)中，在加入激動(dòng)劑之前將血小板用抑制劑預(yù)溫育 IOmin0然后在飽和濃度(lOyg/ml)的P-選擇蛋白(CD62P-APC)的存在下將血小板樣品 在黑暗中不攪拌于室溫下溫育5分鐘。用與上述相同濃度下的PAC-I單克隆抗體測(cè)量活化 的GPIIb/IIIa血小板受體。PAC-I特異性識(shí)別在血小板上或血小板附近高親和性活化血小 板的GPIIb/IIIa復(fù)合物的表位5。溫育之后，將樣品在FACS Flow流體中稀釋并在5min內(nèi) 使用BD FACSArray (BDBiosciences, Oxford,UK)分析。流細(xì)胞計(jì)數(shù)在之前描述的單染血小 板樣品上進(jìn)行3。安裝儀器測(cè)量尺寸(前向散射)、粒度(側(cè)向散射)和細(xì)胞熒光。描繪前 向散射和側(cè)向散射的二維分析門控以便包括單個(gè)血小板并排除血小板聚集和微粒。通過分 析個(gè)體的血小板的熒光測(cè)量抗體的結(jié)合。在校正細(xì)胞自身熒光之后測(cè)定平均熒光強(qiáng)度。對(duì) 于各樣品，采用對(duì)數(shù)尺度(logarithmic scale)進(jìn)行熒光分析。得到10，000個(gè)人的熒光柱 形圖。采用Cytometer RXP軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析并以任意單位的對(duì)照熒光的百分比表示。用于水解和阿司匹林釋放測(cè)量的生物樣品的制備通過靜脈刺入Li-肝素Sarstedt Monovette試管(9ml)內(nèi)收集人血樣。通過以 10，OOOrpm離心血液5分鐘獲得血清樣品并以等分試樣冷凍直至需要檢測(cè)。將合并的人肝 微粒體(HLM)用磷酸鹽緩沖劑pH7. 4(0. 1M)稀釋至5ml得到2mg/ml的原液。將等份試樣 冷凍直至需要檢測(cè)。將合并的人腸微粒體(HIM)用磷酸鹽緩沖劑pH 7.4(0. 1M)稀釋至5ml 得到80μ g/ml的原液。將等份試樣冷凍直至需要檢測(cè)。
51
膽堿酯酶活性通過Ellman方法(Ellman等，1964)用分光光度計(jì)(405nm)于37°C測(cè)定HLM和 HIM中的丁酰膽堿酯酶(BChE)活性。使用丁酰膽堿酶碘化物(BTCI) (0. 5mM)作為底物。反 應(yīng)在最終體積為250 μ 1的96孔平皿中進(jìn)行。開始時(shí)將磷酸鹽緩沖劑ρΗ 8. 0 (0. 1Μ)和微 粒體混合并溫育30分鐘。加入DTNB (0. 3mM)和BTCI并測(cè)量反應(yīng)。還采用對(duì)微粒體進(jìn)行超 聲破裂(4x5sec)并在間隔之間置于冰上1分鐘進(jìn)行檢測(cè)。這樣確保微粒體對(duì)試劑的滲透 開放[5]。根據(jù)等式1計(jì)算其活性
酶活性(μπιοΙ/L/min)=樣品-空白等
10.6 (絕對(duì)系數(shù))表2顯示了帶編號(hào)的化合物和以初始酯摩爾濃度的百分比表示的阿司匹林的量， 其中初始酯濃度是在將候選物酯加入到緩沖的人血漿之后于37°C ρΗ 7. 4 (磷酸鹽緩沖劑) 下在峰值測(cè)量的阿司匹林產(chǎn)生。表2 在試驗(yàn)動(dòng)物血漿中的檢測(cè)結(jié)果用豚鼠、倉鼠、兔和猴血漿研究2-阿司匹林酯-5-水楊酸-異山梨醇酯2(0. ImM) 的定性水解篩選。該檢測(cè)的目的是確定生物檢測(cè)和臨床前開發(fā)的合適種類。該結(jié)果還可預(yù) 見證實(shí)己經(jīng)鑒別的人酶的作用，因?yàn)檫@些不同地分布在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中。表3 用不同的種類進(jìn)行2-阿司匹林酯-5-水楊酸-異山梨醇酯的水解 一旦梯度法被成功地發(fā)展在50%兔血漿中進(jìn)行2的水解，因?yàn)橥檬且环N用于血小 板凝集研究的有效模型。Ellman檢測(cè)以1. 1 μ mol/L/min顯示了 BChE活性。結(jié)果表明倉鼠 和猴將成為臨床前檢測(cè)的合適試驗(yàn)對(duì)象。由于源自這些種類的血漿具有與人相似的BuChE 水平，因而酶在人代謝中的作用也得到支持。在腸或肝微粒體的存在下2-阿司匹林酯-5-水楊酸-異山梨醇酯、ISAS (2)的水 解結(jié)果在人血漿中的水解研究表明ISAS(2)是一種成功的阿司匹林前藥。