專利名稱：：用于防治腦缺血損傷相關(guān)疾病的中藥有效成分的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種用中藥的有效成分制備用于防治腦缺血損傷病的組合物。
背景技術(shù)：
：腦缺血損傷相關(guān)疾病包括中風(fēng)、中風(fēng)后遺癥、血管性癡呆和老年性癡呆病。缺血性中風(fēng)是威脅人類健康的重要殺手，在中老年人群發(fā)病率很高，而且發(fā)病年齡是越趨年輕化。老年癡呆是老年常見病，有血管性癡呆(VascularDementia,VD)和老年性癡呆(AD)等不同類型。血管性癡呆是老年癡呆的一種重要類型，也是缺血性中風(fēng)的后遺癥之一，嚴(yán)重影響老年人生活質(zhì)量。隨著我國人口的逐漸老齡化，缺血性腦血管疾病患者在不斷增加。腦中風(fēng)和血管性癡呆這些疾病給家庭和社會帶來沉重的經(jīng)濟和精神負(fù)擔(dān)，迄今為止尚無特別有效的治療和預(yù)防藥物。腦缺血損傷是一多因素致病的綜合性腦血管疾病，多層次、多環(huán)節(jié)、多靶點全面調(diào)節(jié)才能有效地控制直至治愈這種疾病。因此，尋找多靶點、低毒、質(zhì)量可控、體現(xiàn)中醫(yī)藥整體治療作用的抗腦缺血損傷中藥成為當(dāng)前一個重要的研究課題。中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下的小復(fù)方新藥將有望解決大復(fù)方中成藥和中藥單方制劑和單方有效部位制劑面對的困惑，而研究開發(fā)處方組成藥味精簡、有效成分明確、質(zhì)量易于控制而且生產(chǎn)工藝穩(wěn)定、安全有效的復(fù)方有效成分是現(xiàn)代中藥制劑發(fā)展之趨勢。中藥材中具有抗腦缺血損傷作用的單味中藥約有近百余種，如人參、三七、燈盞花、山楂、丹參、川芎、何首烏、黃芪等。其功效分別歸屬于補氣益腎填精健腦、活血化瘀等類中藥。單方制劑和單方有效部位制劑，雖然成分明了，作用明確，質(zhì)量可控，但單味藥作用相對比較單一，在治療腦缺血損傷這種病機復(fù)雜、需綜合調(diào)節(jié)的疾病上，具有一定的局限性。對病因病機復(fù)雜的缺血性中風(fēng)和血管性癡呆等難治性疾病難于獲得滿意療效。中藥復(fù)方因其多成分、多功能、相對低毒的臨床安全有效，對當(dāng)今的心腦血管疾病、代謝綜合征等常見多發(fā)的多因素復(fù)雜疾病顯示獨特的治療優(yōu)勢。但目前具有獨特療效的治療缺血性中風(fēng)疾病和血管性癡呆的中成藥甚少，而經(jīng)嚴(yán)格療效評價、高效、安全、質(zhì)量可控的有效治療缺血性中風(fēng)和老年癡呆的現(xiàn)代中成藥更是欠缺?，F(xiàn)有的防治缺血性中風(fēng)疾病和血管性癡呆的中成藥，如華佗再造丸、安宮牛黃丸、參烏膠囊等普遍存在大復(fù)方、組成藥味多、有效成分復(fù)雜且不明確、生產(chǎn)工藝不穩(wěn)定、質(zhì)量得不得有效的控制、療效難于保證等缺陷，不符合現(xiàn)代中藥要求。因此，在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下用中藥有效成分制成現(xiàn)代中成藥，成分明了，作用機理相對清楚、并可實現(xiàn)其質(zhì)量的有效控制，確保療效的正常發(fā)揮，而又有中藥復(fù)方特色的現(xiàn)代中成藥。文獻(xiàn)"參烏膠囊治療老年輕度認(rèn)知損害臨床對照研究[J]"中國中藥雜志，2007,(17):1800-1803)報道了用人參首烏等中藥材制成用于治療缺血性中風(fēng)疾病和血管性癡呆的復(fù)方參烏制劑如人參首烏膠囊和參烏膠囊，對認(rèn)知損害有較好神經(jīng)保護功能和臨床療效。雖然復(fù)方參烏膠囊有較好的抗腦缺血損傷和抗動脈硬化功能和神經(jīng)保護功能和臨床療效，但由于是中藥復(fù)方制劑，其成分較復(fù)雜，實際應(yīng)用中其產(chǎn)品質(zhì)量難于獲得有效控制，它們的質(zhì)量控制方法主要是進(jìn)行12個指標(biāo)成分的HPLC含量測定和薄層檢認(rèn)，而對大多數(shù)活性成分置之不管，無法真正控制產(chǎn)品質(zhì)量，最終將影響臨床療效的穩(wěn)定性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種用于防治腦缺血損傷病的中藥有效成分的組合物。本發(fā)明的技術(shù)方案是用于腦缺血損傷相關(guān)疾病的中藥有效成分的組合物由以下重量份的中藥有效成分和藥學(xué)上所允許的載體用常規(guī)的制劑工藝制成的制劑，人參皂苷Rbl2-10份人參皂苷Rgl2-10份人參皂苷Rd1-5份人參皂苷Re1-5份二苯乙烯苷2-10份銀杏內(nèi)酯1-5份由山柰酚與槲皮素質(zhì)量比為1:1組成的黃酮混合物卜5份本組方中的人參皂苷Rbl(ginsenosideRbl)，是從人參提取分離得到的有效成分，其分子式為C54H92023，分子量為1109.29，含量》95%。有延緩衰老及抗氧化作用，還有促進(jìn)和增強記憶作用。人參皂苷Rgl(GinsenosideRgl)，也是從人參提取分離得到的有效成分，其分子式為C42H72014，分子量為801.01，含量》95%。