專利名稱：：胃腸疾病的治療的制作方法胃腸疾病的治療本發(fā)明涉及預防和治療胃腸疾病，和具體地，涉及用源自可食用植物的提取物預防和治療胃腸疾病。胃炎包括多種不同的病癥，所有這些病癥都導致胃部的炎癥。炎癥可以由細菌感染引起，但其他因素，包括外傷性損傷和經常使用某些鎮(zhèn)痛藥，也可以造成胃炎。盡管有許多與胃炎有關的病癥，但是這些疾病的征兆和癥狀非常相似上腹部的灼燒痛和偶爾脹氣、打嗝、惡心或嘔吐。在一些情形中，胃炎可以導致潰瘍和增高的胃癌風險。胃潰瘍是胃或十二指腸襯層上的瘡。胃潰瘍的一個原因是細菌感染，但是一些漬瘍是由長期使用非類固醇消炎藥劑(NSAIDs)，如阿司匹林和布洛芬引起的。在少數(shù)情形中，胃或胰腺中的癌性腫瘤可以導致潰瘍。幽門螺桿菌(H.pylori)是這樣的一種細菌類型，其是慢性胃炎的主要原因，并且在胃和十二指腸潰瘍的發(fā)展中起關鍵作用(1)。幽門螺桿菌削弱胃和十二指腸的保護粘膜層，這容許酸穿過到達下面的敏感襯層。酸和細菌二者刺激襯層并導致瘡，或潰瘍。幽門螺桿菌能夠在胃酸中生存，因為它分泌中和酸的酶。這種機制容許幽門螺桿菌設法到達"安全"的區(qū)域；即保護性粘膜襯層。一旦到達那里，該細菌的螺旋形狀幫助其鉆入襯層。這種生物體的慢性感染與增高的發(fā)展胃腺癌和胃淋巴瘤的風險有關(2)。已經表明幽門螺桿菌對胃上皮的附著影響疾病的嚴重性(3)。其促進細胞毒素-相關抗原A(CagA)經由由IV型分泌系統(tǒng)(TFSS)編碼的cag致病島易位進入宿主細胞，由此導致宿主細胞功能的顛覆并增加胃癌發(fā)展的風險(4)。同樣地，附著于宿主胃粘膜的能力是最初建群和隨著宿主病理學的后繼發(fā)展繼續(xù)生存和增殖的先決條件。幽門螺桿菌的治療通常遵循7-10天的三重治療方案，包括質子泵抑制劑諸如奧美拉唑或雷貝拉唑，以及普遍使用的抗生素諸如克拉霉素、甲硝唑和阿莫西林(5)。盡管有效，但是這樣的方案從成本觀點以及還有當已知發(fā)生副作用影響諸如腹瀉、金屬味道和過敏反應時，可以是不理想的。對克拉霉素和甲硝唑的耐藥性也是10-20%患者在治療后未能成功根除該生物體的治療失敗的主要原因(6)。該高失敗率導致了將大量非-抗生素治療法考慮作為治療幽門螺桿菌感染的潛在備選方案。若干報告描述了植物提取物和它們分離的成分針對幽門螺桿菌的活性。例如，蔬菜諸如花椰菜(broccoli)用于制備胃炎的用途是公知的(8)。另外，花椰菜的活性成分，萊菔硫烷異硫氰酸鹽(isothiocyanatesulforaphane)，顯示出針對幽門螺桿菌包括抗生素抗性品系的活性(9)。此外，還顯示了由蔥火蔥(Alliumascalonicum)(10)的醇提取物和由牛至(oregano)和蔓越桔(cranberry)(11)引起的幽門螺桿菌的生長抑制和脲酶生成。顯示出表現(xiàn)針對幽門螺桿菌的毒性的其他植物是北美草藥血根草(Sanguinariacanadensis)禾口白毛賞(HydrastisCanadensis)(12)、亞洲藥草百花丹(Plumbagozeylanica)(13)、一定范圍的希臘傳統(tǒng)藥物(14)、和綠茶提取物(15)。更近期，報告描述了肉豆蔻、香芹(parsley)、龍蒿、蓽撥(longpepper)、鼠尾草屬和肉桂針對幽門螺桿菌的抗細菌活性(16)。然而，許多這些烹調用和醫(yī)藥藥草表現(xiàn)出針對革蘭士-陽性和革蘭士-陰性細菌二者顯示出的具有毒性的廣譜活性(17)。因此，消費這樣的藥草和它們的產品也可以對益生菌微菌群具有副作用，所述益生菌微菌群中的許多已知是有益的(18)。因此，為了有效，天然抗-幽門螺桿菌試劑應該表現(xiàn)出窄譜活性并且理想地是僅對幽門螺桿菌選擇性的。本發(fā)明的目的是提供有效用于預防或治療胃腸疾病，具體地胃和十二指腸潰瘍的備選非-抗生素組合物。按照本發(fā)明的第一方面，提供用于預防或治療胃腸疾病的組合物，其包括治療有效量的可源自馬鈴薯汁的小于或等于4kDa的可溶性級分。按照本發(fā)明的第二方面，提供可源自馬鈴薯汁的小于或等于4kDa的可溶性級分用于制備預防或治療胃腸疾病的藥物的用途。按照本發(fā)明的第三方面，提供用于治療胃腸疾病的方法，其包括向需要所述治療的受試者施用治療有效量的可源自馬鈴薯汁的小于或等于4kDa的可溶性級分。更優(yōu)選地，所述級分小于或等于3kDa，特別地是l-3kDa。更特別地，可源自馬鈴薯汁的可溶性級分包括治療有效量的等于或大于500Da—小于或等于lkDa。