專利名稱：可注射人發(fā)角蛋白軟組織填充材料的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種醫(yī)學(xué)整形美容用材料，尤其涉及一種來(lái)源于自體的 適合于注射的可注射人發(fā)角蛋白軟組織填充材料的制備方法。
背景技術(shù)：
軟組織填充材料在整形外科領(lǐng)域有著廣泛而重要的應(yīng)用。在組織缺 損修復(fù)、改善面部及身體輪廓的治療中，通過(guò)軟組織填充材料可以達(dá)到 理想的效果；與手術(shù)方法相比，注射軟組織填充材料的方法簡(jiǎn)單實(shí)用、 易于掌握、形態(tài)容易控制。
但是這種方法對(duì)填充材料的要求很高，理想的充填材料應(yīng)當(dāng)具有以 下的特點(diǎn)1)最好是自體的材料，不存在免疫排斥問(wèn)題；2)能比較長(zhǎng) 期地存留，但不一定是永久性的；3)無(wú)痛苦且放置容易，質(zhì)地接近正常 組織；4)最好能通過(guò)注射法置入；5)價(jià)格不昂貴，副作用少，不出現(xiàn) 皮膚青腫、刺激性、炎癥、遷移等。理想的自體注射材料能夠提供長(zhǎng)期 的矯正效果，不需要犧牲額外組織，僅需可以忽略的手術(shù)操作獲得原始 組織，通過(guò)適當(dāng)?shù)奶幚砑庸か@得無(wú)限的產(chǎn)量。
1899年，Gersuny為一位睪丸切除后的年輕男性行陰囊內(nèi)石蠟注射 陰囊充填開(kāi)始，誕生了注射充填的技術(shù)和科學(xué)。自從1977年膠原注射材 料的出現(xiàn)，許多來(lái)源于人體、動(dòng)物甚至是細(xì)菌的天然填充材料應(yīng)用于臨 床，如填充眼睛和唇周圍的表淺皺紋和前額、眉間或鼻唇區(qū)可見(jiàn)的深 層皺紋，矯正凹陷性疤痕或水痘凹窩，醫(yī)源性或創(chuàng)傷性疤痕和真皮萎縮 等。每一種材料都有它們本身的優(yōu)缺點(diǎn)，如透明質(zhì)酸凝膠有較強(qiáng)的異
3源性且易被吸收；提純精制的牛膠原，包括ZydermI (含膠原35 mg/mL)、 ZydermII (含膠原65mg/mL)和Zyplast (含戊二醛交聯(lián)的膠原35mg/mL)在 組織內(nèi)存留期僅有6 9月，且會(huì)導(dǎo)致1% 3%的健康病人注射區(qū)域發(fā)生 局部過(guò)敏反應(yīng)，表現(xiàn)為暫時(shí)性的紅斑、搔癢癥狀、硬結(jié)和腫脹等；聚甲 基丙烯酸甲酯(PMMA)微粒易導(dǎo)致如過(guò)敏反應(yīng)、毛細(xì)血管擴(kuò)張、肉芽腫 形成并發(fā)癥，且PMMA是惰性材料不能降解，置入后很難取出。注射硅膠 的并發(fā)癥則多見(jiàn)周邊組織肉芽腫形成、硬化、皮膚變薄、潰瘍形成等； 聚丙烯酰胺水凝膠則易導(dǎo)致出血、血腫、感染、局部水腫、硬結(jié)和不對(duì) 稱等；膨體聚四氟乙烯(ePTFE)雖性質(zhì)穩(wěn)定，組織相容較好，但極易吸附 雜質(zhì)或吸入雜質(zhì)貯留于其內(nèi)部微孔之中，使其喪失了良好的組織相容性， 且對(duì)手術(shù)操作要求較高，價(jià)格較昂貴；自體脂肪顆粒、自體成纖維細(xì)胞 溶漿等作為軟組織填充材料的遠(yuǎn)期療效并不確切。其他異源性材料如 Artecoll、透明質(zhì)酸帝J劑、纟屯石圭酉同、Fibrel、 Alloderm、 Dermalogen等 也面臨類似情況，有的已經(jīng)被美國(guó)FDA嚴(yán)令禁止使用。因此尋找一種長(zhǎng) 期、安全、有效的材料，依然是一個(gè)亟待解決的問(wèn)題。
