專利名稱：：從植物中提取α-葡萄糖苷酶抑制劑有效成分的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種從植物中提取a-葡萄糖苷酶抑制劑有效成分的方法，屬于中草藥制備及化學(xué)化工
技術(shù)領(lǐng)域：
。技術(shù)背景青錢柳是胡桃科的單一屬種植物，是我國珍稀植物之一。其形態(tài)為落葉喬木，高可達(dá)20米，主要分布于海拔400米至800米的山坡或山窩的闊葉林中，習(xí)慣于云霧彌漫的陰涼環(huán)境。青錢柳是中國特有的天然保健食品資源。青錢柳葉含鍺、硒、鉻、釩、鋅、鐵、鈣等多種微量元素。近年來，發(fā)現(xiàn)青錢柳具有降糖作用，但未見從其中提取a-葡萄糖苷酶抑制劑有效成分的研究報(bào)道。a-葡萄糖苷酶(a-glucosidase,EC3.2丄20)又叫a-D-葡萄糖苷水解酶，以前稱作麥芽糖酶(maltase)。a-葡萄糖苷酶在自然界廣泛分布，種類繁多，性質(zhì)各異，幾乎存在于所有生物體內(nèi)。它在人類的糖原降解和動物、植物、微生物的糖類代謝方面具有重要的生理功能。它可以從低聚糖類底物(淀粉、糊精、蔗糖、麥芽糖等)的非還原末端切開a-l,4糖苷鍵，釋放出葡萄糖。而a-葡萄糖苷酶抑制劑能抑制小腸刷狀緣上各種a-葡萄糖苷酶，使淀粉類分解為麥芽糖進(jìn)而分解為葡萄糖的速度和蔗糖分解為葡萄糖的速度減慢，其中對葡萄糖苷酶的抑制作用最強(qiáng)。研究證實(shí)，a-葡萄糖苷酶抑制劑可以防治餐后高血糖癥和緩解高胰島素血癥，同時(shí)可以提高糖耐量，還可預(yù)防和治療肥胖癥和高三酰甘油血癥，用于治療因碳水化合物代謝紊亂而引起的疾病。阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖幾種典型的(X-葡萄糖苷酶抑制劑。此類降糖藥的特點(diǎn)主要是降低餐后血糖而對降低空腹血糖無作用、安全和不增加胰島素的分泌。從天然植物中提取具有a-葡萄糖苷酶抑制活性的成分，用于降糖藥物、保健品和食品的開發(fā)，是目前a-葡萄糖苷酶抑制劑研究的重點(diǎn)之一。由于青錢柳具有明顯的降糖作用，因此從青錢柳中提取相關(guān)的成分，可以開發(fā)降糖藥物、保健品以及食品。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種從青錢柳葉片植物中提取a-葡萄糖苷酶抑制劑有效成分的方法。本發(fā)明的要點(diǎn)是首先采用有機(jī)萃取方法去處對(X-葡萄糖苷酶低抑制活性組分，再用大孔吸附樹脂和sephadexLH-20柱層析技術(shù)提取對a-葡萄糖苷酶有強(qiáng)烈抑制活性的有效組分；具體包括以下的工藝過程和步驟a.將青錢柳植物葉片進(jìn)行粉碎，放入一容器，按1:40(g/ml)加入50%乙醇溶液，在室溫下震蕩3h,收集提取液，反復(fù)3次，合并收集提取液；旋干后，用蒸餾水加熱重溶;b.按體積比i:i加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分另作處理；水相部分按i:i加入正丁醇萃取，正丁醇部分另作處理，收集萃取物進(jìn)行下一步處理；C.上述萃取物旋干重溶，上大孔吸附樹脂柱，用水-乙醇梯度洗脫，乙醇濃度0-100%;洗脫流速0.4ml/min，收集30-40%乙醇洗脫峰，進(jìn)一步處理；d.將步驟c部分旋干重溶，上sephadexLH-20柱；用水-乙醇梯度洗脫，乙醇濃度0-100%，洗脫流速0.3ml/min;收集具有活性的乙醇洗脫峰，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇溶劑，得到對ot-葡萄糖苷酶具有強(qiáng)效抑制活性的組分。本發(fā)明方法采用有機(jī)萃取和兩步層析精致的聯(lián)合工藝，最后得到對a-葡萄糖苷酶具有強(qiáng)效抑制活性的組分不僅可用于降糖藥物的開發(fā)，而且也可以進(jìn)行物質(zhì)結(jié)構(gòu)的進(jìn)一步研究。本發(fā)明工藝簡單，易于操作，純度高，且產(chǎn)物不含有害物質(zhì)，對環(huán)境無污染。具體實(shí)施方式下面將結(jié)合一下實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的介紹實(shí)施例1本實(shí)施例中a-葡萄糖苷酶抑制劑提取過程和步驟如下(1)首先將2g植物葉片進(jìn)行粉碎；置250ml燒杯按l:40(g/ml)比例加入50%乙醇溶液，室溫震蕩3h;室溫，8000rpm/min離心20min，收獲上清；植物殘?jiān)偌尤?0%乙醇溶液，反復(fù)3次重復(fù)提??；合并3次提取液；(2)用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇溶液，得0.72g固體，加100ml熱水重溶；按1:1比例加入乙酸乙酯溶液萃取，收集水相部分85ml;按1:1比例在收獲溶液中加入正丁醇溶液萃取，收集水相部分，旋干得0.48g固體，5ml熱水重溶待用；(3)上述樣品上MARC(大孔吸附樹脂)層析(填料高35cm，柱直徑2.6cm)，用水-乙醇梯度洗脫,乙醇溶液濃度0-100%,洗脫流速0.4ml/min。