專利名稱：一種天然高純科羅索酸和山楂酸及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物中草藥的活性成分及其制備方法，具體地說(shuō)是一種天然高純科羅索 酸和山楂酸及其制備方法。二、 背景技術(shù)枇杷葉為薔薇科植物枇杷(Eribotrya japonica (Thunb) Lindl)干燥葉，是常用中 藥材之一，具有化痰止咳、降氣和胃之效，常用于支氣管炎、肺熱咳嗽。在我國(guó)的華東、中 南、西南等地區(qū)廣泛種植。隨著枇杷葉藥用成分研究的深入，發(fā)現(xiàn)枇杷葉中三萜酸成分豐富，其中含有的科羅索酸 具有降血糖、減肥、抗腫瘤和抗炎作用，山楂酸具有抗腫瘤、抗病毒和抗心血管疾病作用。 國(guó)內(nèi)已有文獻(xiàn)報(bào)道枇杷葉總?cè)扑岢煞值闹苽浼捌湓诮笛?、抗炎、止咳藥物中的?yīng)用的專 利。CN1439648A公開了一種枇杷葉總?cè)扑峤M分為烏蘇酸、2a-羥基烏蘇酸、2 a -羥基齊墩 果酸、齊墩果酸、坡模酸和薔薇酸。其制備首先用95%乙醇回流提取、脫溶得到浸膏，然后 依次用D101大孔吸附樹脂處理和中性A203柱層析。該總?cè)扑峋哂锌寡住⒅箍鹊人幚碜饔?。CN1640885A公開了一種枇杷葉總?cè)扑嶂饕芄?、齊墩果酸、可樂(lè)酸和2 a-羥基齊 墩果酸。其制備首先用乙醇或甲醇回流提取、脫溶后得到浸膏，用沸水洗滌除去水溶性成分， 濾渣經(jīng)洗滌、乙醇復(fù)溶、活性炭脫色最后脫去乙醇。該總?cè)扑峥捎糜诜乐翁悄虿?。CN1634971A公開了以3-羰基熊果酸酯和3-羰基齊墩果酸酯為原料合成科羅索酸和山楂 酸的方法，科羅索酸有降血糖、減肥、抗腫瘤和抗炎作用，山楂酸有抗腫瘤、抗病毒和抗心 血管疾病作用。US6485760、 US6716459和US20040072906公開了大花紫薇(Largetroernia Speciosa L.) 為原料制備含有科羅索酸醫(yī)藥原料的工藝及其在治療II型糖尿病和肥胖癥中的應(yīng)用。三、 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明旨在提供一種可供藥用的天然高純的科羅索酸和山楂酸，所要解決的技術(shù)問(wèn)題是 自枇杷葉中直接制備高純的科羅索酸和山楂酸。本發(fā)明所稱的天然高純科羅索酸和山楂酸是自枇杷葉中提取、然后分離得到的兩種五環(huán) 三萜酸，與現(xiàn)有技術(shù)的區(qū)別是科羅索酸的含量80. 0~99. 2%(w/w)，山楂酸的含量80. 0~99. 2% (w/w)?？屏_索酸和山楂酸有以下化學(xué)通式:當(dāng)R1=CH3,R2=H為山楂酸， 當(dāng)R1=H,R2= CH3為科羅索酸。 科羅索酸和山楂酸的制備方法，以枇杷葉為原料，包括乙醇或甲醇水溶液的回流提取、分離、濃縮、脫色、干燥和后處理，所述的回流提取是使用濃度為45~80% (w/w)的乙醇或 甲醇水溶液回流提取，分離得到提取液，與現(xiàn)有技術(shù)的區(qū)別是提取液濃縮時(shí)控制濃縮比，即 濃縮至原提取液體積的5~50%，優(yōu)選10~30%，然后冷卻靜置、分離、洗滌，將濾渣溶于乙 醇或甲醇后活性炭脫色，過(guò)濾分離，濾液脫溶后得到中間產(chǎn)物，呈淡黃色粉末狀，中間產(chǎn)物 是主要含科羅索酸和山楂酸的三萜酸。所述的后處理就是對(duì)中間產(chǎn)物用柱色譜分離、洗脫液 洗脫，分別收集含科羅索酸和山楂酸的洗脫液，脫溶后分別得到白色粉末狀的科羅索酸，純 度80.0~99.2%，以及山楂酸，純度80.0—99. 2%。色譜柱填料(固定相)選自正相硅膠或 氧化鋁，或者反相硅膠C8或Ci8，當(dāng)選擇正相硅膠色譜柱時(shí)，洗脫液為石油醚和乙酸乙酯， 混合比1: 0 0: l(v/v);當(dāng)選擇反相硅膠色譜柱時(shí)，洗脫液是pH值為2~7的75~95%(w/w) 的乙醇水溶液或甲醇水溶液。優(yōu)選pH值為3~6的75~95% (w/w)的乙醇水溶液或甲醇水 溶液。具體操作過(guò)程如下-(1) 用乙醇或甲醇含量大于45%( w/w )乙醇或甲醇水溶液回流提取，粉碎后枇杷葉與溶 劑質(zhì)量比為1:6至1:12，提取次數(shù)1至3次，每次1至5個(gè)小時(shí)；(2) 濾出提取液，減壓濃縮，控制濃縮液為原提取液體積的0.05~0.5倍，冷卻12h過(guò) 濾，用10 15倍重蒸餾水洗滌濾渣；(3) 將洗滌后的濾渣用乙醇或甲醇溶解，加0. 05至0. 