人發(fā)是真皮的演化物，主要成分多硫角質(zhì)蛋白的肽鏈間存在著廣泛 的交聯(lián)，呈現(xiàn)高度的穩(wěn)定性，使其對(duì)物理、化學(xué)因素有高度的抵抗力、 性質(zhì)穩(wěn)定、耐酸堿、不易被組織吸收降解。人發(fā)經(jīng)戊二醛合劑處理后， 角蛋白處于半解聚狀態(tài)，在體內(nèi)的降解產(chǎn)物為多種氨基酸，可為遷入的 真皮細(xì)胞利用，為細(xì)胞的生長(zhǎng)代謝提供營(yíng)養(yǎng)。此外，網(wǎng)狀的人發(fā)還提供 了粗支架，利于細(xì)胞的遷入。將經(jīng)特殊處理的人發(fā)與細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn) 人發(fā)與成纖維細(xì)胞相容性好，且對(duì)細(xì)胞有吸附性。將人發(fā)編織成網(wǎng)狀摻 入膠原中，在體外可抑制成纖維細(xì)胞收縮，同時(shí)機(jī)械張力還能促進(jìn)彈性 蛋白的表達(dá)。已有將人發(fā)植入人體填補(bǔ)面部軟組織缺損以及應(yīng)用人發(fā)角 蛋白作為人工腱修復(fù)肌腱及韌帶的缺損的臨床應(yīng)用成功的報(bào)導(dǎo)。人發(fā)高度的穩(wěn)定性，無(wú)免疫原性及良好的組織相容性，使其作為填 充材料具有良好的前景；同時(shí)人發(fā)具有獲取方便、可以反復(fù)取材和便于 加工等優(yōu)點(diǎn)，有望利用自體毛發(fā)制成填充材料應(yīng)用于人體自身從而獲得 滿意的填充效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種可注射人發(fā)角蛋白軟組織填充材料的制備方法，該
填充材料可反復(fù)取材，安全無(wú)毒，組織相容性好，易于人體耐受，且能
夠刺激膠原增生。
本發(fā)明采用如下技術(shù)方案 一種可注射人發(fā)角蛋白軟組織填充材料的制備方法，步驟如下
(1) 清洗除雜質(zhì)室溫下，取人發(fā)樣品中段，蒸餾水反復(fù)清洗，晾
干；
(2) 脫脂室溫下，將清洗干凈的人發(fā)浸入乙醇脫脂液，1.5 2h，
蒸餾水清洗，干燥；
(3) 氯化NaC10和稀H2S04，水浴比1:30，室溫反應(yīng)20分鐘，流
水沖洗；
(4) 漂白采用室溫漂白法，清洗干凈的人發(fā)毛發(fā)20 30質(zhì)量份， 質(zhì)量體積濃度為&02 30質(zhì)量份，焦磷酸鈉質(zhì)量8份，氨水質(zhì)量60份， 過(guò)硫酸鉀3質(zhì)量份，室溫反應(yīng)4小時(shí)；
(5) 清洗烘干待人發(fā)原料色澤變白后，蒸餾水反復(fù)清洗，去除殘 留物，過(guò)濾，烘干；
(6) 人發(fā)角蛋白顆粒的制備漂白烘干后的人發(fā)，按質(zhì)量體積比為 12 15: IOO的比例，將人發(fā)與生理鹽水混合，經(jīng)碾磨加工8 12h，形 成粒徑約60 80um的人發(fā)角蛋白顆粒勻漿，鈷60輻照滅菌。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)
人發(fā)對(duì)物理、化學(xué)因素有高度的抵抗力,性質(zhì)穩(wěn)定，耐酸堿，不易被組織吸收降解，獲取方便，可以反復(fù)取材和便于加工等優(yōu)點(diǎn)，克服現(xiàn)有 的軟組織填充材料的異源性且易被吸收、易過(guò)敏、易導(dǎo)致出血、血腫、 感染、局部水腫、硬結(jié)和不對(duì)稱等；且對(duì)手術(shù)操作要求較高，價(jià)格較昂 貴或遠(yuǎn)期療效并不確切等不足之處。本發(fā)明來(lái)源于自體，便于獲得，安 全無(wú)毒，組織相容性好，易于人體耐受，且能夠刺激膠原增生的適合于 注射的人發(fā)角蛋白軟組織填充材料。從而實(shí)現(xiàn)皮膚及軟組織的長(zhǎng)期修復(fù)， 滿足整形美容領(lǐng)域的軟組織填充材料的需要。