具體地，所述級分包括至少一種寡糖。優(yōu)選地，所述級分在pH8是中性的。所述級分優(yōu)選地包括苯酚糖苷、苯酚糖苷配基和/或氮化合物，優(yōu)選地除了生物堿以外。所述級分可以包括選自由蘇氨酸、纈氨酸和亮氨酸或異亮氨酸或甲硫氨酸組成的組中的一種或多種氨基酸。按照本發(fā)明的第四方面，提供可源自馬鈴薯汁的可溶性級分，其包括一定量的等于或大于500Da—小于或等于lkDa，其中所述可溶性級分包括三種咖啡酸衍生物和兩種芳族衍生物。應該理解按照本發(fā)明的可溶性提取物可以處于純的形式或備選地，其也可以與其他化合物混合，條件是那些化合物不抑制按照本發(fā)明的提取物的抗-附著性質。發(fā)現(xiàn)所述小于或等于4kDa的提取物，更特別地，等于或大于500Da一小于或等于lkDa的可溶性級分在抑制幽門螺桿菌結合和去除結合的細菌中特別有效，并且因此具有預防或治療胃炎和十二指腸潰瘍的功效。不希望受到任何具體理論的限制，認為小于或等于4kDa的級分，更具體地，等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級分，可以模仿或與允許細菌附著于胃或十二指腸上皮的細菌受體競爭，盡管本發(fā)明人不希望受到該假說的限制。按照本發(fā)明的小于或等于4kDa的可溶性提取物，包括等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級分，可以通過下列步驟以其最簡單形式制備勻漿馬鈴薯汁和傾析出水性上清液，離心和分級該上清液從而分出理想的級分。該提取物可以通過，例如，標準技術，例如減壓下蒸發(fā)進行濃縮、富集或凝聚。濃縮物的實例是至少2-倍，更通常地，至少4-倍，例如至少8-倍，或至少20-倍，或至少100-倍，或至少200-倍，或至少1000-倍濃縮的那些。任何合適的方法可以用于將水溶液分級為活性級分，包括，例如，分子量過濾、在合適的固體支持物諸如瓊脂糖凝聚上層析或可以基于尺寸排阻層析的快速蛋白質液相層析(FPLC)。按照本發(fā)明的小于或等于4kDa的級分，包括等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級分可以通過下列步驟中的一步或多步從馬鈴薯汁中制備(a)浸漬馬鈴薯塊莖，任選地，新鮮剝皮的；禾口(b)離心過濾由此生成的水性汁。適當?shù)挠袡C溶劑可以用于協(xié)助純化所述級分，所述適當?shù)娜軇┛梢杂糜趯游龇ú襟E，諸如離子交換樹脂和還有在例如Superdex上的尺寸排阻。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，對所述級分進行離子交換層析，從而部分純化提取物。優(yōu)選地，在pH8，對所述級分進行陰離子HPLC分餾，在pH8，對其流出液進行陽離子HPLC。收集來自該陽離子HPLC的流出液，從而生成部分純化的具有理想的抗-附著性質的提取物。分餾的上清液可以任選地冷凍或噴霧干燥，從而生成按照本發(fā)明的粉末狀級分。粗制品(參考以上提到的分級上清液)可以基本"純的"或甚至"稀釋"使用。當是這種情形時，該上清液(無論稀釋與否)可以與為了營養(yǎng)原因、醫(yī)學原因或甚至為了調節(jié)接受治療的受試者消費該提取物的適口性而添加的許多其他試劑相混合。例如，可以用食品或飲料產品配制該提取物，從而提供具有這樣的特征的預防或緩解胃炎癥狀的功能性食品，所述特征.是其包含小于或等于4kDa，更優(yōu)選地小于或等于3kDa，和最特別地，其包含等于或大于500Da一小于或等于lkDa的馬鈴薯汁可溶性級分。例如，可以用奶產品，使用奶(例如，奶、奶昔、酸乳酪、酸乳酪飲料或奶增補劑)作為原料配制所述提取物，從而生成具有添加的益處的美味飲料(drink)/飲品(beverage)，所述益處是其包含活性級分并因此應該高度適合作為胃炎患者的點心。所述功能性食品產品可以包括益生菌飲料。應該理解所述提取物可以配制為備選的飲品，諸如果汁，盡管這樣的選擇可能對胃炎患者不太理想。備選地，所述粗制品可以包含在用于腸喂食的營養(yǎng)液中。例如，所述活性級分可以與用于受試者腸喂食的鹽或水溶液(可以包括其他維生素、礦物質和營養(yǎng)物)相混合。應該理解可能需要濃縮所述粗制品，或備選地，粉末狀組合物可能是理想的。當是這種情形時，將需要對粗提取物進行濃縮/脫水。