專利名稱：包含pcl的微粒及其用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及用于制備包含聚(ε-己內酯)或聚己內酯PCL的微粒的方法，涉及該微粒，涉及生物可降解的可注射凝膠并涉及該凝膠的多種用途。
背景技術：
隨著年齡的增長和/或作為某些疾病的后果，包括肌肉和脂肪的人體軟組織會減 少，影響外貌和/或減少功能。例如，諸如控制膀胱功能和胃反流的控制許多人體自主功能 的括約肌隨著年齡或疾病而減少。已經開發(fā)了諸如可注射牛膠原的多種醫(yī)用填充劑。這 種填充劑具有多種主要與過敏風險有關的缺陷，以及由克雅氏病(Kreutzfeld Jacob' s disease)引起的威脅。作為可注射牛膠原的替代品，已經開發(fā)了其它填充劑，例如包含聚 合物微粒的微粒懸浮液或乳液的植入物，該聚合物包含乳酸和/或乙醇酸重復單元(US 2003/093157 或 WO 98/56431)。然而，這些專利申請中的每一個所公開的填充劑均具有多種缺陷由于最終產品 的構造，包含這樣的填充劑的凝膠的混合和流動性能(即流動注射能力)不是最佳的。因此仍然需要緩慢地再吸收的生物可降解的醫(yī)用或美容植入物，其在人體內不會 引起任何不期望的反應，并且由于基本上為球形的微球在注射時避免聚集、堵塞針孔和形 成結節(jié)，而具有優(yōu)良的諸如流動性能的性能。

發(fā)明內容
本發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)，可以以高效且快速的方法獲得具有優(yōu)良的諸如流動性 能的性能的微球，其中使用粘度較高且包含增溶的PCL及表面活性劑的初始混合物。該方 法的每個特征均在本文中詳盡描述。^^在第一方面中，本發(fā)明涉及制備包含聚(ε -己內酯)(PCL)的微粒的方法，其中該 方法包括如下步驟al)將PCL聚合物增溶，隨后將增溶的PCL聚合物與包含表面活性劑的液體混合， 所述液體的粘度為約IcP至約400. OOOcP,b)由在al)中得到的溶液形成包含PCL的微粒。在第二方面中，本發(fā)明涉及制備包含聚己內酯(PCL)的微粒的方法，其中該方法 包括如下步驟a2)將PCL聚合物增溶在二氯甲烷(DCM)和/或基本上純凈的吐溫中，b)由在a2)中得到的溶液形成包含PCL的微粒。在一優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明包括根據以上定義的兩方面的方法該方法為其中 在步驟a)中，將PCL聚合物增溶在DCM和/或基本上純凈的吐溫中，隨后將所述增溶的PCL 聚合物與包含表面活性劑的液體混合，所述液體的粘度為約IcP至約400. OOOcP0隨后作為 步驟b)，由在a)中得到的溶液來形成包含PCL的微粒。步驟a)
本發(fā)明方法的第一步驟a)包括增溶步驟或由增溶步驟組成或為增溶步驟。步驟a2)本發(fā)明方法的第一步驟由增溶步驟組成或為增溶步驟將PCL聚合物增溶在二氯 甲烷(DCM)和/或基本上純凈的吐溫中，因此，取決于包含本文隨后定義的微粒的凝膠的預 期應用，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)當制備具有中低分子量的微粒時，并且由于沒有有機溶劑，基本上純 凈的吐溫的使用特別有吸引力。中低分子量是指分子量為約1. OOOMn至約50. OOOMn (數(shù)均 分子量)，更優(yōu)選為約1. OOOMn至約40. OOOMn，更優(yōu)選為約5. OOOMn至約40. OOOMn，更優(yōu)選 為約1. OOOMn至約30. OOOMn,更優(yōu)選為約10. OOOMn至約30. OOOMn,更優(yōu)選為約20. OOOMn 至約30. ΟΟΟΜη，并且最優(yōu)選為約1. OOOMn至約30. OOOMn。因此，在本發(fā)明的第二方法中， 提供了三種優(yōu)選的方法一種是使用DCM，其適于提供具有中低分子量或中高分子量的微 粒。中高分子量是指分子量優(yōu)選為約30. OOOMn至約500. OOOMn,更優(yōu)選為約40. OOOMn 至約150. OOOMn,更優(yōu)選為約40. OOOMn至約150. OOOMn,甚至更優(yōu)選為約40. OOOMn至約 100. OOOMn0另一優(yōu)選的方法使用基本上純凈的吐溫，所述方法適于獲得具有中低分子量的 微粒。最后，第三種方法使用DCM與基本上純凈的吐溫的組合。基本上純凈的吐溫優(yōu)選指至少80%的吐溫，或至少90%的吐溫，或大約100%的 吐溫。吐溫是一類表面活性劑，其為聚氧乙烯失水山梨糖醇的酯。可以使用吐溫20、40、60 或80。當在步驟a2)中使用基本上純凈的吐溫時，優(yōu)選在接近PCL的熔融溫度或高于該溫 度下進行該增溶步驟。該溫度接近于PCL的熔融溫度。該溫度優(yōu)選為約50°C至約90°C，或 約60°C至約90°C，更優(yōu)選為約60°C或約80°C。如果已經在步驟a2)中使用了 DCM，為了獲得包含微粒的液體，將在a2)中得到 的溶液隨后加入到包含表面活性劑的液體中。表面活性劑或張力活性劑(tensoactive agent)是在溶液中降低表面張力的化學劑，使得能夠形成穩(wěn)定的小顆粒。表面活性劑在微 粒形成過程中會穩(wěn)定微粒。合適的表面活性劑包括但不限于甲基纖維素(MC)、聚乙烯醇 (PVA)、諸如聚氧乙烯失水山梨糖醇的聚山梨醇酯或Pluronics ，優(yōu)選聚氧乙烯山梨糖醇酐 單油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐三油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨 糖醇酐三硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單棕櫚酸酯或聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯， 優(yōu)選聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯(吐溫80(TM))、聚氧乙烯山梨糖醇酐單硬脂酸酯(吐溫 60 (TM))和聚氧乙烯山梨糖醇酐單月桂酸酯(吐溫20(TM))，并且甚至更優(yōu)選聚氧乙烯山梨 糖醇酐單油酸酯(吐溫80 (TM))。在優(yōu)選的實施方案中，表面活性劑不是諸如EP 1872803 或US 2003/0157187所述的聚乙烯醇(PVA)的生物相容性有限的表面活性劑。由于MC的生 物相容性，MC為其中最優(yōu)選的表面活性劑。