專利名稱：用于治療肥胖癥和胰島素抗性的肽化合物的制作方法
用于治療肥胖癥和胰島素抗性的肽化合物
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于治療代謝綜合征尤其是肥胖癥和胰島素抗性的血管生成素樣蛋 白 6 (angiopoietin-like protein 6) (Angptl6)月太。(2)相關(guān)領(lǐng)域的描述代謝綜合征是一種增加患心血管疾病、中風(fēng)和糖尿病風(fēng)險的醫(yī)學(xué)病癥組合的病 癥，包括肥胖癥、血脂異常(dyslipidaemia)和高血糖。代謝綜合征(又被稱為(代謝)綜 合征X，胰島素抗性綜合征，Reaven' s綜合征和CHAOS (Australia))已增加到在世界范圍 的流行比例。該綜合征的病理生理學(xué)歸因于向心性分布的肥胖癥，降低的高密度脂蛋白，升 高的甘油三酯，升高的血壓和高血糖。代謝綜合征患者患II型糖尿病、冠心病以及與動脈 壁斑積聚有關(guān)的其他疾病(例如，中風(fēng)和周圍性血管疾病)的風(fēng)險增加。在兩項預(yù)測性的歐 洲研究中，代謝綜合征預(yù)示著心血管疾病和死亡率的增加(Isomaa等，Diabetes Care 24: 683-689(2001) ；Lakka 等，JAMA 288:2709-2716(2002))。代謝綜合征最顯著的根本原因看起來是肥胖癥。導(dǎo)致代謝綜合征的遺傳因素仍然 不清楚。因此，需要鑒定導(dǎo)致代謝綜合征發(fā)生的基因。還需要能夠鑒定調(diào)節(jié)這些基因的活 性或調(diào)節(jié)這些基因編碼的產(chǎn)物(例如，蛋白)的活性的化學(xué)藥劑的方法。這類化學(xué)藥劑可 用作，例如，預(yù)防代謝綜合征或改善至少一種代謝綜合征癥狀的藥物。W02005097171 和 Oike 等，Nat. Med. 11 400408 (2005)顯示全長 Angptl6 蛋白對抗 肥胖癥和胰島素抗性，顯示其作為抗肥胖劑的用途。但是，全長Angptie蛋白還引起血管發(fā) 生，這是抗肥胖治療無法接受的影響。因此，需要對抗肥胖癥和胰島素抗性但沒有不良血管 發(fā)生副作用的Angptie蛋白類似物或衍生物。發(fā)明簡述本發(fā)明提供血管生成素樣蛋白6 (Angptie)肽化合物及其組合物，它們可治療性 用于代謝病癥諸如代謝綜合征的治療，尤其是減輕肥胖癥和胰島素抗性。Angptie肽化合物的治療應(yīng)用包括給個體施用Angptie肽以治療折磨該個體的代 謝病癥。這類病癥包括，但不限于，肥胖癥，代謝綜合征或綜合征X，和II型糖尿病。由此同 樣可以對糖尿病并發(fā)癥諸如視網(wǎng)膜病產(chǎn)生積極影響。肥胖癥是諸如糖尿病、高血壓、血脂異 常、心血管疾病、膽結(jié)石、骨關(guān)節(jié)炎和某些癌癥形式的疾病狀態(tài)的共病(comorbidity)，并可 能導(dǎo)致這類疾病狀態(tài)。給個體施用一種或更多種此處公開的Angtie肽化合物以實現(xiàn)體重 損失也可用于預(yù)防這類疾病以及作為任意一種上述狀況的治療的一部分，等等。在其他實 施方案中，提供一種治療個體的代謝病的方法，包括給該個體施用一種或更多種如上所述 的Angtie肽化合物。代謝病可以選自以下組糖尿病，代謝綜合征，高血糖和肥胖癥，可以 通過外周到腦的途徑施用，諸如口的，粘膜的，口腔的，舌下的，鼻的，直腸的，皮下的，透皮 的，靜脈的，肌內(nèi)的，或腹膜內(nèi)途徑。最終，可以給個體施用Angtie肽化合物以實現(xiàn)該個體 食物攝入的減少，實現(xiàn)該個體體重增加的減少，預(yù)防該個體的體重增加，實現(xiàn)該個體的體重?fù)p失，和/或預(yù)防該個體的體重反彈。因此，本發(fā)明提供可以用于治療肥胖癥或糖尿病的Angptie肽化合物及其組合 物，所述Angptie肽化合物包括Angptie蛋白的卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域并且排除了 Angptl6蛋白 的完整球狀纖維蛋白原結(jié)構(gòu)域。在具體的方面，Angptie肽包括與SEQ ID NO :1所示的氨 基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列。在其他方面，Angptie肽與異源蛋白或肽綴 合。例如，異源蛋白可以選自人血清白蛋白，免疫球蛋白，免疫球蛋白的Fc片段和轉(zhuǎn)鐵蛋 白。在其他方面，Angptie肽化合物包括融合蛋白，所述融合蛋白包括與異源蛋白或肽(例 如，免疫球蛋白的Fc結(jié)構(gòu)域或Flag或六聚組氨酸標(biāo)簽或引導(dǎo)肽)融合的Angptie肽。融合 蛋白還可以在所述異源蛋白或肽與Angptie肽之間包含接頭或“鉸鏈”氨基酸序列諸如氨 基酸 ERKCCVECPPCP (SEQ ID NO 17)或 VECPPCP(SEQ ID NO: 18)或 GGGERKCCVECPPCP (SEQ ID NO: 19)或 GGGVECPPCP(SEQ ID NO :20)。在另一個方面，本發(fā)明提供Angptie化合物，其具有式(I)Z1-肽-Z2其中肽是Angptie肽，其包括Angptie蛋白的卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域并排除了 Angptl6 蛋白的完整球狀纖維蛋白原結(jié)構(gòu)域，其中一個或更多個氨基酸可以是D-或L-氨基酸，氨基 酸類似物或氨基酸衍生物；Z1是任選存在的保護(hù)基，其如果存在的話與N端氨基相連；和Z2 是NH2或任選存在的保護(hù)基，其如果存在的話與C端羧基相連，和其藥學(xué)上可接受的鹽。在 具體的實施方案中，Angptie肽包括與SEQ ID NO :1所示的氨基酸序列具有至少95%同一 性的氨基酸序列。Angptie肽還可以在Z1和肽之間包括另外1到25個氨基酸。在上述Angptie肽化合物的另一方面，肽的N端氨基酸與選自PEG、膽固醇、 N-乙基馬來酰亞胺基(ethylmaleimidyl)和棕櫚?；囊环N或更多種分子共價連接。在 Angptie肽化合物的另一方面，肽進(jìn)一步在該肽的N端包括半胱氨酸殘基，其上任選的存在 保護(hù)基(其如果存在的話與半胱氨酸殘基的N端氨基相連)。在肽的具體方面，N端半胱氨 酸殘基的硫醇基與選自PEG、膽固醇、N-乙基馬來酰亞胺基(ethylmaleimidyl)和棕櫚酰基 的一種或更多種分子共價連接。在具體實施方案中，Angptie肽化合物具有SEQ ID NO=I 的氨基酸，其還包括位于該肽N端的半胱氨酸殘基，其上存在與半胱氨酸殘基的N端氨基相 連的保護(hù)基和與硫醇基相連的PEG分子。本發(fā)明進(jìn)一步提供Angptie肽化合物的任意一種或更多種實施方案和方面在制 備治療代謝病癥的藥物中的用途。這類病癥包括，但不限于，肥胖癥，代謝綜合征或綜合征 X，和II型糖尿病。同樣可以對糖尿病并發(fā)癥諸如視網(wǎng)膜病產(chǎn)生積極影響。肥胖癥是諸如 糖尿病、高血壓、血脂異常、心血管疾病、膽結(jié)石、骨關(guān)節(jié)炎、胰島素抗性和某些癌癥形式的 疾病狀態(tài)的共病，并可能導(dǎo)致這類疾病狀態(tài)。因此，本發(fā)明提供一種組合物，其包括一種或 更多種任意上述Angptie肽化合物和藥學(xué)上可接受的載體。附圖簡述

圖1顯示施用單次IV劑量腺病毒-小鼠Angptl6 (Ad-Angptl6)或腺病 毒-GFP(Ad-GFP)的小鼠的體重變化。X軸表示注射后的天數(shù)，Y軸顯示體重(克)。*表示 兩組間的顯著(P < 0. 05)變化。圖2顯示單次IV劑量腺病毒-小鼠Angpt 16 (Ad-Angpt 16)或腺病毒-GFP (Ad-GFP) 后17天比較體重?fù)p失。Y軸顯示體重?fù)p失(克)。**表示兩組間的顯著(ρ <0.05)變化。
