專(zhuān)利名稱(chēng)：預(yù)防核輻射、太陽(yáng)輻射及其他輻射誘導(dǎo)的組織損害的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及保護(hù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞和組織免受預(yù)期的、有計(jì)劃的或非故意的輻射暴露、特別是電離輻射暴露的不利影響的領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明涉
及肌醇六磷酸(inositolhexaphosphate， IP-6)及其衍生物(包括焦磷酸酯和檸檬酸酯衍生物)與或不與肌醇一起在輻射暴露之前、期間或之后向哺乳動(dòng)物個(gè)體或哺乳動(dòng)物細(xì)胞給藥，用于預(yù)防或治療暴露于太陽(yáng)輻射、核輻射、宇宙輻射及其他電磁輻射或微粒輻射的形式(包括如在抗癌放射治療期間發(fā)生的輻射暴露)的這樣的哺乳動(dòng)物和它們的組織及細(xì)胞的損害的用途。
背景技術(shù)：
輻射是跨越電磁波譜分布的能量，通過(guò)參考波(具有長(zhǎng)波長(zhǎng)和低頻率)和/或粒子(具有短波長(zhǎng)和高頻率)描述的方式與物質(zhì)相互作用。通常哺乳動(dòng)物所碰到的所有輻射的約80%來(lái)自天然存在的源。輻射、尤其電離輻射主要通過(guò)細(xì)胞毒性效應(yīng)對(duì)細(xì)胞和組織具有不利影響。在人類(lèi)中，主要通過(guò)治療技術(shù)(如抗癌放射療法)、通過(guò)職業(yè)和/或環(huán)境暴露于人源性輻射源、或通過(guò)職業(yè)暴露于天然存在的輻射源(如在航空器飛行人員的情況下)而發(fā)生電離輻射暴露。
表1根據(jù)它們的頻率和所選的生物效應(yīng)表征輻射形式。接近所述波譜的低頻率末端的輻射形式的性質(zhì)更好地描述為波狀(wavelike)。接近所述波譜的高頻率末端的輻射形式則具有最大能量，且易于作為粒子與物質(zhì)相互作用。輻射暴露的危險(xiǎn)效應(yīng)通常與輻射類(lèi)型的微粒特征相關(guān)。表l:離子化和非離子化電磁輻射
輻射_ 頻率(Hz) 所選的生物效應(yīng)
電力
無(wú)線(xiàn)電波和雷達(dá)微波
1-50 可能增加的癌癥發(fā)病率106-1,011 熱效應(yīng)、白內(nèi)障
109-1,010 晶狀體混濁紅外光 1,011-1,014 白內(nèi)障
可見(jiàn)光 1,015 視網(wǎng)膜灼傷(激光)
紫外線(xiàn) 1,015-1,018 皮膚燒傷、皮膚癌
X射線(xiàn)和Y射線(xiàn) 1,018-1,020 急性和延遲的損傷、癌癥
宇宙輻射 1,027 可能的白內(nèi)障、腦損害、癌癥
電離輻射的特征是具有短波長(zhǎng)和高頻率；典型的電離輻射形式包括紫外線(xiàn)、X射線(xiàn)、Y射線(xiàn)和宇宙輻射。電離輻射的形式還包括粒子如a粒子或中子的放射性發(fā)射。與其微粒性質(zhì)一致，電離輻射引起生物分子中的原子的振動(dòng)和旋轉(zhuǎn)，導(dǎo)致電子的噴射和自由基化學(xué)物種(species)的形成。自由基是在外層軌道具有單個(gè)未成對(duì)電子的化學(xué)物種。這種不穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)有利于通過(guò)與無(wú)機(jī)和有機(jī)的鄰近分子的相互作用來(lái)釋放能量。在生物分子中，這種釋放通過(guò)形成異常的(aberrant)化學(xué)鍵而導(dǎo)致所述的生物分子的物理變化。因此，人們認(rèn)為電離輻射可產(chǎn)生對(duì)生物分子的直接影響。
自由基物種還可經(jīng)由中間活性物質(zhì)通過(guò)化學(xué)的、酶的和催化的方式來(lái)產(chǎn)生，但是電離輻射例如可通過(guò)直接將水水解成羥基(OH，)和氫(H，)自由基而直接形成自由基。例如，當(dāng)組織暴露于Y輻射時(shí)，很多儲(chǔ)存于細(xì)胞中的能量被水吸收，并導(dǎo)致水的氧-氫共價(jià)鍵裂解，留下一個(gè)單電子在氫上而另一個(gè)在氧上，因此形成兩個(gè)自由基。羥基(OH，)是化學(xué)中已知的最具活性的自由基。
自由基物種與生物分子如核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及其他生物大分子的嘌呤或嘧啶堿基反應(yīng)以產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞和組織的損害，并且它們可能引起特別是在嚴(yán)重患病的患者中的細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的鏈反應(yīng)。例如，活性自由基氧物種通過(guò)細(xì)胞表面的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄因子的激活，從而導(dǎo)致炎癥和腫瘤引發(fā)。
普遍公認(rèn)DNA是電離輻射的細(xì)胞毒性效應(yīng)的決定性的靶。電離輻射能直接損害或改變DNA，弓l起雙敏ds)斷裂和作為特別重要的副產(chǎn)物的交聯(lián)嘧啶堿基如胸苷二聚體的形成。人們認(rèn)為，直接通過(guò)在DNA去氧核糖部分上的電離輻射形成的碳中心基團(tuán)是鏈斷裂物的前體。經(jīng)受廣泛的不可修復(fù)的DNA損害的細(xì)胞通常進(jìn)入細(xì)胞凋亡(程序性細(xì)胞死亡)，且存活細(xì)胞帶有以突變、染色體異常和基因不穩(wěn)定的形式的輻射損害的標(biāo)志?？焖俜至鸭?xì)胞如骨髓中的造血細(xì)胞(造血的)、睪丸和卵巢中的生殖細(xì)胞、胃腸道、氣道等的粘膜襯細(xì)胞對(duì)電離輻射的損傷最敏感。細(xì)胞周期的G2和有絲分裂期中的細(xì)胞最有可能被損害。事實(shí)上，已經(jīng)提出許多認(rèn)為病
?？赡苌婕把踝杂苫?"氧自由基(oxyradical)")病理生理學(xué)。氧自由基損傷已牽涉以下疾病的發(fā)病機(jī)理肺型氧中毒、成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)、支氣管肺發(fā)育不良、膿毒病綜合征以及多種缺血-再灌注綜合征，所述缺血-再灌注綜合征包括心肌梗死、中風(fēng)、心肺轉(zhuǎn)流術(shù)、器官移植、壞死性小腸結(jié)腸炎、急性腎小管壞死和其他疾病。
任何源的輻射暴露可被分類(lèi)為急性(單次大暴露)或慢性(一系列小的低水平或連續(xù)的低水平暴露隨時(shí)間擴(kuò)展)。表2列舉所選源的輻射劑量。輻射劑量通常以毫雷姆(millirem)報(bào)告。
表2
電視
■y身才線(xiàn)，Jet Cross Country
高山期(Mountain Vacation)-2周
原子試爆塵埃(Atomic Test Fallout)
美國(guó)水、食品和空氣(平均)
木材
混凝土
磚
胸部X射線(xiàn)宇宙輻射(海平面)
天然本底(Natural Background)舊金山
天然本底丹佛
工人的原子能委員會(huì)限值
完全牙科X射線(xiàn)
巴西Pocos de Caldras天然本底
全身診斷X射線(xiàn)
劑量(毫雷姆)
<1/年
1
3
30/年50/年50/年75/年100
40/年(增加1
英尺海拔)
120/年
50/年
5,000/年
5,000
7,000/年
;雷姆/100癌癥療法 500,000 (局部的)
輻射病-長(zhǎng)崎 125,000 (單劑量)
半數(shù)致死劑量-長(zhǎng)崎和廣島 400,000-500,000 (單劑量)
輻射病通常起因于充分劑量的急性暴露，并且呈現(xiàn)以有秩序的方式出 現(xiàn)的癥狀的特征性集合，包括脫發(fā)、虛弱、嘔吐、腹瀉、皮膚燒傷和胃腸 道和粘膜出血。遺傳缺陷、不育和癌癥(特別是骨髓癌)經(jīng)常隨時(shí)間發(fā)展。電 離輻射的足夠大的急性劑量如500,000至超過(guò)1百萬(wàn)毫雷姆(與5-10 Gy相 當(dāng))可立即殺死個(gè)體。幾十萬(wàn)毫雷姆的劑量可在7至21天內(nèi)從稱(chēng)作"急性 輻射中毒"的狀態(tài)殺死個(gè)體。125,000毫雷姆的急性全身暴露可引起輻射病。 局部劑量如用于放射療法的劑量可能不引起輻射病，但是可導(dǎo)致暴露的正 常細(xì)胞的損害或死亡。
例如，在不到1周內(nèi)接受的100,000-125,000毫雷姆(與1Gy相當(dāng))的急 性全身輻射劑量將導(dǎo)致可觀察到的生理學(xué)效應(yīng)如皮膚燒傷或疹、粘膜和GI 出血、惡心、腹瀉和/或過(guò)度疲勞。隨時(shí)間也可出現(xiàn)更長(zhǎng)期的細(xì)胞毒性和遺 傳效應(yīng)如造血和免疫活性細(xì)胞破壞、脫發(fā)(禿頂)、胃腸道和口腔粘膜形成腐 肉、肝的靜脈閉塞病和腦血管的慢性血管增生、白內(nèi)障、肺炎、皮膚變化 和癌癥發(fā)病率增加。盡管長(zhǎng)期細(xì)胞毒性或遺傳效應(yīng)可發(fā)生，但是少于10,000 毫雷姆(與0.1 Gy相當(dāng))的急性劑量通常不會(huì)導(dǎo)致即時(shí)可觀察的生物或生理 效應(yīng)。
慢性暴露通常與延遲的醫(yī)學(xué)問(wèn)題如癌癥和過(guò)早老化相關(guān)。慢性輻射暴 露是隨時(shí)間接受的低水平(即100-5,000毫雷姆)增加的或連續(xù)的輻射劑量。 慢性劑量的實(shí)例包括約每年5,000毫雷姆的全身劑量，這是通常由在核電站 工作的成人接受的劑量。相比之下，原子能委員會(huì)建議普通公眾每年接受 應(yīng)不超過(guò)100毫雷姆。慢性劑量可引起長(zhǎng)期細(xì)胞毒性和遺傳效應(yīng)，例如顯 示作為在隨后生命中發(fā)生的輻射誘導(dǎo)的癌癥的風(fēng)險(xiǎn)增加。
超過(guò)每年5，000毫雷姆(每年0.05 Gy)的慢性劑量可導(dǎo)致類(lèi)似于針對(duì)接 受急性劑量的人所描述的那些長(zhǎng)期細(xì)胞毒性或遺傳效應(yīng)。 一些不利的細(xì)胞 毒性或遺傳效應(yīng)還可在顯著低于每年5,000毫雷姆的慢性劑量時(shí)發(fā)生。為了 輻射防護(hù)的目的，假定任何高于零的劑量可增加輻射誘導(dǎo)的癌癥的風(fēng)險(xiǎn)(即 沒(méi)有閾值)。流行病學(xué)研究已發(fā)現(xiàn)，估計(jì)死于癌癥的終生危險(xiǎn)為大于約0.04%每雷姆的全身輻射劑量。
電離輻射(急性)暴露的主源是人源性治療輻射在治療癌癥或其他增殖 性病癥中的給藥。暴露于電離輻射治療劑量的個(gè)體通常每次治療接受0.1
至2 Gy,并且每次治療可接受像5 Gy —樣高。根據(jù)治療醫(yī)生所開(kāi)處方的療 程，個(gè)體可能在數(shù)周至數(shù)月的過(guò)程中接受倍劑量(multiple doses)。
暴露于人源性源的電離輻射還可能在職業(yè)環(huán)境中發(fā)生。電離輻射的職 業(yè)劑量可被工作涉及暴露(或潛在的暴露)于如在核電和核武器工業(yè)中的輻 射的人所接受。職業(yè)暴露還可在為處理包括核反應(yīng)堆或放射性材料的突變 事件而召集的救援和應(yīng)急人員中發(fā)生。職業(yè)暴露的其他源可能來(lái)自機(jī)器零 件、塑料、制造放射性醫(yī)療產(chǎn)品所剩下的溶劑、防煙警報(bào)、應(yīng)急標(biāo)記和其 他消費(fèi)品。職業(yè)暴露還可能發(fā)生在為核動(dòng)力船服務(wù)的軍事人員或平民、特 別是那些照管核反應(yīng)堆的以及在被軍事用途的放射性物質(zhì)(包括核武器塵 埃)所污染的地區(qū)中操作的那些。
包括人類(lèi)和其他動(dòng)物(如家畜)的哺乳動(dòng)物還可能暴露于來(lái)自環(huán)境的人 源性電離輻射。暴露于顯著量的這樣的環(huán)境輻射的主源來(lái)自核電站事故如 在Three Mile Island、 Chernobyl和Tokaimura的那些。電離輻射的環(huán)境暴露 還可能起因于核武器爆炸(實(shí)驗(yàn)性或戰(zhàn)時(shí)期間)、錒系元素從核廢物貯存中的 排放與核燃料的處理和再處理、以及天然存在的放射性材料如氡氣或鈾。 同時(shí)也越來(lái)越關(guān)注使用含有貧鈾的軍需品導(dǎo)致戰(zhàn)區(qū)的低水平放射性污染。