有促進(jìn)和增強記憶作用，并有明顯的強心作和抗應(yīng)激作用，促進(jìn)內(nèi)分泌系統(tǒng)功能，還能促進(jìn)代謝系統(tǒng)功能。人參皂苷Rd(GinsenosideRd)，是從人參提取分離得到的有效成分，其分子式為C48H82018，分子量為947.15，含量》95%。能促進(jìn)核酸(DNA和RNA)和蛋白質(zhì)合成，對免疫功能有明顯促進(jìn)作用。人參皂苷Re(GinsenosideRe)，是從人參提取分離得到的有效成分，其分子式為C48H82018;分子量為947.15，含量》95%。有延緩衰老作用及抗氧化作用，并能促進(jìn)核酸(DNA和RNA)和蛋白質(zhì)合成，對免疫功能有明顯促進(jìn)作用。二苯乙烯苷(2，3，5,4'-tetrahydroxy-tilbene-2-0-P-D-glucoside)，是從首烏提取分離得到的有效成分，化學(xué)名為2，3,5，4-四羥基二苯乙烯-2-0-e-D-葡萄糖苷，分子式為C20H24010，分子量424.40;含量》70%。可改善慢性腦缺血大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，保護超氧化物歧化酶、抗氧化、增強免疫作用、抗衰老的作用，還有降低總膽固醇、延緩動脈硬化，提高記憶力、對老年癡呆、腦老化有明顯的治療效果。銀杏總內(nèi)酯(Ginkgolide)是用銀杏的葉提取分離得到的有效成分，總內(nèi)酯含量》95;銀杏內(nèi)酯B^40y。，具有選擇性的拮抗由PAF誘導(dǎo)的血小板聚集，可有效的防止血小板聚集和血栓的形成。對降低腦血管阻力、增加腦血流量、促進(jìn)腦血循環(huán)有很好的功效，并能清除有害的氧化自由基，提高免疫功能，保護腦細(xì)胞免受缺血損傷。對預(yù)防和治療腦血栓等腦血管疾病療效獨特。黃酮混合物是山柰酚與槲皮素質(zhì)量比為l:l組成，槲皮素(Quercetin)，其分子式C15H1007xH20;分子量302.24，含量》95%?？蓮你y杏葉、柿葉等植物提取分離得到，具有抗氧化和清除自由基等功能。槲皮素還具有抗癌、抗氧化、抗血小板聚集、抗抑郁、抗心肌肥厚和降壓等多種藥理作用。山柰素(Kaempferol)，可從銀杏葉、柿葉等植物提取分離得到，其分子式:C15H1006;分子量286.24，含量>95%。它具有抗氧化和清除自由基等功能。我們?nèi)∪藚?、首烏、銀杏中所含的主要抗腦缺血損傷和神經(jīng)保護的有效成分，進(jìn)行組方研究，采用均勻設(shè)計和高通量篩選法篩選出防治腦缺血損傷和神經(jīng)退行性病變的相關(guān)疾病的中風(fēng)、中風(fēng)后遺癥、老年癡呆的新配方，然后用最優(yōu)配方再進(jìn)行整體動物藥效驗證。均勻設(shè)計試驗方法用U5(58)均勻設(shè)計表來安排試驗，選用7因素，代表7個組分、分別安排在不同列中，5個水平(1，2，3，4，5)代表配方中各組分質(zhì)量份數(shù)，實驗號各行分別安排各組方的不同組分的不同質(zhì)量份數(shù)配伍。用各實驗號所得的不同配方組合物進(jìn)行缺血損傷神經(jīng)元保護作用和小鼠學(xué)習(xí)記憶增強作用篩選實驗，觀察各不同配方組合物神經(jīng)元保護作用和學(xué)習(xí)記憶增強作用(詳見下面實驗例一、二)。實驗結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，按作用強弱進(jìn)行得分統(tǒng)計，篩選出神經(jīng)元保護作用和學(xué)習(xí)記憶增強作用最佳配方。結(jié)果見表l。從實驗結(jié)果看出組成的最低和最高、中間份都有較好神經(jīng)元保護作用和學(xué)習(xí)記憶增強作用。結(jié)論不同配比的復(fù)方參烏醒腦有效成分組合物均有神經(jīng)元保護作用和學(xué)習(xí)記憶增強作用。表l試驗方案和結(jié)果(數(shù)字為組分質(zhì)量份數(shù)，括號內(nèi)的數(shù)字為各因素)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>由上結(jié)果篩選得到的最佳組方是人參皂苷Rbl10份人參皂苷Rgl10份人參皂苷Rd1份人參皂苷Re4份二苯乙烯苷8份銀杏內(nèi)酯4份由山柰酚與槲皮素質(zhì)量比為l:l組成的黃酮混合物3份。為了適應(yīng)臨床的需要，將上述有效成分按處方要求混合后添加輔料，如潤滑劑、填充劑、粘合劑、崩解劑等，以常規(guī)的藥物制劑工藝和制備食品的方法制備成顆粒劑、片劑、膠囊劑、散劑、丸劑、粉末、顆粒、晶體、溶液、浸出物、混懸劑、湯、糖漿劑、酏劑、茶、油等的形式的藥物和保健品等。為達(dá)到藥物起效更快的目的，也可以以制成注射劑，最佳的是制成凍干粉針劑。本復(fù)方中藥有效成分組合物的制劑，可取市售中藥有效成分提取物人參皂苷Rbl、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rd、人參皂苷Re、二苯乙烯苷、銀杏內(nèi)酯、山柰酚與槲皮素混合物、按比例和等量遞增法混勻制成有效成分混合物(以下簡稱FSWXN)后，添加藥學(xué)上所允許的載體用常規(guī)的制劑工藝制成，如添加淀粉和糊精適量，混勻，加75%酒精制粒，60°(:干燥，整粒，裝3號膠囊、每粒裝0.15g，含F(xiàn)SWXN84mg/粒制成膠囊劑。