分部收集洗脫液，活性檢測后，收集30-40%乙醇洗脫峰，旋干后得固體0.42g，2ml熱水重溶；(4)MARC收獲樣品上sephadexLH-20層析柱(填料高90cm，柱直徑1.6cm)，用水-乙醇梯度洗脫,乙醇溶液濃度0-100%，洗脫流速0.3ml/min。分部收集各乙醇洗脫峰，活性檢測后，收獲活性最高的部分，旋干后得固體0.06g。實(shí)施例2本實(shí)施例2的過程和實(shí)施例1完全相同，其步驟如下(1)首先將2g植物葉片進(jìn)行粉碎；置250ml燒杯按1:40(g/ml)比例加入50%乙醇溶液，室溫震蕩3h;室溫，8000rpm/min離心20min，收獲上清；植物殘?jiān)偌尤?0%乙醇溶液，反復(fù)3次重復(fù)提??；合并3次提取液；(2)用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇溶液，得0.81g固體，加100ml熱水重溶；按1:1比例加入乙酸乙酯溶液萃取，收集水相部分89ml;按1:1比例在收獲溶液中加入正丁醇溶液萃取，收集水相部分，旋干得0.52g固體，5ml熱水重溶待用；(3)上述樣品上MARC(大孔吸附樹脂)層析(填料高35cm，柱直徑2.6cm)，用水-乙醇梯度洗脫,乙醇溶液濃度0-100%，洗脫流速0.4ml/min。分部收集洗脫液，活性檢測后，收集40%乙醇洗脫峰，旋干后得固體0.45g，2ml熱水重溶；(4)MARC收獲樣品上sephadexLH-20層析柱(填料高90cm,柱直徑1.6cm)，用水-乙醇梯度洗脫,乙醇溶液濃度0-100%，洗脫流速0.3ml/min。分部收集各乙醇洗脫峰，活性檢測后，收獲活性最高的部分，旋干后得固體0.07g;由上述實(shí)施例中所得到的植物提取物在體外對a-葡萄糖苷酶的抑制試驗(yàn)敘述如下在試管中先后加入PH為6.8的lOOmM的磷酸鉀緩沖液、0.044U/ml的a-葡萄糖苷酶5ul、一定量的植物提取抑制劑，用緩沖液調(diào)節(jié)反應(yīng)總體系736ul，混勻后于37'C保溫20min，再加入2.0mM對硝基苯-(3-半乳糖苷(PNPG)64ul，在400nm連續(xù)測定lmin，斜率即為酶的活力。抑制率為(未加抑制劑的酶活力-加抑制劑的酶活力)/未加抑制劑的酶活力xlOO%。該提取工藝最后結(jié)果如下表所示<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>備注步驟1.50%乙醇溶液提取；步驟2.乙酸乙酯萃??；步驟3.正丁醇萃??；步驟4.MARC層析；步驟5.SephadexLH-20層析。權(quán)利要求1.一種從植物中提取α-葡萄糖苷酶抑制劑有效成分的方法，其特征在于該方法包括以下的工藝過程和步驟a、將植物葉片進(jìn)行粉碎，放入適當(dāng)容器，按1∶40(g/ml)加50％乙醇溶液室溫震蕩3h，收集提取液，反復(fù)3次，合并收集提取液；旋干后，用適當(dāng)體積蒸餾水加熱重溶；b、按體積比1∶1加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分另作處理；水相部分按1∶1加入正丁醇萃取，正丁醇部分另作處理，收集萃取物進(jìn)行下一步處理；C、上述萃取物旋干重溶，上大孔吸附樹脂柱；用水-乙醇梯度洗脫，乙醇濃度0-100％；洗脫流速0.4ml/min；收集30-40％乙醇洗脫峰，進(jìn)一步處理；D、將步驟c部分旋干重溶，上sephadexLH-20柱；用水-乙醇梯度洗脫，乙醇濃度0-100％，洗脫流速0.3ml/min；收集具有活性的乙醇洗脫峰，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收乙醇溶劑，得到對α-葡萄糖苷酶具有強(qiáng)效抑制活性的組分。全文摘要本發(fā)明涉及一種從植物中提取α-葡萄糖苷酶抑制劑有效成分的方法，該方法屬于中草藥制備及化學(xué)化工
技術(shù)領(lǐng)域：
；它首先采用有機(jī)萃取方法去除對α-葡萄糖苷酶低抑制活性組分，再用大孔吸附樹脂和sephadexLH-20柱層析技術(shù)提取對α-葡萄糖苷酶有強(qiáng)烈抑制活性的有效組分，抑制劑的得率為4％；本發(fā)明工藝簡單，易于操作，純度高，且產(chǎn)物不含有害物質(zhì)，對環(huán)境無污染；用本發(fā)明所得的植物提取物，不僅可用于降糖藥物的開發(fā)，而且也可以進(jìn)行物質(zhì)結(jié)構(gòu)的進(jìn)一步研究。文檔編號A61K36/185GK101254238SQ20081006053公開日2008年9月3日申請日期2008年3月26日優(yōu)先權(quán)日2008年3月26日發(fā)明者周海夢,孟凡國,胡衛(wèi)江,邱愛東申請人:清華大學(xué);浙江清華長三角研究院