如上所述，對(duì)于大多數(shù)哺乳動(dòng)物，大量的它們終生輻射暴露來(lái)源于天 然存在的源。所述源包括分散在自然中的放射性化學(xué)元素，例如天然存在 于花崗巖中的少量鈾。少量放射性元素普遍存在于大氣、地面和水中，這 較多或較少的程度取決于場(chǎng)所。其他重要的天然存在的源來(lái)自外層空間 太陽(yáng)和宇宙。由于在世界許多地方可偶然獲得相對(duì)強(qiáng)的劑量，所以由太陽(yáng) 發(fā)射的紫外線(xiàn)輻射可能特別危險(xiǎn)。宇宙輻射、X射線(xiàn)和Y射線(xiàn)暴露對(duì)在高 海拔生活或工作的那些哺乳動(dòng)物特別危險(xiǎn)。包括宇航員的商業(yè)和軍事飛行 人員由于他們?cè)诟吆０蜗牡臅r(shí)間相對(duì)長(zhǎng)，故對(duì)這種輻射特別敏感。
盡管抗輻射服或其他防護(hù)性裝備(gear)可有效減少輻射暴露，但是這樣 的裝備昂貴、笨重，且通常公眾不可獲得。此外，輻射防護(hù)性裝備不保護(hù) 鄰近腫瘤的正常組織避免在放射療法期間的偏離輻射暴露。因此，所需要的是一種防護(hù)預(yù)定遭受電離輻射暴露或處于遭受電離輻射暴露的危險(xiǎn)的個(gè) 體的實(shí)用方法。在治療輻照的情況中，期望增強(qiáng)正常細(xì)胞的防護(hù)，同時(shí)引 起腫瘤細(xì)胞保持易受到輻射的有害作用。此外，期望提供系統(tǒng)性防護(hù)以免 預(yù)期的或疏忽的全身照射(如可能在職業(yè)或環(huán)境暴露或在某些治療技術(shù)中 發(fā)生的)。
藥物輻射防護(hù)劑提供有成本效益的、有效且易獲得的輻射防護(hù)裝置的 替代方案。但是，之前用藥物組合物進(jìn)行輻射防護(hù)正常細(xì)胞的嘗試還未完 全成功。例如，涉及使外周血祖細(xì)胞活動(dòng)的細(xì)胞因子當(dāng)在輻射前給予時(shí)賦
予骨髓防護(hù)效應(yīng)(Neta等人，Semin. Radiat. Oncol. 6:306-320, 1996)，但是不
賦予系統(tǒng)性防護(hù)。單獨(dú)給藥或與生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑組合的其他化學(xué)的輻射防 護(hù)劑已在小鼠中顯示較小的防護(hù)效應(yīng)，但是向大哺乳動(dòng)物應(yīng)用這些化合物 較少成功，并且是否化學(xué)輻射防護(hù)具有價(jià)值仍有疑問(wèn)(Maisin， J. R., Bacq和 Alexander Award Lecture. "Chemical radioprotection: past, present, and future prospects" ， Int. J. Radiat. Biol. 73:443-50， 1998)。
在當(dāng)今來(lái)自恐怖分子和/或流氓國(guó)家(rogue natkm)的核威脅的增加以及 核電站反應(yīng)堆的意外事件中，對(duì)保護(hù)核反應(yīng)堆工人和廣大人群(population at large)以免電離輻射暴露的健康危險(xiǎn)的安全有效的手段有增加的需要。 美國(guó)能源部(DOE)報(bào)告"與此問(wèn)題有關(guān)的文官和軍官的未實(shí)現(xiàn)的夢(mèng)想是具有 全球有效藥理學(xué)的即魔力的輻射防護(hù)藥丸(pill)。這種藥丸能口服，在疑似 核/輻射學(xué)的事件之前或之后沒(méi)有任何過(guò)度的副作用以便提供個(gè)體全身防 護(hù)以免早期出現(xiàn)急性損傷和后期出現(xiàn)病理學(xué)(2005年7月13日的關(guān)于肌醇 和其他輻射防護(hù)劑研討會(huì)(Inositol and Other Radioprotective Agents Worksh叩)上的美國(guó)能源部報(bào)告)"。因此，"輻射防護(hù)藥丸"是迫切的并具有 重要的國(guó)家安全利益。
DOE報(bào)告進(jìn)一步說(shuō)明"......目前最大范圍的R&D策略正用于探求新
的安全和有效的輻射防護(hù)劑，所述策略包括a)大規(guī)模篩選新型鑒定的化 學(xué)種類(lèi)或自然產(chǎn)物；b)重新配制或重建具有已證明的效能的老防護(hù)劑以減 少不期望的毒性；c)使用只是適度防護(hù)的但是基本上無(wú)毒且耐受性非常好 的營(yíng)養(yǎng)食品；d)使用潛在毒性(在高藥物劑量時(shí))但是有效的藥劑的低劑量 組合，所述組合通過(guò)希望促進(jìn)輻射防護(hù)性的協(xié)同作用的不同途徑來(lái)進(jìn)行細(xì)胞防護(hù)；和e)接受代替無(wú)毒的、依賴(lài)于由藥物所提供的防護(hù)作用的較低藥 物效力，其可受暴露后療法的影響......"。但是，就IP-6及其衍生物(包括
焦磷酸酯)和/或肌醇的這種應(yīng)用的主題物質(zhì)而言，本領(lǐng)域技術(shù)人員總結(jié)
"肌醇六磷酸IP-6及其類(lèi)似物正作為藥物進(jìn)入試驗(yàn)。挑戰(zhàn)之一是用保護(hù)基 保護(hù)(cover)磷酸酯以使該分子容易通過(guò)進(jìn)入細(xì)胞中(2005年7月13日的 DOE報(bào)告)。"這隱含著以下觀點(diǎn)IP-6及其衍生物(包括焦磷酸酯)和/或 肌醇目前作為輻射防護(hù)劑是無(wú)效的。
輻射調(diào)節(jié)劑如輻射防護(hù)劑和輻射增敏劑的現(xiàn)有技術(shù)探索已集中在低氧 細(xì)胞增敏劑如甲硝唑(metranidazole)和米索硝唑(misonidazole)。輻射防護(hù) 劑在臨床水平已接受比輻射增敏劑更少的注意力。核時(shí)代在輻射防護(hù)劑的 開(kāi)發(fā)中引起相當(dāng)?shù)呐?，在二十世紀(jì)六十年代超過(guò)4,000個(gè)化合物在美國(guó)的 Walter ReedAraiy Institute of Research中合成并測(cè)試。除稱(chēng)為WR2727的化 合物之外，已證明這些化合物沒(méi)有一個(gè)在軍事或工業(yè)情況下或在癌癥輻射 療法中有用。
發(fā)明概述
本發(fā)明提供用于在已遭受電離輻射暴露或處于遭受電離輻射暴露的危 險(xiǎn)的個(gè)體中保護(hù)正常細(xì)胞和組織以免輻射暴露、特別是電離輻射暴露的細(xì) 胞毒性和遺傳效應(yīng)的組合物和方法。電離輻射暴露可在治療癌癥和其他增 殖病癥期間以受控劑量存在，或可在高?；顒?dòng)或環(huán)境暴露期間以超過(guò)廣大 人群所接受的標(biāo)準(zhǔn)的未受控劑量存在。
因此，在一個(gè)方面中，提供肌醇/IP-6化合物和藥學(xué)可接受的鹽及衍生 物(包括焦磷酸酯和檸檬酸酯衍生物)，還提供包含它們的藥物組合物。
本發(fā)明提供用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中電離輻射暴露的急性短期不利
的健康影響的方法，所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物給藥有效量的包含任 意組合的IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物的藥物組合物; 并預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中電離輻射暴露的急性短期不利的健康影響。在優(yōu) 選的實(shí)施方案中，所述藥物組合物還包含肌醇。在另一實(shí)施方案中，所述 藥物組合物還包含至少一種藥學(xué)可接受的賦形劑或載體，且它可按液體、 洗劑、乳膏劑、凝膠劑、軟膏劑、散劑、片劑、咀嚼片劑、栓劑或膠囊劑的形式提供。所述藥物組合物可以是腸內(nèi)或腸胃外制劑。
在另一實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含按重量計(jì)約0.1%至約100%
或按重量計(jì)約0.1%至約50%的量的任意組合的IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或 其藥學(xué)可接受的衍生物，其中所述藥物組合物還包含按重量計(jì)約0.1%至約 50%的量的任意組合的肌醇、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物。 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含約30:1至約1:30的比率或約 5:1至約1:5的比率的任意組合的肌醇和IP-6、它們的藥學(xué)可接受的鹽或它 們的藥學(xué)可接受的衍生物。
在另一實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含按重量計(jì)約0.01%至約20% 的量的任意組合的IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物。優(yōu) 選地，所述藥物組合物包含按重量計(jì)約0.01%至約20%的量的任意組合的 IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物，且還包含按重量計(jì)約 0.01%至約20%的量的任意組合的肌醇、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受 的衍生物。甚至更優(yōu)選地，所述組合物包含按重量計(jì)約0.1%至約10%的 IP-6，且還包含按重量計(jì)約0.1%至約10%的量的任意組合的肌醇、其藥學(xué) 可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物。在另一實(shí)施方案中，所述藥物組合 物包含按重量計(jì)約0.5%至約5%的量的任意組合的IP-6、其藥學(xué)可接受的 鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物，且還包含按重量計(jì)約0.5%至約5%的量的任 意組合的肌醇、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物。優(yōu)選地，所 述藥物組合物包含約30:1至約1:30的比率或約5:1至約1:5的比率的任意 組合的肌醇和IP-6、它們的藥學(xué)可接受的鹽或它們的藥學(xué)可接受的衍生物， 且所述肌醇和IP-6可按其藥學(xué)可接受的鹽、異構(gòu)體、酯、衍生物或任何組 合的形式存在。
該藥物組合物還可包含抗氧化劑、抗微生物劑(biodde)、化學(xué)治療劑、 營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑或營(yíng)養(yǎng)食品、鎮(zhèn)痛藥、防曬劑(sunblock)、增濕劑或它們的任意組 合。所述藥物組合物可按散劑、片劑或膠囊劑口服給藥，以及可按洗劑、 乳膏劑、軟膏或凝膠劑局部給藥。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物在電離輻射暴露前給藥至少一天。 優(yōu)選地，所述給藥每天進(jìn)行至少兩次或每天進(jìn)行至少三次，且所述藥物組 合物以至少一種含有總計(jì)為約1克至約IO克的任意組合的肌醇、IP-6、它們的藥學(xué)可接受的鹽或它們的藥學(xué)可接受的衍生物的劑量給藥。在另一實(shí)
施方案中，所述藥物組合物以至少一種含有約2克至約5克的任意組合的 肌醇、IP-6、它們的藥學(xué)可接受的鹽或它們的藥學(xué)可接受的衍生物的劑量給 藥。
本發(fā)明規(guī)定電離輻射暴露包括紫外線(xiàn)、X射線(xiàn)、Y射線(xiàn)、宇宙射線(xiàn)、粒 子束或它們的任意組合，其中所述電離輻射來(lái)源于一種或多種天然源，所
述天然源包括太陽(yáng)、外層空間或存在于大氣、地面、礦床、礦石、地下
水、水體(bodyofwater)或石頭中的放射性元素。所述電離輻射還可來(lái)源于 一種或多種人源性源，如紫外線(xiàn)、治療性輻射源(therapeutic radiation source)、核電站、核燃料、核武器、核塵埃(nuclearfallout)和放射性消耗裝 置(radioactive consumer device)。
被本發(fā)明的組合物預(yù)防或減少的不利的健康影響除了別的以外還包 括皮膚燒傷、疹、粘膜退化(degradation)或出血、胃腸道退化或出血、 腹瀉、貧血或過(guò)度疲勞。
本發(fā)明還提供安全增加對(duì)需要電離輻射治療的哺乳動(dòng)物所供給的治療 電離輻射的劑量的方法，所述方法包括在暴露于治療性輻射電離輻射之 前向哺乳動(dòng)物給藥包含如上所提供的組合物的藥物組合物；并將所述哺乳 動(dòng)物暴露于大于在不存在所述藥物組合物時(shí)所述哺乳動(dòng)物的最大安全劑量 的劑量的治療性輻射電離輻射。
本發(fā)明還提供用于保護(hù)工人以免工作場(chǎng)所電離輻射暴露的短期不利的 健康影響的方法，所述方法包括在暴露于工作場(chǎng)所電離輻射之前向工人 給藥包含如上所提供的組合物的藥物組合物；并保護(hù)所述工人以免工作場(chǎng) 所電離輻射暴露的不利的健康影響。