圖3顯示施用單次IV劑量腺病毒-小鼠Angptl6 (Ad-Angptl6)或腺病 毒-GFP(Ad-GFP)的小鼠的每日食物攝入。X軸表示注射后的天數(shù)，Y軸顯示每天消耗的食 物(克)。*表示兩組間的顯著(P < 0. 05)變化。圖4顯示施用單次IV劑量腺病毒-小鼠Angptl6 (Ad-Angptl6)或腺病 毒-GFP(Ad-GFP)的小鼠的體重變化。X軸表示注射后的天數(shù)，Y軸顯示從研究開始的體重 損失(克)。*表示兩組間的顯著(P < 0. 05)變化。 圖5顯示施用單次IV劑量的鹽水，對照載體(Ad-pterm)，腺病毒-小鼠 Angptl6 (Ad-Angptl6)，或腺病毒-N端小鼠Angtpl6 (Ad-NAngptl6)的小鼠的每日食物攝 入。X軸表示注射后的天數(shù)，Y軸顯示每天消耗的食物(克)。*表示相對于Ad-Pterm組的 顯著(ρ < 0. 05)變化。圖6顯示施用單次IV劑量的鹽水，對照載體(Ad-pterm)，腺病毒-小鼠 Angptl6 (Ad-Angptl6)，或腺病毒-N端小鼠Angtpl6 (Ad_NAngptl6)的小鼠的體重變化。X 軸表示注射后的天數(shù)，Y軸顯示從研究開始的體重?fù)p失(克)。*表示相對于Ad-Pterm組 的顯著(P < 0. 05)變化。圖7顯示施用單次IV劑量的鹽水，對照載體(Ad-pterm)，腺病毒-小鼠 Angptl6(Ad-Angptl6)，或腺病毒-N端小鼠Angtpl6 (Ad-Nangptl6)的小鼠的脂肪、肌肉或 游離液(FF)的重量變化。Y軸是注射后13天的重量變化。*表示相對于Ad-Pterm組的顯 著(P < 0. 05)變化。圖8是顯示用于檢測小鼠Angptl6(Adv-Angptl6)或N端小鼠 Angtpl6(Ad-NAngptl6)表達(dá)的PCR引物位置的示意圖。圖9顯示施用單次IV劑量的鹽水，對照載體(Ad-pterm)，腺病毒-小鼠 Angptl6(Ad-Angptl6)，或腺病毒-N 端小鼠 Angtpl6 (Ad_NAngptl6)的小鼠中 N 端 Angtpl6(Ad-NAngptl6)或 Angtpl6 (Ad_Angptl6)的表達(dá)。Y 軸是相對于來自 Taqman 數(shù)據(jù) 的肝臟中天然Angptie的表達(dá)。發(fā)明詳述血管生成素相關(guān)生長因子(也被稱為Angptie)最近被鑒定為主要來自肝臟的 孤兒(orphan)50KD分泌蛋白，其作為外周組織的內(nèi)分泌信號起作用。來自3種獨立遺傳 學(xué)模型的證據(jù)顯示Angptie可作為治療肥胖癥和胰島素抗性的化合物(Oike et ah, Nat. Med. 11 =400408 (2005)) ο Angptl6 KO小鼠是嚴(yán)重肥胖的，而過表達(dá)Angptl6的轉(zhuǎn)基因小鼠 能夠抵抗飲食誘導(dǎo)的肥胖癥并顯示胰島素敏感性的提高。此外，用表達(dá)Angptie的腺病毒 載體治療的飲食誘導(dǎo)肥胖(DIO)小鼠顯示體重?fù)p失和糖尿病的矯正。但是，除了 Angptie 在代謝病癥中的作用外，Angptie還在體外以及體內(nèi)被鑒定為促血管發(fā)生劑。Angptie與 Angptl家族的其他成員一樣具有特征結(jié)構(gòu)信號肽，預(yù)測形成二聚或三聚卷曲螺旋的延 伸結(jié)構(gòu)域，和球狀纖維蛋白原結(jié)構(gòu)域。我們假設(shè)，與Angptl家族的其他成員(Angptl3和 Angptl4) 一樣，Angptie的結(jié)構(gòu)域可能具有獨立的功能。構(gòu)建過表達(dá)全長Angptl6或該蛋白 N端部分(包含卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域)的腺病毒(Ad)載體并在體內(nèi)檢測。之前在W02005097171 和Oike等，Nat. Med. 11 =400408(2005)中顯示全長Angptl6蛋白減輕肥胖癥和胰島素抗 性，這表明Angptie蛋白可以用做抗肥胖劑。但是，全長Angptie蛋白還引起血管發(fā)生，這 是抗肥胖治療無法接受的影響。本發(fā)明人在此處顯示包括卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域但不包括球狀纖維蛋白原結(jié)構(gòu)域的Angptie蛋白亞結(jié)構(gòu)域的表達(dá)減輕肥胖癥和胰島素抗性但沒有不良的 血管發(fā)生副作用。因此，本發(fā)明提供可以用于治療代謝病癥的血管生成素樣蛋白6(Angptl6)肽 化合物及其組合物，所述Angptie肽化合物包括Angptie的卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域并且排除了 Angptie的完整球狀纖維蛋白原結(jié)構(gòu)域。可以給個體施用一種或更多種Angptie肽化合物 以治療折磨該個體的代謝病癥。這類病癥包括，但不限于，肥胖癥，代謝綜合征或綜合征X， 和II型糖尿病。同樣可以對糖尿病并發(fā)癥諸如視網(wǎng)膜病產(chǎn)生積極影響。肥胖癥是諸如糖尿 病、高血壓、血脂異常、心血管疾病、膽結(jié)石、骨關(guān)節(jié)炎和某些癌癥形式的疾病狀態(tài)的共病， 并可能導(dǎo)致這類疾病狀態(tài)。給個體施用一種或更多種此處公開的Angptie肽化合物以實現(xiàn) 體重?fù)p失也可用于預(yù)防這類疾病以及作為任意一種上述狀況的治療的一部分，等等。在其 他實施方案中，提供一種治療個體的代謝病的方法，包括給該個體施用一種或更多種如上 所述的Angptie肽化合物。代謝病可以選自以下組糖尿病，代謝綜合征，高血糖和肥胖癥， 可以通過外周到腦的途徑施用，諸如口的，粘膜的，口腔的，舌下的，鼻的，直腸的，皮下的， 透皮的，靜脈的，肌內(nèi)的，或腹膜內(nèi)途徑。在具體的實施方案中，Angptie肽化合物可用于治 療個體的多種病癥。根據(jù)此處的公開本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以清楚的知道，可以給個體施 用Angptie肽化合物以實現(xiàn)該個體食物攝入的減少，實現(xiàn)該個體體重增加的減少，預(yù)防該 個體的體重增加，實現(xiàn)該個體的體重?fù)p失，和/或預(yù)防該個體的體重反彈。因此，本發(fā)明提供可以用于治療肥胖癥或糖尿病的Angptie肽化合物及其組合 物，所述Angptie肽化合物包括Angptie蛋白的卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域并且排除了 Angptl6蛋白 的完整球狀纖維蛋白原結(jié)構(gòu)域。在具體的方面，Angptie肽包括與SEQ ID NO :1所示的氨 基酸序列具有至少95%同一性的氨基酸序列。在另一個方面，Angptie肽還可以在氨基端 包括其內(nèi)源引導(dǎo)肽或在氨基端或羧基端包括異源肽。在具體的方面，異源肽是位于氨基端 的引導(dǎo)肽，其促進(jìn)該肽從細(xì)胞的分泌。在其他方面，引導(dǎo)序列通過肽(包括切割位點以便于 從Angptie肽去除引導(dǎo)肽)與Angptie肽相連或融合。在其他方面，Angptl6肽與異源蛋白 或肽綴合。例如，異源蛋白可以選自人血清白蛋白，免疫球蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白。在其他方面， AngptlB肽化合物包括融合蛋白，所述融合蛋白包括在其C或N端與異源蛋白或肽(例如， 免疫球蛋白的Fc結(jié)構(gòu)域或部分或Flag或六聚組氨酸標(biāo)簽或弓I導(dǎo)肽)融合的Angptie肽。Fc 結(jié)構(gòu)域可以來自小鼠IgG1或人IgG具。人IgG2M4是來自IgG2的具有突變的抗體，利用所述 突變該抗體維持正常的藥代動力學(xué)模式但不具有任何已知的效應(yīng)物功能(參見美國公開 的申請?zhí)?0070148167和美國公開的申請?zhí)?0060228349)。融合蛋白還可以在所述異源蛋 白或肽與Angptie肽之間包含接頭或“鉸鏈”氨基酸序列諸如氨基酸ERKCCVECPPCP (SEQ ID NO 17)或 VECPPCP (SEQ ID NO 18)或 GGffiRKCCVECPPCP (SEQ ID NO :19)或 GGGVECPPCP(SEQ IDNO 20)。Angptie肽可以在大腸桿菌，酵母(諸如畢赤酵母或釀酒酵母)，或哺乳動物細(xì) 胞中表達(dá)。在另一個方面，本發(fā)明提供Angptie化合物，其具有式(I)Z1-肽-Z2其中肽是Angptie肽，其包括Angptie蛋白的卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域并排除了 Angptl6 蛋白的完整球狀纖維蛋白原結(jié)構(gòu)域，其中一個或更多個氨基酸可以是D-或L-氨基酸，氨基 酸類似物或氨基酸衍生物；Z1是任選存在的保護(hù)基，其如果存在的話與N端氨基相連；和Z2是NH2或任選存在的保護(hù)基，其如果存在的話與C端羧基相連，和其藥學(xué)上可接受的鹽。在具體的實施方案中，Angptie肽包括與SEQ ID NO=I所示的氨基酸序列具有至 少95%同一性的氨基酸序列。Angptie肽還可以包括內(nèi)源或異源的引導(dǎo)肽或1到25個氨 基酸的任意異源肽。在具體的方面，Angptie肽化合物任選的包括與Angptl6肽的N端氨基共價連接 的保護(hù)基。與Angptie肽的N端氨基共價連接的保護(hù)基在體內(nèi)條件下降低氨基端的反應(yīng) 性。氨基保護(hù)基包括-C1,烷基，-C1,取代的烷基，-C2,鏈烯基，-C2_1(l取代的鏈烯基，芳 基，-Ch 烷基芳基，-C (0) - (CH2) H-COOH，-C (0) -C1^6 烷基，-C (0)-芳基，-C (0) -O-C1^6 烷基， 或-C (0) -0-芳基。