專利名稱：：注射用美洛西林鈉舒巴坦鈉及其凍干粉針劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供一種注射用的美洛西林鈉和舒巴坦鈉的分離純化方法，以及美洛西林鈉舒巴坦鈉粉針劑的制備方法。屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。技術(shù)背景美洛西林屬青霉素類廣譜抗生素，主要通過干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成而起殺菌作用；舒巴坦除對(duì)奈瑟菌科和不動(dòng)桿菌外，對(duì)其它細(xì)菌無抗菌活性，但是舒巴坦對(duì)由e-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥菌株產(chǎn)生的多數(shù)重要的p-內(nèi)酰胺酶具有不可逆性的抑制作用。舒巴坦可防止耐藥菌對(duì)青霉素類和頭孢菌素類抗生素的破壞，舒巴坦與青霉素類和頭孢菌素類抗生素具有明顯的協(xié)同作用。目前使用的美洛西林鈉舒巴坦鈉復(fù)方制劑存在有效成分純度不高，以及由此引起的副作用大等問題。高速逆流色譜(High-SpeedCountercurrentChromatogr叩hy)是一種連續(xù)高效的液-液分配色譜分離技術(shù)，由于采用液態(tài)固定相而不需要固體支撐物，因而避免了因不可逆吸附引起的樣品損失、失活變性等，在近2030年發(fā)展十分迅速，但未有將高速逆流色譜用于美洛西林鈉和舒巴坦鈉的分離純化的報(bào)導(dǎo)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一在于提供一種注射用的美洛西林鈉和舒巴坦鈉的分離純化方法，以提高美洛西林鈉和舒巴坦鈉的注射劑穩(wěn)定性。本發(fā)明的目的之二在于提供一種美洛西林鈉舒巴坦鈉粉針劑的制備方法，用這種方法制備的粉針劑穩(wěn)定性好。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明技術(shù)方案如下本發(fā)明提供一種美洛西林鈉舒巴坦鈉注射劑的制備方法，其特征在于包括美洛西林鈉或者舒巴坦鈉的原料用高速逆流色譜進(jìn)行純化的步驟，其中所述高速逆流色譜的條件為以三氯甲烷、甲醇和水配制構(gòu)成固定相、流動(dòng)相的溶劑體系，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，使高速逆流色譜儀整個(gè)柱體中充滿固定相，再將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，美洛西林鈉或者舒巴坦鈉的原料用流動(dòng)相作為溶劑溶解后由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。上述所述的方法，其中所述溶劑體系中三氯甲烷、甲醇和水的用量體積比是0.81.5:L02.5:1;更加優(yōu)選所述溶劑體系中三氯甲垸、甲醇和水的用量體積比為1.2:1.8:1。本發(fā)明上述所述的方法，高速逆流色譜的主機(jī)轉(zhuǎn)速、流速等，沒有特別限制。作為本發(fā)明具體實(shí)施方式，本發(fā)明優(yōu)選將固定相和流動(dòng)相超聲脫氣后，先用固定相充滿整個(gè)柱體，然后開啟高速逆流色譜儀，轉(zhuǎn)速為10002000rpm，以1.02.0ml/min流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，再進(jìn)行進(jìn)樣。更加優(yōu)選高速逆流色譜的主機(jī)轉(zhuǎn)速為1500rpm，以1.5ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)。本發(fā)明上述所述方法，可以制得純度至少在99%以上的注射用美洛西林鈉和注射用舒巴坦鈉。所制得的注射用美洛西林鈉和注射用舒巴坦鈉，可以根據(jù)需要配制成各種注射劑。作為本發(fā)明優(yōu)選方案，所述方法，其中所述的注射劑為凍干粉針，美洛西林鈉或者舒巴坦鈉的原料用高速逆流色譜分離，分別收集美洛西林鈉99%以上部分和舒巴坦鈉99%以上部分，冷凍干燥、粉碎后，按比例進(jìn)行無菌分裝。如果需要，上述所述的方法，其中收集到的99%以上部分，在進(jìn)行冷凍干燥前，先用活性炭脫色，然后用微孔濾膜(例如0.22um微孔濾膜)過濾除菌，再進(jìn)行冷凍干燥，制成粉針劑。本發(fā)明上述所述的方法，其中所述注射劑中美洛西林鈉和舒巴坦鈉的重量比為，可以根據(jù)需要按一定比例混合。作為優(yōu)選方式，所述注射劑中美洛西林鈉和舒巴坦鈉的重量比為(15):(12);更優(yōu)選美洛西林鈉和舒巴坦鈉的重量比為4:1。其中，上述所述方法中，所述凍干粉針的制劑規(guī)格，可以根據(jù)需要確定，本發(fā)明優(yōu)選每瓶裝量為0.625g3.75g。進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供一種注射用美洛西林鈉或者注射用舒巴坦鈉的純化方法，其特征在于包括美洛西林鈉或者舒巴坦鈉的原料用高速逆流色譜5進(jìn)行純化的步驟，其中所述高速逆流色譜的條件為以三氯甲烷、甲醇和水配制構(gòu)成固定相、流動(dòng)相的溶劑體系，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，使高速逆流色譜儀整個(gè)柱體中充滿固定相，再將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，美洛西林鈉或者舒巴坦鈉的原料用流動(dòng)相作為溶劑溶解后由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。