本發(fā)明還提供用于保護(hù)軍事人員以免人源性電離輻射暴露的短期不利 的健康影響的方法，所述方法包括在暴露于軍事電離輻射(military ionizing mdiation)之前向軍事人員給藥包含如上所提供的組合物的藥物組合物；并 保護(hù)所述軍事人員以免人源性電離輻射暴露的不利的健康影響。
本發(fā)明還提供用于保護(hù)軍事人員以免人源性電離輻射暴露的短期不利 的健康影響的試劑盒，所述試劑盒包含容器，所述容器含有包含任意組合 的IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物的多種藥物組合物，所述多種藥物組合物包括有效保護(hù)軍事人員以免人源性電離輻射暴露的短
期不利的健康影響的局部用制劑(topical prepamtkm)和口服制劑。優(yōu)選地， 所述多種藥物組合物以單位劑量提供，且是試劑盒包含足以使用至少一天 的單位劑量。更優(yōu)選地，所述多種藥物組合物還包含任意組合的肌醇、其 藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物。在另一實(shí)施方案中，所述多種 藥物組合物以至少一種劑量給藥，每種劑量包含總計(jì)為約1克至約10克的 任意組合的肌醇、IP-6、它們的藥學(xué)可接受的鹽或它們的藥學(xué)可接受的衍生 物。
本發(fā)明還提供預(yù)防哺乳動(dòng)物中電離輻射暴露的急性短期不利的健康影 響的局部用制劑，所述局部用制劑包含有效量的組合物，所述組合物包含 任意組合的IP-6、其藥理學(xué)可接受的鹽或其藥理學(xué)可接受的衍生物和至少 一種藥理學(xué)可接受的載體，其有效預(yù)防哺乳動(dòng)物中電離輻射暴露的急性短 期不利的健康影響。優(yōu)選地，所述組合物是洗劑、乳膏劑或凝膠劑，且所 述電離輻射暴露的急性短期不利的健康影響包括曬斑。優(yōu)選地，所述組合 物在電離輻射暴露之前足以使任意組合的IP-6、其藥理學(xué)可接受的鹽或其 藥理學(xué)可接受的衍生物被皮膚的細(xì)胞所吸收的時(shí)間施用至所述哺乳動(dòng)物的 皮膚。甚至更優(yōu)選地，所述藥物組合物在電離輻射暴露之前3至12小時(shí)施 用至所述哺乳動(dòng)物的皮膚。
在另一實(shí)施方案中，上述的局部用制劑還包含抗氧化劑、抗微生物劑、 營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑或營(yíng)養(yǎng)食品、鎮(zhèn)痛藥、防曬劑、增濕劑或它們的任意組合，并且 甚至還包含任意組合的肌醇、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物。 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物包含按重量計(jì)約0.1%至約50%的量的任意 組合的IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物，且還包含按重 量計(jì)約0.1%至約50%的量的任意組合的肌醇、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué) 可接受的衍生物。在另一實(shí)施方案中，該組合物包含約30:1至約1:30的比 率或以約5:1至約1:5的比率的任意組合的肌醇和IP-6、它們的藥學(xué)可接受 的鹽或它們的藥學(xué)可接受的衍生物。
在另一方面，本發(fā)明提供治療個(gè)體癌癥或其他增殖性病癥的方法，所 述方法包括在給藥有效量的電離輻射之前向所述個(gè)體給藥有效量的至少一 種輻射防護(hù)劑肌醇/IP-6化合物，其中所述肌醇/IP-6化合物誘導(dǎo)個(gè)體的正常組織中的短暫抗輻射性表型。
在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于凈化(purge)骨髓贅生性細(xì)胞(例如
白血病細(xì)胞)或已轉(zhuǎn)移至骨髓的腫瘤細(xì)胞的方法，所述方法包括從患有增殖
性病癥的個(gè)體收集骨髓細(xì)胞、用有效量的至少一種肌醇/IP-6化合物處理收
集的骨髓細(xì)胞、并對(duì)經(jīng)處理的骨髓細(xì)胞進(jìn)行有效量的電離輻射。然后將收 集的細(xì)胞送回至患病個(gè)體的機(jī)體。
在又一方面，本發(fā)明提供用于治療已遭受可醫(yī)治的電離輻射暴露的輻 射損害或處于可醫(yī)治的電離輻射暴露的輻射損害的危險(xiǎn)的個(gè)體的方法。在
一個(gè)實(shí)施方案中，有效量的至少一種肌醇/IP-6化合物在所述個(gè)體遭受可醫(yī) 治的電離輻射暴露的輻射損害之前向所述個(gè)體給藥。在另一實(shí)施方案中， 有效量的至少一種肌醇/IP-6化合物在所述個(gè)體遭受可醫(yī)治的電離輻射暴露 的輻射損害之后向所述個(gè)體給藥。
附圖簡(jiǎn)述


圖1. IP-6和UVB輻射對(duì)HaCaT細(xì)胞成活力和增殖的作用。將HaCaT 細(xì)胞暴露于不同的UVB強(qiáng)度，并立即用不同濃度的Na-IP-6處理。使用 MTT測(cè)定24小時(shí)后，確定細(xì)胞成活力和增殖。每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)表示平均士標(biāo)準(zhǔn) 偏差。相對(duì)的細(xì)胞成活力隨IP-6濃度增加而顯著增加，p< 0.001。該培養(yǎng) 基中的肌醇濃度為38.8 (iM。
圖2. IP-6和UVB輻射對(duì)HaCaT細(xì)胞的附著的作用。將HaCaT細(xì)胞暴 露于不同的UVB強(qiáng)度，并立即用不同濃度的Na-IP-6處理。UVB輻射后 18小時(shí)，確定細(xì)胞附著。每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)表示平均i標(biāo)準(zhǔn)偏差。在30mJ/cm2 UVB 強(qiáng)度時(shí)，0.5、 1.0和2.0mM的IP-6濃度引起細(xì)胞附著顯著增加，p<0.01。 該培養(yǎng)基中的肌醇濃度為38.8 pM。
圖3. IP-6和UVB輻射對(duì)HaCaT細(xì)胞的細(xì)胞周期分布的作用。將膜聯(lián) 蛋白V (annexin V)和PI染色細(xì)胞不暴露或暴露于30 mJ/cm2 UVB輻射，然 后用1.0mMNa-IP-6處理或不用IP-6處理。18小時(shí)后，收集細(xì)胞，用膜聯(lián) 蛋白V和PI二重染色，并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析。將凋亡細(xì)胞、壞死細(xì)胞或 活細(xì)胞的數(shù)目表示成百分比；與暴露于UVB但不用IP-6處理的組比較，p < 0.001。該培養(yǎng)基中的肌醇濃度為38.8pM。圖4. IP-6和UVB輻射對(duì)HaCaT細(xì)胞的胱天蛋白酶-3激活的作用。為 了評(píng)價(jià)激活的胱天蛋白酶-3活性，將細(xì)胞不暴露或暴露于30 mJ/cm2 UVB 輻射，然后用l.OmMNa-IP-6處理或不用IP-6處理。18小時(shí)后，收集細(xì)胞， 并進(jìn)行熒光CaspACE測(cè)定。激活的胱天蛋白酶-3活性表示成相對(duì)熒光單位。 與暴露于UVB但不用IP-6處理的組比較，在p < 0.01時(shí)具有顯著性"。該 培養(yǎng)基中的肌醇濃度為38.8 )iM。
圖5:在UVB暴露后，作為細(xì)胞損傷和死亡的征兆，對(duì)照未處理的細(xì) 胞顯示出與用Na-IP-6、肌醇(Ins)和IP-6 +肌醇處理的那些相比對(duì)板更少的 附著。用1:1摩爾比率的IP-6和肌醇處理的細(xì)胞顯示最佳附著。
發(fā)明詳述
肌醇(環(huán)己六醇)及其磷酸酯是眾所周知、無(wú)毒、天然存在的化合物。肌 醇是以更大分子的部分如磷脂類(lèi)或以磷酸化形式如各種肌醇磷酸酯、聚磷 酸酯和焦磷酸酯存在于動(dòng)物和植物細(xì)胞中的六碳糖。肌醇可通過(guò)很多方法 來(lái)商業(yè)制備，如參見(jiàn)Posternak，美國(guó)專(zhuān)利1,313,014; Goedecke，美國(guó)專(zhuān)利 1,715，031; Wagner，美國(guó)專(zhuān)利1，716，286; Goedecke，美國(guó)專(zhuān)利1,721,214; 美國(guó)專(zhuān)利2,112,553; Elkin，美國(guó)專(zhuān)利2，414，365等。
本發(fā)明的肌醇/IP-6化合物和組合物保護(hù)正常細(xì)胞和組織以免輻射、特 別是電離輻射的急性和慢性暴露的影響。本文所用的術(shù)語(yǔ)"肌醇/IP-6"是 指基于肌醇的本發(fā)明化合物，其包含任意有效組合的肌醇、IP-6、 IP-6藥理 學(xué)可接受的衍生物(包括IP-6的焦磷酸酯與擰檬酸酯衍生物，如IP-7、IP-8、 IP-12和IP-6六檸檬酸酯等)和它們的任何前藥、及其藥理學(xué)可接受的鹽。
本文所用的術(shù)語(yǔ)"個(gè)體"包括人類(lèi)和非人類(lèi)動(dòng)物，且指預(yù)定遭受電離 輻射暴露、處于遭受電離輻射暴露的風(fēng)險(xiǎn)或已遭受電離輻射暴露的生物體。
本文所用的"電離輻射"是足夠的能量輻射，當(dāng)其被細(xì)胞和組織吸收 時(shí)誘導(dǎo)自由基物種和DNA損害的形成。這種類(lèi)型的輻射包括紫外線(xiàn)輻射、 X射線(xiàn)、Y射線(xiàn)和粒子轟擊(例如中子束、電子束、質(zhì)子、介子及其他)，并 且用于醫(yī)學(xué)試驗(yàn)和治療、科學(xué)目的、工業(yè)試驗(yàn)、制造和滅菌、武器和武器 開(kāi)發(fā)及很多其他用途。輻射通常以吸收劑量的單位如拉德(md)或戈瑞 (gray )(Gy)或以劑量當(dāng)量的單位如雷姆或韋特(sievert)(S v)測(cè)量。Sv是Gy劑量乘以因子，所述因子包括所受組織損害。例如，穿透電 離輻射(例如Y和卩輻射)具有約1的因子，因此1 Sv等于約1 Gy。 a射線(xiàn) 具有20的因子，因此lGy的a輻射等于20Sv。
所謂"電離輻射的有效量"表示有效殺死個(gè)體中的異常增殖細(xì)胞或有 效減少所述異常增殖細(xì)胞的增殖的電離輻射的量。就骨髓凈化而言，所用 的"電離輻射的有效量"表示有效殺死從個(gè)體移除的骨髓樣品中的惡性細(xì) 胞或有效減少所述惡性細(xì)胞的增殖的電離輻射的量。
所謂"電離輻射急性暴露"或"電離輻射急性劑量"表示在少于24小 時(shí)內(nèi)被個(gè)體吸收的電離輻射劑量。急性劑量如在放療技術(shù)中可局部化或可 被個(gè)體全身所吸收。急性劑量通常高于10,000毫雷姆(O.l Gy)，但可低于 10,000毫雷姆。
術(shù)語(yǔ)"急性輻射誘導(dǎo)的皮膚損害"是指由電離輻射的單次大劑量或重 復(fù)的更小劑量引起的皮膚表皮層的損害，所述損害本身可在暴露后至少約 3-5周內(nèi)、通常在大大早于上述時(shí)間顯現(xiàn)。急性輻射誘導(dǎo)的皮膚損害可在電 離輻射暴露后不久出現(xiàn)，如在曬斑的情況中。急性輻射誘導(dǎo)的皮膚損害有 時(shí)是指如早期輻射誘導(dǎo)的皮膚損害，并例如包括紅斑、干燥脫皮(dry desquamation^濕性脫皮(moist desquamation)、毛發(fā)脫落和潰瘍。急性輻射 誘導(dǎo)的皮膚損害會(huì)在皮褶和高摩擦區(qū)域如腹股溝、臀部、乳房皺襞(the folds ofthebreast)、頸等及類(lèi)似區(qū)域特別嚴(yán)重。
術(shù)語(yǔ)"晚期輻射誘導(dǎo)的皮膚損害"是指在該輻射暴露后6個(gè)月或更多 個(gè)月出現(xiàn)的皮膚損害，所述損害例如包括萎縮、纖維化、變薄、毛細(xì)管擴(kuò) 張、改變的色素沉著、潰瘍、壞死和致癌作用。
所謂"電離輻射慢性暴露"或"電離輻射慢性劑量"表示在超過(guò)24小 時(shí)的時(shí)段內(nèi)被個(gè)體吸收的電離輻射的劑量。所述劑量可間斷的或連續(xù)的， 并且可局部化或被所述個(gè)體全身所吸收。慢性劑量通常少于10，000毫雷姆 (0.1 Gy)，但可高于10,000毫雷姆。
所謂"處于遭受電離輻射暴露的危險(xiǎn)"表示個(gè)體在將來(lái)可留意(如通過(guò) 預(yù)定的放療期間)或疏忽地暴露于電離輻射。疏忽的暴露包括意外的或無(wú)計(jì) 劃的環(huán)境或職業(yè)暴露。
所謂"肌醇/IP-6化合物的有效量"表示有效減少或消除個(gè)體正常細(xì)胞中的與輻射相關(guān)的毒性的化合物的量。當(dāng)使用"肌醇/IP-6化合物的有效量"