在具體實施方案中，氨基端保護(hù)基選自乙?；?，丁二?；?，苯甲基， 芐氧羰基，和叔丁氧羰基。N端氨基酸的脫氨是預(yù)期在體內(nèi)條件下降低氨基端反應(yīng)性的另一 種修飾。Angptl6肽化合物的化學(xué)修飾組合物(其中Angptl6肽與聚合物連接)也包括在 本發(fā)明的范圍內(nèi)。挑選的聚合物通常被修飾為具有單個反應(yīng)基，諸如用于酰化的活性酯或 用于烷化的醛，這樣的話當(dāng)用于本方法時可以控制聚合度。聚合物的混合物也包括在聚合 物范圍內(nèi)。優(yōu)選的，為了終產(chǎn)物制品的治療用途，聚合物應(yīng)是藥學(xué)上可接受的。聚合物或其混合物可以選自，例如，聚乙二醇(PEG)，單甲氧基-聚乙二醇，葡聚 糖，纖維素，或其他基于碳水化合物聚合物，聚(N-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇，丙二醇同聚 物，聚氧化丙烯/環(huán)氧乙烷共聚物，聚氧乙烯多元醇(例如，甘油)，和聚乙烯醇。在其他實施方案中，Angptl6肽通過聚乙二醇化、膽固醇化(cholesteroylation) 或棕櫚?；?palmitoylation)進(jìn)行修飾。修飾可以針對Angptl6肽中的任意氨基酸殘基， 但是，在目前優(yōu)選的實施方案中，修飾針對Angptie肽的N端氨基酸，直接針對N端氨基酸 或通過與添加到N端的半胱氨酸殘基的硫醇基偶聯(lián)或與添加到N端的接頭諸如Ttds偶聯(lián)。 在進(jìn)一步的實施方案中，Angptie肽的N端包括半胱氨酸殘基，在此保護(hù)基與半胱氨酸殘基 的N端氨基偶聯(lián)，用N-乙基馬來酰亞胺，PEG基團(tuán)，膽固醇基團(tuán)或棕櫚?；鶊F(tuán)對半胱氨酸硫 醇基進(jìn)行衍生化。在進(jìn)一步的實施方案中，乙?；陌腚装彼釟埢惶砑拥紸ngptie肽的 N端，用N-乙基馬來酰亞胺，PEG基團(tuán)，膽固醇基團(tuán)或棕櫚?；鶊F(tuán)對半胱氨酸的硫醇基進(jìn)行 衍生化。大家都知道可以通過連接聚乙二醇(PEG)聚合物(其增加蛋白的流體動力學(xué)體 積從而減緩其通過腎過濾的清除)來改變某些蛋白的特性。(參見，例如，Clark et al, J. Biol. Chem. 271 :21969_21977 (1996))。因此，可以預(yù)期核心肽殘基可以被聚乙二醇化以 提供增強的療效諸如，例如，通過延長體內(nèi)半衰期增加功效。因此，將Angptie肽聚乙二醇 化能夠提高Angtie肽化合物的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)。肽聚乙二醇化的方法是文獻(xiàn)中公知的，并在下列參考文獻(xiàn)中描述，其中每篇 均在此通過援引并入Lu 等，Int. J. P印t. Protein Res. 43 127-38 (1994) ；Lu 等， Pept. Res. 6 140-6(1993) ；Felix 等，Int. J. Pept. Protein Res. 46 253-64 (1995)； Gaertner 等，Biocon jug. Chem. 7 :38_44 (1996) ；Tsutsumi 等，Thromb. Haemost. 77 168-73 (1997) ；Francis 等，Int. J. Hemato 1. 68 1-18 (1998) ；Roberts 等，J. Pharm. Sci. 87 1440-45 (1998)；和 Tan 等，Protein Expr. Purif. 12 :45_52 (1998)。聚乙 二醇或 PEG 旨 在包括用于將其他蛋白衍生化的PEG的任意形式，包括但不限于，單-(C1,)烷氧基或芳氧基-聚乙二醇。合適的PEG部分包括，例如，40kDa甲氧基聚(乙二醇)丙醛(Dow， Midland, Michigan) ；60kDa 甲氧基聚(乙二醇)丙醛(Dow, Midland, Michigan) ；40kDa 甲氧基聚(乙二醇)馬來酰亞氨基_丙酰胺(Dow，Midland, Michigan) ；3IkDa α -甲 基-w-(3-氧代丙氧基)，聚氧乙烯(NOF Corporation, Tokyo) ；mPEG2-NHS-40k(Nektar)； mPEG2-MAL-40k (Nektar), SUNBRIGHTGL2-400MA ((PEG) 240kDa) (NOF Corporation, Tokyo), SUNBRIGHTME-200MA (PEG20kDa) (NOF Corporation，Tokyo)。通常通過 PEG 部分上的反應(yīng)基 (例如，醛，氨基，巰基，或酯基)與Angptie肽上的反應(yīng)基(例如，醛，氨基，巰基，或酯基) 的?；饔没蜻€原性烷基化作用將PEG基團(tuán)與Angptie肽相連。PEG分子可以與Angptl6肽上任意位置的任意Lys、Cys或K (CO (CH2) 2SH)殘基共 價相連?？梢越?jīng)由N端氨基直接在N端的任意氨基酸上對此處描述的Angptie肽進(jìn)行聚 乙二醇化?？梢越oAngptie肽添加“接頭臂”以促進(jìn)聚乙二醇化。半胱氨酸巰基側(cè)鏈的聚 乙二醇化已經(jīng)被廣泛報道(參見，例如，Caliceti & Veronese，Adv. Drug Deliv. Rev. 55 1261-77(2003))。如果肽中不存在半胱氨酸殘基，可以通過取代或通過向N端氨基酸添加 半胱氨酸來引入半胱氨酸殘基。那些已經(jīng)被聚乙二醇化的Angptie肽是通過添加到N端氨 基酸的半胱氨酸殘基的側(cè)鏈進(jìn)行聚乙二醇化的?？蛇x的，PEG分子可以共價連接到Angptie肽C端的酰胺基。通常，存在至少一個 與Angptie肽共價連接的PEG分子。在特定的方面，PEG分子是分枝的，而在其他方面，PEG 分子可以是線性的。在特定的方面，PEG分子的分子量在IkDa到IOOkDa之間。另一方面， PEG分子選自10，20，30，40，50和60kDa。仍在另一方面，它選自20，40，或60kDa。當(dāng)存在 兩個與本發(fā)明的Angptie肽共價連接的PEG分子時，其各自是1到40kDa，在特定的方面， 它們具有20和20kDa, 10和30kDa, 30和30kDa, 20和40kDa,或40和40kDa的分子量。在 特定的方面，Angptie肽包含mPEG-半胱氨酸。mPEG-半胱氨酸中的mPEG可以具有不同分 子量。分子量的范圍優(yōu)選的是5kDa到200kDa，更優(yōu)選的5kDa到lOOkDa，和進(jìn)一步優(yōu)選的 20kDa到60kDa。mPEG可以是線性的或分枝的。目前，優(yōu)選的Angptie肽是通過添加到N端氨基酸的半胱氨酸的側(cè)鏈進(jìn)行聚乙二 醇化的。mPEG-半胱氨酸中的mPEG可以具有不同分子量。分子量的范圍優(yōu)選的是5kDa到 200kDa，更優(yōu)選的5kDa到IOOkDa,和進(jìn)一步優(yōu)選的20kDa到60kDa。mPEG可以是線性的或 分枝的。用于合成Angptie肽的聚乙二醇化的有用策略由以下組成通過在溶液中形成共 軛鍵結(jié)合肽和PEG部分，它們均載有可以互相反應(yīng)的特定官能度?？梢杂贸Ｒ?guī)的固相合成 法容易的制備Angptie肽。Angptie肽是用特定位點的合適官能團(tuán)預(yù)活化的。在與PEG部 分反應(yīng)前，將前體純化并充分表征。Angptie肽與PEG的綴合通過發(fā)生在水相，可以方便的 通過反相分析型HPLC進(jìn)行監(jiān)測。聚乙二醇化的Angptie肽可以方便的通過陽離子交換層 析或制備型HPLC進(jìn)行純化，并通過分析型HPLC、氨基酸分析和激光解吸質(zhì)譜法進(jìn)行表征。Angptl6肽化合物可以包括其他非序列(non-sequence)修飾，例如，糖基化，脂 化，乙?；姿峄?，羧化，甲基化，或任意其他操作或修飾，諸如與標(biāo)記組分綴合。而在特 定方面，本文中的Angptie肽化合物利用天然存在的氨基酸或天然存在氨基酸的D同種 型，利用非天然存在氨基酸(例如，甲硫氨酸亞砜，甲硫氨酸甲基锍(methylsulfonium)， 正亮氨酸，ε "氨基己酸，4-氨基丁酸，四氫異喹啉-3-羧酸，8-氨基辛酸，4氨基丁酸，Lys (N ( ε )-三氟乙?；?或合成類似物，例如，ο-氨基異丁酸，ρ或y_氨基酸，和環(huán)狀類似 物的替代。仍在另一方面，Angptie肽化合物包括具有第一部分(是Angptl6肽)和第二部分 (是異源肽或蛋白)的融合蛋白。融合蛋白可以包括myc-、HA-或His6-標(biāo)簽。融合蛋白還 包括與人IgG的Fc結(jié)構(gòu)域融合的Angptie肽。在具體的方面，免疫球蛋白融合體包括IgGl 分子的鉸鏈、CH2和CH3，或鉸鏈、CHl、CH2和CH3區(qū)。