上述所述方法，其中所述溶劑體系中三氯甲烷、甲醇和水的用量體積比為0.81.5:L02.5:1;更加優(yōu)選所述溶劑體系中三氯甲烷、甲醇和水的用量體積比為1.2:1.8:1。作為本發(fā)明具體實(shí)施方式，本發(fā)明優(yōu)選將固定相和流動(dòng)相超聲脫氣后，先用固定相充滿整個(gè)柱體，然后開啟高速逆流色譜儀，轉(zhuǎn)速為10002000rpm，以1.02.0ml/min流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，再進(jìn)行進(jìn)樣；優(yōu)選轉(zhuǎn)速為1500rpm，以1.5ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)。本發(fā)明采用高速逆流色譜，以三氯甲烷、甲醇、水配制構(gòu)成固定相、流動(dòng)相的溶劑體系，對(duì)美洛西林鈉和舒巴坦鈉進(jìn)行分離純化，得到注射用美洛西林鈉和舒巴坦鈉，所得產(chǎn)品純度至少在99%以上，所制得的注射劑具有改善的穩(wěn)定性。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1、本發(fā)明采用了高速逆流色譜分離方法，高速逆流色譜技術(shù)避免了因吸附作用引起的樣品損失、樣品組分的化學(xué)變性，分離效能與容量可以與制備HPLC相比，而且一般不存在峰的拖尾現(xiàn)象。2、采用高速逆流色譜純化方法，使原料的純度得到很大的提高，產(chǎn)品純度至少達(dá)到99%以上，而且純化過程無污染，便于工業(yè)連續(xù)化生產(chǎn)。3、本方法純化美洛西林鈉和舒巴坦鈉的有效理論塔板數(shù)為13002500，具有分離高效、快速、分離量大、樣品無損失、回收率高、分離環(huán)境溫和、節(jié)約溶劑等特點(diǎn)。4、采用離速逆流色譜純化制備的凍干粉針劑，除去了很多水不溶性雜質(zhì)，提高了在水中的溶解性和溶液的穩(wěn)定性。本發(fā)明提供的制備美洛西林鈉舒巴坦鈉粉針劑的方法，制備的粉針劑純度高，溶解性好，性質(zhì)穩(wěn)定。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，以助于理解本發(fā)明的內(nèi)容。下面的實(shí)施例中所用的美洛西林鈉和舒巴坦鈉原料，均由山東瑞陽(yáng)制藥有限公司提供，純度分別為96.0%和95.9%。實(shí)施例l使用半制備型高速逆流色譜儀，配有恒流泵，15ml進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱體積為200ml，UV紫外檢測(cè)器。將體積比為1.2:1.8:1的三氯甲烷甲醇水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動(dòng)相，超聲脫氣后，先用固定相充滿整個(gè)柱體，然后開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為1500rpm，以1.5ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，將美洛西林鈉原料溶于下相中，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測(cè)器紫外圖譜，收集收集99%以上部分，活性炭脫色，0.22um微孔濾膜過濾除菌后，冷凍干燥，得純化原料粉。經(jīng)HPLC分析，美洛西林鈉的純度為99.4%,有效理論塔板數(shù)為1988。同法純化舒巴坦鈉原料，冷凍干燥，得舒巴坦鈉純化原料粉。經(jīng)HPLC分析，舒巴坦鈉的純度為99.1%，有效理論塔板數(shù)為2046。將冷凍干燥后的美洛西林鈉和舒巴坦鈉純品分別過60目篩粉碎，然后按重量比4:l混合均勻，在無菌室內(nèi)IOO級(jí)條件下分裝，得注射用美洛西林鈉舒巴坦鈉無菌制劑，每瓶裝量為0.625g。實(shí)施例2使用半制備型高速逆流色譜儀，配有恒流泵，15ml進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱體積為200ml，UV紫外檢測(cè)器。將體積比為0.8:2.5:1的三氯甲烷:甲醇水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動(dòng)相，超聲脫氣后，先用固定相充滿整個(gè)柱體，然后開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為2000rpm，以1.2ml/min的流速將流動(dòng)相泵入住內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，將美洛西林鈉原料溶于下相中，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測(cè)器紫外圖譜，收集收集9%以上部分，活性炭脫色，0.22lim微孔濾膜過濾除菌后，冷凍干燥，得純化原料粉。經(jīng)HPLC分析，美洛西林鈉的純度為99.3%，有效理論塔板數(shù)為2014。同法純化舒巴坦鈉原料，冷凍干燥，得舒巴坦鈉純化原料粉。經(jīng)HPLC分析，舒巴坦鈉的純度為99.2%，有效理論塔板數(shù)為1776。