因此，預期采用DCM和隨后的MC作為表面活性 劑的方法比采用DCM和隨后的PVA作為表面活性劑的方法更有效由于MC的生物相容性， 在方法的最后階段不需要徹底洗滌所形成的微粒以除去表面活性劑。優(yōu)選為包含表面活性劑的液體或凝膠液體的液體優(yōu)選定義為 粘度為約IcP至 約400. OOOcP的液體，或粘度為約IOcP至約100. OOOcP的液體，或粘度為約50cP至 約100. OOOcP的液體，或粘度為約75cP至約50. OOOcP的液體，或粘度為約IOOcP至約 50. OOOcP的液體，或粘度為約IOOcP至約1. OOOcP的液體，或粘度為約75cP至約1. OOOcP的 液體。其粘度最優(yōu)選為約75cP至約300cP。粘度優(yōu)選在室溫或將PCL增溶的溫度下測定。 在優(yōu)選實施方案中，加入的表面活性劑MC的濃度更優(yōu)選為約0.至約5. ，更優(yōu)選為約O.至約5.，更優(yōu)選為約0.至約2.，最優(yōu)選為約1. Ow/
w%?？缮藤従哂胁煌肿恿康亩喾N類型的MC (Mn = 14000、Mn = 41000、Mn = 63000或 Mn = 88000)。優(yōu)選使用分子量為Mn = 63000的MC。在優(yōu)選實施方案中，優(yōu)選使用約1. 0 / %的MC (Mn = 63000)。使用如此高濃度 的MC對于該方法的效率和所形成的微粒的特性來說具有吸引力初始MC溶液的粘度很高 (IOOcP至120cP)。我們驚奇地發(fā)現(xiàn)將大體積的PCL的DCM濃溶液加入粘性MC溶液中能夠 相當快地完成(少于1分鐘)，并且結果所得到的混合物的粘度也相當高。所得到的混合物 的粘度大約與MC溶液的粘度相同。強力攪拌導致微粒的形成，該微粒如本文隨后所確定的 那樣基本上為球形。PCL在DCM中的濃度如本文隨后所定義。此外，通過蒸發(fā)除去DCM能夠 比使用很少的MC的常規(guī)萃取蒸發(fā)方法(Iooss P et al, (2001), 22 =2785-2794)更快(在 1至3小時內)。步驟al)本發(fā)明方法的第一步驟包括增溶步驟。步驟al)中所顯示的增溶步驟優(yōu)選按照步 驟a2)所描述的那樣進行。然而，可以使用其它液體、溶劑或表面活性劑使PCL聚合物增 溶。實例包括脂肪族化合物、芳香族化合物、含鹵素的化合物、氯仿、不含鹵素的化合物、丙 酮、THF、甲苯、乙酸乙酯或乳酸乙酯等。隨后將增溶的PCL聚合物與包含表面活性劑的液體混合，所述液體的粘度為約 IcP至約400. OOOcP，或約IOcP至約100. OOOcP。該粘度優(yōu)選為約IOcP至約30. OOOcP，或 優(yōu)選為約15cP至約20. OOOcP,更優(yōu)選為約20cP至約10. OOOcP,甚至更優(yōu)選為約40cP至約 5. OOOcP,甚至更優(yōu)選為約50cP至約2. OOOcP,甚至更優(yōu)選為約75cP至約2. OOOcP,甚至更 優(yōu)選為約75cP至約1. OOOcP,甚至更優(yōu)選為約IOOcP至約1. OOOcP,甚至更優(yōu)選為約75cP 至約500cP，或甚至更優(yōu)選為約75cP至約400cP，最優(yōu)選為約75cP至約300cP。粘度優(yōu)選在 室溫或將PCL增溶的溫度下測定。在步驟al)中所使用的表面活性劑優(yōu)選與在步驟a2)中所使用的表面活性劑相 同。這樣的表面活性劑已經在前文中確定。其中，由于MC的生物相容性，優(yōu)選的表面活性 劑包括MC。優(yōu)選的MC濃度和類型已經在前文中確定。所使用的最優(yōu)選的為約1.0 / %的 MC(Mn = 63000cP)。使用如此高濃度的MC得到的粘性溶液對于該方法的效率和如本文隨 后所定義的所形成的微粒特性來說具有吸引力。優(yōu)選地，不希望受到任何理論的限制，本發(fā) 明人認為重要的是步驟al)中所使用的液體和/或在步驟al)的最后階段所形成的溶液的 粘度。任何或所有這些粘度均優(yōu)選足夠高以有利于步驟b)并且使得能夠以高收率形成如 本文隨后所定義的高度均勻的微粒。如實施例中例示的那樣，可以得到直徑為約38μπι至 75 μ m的收率為約60-80%的微粒，這是十分有優(yōu)勢的。甚至可以得到具有這樣的直徑的收 率為約70-80%的微粒。液體及所得到的溶液的優(yōu)選粘度均在本文中定義。步驟b)隨后，從由al)或a2)得到的溶液或混合物形成包含PCL的微粒。取決于在步驟 al)或a2)中所用溶劑的a. ο.特性(a. ο.為DCM和/或吐溫)，按照如下的說明進行截然 不同的步驟。如果已經在步驟al)或a2)中使用了 DCM， 通過萃取蒸發(fā)將DCM從分散在粘性液體 中的包含PCL的微粒中萃取。萃取蒸發(fā)方法也被稱為蒸發(fā)萃取方法，其對技術人員來說是 已知的，并且已經在例如 Journal ofControlled Release (Preparation of biodegradablemicrosheres andmicrocapsules (生物可降解的微球和微膠囊的制備)，Journal of ControlledRelease, (1991)，volume 17:1-22)中描述。由于本文所定義的混合物的高粘 度，可能只得采取強力攪拌(如實施例中所示的約IOOOrpm)。不受任何理論的限制，我們認 為由于強力攪拌，將空氣引入混合物中以產生泡沫，相信這有利于萃取/蒸發(fā)方法。另外， 必須萃取/蒸發(fā)較少量DCM(即如本文隨后所定義的高比率的PCL/DCM)的事實有利于萃取 /蒸發(fā)方法。所述方法持續(xù)約3小時，而使用粘度低得多的混合物的經典萃取/蒸發(fā)方法 (參見實施例)被認為持續(xù)超過14小時的長得多的時間。在萃取蒸發(fā)過程中，包含PCL的 微粒中含有的大部分DCM被萃取到水中并在表面蒸發(fā)。如果已經在加熱下將吐溫作為唯一的溶劑用于步驟al)或a2)中，則由于受控制的冷卻和攪拌條件，形成微粒。最終溫度通常為室溫。可以將混合物加熱至80°C。攪拌可 以為約500rpm。受控制的冷卻可以持續(xù)1至12小時。在本發(fā)明方法的最后階段，得到基本上不含DCM和/或基本上純凈的吐溫的微 粒?；旧喜缓瑑?yōu)選指仍然存在少于70wt%的初始DCM或基本上純凈的吐溫，更優(yōu)選少于 60wt %、50wt %、40wt %、30wt %、20wt %UOwt %,5wt %,2wt %Uwt %,0. 5wt%,0. 3wt%, 0. 2wt%或甚至少于0. lwt%。在一實施方案中，在所形成的微粒中沒有檢測到DCM和/或 吐溫?？梢酝ㄟ^氣相色譜(GC)的方法檢測DCM或吐溫。