小于或等于4kDa，更優(yōu)選地小于或等于3kDa的級分，和特別地，等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級分可以配制為粉末、顆粒或半固體，以引入膠囊中。為了以半固體的形式介紹，所述提取物可以溶解或混懸在粘性液體或半固體賦形劑(vehicle)諸如聚乙二醇，或液體載體諸如二元醇，例如丙二醇、或甘油或植物油或魚油，例如選自橄欖油、向日葵油、紅花油、月見草油、大豆油、冷肝油、鯡魚油等中的一種油中。然后，可以將其填入到這樣的膠囊中，所述膠囊是硬明膠或軟明膠類型的或由硬或軟明膠等價物制成的，對于粘性液體或半固體填充物優(yōu)選的是軟明膠或明膠-等價物膠囊。包括按照本發(fā)明的小于或等于4kDa，更優(yōu)選地小于或等于3kDa的級分，和特別地，等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級分的粉末特別有效用于制備可以用于預防或治療胃腸疾病，具體地，胃和十二指腸潰瘍和胃和十二指腸癌的藥物或營養(yǎng)產品。冷凍-千燥或噴霧干燥代表用于生產包括按照本發(fā)明的提取物的粉末的優(yōu)選方法。噴霧干燥導致具有良好流動性質和快速溶解特征的自由-流動顆粒狀粉末混合物。粉末狀提取物可以重構為清澈/透明的低粘性飲料/飲品。如上討論地，可以重構到水、乳或果汁中。應該理解所述粉末可以包裝到小袋中，并且在需要或希望時由'受試者重構為飲料。粉末混合物代表本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。所述混合物包括粉末狀提取物(如上所述)，和與之混合的其他成分。所述成分可以為了營養(yǎng)或醫(yī)學原因或為了改善適口性而添加。粉末狀提取物可以與不同顆粒尺寸的砂糖相混合，從而獲得不同甜度的自由-流動的粉末混合物。備選地，天然甜味劑或人造甜味劑(例如，天冬甜素、糖精等)可以與所述粉末狀提取物混合，從而重構為低卡路里/減少卡路里的甜飲料。所述粉末混合物可以包括礦物質增補劑。礦物質可以是鈣、鎂、鉀、鋅、鈉、鐵、和它們多種組合物中的任意一種。粉末混合物還可以包含緩沖劑諸如檸檬酸鹽和磷酸鹽緩沖液，和由碳酸鹽，例如碳酸氫鹽諸如碳酸氫鈉或碳酸氫銨形成的發(fā)泡劑，和固體酸，例如檸檬酸或酸式檸檬酸鹽。小于或等于4kDa，更優(yōu)選地小于或等于3kDa，和特別地，等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級分可以作為食品增補劑或食品添加劑存在，或可以被引入到食品，例如功能性食品或營養(yǎng)藥中。這樣的產品可以用作主食以及在可能存在臨床需要的情況下使用?？梢詫⑺龇勰┮氲礁恻c或谷物產品，諸如點心棒例如水果棒、堅果棒和谷物棒中。為了以點心棒的形式出現(xiàn)，粉末可以與選自干果諸如曬干的番茄、葡萄干和淡黃葡萄干(sultanas)、花生(groundnuts)或谷物諸如燕麥和小麥中的任何一種或多種成分混合。應該理解所述小于或等于4kDa的級分,小于或等于3kDa的級分，和特別地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級分可以方便地配制用作藥劑的藥物(需要處方或相反)。粉末狀級分或濃縮的液體級分也可以引入片劑、錠劑、糖果或其他用于口服攝取的食品中。也應該理解所述粉末狀級分或濃縮的液體級分可以引入到緩慢-釋放的膠囊或裝置中，所述膠囊或裝置可以被咽下并能夠長期釋放該級分到腸中。還可以將所述小于或等于4kDa的級分,小于或等于3kDa的級分，和特別地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級分包封入微膠囊。例如，包封可以通過藻酸鈣凝膠膠囊的形成。k-角叉藻聚糖、吉蘭糖膠、明膠和淀粉可以用作微膠囊包封的賦形劑。粗制品、液體濃縮物、粉末等可以與治療胃炎的已知治療劑組合。同樣地，按照本發(fā)明的提取物可以用在非常有效的組合治療中。應該理解溶液中的提取物可以起治療胃炎的其他治療劑的理想賦形劑(vehicle)的作用。所述小于或等于4kDa的級分,小于或等于3kDa級分，和特別地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級分還可以包括在包括益生菌部分的組合/合生素(synbiotic)治療劑中。許多益生菌混合物中包含的細菌不具有附著性質，所以不會受到內含活性級分的影響。本發(fā)明的組合物可以以包含確定濃度的所述提取物的單位劑型存在。