關(guān)于免疫球蛋白融合體的產(chǎn)生，還可 以參見美國專利號5，428，130。Fc部分可以來源于小鼠IgGl或人IgG2M40人IgG2M4(參見 美國公開的申請?zhí)?0070148167和美國公開的申請?zhí)?0060228349)是來自IgG2的抗體， 其具有抗體維持正常的藥代動力學(xué)模式但不具有任意已知效應(yīng)物功能的突變。融合蛋白還 包括與人血清白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白或抗體融合的Angptie肽。仍在另一方面，Angptie肽化合物包括其中Angtl6肽與載體蛋白諸如人血清白蛋 白、運載蛋白(transferring)或抗體分子綴合的Angtl6肽?？梢酝ㄟ^各種化學(xué)技術(shù)修飾Angptie肽化合物以產(chǎn)生與未修飾的Angptie蛋白或 肽具有基本上相同活性的和/或具有其他所希望特性的衍生物。與C端羧基共價連接的 保護(hù)基在體內(nèi)條件下降低羧基端的反應(yīng)性。例如，肽的羧基(無論是羧基末端的還是側(cè)鏈 的)可以采用藥理學(xué)上可接受的陽離子的鹽形式提供，或被酯化形成C1-6酯，或被轉(zhuǎn)化為 式NRR2 (其中R和R2各自獨立的是H或C1-6烷基)的酰胺，或組合形成雜環(huán)，諸如5-或 6_元環(huán)。羧基端保護(hù)基優(yōu)選的連接到最后一個氨基酸的α-羰基。羧基端保護(hù)基包括，但 不限于，酰胺，甲基酰胺，和乙基酰胺。肽的氨基(無論是N端還是側(cè)鏈的)，可以采用藥理 學(xué)上可接受的酸加成鹽形式，諸如HC1，HBr,醋酸，苯甲酸，甲苯磺酸，馬來酸，酒石酸，和其 他有機鹽，或可以被修飾為C1-6烷基或二烷基氨基或進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為酰胺?？梢允褂霉募夹g(shù)將Angptie肽側(cè)鏈的羥基轉(zhuǎn)化為C1-6烷氧基或C1-6酯?？?以用一個或更多個鹵原子，諸如氟，氯，溴或碘，或用C1-6烷基，Cl-6 alltoxy,羧酸及其酯， 或這類羧酸的酰胺來取代肽側(cè)鏈的苯環(huán)和酚環(huán)。Angptie肽側(cè)鏈的亞甲基基團(tuán)可以延伸至 同源C2-4亞烷?？梢岳么罅抗Ｗo(hù)基中的任一種(諸如乙酰胺基團(tuán))保護(hù)巰基。本 領(lǐng)域技術(shù)人員還知曉將環(huán)狀結(jié)構(gòu)引入Angptie肽以選擇并提供導(dǎo)致穩(wěn)定性增強的對結(jié)構(gòu) 的構(gòu)象束縛的方法。例如，可以給Angptie肽添加羧基端或氨基端半胱氨酸殘基，這樣的話 當(dāng)氧化時，Angptie肽將包含二硫鍵，從而產(chǎn)生環(huán)肽。其他肽環(huán)化方法包括硫醚和羧基和氨 基端酰胺和酯的形成。多糖聚合物是另一類可用于蛋白修飾的水溶性聚合物。葡聚糖是多糖聚合物，其 由主要通過α 1-6鍵連接的葡萄糖單個亞單位組成。葡聚糖自身可提供廣泛的分子量范 圍，可以方便的提供從約IkDa到約70kDa的分子量。葡聚糖是一種合適的水溶性聚合物， 其自身或與另一賦形劑聯(lián)用可以用做賦形劑(參見，例如，WO 96/11953和W096/05309)。 與治療性或診斷性免疫球蛋白綴合的葡聚糖的使用已被報道；參見，例如，歐洲專利公開號 0 315 456。當(dāng)根據(jù)本發(fā)明使用葡聚糖作為賦形劑時，約IkDa到約20kDa的葡聚糖是優(yōu)選 的。如上所述，“接頭”基團(tuán)的存在是任選的。當(dāng)存在時，其化學(xué)結(jié)構(gòu)不是關(guān)鍵的，因為 它主要用做間隔物。但是，在某些實施方案中，接頭自身可以為本發(fā)明的組合物提供改進(jìn)的 特性。接頭優(yōu)選的由通過肽鍵連接到一起的氨基酸組成。因此，在具體的實施方案中，接頭由通過肽鍵連接的1到20個氨基酸組成，其中所述氨基酸選自20個天然存在的氨基酸。其 中一些氨基酸可以被糖基化，正如本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的那樣。在更優(yōu)選的實施方案中，1 到20個氨基酸選自甘氨酸，丙氨酸，脯氨酸，天門冬酰胺，谷氨酰胺，和賴氨酸。甚至更優(yōu)選 的，接頭由大部分空間上不受阻礙的氨基酸(諸如甘氨酸和丙氨酸)組成。因此，優(yōu)選的接 頭是聚甘氨酸(尤其是(Gly)4, (Gly)5)，聚(Gly-Ala)，和聚丙氨酸。接頭的其他特定實施 例是(Gly) 3 (Gly) 4 ； (Gly) 3AsnGlySer (Gly) 2 ； (Gly) 3Cys (Gly) 4 ；和 GlyProAsnGlyGly。還可以使用非肽接頭。例如，可以使用烷基接頭諸如-NH-(CH2)S_C(0)-，其中s = 2-20。這些烷基接頭還可以被任意非空間上受阻基團(tuán)(諸如低級烷基(例如，C1J低級酰 基，鹵素(例如，Cl，Br)，CN，NH2，苯基，等等)取代。示例性的非肽接頭是PEG接頭，其中η 使得接頭的分子量為100到5000kD，優(yōu)選的100到500kD。可以采用如上所述的相同方式 改變肽接頭以形成衍生物。其他接頭包括Ttds (1-氨基-4，7，10-三噁-13-三癸胺琥珀酰 亞胺酸)。本發(fā)明包括非對映體以及它們的外消旋和解析對映體純的形式。Angptie肽可以 包含D-氨基酸，L-氨基酸，或其組合。通常，氨基酸采用L型，而特定的氨基酸采用D型。 如本領(lǐng)域所知的，各種氨基酸可以如下表示A = Ala =丙氨酸；C = Cys =半胱氨酸；D = Asp =天門冬氨酸；E = Glu =谷氨酸；F = Phe =苯丙氨酸；G = Gly =甘氨酸；H = His = 組氨酸；I = Ile =異亮氨酸；K = Lys =賴氨酸；L = Leu =亮氨酸；M = Met =甲硫氨酸； N = Asn =天門冬酰胺；p = Pro =脯氨酸；Q = Gln =谷氨酰胺；R = Arg =精氨酸；S = Ser =絲氨酸；T = Thr =蘇氨酸；V = Val =纈氨酸；W = Trp =色氨酸；和Y = Tyr =酪 氨酸。進(jìn)一步提供的是用于治療個體的代謝病癥的藥物組合物，其包括治療有效量的一 種或更多種此處公開的Angptie肽化合物。這類病癥包括，但不限于，肥胖癥，代謝綜合征 或綜合征X，II型糖尿病，糖尿病的并發(fā)癥諸如視網(wǎng)膜病，高血壓，血脂異常，心血管疾病， 膽結(jié)石，骨關(guān)節(jié)炎，胰島素抗性和某些形式的癌癥。本文中肥胖癥相關(guān)病癥與肥胖癥有關(guān)， 由肥胖癥造成或由肥胖癥產(chǎn)生?！胺逝职Y”是其中存在過量體脂的狀況。肥胖癥的操作性定義是基于體重指數(shù) (Body Mass Index, BMI)，其采用以平方米為單位的每高度體重(kg/m2)計算?！胺逝职Y” 是指以下狀況其他方面健康的受試者具有大于或等于30kg/m2的體重指數(shù)(BMI)，或患有 至少一種共病(co-morbidity)的受試者具有大于或等于27kg/m2的BMI?！胺逝质茉囌摺?是指具有大于或等于30kg/m2的體重指數(shù)(BMI)其他方面健康的受試者，或具有大于或等 于27kg/m2的BMI的患有至少一種共病的受試者?！熬哂谢挤逝职Y風(fēng)險的受試者”是具有 25kg/m2到低于30kg/m2的BMI的其他方面健康的受試者，或具有25kg/m2到低于27kg/m2 的BMI的患有至少一種共病的受試者。在亞洲人中與肥胖癥相關(guān)的風(fēng)險增加發(fā)生在較低的體重指數(shù)(BMI)。在亞洲國家， 包括日本，“肥胖癥”是指以下狀況患有至少一種肥胖癥誘導(dǎo)或肥胖癥相關(guān)的共病(需要 體重減輕或?qū)⒈惑w重減輕改善)的受試者具有大于或等于25kg/m2的BMI。在亞洲國家，包 括日本，“肥胖受試者”是指患有至少一種肥胖癥誘導(dǎo)或肥胖癥相關(guān)的共病(需要體重減輕 或?qū)⒈惑w重減輕改善)的BMI大于或等于25kg/m2的受試者。在亞洲國家，“具有患肥胖癥 風(fēng)險的受試者”是BMI大于23kg/m2到低于25kg/m2的受試者。