微粒包含PCL聚合物或由其組成。 任選地，在該方法的最后階段，可以將微粒在水中洗滌一次或多次以除去DCM和/或基本上 純凈的吐溫。如果在本發(fā)明的方法中將DCM和吐溫組合使用作為溶劑，則該方法優(yōu)選與DCM作 為唯一溶劑時的方法相同。在本發(fā)明的上下文中，PCL聚合物是指包含聚_ ε -己內酯或聚己內酯的聚合物。 PCL是生物可降解的、免疫不活躍的、生物相容的和生物可吸收的合成聚合物。本發(fā)明所使 用的PCL聚合物可以購買或通過技術人員公知的方法生產。優(yōu)選使用適用于生物醫(yī)學或美 容應用中的純化的PCL聚合物。聚合物是由被稱為單體的低分子量重復單元構成的分子。 將單體連接生成聚合物的過程稱為聚合。在本發(fā)明的上下文中，可以為聚合物給出技術人員已知的所有可能的含義，包括 例如線性聚合物、共聚物、嵌段共聚物、三元共聚物，或者不同類型的均聚物、共聚物、嵌段 共聚物或三元共聚物的共混物。在另一優(yōu)選的方法中，在步驟al)或a2)中使用ε -己內酯(CL)的共聚物。優(yōu) 選的CL的共聚物為CL與選自L-丙交酯、D-丙交酯、DL-丙交酯、TMC (三亞甲基碳酸酯)、 PEO (聚環(huán)氧乙烷)、乙交酯和DO (二氧環(huán)己酮(dioxanone))的至少一種化合物的共聚物。 當在方法中使用CL共聚物(共聚物、嵌段共聚物)，其中在步驟a2)中將基本上純凈的吐溫 用作唯一的溶劑時，PCL的熔融溫度意指CL共聚物熔融的溫度。在優(yōu)選的方法中，在步驟al)或a2)中使用PCL三元共聚物。優(yōu)選的PCL三元共 聚物為CL與選自L-丙交酯、D-丙交酯、DL-丙交酯、TMC、ΡΕ0、乙交酯和DO的一種化合物 的共聚物。當在方法中使用PCL三元共聚物，其中在步驟a2)中將基本上純凈的吐溫用作 唯一的溶劑時，PCL的熔融溫度意指PCL三元共聚物熔融的溫度?；蛘撸琍CL三元共聚物為PCL與選自以下的兩種化合物的聚合物L_丙交酯、D-丙 交酯、DL-丙交酯、TMC、PE0、乙交酯和D0。除了上述與組分選自L-丙交酯、D-丙交酯、DL-丙交酯、內消旋-丙交酯、TMC、PEO、乙交酯和DO的均聚物/共聚物、嵌段共聚物/三元共聚物 的共混物，其它CL共聚物或共混物可以包含聚酯、聚醚、聚碳酸酯、共聚草酸酯、聚(鄰碳酸 酯)、聚(縮醛)、聚酐、pbt/peo共聚物(PolyActive )及聚膦嗪。在另一優(yōu)選方法中，使用PCL均聚物。PCL均聚物是有利的，因為其為半晶體。因 此，它的形態(tài)是穩(wěn)定的。另外，PCL均聚物為疏水物，因此當將它用作皮膚填充劑時，其再吸 收時間可能比非半結晶生物可吸收聚合物的相應的再吸收時間長。更優(yōu)選使用不包含第二 單體的PCL聚合物，所述第二單體選自乙交酯、二氧環(huán)己酮、三亞甲基碳酸酯和丙交酯及其 組合。另外，作為本方發(fā)明的另一優(yōu)選實施方案，此處所使用的PCL聚合物被另一種聚 合物代替。這樣的其它聚合物可以是基于L-丙交酯、D-丙交酯、DL-丙交酯、內消旋_丙交 酯、TMC、乙交酯或二氧環(huán)己酮的聚合物。取決于預期的應用，所有在本文中公開的聚合物、所得到的微粒和所得到的凝膠 的性質彼此大不相同，并且這通常并不重要。對于注射應用，包含微粒的PCL應當適于通過 適當大小的注射器注射。在優(yōu)選的實施方案中，加入PCL聚合物并以一定的濃度溶解在DCM和/或基本 上純凈的吐溫中，基于重量，所述濃度為高達DCM的約10% (作為唯一的溶劑或與吐溫組 合)，高達DCM的約30% (作為唯一的溶劑或與吐溫組合)，或者當吐溫被用作唯一的溶劑 時，在基本上純凈的吐溫中高達約50%。更優(yōu)選地，加入PCL聚合物并以高達約25%或高 達25%的濃度溶解在DCM中。該百分比主要取決于所使用的PCL的分子量。在更優(yōu)選的實施方案中，PCL/DCM溶液的粘度可以為約5cp至5000cp (室溫下測 定)。該粘度主要取決于所使用的PCL的分子量和所使用的PCL和DCM的濃度。PCL/DCM (w/ w)的比例可以為約IOg PCL/100gDCM至20g PCL/100g PCL0該比例高于之前在現(xiàn)有技術 中所使用的比例。由于使用盡可能少的DCM，使用如本文所定義的高比例PCL/DCM是有利的。因此， 預期用以獲得本發(fā)明微粒的DCM的蒸發(fā)方法比經典的方法快，該經典的方法使用的DCM比 本發(fā)明多。粒子的大小和分布可能受所用表面活性劑(優(yōu)選MC)的特性、PCL聚合物(優(yōu)選 均聚物)、PCL/溶劑(DCM和/或基本上純凈的吐溫)比例(優(yōu)選的比例已給定)以及方法 條件的影響。微粒在另一方面中，本發(fā)明提供了可通過如之前的部分所概述的第一和/或第二方面 的方法得到的微粒。只要這些微粒具有如下所示的期望特性，則微粒本身不必采用如上所 述的方法獲得。本發(fā)明的方法是用于獲得這些微粒的一優(yōu)選方法。本發(fā)明的微粒優(yōu)選具有 至少一個以下的特性i)直徑分布為5μπι至200μ ，更優(yōu)選20 μ m至150 μ m，甚至更優(yōu)選30 μ m至 90 μ m,甚至更優(yōu)選25 μ m至75 μ m，甚至更優(yōu)選38 μ m至75 μ m，甚至更優(yōu)選25 μ m至50 μ m。ii)密度、形態(tài)和內含物均勻(參見作為實施例的

圖1)球形并且表面光滑。iii)基本上球形的微球。本發(fā)明的微粒的均勻特性(特征i)、ii)和/或iii))非常具有吸引力，因為它會賦予源自該微粒的凝膠最佳的流動性能(如以下部分所示)我們預期在注射器中沒有聚 集，用注射器注射時沒有針孔堵塞。該均勻特性代表了相對于用作植入物的已知凝膠的改 進。例如，本發(fā)明的微粒具有比在EP 1872803或US 2003/0157187中公開的微粒更具吸引 力的性質，這優(yōu)選是由于使用包含表面活性劑的液體，所述液體在步驟al)中的粘度為約 IcP至約400. OOOcP，和/或優(yōu)選由于使用MC作為表面活性劑，更優(yōu)選使用MC，甚至更 優(yōu)選使用MC (Mn = 63000)，和/或優(yōu)選由于使用如本文所定義的較高比例的PCL/DCM， 和/或優(yōu)選由于已經進行萃取蒸發(fā)的方式。