時(shí)，第二益處還可在某些情況下發(fā)現(xiàn)；在這些情況下，以有效量的肌醇/IP-6 化合物具有抗腫瘤、細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)和細(xì)胞分化作用。就骨髓凈化而言，所 用的"肌醇/IP-6化合物的有效量"表示有效減少或消除從個(gè)體移除的骨髓 中的與輻射相關(guān)的毒性并還對(duì)從所述個(gè)體移除的骨髓中的惡性細(xì)胞產(chǎn)生直 接的細(xì)胞毒性或抗腫瘤效應(yīng)的肌醇/IP-6化合物的量。
本文所用的"前藥"是通過(guò)體內(nèi)給藥而代謝或以其他方式轉(zhuǎn)化成化合 物在生物學(xué)上、藥學(xué)上或治療上活性的形式的化合物。為了生成前藥，對(duì) 藥學(xué)上活性的化合物進(jìn)行修飾以使所述活性化合物通過(guò)代謝過(guò)程再生。該 前藥可設(shè)計(jì)以改變藥物的代謝穩(wěn)定性或轉(zhuǎn)運(yùn)特性從而掩蔽副作用或毒性、 改善藥物的風(fēng)味或改變藥物的其他特性或性質(zhì)。由于藥效學(xué)過(guò)程和體內(nèi)藥 物代謝的知識(shí)，所以一旦藥學(xué)上活性的化合物已知，則本領(lǐng)域技術(shù)人員可 設(shè)計(jì)化合物的前藥(參見(jiàn)，例如Nogrady(1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press,紐約，第388-392頁(yè))。
肌醇/IP-6組合物對(duì)正常細(xì)胞的作用的精確的輻射防護(hù)劑機(jī)理是未知 的。但是，基于試驗(yàn)?zāi)Ｐ筒⑶也幌Ｍ芟抻谌魏卫碚摚@些化合物可影響 正常細(xì)胞中的某些元素，其誘發(fā)可逆的休眠細(xì)胞周期狀態(tài)，在該狀態(tài)中通 過(guò)有絲分裂的轉(zhuǎn)運(yùn)以及這種通道所必需的很多變化下調(diào)、滅活或不存在。 相反地，在異常細(xì)胞、特別是癌性細(xì)胞和受損害細(xì)胞中，這些化合物可影 響某些元素，其誘發(fā)異常或受損害細(xì)胞的凋亡、再活化停滯的細(xì)胞周期或 使異常細(xì)胞周期正常化或者誘發(fā)變異細(xì)胞的分化。根據(jù)其他可能的防護(hù)機(jī) 理，通過(guò)對(duì)肌醇/IP-6組合物的預(yù)暴露，可使輻射誘發(fā)的活性氧分子、DNA 損害和死亡途徑誘導(dǎo)的活化無(wú)害。此外，肌醇/IP-6組合物提供抵抗"擬放 射性"藥物的化學(xué)防護(hù)作用。擬放射性藥物是類(lèi)似于電離輻射地誘導(dǎo)DNA 損害和/或細(xì)胞中的氧自由基生成的化合物。
盡管有絲分裂期抑制劑和電離輻射可引起細(xì)胞周期異常、特別是細(xì)胞 周期停滯，但是有絲分裂期細(xì)胞周期抑制劑以不同于電離輻射的方式影響 細(xì)胞。例如，該有絲分裂期細(xì)胞周期抑制劑不會(huì)引起由DNA損害產(chǎn)生的細(xì) 胞死亡，且不會(huì)使細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行過(guò)去的G1期。電離輻射損害DNA，并且 通常引起G2期的細(xì)胞周期停滯。同時(shí)，與有絲分裂期細(xì)胞周期抑制劑接觸的細(xì)胞未顯示長(zhǎng)期的損害，而是僅顯示急性效應(yīng)。相比之下，電離輻射的一些影響直到暴露后至少兩周才是明顯的，其中骨髓損害在30天后出現(xiàn)，
而神經(jīng)損害直到暴露后六個(gè)月才顯現(xiàn)。有效量的本發(fā)明的肌醇/IP-6化合物
解除這些不利效應(yīng)。
當(dāng)經(jīng)受用于治療增殖病癥的治療照射時(shí)，個(gè)體可暴露于電離輻射。這樣的病癥包括癌性和非癌性增殖病癥。例如，我們認(rèn)為本化合物可在范圍寬泛的腫瘤類(lèi)型的治療照射期間有效保護(hù)正常細(xì)胞，所述腫瘤類(lèi)型包括但不限于下列乳房腫瘤、前列腺腫瘤、卵巢腫瘤、肺腫瘤、結(jié)腸直腸腫瘤、腦腫瘤(即神經(jīng)膠質(zhì)瘤)和腎腫瘤。所述化合物還可有效對(duì)抗白血病細(xì)胞和有效保護(hù)非癌細(xì)胞以免用于治療白血病的輻射的不利影響。
還認(rèn)為所述該化合物用于在非癌增殖性病癥中的異常組織的治療照射期間保護(hù)正常細(xì)胞，所述病癥包括但不限于下列新生兒血管瘤病、繼發(fā)性進(jìn)行性多發(fā)性硬化、慢性進(jìn)行性骨髓退行性疾病、神經(jīng)纖維瘤病、神經(jīng)
節(jié)瘤病、瘢痕疙瘩形成、佩吉特骨病、乳房纖維性囊腫病、Peronies和Dupuytren纖維化、再狹窄和硬化。
根據(jù)本發(fā)明，治療電離輻射可以任何時(shí)間表(schedule)并以任何符合規(guī)定的治療過(guò)程的劑量向個(gè)體給藥，只要肌醇/IP-6輻射防護(hù)劑化合物在輻射暴露之前、期間和/或之后給藥。治療過(guò)程隨個(gè)體的不同而各異，并且本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可在給定的臨床情況下容易確定治療輻射的合適劑量和時(shí)間表。
優(yōu)選地，所述肌醇/IP-6化合物應(yīng)在治療輻射前很早給藥以使該化合物能以足以在輻射暴露時(shí)對(duì)正常細(xì)胞產(chǎn)生放射防護(hù)作用的濃度到達(dá)個(gè)體的正常細(xì)胞。所述肌醇/IP-6化合物可在給藥輻射前多于約24小時(shí)、優(yōu)選不超過(guò)約18小時(shí)給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述肌醇/IP-6組合物在給藥治療輻射前至少約6-12小時(shí)給藥。在另一實(shí)施方案中，所述肌醇/IP-6組合物在輻射暴露前約2-3小時(shí)給藥一次。最優(yōu)選地，所述肌醇/IP-6化合物在輻射暴露前約18小時(shí)給藥一次，而在輻射暴露前約2-3小時(shí)再次給藥。 一種或多種肌醇/IP-6組合物可同時(shí)給藥或者不同肌醇/IP-6組合物可在所述治療期間以不同時(shí)間給藥。
當(dāng)治療輻射以連續(xù)方式給藥時(shí)，優(yōu)選在輻射治療的時(shí)間表中插入一種或多種肌醇/IP-6組合物的給藥。如上，不同肌醇/IP-6組合物可在治療期間同時(shí)或以不同時(shí)間給藥。優(yōu)選地，肌醇/IP-6的最終劑量的給藥和每次治療輻射暴露間隔約6至18小時(shí)的時(shí)段。更優(yōu)選地，所述肌醇/IP-6的最終劑量的給藥和所述治療輻射間隔約2-3小時(shí)。這種策略使輻射誘導(dǎo)的副作用顯著減少，且沒(méi)有不利地影響所述治療輻射的抗癌活性。
例如，每天給予0.1Gy的劑量的治療輻射，連續(xù)五天，休息兩天，總周期為6-8周。 一種或多種肌醇/IP-6組合物可在每次輻射前2-3小時(shí)向個(gè)體給藥，更優(yōu)選在每次輻射前約12-24小時(shí)給藥一次，而在每次輻射前2-3小時(shí)再次給藥。但是應(yīng)指出，由于肌醇/IP-6組合物所提供的正常細(xì)胞的防護(hù)，根據(jù)本發(fā)明包括更積極的治療時(shí)間表即更高劑量的遞送。因此，肌醇/IP-6的輻射防護(hù)作用增加治療輻射的治療指數(shù)，并且可允許醫(yī)師安全增加高于目前推薦水平的治療輻射的劑量，而不冒向周?chē)＜?xì)胞和組織的損害增加的風(fēng)險(xiǎn)。
本發(fā)明的肌醇/IP-6組合物還用于保護(hù)正常骨髓細(xì)胞以避免計(jì)劃用來(lái)破壞血液贅生性細(xì)胞或已轉(zhuǎn)移至骨髓的腫瘤細(xì)胞的放射治療。這樣的細(xì)胞例如包括髓性白血病細(xì)胞。在骨髓及處在機(jī)體別處的這些細(xì)胞的形態(tài)與各種疾病狀態(tài)相關(guān)，所述疾病狀態(tài)如急性骨髓性白血病(AML)的French-American-British (FAB)亞型、慢性髓細(xì)胞樣白血病(CML)和急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)。特別是，CML的特征在于在血液、骨髓、脾、肝和其他組織中的未成熟粒細(xì)胞(例如嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞)的異常增殖以及粒細(xì)胞前體在這些組織中的蓄積。有這種癥狀出現(xiàn)的個(gè)體通常每微升血液含有超過(guò)20,000個(gè)白細(xì)胞，且計(jì)數(shù)可超過(guò)400,000個(gè)。事實(shí)上，所有CML患者發(fā)展"急性發(fā)作(blast crisis)",其為此疾病的終末期，在所述終末期時(shí)未成熟母細(xì)胞快速增殖從而導(dǎo)致死亡。
其他個(gè)體遭受轉(zhuǎn)移性腫瘤，并且需要全身照射(TBI)的治療。因?yàn)門(mén)BI還殺死個(gè)體的造血細(xì)胞，所以部分的個(gè)體的骨髓在照射前移除并用于隨后移植(reimplantatkm)。但是，轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞可能存在于骨髓中，并且再植術(shù)通常導(dǎo)致癌癥在很短時(shí)間內(nèi)復(fù)發(fā)。
患有骨髓的腫瘤性疾病或轉(zhuǎn)移性腫瘤的個(gè)體可通過(guò)下列來(lái)治療移除部分骨髓(也稱(chēng)為"收集")、凈化收集骨髓的惡性干細(xì)胞并且再植入凈化的骨髓。優(yōu)選地，所述個(gè)體用輻射或一些其他的抗癌療法來(lái)同時(shí)治療。
因此，本發(fā)明提供減少骨髓中惡性細(xì)胞的數(shù)目的方法所述方法包括 下列步驟移除部分個(gè)體的骨髓、給藥有效量的至少一種肌醇/IP-6化合物， 并用足夠劑量的電離輻射照射處理過(guò)的骨髓以使骨髓中的贅生性細(xì)胞或腫 瘤細(xì)胞被殺死。本文所用的"惡性細(xì)胞"表示任何無(wú)法控制的增殖細(xì)胞如 腫瘤細(xì)胞或贅生性細(xì)胞。所述肌醇/IP-6化合物防護(hù)存在于骨髓的正常造血 細(xì)胞避免電離輻射的有害影響。所述肌醇/IP-6組合物也展現(xiàn)直接殺死效應(yīng)、
抗腫瘤效應(yīng)和/或?qū)盒约?xì)胞的分化效應(yīng)。在再植術(shù)前顯著減少或消除骨髓 中惡性細(xì)胞的數(shù)目，因此使復(fù)發(fā)的發(fā)病率降至最低。
優(yōu)選地，肌醇/IP-6的每次劑量以約0.05至約100毫摩爾的濃度給藥。
劑量可取決于給藥途徑，其中局部用制劑或腸內(nèi)制劑通常具有比腸胃外制
劑更高的濃度。局部用制劑可包含約10至約100毫摩爾、更優(yōu)選約10至 約50毫摩爾、甚至更優(yōu)選約20至約40毫摩爾的濃度的肌醇/IP-6。特別優(yōu) 選的濃度為20、 25、 30、 35、 40、 45和50毫摩爾。局部用制劑還可包含 按重量計(jì)約0.5至約5%、按重量計(jì)約1至約4%或更優(yōu)選按重量計(jì)約1.5 至約3。/。的量的肌醇/IP-6。在包含肌醇和IP-6的局部用組合物中，肌醇與 IP-6的比率優(yōu)選為約1:1至約1:50、更優(yōu)選為約1:10至約1:40、甚至更優(yōu) 選為約1:20至約1:30。特別優(yōu)選的量為按重量計(jì)約1:20、 1:25、 1:30、 1:35 和1:40%。還可以使用更高和更低的量。特別地，口服制劑(片齊U、膠囊劑、 散劑等)還可包含按重量計(jì)50、 60、 70、 80、 90、 95、 99和100。/。的肌醇/IP-6。 在這種情況下，以單次劑量給藥的肌醇/IP-6的總量為約1至約10克，優(yōu)選 為約2至約5克，甚至更優(yōu)選為約3至約4克。應(yīng)注意，單次劑量可包含 任何數(shù)目的單獨(dú)的膠囊劑或片劑，只要肌醇/IP-6的總量在指定的范圍內(nèi)。 優(yōu)選地，片劑和膠囊劑各自包含約l-2克的肌醇/IP-6。劑量還可按約IO、 15、 20、 25、 30、 35、 40、 45和50 mg/kg個(gè)體體重使用，且范圍為約10 至約50、約20至約40、更優(yōu)選約25至約35mg/kg體重。