本文使用的術(shù)語“肥胖癥”旨在包括肥胖癥的所有上述定義。肥胖癥誘導(dǎo)或肥胖癥相關(guān)的共病包括，但不限于，糖尿病，2型非胰島素依賴型糖 尿病，受損的葡萄糖耐受，受損的空腹葡萄糖，胰島素抗性綜合征，血脂異常，高血壓，高尿 酸血癥，痛風(fēng)，冠狀動脈病，心肌梗死，心絞痛，睡眠呼吸暫停綜合征，匹克威克綜合征，脂肪 肝；腦梗死，腦血栓形成，短暫性缺血性發(fā)作，矯形外科病癥，變形性關(guān)節(jié)炎，腰痛，月經(jīng)病， 和不育，具體來說，共病包括高血壓，高脂血癥，血脂異常，葡萄糖不耐受，心血管疾病，睡 眠呼吸暫停，糖尿病，和其他肥胖癥相關(guān)狀況。(肥胖癥和肥胖癥相關(guān)病癥)的“治療”涉及施用本發(fā)明的化合物以減輕或維持肥 胖受試者的體重。治療的一種結(jié)果可以是相對于就在施用本發(fā)明化合物前的受試者體重， 減輕肥胖受試者的體重。治療的另一結(jié)果可以是防止先前因為飲食、運動或藥療法而損失 的體重的恢復(fù)。治療的另一結(jié)果可以是降低肥胖癥相關(guān)疾病的發(fā)生和/或嚴(yán)重性。治療可 以適當(dāng)?shù)膶?dǎo)致受試者食品或熱量攝入的減少，包括總食物攝入的減少，或飲食的特定組分 諸如碳水化合物或脂肪的攝入的減少；和/或營養(yǎng)吸收的抑制；和/或代謝率降低的抑制； 和需要其的受試者的體重減輕。治療還可以導(dǎo)致代謝率的改變，諸如代謝率的增加，而不是 代謝率降低的抑制或除了代謝率降低的抑制之外；和/或通常由體重?fù)p失產(chǎn)生的代謝抗性 的最小化。(肥胖癥和肥胖癥相關(guān)病癥)的“預(yù)防”涉及施用本發(fā)明的化合物以減輕或維持具 有患肥胖癥風(fēng)險的受試者的體重。預(yù)防的一種結(jié)果可以是相對于就在施用本發(fā)明化合物前 的具有患肥胖癥風(fēng)險的受試者的體重，減輕該受試者的體重。預(yù)防的另一結(jié)果可以是防止 先前因為飲食、運動或藥療法而損失的體重的恢復(fù)。如果治療是在具有患肥胖癥風(fēng)險的受 試者中肥胖癥發(fā)病前施用的，預(yù)防的另一結(jié)果可以是預(yù)防肥胖癥發(fā)生。如果治療是在具有 患肥胖癥風(fēng)險的受試者中肥胖癥發(fā)病前施用的，預(yù)防的另一結(jié)果可以是降低肥胖癥相關(guān)病 癥的發(fā)生和/或嚴(yán)重性。此外，如果治療是在已患肥胖的受試者中開始的，這類治療可以預(yù) 防肥胖癥相關(guān)病癥(諸如，但不限于，動脈硬化，II型糖尿病，多囊卵巢病，心血管病，骨關(guān) 節(jié)炎，皮膚病癥，高血壓，胰島素抗性，高膽固醇血癥，高甘油三酯血癥，和膽石病)的發(fā)生、 進(jìn)展或嚴(yán)重性。本文中肥胖癥相關(guān)病癥與肥胖癥有關(guān)，由肥胖癥造成或由肥胖癥產(chǎn)生。肥胖癥相 關(guān)病癥的實例包括進(jìn)食過量和易餓病，高血壓，糖尿病，升高的血漿胰島素濃度和胰島素抗 性，血脂異常，高脂血癥，子宮內(nèi)膜癌，乳癌，前列腺癌和結(jié)腸癌，骨關(guān)節(jié)炎，阻塞性睡眠呼吸 暫停，膽石病，膽結(jié)石，心臟病，異常心臟節(jié)律和心律不齊，心肌梗死，充血性心力衰竭，冠心 病，猝死，中風(fēng)，多囊卵巢病，顱咽管瘤，Prader-Willi綜合征，垂體綜合征，GH缺陷受試者， 正常變異身材矮小癥，特納氏綜合征，和其他顯示代謝活性降低或作為總不含脂肪物質(zhì)百 分比的靜息時能量消耗降低的病理學(xué)狀況，例如，患急性淋巴母細(xì)胞性白血病的兒童。肥胖 癥相關(guān)病癥的其他實例是代謝綜合征，亦稱為綜合征X，胰島素抗性綜合征，性別和生殖功 能障礙，諸如不育，男性的性腺機能減退和女性的多毛癥，胃腸道運動病癥，諸如肥胖癥相 關(guān)的胃_食管回流，呼吸性病癥，諸如肥胖癥_換氣不足綜合征(匹克威克綜合征)，心血管 病癥，炎癥，諸如血管系統(tǒng)的全身性炎癥，動脈硬化，高膽固醇血癥，高尿酸血癥，下腰疼痛， 膽囊疾病，痛風(fēng)，和腎癌。本發(fā)明的化合物還可用于降低肥胖癥繼發(fā)性結(jié)果的風(fēng)險，諸如降 低左心室肥大的風(fēng)險。
本文使用的術(shù)語“糖尿病”包括胰島素依賴性糖尿病(IDDM，亦稱為I型糖尿病) 和非胰島素依賴性糖尿病(NIDDM，亦稱為II型糖尿病)。I型糖尿病，或胰島素依賴性糖尿 病，是胰島素(調(diào)節(jié)葡萄糖利用的激素)完全缺陷的結(jié)果。II型糖尿病，不依賴胰島素的糖 尿病(即，非胰島素依賴性糖尿病)，經(jīng)常在正?；蛏踔辽咚降囊葝u素情況下發(fā)生，看 起來是組織無法對胰島素做出合適應(yīng)答的結(jié)果。大部分II型糖尿病患者也是肥胖的。本 發(fā)明的化合物可用于治療I型和II型糖尿病。該化合物對治療II型糖尿病尤其有效。本 發(fā)明的化合物還可用于治療和/或預(yù)防妊娠期糖尿病。當(dāng)與藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合時，此處公開的Angptie肽化合物可在藥物組合物 中使用。這類組合物包括治療有效量的Angptie肽化合物和藥學(xué)上可接受的載體。這類組 合物也可以包括(除了 Angptie肽化合物和載體外)稀釋劑，填充劑，鹽，緩沖液，穩(wěn)定劑， 增溶劑，和其他本領(lǐng)域公知的材料。如果需要，包括Angptie肽化合物的組合物可以采用鹽 形式施用，條件是所述鹽是藥學(xué)上可接受的。可以采用合成有機化學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員已知 的標(biāo)準(zhǔn)方法制備鹽。術(shù)語“個體”旨在包括人和伙伴或家養(yǎng)動物諸如狗，貓，馬，等等。因此，包括式I的 組合物還可用于治療或預(yù)防貓和狗的肥胖癥和肥胖癥相關(guān)病癥。因此，術(shù)語“哺乳動物”包 括伙伴動物諸如貓和狗。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指從藥學(xué)上可接受的無毒堿或酸(包括無機或有機 堿以及無機或有機酸)制備的鹽。源自無機堿的鹽包括鋁，銨，鈣，銅，鐵，亞鐵，鋰，鎂，三 價錳鹽，二價錳，鉀，鈉，鋅，等等。尤其優(yōu)選的是銨，鈣，鎂，鉀，和鈉鹽。由藥學(xué)上可接受 的有機無毒堿衍生的鹽包括以下的鹽伯胺，仲胺，和叔胺，取代胺(包括天然存在的取代 胺)，環(huán)胺，和堿性離子交換樹脂，諸如精氨酸，甜菜堿，咖啡因，膽堿，N, N' -二芐基乙二 胺，二乙胺，2-二乙氨基乙醇，2-二甲氨基乙醇，乙醇胺，乙二胺，N-乙基嗎啉，N-乙基哌 啶，葡糖胺，氨基葡萄糖，組氨酸，hydrabamine，異丙胺，賴氨酸，甲基葡糖胺，嗎啉，哌嗪，哌 啶，聚胺樹脂，普魯卡因，嘌呤，可可堿，三乙胺，三甲胺，三丙胺，氨丁三醇，等等。術(shù)語“藥 學(xué)上可接受的鹽”還包括所有可接受的鹽諸如醋酸鹽，乳糖醛酸鹽，苯磺酸鹽，月桂酸鹽， 苯甲酸鹽，蘋果酸鹽，重碳酸鹽，馬來酸鹽，硫酸氫鹽，扁桃酸鹽，酒石酸氫鹽，甲磺酸鹽，硼 酸鹽，甲基溴化物，溴化物，甲基硝酸鹽，乙二胺四乙酸鈣，甲基硫酸鹽，右旋樟腦磺酸鹽，黏 酸鹽，碳酸鹽，萘磺酸鹽，氯化物，硝酸鹽，克拉維酸鹽，N-甲基葡糖胺，檸檬酸鹽，銨鹽，二 氫氯化物，油酸鹽，乙二胺四乙酸鹽，草酸鹽，乙二磺酸鹽，雙羥萘酸鹽(撲酸鹽)，丙酸酯 十二烷基硫酸鹽，棕櫚酸鹽，乙磺酸鹽，泛酸鹽，富馬酸鹽，磷酸鹽/ 二磷酸鹽，葡庚糖酸鹽， 聚半乳糖醛酸鹽，葡萄糖酸鹽，水楊酸鹽，谷氨酸鹽，硬脂酸鹽，glycollylarsanilate，硫酸 鹽，hexylresorcinate，堿式醋酸鹽，hydrabamine，琥珀酸鹽，氫溴酸鹽，丹寧酸鹽，鹽酸鹽， 酒石酸鹽，羥基萘甲酸鹽，teolate，碘化物，甲苯磺酸鹽，isothionate，三乙基碘，乳酸鹽， panoate，戊酸鹽，等等，它們可以用作改變?nèi)芙庑曰蛩馓匦缘膭┬突蛴糜诔掷m(xù)釋放或前 體藥物制劑。應(yīng)理解，如本文使用的，涉及通式(I)的Angptie肽化合物還表示包括藥學(xué)上 可接受的鹽。此處使用的術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”表示不干擾活性成分生物活性的功效的無毒 材料，經(jīng)由聯(lián)邦政府或州政府的管理機構(gòu)批準(zhǔn)或列于美國藥典或其他公認(rèn)的用于動物和更 具體的是人中的藥典。術(shù)語“載體”表示與治療劑一起施用的稀釋劑，佐劑，賦形劑，或媒介物(vehicle)，包括但不限于諸如水和油的無菌液體。載體的性質(zhì)將取決于施用途徑。 Angptie肽化合物可以包括多聚體(例如，異二聚體或同二聚體)或含其自身或其他肽的 復(fù)合物。因此，本發(fā)明的藥物組合物可以包括采用這類多體或復(fù)合形式的一種或更多種 Angptl6肽化合物。本文使用的術(shù)語“治療有效量”表示足以顯示有意義的患者受益(即，有關(guān)醫(yī)學(xué)狀 況的治療、治愈、預(yù)防或改善，或這類狀況治療、治愈、預(yù)防或改善比例的增加)的藥物組合 物或方法中每種活性成分的總量。當(dāng)用于單獨施用的單個活性成分時，該術(shù)語只涉及所述 單獨的成分。當(dāng)用于組合時，該術(shù)語涉及產(chǎn)生療效的活性成分的組合量，無論是連續(xù)或同時 地組合施用。