FSWXN添加淀粉和糊精適量，混勻，加7596酒精制粒,6(TC干燥，整粒，添加硬脂酸鎂適量壓片或進(jìn)一步包衣，包歐巴代或其它薄膜衣，制得片劑。每片重0.20g，含F(xiàn)SWXN80mg/片。FSWXN添加淀粉、糊精和其它輔料適量，混勻，裝入小包，制得散劑。每小包重0.20g，含F(xiàn)SWXN580mg/片。FSWXN添加淀粉和糊精適量，混勻，再加蜂蜜適量，泛制小水蜜丸，60°C干燥，包裝3號膠囊、得丸劑膠囊，每粒裝0.30g,含F(xiàn)SWXN84mg/粒。FSWXN添加淀粉和糊精適量，混勻，加75%酒精制粒，60°。干燥，整粒，包裝小包裝O.15g，含F(xiàn)SWXN84mg。即成顆粒劑。FSWXN添加羧甲基纖維素鈉等穩(wěn)定劑，加蔗糖、蒸餾水制成合劑，裝入瓶中，每瓶60ml，含F(xiàn)SWXN80mg/5ml。即成合劑FSWXN添加羧甲基纖維素鈉等穩(wěn)定劑，加蔗糖、蒸餾水制成合劑，即混懸劑規(guī)格裝入瓶中，每瓶60ml，含F(xiàn)SWXN80mg/5ml。FSWXN加蒸餾水，加熱混勻，添加蔗糖糖漿，裝入瓶中，即成糖漿劑。規(guī)格每瓶60ml，含F(xiàn)SWXN80mg/5ml。FSWXN或添加甘油和羧甲基纖維素鈉等穩(wěn)定劑，加蔗糖制成甘油酏劑，裝入瓶中，即成酏劑規(guī)格每瓶60ml，含F(xiàn)SWXN80mg/5ml。當(dāng)然，本發(fā)明不限于上述的劑型，也可以制成注射劑，但需進(jìn)一步做毒性等藥效試驗。例FSWXN添加助溶劑，按粉針劑要求制成粉針劑。每瓶含F(xiàn)SWXN240mg。本發(fā)明的優(yōu)點在于克服傳統(tǒng)復(fù)方中藥組成復(fù)雜，產(chǎn)品質(zhì)量無法得到有效控制，導(dǎo)致療效不穩(wěn)定的缺點，本發(fā)明提供了一種成分明了，作用明確、質(zhì)量穩(wěn)定可控的新產(chǎn)品。1)經(jīng)現(xiàn)代中藥藥理研究證實本發(fā)明的產(chǎn)品具有抗缺血腦損傷、神經(jīng)保護、學(xué)習(xí)記憶增強作用；2)臨床研究結(jié)果表明，本發(fā)明的產(chǎn)品對缺血性中風(fēng)及其后遺癥、腦動脈硬化、血管性癡呆具有顯著防治效果，能改善病人的運動神經(jīng)功能和學(xué)習(xí)記憶功能，治療臨床療效確切；3)毒性很低，臨床沒有觀察到明顯副作用；4)產(chǎn)品制備方法簡單，宜工業(yè)化批量生產(chǎn)。下面通過實驗例證明本發(fā)明的有益效果實驗例1、藥理活性檢測1.用神經(jīng)元缺氧缺血清再灌注損傷模型篩選FSWXN的處方試驗方法培養(yǎng)原代大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元，經(jīng)缺氧缺糖缺血清一再給氧給糖和血清模型，檢測指標(biāo):神經(jīng)元凋亡水平；MTT法檢測神經(jīng)細(xì)胞活力，觀察不同ESWXN組方對缺氧缺血清再給氧給血清氧化應(yīng)激損傷神經(jīng)元的保護作用。材料和方法樣品及試劑FSWXN樣品按均勻設(shè)計實驗方案制成不同配比的5個實驗組樣品，用前用二甲基亞砜和雙蒸水按l:l配成濃液，用培養(yǎng)基配成所需的濃度。對照品人參首烏提取物按部標(biāo)六冊，人參首烏膠囊的處方工藝和質(zhì)量要求，購進(jìn)中藥材紅參和首烏，提取制備人參首烏提取物。每lg人參首烏提取物含藥材紅參2g，制何首烏3g。參烏膠囊提取物從華北制藥集團制劑有限公司購得參烏膠囊DMEM培養(yǎng)基(Gibco)，胰蛋白酶、胎牛血清、馬血清(Gibco)、Hochest33342。皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞的原代培養(yǎng)和低氧低糖再復(fù)氧誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡模型按文獻(xiàn)[WeiJianBei，WenliePeng，AnLongXU.etal.NeuroprotectiveeffectsofastandardizedextractofDiospyroskakileavesonMCAOtransientfocalcerebralischemicratsandculturedneuronsinjuredbyglutamateorhypoxia.PlantaMedica2007;73:636-643]方法進(jìn)行。SD大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)至d12，換成低糖無血清DMEM培養(yǎng)基，在自制的低氧罐(通入含95%N2+59&C02)中分別溫孵16h，再復(fù)氧培養(yǎng)24h。實驗分組與藥物處理(l)正常對照組:細(xì)胞在正常培養(yǎng)基培養(yǎng)H天，直接用MTT法檢測96多孔板上各培養(yǎng)孔中神經(jīng)細(xì)胞存活率或Hochest33528染色，熒光顯微鏡鏡法檢測細(xì)胞凋亡。