專利名稱：注射用金蓮花總黃酮的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物總黃酮的提取、純化方法，具體是金蓮花總黃酮的 制備方法。
背景技術(shù)：
毛茛科金蓮花屬(rra肌^ )植物為多年生草本植物，在世界上共有約25 種種，主要分布于北溫帶及寒溫帶高山區(qū)域，我國有16種和6個變種，以 河北、山西、內(nèi)蒙古產(chǎn)量最多。在同屬的10余種金蓮花植物中，金蓮花 (rra肌ws c/n'we"w's Bge.)和亞洲金蓮花(rra肌ws L.)被《中藥大辭典》收錄供藥用。近年來，人們對同屬的長瓣金蓮花(7>0/^ ^^0/^^/^ 1". Schmidt)和短瓣金蓮花(rra肌iw/^te6ow7Reichb.)研究較多，顯示短瓣金蓮 花可能成為中藥金蓮花的重要代用新資源。在中國，金蓮花具有悠久的藥用歷史，它收載于本草，最初見于清趙學(xué) 敏所著《本草綱目拾遺》。夏季花盛開時采收晾干。以花入藥，其味苦，性 寒，毒，具有清熱解毒、抗菌消炎的作用。近代研究表明，其對急性化膿性 扁桃體炎、咽炎、上呼吸道感染、中耳炎及急性結(jié)膜炎、急性腸炎、泌尿系 統(tǒng)感染、痤瘡等均有較好的療效[袁強，等.金蓮花片治療感冒風(fēng)熱證90例 療效觀察.中國臨床醫(yī)生，2006， 34(2): 53;王平.金蓮花沖劑治療上呼吸道感 染療效觀察.中成藥，1996, 18(3): 50.]。天然藥物化學(xué)和現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明各種金蓮花屬植物中主要有效成 分為總黃酮，總黃酮中的主要成分均為牡荊苷(vitexin)和葒草苷(orientin)。 有報道從金蓮花中分離出的黃酮類物質(zhì)有牡荊苷、葒草苷、槲皮素、異當(dāng)藥 黃素、異日本當(dāng)藥黃素、薊黃素等[任正博，等.金蓮花化學(xué)成分究.2006,8(2): 14; Wang R.F, et al. Trollioside， a new compound from the flowers of Trollius chinensis. Journal of Asian Natural Products Research, 2004, 6(2): 139.]。有報道 從長瓣金蓮花的花和莖葉中分離得到牡荊苷、葒草苷、牡荊素2"-CM3-D-吡 喃木糖苷和葒草素2"-0-J3-D-吡喃木糖苷[劉麗娟等.長瓣金蓮花莖葉化學(xué)成分的研究.藥學(xué)學(xué)報，1992, 27(11): 837]。從短瓣金蓮花中分離得到牡荊苷、 葒草苷、槲皮素-新橙皮苷[黃文哲等.短瓣金蓮花化學(xué)成分的研究.中草藥, 2000,31(10): 731]，從阿爾泰金蓮花中分離得到柯伊利素(chrysoeriol)、葒草 苷(orientin)等[宋冬梅等.阿爾泰金蓮花化學(xué)成分的研究.中國藥物化學(xué)雜志， 2004,14(4): 233]。林秋鳳等[林秋鳳等.金蓮花抑菌抗病毒活性成分的初步 研究.浙江大學(xué)學(xué)報(理學(xué)版)，2004,31 (4) : 412]對金蓮花中總黃酮、 牡荊苷、荮草苷對抑菌、體外抗病毒作用展開研究，實驗結(jié)果表明了總黃酮、 牡荊苷、葒草苷對金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌有很好的抑制作用，總黃 酮對呼吸道合胞病毒、A型流感病毒合副流感3型病毒均有一定的抑制作用， 而牡荊苷、葒草苷對副流感3型病毒有較強的抑制作用。