作為另一實例，本發(fā)明的微粒具有比在Iooss(Iooss P et al，(2001), 22 2785-2794)中公開的微粒更具吸引力的性質，這優(yōu)選是由于使用包含表面活性劑的液體， 所述液體在步驟al)中的粘度為約IOcP至約100. OOOcP，和/或優(yōu)選由于使用如本文所定 義的較高比例的PCL/DCM，和/或優(yōu)選由于使用作為表面活性劑的MC的特定類型和濃度，更 優(yōu)選由于使用MC，甚至優(yōu)選MC (Mn = 63000)，和/或優(yōu)選由于已經進行萃取蒸發(fā)的 方式。該微粒如此均勻以至于它們也可以被稱為微球。微粒的均勻性(球形并且表面光滑 以及已經如i)、ii)和iii)所定義的任何特征)是由于其中本發(fā)明的具體方法，優(yōu)選由于 使用包含表面活性劑的液體，所述液體在步驟al)中的粘度為約IcP至約400. OOOcP，和/ 或優(yōu)選由于如本文所定義的最佳比例的PCL/DCM，和/或優(yōu)選由于所使用的表面活性劑，更 優(yōu)選MC(Mn = 63000)，和/或優(yōu)選由于已經進行萃取/蒸發(fā)處理的方式。微粒(微球)的優(yōu)選直徑為20 μ m至150 μ m。直徑優(yōu)選大于20 μ m,因為它將巨 噬細胞的直接吞噬作用最小化。直徑優(yōu)選小于150 μ m，因為預期當在凝膠中存在該微粒時 具有甚至更好的流動性能?；蛘?，優(yōu)選的直徑為25 μ m至50 μ m。本發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)，如前文所定義的包含中低分子量PCL的微粒非常適合 用于本發(fā)明。當存在于本發(fā)明的凝膠中時，這種包含中低分子量PCL的微粒比包含具有如 本文隨后所定義的中高分子量PCL的微粒的凝膠表現(xiàn)出相對較短的再吸收時間。微?？梢宰鳛槔鋬龈稍?、凍干或自由流動的粉末在干燥狀態(tài)下貯存并在合適的條 件下保存數(shù)年。由于凍干法易于消毒和儲存，因此其是有利的。當存在于凝膠中及在體內注 射時，聚合物的分子量和微粒固有的物理性質(除了球形并且表面光滑外，參見如前文i)、 ii)和/或iii)所定義的至少一種特征)至少部分地決定了它們的體內降解行為。碰在另一方面中，本發(fā)明涉及包含如之前部分所定義的微粒和載體的生物可降解 的可注射凝膠。載體可以包含粘度增強劑、密度增強劑和/或緊張潤濕增強劑(tonicity wetting enhancing agent)。粘度增強劑可以選自羧甲基纖維素鈉(CMC)、聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)、甲基纖維素(MC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)。然而，也可以使用其它粘度增強劑，如 對本領域的技術人員來說顯而易見的那樣。CMC優(yōu)選用作粘度增強劑。盡管也可以使用其它合適的密度劑，密度增強劑可以選自山梨醇、甘露醇和果糖。 緊張潤濕劑可以是聚山梨醇酯(吐溫20、40、60或80)。也可以使用其它的緊張潤濕劑。本 文所公開的凝膠可以包括不同數(shù)量的粘度增強劑、密度增強劑和/或緊張潤濕增強劑。在 優(yōu)選的實施方案中，凝膠包含約0襯％至8wt%的粘度增強劑，和/或約0wt%至約50wt% 的密度增強劑，和/或約0襯％至約5. 0wt%的緊張潤濕劑。更優(yōu)選地，凝膠包含約0. Iwt % 至8wt %的粘度增強劑，和/或約Owt %至約50wt %的密度增強劑，和/或約Owt %至約5.Owt%的緊張潤濕劑。本文所公開的凝膠可以包括不同數(shù)量的微粒并且通?？梢园sIOwt %至約 50wt%的微粒，約15wt%至約50wt%的微粒，約25wt%至約45wt%的微粒，約35wt%至約 45襯％的微粒。通常選擇載體的數(shù)量以獲得具有期望流動性能即合適粘度的懸浮液。技術 人員知道，根據欲用于本發(fā)明凝膠的應用類型，可以使用具有特定特性的針。對于所使用的 每種類型的針，為了得到期望的流動性能，可能必須優(yōu)化凝膠的粘度。作為也是優(yōu)選實施方 案的實例，采用26-30號針和CMC，適宜的粘度為約20000cp至200000cp。在優(yōu)選實施方案 中，載體為藥物或美容可接受的載體和/或生物醫(yī)學可接受的載體。生物可降解與生物可再吸收同義。凝膠的期望的生物可再吸收性可根據所使用的 PCL聚合物類型和預期用途/應用等而變化。在優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的凝膠在注射后的 10年或少于10年內，或在注射后的5年或少于5年內，或在注射后的2年或少于2年內，或 在注射后的1年或少于1年內是生物可再吸收的。所得到的凝膠包含如之前所定義的微粒的懸浮液并且比其它已知的凝膠更具吸 引力本發(fā)明的凝膠包含微粒，所述微?；旧蠟榫哂泄饣砻娴那蛐?具有如前文i)、 ii)和/或iii)所定義的至少一種以下特征)并因此提高了凝膠的流動性能。本發(fā)明人出 人意料地發(fā)現(xiàn)，可以有利地使用包含具有中低分子量的微粒的凝膠。本發(fā)明的凝膠包含聚 合物，當在體內注射時，所述聚合物更穩(wěn)定(其降解動力學比其它聚合物慢)。凝膠包含微 粒和載體。注射后載體在3至4個月內通常會降解、溶解或再吸收。微粒的再吸收時間取 決于所使用的PCL的初始分子量。例如，預期包含具有如前文所定義的中低分子量的PCL 聚合物的微粒的降解或再吸收時間為約6個月至2年。例如，根據已經將其注射的位置及 微粒的其它特性，預期包含微粒的凝膠的再吸收時間為約6至15個月或12至15個月，所 述微粒包含分子量為約10. OOOMn的PCL聚合物。再如，根據已經將其注射的位置及微粒的 其它特性，預期包含微粒的凝膠的再吸收時間為約18至24個月或20至約24個月，所述微 粒包含分子量為約40. OOOMn的PCL聚合物。這種凝膠可用于如以下定義的多種類型的應 用。凝膠可以以無菌懸浮液的形式貯存在容器中。優(yōu)選地，容器為可隨時使用的預裝注射 器。注射器也可以作為兩室預裝注射器提供，一室含有(凍干)微粒并且另一室含有藥物 可接受的載體。如果將凝膠通過例如水或雙蒸水臨時重構用作注射制劑，則凝膠(懸浮液) 可應用于皮內或皮下注射?；蛘?，容器可以是小瓶。這里也用作注射器，小瓶可含有待用的 本發(fā)明的凝膠?；蛘撸∑靠稍谝皇抑泻?凍干)微粒并在另一室中含有藥物可接受的 載體。用于在注射器或小瓶中臨時重構凝膠的水優(yōu)選為蒸餾水，更優(yōu)選為雙蒸水，甚至 更優(yōu)選為無菌水。最優(yōu)選使用PBS (磷酸鹽緩沖液)。載體可以進一步包含選自抗凍劑和緩沖劑的組分?？箖鰟┦窃诶鋮s過程中抑制或 減少生物組織中破壞性冰晶的形成的化學劑。合適的抗凍劑包括但不限于諸如d-甘露醇、 乳糖、蔗糖、果糖、山梨醇和葡聚糖的糖和碳水化合物，優(yōu)選d-甘露醇。凝膠的載體中抗凍 劑的濃度可根據預期的應用、微粒和所選的抗凍劑的特性而變化。凝膠通?？