對(duì)于腸胃外給藥和體內(nèi)用法，肌醇/IP-6的每次劑量以約0.5至約50毫 摩爾的濃度給藥。腸胃外和體內(nèi)制劑可包含約1至約IO毫摩爾、更優(yōu)選約 2至約8毫摩爾、甚至更優(yōu)選約3至約5毫摩爾的濃度的肌醇/IP-6。特別優(yōu) 選的濃度為0.5、 1、 1.5、 2、 2.5、 3、 3.5、 4和5毫摩爾。腸胃外制劑也可包含按重量計(jì)約0.05至約10%、按重量計(jì)約0.1至約10%或更優(yōu)選按重量 計(jì)約0.5至約5。/。的量的肌醇/IP-6。特別優(yōu)選的濃度為按重量計(jì)0.5、 1、 1.5、 2、 2.5、 3、 3.5、 4禾P5。/。。在包含肌醇和IP-6的腸胃外組合物中，肌醇與 IP-6的比率優(yōu)選為約5:1至約1:30，更優(yōu)選為約2:1至約1:10，甚至更優(yōu)選 為約l:l至約1:5。特別優(yōu)選的量為按重量計(jì)約2:1、 1:1、 1:2、 1:3禾Q 1:4%。 還可以使用更高和更低的量。特別地，可以使用將體內(nèi)(循環(huán)或機(jī)體)濃度升 高至約50至約300微摩爾、更優(yōu)選至約100至約200微摩爾所需的量。在 所有的實(shí)施方案中，可以調(diào)節(jié)量以補(bǔ)償實(shí)際遞送至治療的細(xì)胞或組織的活 性成分的量的差異。
本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，肌醇/IP-6組合物或其藥學(xué)可接受的鹽的個(gè) 體劑量的最佳數(shù)量和間隔將通過(guò)待治療疾患的性質(zhì)和程度、給藥形式、途 徑和部位以及待治療的具體患者來(lái)確定，并且這種最佳可通過(guò)常規(guī)技術(shù)來(lái) 確定。本領(lǐng)域技術(shù)人員也應(yīng)理解治療的最佳過(guò)程(即在指定數(shù)目的天數(shù)內(nèi) 每天給予肌醇/IP-6組合物或其藥學(xué)可接受的鹽的劑量的數(shù)目)可由本領(lǐng)域 技術(shù)人員使用治療測(cè)定試驗(yàn)的常規(guī)過(guò)程來(lái)確定。
肌醇/IP-6組合物可直接加至收集的骨髓或體外其他細(xì)胞，但是優(yōu)選在 添加之前溶解于水。還可使用如下文更為詳細(xì)描述的肌醇/IP-6的藥物制劑。
優(yōu)選地，在輻射暴露前約20小時(shí)、優(yōu)選在輻射暴露前不超過(guò)約24小 時(shí)、更優(yōu)選在暴露前不超過(guò)18小時(shí)將肌醇/IP-6組合物加至收集的骨髓或其 他細(xì)胞或組織。在一個(gè)實(shí)施方案中，在輻射暴露前至少約6小時(shí)將肌醇/IP-6 組合物給藥至收集的骨髓或其他細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，所述肌醇/IP-6 組合物在輻射暴露前至少約2-3小時(shí)給藥。在又一實(shí)施方案中，所述肌醇 /IP-6化合物在輻射暴露前至少約一個(gè)半小時(shí)(onehalfhour)給藥。 一種或 多種肌醇/IP-6組合物可同時(shí)給藥，或者不同的肌醇/IP-6組合物可在不同時(shí) 間給藥。還可使用其他劑量方案。
如果個(gè)體在經(jīng)凈化的骨髓或其他細(xì)胞或組織的再植術(shù)前用電離輻射治 療，那么如上所述，所述個(gè)體可在接受所述電離輻射劑量之前、期間或之 后用一種或多種肌醇/IP-6組合物治療。
如在背景部分中所述，個(gè)體還可暴露于職業(yè)或環(huán)境源的電離輻射。對(duì) 于本發(fā)明而言，電離輻射的源不如暴露類(lèi)型(即急性或慢性)和個(gè)體所吸收的劑量水平重要。應(yīng)理解，下列討論包括職業(yè)和環(huán)境源，以及人源性源和天 然存在的源的電離輻射暴露。
人們認(rèn)為，遭受不立即致命的電離輻射急性或慢性暴露的影響的個(gè)體 具有可醫(yī)治的輻射損害。這樣的可醫(yī)治的輻射損害可通過(guò)本發(fā)明的化合物 和方法來(lái)減少或消除。
可引起可醫(yī)治的輻射損害的電離輻射急性劑量包含例如在24小時(shí)或更
少時(shí)間內(nèi)約10,000毫雷姆(O.l Gy)至約l,OOO，OOO亳雷姆(IO Gy)、優(yōu)選在24 小時(shí)或更少時(shí)間內(nèi)約25,000毫雷姆(0.25 Gy)至約200,000(2 Gy)、更優(yōu)選在 24小時(shí)或更少時(shí)間內(nèi)約100,000毫雷姆(l Gy)至約150,000毫雷姆(1.5 Gy) 的局部或全身劑量。
可引起可醫(yī)治的輻射損害的電離輻射慢性劑量包含約100毫雷姆 (0.001 Gy)至約10,000毫雷姆(O.l Gy)的全身劑量、優(yōu)選在超過(guò)24小時(shí)的時(shí) 段內(nèi)的約1,000毫雷姆(O.Ol Gy)至約5,000亳雷姆(0.05 Gy)的劑量或者在超 過(guò)24小時(shí)的時(shí)段內(nèi)的15,000毫雷姆(0.15 Gy)至50,000毫雷姆(0.5 Gy)的局 部劑量。
因此，本發(fā)明提供用于治療已遭受電離輻射的急性或慢性暴露的可醫(yī) 治的輻射損害的個(gè)體的方法，所述方法包括通過(guò)給藥有效量的至少一種肌 醇/IP-6化合物來(lái)減少或消除輻射暴露對(duì)正常細(xì)胞和組織的細(xì)胞毒性效應(yīng)。 所述化合物優(yōu)選以在輻射暴露后盡可能短的時(shí)間內(nèi)、例如在暴露后0-6小 時(shí)給藥，更優(yōu)選暴露后每2-6小時(shí)、每6-12小時(shí)或每天進(jìn)行另外的治療， 持續(xù)l、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 14、 21或28天的時(shí)間。
可醫(yī)治的輻射損害可在個(gè)體中采用細(xì)胞毒性和遺傳毒性(即不利的遺 傳)效應(yīng)的形式。在另一實(shí)施方案中，因此提供減少或消除輻射暴露對(duì)正常 細(xì)胞和組織的細(xì)胞毒性和遺傳毒性效應(yīng)的方法，所述方法包括在急性或慢 性輻射暴露之前、期間或之后給藥有效量的至少一種肌醇/IP-6化合物。所 述肌醇/IP-6化合物例如可在輻射暴露前約24小時(shí)、優(yōu)選在輻射暴露前不超 過(guò)約18小時(shí)、甚至更優(yōu)選在輻射暴露前不超過(guò)6-12小時(shí)給藥。所述肌醇 /IP-6化合物可在輻射暴露期間或在輻射暴露后立即給藥，且優(yōu)選暴露后每 2-6小時(shí)、每6-12小時(shí)或每天進(jìn)一步給藥，持續(xù)l、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 14、 21或28天的時(shí)間。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述肌醇/IP-6在輻射暴露前至少約6小時(shí)或至少2-3小時(shí)給藥。更優(yōu)選地，所述肌醇/IP-6在輻射暴露前約 18小時(shí)給藥，且在輻射暴露前約2-3小時(shí)再次給藥；甚至更優(yōu)選在暴露后 立即和每2-3小時(shí)再次給藥。 一種或多種肌醇/IP-6組合物可同時(shí)給藥，或 不同肌醇/IP-6組合物可在不同時(shí)間給藥。
當(dāng)預(yù)期多次急性暴露時(shí)，所述肌醇/IP-6組合物可多次給藥。例如，如 果消防人員或援救人員必須多次進(jìn)入受污染的地區(qū)，那么所述肌醇/IP-6組 合物可在每次暴露前給藥。優(yōu)選地，肌醇/IP-6化合物的給藥與輻射暴露間 隔約24小時(shí)的時(shí)段。更優(yōu)選地，所述肌醇/IP-6化合物的給藥和所述輻射暴 露間隔約6至18小時(shí)，甚至更優(yōu)選所述肌醇/IP-6化合物的給藥和所述輻射 暴露間隔約2-3小時(shí)。還包括核電站的工人可在每次工作班開(kāi)始前給藥有 效量的肌醇/IP-6組合物以減少或消除電離輻射暴露的作用。
如果個(gè)體預(yù)期電離輻射慢性暴露，那么所述肌醇/IP-6組合物可在整個(gè) 預(yù)期暴露的期間周期性給藥。例如，在被放射性塵埃污染的前沿地區(qū)中工 作的核電站工人和士兵可每24小時(shí)、優(yōu)選每6-18小時(shí)、甚至更優(yōu)選每3-6 小時(shí)給予肌醇/IP-6組合物以便減輕輻射損害的作用。同樣地，肌醇/IP-6組 合物可向在被放射性塵埃污染的地區(qū)中生活的平民周期性給藥直到所述地 區(qū)排除污染或所述平民移至更安全的環(huán)境。
如果個(gè)體預(yù)期太陽(yáng)的延長(zhǎng)暴露、因而延長(zhǎng)它的紫外線(xiàn)輻射，那么本發(fā) 明的肌醇/IP-6化合物可在預(yù)期暴露前給藥以預(yù)防急性不利的影響(即曬 斑)。優(yōu)選地，所述肌醇/IP-6組合物在暴露前至少約2-12小時(shí)給藥。甚至 更優(yōu)選地，給藥在暴露前至少約2-6小時(shí)進(jìn)行，且還更優(yōu)選在暴露前約2-3 小時(shí)進(jìn)行。給藥還可優(yōu)選在暴露前立即進(jìn)行。優(yōu)選以洗劑、乳膏劑或凝膠 劑的形式局部給藥。甚至更優(yōu)選地，局部用形式包括防曬用品(sun screen) 或防曬劑，且可還包含增濕劑、著色劑、芳香劑、抗微生物劑及本領(lǐng)域技 術(shù)人員發(fā)現(xiàn)想要的類(lèi)似物。除局部給藥之外或甚至代替局部給藥，個(gè)體也 可給藥本發(fā)明的口服組合物。優(yōu)選地，肌醇/IP-6組合物可溶解于水中，且 在日光照射前2-12、2-6小時(shí)或最優(yōu)選2-3小時(shí)使用。優(yōu)選地，所述肌醇/IP-6 組合物至少約每12小時(shí)、更優(yōu)選約每8小時(shí)、甚至更優(yōu)選至少約每2-6小 時(shí)再次給藥。
本文所用的"給藥"表示使肌醇/IP-6化合物可用于所述個(gè)體以使實(shí)現(xiàn)輻射防護(hù)或醫(yī)治(remediation)的藥理學(xué)作用的動(dòng)作。在某種水平的輻射暴露 時(shí)這種藥理學(xué)作用可顯示成期望的生理學(xué)或臨床癥狀的缺失。本領(lǐng)域技術(shù) 人員可通過(guò)眾所周知的實(shí)驗(yàn)室和臨床方法容易確定輻射誘導(dǎo)的效應(yīng)的存在 或缺失。因此，所述肌醇/IP-6化合物可通過(guò)任何足以在患者中帶來(lái)想要的 放射防護(hù)作用的途徑給藥。給藥途徑例如包括局部用或腸內(nèi)(例如口服、直 腸、陰道內(nèi)、鼻內(nèi)等)和腸胃外給藥。腸胃外給藥例如包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、 動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、囊內(nèi)(intravesicular)(例如進(jìn)入膀胱)、皮內(nèi)或皮下給藥。 藥物以控制制劑滴注至患者的機(jī)體也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)，其中藥物的 全身或局部釋放在隨后發(fā)生。例如，肌醇/IP-6化合物的貯庫(kù)(depot)可在給 藥輻射前超過(guò)24小時(shí)向所述患者給藥。優(yōu)選地，至少一部分肌醇/IP-6保留 在Ue庫(kù)中，且直至在輻射暴露前約6-18時(shí)窗(hourwindow)、甚至更優(yōu)選直 至在輻射暴露前約2-3小時(shí)才釋放。
所述肌醇/IP-6化合物可按藥物組合物的形式給藥，所述藥物組合物包 含與一種或多種藥學(xué)上或藥理學(xué)可接受的載體組合的一種或多種肌醇/IP-6 化合物。如上所述，這種制劑中的肌醇/IP-6化合物可占0.01至約100重量 百分比。所謂"藥學(xué)上"或"藥理學(xué)可接受的載體"表示可與制劑的其他 成分相容且對(duì)所述個(gè)體無(wú)害的任何載體、稀釋劑或賦形劑。與肌醇/IP-6組 合物配制合適的藥物組合物是在本領(lǐng)域的技術(shù)內(nèi)。
例如，根據(jù)藥物制劑領(lǐng)域中的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)踐，所述肌醇/IP-6組合物可配制 成藥物組合物。參見(jiàn)Alphonso Gennaro編，Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版，(1990) Mack Publishing Co., Easton, Pa。例如，合適的藥 物組合物包括片劑、散劑、膠囊劑、溶液(尤其腸胃外溶液)、錠劑、栓劑、 乳膏劑、洗劑、凝膠劑或懸浮液。