20倍重活性碳，于85"下回流脫 色20分鐘，乘熱過(guò)濾，將濾液蒸干，得到淡黃色粉末的中間產(chǎn)物；(4) 將淡黃色粉末進(jìn)行固定相為正相硅膠、氧化鋁或反相C8、 C18硅膠柱色譜分離，正相色譜洗脫方式為石油醚與乙酸乙酯混合體系梯度洗脫(1: 0~0: 1)，反相色譜洗 脫方式為加酸調(diào)整pH值為2~7的乙醇-水或甲醇-水等度洗脫，洗脫劑中水含量小于30. 0%。(5)柱色譜分離后的科羅索酸洗脫液和山楂酸洗脫液蒸干后得到白色粉末，即為高純度 科羅索酸和山楂酸。測(cè)定方法為高效液相色譜法(HPLC-UV)，色譜固定相為碳十八垸基硅膠，流動(dòng)相為甲醇 -1. 0%醋酸溶液(體積比為88 : 12)，流速為0. 8mL/min，柱溫27°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm。四

圖l是山楂酸的液相色譜圖。 圖2是科羅索酸的液相色譜圖。五具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述。實(shí)施例1干燥枇杷葉2. 0Kg粉碎后，加80%乙醇(w/w) 20L回流提取3h，提取2次后合并濾液， 濃縮至2L過(guò)濾，得濾渣124.2g，將濾渣溶解于500mL乙醇中，加入25. Og活性炭下回 流脫色20分鐘，乘熱過(guò)濾，將濾液蒸干，得到淡黃色粉末54.2g，將淡黃色粉末，以甲 醇溶解硅膠拌樣，揮去溶劑后干法上硅膠柱分離，以石油醚與乙酸乙酯混合體系梯度洗 脫(10:0(v/v)至0:10(v/v))按11個(gè)梯度洗脫，每個(gè)梯度IOL，以500mL為單位分段收 集，以TLC檢測(cè)，按單一斑點(diǎn)合并得到科羅索酸和山楂酸餾分，蒸干后得科羅索酸粉末 4. 12g，山楂酸粉末3. 24g，科羅索酸含量為96. 2%，山楂酸含量為96. 1% (以重量計(jì))。實(shí)施例2干燥枇杷葉2. OKg粉碎后，加80。/。乙醇(w/w)20L回流提取3h，提取2次后合并濾液， 濃縮至4L過(guò)濾，得濾渣132. lg，將濾渣溶解于500mL乙醇中，加入25. Og活性炭回流 脫色20分鐘，乘熱過(guò)濾，將濾液蒸干，得到淡黃色粉末56.2g，將淡黃色粉末，以乙酸 乙酯溶解樣品，在固定相填料為碳十八垸基硅膠制備色譜上進(jìn)行分離，洗脫劑為83%甲 醇水溶液，醋酸調(diào)pH值至3 6，根據(jù)制備色譜圖收集科羅索酸和山楂酸餾分，蒸干后得 科羅索酸粉末4.42g，山楂酸粉末3.26g,科羅索酸含量為99. 2%，山楂酸含量為99. 1% (以重量計(jì))。山楂酸結(jié)構(gòu)測(cè)定IR (KBr) 3415cm-1為-0H伸縮振動(dòng)鋒；2973, 2927， 2872 cm-1為—C0—強(qiáng)伸縮振 動(dòng)鋒，為締合羥基的羰基峰；1691cm-l為雙鍵伸縮振動(dòng)區(qū)，包括羰基(OO)吸收、碳 -碳(C=C)雙鍵吸收；1458 cm-l ( C_H)彎曲振動(dòng)鋒。1300 400 cm_l，為指紋區(qū)。1H-麗R(DMS0—d6， 500MHz) S: 0. 71(3H， s， H29) ， 0. 71 (3H， s， H30) ， 0.88(3H， s， H25)， 0.88(3H， s， H24) ， 0.91 (3H， s， H26) ， 0.93 (3H， s， H27) ， 1. 1 (3H， s， H23) ， 4.33 (1H， d， J=9. 0Hz， H—2 0)， 4.24 (1H, dd， J=8.9， 11.5， H—3 a ) ， 5.17 (1H， t， J=3.4Hz， H12)， 3.42(1H， t， J= H18) ， 2.74 (2H， d， J= H19)13ONMR(DMS0_d6， 500MHz) S: 45.6(C_1), 67.1 (C-2 )， 82.2 (C-3)， 38. 9(C-4) ， 54. 7(C-5) ， 18(C_6) ， 33. 2(C-7) ， 46. 8(C-8) ， 47(C-9) ， 37. 6(C-10)， 23. 3 (C-11)， 121. 4 (C-12)， 143.8(C_13)， 41. 3 (C-14)， 27.1(C-15)， 22. 5(C_16)， 45. 4 (C-17) ， 23. 3 (C-18) ， 40. 7 (C_19) ， 30. 3 (C-20) ， 33. 3 (021) ， 32 (C-22) ， 28. 