王凌云等[王凌云 等.長瓣金蓮花中黃酮苷的抑菌活性研究及牡荊苷的含量測定.中藥新藥與 臨床藥理，2003， 14 (4) :252]亦對長瓣金蓮花中黃酮苷的抑菌活性進了研 究，結(jié)果亦表明總黃酮、葒草苷、牡荊苷對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌 有較強的抑制作用。中國專利CN1872084公開了短瓣金蓮花提取物及葒草 苷、牡荊苷等IO種黃酮單體有效成分具有顯著的抗炎作用，各單體化合物 與C0X2酶均具有一定結(jié)合能力，可用于制備治療炎性疾病例如風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等病癥的藥物的用途。目前市場上金蓮花的成藥有金蓮花片，金蓮花咀嚼片、金蓮花潤喉片、 金蓮花分散片、金蓮花顆粒劑，金蓮花口服液，金蓮花膠囊等。但該類藥物 均為水提制備，工藝較為粗糙，存在服用劑量大、有效成分不清楚、劑型簡 單等缺點。中國專利CN1876031公開了金蓮花注射液及其制備方法，其中 金蓮花提取物原料僅采用大孔樹脂洗脫，總黃酮含量較低；中國專利CN 1452974公開了一種金蓮花粉針劑及其制備方法，該粉針包括以金蓮花為主 共四味中藥制成，其中金蓮花提取物僅采用水醇法制備。目前還沒有一種產(chǎn) 品是以金蓮花有效部位為基礎(chǔ)的注射劑等產(chǎn)品，有必要對金蓮花總黃酮進行 提取純化和深入開發(fā)研究。己有報道的金蓮花總黃酮多以水提，亦有報道用 聚酰胺或AB — 8大孔樹脂進行純化的，但總黃酮純度均不高(低于70%)。 雖然有報道[胡冰等.金蓮花注射劑精制新工藝研究.哈爾濱商業(yè)大學(xué)雪豹(自 然科學(xué)版)，2006， 22(3), 8 13]將水沉法和大孔樹脂吸附法聯(lián)合應(yīng)用對金蓮花粗提物進行精制總黃酮含量能達到80%,但其反復(fù)醇沉、冷凍，并用活性 炭吸附，對總黃酮的損失比較大，并且工藝復(fù)雜，不利于工業(yè)化生產(chǎn)。中國 專利CN1268631C公開了采用高速逆流色譜法(HSCCC)和制備液相色譜 對短瓣金蓮花總黃酮進行分離純化，得到純度高于98%的葒草苷、牡荊苷、 槲皮素-新橙皮糖苷，但該法需要采用特制設(shè)備，不利于工業(yè)化推廣使用。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種新的注射用金蓮花總黃酮的提取純化方法，該方法生產(chǎn) 的金蓮花總黃酮含量可達到70%以上，使得到的金蓮花總黃酮在純度、性 狀和療效方面均符合藥典規(guī)定的注射用標(biāo)準(zhǔn)，同時能適應(yīng)工業(yè)化生產(chǎn)，并且 對環(huán)境無污染。本發(fā)明提供的制備金蓮花總黃酮的方法包括以下工藝步驟(1) 選取金蓮花屬植物藥材，自然干燥；(2) 由(1)所得金蓮花藥材采用水或醇水(10-95%)混合溶媒提取， 提取液合并，濃縮至密度為1.05 1.15mg/ml，得金蓮花濃縮液；(3) 由(2)所得金蓮花濃縮液，過濾；濾液經(jīng)大孔樹脂、聚酰胺或反 相硅膠、凝膠等吸附材料中的一種，先用水洗，再用醇水混合溶媒梯度洗脫； 收集富含黃酮部位洗脫液，合并后減壓回收乙醇至干，得浸膏；(4) 由(3)所得浸膏經(jīng)水溶解，過濾；濾液經(jīng)大孔樹脂、聚酰胺或硅 膠、反相硅膠、凝膠等吸附材料中的一種但不同于步驟(3)所用的吸附材 料吸附，先用水洗，再用醇水混合溶媒梯度洗脫；收集富含黃酮部位洗脫液， 合并后經(jīng)濃縮，干燥，除盡溶劑，即得金蓮花總黃酮提取物。