該活性成分可一次給藥或可分成多個(gè)更小的劑量同時(shí)或以時(shí)間間隔給 藥。應(yīng)了解，治療的精確劑量和持續(xù)時(shí)間是待治療組織的函數(shù)，并可從經(jīng) 驗(yàn)上使用已知的試驗(yàn)方案或通過(guò)體內(nèi)或體外試驗(yàn)數(shù)據(jù)的外推法來(lái)確定。應(yīng) 注意，濃度和劑量值也可隨經(jīng)治療的個(gè)體的年齡而變化。應(yīng)進(jìn)一步了解， 對(duì)于任何具體個(gè)體，根據(jù)個(gè)體需要和給藥或監(jiān)督組合物給藥的人的職業(yè)判 斷，特定劑量方案應(yīng)隨時(shí)間調(diào)整，并且本文列出的濃度范圍僅為示例性的， 而非意在限制要求保護(hù)的組合物的范圍或?qū)嵺`。該化合物可按微?；蚱渌线m的形式懸浮，或者可衍生化以生成更 可溶的活性產(chǎn)品或以生成前藥、或當(dāng)所述化合物為前藥時(shí)以使用活性形式。 所得的混合物的形式取決于很多因素，所述因素包括預(yù)期的給藥方式和所 選載體或載體中的化合物的溶解度。有效濃度足以改善電離輻射暴露的不 利的健康影響，并且可從經(jīng)驗(yàn)上確定。就腸胃外給藥而言，所述肌醇/IP-6化合物可與合適載體或稀釋劑如水、 油、鹽水溶液、含水右旋糖(葡萄糖)和相關(guān)的糖溶液、環(huán)糊精或二醇如丙二 醇或聚乙二醇混合。腸胃外給藥的溶液優(yōu)選包含肌醇/IP-6化合物的藥學(xué)上 或藥理學(xué)可接受的水溶性鹽。還可加入穩(wěn)定劑、抗氧化劑和防腐劑。合適的抗氧化劑包括亞硫酸、抗壞血酸、檸檬酸及它們的鹽和EDTA鈉。合適 的防腐劑包括苯扎氯銨、對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯，以及三 氯叔丁醇。就口服給藥而言，所述肌醇/IP-6可與一種或多種用于制備片劑、膠囊 劑或其他合適的口服劑型的固體惰性成分組合。例如，活性劑可與羧甲基 纖維素鈣、硬脂酸鎂、甘露醇和淀粉組合，然后通過(guò)常規(guī)壓片方法形成片 劑。當(dāng)然，為獲得輻射防護(hù)益處的肌醇/IP-6組合物給藥的特定劑量和時(shí)間 表會(huì)通過(guò)個(gè)體患者的具體情況來(lái)確定，所述情況包括患者的體型、重量、 年齡和性別、待治療疾病的特性和階段、所述疾病的侵襲性和給藥途徑、 及所述輻射的特殊毒性。例如，可以使用約0.01至約150 mg/kg/天、更優(yōu) 選約0.05至約50 mg/kg/天的日劑量。特別優(yōu)選約1.0至約40.0 mg/kg/天的 劑量，例如約30 mg/kg/天的劑量。所述劑量可經(jīng)多次給藥給予，例如15 mg/kg的兩次給藥。還包括更高或更低的劑量。該肌醇/IP-6組合物可采用藥學(xué)可接受的鹽的形式。術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)可接受 的鹽"包括通常用于形成堿金屬鹽和用于形成游離酸或游離堿的加成鹽的 鹽。所述鹽的性質(zhì)不是關(guān)鍵性的，只要它是藥學(xué)可接受的。合適的藥學(xué)可 接受的酸加成鹽可由無(wú)機(jī)酸或由有機(jī)酸制備。這樣的無(wú)機(jī)酸的實(shí)例是鹽酸、 氫溴酸、氫碘酸、硝酸、碳酸、硫酸和磷酸。合適的有機(jī)酸可選自脂族酸、 環(huán)脂族酸、芳族酸、芳脂族酸、雜環(huán)酸、羧酸和硫酸類(lèi)有機(jī)酸，它們的實(shí) 例有甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羥乙酸、葡糖酸、乳酸、蘋(píng)果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、葡糖醛酸、馬來(lái)酸、富馬酸、丙酮酸、門(mén)冬氨酸、 谷氨酸、苯甲酸、鄰氨基苯甲酸、甲磺酸、水楊酸、4-羥基苯甲酸、苯乙 酸、扁桃酸、雙羥萘酸(撲酸)、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、泛酸、2-羥基乙磺酸、甲苯磺酸、對(duì)氨基苯磺酸、環(huán)己基氨基磺酸、硬脂酸、海藻酸(algenic acid)、 P-羥丁酸、粘酸和半乳糖醛酸。合適的藥學(xué)可接受的堿加成鹽包括 由鈣、鋰、鎂、鉀、鈉和鋅制備的金屬鹽或由N,N，-二芐基乙二胺、氯普魯 卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普魯卡因制備的 有機(jī)鹽。所有這些鹽可通過(guò)常規(guī)方式例如經(jīng)由將所述合適酸或堿與肌醇 /IP-6化合物反應(yīng)由相應(yīng)的肌醇/IP-6化合物來(lái)制備。實(shí)施例1通過(guò)在輻射標(biāo)準(zhǔn)程序后給藥肌醇/IP-6化合物提高細(xì)胞成活力將人類(lèi)角化細(xì)胞(HaCaT)在含有7mg/L肌醇(38.8 pM)、補(bǔ)充有10%熱 滅活胎牛血清、1% L-谷酰胺和1%抗生素(青霉素、鏈霉素)的Dulbecco改 良的Eagle培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。將細(xì)胞保持在37°〇和5% C02。 Na-IP-6使用作 為稀釋劑的細(xì)胞培養(yǎng)基從100 mM儲(chǔ)備溶液稀釋至所需濃度(0.05-2.0 mM)。 使用15、 30、 60和120 mJ/cn^的UVB強(qiáng)度，這通過(guò)改變對(duì)UVB光(80% 的光輸出在2卯-320 nm UVB范圍)的細(xì)胞暴露時(shí)間而獲得。使HaCaT細(xì)胞生長(zhǎng)至約80-卯。/。融合(confluency)。將100 口104細(xì) 胞/mL HaCaT細(xì)胞接種于四個(gè)96孔板的每個(gè)孔中。用IP-6(0-2.0 mM)處理 細(xì)胞，并且在第0、 1、 2和3天將100 ,L 1 mg/mL溶解于DMEM培養(yǎng)基 中的含水MTT加至每孔，并將板放至培養(yǎng)箱(37'C和5% C02) 4小時(shí)。然 后加入150//LDMSO以溶解甲臘(Formazan)產(chǎn)物。使用EL Ultra Micro-plate Reader于540 nm讀取吸光度。將結(jié)果記錄為每組的平均吸光度。對(duì)于平板 效率測(cè)定(Plating E伍ciency Assay),將HaCaT細(xì)胞以500細(xì)胞/孔涂板于12 孔組織培養(yǎng)皿。將IP-6以0-2.0 mM的濃度加至各自孔，重復(fù)兩份。然后將 細(xì)胞在37'C和5% C02溫育7天。在這個(gè)溫育期后，用PBS 1X(pH 7.4)洗滌對(duì)照和經(jīng)處理的集落(colony)， 用4.0%甲醛固定，并用0.5%含水結(jié)晶紫染色。使用倒置顯微鏡對(duì)集落的數(shù) 目計(jì)數(shù)。將結(jié)果記錄為每組的集落平均數(shù)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析每個(gè)試驗(yàn)進(jìn)行至少兩次，并通過(guò)使用Excel軟件計(jì)算，表示成平均士標(biāo)準(zhǔn)偏差。學(xué)生t檢驗(yàn) (Student'st-test)用于比較對(duì)照組和試驗(yàn)組，并且p值〈0.05時(shí)，認(rèn)為有顯 著性差異。上述的程序用于實(shí)施例1-6。
為確定是否IP-6保護(hù)HaCaT細(xì)胞避免UVB誘導(dǎo)的損傷，如上所述進(jìn) 行MTT測(cè)定。將50 不含酚紅的DMEM培養(yǎng)基中的2xl(f細(xì)胞/mL接 種至五個(gè)96孔板的每個(gè)孔，并溫育(37"C和5。/。 C02)24小時(shí)。然后將細(xì)胞 暴露于0、 15、 30、 60或120 mJ/cm2 UVB強(qiáng)度(UVB寬帶燈，4列 (FS40T12/UVB 4 ft))。繼而立即將經(jīng)UVB暴露的細(xì)胞用50 (iL細(xì)胞培養(yǎng)基 中的IP-6(0-2.0mM)處理。接著將細(xì)胞在37"和5%0)2放至培養(yǎng)箱，并且 如上進(jìn)行MTT的添加。將結(jié)果記錄成每組的平均吸光度。
與非暴露對(duì)照組比較，在暴露后24小時(shí)UVB輻射使成活力劑量依賴(lài) 性和HaCaT細(xì)胞的增殖下降，p < 0.05。通過(guò)在UVB暴露后24小時(shí)細(xì)胞 成活力隨IP-6濃度的增加而增加，顯示顯著性，p〈0.001(圖l)。盡管正常 趨勢(shì)是細(xì)胞成活力隨IP-6濃度的增加而下降，但是結(jié)果顯示反轉(zhuǎn)的趨勢(shì) 當(dāng)UVB強(qiáng)度增加時(shí)，細(xì)胞成活力增加。 實(shí)施例2
IP-6和UVB輻射對(duì)附著細(xì)胞的作用
將5W04 HaCaT細(xì)胞接種至四個(gè)6孔組織培養(yǎng)板的每個(gè)孔，并在37°C 和5% C02溫育24小時(shí)。在UVB照射前1小時(shí)，兩個(gè)板用IP-6處理(O和 0.1 mM)， 一個(gè)用于IP-6預(yù)處理而另一個(gè)用于IP-6預(yù)處理和后處理。然后 將所有四個(gè)板用PBS 1X洗滌兩次，并將少量PBS 1X加至孔中，所述孔以 30 mJ/cm2照射。在UVB暴露后，將PBS從孔中去除，并將DMEM培養(yǎng) 基加至每個(gè)孔。然后將IP-6(0.05和0.1 mM)加至非UVB暴露、IP-6后處理 以及預(yù)處理和后處理標(biāo)記的板。然后將細(xì)胞溫育(37。C和5%C02)18小時(shí)。 在溫育后，將細(xì)胞用PBS 1X(pH 7.4)洗滌4次，然后用4.0%甲醛固定15 分鐘，并用0.5%含水結(jié)晶紫染色至少5分鐘。將過(guò)量的結(jié)晶紫從孔中洗滌， 并將板放置干燥。然后將每個(gè)孔中的干燥的結(jié)晶紫殘?jiān)芙庥?00 30% 乙酸。使用EL Ultra Micro-plate Reader將96孔板于595 nm讀取吸光度三
此外，如文所完成，將5xl04 HaCaT細(xì)胞涂板至10個(gè)6孔板的每個(gè)孔。在UVB照射前，將細(xì)胞用PBS IX洗滌兩次，并將少量PBS IX加至孔中。 然后將細(xì)胞暴露于無(wú)UVB或者15、 30、 60或120mJ/cn^強(qiáng)度。在暴露后， 將細(xì)胞培養(yǎng)基加至孔中，并用IP-6(0-2.0 mM)處理細(xì)胞。然后將細(xì)胞在37°C 和5。/。C02溫育。在UVB暴露后18小時(shí)，如上所述，將細(xì)胞用4%甲醛固 定，用0.5%含水結(jié)晶紫染色，并用30%乙酸溶解。于595 nm讀取吸光度
將HaCaT細(xì)胞暴露于不同UVB強(qiáng)度則顯示與非暴露對(duì)照組比較，在 UVB暴露后18小時(shí)細(xì)胞附著隨UVB強(qiáng)度增加而顯著地劑量依賴(lài)性下降， p< 0.001。為了確定IP-6和UVB兩者對(duì)細(xì)胞附著的作用，使用不同濃度的 IP-6和不同UVB強(qiáng)度。觀察到與以30 mJ/cm^照射但未用IP-6處理的細(xì)胞 比較，在30 mJ/cm2的UVB強(qiáng)度下HaCaT細(xì)胞附著隨IP-6濃度增加而顯 著增加(在p〈0.01，顯著的)。與它們各自對(duì)照組即暴露于60或120mJ/cm2 UVB和沒(méi)有IP-6的細(xì)胞比較，60和120 mJ/cm2 UVB強(qiáng)度都顯示細(xì)胞附著 下降。暴露于15mJ/cm2UVB的組顯示與無(wú)IP-6處理的組比較，對(duì)于較 低的IP-6濃度即1.0 mM細(xì)胞附著增加，對(duì)于較高的IP-6濃度即2.0 mM細(xì) 胞附著下降。暴露于15 mJ/cm2 UVB的細(xì)胞所顯示的趨勢(shì)與暴露于不同IP-6 濃度但非UVB暴露的組相當(dāng)(圖2)。 實(shí)施例3
IP-6和UVB輻射對(duì)HaCaT細(xì)胞的凋亡的作用
將HaCaT細(xì)胞涂板至60 mm組織培養(yǎng)皿24小時(shí)。然后將細(xì)胞不暴露 或暴露至30 mJ/cm2 UVB輻射并立即用0、 0.5 mM或1.0 mM IP-6處理。 在UVB暴露后6和18小時(shí)收集細(xì)胞。將5 ^LRnase (不含DNase)加至106 細(xì)胞/mL。將細(xì)胞懸浮液在37t:溫育30分鐘。然后將懸浮液在冰上冷凍 (2-8°C)。將100pLPI加至細(xì)胞懸浮液(細(xì)胞DNA流式細(xì)胞術(shù)分析試劑盒， Roche Diagnostics, Indianapolis, IN)。 DNA定量使用FACS通過(guò)流式細(xì)胞術(shù) 在同一天進(jìn)行。
與非UVB暴露對(duì)照組比較，在30mJ/cr^UVB輻射后6小時(shí)，Gl期 顯著增加而S期顯著減少，p< 0.001。但是，G2M期在暴露與非暴露組之 間沒(méi)有顯著差異。與非暴露組比較，在UVB暴露后18小時(shí)，Gl期顯著增 加，而S期顯著減少；甚至18小時(shí)后，UVB輻射對(duì)細(xì)胞周期的G2M期沒(méi)有顯著影響。6和18小時(shí)暴露與IP-6對(duì)細(xì)胞周期的不同期的作用之間沒(méi)有時(shí)間依賴(lài)性差異。