該工作旨在將 分析擴(kuò)大至包括肝和腸微粒體的制備以便評(píng)價(jià)在主要在胃上皮細(xì)胞和隨后在肝中吸收相 期間在其它組織中將發(fā)生多少阿司匹林釋放。當(dāng)在人肝微粒體和人腸微粒體的存在下對(duì)藥 物進(jìn)行溫育時(shí)分別產(chǎn)生9 μ M和56 μ M的阿司匹林(圖13)和(圖14)。這就提出了問題這 是否應(yīng)歸于BChE或其它酶的存在，因?yàn)楸M管人血液只含丁酰膽堿酯酶但肝和腸上皮細(xì)胞 也含羧酸酯酶(CE)-主要是肝內(nèi)的CE-I和腸內(nèi)的CE-2。因此在加入前藥之前將微粒體制 劑用異-OMPA —種確定的BChE抑制劑預(yù)溫育以便提供充足的時(shí)間抑制可能已經(jīng)存在于微 粒體制劑中的任何BChE。然后如前所述進(jìn)行水解分析以觀察對(duì)阿司匹林產(chǎn)生什么作用(如 果有的話)。使用特異性BChE抑制劑沒有削弱阿司匹林的產(chǎn)生表明涉及一些其它的酶。對(duì) 兩種微粒體制劑進(jìn)行Ellman檢測(cè)以確定BChE以什么水平存在(如果有的話)。僅發(fā)現(xiàn)有 極小的量(表3. 1)，不可能是高水平阿司匹林產(chǎn)生的結(jié)果。表4 對(duì)于HLM和HIM的BChE活性結(jié)果 空白雌性血漿=14. 98μ mol/L/min。血漿含大約5mg/L BChE[5]，因此這是
560. 0125 μ g/ml BChE 的等同物。采用兔肝羧酸酯酶，測(cè)量藥物的水解，產(chǎn)生5. 99 μ M阿司匹林(圖18)-相似于HLM 的水平。在加入藥物之前將BNPP —種已知的羧酸酯酶抑制劑用HIM和HLM溫育10分鐘以 便破壞羧酸酯酶活性。觀察到阿司匹林產(chǎn)生明顯下降，在60分鐘之后藥物還沒有消失?？?以得出結(jié)論ISAS是CE-I和CE-2以及BuChE的底物。這些酶屬于相同的族但在底物特異 性方面有顯著的區(qū)別。例如CE酶對(duì)帶正電荷的底物如那些BuChE喜愛的底物包括膽堿酯 類的水解無效。這些酶一般不分在同一組。令人驚奇地在ISAS的情況下，存在于HIM制劑 中的CE-2表現(xiàn)出與BuChE相同的特異性和功效，是一種阿司匹林釋放的良好載體。結(jié)果表 明一種以上的酶能使阿司匹林自化合物釋放。表5 用ISAS進(jìn)行的采用不同的生物樣品的阿司匹林產(chǎn)生的對(duì)比
不同的生物樣品的阿司匹林產(chǎn)生的對(duì)比
57 2-阿司匹林-5-(4-硝氧基-甲基)苯甲酸-異山梨醇酯22的水解結(jié)果表7 =NO位置對(duì)阿司匹林產(chǎn)生的影響
生物來源2-硝酸酯(5)3-硝酸酯(4)4-硝酸酯(6)(μ Μ)(μ Μ)(μ Μ)50%人血漿10. 3262HIM (80 μ g/ml)21. 7209. 7非異山梨醇型參照阿司匹林酯類的水解結(jié)果對(duì)兩種非異山梨醇型阿司匹林酯，即2-甲氧苯基-2-乙酰氧苯甲酸酯(guaicol 酯)和2-乙酰氧苯甲酸苯酯在人腸微粒體(40yg/ml)中的水解進(jìn)行評(píng)價(jià)。這些酯沒有一 種在人血漿中充當(dāng)阿司匹林前藥，即人血漿酯酶的作用不使阿司匹林從這些酯中釋放。表8在HIM中非異山梨醇型阿司匹林酯的阿司匹林產(chǎn)生
生物來源
Guaicol阿司匹林酯
V
n^V OMe
2-乙酰氧笨甲酸苯基酯
V
(μΜ)
HIM (40 μ g/ral) HIM (20 μ g/ral)
0. 5 (μ Μ)
7.7 (μ Μ) 5. 3 (μ Μ)
苯基阿司匹林酯與人腸微粒體接觸產(chǎn)生數(shù)量較少的阿司匹林，表明對(duì)于這些底物 CE-2優(yōu)先性與BuChE略微不同，在BuChE的存在下發(fā)生水解但不放出阿司匹林。然而，相對(duì) 于ISAS和硝氧基甲基類似物幾乎沒有阿司匹林產(chǎn)生。換而言之這些化合物在人血漿中不 是阿司匹林前藥而是在CE-2存在下的無效阿司匹林前藥。該數(shù)據(jù)說明CE-2和本發(fā)明前藥 之間的相互作用在有效的阿司匹林產(chǎn)生的發(fā)生方面是特異性的。