所述工藝步驟(1)中金蓮花藥材為金蓮花屬植物的一種，如金蓮花、 亞洲金蓮花、長瓣金蓮花、短瓣金蓮花、阿爾泰金蓮花等。所述工藝步驟(2)中采用水或醇水(10-95%的乙醇或甲醇)混合溶媒 提取，提取液合并，常法濃縮至密度為1.05 1.15mg/ml，得金蓮花濃縮液。所述工藝步驟(3)中，取(2)所得金蓮花濃縮液，過濾，濾液經(jīng)過大 孔樹脂、聚酰胺或硅膠、反相硅膠、凝膠等吸附材料中的一種進行柱層析吸 附，其中優(yōu)選大孔樹脂；大孔樹脂柱洗脫時先用水洗，再用醇(乙醇或甲醇) -水混合溶媒梯度洗脫，收集富含黃酮部位洗脫液，其中優(yōu)選乙醇一水混合溶媒梯度洗脫，更優(yōu)選用20% 80%乙醇分別洗脫，收集富含黃酮部位的 20% 80%乙醇洗脫液，合并后減壓回收乙醇至干，得浸膏。所述工藝步驟(4)中，將(3)中所得浸膏經(jīng)水溶解，過濾，濾液經(jīng)過 大孔樹脂、聚酰胺或反相硅膠、凝膠等吸附材料中的一種進行柱層析吸附； 洗脫時先用水洗，再用醇水混合溶媒梯度洗脫，其中優(yōu)選20% 80%乙醇 一水混合溶媒洗脫；收集富含黃酮部位洗脫液，合并后經(jīng)濃縮、干燥，除盡 溶劑，即得金蓮花總黃酮提取物，其中優(yōu)選減壓濃縮、真空干燥。由本發(fā)明以上工藝步驟制備所得的金蓮花總黃酮提取物，總黃酮含量大 于70%。所采用的總黃酮測定方法以蘆定為對照品，以亞硝酸鈉一硝酸 鋁為顯色劑，采用分光光度法在500nm處進行測定。本制備工藝所得原料含有70%以上的金蓮花總黃酮，符合國家新藥報 批中"以有效部位為組分的注射液，其有效部位的含量應(yīng)不少于總固體量的 70% (靜脈用不少于80%)"的規(guī)定。本發(fā)明中僅使用了水和乙醇這兩種無 害的溶媒，避免了有害有機溶劑，降低了提取、純化成本，保證了用藥安全 性，非常適合工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明內(nèi)容是通過大量實驗研究、進行工藝優(yōu)化分析完成的，以下述具 體實施例進行說明。
具體實施方式
本發(fā)明所述的金蓮花提取物是按如下實施例所表示的方法制造，所涉及 到的方法是本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠掌握和運用的技術(shù)手段。但以下實施例不 得理解為任何意義上的對本發(fā)明權(quán)利要求的限制。實施例1:取金蓮花藥材500克，加15倍量水煎煮兩次，每次1小時，合并提取 液，減壓回收溶劑至藥液密度為1.05，過濾，上樣于處理好的DA201大孔 樹脂，分別用水、40%乙醇洗脫；收集40%乙醇洗脫液，并將其減壓回收 乙醇至干，所得浸膏經(jīng)水溶解，過濾，濾液上樣于己處理好的反相硅膠，分 別用水、80%乙醇洗脫；收集80%乙醇洗脫液，將其減壓濃縮并真空干燥 后粉碎，得到金蓮花總黃酮5.5g，總黃酮含量為86.7%。實施例2:取金蓮花藥材500克，加10倍量水煎煮兩次，每次1.5小時，合并提 取液，減壓回收溶劑至藥液密度為1.09，過濾，上樣于處理好的HPD450 大孔樹脂，分別用水、50%乙醇洗脫；收集50%乙醇洗脫液，并將其減壓 回收乙醇至干，所得浸膏經(jīng)水溶解，過濾，濾液上樣于己處理好的LH-20 凝膠，分別用水、70%乙醇洗脫；收集70%乙醇洗脫液，將其減壓濃縮并 真空干燥后粉碎，得到金蓮花總黃酮5.7g，總黃酮含量為87.1%。