0.5 mM和1.0 mM IP-6處理在UVB暴露后都顯示與UVB輻射暴露6小時(shí)類(lèi)似的結(jié)果。在UVB暴露后18小時(shí)隨后用1.0 mM IP-6立即處理的G2M期與用0.5 mMIP-6處理后18小時(shí)所觀察到的結(jié)果相當(dāng)。
與暴露于UVB輻射但未用IP-6處理的組比較，對(duì)暴露至UVB的細(xì)胞的0.5 mM IP-6處理顯示凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的百分比顯著下降和活細(xì)胞百分比顯著增加(圖3)。與0.5mMIP-6處理比較，1.0 mM IP-6處理顯示類(lèi)似的結(jié)果，但是這種效應(yīng)在較高濃度時(shí)更顯著。因此，與暴露于UVB但不用IP-6處理的組比較，當(dāng)暴露于UVB輻射時(shí)IP-6能引起凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的劑量依賴(lài)性減少，而活細(xì)胞增加，p< 0.001。
當(dāng)使用MCF-10A(永生化正常乳房細(xì)胞系)和正常的人類(lèi)外周淋巴細(xì)胞重復(fù)試驗(yàn)時(shí)，獲得類(lèi)似的結(jié)果。實(shí)施例4
IP-6和UVB輻射對(duì)HaCaT細(xì)胞的胱天蛋白酶-3激活的作用
將HaCaT細(xì)胞涂板至60 mm組織培養(yǎng)皿24小時(shí)。將細(xì)胞暴露于30mJ/cm2 UVB輻射或不暴露。在UVB暴露后立即用1.0 mM IP-6處理細(xì)胞。在UVB暴露后18小時(shí)，從lxl06 HaCaT細(xì)胞獲得的細(xì)胞溶胞產(chǎn)物在低滲細(xì)胞溶解緩沖液(25 mM HEPES (pH 7.5)、 5 mM MgCl2、 5 mM EDTA、 5 mMDTT、 2mMPMSF、 10//g/mL胃酶抑素A和10 pg/mL亮肽素)中制備。然后將10/^樣品與含有50^M胱天蛋白酶-3底物、Ac-DEVD-AMC的胱天蛋白酶測(cè)定緩沖液(312.5 mM HEPES(pH 7.5)、 31.25%蔗糖、0.3125%CHAPS (3-[(3-膽酰胺丙基)二甲氨基丙磺酸，3-[(3-cholamido-propyl)dimethylammonio]-l-propane國(guó)sulfonate)、 2% DMSO、10 mMDTT)在白色96孔微孔滴定板中組合。陰性對(duì)照孔包含2;^L2.5 mM胱天蛋白酶-3(Ac-DEVD-CHO)的特異性肽抑制劑。將板在3(TC溫育1小時(shí)。然后使用具有360 nm激發(fā)波長(zhǎng)和460 nm發(fā)射波長(zhǎng)的熒光板讀數(shù)器測(cè)量游離反應(yīng)產(chǎn)物AMC。將胱天蛋白酶-3活性報(bào)告為AMC的相對(duì)熒光強(qiáng)度。
在30 mJ/cm2 UVB輻射暴露后18小時(shí)，使用1.0 mM IP-6處理確定IP-6對(duì)HaCaT細(xì)胞的凋亡的作用。結(jié)果顯示與對(duì)照組比較，IP-6引起激活的胱天蛋白酶-3活性的增力口。UVB暴露還引起激活的胱天蛋白酶-3活性的增加。然而，在1.0mMIP-6的存在下，與暴露于UVB輻射但未用IP-6處理的組比較，激活的胱天蛋白酶-3活性顯著下降，p〈0.01(圖4)。
當(dāng)使用MCF-10A(永生化正常乳房細(xì)胞系)和正常的人類(lèi)外周淋巴細(xì)胞重復(fù)試驗(yàn)時(shí)，獲得類(lèi)似的結(jié)果。實(shí)施例5
作為輻射防護(hù)劑的IP-6i肌醇
將人類(lèi)角化細(xì)胞HaCaT細(xì)胞暴露于UVB 30 mJ/cm2 (2分10秒)；非暴露細(xì)胞用作對(duì)照。然后將細(xì)胞用IP-6、肌醇、IP-6 +肌醇和未處理(對(duì)照)處理，并放至培養(yǎng)箱18小時(shí)。保持附著至孔的細(xì)胞是活的(防護(hù)以免UVB損害)；附著細(xì)胞的量通過(guò)將它們?nèi)芙庥谝宜嶂胁y(cè)量該溶液的吸光度來(lái)測(cè)量。用IP-6和肌醇的1:1摩爾比率處理的細(xì)胞顯示最好的附著。
當(dāng)使用MCF-10A(永生化正常乳房細(xì)胞系)和正常的人類(lèi)外周淋巴細(xì)胞重復(fù)試驗(yàn)時(shí)，獲得類(lèi)似的結(jié)果。實(shí)施例6
IP-6±肌醇作為體內(nèi)輻射防護(hù)劑的作用
將6周齡不含病原體SKH-1雌性小鼠(Charles River Laboratory,Wilmington, MA)每周照射3次，起初用1.5 kJ/m2劑量并每周逐漸增加1.5kJ/m2至7.5 kJ/r^的最終劑量；每段時(shí)間持續(xù)約10分鐘，進(jìn)行23周。將動(dòng)物用不含IP-6的AIN-76A飲食(Harlan Teklad, #170481)喂養(yǎng)。將約100 mgIP-6+/-肌醇以4。/。K-IP-6、 1%肌醇或4% K-IP-6 + 1%肌醇的皮膚乳膏劑局部施用在背側(cè)面。另外一組接受飲用水中的以1:1摩爾比率的Na-IP-6+肌醇以觀察是否口服給藥IP-6+肌醇能提供類(lèi)似的保護(hù)。每天觀察動(dòng)物，監(jiān)控并計(jì)數(shù)以乳頭狀瘤形式的腫瘤的形態(tài)。結(jié)果顯示用皮膚乳膏劑中的K-IP-6處理的動(dòng)物相對(duì)于不含IP-6的乳膏劑沒(méi)有腫瘤；乳膏劑中的IP-6+肌醇顯示腫瘤減少60%，甚至更有意思的是，接受飲用水中的IP-6+肌醇的動(dòng)物UVB誘導(dǎo)的皮膚腫瘤發(fā)病率減少78.6%。
此外，與對(duì)照動(dòng)物比較，經(jīng)處理的動(dòng)物顯示輻射誘導(dǎo)的皮膚損害改善，其中皮膚變紅、潰瘍和/或發(fā)皰減少或消失。實(shí)施例7 (預(yù)示的)肌醇/IP-6組合物對(duì)培養(yǎng)的正常細(xì)胞的放射防護(hù)作用
將HFL-1細(xì)胞(正常二倍體肺成纖維細(xì)胞)以包含10%胎牛血清和抗 生素的DMEM中的3.000細(xì)胞/10 mm2的細(xì)胞密度涂板至24孔皿。24小時(shí) 后將肌醇/IP-6試驗(yàn)化合物以含有水的100至500微摩爾的選擇濃度加至細(xì) 胞。對(duì)照細(xì)胞僅用水處理。將細(xì)胞暴露至試驗(yàn)化合物或水24小時(shí)。然后使 用裝備有作為輻射源的137銫的J. L. Shepherd Mark I, Model 30-1 Irradiator 用10 Gy(戈瑞)或15 Gy的電離輻射(IR)照射細(xì)胞。
照射后，將試驗(yàn)細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞上的培養(yǎng)基去除，并用不含試驗(yàn)化合 物或另外的水的新鮮生長(zhǎng)培養(yǎng)基替代。將照射過(guò)的細(xì)胞溫育96小時(shí)，并將 重復(fù)孔進(jìn)行胰酶蛋白消化，重新涂板至100 mi^組織培養(yǎng)皿。重新涂板的 細(xì)胞在具有一種新鮮培養(yǎng)基的變化的正常條件下生長(zhǎng)3周。每個(gè)IOO mm2 培養(yǎng)皿的集落數(shù)目表示存活細(xì)胞的數(shù)目，它們?nèi)缦率鐾ㄟ^(guò)將皿染色來(lái)確定。
為顯影和計(jì)數(shù)從個(gè)體輻射防護(hù)的細(xì)胞的克隆的向外生長(zhǎng)(outgrowth)得 到的集落，去除培養(yǎng)基并將板用室溫磷酸鹽緩沖鹽水洗滌一次。將細(xì)胞用 1:10稀釋的改良Giemsa染色液(Sigma)染色20分鐘。去除染料并用自來(lái)水 洗滌板。將板風(fēng)干，計(jì)數(shù)每個(gè)板的集落數(shù)目并確定重復(fù)板的平均值。
觀察肌醇/IP-6化合物的輻射防護(hù)活性。
當(dāng)使用MCF-10A(永生化正常乳房細(xì)胞系)和正常的人類(lèi)外周淋巴細(xì)胞 重復(fù)試驗(yàn)時(shí)，獲得類(lèi)似的結(jié)果。 實(shí)施例8(預(yù)示的)
用肌醇/IP-6組合物處理培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞
為了闡述肌醇/IP-6組合物通過(guò)在對(duì)正常成纖維細(xì)胞有保護(hù)性的條件下 的電離照射對(duì)殺死腫瘤細(xì)胞的作用，進(jìn)行下列試驗(yàn)。將雄激素陰性前列腺 癌細(xì)胞系DU145細(xì)胞以包含10。/。胎牛血清和抗生素的DMEM中的1.0><105 細(xì)胞每35 mn^的細(xì)胞密度涂布至6孔皿。24小時(shí)后將水中的肌醇/IP-6組 合物(0.5mM、 1.0 mM、 2.5 mM、 5.0 mM、 10.0 mM和20.0 mM)單獨(dú)加至 細(xì)胞。對(duì)照細(xì)胞僅接受水。將板溫育2-4小時(shí)并用5 Gy或10 Gy的輻射來(lái) 照射細(xì)胞。
照射后，去除培養(yǎng)基并用不含試驗(yàn)化合物的新鮮培養(yǎng)基代替。將細(xì)胞 溫育96小吋，并將活細(xì)胞的數(shù)目通過(guò)錐蟲(chóng)藍(lán)排除來(lái)確定。確定來(lái)自重復(fù)孔的活細(xì)胞的平均數(shù)目。
在正常的人類(lèi)肺成纖維細(xì)胞中誘導(dǎo)輻射防護(hù)的肌醇/IP-6組合物的添加
不減少電離輻射對(duì)腫瘤細(xì)胞系的殺死活性。還觀察對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞殺死 有小但穩(wěn)定的附加效應(yīng)。肌醇/IP-6化合物的輻射防護(hù)作用對(duì)正常組織有特 異性，并且當(dāng)腫瘤細(xì)胞用試驗(yàn)化合物以在照射前2-4小時(shí)脈沖的形式處理 時(shí)，不阻礙通過(guò)IR殺死腫瘤細(xì)胞。
當(dāng)使用MCF-10A(正常永生化乳房細(xì)胞)和正常的人類(lèi)外周淋巴細(xì)胞重 復(fù)試驗(yàn)時(shí)，獲得類(lèi)似的結(jié)果。 實(shí)施例9 (預(yù)示的)
通過(guò)用肌醇/IP-6組合物預(yù)處理保護(hù)小鼠以免輻射毒性
將年齡為10-12周的C57黑小鼠(Taconic)分成兩個(gè)治療組，每組10只 小鼠。 一組在用8 Gy y輻射照射前18和6小時(shí)接受溶解于水中的200微克 肌醇/IP-6組合物的腹膜內(nèi)注射(10mg/Kg劑量，基于20g小鼠)。第二組在 用8 Gy y輻射照射前18和6小時(shí)接受溶解于水中的600微克肌醇/IP-6組 合物的腹膜內(nèi)注射(30mg/Kg劑量，基于20g小鼠)。16只動(dòng)物的對(duì)照組單 獨(dú)接受8 Gy y輻射。在照射后40天評(píng)價(jià)對(duì)照組和試驗(yàn)組的死亡率。
照射后第20天，對(duì)照小鼠顯示80%的最大死亡率；因此，認(rèn)為y輻射 的8 Gy劑量是LDso劑量。相比之下，僅約50%的第一組小鼠和約30%的 第二組小鼠在接受LD8Q輻射劑量后第20天死亡。第40天，第一組達(dá)到約 60%的最大死亡率，而第二組達(dá)到約50%的最大死亡率。小鼠中的輻射毒 性受肌醇/IP-6組合物的預(yù)處理大量減少。 實(shí)施例10 (預(yù)示的)
當(dāng)輻射暴露后給予時(shí)肌醇/IP-6組合物在小鼠中的輻射防護(hù)作用
將10-12周齡的C57 B6/J小鼠(Taconic)分成兩個(gè)分別為9只和10只小 鼠的治療組。 一組在用8 Gy Y輻射照射前18和6小時(shí)接受溶解于水中的 200微克肌醇/IP-6組合物的腹膜內(nèi)注射(IO mg/Kg劑量，假定20 g小鼠)。 第二組在用8 Gy y輻射照射后15分鐘接受溶解于水中的600微克肌醇/IP-6 組合物的腹膜內(nèi)注射(30mg/Kg劑量，基于20g小鼠)。16只動(dòng)物的對(duì)照組 單獨(dú)接受8 Gy Y輻射。在照射后40天評(píng)價(jià)對(duì)照組和試驗(yàn)組的死亡率。
與對(duì)照動(dòng)物比較，小鼠在照射后用肌醇/IP-6組合物的處理導(dǎo)致輻射誘導(dǎo)的死亡率顯著延緩。盡管經(jīng)由照射后處理提供的肌醇/IP-6組合物的輻射 防護(hù)作用不像用照射前處理所觀察到的那樣明顯，但是用肌醇/IP-6組合物
的照射后處理有效減輕輻射毒性的影響。 實(shí)施例11 (預(yù)示的)
在用肌醇/IP-6組合物預(yù)處理后電離輻射暴露對(duì)正常和惡性造血祖細(xì)胞生長(zhǎng)
的作用
電離輻射對(duì)用肌醇/IP-6組合物預(yù)處理的正常和惡性造血祖細(xì)胞的作用 通過(guò)評(píng)價(jià)預(yù)處理細(xì)胞在照射后的克隆效率和發(fā)育來(lái)確定。