表9 由2-阿司匹林酯-5-水楊酸-異山梨醇酯和2-阿司匹林酯_5_ (3-硝氧基 甲基)苯甲酸-異山梨醇酯產(chǎn)生的阿司匹林量的對(duì)比 參考文獻(xiàn)Albert, Α. 1958.Chemical aspects of selective toxicity. Nature,182, 421-422Burton, D. J. and Koppes, W. M. 1975. Cleavage of carboxylic acid esters to acid chlorides with dichlorotriphenylphosphorane.J.Org. Chem 40, No 21, 3026-3032.Carini M, Aldini G, Orioli M, Maffei Facino R. In vitro metabolism of a nitroderivative of acetylsalicylic acid(NCX4016)by rat liver :LC and LC-MS studies. J Pharm Biomed Anal. 2002 Aug 1 ；29(6) :1061_71.Cena C, Lolli ML, Lazzarato L, Guaita E, Morini G, Coruzzi G, McElroy SP, Megson IL, Fruttero R, Gasco A.2003.Antiinflammatory, gastrosparing, and antiplatelet properties of new NO—donor esters of aspirin.Cena C, Lolli ML, Lazzarato L, Guaita E, Morini G, Coruzzi G, McElroy SP, Megson IL, Fruttero R, Gasco A. Antiinflammatory, gastrosparing, and antiplatelet properties of new NO-donor esters of aspirin. 2003 J Med Chem. Feb 27 ；46 (5) 747-54.Chan AT, Giovannucci EL, Meyerhardt JA,Schernhammer ES, Curhan GC, Fuchs CS.2005. Long-term use of aspirin and nonsteroidal anti-inflammatory drugs and risk of colorectal cancer. JAMA. Aug24 ；294 (8) :914_23·
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權(quán)利要求
具有如通式(I*)中所示通式結(jié)構(gòu)的阿司匹林異山梨醇酯化合物其中Y為C1 C8烷基酯、C1 C8烷氧基酯、C3 C10環(huán)烷基酯、芳基酯、C1 C8烷基芳基酯或 C(O)OR環(huán)，其中R環(huán)為含至少一個(gè)取代環(huán)系碳的雜原子的5 元芳香環(huán)或非芳香5 元環(huán)，其可不被取代或被至少一個(gè)釋放一氧化氮的基團(tuán)取代。FPA00001186235500011.tif
2.具有如通式(I)中所示通式結(jié)構(gòu)的阿司匹林異山梨醇酯化合物其中Y為 C1-C8烷基酯、C1-C8烷氧基酯、C3-C10環(huán)烷基酯、芳基酯或C1-C8烷基芳基酯，其可不被取 代或被至少一個(gè)釋放一氧化氮的基團(tuán)取代。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中釋放一氧化氮的基團(tuán)包括硝酸酯、C1-C8烷基硝 酸酯、C3-C10環(huán)烷基硝酸酯或C1-C8烷基硝酸酯。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的阿司匹林異山梨醇酯化合物，其具有如通式(I)中所示通式結(jié)構(gòu)，其中Y為 C1-C8烷基酯或C1-C8烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或 C3-C10環(huán)烷基酯或C1-C8環(huán)烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或 未取代或取代的芳基酯、烷基芳基酯、苯甲酸酯、煙酸酯、噁唑甲酸酯、異噁唑甲酸酯、 噻二唑甲酸酯基團(tuán)，其可被包括下列中的至少一個(gè)基團(tuán)取代輕基、-Cl、-Br、C1-C8烷基、 芐基、C「C8 烷氧基、芐基氧基、-NHC(O)R, -NH2、-NO2、-ONO2、-(CH2) n0N02、-OC (0) [ (CH2) J 環(huán) ONO2, -OCOArONO2, -OCOAr (CH2)nONO2 或 C1-C5 鹵代燒基酯，其中R為C1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8，m = 3_10。