(2)模型對照組:細(xì)胞在正常培養(yǎng)基培養(yǎng)12天，換成低氧低糖無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)16h后再復(fù)氧24h，檢測原代培養(yǎng)的大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。(3)給藥組不同的FSWXN、和復(fù)方參烏提取物以1.0、5.0、25.0ug/ml終濃度加到各培養(yǎng)孔、即大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞中。培養(yǎng)至第十一天，進(jìn)行低氧無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)前2小時，分別加入上述不同濃度的各種藥物，低氧無血清培養(yǎng)模型組給予等容量生理鹽水。細(xì)胞在低氧無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)16h后進(jìn)行，復(fù)氧和給予血清再培養(yǎng)24h，然后檢測原代培養(yǎng)的大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞活力活力和凋亡。正常對照組用95%空氣和5%C02和正常培養(yǎng)基培養(yǎng)。MTT法檢測細(xì)胞活力；用hochest33342進(jìn)行熒光染色，顯微鏡法檢測細(xì)胞凋亡，拍照，記錄在電腦軟件上，每組拍5張，細(xì)胞培養(yǎng)每孔至少拍一張，觀察細(xì)胞凋亡率。試驗結(jié)果見表2，表3從表2，3顯示，不同的FSWXN在濃度為1，5，25ug/mL時均能提高低氧低糖再復(fù)氧誘導(dǎo)損傷皮質(zhì)神經(jīng)元的細(xì)胞活力，在25ug/mL時可使低氧低糖再復(fù)氧誘導(dǎo)皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡率降低。人參首烏提取物和復(fù)方參烏提取物也有相似作用，但起效藥物濃度在5ug/mL以上。表2FSWXN對低氧低糖再復(fù)氧誘導(dǎo)損傷神經(jīng)細(xì)胞活力的影響(1^3，i±s，％)組別l正常組I空白組ilPg/mL組U"g/mL組125ug/mL組！實驗得分l結(jié)果！iiIil藥物FSWXN1i100±3.7j66.2±4.0FSWXN2I100±7.2|66.3±5.180.4±5.9*i87.2±5.7**92.0±6.0*i8.0—'扁一———~一T"——■—■"~——1—…了"'.■—'，'88.4±6.4*191.3±12.898.4±6.5**|10.0FSWXN3i100±4.965.9±5.5"i71.1±6.5i80.6±3.0**|90.2±4.7林i7.0———i..............................................................;..一..............................—j一—■—..................................I一...............................——4..........................一—■■______j———FSWXN4I100±2.6!65.3±2.7"!70.5±5.7J81.6±3.0**|91.1±5.7**|8.0FS翻5I100±7.2!66.2±4'2，.3±5'3*|89.8±6.7**195.9±6.9林)9.0;人參首烏提1咖土7.2,.2±4.H67.3±5'3I73.8±3.2*—7±5.5林l7.。;取物:Iii;i參烏膠囊提l;取物I100士7.2;66.6土4.3"68.3±5.8f77.6±3.0**|90.3±5.1**!8.0注與正常組比較，"P〈0.01;與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01<結(jié)論:不同的FSWXN、人參首烏提取物和復(fù)方參烏提取物對低氧低糖再復(fù)氧誘導(dǎo)損傷皮質(zhì)神經(jīng)元均有保護，保護作用強度以FSWXN2和FSWXN5作用較強。表3不同F(xiàn)SWXN對低氧低糖再復(fù)氧誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡率的影響(『3,7±s,%)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注與正常組比較，"P〈0.01;與空白組比較，*P〈0.05，**P<0.01。實驗例2、急性毒性和長期毒性試驗小鼠急性毒性研究將120只1921gNIH小鼠(雌雄各半)分成6組，每組20只，分別以五種不同劑量的FSWXN5灌胃給藥，生理鹽水對照。觀察小鼠的反應(yīng)并記錄每組小鼠的死亡數(shù)目，采用MicrosoftExcel的線性回歸軟件，根據(jù)對數(shù)劑量與經(jīng)驗概率單位繪制直線，計算LDs。。FSWXN5對小白鼠灌胃給藥的LDs。