可以選擇所述單位劑型，以獲得理想水平的生物學活性。受試者需要的提取物的量由生物學活性和生物利用率確定，其又依賴于配制、施藥模式、該提取物的物理化學性質和其是作為單治療還是組合治療使用。例如，成年人的每日劑量可以是0.1g-100g冷凍-干燥或噴霧-干燥的粉末(不管用何種方法配制的)。更優(yōu)選地，是lg-30g，例如，如所需地，約5g、10g、或15g。所述提取物在包括在藥物制劑諸如片劑或膠囊中時是特別有效的。所述制劑可能需要有腸-溶衣，如果生物利用率指示如此。已知的程序，諸如制藥工藝常規(guī)使用的那些(例如，體內實驗、臨床試驗等)，可以用于構建特定的藥物組合物制劑和準確的治療方案(諸如化合物的每日劑量和施藥頻率)。應該理解常規(guī)"營養(yǎng)藥"程序可以用于制造包括所述小于或等于4kDa的級分，更優(yōu)選小于或等于3kDa的級分和特別地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級分的液體飲料、粉末混合物和食品。每日劑量可以作為單次施藥給出(例如，用于口服消費的每日片劑或作為單次液體飲料)。備選地，使用的提取物可以需要在一天內施用2次或更多次。作為實例，包含0.1-20g噴霧干燥的提取物，優(yōu)選0.3-10g噴霧干燥的提取物和更優(yōu)選0.5-3.0g的100ml橙味飲料可以用于全天內每隔一定間隔緩和口渴并由此遞送建議的劑量。應該理解增補了小于或等于4kDa的馬鈴薯提取物，小于或等于3kDa的級分和特別地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級分的營養(yǎng)產品代表向患有或處于發(fā)展胃炎或其其他胃腸疾病風險中的受試者提供按照本發(fā)明的提取物的理想方法。因此，按照本發(fā)明的第五方面，提供用于預防或治療胃腸疾病的營養(yǎng)產品，其包括治療有效量的可源自馬鈴薯汁的小于或等于4kDa的級分，或小于或等于3kDa的級分和特別地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級分。所述營養(yǎng)產品可以包括(a)清澈、低粘性、水樣、穩(wěn)定、易于使用、瓶裝、碳酸或非-碳酸飲料；或用于重構的濃縮清澈液體，其包括可源自馬鈴薯汁的小于或等于4kDa的級分，或小于或等于3kDa的級分和特別地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級分；(b)待用水或任何其他可口服攝取的液體重構為可飲用液體的粉末/顆?；旌衔铮浒稍醋择R鈴薯汁的小于或等于4kDa的級分，或小于或等于3kDa的級分和特別地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可溶性級分；或(c)混合在食品(例如，谷物或巧克力棒，錠劑等)中的粉末狀或顆粒狀混合物。營養(yǎng)產品可以如上所述，并可以或可以不包含水溶性維生素、另外的礦物質增補劑、營養(yǎng)化合物、抗氧化劑或調味劑。本發(fā)明將進一步通過實施例，參考附圖進行舉例說明，在所述附圖中圖1是顯示馬鈴薯汁(PJ)的抗-附著性質存在于小于3kDa的級分中的圖表；圖2是顯示小于3kDa的級分的抗-附著活性是劑量依賴性作用的圖表；圖3舉例說明蛋白酶K和熱處理對馬鈴薯汁(PJ)及其級分的抗-附著性質的影響；圖4是所述小于或等于3kDa的級分的陰離子交換HPLC分離層析圖；圖5是顯示陰離子交換HPLC后小于或等于3kDa的級分的活性特征的圖表；圖6是顯示陰離子交換HPLC分級的大規(guī)模的小于或等于3kDa的級分的碳水化合物含量；圖7是大量分離的小于或等于kDa的級分陰離子交換流出液的陽離子交換HPLC的層析圖；和圖8是顯示陽離子交換HPLC后小于或等于3kDa的級分的活性特征的圖表。圖9a是小于或等于lkDa—大于或等于500Da的級分在GeminiC18反相柱上的HPLC層析圖。在280nm處UV檢測，1、2:峰1禾口2;圖9b是小于或等于lkDa—大于或等于500Da的級分在GeminiC18反相柱上的HPLC層析圖。在350nm處UV檢測；圖10a是280nrn處峰1的UV光譜；圖10b是280nm處峰2的UV光譜；圖11是在14-17分鐘洗脫下來的成分在350nm處檢測的放大圖。A-C:峰A-C;圖12a是350nm處峰A的UV光譜；圖12b是350nm處峰B的UV光譜；圖12c是250nm處峰C的UV光譜；圖13a是350nm處綠原酸標記的HPLC層析圖；和圖13b是350nm處綠原酸標記的UV光譜。