砂s0至 約45%，或約30%至約40%重量的抗凍劑。緩沖劑是加入溶液中以使溶液能夠抵抗稀釋或加入少量酸或堿所引起的pH值變 化的一種或多種化合物。有效的緩沖體系使用含有大且大約相等濃度的共軛酸-堿對(或緩沖劑)的溶液。本文所使用的緩沖劑可為藥物可接受的任何這樣的化合物，包括但不限 于磷酸和檸檬酸的鹽(共軛酸和/或堿)。凝膠通?？砂sO至約0.2%，或約0. 至 約0. 15%重量的緩沖劑。優(yōu)選的緩沖劑為PBS。在另一優(yōu)選實施方案中，將包含微粒的凝膠用作藥劑。可將本文中的凝膠自身看 作藥劑，該凝膠自身不含任何活性成分，或優(yōu)選不含任何藥劑。在該第一種情況下，凝膠優(yōu) 選用作填充劑或植入物以在各種治療中增加哺乳動物中的軟組織，所述治療包括治療皮膚 異?；驓p、控制膀胱功能(治療尿道括約肌缺陷)和/或控制胃反流(治療幽門括約肌 缺陷)、聲帶缺陷、先天性畸形、用于牙科治療的填補牙齦。在所有這些用途中，哺乳動物優(yōu) 選為人類。在所有這些用途中，通常通過皮內或皮下注射器注射將凝膠引入待治療或給藥 的組織部位。在優(yōu)選實施方案中，將凝膠用作填充劑和/或植入物。在更優(yōu)選的實施方案中，凝 膠為皮膚填充劑。皮膚填充劑可用于矯正皮膚異常，所述皮膚異常形成了對個體的健康威 脅，例如手術后的皮膚異?；蛑T如燒傷的皮膚損毀。當將凝膠用作藥劑和根據作為皮膚填 充劑的應用用作皮膚填充劑時，在本發(fā)明方法的步驟al)或a2)中，PCL聚合物優(yōu)選具有如 前文所定義的中低分子量或中高分子量。在另一更優(yōu)選的實施方案中，將本文所公開的凝膠用作植入物或填充劑來治療諸 如尿失禁(膀胱功能的控制)的各種括約肌缺陷。膀胱控制的喪失可能是因為由形體動作 (咳嗽、打噴嚏、運動)引起的壓力和/或沖動或包括睡眠在內的意外時刻的大量泄漏。所 有類型的失禁可以忽略患者的年齡使用本發(fā)明的凝膠來治療。排尿節(jié)制取決于可塑性貯器 和括約肌效率，其具有2個組成部分(1)膀胱頸上的不隨意平滑肌；和(2)外括約肌的隨 意骨骼肌。因此，可加入本發(fā)明的凝膠來對括約肌或尿道形成局部壓迫，從而通過一次或多 次的凝膠注射減少內腔大小并且因此基本上減少或消除壓力性尿失禁。在這些實例中，可 通過注射將凝膠嵌入尿道或尿道周圍組織。因此，通常的步驟包括在膀胱鏡的輔助下將凝 膠注入膀胱頸周圍的組織中以增加組織體積，并隨后將尿道腔接合。凝膠增加體積并幫助 關閉尿道以減少壓力性失禁。通?？梢灾芷谛缘闹貜妥⑸湟缘玫阶罴呀Y果。在另一更優(yōu)選的實施方案中，將凝膠用作填充劑或植入物用于控制胃反流(來治 療幽門括約肌的缺陷)。胃食管反流病(GERD)涉及胃酸和其它成分反流進入食道或膈。 70%的反流發(fā)作發(fā)生在較低的食管括約肌的自發(fā)松弛過程中，或由于吞咽之后的長期松 弛。30%發(fā)生在低括約肌壓力周期期間。主要的癥狀是胃灼熱(飯后30至60分鐘)。GERD 的典型表現(xiàn)包括哮喘、慢性咳嗽、喉炎、喉嚨痛和與心臟無關的胸痛。GERD是終身疾病，需要 生活方式的改變和醫(yī)療干預。因此，可注射本發(fā)明的凝膠以增加較低的食管括約肌的體積和對其的局部壓迫。 因此，通常的步驟包括在內窺鏡的輔助下將凝膠注入較低的食管括約肌周圍的組織中以增 加組織體積，并隨后接合，使括約肌的壓力正?；?。凝膠增加體積并幫助關閉括約肌來減少 反流?？梢悦磕曛貜妥⑸湟缘玫阶罴呀Y果?？刹捎镁植柯樽韥碜⑸淠z。
當將凝膠用作控制膀胱功能和/或胃反流的藥劑時，在本發(fā)明方法的步驟al)或 a2)中，所用的PCL聚合物優(yōu)選具有如前文所定義的中高分子量。這是優(yōu)選的，因為此處所 用的凝膠將在注射位置停留長得多的時間(體內的降解速率較低)并且外科手術干預不必經常重復。在另一更優(yōu)選的實施方案中，將凝膠用作填充劑或植入物以治療可影響所有年齡 的男性的勃起功能障礙(ED)。本發(fā)明的凝膠可用于治療ED。通常的步驟包括將凝膠直接 注射在遍及海綿體的整個長度的深筋膜上。在另一更優(yōu)選的實施方案中，將凝膠用作填充劑或植入物以治療聲帶。本發(fā)明的 凝膠可通過改變該軟組織塊的形狀用于喉部聲音發(fā)生器的聲帶內注射。本發(fā)明進一步涵蓋了當凝膠自身被看作藥劑時，其進一步包含活性成分，該活性 成分也優(yōu)選為藥劑。本文所用的“藥劑”可以是期望對凝膠的注射位置給藥的任何生物活性 組合物、藥品、藥物或化合物。在這種情況下，加入凝膠中的藥劑可使凝膠功能更容易發(fā)揮， 并且可以包含麻醉劑以減少與注射凝膠或組合物有關的疼痛或不適，該凝膠或組合物促進 PCL或微粒的結合或減少注射位置的創(chuàng)傷。在一優(yōu)選實施方案中，將藥劑加入到凝膠中。 示例性麻醉劑包括但不限于利多卡因、塞羅卡因、普魯卡因、苯佐卡因、丙胺卡因、羅哌卡因 (ripivacaine)和異丙酚。能夠在本文所公開的凝膠中使用的其它藥劑包括肽；組織再 生劑；抗生素；類固醇；纖連蛋白；細胞活素；生長因子；止痛劑；防腐劑；α-、β或γ-干 擾素；紅細胞生成素；胰升糖素；降鈣素；肝素；白細胞介素-1 ；白細胞介素_2 ；非格司亭； cDNA ；DNA ；蛋白類；肽類；HGH ；促黃體激素；心鈉素；因子VIII ；因子IX和促濾泡激素。在 將凝膠與前文所定義的載體混合活化的過程中，經常將藥劑在臨注射前加入到凝膠中。活 性成分或藥劑通常存在于可加入凝膠中的微球中，隨后可注射所述凝膠?；蛘?，在另一優(yōu)選的實施方案中，存在于凝膠中的藥劑不增強凝膠的功能。在這種 情況下，將凝膠看作用于任何已知的或待發(fā)現(xiàn)的藥劑的控制遞送體系。在另一優(yōu)選的實施方案中，凝膠為美容凝膠。美容凝膠可用作皮膚填充劑。在該 優(yōu)選實施方案中，當在步驟al)中優(yōu)選使用包含表面活性劑的液體且所述液體的粘度為約 IcP至約400. OOOcP時，和/或優(yōu)選當使用如本文所定義的高比例的PCL/DCM時，和/或優(yōu) 選當將MC用作表面活性劑，更優(yōu)選約1 % MC,甚至更優(yōu)選Mn = 63000的約1 % MC時，和/ 或優(yōu)選當已經優(yōu)選進行如本文所定義的萃取蒸發(fā)時實施本發(fā)明的方法時，得到具有最佳特 性的凝膠。在該優(yōu)選實施方案中，PCL聚合物優(yōu)選為PCL均聚物。在該優(yōu)選實施方案中，凝 膠不包含任何活性成分或藥劑。當將凝膠用作作為皮膚填充劑的美容凝膠時，在本發(fā)明方 法的步驟a2)中，PCL聚合物優(yōu)選具有如前文所定義的中低分子量。凝膠可用于疤痕、皺紋、 面部脂肪減少的美容治療。本發(fā)明的凝膠可用于填充和消除軟組織缺陷，所述軟組織缺陷 例如痘痕或疤痕(如水痘或痤瘡疤痕)、先天性畸形(如唇裂)和皺紋。疤痕可以是任何 原因引起的疾病、術后、燒傷。凝膠也可以用作蓬松劑以在人體中補充面部組織或脂肪損 失。凝膠的有效應用的解剖學區(qū)域可以為皮膚，優(yōu)選面部區(qū)域的皮膚表皮和/或皮下。根 據預期的具體美容應用，注射位置可以改變用于治療痤瘡疤痕和細小面線的位置，用于治 療皺紋、褶痕和面部輪廓的仿形(modelling)的較深位置，及用于治療脂肪營養(yǎng)不良的更 深位置。凝膠的用途 本發(fā)明的另一方面涉及本發(fā)明的凝膠在制備用于治療皮膚異?；蚱つw毀損，或用 于控制膀胱功能，和/或用于控制胃反流，和/或用于治療勃起功能障礙，和/或用于治療 聲帶的藥劑中的用途。