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4的阿司匹林異山梨醇酯化合物，其具有如通式(I)中所示通式 結(jié)構(gòu)， 其中Y為C1-C8烷基酯或C1-C8烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或 未取代或取代的芳基酯、烷基芳基酯、苯甲酸酯、煙酸酯、噁唑甲酸酯、異噁唑甲酸酯、 噻二唑甲酸酯基團(tuán)，其可被包括下列中的至少一個(gè)基團(tuán)取代羥基、-Cl.-BinC1-C8烷基、芐 基、C1-C8 烷氧基、鄰-芐基氧基、-NHC(O)R, -NH2、-NO2、-ONO2、-(CH2) n0N02、-OC (0) [ (CH2) J 環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2)nONO2 或 C「C5 鹵代烷基酯，其中R為C1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8，m = 3_10。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或4的化合物，其具有如通式(I)中所示的通式結(jié)構(gòu)， 其中γ為C1-C8烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或 未取代或取代的苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被包括下列中的至少一個(gè)基 團(tuán)取代羥基、-Cl、-Br、C1-C8烷基、芐基、C1-C8烷氧基、鄰-芐基氧基、-NHC(O) R、-NH2、-NO2、-ONO2、-(CH2) n0N02、-OC(O) [ (CH2)m]環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2)nONO2 或 C1-C5鹵代烷基酯，其中R為C1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8，m = 3_10。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或4的化合物，其具有如通式(I)中所示的通式結(jié)構(gòu)，其中Y為未取代或取代的苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被下列基團(tuán)中的至少一個(gè)取 代羥基、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、鄰-芐基氧基、-(CH2)nONO2 (η = 1-8)、C3-C10環(huán)烷基酯 或鹵代烷基酯。
8.根據(jù)權(quán)利要求4至7的化合物，其中鹵代烷基酯的鹵素取代基為Cl、Br或F。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的化合物，其中Y選自
10.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中Y選自
11.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其具有如通式(I)中所示的通式結(jié)構(gòu) 其中Y為未取代或取代的苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被下列基團(tuán)中的至少一個(gè)取 代羥基、-Cl、甲基、鄰-芐基氧基、甲氧基、-NHC (0) CH3、-OC (0) CH2Br、-NO2、-CH2ONO2，其中 Y 為未取代或取代的苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被下列基團(tuán)中的至少一個(gè)取代羥基、-Cl、 甲基、鄰-芐基氧基、甲氧基、-NHC (0) CH3、-OC (0) CH2Br、-NO2、-CH2ONO2。