本發(fā)明人進行研究來研究馬鈴薯汁對幽門螺桿菌具有什么作用。具體地，進行研究來確定馬鈴薯汁是否能夠破壞幽門螺桿菌對胃上皮細胞的附著。破壞幽門螺桿菌建群的基本原理應該導致該生物體的清除和宿主組織損傷和癥狀的減少。進行進一步的研究，以確定馬鈴薯汁的抗-附著性質存在于小于或等于3kDa的級分，更特別地等于或大于500Da—小于或等于lkDa的可源自馬鈴薯汁的似乎中性電荷的可溶性級分。制備提取物通過首先在食物攪拌器中勻漿剝皮的KingEdwards馬鈴薯，篩濾碾碎的馬鈴薯并且在8000-3000rpm離心可溶性級分5-20分鐘，生成馬鈴薯汁。然后，利用0.22pm的過濾器過濾溶液并將提取物保存在-8(TC直至需要。新鮮制備的粗馬鈴薯汁通過在VIVASpin20離心過濾器(MWCO3kDa)中，以3,660rpm離心過濾60分鐘，離心3次而分級。收集的小于或等于3kDa的級分保存在-8(TC直至需要用于進一步的分析。另外，帝U備大規(guī)模的小于或等于3kDa的馬鈴薯汁級分，用于分離抗-附著成分。磨碎并過濾清洗和剝皮的馬鈴薯(8.66Kg)，從而提供2,215mL粗馬鈴薯汁，其在通過離心過濾分級后，提供853mL的小于或等于3kDa的級分。將其凍干并混懸在水(25mL)中，從而提供黃-紅粘性液體。濃縮的級分保存在-8(TC直至需要用于進一步的分析。實施例l利用Bennett和Roberts,2005(19)描述的方法的改進確定馬鈴薯汁對幽門螺桿菌附著的影響，其中在用AGS細胞培養(yǎng)幽門螺桿菌之前或之后，包括馬鈴薯汁，或其級分。利用低聚甲醛和甘氨酸將AGS細胞固定在96孔板上。將幽門螺桿菌的培養(yǎng)物調節(jié)到OD(600)=0,25，并以1:1的比例與樣品提取物混合。將lOO(iL等分試樣加入到每個孔中，并在l，OOOrpm旋轉IO分鐘，隨后在37。C微好氧培養(yǎng)90分鐘。然后連續(xù)稀釋和處理樣品，從而通過標準程序進行生存計數(shù)。結果實驗顯示小于或等于3kDa的級分對幽門螺桿菌與AGS細胞的結合具有顯著作用，如附圖的圖l中所示。幽門螺桿菌細胞與AGS細胞結合后，加入小于或等于3kDa的級分的連續(xù)稀釋物。隨后，確定結合的細菌數(shù)量，將PBS對照中結合的細菌數(shù)量表示為100%。小于3kDa級分的濃縮液未稀釋。滴定顯示劑量依賴性作用(見圖2)。圖1和2中說明的結果是在細菌附著后加入所述級分后獲得的，但是令人興奮地，發(fā)現(xiàn)無論與幽門螺桿菌同時或在細菌附著后(如通過置換測定證明的)將該級分加入到宿主細胞中，所述小于或等于3kDa的級分對幽門螺桿菌與AGS細胞結合的影響均起作用。這顯示所述小于或等于3kDa的級分中存在的抗-附著成分不僅能夠抑制結合而且能夠從AGS細胞中除去結合的幽門螺桿菌，因此提供去除結合的幽門螺桿菌感染宿主的可能性，從而促進根除。研究了熱和蛋白酶K消化對馬鈴薯汁活性的作用。結果顯示抗-附著性質不受熱處理的影響，且用蛋白酶K(PK)溫育對所述提取物的活性似乎不表現(xiàn)出任何明顯的影響(圖3)。蛋白酶K是非特異性蛋白酶，其裂解脂族、芳族或疏水氨基酸羧基端的肽鍵。在后者處理的方面，這提示活性成分本質上不是蛋白質樣的。進行小于或等于3kDa級分的陰離子和陽離子HPLC分級，從而純化該級分的抗-附著成分。蛋白質或其他生物分子具有已知為PI值的性質，所述PI值是該分子不攜帶凈電荷的pH。在高于PI值的pH下，分子帶負電荷，而在低于PI值的pH下，分子帶正電荷。這種性質可以在離子交換層析過程中利用?；旧?，離子交換涉及在帶正電荷的柱(陰離子交換)或在帶負電荷的柱(陽離子交換)上洗脫提取物，最初使用緩沖液，諸如Tris或MES洗脫未結合的物質，并且然后引入線性鹽梯度，從而在各自的pH下，置換與柱結合的分子。為了結合，在使用的pH下，分子必須具有與柱的凈電荷相反的凈電荷。在裝配UV檢測器(215,254和280nm)和電導率記錄儀的ETTANLC(安瑪西亞生物科學(AmershamBiosciences))上進行所有的分離。利用Unicom軟件分析結果。為了陰離子交換分級，使用的柱是MonoQHR5/5(1mL體積)，帶電基團0-CH2-CHOH-CH2-0-CH2-CHOH-CH2-N+(CH3)3。流動相緩沖液A:20mMTris-HCl(pH8)，緩沖液B:處于2MNaCl中的20mMTris(pH8)。