具體實(shí)施例方式
一種可注射人發(fā)角蛋白軟組織填充材料的制備方法，步驟如下
(1) 清洗除雜質(zhì)室溫下，取人發(fā)樣品中段，蒸餾水反復(fù)清洗，晾
干；
(2) 脫脂室溫下，將清洗干凈的人發(fā)浸入乙醇脫脂液，1.5 2h，
蒸餾水清洗，干燥；
(3) 氯化NaC10和稀H2S0"水浴比1:30，室溫反應(yīng)20分鐘，流
水沖洗；
(4) 漂白采用室溫漂白法，清洗干凈的人發(fā)毛發(fā)20 30質(zhì)量份， 質(zhì)量體積濃度為^02 30質(zhì)量份，焦磷酸鈉質(zhì)量8份，氨水質(zhì)量60份， 過(guò)硫酸鉀3質(zhì)量份，室溫反應(yīng)4小時(shí)；
(5) 清洗烘干待人發(fā)原料色澤變白后，蒸餾水反復(fù)清洗，去除殘 留物，過(guò)濾，烘干；
(6) 人發(fā)角蛋白顆粒的制備漂白烘干后的人發(fā)，按質(zhì)量體積比為 12 15:100的比例，將人發(fā)與生理鹽水混合，經(jīng)碾磨加工8 12h，形成 粒徑約60 80um的人發(fā)角蛋白顆粒勻漿，鈷60輻照滅菌。
取20g中段人發(fā)經(jīng)脫脂洗滌烘干后，氯化(0. 32%NaC10、 0. 5%H2S04， 水浴比1:30， 20°C ， 20分鐘)，流水沖洗，雙蒸水浸泡3次后，漂白 (30%H202，焦磷酸鈉8g/1，過(guò)硫酸鉀3g/1，氨水14g/1，浴比1:100， 40。C水浴，3.5h。)在本實(shí)施例中，可以在將勻漿進(jìn)行鈷60輻照滅菌之前，將勻漿移至液氮罐中，凍干，鈷60輻照后4'C保存。實(shí)施例一
1.1實(shí)驗(yàn)材料，試劑和儀器C02細(xì)胞培養(yǎng)箱(Heal Force BB16UV HongKong)，相差顯微鏡(NikonEclipse TS100日本)，96孔板，DMEM培養(yǎng)基(Gibco公司美國(guó))，胎牛血清(杭州四季清)，PBS緩沖液，MTT(溴化-3-(4-5-二甲基噻唑基-2)2， 5二苯基四唑，Sigma公司美國(guó))濃度為5mg/ml(0.5%)，過(guò)濾除菌，DMSO(Sigma公司，美國(guó))，生理鹽水，高壓滅菌，30%過(guò)氧化氫，濃氨
水，過(guò)硫酸鉀。1.2人發(fā)處理
取20g中段人發(fā)經(jīng)脫脂洗滌烘干后，氯化(0.32。/。NaClO，0.5。/。H2SO4，水浴比l: 30， 20°C， 20分鐘)，流水沖洗,雙蒸水浸泡3次后，漂白(30%H2O2，焦磷酸鈉8g/l，過(guò)硫酸鉀3g/1，氨水14g/l，水浴比1:100，4(TC水浴3.5h)， 3(TC烘干，稱重并取lg試樣用作制備粉體材料浸提液，其余分為兩等份。取其中一半試樣，按14%的濃度與生理鹽水混合并分為3等份，分別加工8、 6、 4h，得到粗、中、細(xì)三種形態(tài)粉體勻漿。另
一半試樣制備人發(fā)角蛋白凝膠。1.3試樣浸提液制備
人發(fā)角蛋白凝膠經(jīng)液氮冷凍固化后粉碎，取lg加入10ml生理鹽水中,振蕩混勻后在細(xì)胞培養(yǎng)孵箱中37。C放置7d，離心后吸出上清液，制備凝膠浸提液原液(初始100%濃度材料浸液400mg/ml);人發(fā)漂白試樣取lg加入10ml生理鹽水中，同法制備粉體浸提液原液，過(guò)濾除菌備用。
1.4體外急性全身毒性試驗(yàn)