實施例3:取金蓮花藥材500克，加12倍量水煎煮兩次，每次2小時，合并提取 液，減壓回收溶劑至藥液密度為1.06，過濾，上樣于處理好的S-8大孔樹脂， 分別用水、60%乙醇洗脫；收集60%乙醇洗脫液，并將其減壓回收乙醇至 干，所得浸膏經(jīng)水溶解，過濾，濾液上樣于巳處理好的聚酰胺，分別用水、 50%乙醇洗脫；收集50%乙醇洗脫液，將其減壓濃縮并真空干燥后粉碎， 得到金蓮花總黃酮5.8g，總黃酮含量為88.3%。實施例4:取金蓮花藥材500克，加8倍量水煎煮兩次，每次1.5小時，合并提取 液，減壓回收溶劑至藥液密度為1.10，過濾，上樣于處理好的AB-8大孔樹 脂，分別用水、70%乙醇洗脫；收集70%乙醇洗脫液，并將其減壓回收乙 醇至干，所得浸膏經(jīng)水溶解，過濾，濾液上樣于已處理好的聚酰胺，分別用 水、70%乙醇洗脫；收集70%乙醇洗脫液，將其減壓濃縮并真空干燥后粉 碎，得到金蓮花總黃酮5.9g，總黃酮含量為84.3%。
權(quán)利要求
1、一種注射用金蓮花總黃酮的制備方法，由以下步驟組成(1)選取金蓮花藥材，自然干燥；(2)由(1)所得金蓮花藥材采用水或醇水混合溶媒提取，提取液，濃縮至密度為1.05～1.15mg/ml；(3)由(2)所得金蓮花濃縮液，過濾；濾液經(jīng)大孔樹脂、聚酰胺、硅膠、反相硅膠或凝膠中的至少一種進行吸附，先用水洗，再用醇水混合溶媒梯度洗脫；收集富含黃酮部位洗脫液，合并后減壓回收乙醇至于，得浸膏；(4)由(3)所得浸膏經(jīng)水溶解，過濾；濾液經(jīng)大孔樹脂、聚酰胺、硅膠、反相硅膠或凝膠中的至少一種但不同于步驟(3)所用的吸附材料吸附，先用水洗，再用醇水混合溶媒梯度洗脫；收集富含黃酮部位洗脫液，合并后經(jīng)濃縮，干燥，除盡溶劑，即得。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中歩驟(1)中所述金蓮花藥材為金 蓮花屬植物的一種。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中步驟(3)中選用大孔樹脂吸附材 料，步驟(4)中選用除大孔樹脂外的其它吸附材料。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其中步驟(4)中選用聚酰胺吸附材料， 采用水、20% 80%乙醇進行洗脫；收集20% 50%乙醇部分富含黃酮部 位洗脫液。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述總黃酮中含有葒草 苷和牡荊苷類的黃酮成分，總黃酮含量大于70%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種注射用金蓮花總黃酮的制備方法，該提取物中主要含有葒草苷和牡荊苷等黃酮類成分，總黃酮含量大于70％，本發(fā)明公開了所述提取物的制備方法，主要特征在于該提取物經(jīng)兩次柱層析精制處理獲得，其中所用吸附材料為大孔樹脂、聚酰胺或硅膠、反相硅膠、凝膠等吸附材料中的兩種，該提取物經(jīng)過現(xiàn)代科學(xué)方法加以提取、濃縮、精制而成，工藝簡單易行，提高了原藥材的有效成份純度，減小了服用劑量和不良反應(yīng)。
文檔編號A61P31/12GK101234147SQ20081000768
公開日2008年8月6日 申請日期2008年3月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月6日
發(fā)明者劉江云, 蔡金娜, 陳超敏 申請人:江西匯仁藥業(yè)有限公司