分別為11.2312.86g/kg大鼠長期毒性實驗取Wistar大鼠120只雌雄各半分成4組，每組30只，分別灌胃給藥給予1.20g/kg、0.60g/kg、0.30g/kgFSWXN5，對照組灌胃給生理鹽水。連續(xù)給藥180天，三個劑量組大鼠均未見明顯血象、心肺肝腎功能及神經(jīng)系統(tǒng)功異常，也未心、肺、脾、胃、大腦、腸等重要器官有明顯病理變化。結(jié)論本發(fā)明的產(chǎn)品毒性很低、安全性高。實驗例3、藥效試驗SWXNF5對雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎對大鼠記憶行為功能和海馬組織形態(tài)學(xué)的影響1.實驗材料SWXNF5，SWXNF1、SWXNF2，人參首烏膠囊，用生理鹽水配成合適濃度的混懸液；試驗動物用健康雌性SD大鼠120只，體重210g250g，大鼠隨機分為正常組(N組)、模型組(M組)、FSWXN5小劑量組(2mg/kg)、FSWXN5中劑量組(10mg/kg)，F(xiàn)SWXN5高劑量組(20mg/kg)、FSWXN1高劑量組(20mg/kg)、FSWXN2高劑量組(20mg/kg)人參首烏膠囊對照組(60mg/kg)每組15只。給藥給藥12天(缺血再灌注前4天，后7天)。腹腔灌胃給藥，每日2次。2.實驗方法方法按文獻(xiàn)方法(NiJW.，MatsumotoIK.，MatsumotoIK.Progressivecognitiveimpairmentfollowingchroniccerebralhypoperfusioninducedbypermanentocclugionofbilateralcarotidarteriesinrats《BRAINRESEARCH》1994;653(1-2):231-236;劉匯波李斌李斌雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎對大鼠記憶行為功能和海馬組織形態(tài)學(xué)的影響《基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床》1998;18(4):294-297)行大鼠結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈缺血再灌手術(shù)建立動物模型。給藥缺血再灌注前4天開始，至后再灌注60天。每天腹腔灌胃給藥，每日l次。采用水迷宮在給藥后15天、30天、60天時，測定大鼠游出時間和距離，并用組織學(xué)的方法觀察海馬神經(jīng)元組織形態(tài)3、實驗結(jié)果結(jié)果腦缺血模型大鼠到達(dá)站臺游動時間比正常對照組增長113.6%(P<0.01);FSWXN5和人參首烏膠囊均能降低永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈后24小時內(nèi)大鼠的死亡率，有降低大鼠水迷宮游出時間和錯誤次數(shù)的趨勢，其中在30d的時間點，給藥組與對照組相比，水迷宮的錯誤次數(shù)顯著降低(P<0.05);而FSWXN小、中、大劑量組較模型組動物分別縮短58.0%(P<0.01)，78.2%(P<0.01)和82.8%(P<0.01);見表4表4FSWXN各組大鼠水迷宮游出時間(3f±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注:與N組比較:"PO.01;與M組比較*P<005，**P<00012海馬神經(jīng)元組織形態(tài)正常大鼠腦海馬組織CA1區(qū)有34層錐體細(xì)胞，排列整齊；高倍鏡下，錐體細(xì)胞核大而園，有12個核仁，缺血再灌注7天，可見明顯大鼠腦海馬組織細(xì)胞損傷。CA1區(qū)錐體細(xì)胞已大部分死亡，細(xì)胞碎片散亂分布；不同劑量的復(fù)方參烏醒腦方(FSWXN5)，大鼠腦海馬CA1區(qū)神經(jīng)元損傷明顯減輕，其活錐體細(xì)胞密度比對照組大鼠明顯增加。動物整體狀況改善，大鼠外觀活動正常，皮毛光滑，體重減輕不明顯。缺血再灌注后動物存活數(shù)比對照組明顯多。表明(SWXN5對急性缺血有保護作用。這為SWXNF5治療腦卒中及中風(fēng)后遺癥提供了實驗依據(jù)。陽性對照藥人參首烏膠囊也顯示對缺血再灌注所致大鼠腦海馬組織細(xì)胞損傷有明顯保護作用。見表5表5FSWXN對前腦缺血再灌流引起大鼠海馬CA1錐體神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護作用<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注與正常對照組比較，**p<0.01;與生理鹽水組比較，##p<0.01。結(jié)論研究表明本發(fā)明的FSWXN5能抑制缺血再灌注引起的腦組織細(xì)胞凋亡，對缺血再灌注引起的腦組織損傷有明顯的保護作用，并能改善缺血再灌注引起的學(xué)習(xí)記憶障礙，提高受損傷大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。實驗例4、臨床驗證一、對血管性癡呆的防治作用1資料與方法病例情況:全部病例均系神經(jīng)科住院病人，男性70例，女性20例；年齡5876歲，平均64.9歲;病程最短1年，最長10年，平均3.9年。