12.根據(jù)前述權(quán)利要求的任一項(xiàng)的阿司匹林異山梨醇酯化合物，其具有如式(II)中所 示的結(jié)構(gòu)
13.根據(jù)權(quán)利要求1至12的阿司匹林異山梨醇酯化合物，其具有如式(III)中所示的結(jié)構(gòu)
14.根據(jù)權(quán)利要求1至12的阿司匹林異山梨醇酯化合物，其具有如式(IV)中所示的結(jié)構(gòu)
15.根據(jù)權(quán)利要求1至12的阿司匹林異山梨醇酯化合物，其具有如式(V)中所示的結(jié)構(gòu)
16.根據(jù)權(quán)利要求1至12的阿司匹林異山梨醇酯化合物，其具有如式(VI)中所示的結(jié)構(gòu)
17.根據(jù)權(quán)利要求1至12的阿司匹林異山梨醇酯化合物，其具有如式(VII)中所示的結(jié)構(gòu)
18.根據(jù)權(quán)利要求1至12的阿司匹林異山梨醇酯化合物，其具有選自下列的任何一個(gè)結(jié)構(gòu)
19.藥物的載體化合物，其具有如通式(II)中所示的通式結(jié)構(gòu) 其中Y為C1-C8烷基酯、C1-C8烷氧基酯、C3-Cltl環(huán)烷基酯、芳基酯、C1-C8烷基芳基酯或-C(O)ORlf, 其中Rlf為含至少一個(gè)取代環(huán)系碳的雜原子的5-元芳香環(huán)或非芳香5-元環(huán)，其可不被取代 或被至少一個(gè)釋放一氧化氮的基團(tuán)取代， 且X為藥物分子。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的藥物的載體化合物，其具有如通式(II)中所示的通式結(jié)構(gòu)其中Y為C1-C8烷基酯、C1-C8烷氧基酯、C3-C10環(huán)烷基酯、C1-C8環(huán)烷氧基酯、芳基酯或C1-C8烷基 芳基酯，其可不被取代或被至少一個(gè)釋放一氧化氮的基團(tuán)取代， 且X為藥物分子。
21.根據(jù)權(quán)利要求19或20的載體，其中釋放一氧化氮的基團(tuán)包括硝酸酯、C1-C8烷基硝 酸酯、C3-C10環(huán)烷基硝酸酯或C1-C8烷基硝酸酯。
22.根據(jù)權(quán)利要求19-21的載體，其具有如通式(II)中所示的通式結(jié)構(gòu)其中Y為 C1-C8烷基酯或C1-C8烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或 C3-C10環(huán)烷基酯或C1-C8環(huán)烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或 未取代或取代的芳基酯、烷基芳基酯、苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被包括下列 中的至少一個(gè)基團(tuán)取代羥基、C1-C8烷基、芐基、C1-C8烷氧基、芐基氧基、-NHC(O) R、-NH2、-NO2、-ONO2、-(CH2) n0N02、-OC(O) [ (CH2)m]環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2)nONO2 或 C1-C5鹵代烷基酯，其中R為C1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8，m = 3-10 ；且 X為藥物分子。
23.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其具有如通式(I)中所示的通式結(jié)構(gòu) 其中Y為C1-C8烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或 C3-C10環(huán)烷基酯或C1-C8環(huán)烷氧基酯，其可不被取代或被ONO2取代；或 未取代或取代的苯甲酸酯或煙酸酯基團(tuán)，其可被包括下列中的至少一個(gè)基團(tuán)取代 羥基、C1-C8 烷基、芐基、C1-C8 烷氧基、芐基氧基、-NHC (0) R、-NH2, -NO2, -ONO2, - (CH2) n0N02、-OC (0) [ (CH2) J 環(huán) ONO2、-OCOArONO2、-OCOAr (CH2) n0N02 或 C1-C5 鹵代烷基酯， 其中R為C1-C8烷基或C1-C8烷氧基基團(tuán)，η = 1-8，m = 3-10 ； 且X為藥物分子。