用3.5倍柱體積的100。/。緩沖液A洗脫柱，從而去除未結合的物質，之后，引入10倍柱體積的由0%B到100%B進行的線性梯度模式，從而置換結合的物質。流速為0.25-0.4mL.分鐘—1。通過500|iL注射環(huán)遞送10-20個250pL各種級分的等分試樣(緩沖液A)。然后，對每次運行收集30份0.5mL級分，并在測定抗-附著活性前將該級分的復制物匯集、凍干并混懸在500laL中。在測定前，通過在Spectra/Por⑧透析管(MWCOlkDa)中，針對蒸餾水的透析對級分8-30進行脫鹽。凍干脫鹽的級分并混懸在500pL水中。通過陰離子交換分離后，結果顯示在級分2-5中洗脫的UV吸收物質(圖4)代表"流出液"，且在pH8下，該物質是中性或帶正電荷的。隨后在級分10-17中洗脫的物質與柱結合，因此在pH下，這些成分攜帶凈負電荷?；钚院Y選顯示活性成分存在于流出液中，并且因此在pH8時是中性或帶正電荷的(圖5)。糖分析(利用改進的最初由Dubois等(20)描述的苯酚-硫酸法，以促進在96孔板讀數(shù)器中的分析)顯示陰離子交換后所有碳水化合物洗脫在流出液中(圖6)。這些結果顯示陰離子交換在pH8下，將活性成分從帶負電荷的物質中分離出來。大量分離陰離子交換流出液(級分2-7)，并且使用與陰離子交換實驗中使用的相同條件，通過陽離子交換分開由此產生的級分。HPLC層析圖顯示所有UV吸收物質在引入鹽梯度前洗脫時，不粘在柱上(圖7)。同樣地，陽離子交換后，抗-附著成分似乎仍然存在于流出液中，這說明它們在pH8時的中性性質(圖8)。因此，在MonoQ柱上陰離子交換，隨后在MonoS柱上陽離子交換活性級分后，所述抗-附著成分在pH8時似乎不攜帶凈電荷，并且因此是中性的。清楚地，在pH8時，發(fā)生一些純化，因為通過陰離子交換己經從顯著量的帶負電荷物質中分出了活性。實施例4針對所述小于或等于3kDa的級分進行植物化學分析該級分的TLC分析顯示苯酚糖苷、氮化合物和許多如下表1中所示的未知物的存在。此外，在代表20種已知蛋白質氨基酸的標記旁的提取物TLC分離提示蘇氨酸、纈氨酸和亮氨酸或異亮氨酸或甲硫氨酸的存在。表1.關于小于或等于3kDa的級分的TLC數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>粗或部分純化的小于或等于3kDa的級分可以進一步按照本發(fā)明加工，從而提供可以用于預防或治療胃和十二指腸潰瘍和癌的功能性食品產品。在該方面，在消費馬鈴薯原汁可以減輕胃炎癥狀的同時，應該顯然不可能通過這種方式最大化健康益處，這歸因于需要消費的馬鈴薯汁的頻率和量。鑒定和分離按照本發(fā)明的小于或等于3kDa的級分允許將濃縮量的所述汁的生物活性部分引入到合適的產品("功能性食品")中，所述產品然后可以在需要的時候消費，從而獲得理想的健康益處。實施例5-制備馬鈴薯汁的3kDa級分粉末如上所述地制備勻漿的馬鈴薯汁的小于或等于3kDa的提取物，并冷凍-干燥形成按照本發(fā)明的粉末狀提取物。實施例6-制備馬鈴薯汁的3kDa級分的粉末混合物將3.0g冷凍干燥的粉末狀提取物(實施例4)與0.5g粉末狀檸檬酸、26.3g砂糖和0.2g標準噴霧-干燥的調味劑混合物相混合。該混合物代表自由-流動的粉末制劑(包含3.0g活性級分)，其適合于包裝在小袋中。當患有胃炎的受試者需要時，粉末混合物可以按口味稀釋并飲用。實施例7-制備按照本發(fā)明使用的橙味飲料(a)將100ml粗制品與100ml兩倍濃縮的橙汁(在水中稀釋為2倍濃度的橙汁濃縮液)相混合；(b)將3.5g冷凍-干燥的粉末溶解在100ml橙汁(或備選地，用橙汁濃縮液和水)。橙味飲料(a)或(b)可以被受試者立即消費，冷凍以用于隨后消費或封裝在瓶或硬紙盒中以獲得更長的保存期。應該理解橙汁可以方便地被替換為美味的備選物質，諸如奶。實施例8—小于或等于1kDa—大于或等于500Da的級分的HPLC指紋分析通過反相HPLC分析抗-附著級分，即具有小于或等于1kDa—大于或等于500Da的級分的級分，從而提供在不存在鹽的條件下直接適合于LC-MS分析的分離物，如具有HPAECHPLC層析圖的情形。使用的HPLC柱是GeminiC18250x4.6mmi.d柱，其具有粒子尺寸5pm，使用設計用于分離馬鈴薯中的游離酚類化合物的程序(21)。在返回到初始條件前，流動相由A二水甲醇乙酸(88:10:2)和B二水甲醇乙酸(8:90:2)組成，且涉及經過9分鐘增高到10%B，以及隨后在9-13分鐘之間劇增至100%B的梯度。