選用健康小白鼠24只，體重在20g左右，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，每組8只，記錄初始體重.試驗(yàn)組小鼠腹腔分別注射凝膠和粉體的浸提液原液(100%)，上下午各1次，每次0.5ml/10g，連續(xù)7天;對(duì)照組小鼠取浸提介質(zhì)生理鹽水腹腔注射，方法同上。于每次注射后即刻，4h，24h， 48h和72h觀察小鼠一般狀態(tài)及毒性表現(xiàn)和死亡數(shù)。并分別于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之后第3天，第5天，第7天觀察并記錄各組小鼠體重變化。1.5小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞(PCE)微核試驗(yàn)選體重在20g左右的健康小鼠20只，雌雄各半，隨即分為4組，每組5只.分別為凝膠浸液組，粉體浸液組，陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組。兩實(shí)驗(yàn)組按0.5ml/20g量分別腹腔注射凝膠組和粉體組浸提液原液;陰性對(duì)照組給予生理鹽水(0.5ml/20g腹腔注射)；陽(yáng)性對(duì)照組給予環(huán)磷酰胺(40mg/kg，腹腔注射)。各組均間隔24小時(shí)給樣，第二次給樣后6小時(shí)處死小鼠，胸骨骨髓涂片，吉姆薩染色，鏡檢。每只動(dòng)物計(jì)數(shù)1000個(gè)骨髓的嗜多染紅細(xì)胞(PCE)，記錄含有微核的PCE細(xì)胞數(shù)，計(jì)算微核率。(微核率指含有微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)，以千分率(％ )表示)1.6 MTT比色法測(cè)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
受試液的制備:將浸提液原液(100%)和DMEM培養(yǎng)基1 : 1混合稀釋，為50%濃度;將浸提液原液和DMEM培養(yǎng)基1 : 3混合稀釋，為25%濃度;對(duì)照組加入浸提介質(zhì)生理鹽水。收集對(duì)數(shù)期L-929細(xì)胞，以5X104個(gè)/ml密度接種于96孔板，每孔100ul，分為4組(3個(gè)濃度組+對(duì)照組)，每組重復(fù)8孔。置37"， 5。/。C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)，棄去原液，每孔換入100ul新培養(yǎng)液，實(shí)驗(yàn)組每組各孔再加入100ul 100%、 50%、25%的相應(yīng)受試液，對(duì)照組加同量的生理鹽水。置37'C， 5。/。C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)，于培養(yǎng)的第3天，第5天和第7天分別取出一塊96孔板，棄去每孔上清110ul，加入10ulMTT(0.5%MTT)，置箱中培養(yǎng)4小時(shí)，取板，小心吸去孔內(nèi)上清，每孔加入DMSO 150ul，再放入37。C， 5%C02培養(yǎng)箱中孵育15分鐘，盡快測(cè)定光度值(OD值)，測(cè)定波長(zhǎng)為4卯nm，參考波長(zhǎng)為540腿。
2結(jié)果
2.1人發(fā)材料的大體觀察
經(jīng)漂白，不同球磨時(shí)間的人發(fā)粗、中、細(xì)三種粉體勻漿和液態(tài)人發(fā)角蛋白凝膠都具有較好的流動(dòng)性和粘滯性，適合注射，且原發(fā)中的黑色素含量都已淺化，可以用來(lái)填充于面部等較為表淺的層次。
通過(guò)x20倍顯微觀察，除細(xì)態(tài)粉體材料中有部分人發(fā)斷片細(xì)小，不易觀察到之外，粗、中材料中的人發(fā)斷片都保持人發(fā)原有穩(wěn)定的束狀結(jié)構(gòu)，這將有利于延緩注入組織后的降解從而延長(zhǎng)填充的持續(xù)時(shí)間。將人發(fā)材料通過(guò)不同方法制成粗細(xì)各異的粉體和角蛋白凝膠兩種不同形式的材料，可在以后的動(dòng)物皮下填充實(shí)驗(yàn)中互作對(duì)照，以尋求符合注射要求而又有最好填充效果的人發(fā)材料的形態(tài)。