將冷凍干燥后的美洛西林鈉和舒巴坦鈉純品分別過100目篩粉碎，然后按重量比4:l混合均勻，在無菌室內(nèi)IOO級(jí)條件下分裝，得注射用美洛西林鈉舒巴坦鈉無菌制劑，每瓶裝量為1.25g。實(shí)施例3(對(duì)比)使用半制備型高速逆流色譜儀，配有恒流泵，15ml進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱體積為200ml，UV紫外檢測(cè)器。將體積比為0.7:2.6:1的三氯甲垸甲醇水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動(dòng)相，超聲脫氣后，先用固定相充滿整個(gè)柱體，然后開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為1000rpm，以1.5ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，將美洛西林鈉原料溶于下相中，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測(cè)器紫外圖譜，收集收集96%以上部分，活性炭脫色，0.22um微孔濾膜過濾除菌后，冷凍干燥，得純化原料粉。經(jīng)HPLC分析，美洛西林鈉的純度為97.3%，有效理論塔板數(shù)為1685。同法純化舒巴坦鈉原料，冷凍干燥，得舒巴坦鈉純化原料粉。經(jīng)HPLC分析，舒巴坦鈉的純度為97.1%，有效理論塔板數(shù)為1956。將冷凍干燥后的美洛西林鈉和舒巴坦鈉純品分別過80目篩粉碎，然后按重量比4:l混合均勻，在無菌室內(nèi)IOO級(jí)條件下分裝，得注射用美洛西林鈉舒巴坦鈉無菌制劑，每瓶裝量為0.625g。實(shí)施例4(對(duì)比)使用半制備型高速逆流色譜儀，配有恒流泵，15ml進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱體積為200ml，UV紫外檢測(cè)器。將體積比為1.6:0.9:1的三氯甲烷甲醇水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動(dòng)相，超聲脫氣后，先用固定相充滿整個(gè)柱體，然后開啟高速逆流色譜儀，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為1300rpm，以1.3ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，將美洛西林鈉原料溶于下相中，由進(jìn)樣闊進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測(cè)器紫外圖譜，收集收集96%以上部分，活性炭脫色，0.22ym微孔濾膜過濾除菌后，冷凍干燥，得純化原料粉。經(jīng)HPLC分析，美洛西林鈉的純度為97.4%,有效理論塔板數(shù)為2240。同法純化舒巴坦鈉原料，冷凍干燥，得舒巴坦鈉純化原料粉。經(jīng)HPLC分析，舒巴坦鈉的純度為97.8%，有效理論塔板數(shù)為2006。將冷凍干燥后的美洛西林鈉和舒巴坦鈉純品分別過60目篩粉碎，然后按重量比4:l混合均勻，在無菌室內(nèi)IOO級(jí)條件下分裝，得注射用美洛西林鈉舒巴坦鈉無菌制劑，每瓶裝量為1.25g。實(shí)驗(yàn)例5質(zhì)量研究分別將以上制得的樣品在高溫6(TC、光照4500Lx條件下放置IO天進(jìn)行影響因素試驗(yàn)考察，其結(jié)果見表1;在高溫40'C、相對(duì)濕度75%±5%條件下6個(gè)月，進(jìn)行加速試驗(yàn)考察，其結(jié)果見表2;在高溫25'C、相對(duì)濕度60%±10%條件下18個(gè)月，進(jìn)行長(zhǎng)期試驗(yàn)考察，檢測(cè)各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)的變化，其結(jié)果見表3。表l影響因素結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表2加速試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表3長(zhǎng)期試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注以上表格中的"Y1，Y2，Y3"分別表示黃色1號(hào)、黃色2號(hào)、黃色3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液，"<Y1"表示不深于黃色1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液；"1#、2**"表示l號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液，2號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液，"<1#"表示不深于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)濁度液。由以上數(shù)據(jù)結(jié)果可以看出，本發(fā)明實(shí)施例l、實(shí)施例2制得的樣品純度很好，而且影響因素10天、加速6月和長(zhǎng)期18月后各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)無明顯變化，均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。