本發(fā)明的凝膠的另一用途是如前文所定義的本發(fā)明的美容凝膠在美容應用中的用途。這些用途的所有特征均已在題為“凝膠”的前一部分中定義。在本申請文件和其權利要求書中，動詞“包括”及其變形以其非限制意義來使用， 意思是包括緊接著該詞語的項目，但是并不排除沒有具體提及的項目。另外，動詞“由… 組成”可由“基本上由…組成”來代替，其是指如本文所定義的產物或組合物或凝膠或微粒 除了具體指定的組分外還可以包含另外的組分，所述另外的組分不會改變本發(fā)明的獨有特 性。另外，由不定冠詞“a”或“an”修飾的要素不排除存在多于一種的要素的可能性，除非 上下文明確要求有一種且僅有一種要素。因此，不定冠詞“a”或“皿”經常指“至少一種”。 當詞語“約”或“大約”與數(shù)值相關地使用(約10)時，其優(yōu)選是指該值可以為比給定值10 多或少的值。本說明書所引用的所有專利和文獻來源均在此整體引入作為參考。提供下述實施例僅用于說明的目的，而不是試圖以任何方式限定本發(fā)明的范圍。附圖描述Ml^實施例2中制備的微球的顯微鏡照片。圖 2.采用 PCL (Mn = 10000g/mol)的 DCM 溶液和 MC (Mn = 63000g/mol)的水溶液 制備的PCL微球。[PCL]為20g/100g DCM, [MC]為1. lwt%，參見表1。光學顯微鏡照片， 放大10倍。圖3.采用含IOwt % PCL的DCM溶液和1. Owt % PVA的水溶液在IOOOrpm的強力 攪拌下制備的PCL微球。參見Hunter，表4。光學顯微鏡照片，放大10倍。圖4.采用含IOwt % PCL的DCM溶液和含3. Owt % PVA的水溶液在IOOOrpm的強 力攪拌下制備的PCL微球。參見Emeta和Wu，表4。光學顯微鏡照片，放大10倍。圖5.采用含IOwt % PCL的DCM溶液和含0. Iwt % MC的水溶液在IOOOrpm的強力 攪拌下制備的PCL微球。參見Iooss，表4。光學顯微鏡照片，放大10倍。
實施例微球/微粒及在可隨時使用的包含載體的凝膠中這些粒子的懸浮液的合成方案 如下所述。1.為了獲得期望的性質，采用經典的溶劑蒸發(fā)技術或借助無溶劑合成技術來制備 微球。2.通過適當?shù)幕旌蠈⑽⑶驊腋≡谀z中以后，采用已知的制備技術制備具有所需 粘度的凝膠。3.然后在受控氣氛中，用滅菌的凝膠懸浮液將注射器充滿。在可隨時使用的應用或(凍干)小瓶的應用中，為了獲得由前述聚合物或共混物 組成的微粒的懸浮液，能夠使用或組合使用下述實施例。實施例1將10 至 20 克的 Mn 為 10000 或 Mn 為 42500 的 PCL 溶解在 DCM(10 至 20w/w % ) 中。將該溶液分散在含有0. 至5% MC的1000ml水中。通過如本說明書中引用的出版 物所描述的溶劑萃取方法，借助猛烈攪拌(IOOOrpm)，獲得平均直徑為40 μ m的微粒。將所得到的微球過濾、洗滌并干燥。隨后，通過進一步的適度混合和處理，將10%至50%的微球 分散在CMC(0· 至5% )或MC(0· 至5% )凝膠中。實施例2 將10至20克的Mn為42500的PCL溶解在)中。將該溶液 分散在含有0. 8% MC的IOOOml水中。通過如實施例1中所述的溶劑萃取方法，借助猛烈攪 拌(IOOOrpm)，獲得平均直徑為60 μ m的微粒。將所得到的微球過濾、洗滌并干燥。隨后，通 過進一步的適度混合和處理，將10%至50%的微球分散在CMC(0. 至5% )或MC(0. 1% 至5% )凝膠中。實施例2中制備的微球的顯微鏡照片如圖1所示。實施例3通過加熱至70-90°C及攪拌(600-1000rpm)將40克至80克Mn為10000的PCL溶 解在純凈的吐溫20、40、60或80中，之后由于相分離和30分鐘內受控冷卻至5 °C獲得微球。 將所得到的微球過濾、洗滌并干燥。在所需要的范圍內平均分布45um，收率75%。隨后，通 過進一步的適度混合和處理，將10%至50%的微球分散在CMC(0. 至5% )或MC(0. 1% 至5% )凝膠中。另外的實施例本發(fā)明涉及制備生物可降解微球的高效和有效的方法。主要問題是具有較高濃度 和粘度的表面活性劑溶液的使用。本發(fā)明導致約38 μ m至75 μ m的期望大小范圍內的具有 光滑表面的均勻粒子的形成。A)在如實施例4中詳盡例示的本發(fā)明的一方法中，將粘性聚合物溶液快速加入強 力攪拌的表面活性劑水溶液中。當將混合物強力攪拌并蒸發(fā)溶劑時形成微粒。諸如DCM的 揮發(fā)性溶劑是優(yōu)選的。由于強力攪拌的表面活性劑水溶液的高粘性，快速加入是可能的。強 力攪拌也使得溶劑蒸發(fā)時間短，然后能夠收集并進一步處理微粒。由于這個方法是高效的， 因此該方法是有利的和期望的。為了能夠回收聚合物微球，需要將基本上所有(或至少大多數(shù))的聚合物溶劑除 去。只有在那時，球形聚合物粒子才會硬化(并且對于可結晶的粒子來說，它們才能夠結
曰、 曰曰J能夠以多種方式確定蒸發(fā)和除去溶劑所需的時間-由于溶劑蒸發(fā)已經冷卻的分散液已再次升溫至環(huán)境溫度-當聚合物結晶時PCL微球的分散液變成白色-使用諸如MC的表面活性劑，當DCM蒸發(fā)時，在表面活性劑溶液的表面上形成泡 沫。當已經將基本上所有的DCM蒸發(fā)掉時該泡沫消失-靜置時微球不凝固B)在如實施例7中詳盡例示的本發(fā)明的另一方法中，通過加熱將PCL聚合物溶解 在諸如吐溫的較粘的表面活性劑(溶液)中。這里，當由于強力攪拌混合物使熔融聚合物 分散在表面活性劑溶液中時，形成聚合物小滴。在將混合物連續(xù)攪拌并(受控)冷卻至室 溫以后，形成粒子。由于不需要揮發(fā)性溶劑，這個方法是非常高效的。方法的特性_期望的粒子大小范圍我們收集38μπι至75μπι的部分。-高效的方法當采用DCM時較短的蒸發(fā)時間和期望大小范圍內的高收率