2.2小鼠急性全身毒性試驗(yàn)
小鼠一般情況較好，7天觀察期內(nèi)無(wú)死亡，72h觀察期內(nèi)各組動(dòng)物
未見(jiàn)中毒癥狀或不良反應(yīng)，無(wú)死亡，體重增長(zhǎng)正常，方差分析表明兩試驗(yàn)組與生理鹽水組之間小鼠體重變化不存在明顯差異，這表明人發(fā)凝膠和粉體兩種形式材料浸提液均無(wú)急性毒性作用。
2.3小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞(PCE)微核試驗(yàn)
粉體組和凝膠組的微核發(fā)生率與陰性對(duì)照組無(wú)顯著差異(PX).05)，而與陽(yáng)性對(duì)照組比較差異顯著(PO.01)，則兩組受試物小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)呈陰性，說(shuō)明人發(fā)凝膠組和粉體組無(wú)致染色體畸變毒性作用。結(jié)果:見(jiàn)表1
表1骨髓嗜多染紅細(xì)胞(PCE)微核試驗(yàn)結(jié)果
動(dòng)物 數(shù)目 (只)檢查 PCE計(jì)數(shù) (個(gè))微核發(fā)生率 f。/ AP value
凝 膠組510002. 4±1. 140P〉0. 50
粉 體組510001. 8±0. 837P>0. 50
陰 性組510002. 2±0. 837P〉0. 50
陽(yáng) 性組5100024. 2±5. 80 5P<0. 10
2.5 MTT比色法測(cè)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
按公式:RGR-材料各濃度組吸光度/陰性對(duì)照組吸光度X 100%計(jì)算細(xì)胞相對(duì)增殖度(RGR)，并依據(jù)細(xì)胞相對(duì)增殖率與細(xì)胞毒性分級(jí)的關(guān)系轉(zhuǎn)換成細(xì)胞毒性分級(jí)。結(jié)果表明，人發(fā)凝膠和粉體兩種形式材料的不同濃度浸提液在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)得的細(xì)胞相對(duì)增殖率均達(dá)80%以上，細(xì)胞毒性分級(jí)為一級(jí)，說(shuō)明具有良好的細(xì)胞相容性，無(wú)細(xì)胞毒性。見(jiàn)表2
表2-1凝膠MTT結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析
3d 5d 7d表2-2粉體MTT結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析
3d 5d 7d
100%濃度組
50%濃度組
25%濃度組
8
3. 2
9%
9
0. 2
9%
9
7. 4
7%
一級(jí)
4. 9
0%
9
3. 3
4%
9
7. 5
2%
鄰
一級(jí)
8
1. 9
8%
9
1. 2
3%
9
8. 0
2%
.級(jí)
實(shí)施例二
1動(dòng)物模型制備
在每只兔背部取毛區(qū)沿中軸線左右兩側(cè)標(biāo)記5個(gè)注射部位，備皮后用8號(hào)針頭在其皮下分別注射制備的A、 B、 C、 D四種自體兔毛角蛋白粉體勻漿材料約2.5ml，使之形成直徑約2cm的皮下隆起，另外一個(gè)部位注射生理鹽水做對(duì)照。采用Marler等人設(shè)計(jì)的軟組織填充材料注射動(dòng)物模型對(duì)材料的體內(nèi)吸收性進(jìn)行考察。使用游標(biāo)卡尺測(cè)量注射后第i月
10
R
1,
100
%濃度組50%濃度組2
25%濃度組6.