經(jīng)臨床檢查、神經(jīng)量表測試，并經(jīng)頭顱CT或MR證實者。1.2診斷標(biāo)準(zhǔn):采用DSM-IV中血管性癡呆的診斷標(biāo)準(zhǔn)。1.3排除標(biāo)準(zhǔn):有嚴(yán)重神經(jīng)、血液、內(nèi)分泌等原發(fā)性疾病及海金斯基缺血指數(shù)量表(HIS)，總分18分，得分<7分為老年性癡呆者。1.4量表選擇:l美國簡易智能量表，總分30分，若得分<16分者為智能障礙；2日本長谷川癡呆量表，總分30分，若得分<16分者為癡呆成立；3海金斯基缺血指數(shù)量表(HIS)，總分18分，若得分>7分者為血管性癡呆，得分<7分者為老年性癡呆。1.5中醫(yī)主要癥狀參考中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則；中藥新藥治療老年期癡呆的臨床研究指導(dǎo)原則。結(jié)合臨床經(jīng)驗，將以下癥狀作為觀察指標(biāo):神情呆滯，語言不利，或寡言少語或語言倒錯，善忘，不寐，頭暈，頭痛，舌質(zhì)瘀點。1.6療效標(biāo)準(zhǔn):采用綜合評定法，以患者治療前后的智能狀態(tài)、中醫(yī)主要癥狀、體征等方面的改變作為綜評內(nèi)容，并以智能改變?yōu)橹攸c。痊愈者長谷川癡呆量表測試得分增加到正常值，顯效者得分增加5分以上，有效者得分增加不足5分，無效者得分不但無增加反而下降。1.7用藥方法用FSWXN5處方制成膠囊，每天早中晚各服1粒，2個月為1療程，均用藥3個療程，其間停用其它腦血管擴張藥物、腦細(xì)胞代謝藥物、神經(jīng)功能調(diào)節(jié)藥物。人參首烏膠囊由貴陽醫(yī)學(xué)院制藥有限公司生產(chǎn)，每粒裝0.3克，口服，一次2粒，一日3次，飯前服用。2療效與結(jié)果2.1治療前后量表積分變化(見表6、7、8、9)表6治療前后簡易智能量表積分變化(？土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表7治療前后長谷川癡呆量表積分變化(x±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>2.2中醫(yī)主要癥狀變化(見表8)表8治療前后主要癥狀評分變化(3f±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>2.3療效分析(見表9)表9二種藥物對血管性癡呆療效統(tǒng)計<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>3結(jié)論FSWXN5對血管性癡呆的智能改善作用從表可以看到，60例病員經(jīng)服FSWXN5和人參首烏膠囊3個療程后，二藥治療的量表得分均明顯增加(P<0.01)，說明都有恢復(fù)記憶力、改善智能作用。本有效成分組合物FSWXN5對本病的總有效率為76.7%，盡管痊愈者為零、顯效僅5例，但有效率卻占一半多(60.0%)。本有效成分組合物療效比人參首烏膠囊好。二、對老年性癡呆癥的防治作用1資料與方法1.1病例情況:全部病例均系神經(jīng)科住院病人，男性19例，女性11例；年齡5876歲，平均64.9歲;病程最短1年，最長10年，平均3年。經(jīng)臨床檢查、神經(jīng)量表測試，并經(jīng)頭顱CT或MR證實者。1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)按中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則1.3排除標(biāo)準(zhǔn)(同前)1.4量表選擇(同前)1.5中醫(yī)主要癥狀(同前)1.6療效標(biāo)準(zhǔn)(同前)以上1.31.6參照中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則;中藥新藥治療老年期癡呆的臨床研究指導(dǎo)原則。1.7用藥方法(同前)2療效與結(jié)果2.1治療前后量表積分變化(見表IO、11)表10治療前后簡易智能量表積分變化(3f±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表ll治療前后長谷川癡呆量表積分變化(x土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>2.2中醫(yī)主要癥狀變化:見表12從13表可以知道，復(fù)方參烏醒腦有效成分組合物對本病的總有效率為71.9%，顯效15.6%，比目前常用藥的70%的總有效率略高，而沒觀察到明顯副作用。2.3療效分析:見表133結(jié)論本品對老年性癡呆的智能減退有改善作用，從12、13表可以看到，32例病員經(jīng)服復(fù)方參烏醒腦有效成分組合物2個療程后，量表得分明顯增加(PO.Ol)，說明有恢復(fù)記憶力、改善智能作用，且語言不利、失眠、煩躁、易怒、舌質(zhì)瘀點等癥狀改善非常明顯，對痰濁阻竅，氣滯血瘀的老年性癡呆(AD癥)32例有效率達(dá)71.9%。療效與口服服用人參首烏膠囊相當(dāng)，但對失眠、煩躁、易怒等癥狀療效更顯著。