-有效的方法具有光滑表面的基本上為球形的粒子，導致粒子良好的注射能力通過混合，由根據本發(fā)明制備的微球能夠很容易地形成可注射的凝膠。通過緩慢 攪拌，能夠將高達50%的微球體積均勻地混合在羧甲基纖維素凝膠(CMC，來自Hercules的 Aqulon的水溶液或磷酸鹽緩沖溶液)中。實施例4 本發(fā)明的實騎采用PCL的DCM溶液和MC的水溶液制備微球通過將PCL的二氯甲烷(DCM)溶液強力混合在甲基纖維素(MC)的水溶液中，隨后 將DCM蒸發(fā)，制備了聚(ε-己內酯)(PCL)微球。將從Sigma Aldrich購買的不同數(shù)量的Mn = 10000g/mol的PCL溶解在DCM中。 在2秒內將IOOg的這些溶液加入2升的燒杯中的IOOOg的MC水溶液中，同時在IOOOrpm 下進行強力攪拌。采用購自ColorconLtd.的不同分子量(Mn = 14000g/mol、Mn = 41000g/ mol 和 Mn = 63000g/mol)的 MC。在室溫下連續(xù)強力攪拌的三個小時之內，已經將基本上所有的DCM蒸發(fā)。攪拌是 非連續(xù)的，并使已形成的微球落在燒杯底部。除去上清液并用水洗滌微球。采用不銹鋼篩， 將微球在潮濕狀態(tài)下篩分并收集直徑為38微米至75微米的部分。將微球在室溫下真空干燥，收率由重量法測定。采用光學顯微技術(放大10倍) 來分析所得微球的形態(tài)。進行了一系列的實驗，其中改變了 PCL溶液的濃度和MC溶液的特性。結果在表1 中列出。表1 將PCL的DCM溶液混合在MC的水溶液中，同時強力攪拌時，制備PCL微球。 a)參見圖2所示的光學顯微鏡照片。從表1能夠看出，當采用較高粘度的MC溶液時，能夠高效地獲得光滑的球形粒子。 而且，高濃度的PCL溶液造成期望粒子大小的PCL粒子的高收率。實施例5 本發(fā)明的實騎采用PLLA的DCM溶液和MC的水溶液制備微球通過將PLLA的二氯甲烷(DCM)溶液混合在甲基纖維素(MC)的水溶液中，隨后將 DCM蒸發(fā)，制備了聚(L-丙交酯)(PLLA)微球。
將購自Purac Biochem的IOg PLLA (在氯仿中的特性粘數(shù)為2. 3dl/g)溶解在IOOg 的DCM中。在2秒內將IOOg的該溶液加入2升的燒杯中的IOOOg的MC水溶液中，同時進 行 IOOOrpm 的強力攪拌。Mn = 63000g/mol 的 MC 購自 Colorcon Ltd.。在室溫下連續(xù)強力攪拌的三個小時之內，已經將基本上所有的DCM蒸發(fā)。攪拌是 非連續(xù)的，并使已形成的微球落在燒杯底部。除去上清液并用水洗滌微球。采用不銹鋼篩， 將微球在潮濕狀態(tài)下篩分并收集直徑為38微米至75微米的部分。將微球在室溫下真空干燥，收率由重量法測定。采用光學顯微技術(放大10倍) 來分析所得微球的形態(tài)。表2 將PLLA的DCM溶液混合在MC水溶液中，同時強力攪拌時，制備PLLA微球。 該表2表明，也能夠高效地制備PLLA微球。當采用高粘度的MC溶液時，能夠以高 收率獲得期望粒子大小的光滑的球形PLLA微球。實施例6 對比實騎^ffl PCL和CL ^mm DCM溶液和表面活t牛劑的水溶液制各微球I.文獻中的典型數(shù)據科學和專利文獻中已經描述了 PCL和CL共聚物微球的制備。例如在 Hunter (US2003/0157187A1)、Erneta 和 Wu (EP1872803A1)及 Ioos et al. (Biomaterials 22 (2001) 2785-2794的出版物中，描述了將PCL的DCM溶液加入聚乙烯醇(PVA)或MC的水 溶液中能夠導致PCL微球的形成。為了避免PCL溶液在攪拌的水性介質中的凝固，所采用的條件包括在較長的時間 內加入PCL的DCM溶液和較長的DCM蒸發(fā)時間使得分散的PCL粒子硬化。只有在此時形成 的球形PCL微球才足夠穩(wěn)定以被收集。采用不同的實驗方案以及不同的PCL和CL共聚物 和表面活性劑的濃度、加入速率和溶劑蒸發(fā)時間來制備PCL微球。Hunter (US2003/0157187A1 中的實施例 41)PCL =Mn = 25000_45000g/mol ；DCM 中 PCL 的濃度9· 5wt/vol % ；PVA :Mn = 12000-18000g/mol ；在IOOOrpm的攪拌速率下，將2ml的聚合物溶液倒入IOOml的表面活性 劑水溶液中；聚合物溶液的加入時間120min ；將粒子離心并用水洗滌；得到大小為30-100 微米的微球。該粒子為球形，但具有粗糙或凹陷的形態(tài)。Erneta 和 Wu (EP1872803A1 中的實施例)半結晶CL共聚物摩爾質量為5000g/mol至25000g/mol ；DCM中的聚合物濃度 4wt/vol%至7. 5wt/vol%,PVA 沒有指明Mn ；將約275g的溶液倒入約1500ml的表面活性 劑水溶液中，同時以接近250rpm的速率攪拌；聚合物溶液的加入時間高達19min ；DCM蒸 發(fā)時間14至16hrs ；大小為38-75微米的回收的微球部分高達71% ；沒有指明表面形態(tài)。
Iooss (Biomaterials 22(2001)2785-2794)PCL :Mw = 150000 ；MC :Mn = 14000 的 Methocel A15LV ；DCM 中的 PCL 濃度6. 7wt/ vol %至9. lwt/vol%;在1小時內將15ml溶液倒入MC水溶液中，同時以400_600rpm攪拌； 通過用大量(IOOOml)的水萃取除去DCM;大小小于80微米的回收的PCL粒子部分在約
至40%之間變化。數(shù)據的概述在表3中列出。 表3.關于通過將聚合物的DCM溶液混合在攪拌的表面活性劑水溶液中制備PCL 和CL共聚物微球的文獻數(shù)據概述。 II.采用PCL的DCM溶液和表面活性劑的水溶液制備微球。聚合物和表面活性劑 濃度如文獻所述。將80g PCL(購自 Sigma Aldrich, Mn= 10000g/mol)溶解在 800g DCM 中。在 2秒內將IOOg該溶液加入2升燒杯中的IOOOg PVA或MC表面活性劑的水溶液中，同時以 IOOOrpm進行強力攪拌。在實驗中，采用購自Sigma Aldrich的Mn = 9000-10000g/mol的 PVA 以及購自 Colorcon Ltd.的 Mn = 14000g/mol 的 MC。在室溫下以IOOOrpm連續(xù)強力攪拌的三至四個小時之內，已經將基本上所有的 DCM蒸發(fā)。攪拌是非連續(xù)的，并使已形成的微球落在燒杯底部。除去上清液并用水洗滌微 球。采用不銹鋼篩，將微球在潮濕狀態(tài)下篩分并收集直徑為38至75微米的部分。將微球在室溫下真空干燥，收率由重量法測定。采用光學顯微技術(放大10倍) 來分析所得微球的形態(tài)。按照Erneta和Wu(EP1872803Al)的文獻所述進行了對比實驗。這里在12分鐘內 將270g的含7. 5wt% PCL的DCM溶液加入1500ml的含3. Owt % PVA的水溶液中，同時以 240rpm攪拌。在收集微球之前，連續(xù)攪拌16hrs以將DCM蒸發(fā)。結果收集在表4中。表4.當將PCL的DCM溶液混合在MC的水溶液中，同時攪拌時，制備PCL微球。聚