藥物組合物可以包括一種或更多種Angptl6肽化合物；一種或更多種Angptl6肽 化合物和一種或更多種其他用于治療代謝病癥的藥劑；或包括一種或更多種Angptie肽化 合物的藥物組合物可以與包括用于治療代謝病癥的藥劑的藥物組合物同時使用。這類病癥 包括，但不限于，肥胖癥，代謝綜合征或綜合征X，II型糖尿病，糖尿病的并發(fā)癥，高血壓，血 脂異常，心血管疾病，膽結(jié)石，骨關(guān)節(jié)炎，胰島素抗性和某些形式的癌癥。當(dāng)藥物組合物包括用于治療代謝病癥的另一藥劑或治療包括第二藥物組合物 (包括用于治療代謝病癥的藥劑)時，所述藥劑包括，但不限于，用于肥胖癥和糖尿病的其 他注射用產(chǎn)品，諸如肽、抗體和蛋白。預(yù)期的是改善代謝病癥的藥劑，諸如Adiponectin，以 及引起體重?fù)p失或改善的血糖控制的抗體(諸如葛瑞林(ghrelin)抗體，myostatin抗體， 抗-PCI，抗-胎球蛋白，等等)。進(jìn)一步預(yù)期的是藥劑諸如大麻素(CBl)受體拮抗劑，胰高 血糖素樣肽1 (GLP-I)受體激動劑，Byetta，胃泌酸調(diào)節(jié)肽衍生物，NMU衍生物和類似物，NMS 衍生物和類似物，瘦素，PYY3-36衍生物，PP衍生物，胰淀素(amylin)衍生物，脂酶抑制劑， 四氫利普他丁，2-4-二硝基酚，阿卡波糖，西布曲明，phentamine，脂肪吸收阻斷劑，辛伐他 汀，美伐他汀，依澤替米貝，阿托伐他汀，sitagliptin，二甲雙胍，奧利司他，Qnexa,托吡酯， 納曲酮，bupriopion,苯丁胺，氯沙坦，含氫氯噻嗪的氯沙坦，等等。和Angptl6肽化合物聯(lián)用的合適藥劑，包括，但不限于(a)抗糖尿病劑諸如(1) PPAR γ激動劑諸如gl itazones (例如環(huán)格列酮；達(dá) 格列酮；恩格列酮；isaglitazone(MCC-555)；吡格列酮(ACTOS)；羅格列酮(AVANDIA)； 曲格列酮；rivoglitazone，BRL49653 ；CLX-0921 ；5-BTZD，Gff-0207, LG-100641，R483, 和 LY-300512，等等，以及在 W097/10813，97/27857，97/28115，97/28137，97/27847， 03/000685，和03/027112中公開的化合物，和SPPARMS (選擇性PPAR Y調(diào)節(jié)劑)諸如 T13l(Amgen), FK614(Fujisawa), netoglitazone，禾口 metaglidasen ； (2)縮二胍諸如丁雙 胍；二甲雙胍；和苯乙基二胍，等等；(3)蛋白酪氨酸磷酸酶-IB(PTP-IB)抑制劑諸如ISIS 113715，A-401674, A-364504，IDD-3，IDD 2846，KP-40046，KR61639,MC52445, MC52453, C7, 0C-060062, 0C-86839, 0C29796, TTP-277BC1，以及在 WO 04/041799，04/050646，02/26707， 02/26743，04/092146，03/048140，04/089918，03/002569，04/065387，04/127570，和 US 2004/167183 ；中公開的那些藥劑；(4)磺酰脲諸如醋磺環(huán)己脲；氯磺丙脲；氯磺丙脲；格列 吡嗪(glibenclamide)；格列甲嗪；格列本脲(glyburide)；格列美脲；格列齊特；格列太 特；格列喹酮；格列索脲；甲磺氮卓脲；和甲苯磺丁脲，等等；(5)氯茴苯酸類諸如瑞格列奈， Hietiglinide(GLUFAST)和那格列胺，等等；(6) α糖苷水解酶抑制劑諸如阿卡波糖；脂解素；卡格列波糖；乙格列酯；米格列醇；伏格列波糖；普拉米星-Q ；salbostatin ；CKD-711 ； MDL-25，637 ；MDL-73，945 ；和 MOR 14，等等;(7) α -淀粉酶抑制劑諸如 tendamistat, trestatin和A1-3688，等等；(8)胰島素促分泌劑諸如利諾格列，那格列胺，米格列奈 (GLUFAST)，IDllOl A-4166等等；(9)脂肪酸氧化抑制劑，諸如氯莫克舍和乙莫克舍，等等； (10) A2拮抗劑，諸如咪格列唑；伊格列哚；德格列哚；咪唑克生；earoxan ；和氟洛克生，等 等；(11)胰島素或胰島素模擬物，諸如biota，LP-100, novarapid，地特胰島素(insulin detemir)，賴脯胰島素(insulin lispro)，甘精胰島素(insulin glargine)，鋅胰島素混 懸液(長效和超長效的)；Lys-Pro 胰島素，GLP-I (17-36)，GLP-I (73-7) (insulintropin)； GLP-I(7-36)-NH2)exenatide/Exendin-4, Exenatide LAR, Linaglutide, AVE0010, CJC 1131，BIM51077, CS 872，TH0318, BAY-694326，GPO10, ALBUG0N(與白蛋白融合的 GLP-1)， HGX-007 (Epac 激動劑)，S-23521，以及在 WO 04/022004，WO 04/37859 中公開的化合物，等 等；(12)非噻唑烷二酮類諸如 JT-501，和 farglitazar(GW-2570/GI-262579)，等等；
(13)PPARa / y 雙激動劑諸如 AVE 0847，CLX-0940，Gff-1536, GW1929, Gff-2433, KRP-297, L-796449, LBM 642， LR-90, LY510919, MK-0767, 0N0 5129， SB 219994， TAK-559, TAK-654,677954(GlaxoSmithkline) , E-3030 (Eisai), LY510929 (Lilly), AK109(Asahi)，DRF2655 (Dr. Reddy)，DRF8351 (Dr. Reddy)，MC3002 (Maxocore)， TY51501(ToaEiyo)，naveglitazar,muraglitizar,peliglitazar,tesaglitazar(GALIDA)， reglitazar(JTT-501)，chiglitazar，以及在 WO 99/16758, WO 99/19313, WO 99/20614， WO 99/38850，WO 00/23415，WO 00/23417，WO 00/23445，W000/50414, WO 01/00579，WO 01/79150，WO 02/062799，WO 03/033481，WO 03/033450, W003/033453 ；中公開的那些； 和(14)其他胰島素致敏藥物；(15)VPAC2受體激動劑；(16)GLK調(diào)節(jié)劑，諸如PSm05，RO 281675，RO 274375 以及在 WO 03/015774，WO 03/000262, WO 03/055482，WO 04/046139， WO 04/045614, WO 04/063179, W004/063194, WO 04/050645，中公開的那些，等等；(17) 類視黃醇調(diào)節(jié)劑諸如在WO 03/000249中公開的那些；(18)GSK 3 β /GSK 3抑制劑諸如 4-[2-(2-溴苯基)-4-(4-氟苯基-IH-咪唑-5-基]吡啶，CT21022, CT20026, CT-98023， SB-216763, SB410111, SB-675236， CP-70949， XD4241 以及在 WO 03/037869,03/03877, 03/037891,03/024447,05/000192,05/019218中公開的那些化合物，等等；(19)糖原磷酸 化酶(HGLPa)抑制劑，諸如 AVE 5688，PSN 357，GPi-879，在 WO 03/037864，W003/091213, WO 04/092158, WO 05/013975, WO 05/013981，US 2004/0220229，和 JP 2004-196702，中公 開的那些，等等；(20) ATP消耗促進(jìn)劑諸如在W003/007990中公開的那些；(21)PPAR γ激動 劑和二甲雙胍諸如AVANDAMET的固定組合；(22)PPAR pan激動劑諸如GSK 677954 ； (23) GPR40(G-蛋白偶聯(lián)受體 40)也稱作 SNORF 55 諸如 BG 700，和在 WO 04/041266,04/022551, 03/099793 中公開的那些；(24)GPRl 19 (也稱作 RUP3 ；SNORF 25)諸如 RUP3，HGPRBMY26, PFI 007，SNORF 25 ； (25)腺嘌呤核苷受體 2B 拮抗劑諸如 ATL-618，AT1-802，E3080，等等； (26)肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑諸如ST 1327 JPST 1326，等等；(27)果糖1，6-二磷酸酶 