表12治療前后主要癥狀變化(x士s)主要癥狀藥物ii治療前治療后P神情呆滯FSWXN5人參首烏膠囊32313.15±0.543.13±0.562.31±0.852.35±0.86<0.01<0.01語言不利FSWXN5人參首烏膠囊27263.33±0.663.32±0.632.28±0.912.39±0.92<0.01<0.01思考力障礙FSWXN5人參首烏膠囊32313.58±0.643.56±0.622.75±0.882.84±0.86<0.05<0.05判斷力障礙FSWXN5人參首烏膠囊32313.35±0.853.33±0.832.48±0.952.63±0.89<0.05<0.05記憶力障礙FSWXN5人參首烏膠囊32313.46±0.853.47±0.872.58±0.952.66±0.98<0.05<0.05善忘不寐FSWXN5人參首烏膠囊30293.31±0.543.32±0.551.31±0.951.49±0.98<0.01<0.01煩躁、易怒FSWXN5人參首烏膠囊29293.53±0.853.49±0.851.53±0.811.69±0.85<0.01<0.01舌質(zhì)瘀點FSWXN5人參首烏膠囊30312.13±0.402.15±0.431.18±0.621.33±0.64<0.01<0.01表13二種藥物對老年性癡呆療效統(tǒng)計病名n痊愈顯效有效無效總有效率例率％例率％例率％例率％%FSWXN53200515.61856.3928.171.9人參首烏膠囊3100412.91651.61135.564.5臨床研究結(jié)果表明，本品具有顯著的抗腦缺血損傷，改善學(xué)習(xí)記憶作用，治療腦缺血損傷相關(guān)的中風(fēng)后遺癥和血管性癡呆臨床療效確切。下面通過具體實施方案闡述本發(fā)明的技術(shù)方案具體實施方案實施例1、片劑原料人參皂苷Rb,(含量》95%)、人參皂苷Rd(含量》95%)、人參皂苷Re(含量》95%)、人參皂苷Rg,(含量》95%);以上四種人參皂苷從吉林省宏久生物科技股份有限公司購進(jìn)。二苯乙烯苷(含量》70%)、天津匯綠科技有限公司提供。銀杏內(nèi)酯(總內(nèi)酯含量》95;銀杏內(nèi)酯B^40呢)，上海傲拓信息科技有限公司提供。槲皮素和山柰酚(含量》95%)由陜西惠科植物開發(fā)有限公司購進(jìn)。取人參皂苷Rb,10kg、人參皂苷Rd1.0kg、人參皂苷Re4kg、人參皂苷Rgl10kg、二苯乙烯苷8kg、銀杏內(nèi)酯4kg、黃酮混合物3kg(槲皮素1.5Kg加山柰酚1.5Kg)，按等量遞增法混勻制成有效成分混合物(FSWXN5)40Kg，加淀粉25kg，糊精35kg，混勻，加75%酒精制粒，80°C干燥，加硬脂酸鎂適量，壓片，包歐巴代薄膜衣，共制得50萬片。每片重0.20g，含F(xiàn)SWXN580mg/片，用HPLC方法測定，每片中各有效成分含量結(jié)果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>上述制得的有效成分混合物(FSWXN5)，用HPLC方法測定其含人參皂苷Rb!24.3%、人參皂苷Rg,24.8%、人參皂苷Rd2.5%、人參皂苷Re9.86%、苯二烯苷13.90%、銀杏內(nèi)酯9.91%、槲皮素3.70%、山柰酚3.72%。實施例2、膠囊劑原料來源同實施例l取人參皂苷Rb,4kg、人參皂苷Rd4.0kg、人參皂苷Re5kg、人參皂苷Rgl6kg、二苯乙烯苷2.0kg、銀杏內(nèi)酯5kg、黃酮混合物2kg，按等量遞增法混勻制成有效成分混合物合物(FSWXN2)28Kg，加淀粉12kg，糊精10kg，混勻，制成膠囊粉50kg裝3號膠囊、共制得膠囊33.33萬粒，每粒0.15g，含F(xiàn)SWXN84mg/粒。用HPLC方法測定復(fù)方參烏醒腦有效成分(SffXNF2)膠囊中各有效成分含量，結(jié)果如下表。檢測項目含量(mg/粒)檢測項目含量(mg/粒)人參皂苷Rbl11.43二苯乙烯苷4.14人參皂苷Rgl17.07銀杏內(nèi)酯14.46人參皂苷Rd11.53槲皮素2.93人參皂苷Re14.43山柰酚2.94本發(fā)明所制得的復(fù)方參烏醒腦有效成分組合物2(FSWXN2)膠囊粉，HPLC方法測定其各有效成分含量為人參皂苷Rb,7.62%、人參皂苷Rgl11.38%、人參皂苷Rd7.69%、人參皂苷Re9.62%、二苯乙烯苷2.76%、銀杏內(nèi)酯9.64%、槲皮素1.96%、山柰酚1.96%。用此膠囊進(jìn)行臨床試用治療血管性癡呆，每天3次,每次1粒，連服90天，結(jié)果病人記憶力在治療組治療后有明顯加強，總有效率為76.7%。實施例3蜜丸原料來源同實施例l取人參皂苷Rb,2.0kg、人參皂苷Rd2.0kg、人參皂苷Re3.0kg、人參皂苷Rg,8.0kg、二苯乙烯苷10.0kg、銀杏內(nèi)酯2kg、黃酮混合物2kg,按等量遞增法混勻制成復(fù)方參烏醒腦有效成分組合物1(FSWXNl)29.0kg，加淀粉20.5kg，糊精15.kg,混勻，加蜂蜜10kg制成小水蜜丸，6(TC干燥得，成72.5kg干燥丸，裝0號膠囊、共制得膠囊24.1萬粒，每粒0.30g，含F(xiàn)SWX&120mg/粒。口服劑量一次1粒，一日2次。用HPLC方法測定每小袋膠囊中小蜜丸中含各有效成分含量結(jié)果如下表。