胞分
細(xì)性級(jí)
主母
G
9
8
2
9
6
3
八 5
9
o
7
CO
性及
毒f
.3.1 /7
G
R
9
5
3
2
<3/
9
9
9
2-
<3/
9
2
7
c3/
胞分
細(xì)性級(jí)
主母
R
G
9 1 9 9 9 5
3 淪 2 6 4
胞分
細(xì)性級(jí)
主母
G
R
分
細(xì)性級(jí)
毒
R
G
胞分
細(xì)性
主，母
R皮丘參數(shù)皮丘長(zhǎng)度a卜皮丘寬度bi、皮丘高度Ci，計(jì)算皮丘體積Vi(式1)，及皮丘體積保持率Si (式2) 。
5越高，表明材料的吸收率越低。
計(jì)算A、 B、 C、 D四種S值，并記錄其動(dòng)態(tài)變化。<formula>formula see original document page 11</formula>
2 —般情況觀察 ]
動(dòng)物活動(dòng)及進(jìn)食皆正常，背部材料注射區(qū)皮膚無(wú)紅腫無(wú)滲液等炎癥反應(yīng)，皮丘觸之皆軟于正常皮膚組織；隨觀察時(shí)間的增長(zhǎng)，A、 B、 C、D四種材料的皮丘質(zhì)地也逐漸變韌，第12周時(shí)，觸之已似正常皮膚組織；至注射后第28周后，材料A注射部位逐漸形成一個(gè)皮下硬結(jié)，而B(niǎo)， C、D三種皮丘質(zhì)地較前變化并不明顯。
3材料吸收性觀察除生理鹽水皮下注射后約3小時(shí)可完全吸收外，從總體趨勢(shì)看，相比A、 B、 C三種材料，D材料吸收降解較快，注射14周后已基本被吸收。A、 B、 C三種材料則吸收相對(duì)緩慢。注射后12周時(shí)的數(shù)據(jù)表明D材料平均S值(21%)遠(yuǎn)低于A、 B、 C三種(3均值分別為77%， 80%和73%)，統(tǒng)計(jì)分析表明，該差別具有顯著性意義(PO.OOl)，而各時(shí)段的A、 B、 C三種之間S均值無(wú)顯著差異(PX).05)。
4組織學(xué)觀察
l周，A、 B、 C、 D四種材料周圍有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，以中性粒細(xì)胞為主，材料內(nèi)部亦有少量成纖維細(xì)胞長(zhǎng)入。
4周(l個(gè)月)，A、 B、 C、 D四種材料周圍組織內(nèi)炎性細(xì)胞較前已明顯減少，其周圍有菲薄的纖維包膜形成，尤其以材料A為明顯。
12周(3個(gè)月)，A、 B、 C、 D四材料周圍纖維增生，纖維包膜較前有所增厚，依然以材料A明顯，且這四種材料內(nèi)部纖維成份亦有所增多，周圍未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
24周(6個(gè)月)，材料A周圍有纖維包膜形成，B、 C材料周圍纖維包膜增厚不明顯；材料D此時(shí)已基本被吸收。以自體毛發(fā)為原料制備的四種填充材料，除顆粒A在后期之地較硬外，B、 C、 D三種粒徑的毛發(fā)角蛋白顆粒填充局部的質(zhì)地均接近正常軟
組織，有較好的填充效果。既保持了毛發(fā)原有的較穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，又能滿