抑制劑諸如CS-917，MB7803，等等；(28)胰高血糖素拮抗劑諸如AT77077，BAY 694326，Gff 4123X，NN2501，以及在 WO 03/064404, WO 05/00781，US 2004/0209928，US 2004/029943 中 公開的那些，等等；(30)葡萄糖-6-磷酸酶抑制劑；(31)磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK) 抑制劑；(32)丙酮酸脫氫酶激酶(PDK)活化劑；(33) RXR激動劑諸如MC1036，CS00018, JNJ10166806，和在W004/089916，US 6759546中公開的那些，等等；(34) SGLT抑制劑諸如AVE 2268，KGT 1251，T1095/RWJ 394718 ； (35)BLX_1002 ； (b)脂降低藥劑諸如(1)膽汁酸多價螯合劑諸如，考來烯胺，colesevelem，考來 替泊，交聯(lián)葡聚糖的二烷基氨基烷基衍生物；Colestid ；LoCholest ；和Questran ，等等；(2)HMG-CoA還原酶抑制劑諸如阿托伐他汀，伊伐他汀，匹伐他汀，氟伐他汀，洛 伐他汀，普伐他汀，rivastatin,羅蘇伐他汀，辛伐他汀，羅蘇伐他汀(ZD-4522)，等等， 尤其是辛伐他汀；⑶HMG-CoA合酶抑制劑；⑷膽固醇吸收抑制劑諸如FMVP4 (Forbes Medi-Tech), KT6-971(KotobukiPharmaceutical), FM-VA 12 (Forbes Medi-Tech), FM-VP-24(ForbesMedi-Tech), stanol 酯，β -谷甾醇，甾醇苷諸如替奎安(tiqueside)； 和β-丙內(nèi)酰胺(azetidinone)諸如依澤替米貝，和在WO 04/005247中公開的那些， 等等；(5)酰基輔酶A-膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(ACAT)抑制劑諸如阿伐麥布，eflucimibe, pactimibe(KY505)， SMP 797(Sumitomo)， SM32504(Sumitomo)，和在 WO 03/091216 中 公開的那些，等等；(6) CETP 抑制劑諸如 JTT 705 (Japan Tobacco)，torcetrapib，CP 532,632，BAY63-2149 (Bayer), SC 591，SC 795，等等；(7)角鯊烯合成酶抑制劑；(8)抗 氧化劑諸如probuco 1，等等；(9) PPAR α激動劑諸如芐氯貝特，苯扎貝特，環(huán)丙貝特，氯 貝特，依托貝特，非諾貝特，gemcabene,和二甲苯氧庚酸，GW7647，BM 170744 (Kowa)， LY518674(Lilly)，GW590735(GlaxoSmithkline)，KRP-101(Kyorin)，DRF10945(Dr. Reddy)， NS-220/R1593(Nippon Shinyaku/Roche, ST1929(SigmaTau)MC3001/MC3004(MaxoCore Pharmaceuticals, gemcabene calcium,其他苯氧酸(fibric acid)衍生物，諸如 Atromid ，Lopid ，和Tricor ，和在US 6，548，538中公開的那些，等等；(10) FXR受體調(diào)節(jié) 劑諸如 GW 4064(GlaxoSmithkline)， SR 103912， QRX401， LN-6691(LionBioscience)， 和在WO 02/064125，WO 04/045511中公開的那些，等等；(11)LXR受體調(diào)節(jié)劑諸如GW 3965(GlaxoSmithkline)， T9013137，和 XTC0179628(X-C印tor Therapeutics/Sanyo), 和在WO 03/031408, W003/063796, WO 04/072041中公開的那些，等等；(12)脂蛋白合成 抑制劑諸如煙酸；(13)腎素血管緊張素系統(tǒng)抑制劑；(14)PPAR δ部分激動劑，諸如在WO 03/024395中公開的那些；(15)膽汁酸重吸收抑制劑，諸如BARI 1453，SC435，ΡΗΑ384640, S8921，AZD7706，等等；和膽汁酸多價螯合劑諸如考來維侖(WELCH0L/CH0LESTAGEL) ； (16) PPARy 激動劑諸如 GW 501516 (Ligand，GSK)，GW 590735，GW-0742 (GlaxoSmithkline)， T659(Amgen/Tularik), LY934(Lilly)，NNC610050(Novo Nordisk)以及在 W097/28149， WO 01/79197，WO 02/14291，WO 02/46154，W002/46176, WO 02/076957，WO 03/016291，WO 03/033493， WO 03/035603， WO 03/072100， WO 03/097607， WO 04/005253， WO 04/007439， 和JP10237049，中公開的那些，等等；(17)甘油三酯合成抑制劑；(18)微粒體甘油三 酯輸送(MTTP)抑制劑，諸如英普他派，LAB687, JTT130 (Japan Tobacco)，CP346086, 和在WO 03/072532中公開的那些，等等；(19)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑；(20)鯊烯環(huán)氧酶抑制劑； (21)低密度脂蛋白(LDL)受體誘導(dǎo)物；(22)血小板凝集抑制劑；(23)5-L0或FLAP抑 制劑；和(24)煙酸受體激動劑包括HM74A受體激動劑；(25) PPAR調(diào)節(jié)劑諸如在WO 01/25181， W001/79150, WO 02/79162， WO 02/081428， WO 03/016265， W003/033453 中公 開的那些；(26)煙酸結(jié)合鉻，諸如在WO 03/039535中公開的；(27)在WO 03/040114中 公開的取代酸衍生物；(28)注入的HDL諸如LUV/ETC-588 (Pfizer)，AP0-A1 Milano/ETC216 (Pfizer), ETC-642 (Pfizer)，ISIS301012, D4F (Bruin Pharma)，合成的三聚 ApoAl， 以泡沫細(xì)胞作為靶標(biāo)的BioralApo Al，等等;(29) IBAT抑制劑諸如BARI143/HMR145A/ HMR1453(Sanofi-Aventis，PHA384640E(Pfizer)，S8921 (Shionogi)AZD7806(AstrZeneca)， AK105 (Asah Kasei)，等等；(30) Lp_PLA2 抑制劑諸如 SB480848 (GlaxoSmithkline)， 659032 (GlaxoSmithkline)，677116 (GlaxoSmithkline)，等等;(31)影響脂組成的其他 藥劑包括 ETC1001/ESP31015 (Pfizer)，ESP-55016 (Pfizer)，AGI1067 (AtheroGenics), AC3056(Amylin)，AZD4619(AstrZeneca)；禾口(c)抗高血壓的劑諸如(1)利尿劑，諸如噻嗪類，包括氯噻酮，氯噻嗪，二氯磺胺， 氫氟甲噻嗪，吲達(dá)帕胺，和氫氯噻嗪；髓袢利尿藥，諸如丁苯氧酸，利尿酸，呋塞米，和托拉 塞米；留鉀劑(potassiumsparing agents)，諸如阿米洛利，和氨苯喋啶；和醛甾酮拮抗劑， 比如螺留內(nèi)酯，epirenone，等等；(2) β-腎上腺素阻斷劑諸如醋丁洛爾，阿替洛爾，倍他索 洛爾，貝凡洛爾，比索洛爾，波吲洛爾，卡替洛爾，卡維地洛，塞利洛爾，艾司洛爾，茚諾洛爾， metaprolol，納多洛爾，奈必洛爾，噴布洛爾，吲哚洛爾，心得安，索他洛爾，特他洛爾，替利 洛爾，和噻嗎洛爾等等；(3)鈣通道阻斷劑諸如氨氯地平，阿雷地平，阿折地平，巴尼地平， 貝尼地平，芐普地爾，cinaldipine，氯維地平，地爾硫卓，依福地平，非洛地平，戈洛帕米， 伊拉地平，拉西地平，來米地平，樂卡地平，硝吡胺甲酯，硝苯吡啶，尼伐地平，nimodepine, 尼索地平，尼群地平，馬尼地平，普拉地平，和維拉帕米，等等；⑷血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶 (ACE)抑制劑諸如貝那普利；卡托普利；西拉普利；地拉普利；依那普利；福辛普利；咪達(dá) 普利；losinopril ；莫昔普利；喹那普利；喹普利拉；雷米普利；培哚普利；perindropril ； quanipril ；螺普利；tenocapril ；群多普利，和zofenopril，等等；(5)中性肽鏈內(nèi)切酶抑 制劑諸如奧馬曲拉，cadoxatril和依卡曲爾，fosidotril,山帕曲拉，AVE7688, ER4030, 