檢測項目含量(mg/粒)檢測項目含量(mg/粒)人參皂苷Rbl8.26二苯乙烯苷28.90人參皂苷Rgl33.10銀杏內(nèi)酯8.20人參皂苷Rd8.23槲皮素4.06人參皂苷Re12.42山柰酚2.85試用于進(jìn)行臨床治療中風(fēng)后遺癥，每天2次，每次1粒，連服60天，結(jié)果病人語言不利、神情呆滯、善忘不寐、煩躁、易怒等癥狀明顯改善；記憶力在治療組治療后有明顯加強，總有效率為70.5%。實施例4、粉針劑原料來源同實施例l取人參皂苷Rthlkg、人參皂苷Rd1.0kg、人參皂苷Re1.25kg、人參皂苷Rg,1.5kg、二苯乙烯苷0.50kg、銀杏內(nèi)酯1.25kg、黃酮混合物0.50kg,按等量遞增法混勻制成有效成分混合物合物(FSWXN2)7Kg，添加碳酸氫鈉0.50kg，按粉針劑要求制成粉針劑粉7.50kg，裝針劑瓶、每瓶含F(xiàn)SWXN240mg。本發(fā)明所制得的復(fù)方參烏醒腦有效成分組合物2(FSWXN2)粉針劑粉，HPLC方法測定其各有效成分含量為人參皂苷Rb!13.03Q/c)、人參皂苷Rgi20.0P/0、、人參皂苷Rd13.13l人參皂苷Re16.61%、二苯乙烯苷4.62%、銀杏內(nèi)酯16.59%、槲皮素3.30%。用此膠囊進(jìn)行臨床試用治療血管性癡呆，每天1次，每次1瓶，用前用注射用水5ml溶解，肌肉注射，連續(xù)30天，結(jié)果病人記憶力在治療組治療后有明顯加強，總有效率為72.5%。實施例5、散劑取2.0Kg實施例l所得FSWXN5，加淀粉1.25kg，糊精1.75kg，混勻，裝入小包，制得散劑。每小包重O.20g,含F(xiàn)SWXNs80mg/包。實施例6、顆粒劑取2.0Kg實施例l所得FSWXN5，加淀粉1.25kg，糊精1.75kg，混勻，加75%酒精制粒，60°(:干燥，整粒，包裝小包裝0.20g，含F(xiàn)SWXN80mg。即成顆粒劑。實施例7、合劑取400g實施例1所得FSWXN5,羧甲基纖維素鈉500g，加蔗糖5kg、蒸餾水20000ml制成合劑，裝入瓶中，每瓶60ml，含F(xiàn)SWXN520mg/ml。即成合劑實施例8、混懸劑取500g實施例1所得FSWXN5，加羧甲基纖維素鈉lOOOg穩(wěn)定劑，加蔗糖10kg、蒸餾水25000ml，混勻、煮沸，即得混懸劑規(guī)格裝入瓶中，每瓶60ml，含F(xiàn)SWXNs20mg/ml。實施例9、糖漿劑取500g實施例1所得FSWXN5加20kg蔗糖，蒸餾水25000ml，混勻，加熱煮沸，裝入瓶中，即成糖漿劑。規(guī)格每瓶60ml，含F(xiàn)SWXN520mg/ml。實施例IO、甘油酏劑取100g實施例l所得FSWXN5，甘油5000ml，加蔗糖1000g制成甘油酏劑，裝入瓶中，即成酏劑。規(guī)格每瓶60ml，含F(xiàn)SWXNs20mg/ml。權(quán)利要求1.一種用于腦缺血損傷相關(guān)疾病的中藥有效成分的組合物，其特征在于由以下重量份的中藥有效成分和藥學(xué)上所允許的載體用常規(guī)的制劑工藝制成的制劑人參皂苷Rb12-10份人參皂苷Rg12-10份人參皂苷Rd1-5份人參皂苷Re1-5份二苯乙烯苷2-10份銀杏內(nèi)酯1-5份由山柰酚與槲皮素質(zhì)量比為1∶1組成的黃酮混合物1-5份。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥有效成分的組合物，其特征在于含有以下重量份的中藥有效成分和藥學(xué)上所允許的載體用常規(guī)的制劑工藝制成的制劑人參皂苷Rbl10份人參皂苷Rgl10份人參皂苷Rd1份人參皂苷Re4份二苯乙烯苷8份銀杏內(nèi)酯4份由山柰酚與槲皮素質(zhì)量比為l::1組成的黃酮混合物3份。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥有效成分的組合物，其特征在于所說的制劑為片劑、散劑、丸劑、凍干針粉劑、顆粒、合劑、混懸劑、糖漿劑、酏劑中的任意一種。全文摘要用于防治腦缺血損傷相關(guān)疾病的中藥有效成分的組合物，具體涉及用中藥的有效成分制備的制劑。它是由以下重量份的中藥有效成分和藥學(xué)上所允許的載體用常規(guī)的制劑工藝制成的制劑人參皂苷Rb12-10份、人參皂苷Rg12-10份、人參皂苷Rd1-5份、人參皂苷Re1-5份、二苯乙烯苷2-10份、銀杏內(nèi)酯1-5份和由山柰酚與槲皮素質(zhì)量比為1∶1組成的黃酮混合物1-5份。本發(fā)明的優(yōu)點是克服傳統(tǒng)復(fù)方中藥組成復(fù)雜，產(chǎn)品質(zhì)量無法有效控制，導(dǎo)致療效不穩(wěn)定的缺點，本產(chǎn)品成分明了，作用明確、質(zhì)量穩(wěn)定，對缺血性中風(fēng)及后遺癥、腦動脈硬化、血管性癡呆具有顯著防治效果，能改善病人的運動神經(jīng)功能和學(xué)習(xí)記憶功能；毒性很低，沒有明顯副作用；制備方法簡單，宜工業(yè)化批量生產(chǎn)。文檔編號A61K31/7048GK101357136SQ20081019830公開日2009年2月4日申請日期2008年9月4日優(yōu)先權(quán)日2008年9月4日發(fā)明者丁金龍,樸勝華,胡因銘,臧林泉,貝偉劍,姣郭申請人:廣東藥學(xué)院