24.根據(jù)權(quán)利要求22或23的載體，其中鹵代烷基酯的鹵素取代基為Cl、Br或F。
25.根據(jù)權(quán)利要求19-22的載體化合物，其中載體選自 其中X為藥物分子。
26.藥物化合物，包含權(quán)利要求19-22的載體化合物。
27.藥物組合物，包含權(quán)利要求1至25的化合物和至少一種藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。
28.根據(jù)權(quán)利要求1至25的化合物或權(quán)利要求27的組合物在阿司匹林沒有效果的水 平下減少組成型血小板乙二醇蛋白表達(dá)的用途。
29.根據(jù)權(quán)利要求1至25的化合物或權(quán)利要求27的組合物誘導(dǎo)阿司匹林樣作用的用途。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的用途，其中阿司匹林樣作用是降低抗血小板活性、抑制COX產(chǎn)物。
31.根據(jù)權(quán)利要求29或30的用途，其中受抑制的COX產(chǎn)物為血栓素A2或丙二醛。
32.根據(jù)權(quán)利要求1至25的化合物在制備用于治療心血管和腦血管疾病、疼痛、發(fā)熱、 炎癥、癌、阿爾茨海默病或癡呆的藥物中的用途。
33.根據(jù)權(quán)利要求1-25的化合物，其中2-阿司匹林-異山梨醇酯基團(tuán)在5位上被烷基 或芳基酯取代以促進(jìn)2位上的乙?；乃舛尫虐⑺酒チ?。
34.具有如通式(Γ)中所示通式結(jié)構(gòu)的化合物在治療心血管和腦血管疾病、疼痛、發(fā) 熱、炎癥、癌、阿爾茨海默病或癡呆中的用途其中Y為 C1-C8烷基酯、C1-C8烷氧基酯、C3-Cltl環(huán)烷基酯、芳基酯、C1-C8烷基芳基酯或-C(O)ORlf, 其中Rlf為含至少一個(gè)取代環(huán)系碳的雜原子的5-元芳香環(huán)或非芳香5-元環(huán)，其可不被取代 或被至少一個(gè)釋放一氧化氮的基團(tuán)取代。
35.具有如通式(Γ)中所示通式結(jié)構(gòu)的化合物在制備用于治療心血管和腦血管疾病、 疼痛、發(fā)熱、炎癥、癌、阿爾茨海默病或癡呆的藥物中的用途其中Y為 C1-C8烷基酯、C1-C8烷氧基酯、C3-Cltl環(huán)烷基酯、芳基酯、C1-C8烷基芳基酯或-C(O)ORlf, 其中Rlf為含至少一個(gè)取代環(huán)系碳的雜原子的5-元芳香環(huán)或非芳香5-元環(huán)，其可不被取代 或被至少一個(gè)釋放一氧化氮的基團(tuán)取代。
36.基本上如本文中所述和/或參考所附實(shí)施例的根據(jù)權(quán)利要求1至55或33的化合物。
37.基本上如本文中所述和/或參考所附實(shí)施例的根據(jù)權(quán)利要求27的組合物。
38.基本上如本文中所述和/或參考所附實(shí)施例的根據(jù)權(quán)利要求28至32或34-35的 用途。
全文摘要
阿司匹林是在治療炎癥、疼痛和發(fā)熱中應(yīng)用最廣泛的藥物之一。最近它在預(yù)防心臟病發(fā)作和中風(fēng)方面得到應(yīng)用并作為癌化學(xué)預(yù)防試劑正在被研究。盡管阿司匹林有價(jià)值但因?yàn)槠湟鹞赋鲅匀晃幢怀浞謶?yīng)用。正在開發(fā)中的技術(shù)可能消除該問題。將其設(shè)計(jì)成減少藥物和腸內(nèi)層之間的接觸。由此提供一種阿司匹林異山梨醇酯(阿司匹林酯)前藥化合物。該化合物具有如通式(I)所示的通式結(jié)構(gòu)，其中Y是C1-C8烷基酯、C1-C8烷氧基酯、C3-C10環(huán)烷基酯、芳基酯、C1-C8烷基芳基酯或-C(O)OR環(huán)，其中R環(huán)為含至少一個(gè)代替環(huán)系碳的雜原子的5元芳香環(huán)或非芳香5元環(huán)，其可不被取代或被至少一個(gè)釋放一氧化氮的基團(tuán)取代。
文檔編號(hào)A61P29/00GK101925604SQ200880125583
公開日2010年12月22日 申請(qǐng)日期2008年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月21日
發(fā)明者J·F·吉爾姆, L·克魯納-莫里爾提, M·拉利 申請(qǐng)人:都柏林伊麗莎白女王圣三一學(xué)院教務(wù)長(zhǎng)董事及學(xué)者