足于注射填充的使用要求，局部組織反應(yīng)輕，生物相容性好，其中B、 C顆粒注射后有效的填充維持時(shí)間能達(dá)到大約為12個(gè)月，在12個(gè)月的觀察周期后在動(dòng)物皮下仍存留40%,并且吸收情況呈現(xiàn)平臺(tái)期。
上述結(jié)果顯示在此部分我們已探索出一套毛發(fā)角蛋白顆粒勻漿的
制備方法，并通過(guò)不同粒徑毛發(fā)角蛋白顆粒的吸收情況的比較，尋找到了較為理想的作為填充材料和作為載體的毛發(fā)顆粒粒徑范圍，可以根據(jù)患者的要求并且根據(jù)具體情況，分別選取不同粒徑的毛發(fā)角蛋白顆粒進(jìn)行填充。
權(quán)利要求
1、一種可注射人發(fā)角蛋白軟組織填充材料的制備方法，其特征在于，步驟如下(1)清洗除雜質(zhì)室溫下，取人發(fā)樣品中段，蒸餾水反復(fù)清洗，晾干；(2)脫脂室溫下，將清洗干凈的人發(fā)浸入乙醇脫脂液中1.5～2h，用蒸餾水清洗后干燥；(3)氯化NaClO和稀H2SO4，水浴比1∶30，室溫反應(yīng)20分鐘，流水沖洗；(4)漂白采用室溫漂白法，清洗干凈的人發(fā)毛發(fā)20～30質(zhì)量份，質(zhì)量體積濃度為H2O230質(zhì)量份，焦磷酸鈉質(zhì)量8份，氨水質(zhì)量60份，過(guò)硫酸鉀3質(zhì)量份，室溫反應(yīng)4小時(shí)；(5)清洗烘干待人發(fā)原料色澤變白后，蒸餾水反復(fù)清洗，去除殘留物，過(guò)濾，烘干；(6)人發(fā)角蛋白顆粒的制備漂白烘干后的人發(fā)，按質(zhì)量體積比為12～15∶100的比例，將人發(fā)與生理鹽水混合，經(jīng)碾磨加工8～12h，形成粒徑約60～80um的人發(fā)角蛋白顆粒勻漿，鈷60輻照滅菌。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的可注射人發(fā)角蛋白軟組織填充材料的制備 方法，其特征在于在將勻漿進(jìn)行鈷60輻照滅菌之前，將勻漿移至液氮罐 中，凍干，鈷60輻照后4。C保存。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)整形美容技術(shù)領(lǐng)域，根據(jù)人發(fā)對(duì)物理、化學(xué)因素有高度的抵抗力，性質(zhì)穩(wěn)定，耐酸堿，不易被組織吸收降解，獲取方便，可以反復(fù)取材和便于加工等優(yōu)點(diǎn)，克服現(xiàn)有的軟組織填充材料的不足之處。利用固態(tài)的自體人發(fā)中段作為原材料，經(jīng)過(guò)清洗、漂白、碾磨加工、凍干、包裝、鈷60輻照處理，將漂白人發(fā)制成不同粗細(xì)的粉體勻漿及液態(tài)人發(fā)角蛋白顆粒，提供一種來(lái)源于自體，便于獲得，安全無(wú)毒，組織相容性好，易于人體耐受，且能夠刺激膠原增生的適合于注射的人發(fā)角蛋白軟組織填充材料。實(shí)現(xiàn)皮膚及軟組織的長(zhǎng)期修復(fù)，滿足整形美容領(lǐng)域的軟組織填充材料的需要。
文檔編號(hào)A61L31/04GK101530636SQ20081000748
公開(kāi)日2009年9月16日 申請(qǐng)日期2008年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月12日
發(fā)明者章慶國(guó) 申請(qǐng)人:章慶國(guó)