等等；(6)內(nèi)皮縮血管肽拮抗劑諸如替唑生坦，A308165，和YM62899，等等；(7)血管擴張 劑諸如胼苯噠嗪，可樂定，米諾地爾，和煙醇，等等；(8)血管緊張素II受體拮抗劑諸如 坎地沙坦，依普羅沙坦，厄貝沙坦，氯沙坦，pratosartan,他索沙坦，替米沙坦，纈沙坦，和 EXP-3137，F(xiàn)I6828K，和RNH6270,等等；(9) α / β腎上腺素能阻斷劑諸如尼普地洛，阿羅洛 爾和氨磺洛爾，等等；(10) α 1阻斷劑，諸如特拉唑嗪，烏拉地爾，派唑嗪，布那唑嗪，曲馬唑 嗪，多沙唑嗪，萘哌地爾，吲哚拉明，WHIP 164，和XEN010，等等；(11) α 2激動劑諸如洛非西 定，噻美尼定，莫索尼定，利美尼定和guanobenz，等等；(12)醛留酮抑制劑，等等；(13)血管 生成素-2-結(jié)合劑諸如在WO 03/030833中公開的那些；和(d)抗肥胖劑，(1)5HT(血清素)轉(zhuǎn)運蛋白抑制劑，例如，帕羅西汀，氟西汀，苯 氟拉明，氟伏沙明，舍曲林，和丙咪嗪，和在WO 03/00663中公開的那些，以及血清素/去 甲腎上腺素重攝取抑制劑諸如西布曲明(MERIDIA/REDUCTIL)和多巴胺攝取抑制劑/ Norepenephrine攝取抑制齊[Ji者如radafaxine hydrochloride, 353162 (GlaxoSmithkline)， 等等；(2)NE(去甲腎上腺素)轉(zhuǎn)運蛋白抑制劑，諸如GW 320659，despiramine，他舒普侖， 和諾米芬辛；(3)CBl (大麻素-1受體)拮抗劑/反向agonists，諸如利莫那班(ACC0MPLIA Sanofi Synthelabo), SR-147778 (Sanofi Synthelabo), AVE1625 (Sanofi-Aventis), BAY 65-2520 (Bayer), SLV 319(Solvay), SLV326 (Solvay), CP945598 (Pfizer), Ε-6776(Esteve), 01691(Organix), 0RG14481(Organon), VER24343(Vernalis), NESS0327(Univ of Sassari/Univ of Cagliari),以及在美國專利號 4，973，587，5，013，837,5，081，122,5，112，820,5，292，736,5，532，237,5，624，941,6，028，084, 和 6,509367 ；和 W096/33159， W097/29079, W098/31227, WO 98/33765， W098/37061, W098/41519, W098/43635, W098/43636, W099/02499, W000/10967, W000/10968, WO 01/09120， W001/58869, WO 01/64632， WO 01/64633， WO 01/64634， WO 01/70700， WO 01/96330, W002/076949, WO 03/006007, WO 03/007887, WO 03/020217, WO 03/026647, WO 03/026648， WO 03/027069， WO 03/027076， WO 03/027114， WO 03/037332， WO 03/040107， W004/096763,W0 04/111039,WO 04/111033,WO 04/111034, WO 04/111038,WO 04/013120， WO 05/000301, WO 05/016286, WO 05/066126 和 EP-658546 等等中公開的那些；(4)葛瑞林(ghrelin)激動劑 / 拮抗劑，諸如 BVT81-97 (BioVitrum), RC1291 (Rejuvenon)，SRD-04677 (Sumitomo)，未酰化的葛瑞林(TheraTechnologies)， 和在 WO 01/87335，WO 02/08250, WO 05/012331 中公開的那些，等等；(5)H3 (組胺 H3) 拮抗劑/反向激動劑，諸如噻普酰胺，3-(1Η-咪唑-4-基)丙基N-(4-戊烯基)氨 基 甲酸酉旨)，clobenpropit, iodophenpropit, imoproxifan, GT2394(Gliatech),禾口 A331440,和在W002/15905中公開的那些；0-[3-(1H-咪唑-4-基)丙醇]氨基甲酸 酯(Kiec-Kononowicz，K.等，Pharmazie, 55 349-55 (2000))，包含哌啶的組胺 H3-受 體拮抗劑(Lazewska, D.等，Pharmazie, 56 :927_32 (2001)，二苯甲酮衍生物和相關(guān) 化合物(Sasse，Α.等，Arch. Pharm. (Weinheim) 334 :45_52 (2001))，取代的 N-苯基 氨基甲酸酯(Reidemeister，S.等，Pharmazie, 55 :83_6 (2000))，和 proxifan 衍生 物(Sasse, A.等，J. Med. Chem. · 43 3335-43 (2000))和組胺 H3 受體調(diào)節(jié)劑諸如在 WO 03/024928和WO 03/024929中公開的那些；(6)黑色素濃縮激素1受體(MCHlR)拮抗 劑，諸如 T-226296 (Takeda)，T71 (Takeda/Amgen)，AMGN-608450，AMGN-503796 (Amgen)， 856464 (GlaxoSmithkline)，A224940 (Abbott)，A798(Abbott)，ATC0175/AR224349(Arena Pharmaceuticals), GW803430(GlaxoSmithkine), ΝΒΙ-1Α(Neurocrine Biosciences), NGX-I(Neurogen), SNP-7941(Synaptic), SNAP9847(Synaptic), T-226293(Schering Plough), ΤΡΙ-1361-17 (Saitama Medical School/University of Californialrvine), L^i, 及在 WO 01/21169, WO 01/82925, WO 01/87834, WO 02/051809, W002/06245, WO 02/076929， WO 02/076947， WO 02/04433， WO 02/51809， WO 02/083134， W002/094799, WO 03/004027， WO 03/13574,WO 03/15769,WO 03/028641,WO 03/035624,W003/033476,WO 03/033480,WO 04/004611,WO 04/004726,WO 04/011438,WO 04/028459,WO 04/034702,WO 04/039764,WO 04/052848，WO 04/087680 ；和日本專利申請?zhí)?JP 13226269，JP 1437059，JP2004315511, 中公開的那些，等等；(7)MCH2R(黑色素濃縮激素2R)激動劑/拮抗劑；(S)NPYl (神經(jīng)肽 YYl)拮抗劑，諸如BMS205749, BIBP3226, J-115814, BIBO 3304， LY-357897, CP-671906,禾口 GI-264879A ；以及在美國專利號 6，001，836 ；和 WO 96/14307，WO 01/23387，W099/51600, WO 01/85690, WO 01/85098, WO 01/85173，和 WO 01/89528 ；中公開的那些；(9)NPY5 (神 經(jīng)肽 Y Y5)拮抗劑，諸如 152，804，S2367 (Shionogi)，E-6999 (Esteve)，GW-569180A, GW-594884A(GlaxoSmithkline)，GW-587081X, GW-548118X ；FR 235，208 ；FR226928, FR 240662，F(xiàn)R252384 ；1229U91, GI-264879A，CGP71683A, C-75 (Fasgen) LY-377897，LY366377, PD-160170, SR-120562A, SR-120819A, S2367(Shionogi)， JCF-104,和 H409/22 ；；以及在美國專禾U 號 6，140，354，6，191，160，6，258，837，6，313，298，6，326，375，6，329，395， 6，335，345，6，337，332，6，329，395，和 6，340，683 ；和 EP-01010691， EP-01044970，和 FR252384 ；和 PCT
發(fā)明者C-N·錢, D·J·麥奈爾, H·H·周, M·R·托塔, S·平托, 王富寶 申請人:默沙東公司