合物和表面活性劑的濃度為通常在文獻描述的實驗中所使用的濃度。
a)參見圖3所示的光學顯微鏡照片。b)參見圖4所示的光學顯微鏡照片。c)參見圖5所示的光學顯微鏡照片。從表4中注意到，采用在文獻中所述的通常的聚合物和表面活性劑的濃度來高效 制備具有期望特性的粒子是不可能的。由于這些表面活性劑溶液的低粘度，明顯有必要在 較長時間內加入聚合物溶液，在較低的速度下攪拌以及用較長的時間將DCM蒸發(fā)來高效制 備具有期望特性的粒子。III.采用PCL的DCM溶液和粘性表面活性劑的水溶液制備微球。通過將PCL的二氯甲烷(DCM)溶液強力混合在表面活性劑的水溶液中，隨后將DCM 蒸發(fā)來制備PCL微球。將購自Sigma Aldrich的Mn = 10000g/mol的不同量的PCL溶解在DCM中。在2 秒內將IOOg的這些溶液加入2升燒杯中的IOOOg的MC水溶液中，同時以IOOOrpm進行強力 攪拌。采用購自 Sigma Aldrich 的 Mn = 9000_10000g/mol 的 PVA 以及購自 Colorcon Ltd. 的 Mn = 63000g/mol 的 MC。在室溫下以IOOOrpm連續(xù)強力攪拌的三至四個小時之內，已經將基本上所有的 DCM蒸發(fā)。攪拌是非連續(xù)的，并使已形成的微球落在燒杯底部。除去上清液并用水洗滌微 球。采用不銹鋼篩，將微球在潮濕狀態(tài)下篩分并收集直徑為38至75微米的部分。將微球在室溫下真空干燥，收率由重量法測定。采用光學顯微技術(放大10倍) 來分析所得微球的形態(tài)。進行了一系列的實驗，其中改變表面活性劑溶液的性質和濃度。結果在表5中列
出ο表5.將PCL的DCM溶液混合在粘性表面活性劑的水溶液中，同時強力攪拌時，制 備PCL微球。
a)參見圖2所示的光學顯微鏡照片。表5表明，采用較高濃度的PVA制成的粘性水溶液能夠通過快速將PCL溶液加入 強力攪拌的表面活性劑溶液中來用于制備PCL微球。得到非常小的粒子，并且盡管粒子的 形態(tài)適宜，能夠回收的在期望大小范圍內的粒子的收率非常低。當采用MC作為表面活性劑 時，該方法的效率顯著提高。t施徹丨7 本發(fā)明的t駘在高溫下將PCL溶解在葉溫、混合物中，然后誦i寸冷去口形 成粒子當加熱至約80°C并以500rpm連續(xù)攪拌時，在250ml的玻璃容器中將Mn = IOOOOg/ mol的15g PCL分散在100ml的50/50wt/wt吐溫60與水的混合物中。吐溫60購自Sigma Aldrich0通過再攪拌2分鐘使熔融聚合物小滴保持這種分散狀態(tài)。然后在仍然攪拌的同 時，經過一整夜將液體分散液冷卻至室溫。當分散的聚合物小滴凝固時，獲得能夠通過傾析 回收的微球。用水洗滌后，采用不銹鋼篩將PCL微球在潮濕狀態(tài)下篩分并收集直徑為38至75 微米的部分。然后將微球在室溫下真空干燥，收率由重量法測定。收集到總共12. Ig的PCL 微球。表6.通過將含PCL的吐溫60與水的混合物的溶液冷卻同時強力攪拌來制備PCL微球。 從該表中能夠看出，采用較粘的吐溫60與水的混合物，能夠通過冷卻由高溫下的 聚合物的攪拌溶液形成PCL微球。
權利要求
用于制備包含聚己內酯(PCL)的微粒的方法，其中所述方法包括如下步驟a1)將PCL聚合物增溶，隨后將增溶的PCL聚合物與包含表面活性劑的液體混合，所述液體的粘度為約1cP至約400.000cP，b)由在a1)中得到的溶液形成包含PCL的微粒。
2.優(yōu)選地根據權利要求1所述的用于制備包含PCL的微粒的方法，其中所述方法包括 如下步驟a2)將PCL聚合物增溶在基本上純凈的吐溫和/或二氯甲烷中， b)由在a2)中得到的溶液形成包含PCL的微粒。
3.根據權利要求2所述的方法，其中基本上純凈的吐溫在增溶步驟a2)中被用作唯一 的溶劑并且所述步驟在高于或接近所述PCL聚合物的熔融溫度的溫度下進行。
4.根據權利要求1或3所述的方法，其中在步驟b)中，由于受控冷卻和攪拌的條件，形 成所述包含PCL的微粒。
5.根據權利要求2所述的方法，其中在增溶步驟a2)中使用DCM，并且其中步驟b)包 括通過萃取蒸發(fā)經由從分散在凝膠中的這些包含PCL的微粒中萃取所述表面活性劑來形 成包含PCT的微粒。
6.根據權利要求1或4所述的方法，其中所述液體的所述粘度為約20cP至約200cP。
7.根據權利要求1或5或6所述的方法，其中所述表面活性劑為甲基纖維素，優(yōu)選為 Mn為63000的約的MC。
8.根據權利要求1至7中任一權利要求所述的方法，其中所述PCL聚合物為線性聚合 物、共聚物、三元共聚物或不同類型的均聚物/共聚物/三元共聚物的共混物。
9.可通過權利要求1至8中任一權利要求所述的方法獲得的微粒，其優(yōu)選具有至少一 種如下特性i)直徑為5 μ m至100 μ m， )密度、形態(tài)和內含物均勻， iii)基本上為球形的微球。
10.包含權利要求9所述的微粒和載體的生物可降解的可注射凝膠，其中還任選地存 在活性成分。
11.根據權利要求10所述的凝膠，其為植入物或填充劑。
12.根據權利要求11至13中任一權利要求所述的凝膠，其用作藥劑，優(yōu)選用于治療皮 膚異?；蚱つw毀損，和/或用于控制膀胱功能，和/或用于控制胃反流，和/或用于治療勃 起功能障礙，和/或用于治療聲帶。
13.根據權利要求10或11所述的凝膠，其作為美容凝膠。
14.權利要求10至12中任一權利要求所定義的所述凝膠在制備用于治療皮膚異?；?皮膚毀損，和/或用于控制膀胱功能，和/或用于控制胃反流，和/或用于治療勃起功能障 礙，和/或用于治療聲帶的藥劑中的用途。
15.權利要求13所定義的所述凝膠在美容應用中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及制備包含PCL的微粒的方法，涉及可通過所述方法獲得的微粒，涉及由此獲得的凝膠并涉及該凝膠的多種用途，例如用于制備用于治療皮膚異?；蚱つw毀損，和/或用于控制膀胱功能，和/或用于控制胃反流，和/或用于治療勃起功能障礙，和/或用于治療聲帶的藥劑。該凝膠還可以用于美容應用。
文檔編號A61L27/18GK101842084SQ200880104393
公開日2010年9月22日 申請日期2008年7月23日 優(yōu)先權日2007年7月26日
發(fā)明者亨德里克斯·蘇普爾, 保羅·維拉姆·米因南, 德克·韋比·格里杰瑪, 皮爾特·杰勒德·齊爾斯特拉 申請人:亞克蒂斯Ip有限公司