以下結果顯示關于小于或等于lkDa—大于或等于500Da的級分獲得的典型蹤跡(圖9a)。當在280nm處監(jiān)測時，存在若干吸收峰，但是明顯地，存在2個，即似乎分開的1和2(圖9a)。峰1和2的UV光譜分別顯示在圖10a和10b中。這兩種成分性質上均是芳族的，且可以是嘌呤、嘧啶或芳族氨基酸殘基。在350nm處，在14-17分鐘之間洗脫的成分的HPLC層析圖不同(圖9b)。該區(qū)域的放大圖(圖ll)顯示若干峰。盡管沒有完全解析，峰A-C具有指示咖啡酸衍生物(圖12a-12c)、與綠原酸屬于同一家族的酚類類苯基丙烷(phenolicphenylpropanoids)(圖13a和b)UV光譜，酚類類苯基丙垸是馬鈴薯中主要的酚。在15分鐘時，即當綠原酸標記被洗脫下來時，沒有觀察到明顯的峰(圖13a，b)。因此，總而言之，所述小于或等于1kDa—大于或等于500Da的級分中存在至少3種以微小濃度存在的咖啡酸衍生物，沒有一種是綠原酸。此外，所述級分中存在若干芳族成分，其中兩種似乎已被分離。參考文獻1.Blaser,MJ,(1998)幽門螺桿菌和胃病(Helicobacterpyloriandgastricdiseases).生物醫(yī)學雜志(BiomedJ.)316:1507-1510.2.Uemura，N.,Okamoto,S.，Yamamoto,S,,Matsumura，N.,Yamaguchi,S.,Yamakido，M.,Taniyama,K.,禾卩Sasaki,N,,Schlemper,RJ.(2001)幽門螺桿菌感染禾口胃癌的發(fā)展(Helicobacterpyloriinfectionandthedevelopmentofgastriccancer).新英格蘭醫(yī)學雜志(N.Engl.J.Med.)345:784-789.3.Guruge，J丄.，F(xiàn)alk,P.G"Lorenz,R.G.，Dans,M.,Wirth，H.R,Blaser,MJ.,Berg,D.E.,和Gordon,J.I.(1998)上皮附著改變幽門螺桿菌感染的結果(EpithelialattachmentalterstheoutcomeofHelicobacterpyloriinfection).美國國家科學院學報(Proc,Natl,Acad,Sci.USA)95:3925-39304.Censini,S.，Stein,M.,和Covacci,A.(2001)與幽門螺桿菌接觸后誘導的細胞卩向應(CellularresponsesinducedaftercontactwithHelicobacterpylori).當前微生物學觀點(Curr.Opin,Microbiol.)4:41-465.Calvert,X.,Ducons,J.,Bujanda，L.,Bory,F.，Montserrat,A.,禾口Gisbert,J.P.(2005)關于幽門螺桿菌根除的7天對比IO天的雷貝拉唑三重治療:多中心隨機化實驗(SevenversustendaysofrabeprrazoletripletherapyforHelicobacterpylorieradiction:amulticenterrandomisedtrial).美國腸胃病學雜志(Am.J.Gastroenterol)100:1696-17016.Goh,K丄.(2002)關于幽門螺桿菌感染包括藥物耐藥性生物體管理的更新(Updateonthe'managementofHelicobacterpyloriinfection,includingdrugresistantorganisms).腸胃病學和肝臟學雜志OGastroenterolHepatol)17:482-487.7.Kamiji,M.M.,和deOliveiraR.B.(2005)關于幽門螺桿菌感染的非-抗生素治療法(Non-antibiotictherapiesforHelicobacterpyloriinfection).歐洲腸胃病學和肝臟學雜志(EurJGastroenterolHepatol)17:973-981.8.Galan，M.V.,Kishan,A.A.,Silverman,A丄.，2004.用于治療幽門螺桿菌感染的口服花椰菜芽初步報告(OralBroccolisproutsforthetreatmentofHelicobacterpyloriinfection:aprelimaryreport).