7 (C-23)， 16. 2(C—24)， 16.8(C-25)， 17(C—26) ， 25. 6(C—27)， 178. 5(C—28), 32. 8(C—29)， 22.9(030)?？屏_索酸結(jié)構(gòu)測(cè)定IR (KBr)與山楂酸基本相同。lH-NMR(DMS0_d6， 500MHz) S: 0.71(3H， s， H29) ， 0.75(3H, s， H30) ， 0.82(3H， s， H29)， 0.92(3H， s， H24) ， 0.92(3H， s， H26) ， 0.92 (3H， s， H27) ， 1.0(3H， s， H23) ， 4.22 (1H， d， J=8. 7Hz， H_2e)， 4. 33(1H， dd， J=9. 0， 11.5， H—3 a ) ， 5.17 (IH， t， J=3.4Hz， H12) 3.42(1H， t, J= H18) ， 2.74 (1H， t， J= H19)。13C-NMR (DMS0—d6， 500MHz) S : 46. 8 (C-1), 67. 1 (C-2) ， 82. 2 (C-3), 38. 8 (C_4) ， 54. 7 (C-5) ， 18. 0 (C-6) ， 32. 6 (C-7) ， 39. 0 (C_8) ， 47. 0 (C_9), 37. 5 (O10) ， 22. 9 (C_l 1), 124. 4 (C-12) ， 138. 2 (C-13) ， 41. 6 (C-14)' 27. 4 (C-15) ， 23. 7 (C-16) ， 46. 9 (C-17), 52. 3 (C-18)， 38. 4 (C-19) ， 38. 4 (O20) ， 30. 1 (C-21) ， 36. 2 (C-22), 28. 8 (C-23) ，17.1 (C-24) ， 16. 4 (C_25) 16. 9 (C-26), 23. 2 (C-27) ， 178. 2 (C_28) ,21.0 (C-29) ， 16. 9 (C_30)。
權(quán)利要求
1、一種天然高純科羅索酸，其特征在于是自枇杷葉中提取、分離得到的純度為80.0～99.2％科羅索酸。
2、 一種天然高純山楂酸，其特征在于是自枇杷葉中提取、分離得到的純度為 80. 0~99. 2%山楂酸。
3、 由權(quán)利要求1或2所述的科羅索酸和山楂酸的制備方法，以干燥的枇杷葉為原料， 包括乙醇或甲醇溶液的回流提取、分離、濃縮、脫色、干燥和后處理，其特征在于對(duì)回流 提取液濃縮時(shí)濃縮至原體積的5~50%，經(jīng)分離、脫色，脫溶后得到淡黃色粉末狀的中間產(chǎn)物， 所述的后處理就是對(duì)中間產(chǎn)物用柱色譜分離、洗脫液洗脫，分別收集含科羅索酸和山楂酸的 洗脫液，洗脫液脫溶后分別得到白色粉末狀的科羅索酸和山楂酸，色譜柱固定相選自正相硅膠或氧化鋁或反相硅膠C8或Cl8;洗脫液選自混合為比l: 0~0: l的石油醚和乙酸乙酯，或者pH值為2~7的75~95%的乙醇或甲醇水溶液。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于回流提取液濃縮時(shí)濃縮至原體積的 10~30%。
5、 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的制備方法，其特征在于洗脫液75~95%的乙醇或甲醇水 溶液的pH值為3~6。
全文摘要
一種天然高純科羅索酸和山楂酸是自枇杷葉中提取、分離得到的純度為80.0～99.2％科羅索酸和山楂酸。其制備方法為將干燥的枇杷葉粉碎后，以乙醇或甲醇回流提取，將提取濃縮后，將濃縮液中沉淀用水洗滌，以乙醇溶解，加活性炭脫色，脫色后溶液常壓濃縮至有固體物質(zhì)析出，將濃縮液低溫冷卻一段時(shí)間，過(guò)濾后，將濾渣溶解后進(jìn)行柱色譜分離，洗脫獲得科羅索酸和山楂酸餾分，減壓回收餾分中溶劑，干燥后即可獲得高純的科羅索酸和山楂酸產(chǎn)品。產(chǎn)品中的科羅索酸具有降血糖、減肥、抗腫瘤和抗炎作用，山楂酸具有抗腫瘤、抗病毒和抗心血管疾病作用。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101240008SQ20081001992
公開日2008年8月13日 申請(qǐng)日期2008年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月14日
發(fā)明者楊 呂, 旸 昕, 許舒雯, 陳龍勝 申請(qǐng)人:安徽省分析測(cè)試中心