充分說明了在本發(fā)明技術(shù)范圍內(nèi)可以很好的純化美洛西林鈉和舒巴坦鈉原料，制備質(zhì)量合格的注射用美洛西林鈉舒巴坦鈉制劑。已經(jīng)根據(jù)優(yōu)選實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了描述。應(yīng)當(dāng)理解的是前面的描述和實(shí)施例僅僅為了舉例說明本發(fā)明而已。在不偏離本發(fā)明的精神和范圍的前提下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以設(shè)計(jì)出本發(fā)明的多種替換方案和改進(jìn)方案，其均應(yīng)被理解為在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1、一種美洛西林鈉舒巴坦鈉注射劑的制備方法，其特征在于包括美洛西林鈉或者舒巴坦鈉的原料用高速逆流色譜進(jìn)行純化的步驟，其中所述高速逆流色譜的條件為以三氯甲烷、甲醇和水配制構(gòu)成固定相、流動(dòng)相的溶劑體系，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，使高速逆流色譜儀整個(gè)柱體中充滿固定相，再將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，美洛西林鈉或者舒巴坦鈉的原料用流動(dòng)相作為溶劑溶解后由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。2、如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于所述溶劑體系中三氯甲垸、甲醇和水的用量體積比為0.81.5:L02.5:1;優(yōu)選所述溶劑體系中三氯甲垸、甲醇和水的用量體積比為1.2:1.8:1。3、如權(quán)利要求1一2所述的方法，其特征在于固定相和流動(dòng)相超聲脫氣后，先用固定相充滿整個(gè)柱體，然后開啟高速逆流色譜儀，轉(zhuǎn)速為10002000rpm，以1.02.0ml/min流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，再進(jìn)行進(jìn)樣；優(yōu)選轉(zhuǎn)速為1500rpm，以1.5ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)。4、如權(quán)利要求1一3所述的方法，其中所述的注射劑為凍干粉針，美洛西林鈉或者舒巴坦鈉的原料用高速逆流色譜分離，分別收集美洛西林鈉99%以上部分和舒巴坦鈉99%以上部分，冷凍干燥、粉碎后，按比例進(jìn)行無菌分裝。5、如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于在進(jìn)行冷凍干燥前先用活性炭脫色，然后用微孔濾膜過濾除菌。6、如權(quán)利要求1一5所述的方法，其中所述注射劑中美洛西林鈉和舒巴坦鈉的重量比為(15):(12)，優(yōu)選美洛西林鈉和舒巴坦鈉的重量比為4:1。7、如權(quán)利要求4一6所述的方法，其特征在于所述凍干粉針的每瓶裝量為0.625g3.75g。8、一種注射用美洛西林鈉或者注射用舒巴坦鈉的純化方法，其特征在于包括美洛西林鈉或者舒巴坦鈉的原料用高速逆流色譜進(jìn)行純化的步驟，其中所述高速逆流色譜的條件為以三氯甲烷、甲醇和水配制構(gòu)成固定相、流動(dòng)相的溶劑體系，上相為固定相，下相為流動(dòng)相，使高速逆流色譜儀整個(gè)柱體中充滿固定相，再將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，美洛西林鈉或者舒巴坦鈉的原料用流動(dòng)相作為溶劑溶解后由進(jìn)樣閥進(jìn)樣。9、如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述溶劑體系中三氯甲烷、甲醇和水的用量體積比為0.81.5:1.02.5:1;優(yōu)選所述溶劑體系中三氯甲垸、甲醇和水的用量體積比為1.2:1.8:1。。10、如權(quán)利要求8—9所述的方法，其特征在于固定相和流動(dòng)相超聲脫氣后，先用固定相充滿整個(gè)柱體，然后開啟高速逆流色譜儀，轉(zhuǎn)速為10002000rpm，以1.02.0ml/min流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，再進(jìn)行進(jìn)樣；優(yōu)選轉(zhuǎn)速為1500rpm，以1.5ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)。全文摘要本發(fā)明提供一種注射用美洛西林鈉舒巴坦鈉及其凍干粉針劑的制備方法，以及注射用的美洛西林鈉和舒巴坦鈉的分離純化方法。本發(fā)明采用高速逆流色譜，以三氯甲烷、甲醇和水配制構(gòu)成固定相、流動(dòng)相的溶劑體系，對(duì)美洛西林鈉和舒巴坦鈉進(jìn)行分離純化，得到注射用的美洛西林鈉和舒巴坦鈉，所得產(chǎn)品純度可達(dá)99％以上，所制得的注射劑具有改善的穩(wěn)定性。文檔編號(hào)A61K31/429GK101322685SQ200810134828公開日2008年12月17日申請(qǐng)日期2008年8月1日優(yōu)先權(quán)日2008年8月1日發(fā)明者民邱申請(qǐng)人:海南百那醫(yī)藥發(fā)展有限公司