消"[七系統(tǒng)疾病禾卩禾斗學(DigestiveDiseasesandSciences)49,1088-1090.9.Fahey,J.W.,Haristoy，X.,Dolan,P.M.,Kensler,T.W.，Scholtus,L,Stephenson,K.K.,Talalay,P.,Lozneiwski,A.,2002.l-異硫氰基-4R-丁烷抑制幽門螺桿菌胞外、胞內、和抗生素-耐藥性菌株并預防benzo[a]pyrene誘導的胃瘤(Sulforaphaneinhibitsextracellular,intracellular,andantibiotic-resistantstrainsofHelicobacterpyloriandpreventsbenzo[a]pyreneinducedstomachtumors).PNAS99,7610-7615.10.Adeniyi,B.A.，Anyiam,F.M.,2004.火蔥(百合科)葉甲醇提取物的體外抗-幽門螺桿菌潛力對脲酶活性的易感性和作用(Invitroanti-HelicobacterpyloripotentialofmethanolextractofAlluimascalonicumLinn.(Liliacaea)leaf:susceptibilityandeffectonureaseactivity).植物療法研究(PhytotherapyResearch)18,358-361.11.Lin,Y.T.,Kwon，Y.I.,Labbe，R.G.,Shetty，K.,2005.由牛至和蔓越桔植物化學協(xié)同作用引起的幽門螺桿菌和相關脲酶的抑制(InhibitionofHelicobacterpyloriandassociatedureasebyoreganoandcranberryphytochemicalsynergies).71,8558-8564.12.Mahady,GB.，Pendland，S丄,，Stoia,A.，Chadwick,L.R.,2003.幽門螺桿菌對來自北美草藥血根草和白毛茛的異喹啉生物堿體外易感性(InvitrosusceptibilityofHelicobacterpyloritoisoquinolinealkaloidsfromSanguinariaCanadensisandHydrastiscanadensis).植物療法石jf究(PhytotherapyResearch)17,217-221.13.Wang,Y-C，Huang，T-L.,2005.白花丹的抗-幽門螺桿菌活性(Anti]i-HelicobacterpyloriactivityofPlumbagozeylanicaL).FEMS免疫學和醫(yī)學微生物學(FEMSImmunologyandMedicalMicrobiology)43,407-412.14.StamatisG.,Kyriazopoulos,P.,Golegou,S.,Basayiannis,A,，Skaltsas，S.,Skaltsa,H.,2003.希臘草藥的體外抗-幽門螺桿菌活性(Invitroanti-HelicobacterpyloriactivityofGreekherbalmedicines).禾中方矣藥理學(JournalofEthnopharmacology)88，175-179.15.Matsubara,S.，Shibata,H.，Ishikawa,F.,Yokokura,T.,Takahashi,M.,Sugimura,T.,Wakabayashi,K.，2003.在蒙古沙鼠中由綠茶提取物抑制幽門螺桿菌-誘導的胃炎(SupressionofHelicobacterpylori-induced胃炎bygreenteaextractinMongoliangerbils).生物化學和生物物理學研究通信(BichemicalandBiophysicalResearchCommunications)310,715-719.16.O'Mahony,R.,Al匿Khtheeri,H.,Weerasekera,D.,Fernando,N.,Vairi,D.，Holton,J.,Basset,C,2005.烹調用和醫(yī)學植物針對幽門螺桿菌的殺菌和抗-附著性質(Bactericidalandanti-adhesivepropertiesofculinaryandmedicinalplantsaga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