為獲得造血祖細(xì)胞，人骨髓細(xì)胞(BMC)或外周血液細(xì)胞(PB)從正常健 康的、急性或慢性髓性粒細(xì)胞白血病(AML， CML)志愿者通過(guò) Ficoll-Hypaque密度梯度離心法而獲得，并且通過(guò)用免疫磁珠(Dynal A. S., Oslo, Norway)陽(yáng)性選擇CD34+細(xì)胞而部分富集造血祖細(xì)胞。將CD34+細(xì)胞 懸浮于補(bǔ)充的a培養(yǎng)基中，并于4'C在小心倒置試管下用以1:20稀釋的小 鼠抗-HPCA-I抗體溫育45分鐘。將細(xì)胞在補(bǔ)充的a培養(yǎng)基中洗滌三次，然 后用包被有山羊抗小鼠IgG,的Fc片段的珠(75微升免疫珠/107 CD34+細(xì)胞) 溫育。在溫育(4°C)45分鐘后，附著至所述珠的細(xì)胞使用如由制造廠商所 示的磁性顆粒濃縮器而正向選擇。
將2xl04 CD34+細(xì)胞于5 ml聚丙烯管(Fisher Scientific, Pittsburgh, Pa.) 中的含有2%人類(lèi)AB血清和10 mM Hepes緩沖液的總體積為0.4 ml的 Iscove改良Dulbecco培養(yǎng)基(IMDM)中溫育。將肌醇/IP-6組合物加至細(xì)胞 中；例如，將水中三種不同濃度的肌醇/IP-6組合物(5.0 mM、 10.0 mM和 20.0mM)各自加至細(xì)胞中。對(duì)照細(xì)胞單獨(dú)接受水。將細(xì)胞溫育20-24小時(shí)， 并用5 Gy或10 Gy的電離輻射來(lái)照射。
在照射后立即將培養(yǎng)基去除，并用不含試驗(yàn)化合物的新鮮培養(yǎng)基代替。 在照射后24小時(shí)，制備治療細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞用于涂板血漿凝塊或甲基纖維 素培養(yǎng)物。在涂板前不洗滌細(xì)胞(lx 104CD34+細(xì)胞每皿)。
經(jīng)處理的造血祖細(xì)胞的克隆效率和發(fā)育的評(píng)價(jià)基本上如在Gewirtz等 人，Science 242, 1303-1306(1988)的報(bào)告中進(jìn)行。觀察到經(jīng)處理的樣品與對(duì) 照比較有顯著的有益作用。 實(shí)施例l2 (預(yù)示的)在用肌醇/IP-6組合物預(yù)處理后用電離輻射的骨髓凈化
使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)于操作室在全身麻醉下從個(gè)體的髂骨中收集骨髓。將多
次抽吸(aspiration)放至肝素化注射器。抽回足夠的骨髓以使所述個(gè)體能接受 約4xl()S至約8xl0S經(jīng)處理的骨髓細(xì)胞/kg體重。因此，抽回約750至1，000 ml骨髓。將抽吸的骨髓立即轉(zhuǎn)移至含有10,000單位不含防腐劑的肝素每 100 ml培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基(TC-199， Gibco， Grand Island,紐約)。將抽吸的 骨髓過(guò)濾穿過(guò)三種逐漸變細(xì)的篩孔以獲得不含細(xì)胞聚集物、碎片和骨顆粒 的細(xì)胞懸浮液。然后將過(guò)濾的骨髓進(jìn)一步處理至自動(dòng)細(xì)胞分離器(例如Cobe 2991 Cell Processor),所述分離器制備"血沉棕黃層(buffy coat)"產(chǎn)物(即不 含紅細(xì)胞和血小板的白細(xì)胞)。然后將血沉棕黃層制品放至傳遞包(transfer pack),用于進(jìn)一步處理和儲(chǔ)存。它可儲(chǔ)存直至使用標(biāo)準(zhǔn)程序在液氮中凈化。 可選地，凈化可立即進(jìn)行，然后可將經(jīng)凈化的骨髓在液氮中冷凍儲(chǔ)存直至 它作好準(zhǔn)備用于移植。
如下進(jìn)行凈化程序。將血沉棕黃層制品中的細(xì)胞調(diào)節(jié)至含有約20%自 體血漿的TC-199中的約2xl07/ml的細(xì)胞濃度。將肌醇/IP-6組合物如1-2 毫摩爾水中的肌醇/IP-6組合物或10-20毫摩爾水中的肌醇/IP-6組合物加至 包含細(xì)胞懸浮液的傳遞包，并在小心振蕩下于37。C水浴中溫育20-24小時(shí)。 然后將傳遞包暴露于5-10 Gy電離輻射?？蓪⒅亟M人造血生長(zhǎng)因子如rH IL-3或rH GM-CSF加至懸浮液中以刺激造血腫瘤的生長(zhǎng)因而增加它們對(duì)電 離輻射的敏感性。
然后將細(xì)胞在液氮中冷凍或于4。C在含有約20%自體血漿的TC-199中 洗滌一次。然后將經(jīng)洗滌的細(xì)胞輸注至個(gè)體。盡可能小心地在無(wú)菌條件下 操作，并且始終小心保持嚴(yán)格的無(wú)菌技術(shù)。 實(shí)施例13 (預(yù)示的)
IP-6抵抗UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞損害和正常乳房上皮細(xì)胞損害的保護(hù)作用
非轉(zhuǎn)化、正常的人類(lèi)乳房上皮細(xì)胞MCF-10A細(xì)胞用于通過(guò)測(cè)量細(xì)胞成 活力和細(xì)胞附著證明肌醇/IP-6組合物對(duì)UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞損害的保護(hù)作用。 將MCF-10A(含有非突變型p53的自發(fā)永生化、非致瘤性人乳房上皮細(xì)胞系) 保持在補(bǔ)充有5。/。馬血清(Invitrogen Gibco， Carlsbad, CA)、 20 ng/mL EGF (Upstate Biotechnology Incorporated, Lake Placid, NY)、 10 /^g/mL胰島素(Biofluids, Rockville， MD)和500 ng/mL氫化可的松的F-12/DMEM中。將細(xì) 胞保持在37"C和5% C02。Na-IP-6使用作為稀釋劑的細(xì)胞培養(yǎng)基從100 mM 儲(chǔ)備溶液稀釋至所需濃度(0.05-2.0 mM)。使用15、 30、 60和120 mJ/cm2 的UVB強(qiáng)度，這可通過(guò)改變對(duì)UVB光(80°/。的光輸出在290-320 nm UVB 范圍內(nèi))的細(xì)胞暴露時(shí)間而獲得。
使MCF-10A細(xì)胞生長(zhǎng)至約80-90%融合。將100 lx104細(xì)胞/mL MCF-10A細(xì)胞接種于四個(gè)96孔板的每個(gè)孔中。為使用基于MTT的細(xì)胞毒 性測(cè)定評(píng)價(jià)成活力，用IP-6(0-2.0 mM)處理細(xì)胞，并且在第0、 1、 2禾口 3 天將100 1 mg/mL溶解于DMEM培養(yǎng)基中的含水MTT加至每孔，并將 板放至培養(yǎng)箱(37。C和5% C02) 4小時(shí)。加入150pLDMSO以溶解甲臘產(chǎn)物。 使用EL Ultra Micro-plate Reader于540 nm讀取吸光度。將結(jié)果記錄為每組 的平均吸光度。為確定是否IP-6保護(hù)MCF-10A細(xì)胞避免UVB誘導(dǎo)的損傷， 如上所述進(jìn)行MTT測(cè)定。將50 piL不含酚紅的DMEM培養(yǎng)基中的2xl04 細(xì)胞/mL接種至五個(gè)96孔板的每個(gè)孔，并溫育(37"和5% C02)24小時(shí)。 然后將細(xì)胞暴露于0、 15、 30、 60或120 mJ/cm2 UVB強(qiáng)度(UVB寬帶燈， 4列(FS40T12/UVB 4 ft))。繼而立即將經(jīng)UVB暴露的細(xì)胞用50 [iL細(xì)胞生 長(zhǎng)培養(yǎng)基中的IP-6 (0-2.0 mM)處理。接著將細(xì)胞在37。C和5% (302放至培 養(yǎng)箱，并且如上進(jìn)行MTT測(cè)定。將結(jié)果記錄成每組的平均吸光度。
因?yàn)榛罴?xì)胞保持附著而干燥/死亡細(xì)胞分離，所以細(xì)胞的附著用作以單 層正常生長(zhǎng)的貼壁依賴(lài)性細(xì)胞的細(xì)胞成活力的間接指標(biāo)(indicator)。為測(cè) 定肌醇/IP-6組合物和UVB輻射對(duì)附著細(xì)胞的作用，將5xl04 MCF-10A細(xì) 胞接種至四個(gè)6孔組織培養(yǎng)板的每個(gè)孔，并在37"C和5% C02溫育24小時(shí)。 在UVB照射前1小時(shí)，兩個(gè)板用IP-6處理(O和0.1 mM)， 一個(gè)用于IP-6 預(yù)處理而另一個(gè)用于IP-6預(yù)處理和后處理。然后將所有四個(gè)板用PBS IX 洗滌兩次，并將少量PBS IX加至孔中，所述孔以30 mJ/cm2照射。在UVB 暴露后，將PBS從孔中去除并將DMEM培養(yǎng)基加至每個(gè)孔。然后將IP-6 (0.05和0.1 mM)加至非UVB暴露、IP-6后處理以及預(yù)處理和后處理標(biāo)記的 板。將細(xì)胞溫育(37t:和5%C02)18小時(shí)。在溫育后，將細(xì)胞用PBS 1X(pH 7.4)洗滌4次，然后用4.0%甲醛固定15分鐘，并用0.5%含水結(jié)晶紫染色至 少5分鐘。將過(guò)量的結(jié)晶紫從孔中洗滌，并將板放置干燥。然后將每個(gè)孔中的干燥的結(jié)晶紫殘?jiān)芙庥?00 nL 30%乙酸。使用EL Ultra Micro-plate Reader將96孔板于595 nm讀取吸光度三次。
此外，如上文所操作，將5xl04 MCF-10A細(xì)胞涂板至10個(gè)6孔板的 每個(gè)孔。在UVB照射前，將細(xì)胞用PBS 1X洗滌兩次，并將少量PBS IX 加至孔中。然后將細(xì)胞暴露于無(wú)UVB或者15、 30、 60或120mJ/cn^強(qiáng)度。 在暴露后，將細(xì)胞培養(yǎng)基加至孔中，并用IP-6 (0-2.0 mM)處理細(xì)胞。將細(xì) 胞在37°(:和5% C02溫育。在UVB暴露后18小時(shí)，如上所述，將細(xì)胞用 4%甲醛固定，用0.5%含水結(jié)晶紫染色，并用30%乙酸溶解。于595 nm讀 取吸光度三次。
觀察肌醇/IP-6組合物的放射防護(hù)作用。 實(shí)施例l4 (預(yù)示的)
電離輻射和IP-6對(duì)正常外周單核細(xì)胞的作用
電離輻射暴露和IP-6對(duì)正常外周單核細(xì)胞(PBMC)成活力的作用通過(guò) 它們?cè)鲋澈托纬杉涞哪芰?lái)評(píng)價(jià)。很多測(cè)定法己在半固體培養(yǎng)基發(fā)展以 測(cè)定T細(xì)胞集落形成細(xì)胞(T-CFC)。這些T-CFC已用于確定T祖細(xì)胞的數(shù) 目和用于研究正常個(gè)體以及有各種病理學(xué)狀態(tài)的患者中的外周血液和骨髓 T淋巴細(xì)胞的增殖和分化能力。T細(xì)胞集落從10-20例健康志愿者的PBMC 中產(chǎn)生。觀察對(duì)自發(fā)的和誘導(dǎo)的T細(xì)胞集落的作用。沒(méi)有加入生長(zhǎng)因子(PHA 和IL-2)時(shí)在甲基纖維素中培養(yǎng)的PBMC形成自發(fā)T細(xì)胞集落;存在生長(zhǎng)因 子時(shí)它們形成誘導(dǎo)的T細(xì)胞集落。
PBMC在聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque) (Pharmacia, Upsalla,瑞典) 上分離。將間期細(xì)胞用PBS洗滌兩次，并再懸浮在生長(zhǎng)培養(yǎng)基、a-改良的 Eagle培養(yǎng)基(a-MEM) (Invitrogen Gibco, Carlsbad, CA)中。如通過(guò)錐蟲(chóng)藍(lán)染 料排除法測(cè)試，它們的成活力總是>90%。將細(xì)胞進(jìn)一步在玫瑰花瓣?duì)钚纬?的基礎(chǔ)上分離或者使用如實(shí)施例ll所述的免疫磁珠分割。存在PHA(l。/。； 體積/體積)和10 U/mL人rlL-2(Biogen, Geneva, Switzerland)(誘導(dǎo)的T集落) 下和缺少PHA和rlL-2(自發(fā)的T細(xì)胞集落)下，將分割的或未分割的PBMC 細(xì)胞(5xl0Vml細(xì)胞/mL)接種至補(bǔ)充有20。/。FCS、 2mM谷酰胺和抗生素的 a-MEM中的0.8。/。甲基纖維素(Fluka Chemie AG, Buchs, Switzerland)。0.1 mL 包含細(xì)胞的甲基纖維素制品接種于96孔平底微量培養(yǎng)板的每孔中，并在37°。和空氣中的5% C02溫育5-7天。包含至少50個(gè)細(xì)胞的聚集物在倒置
顯微鏡下計(jì)數(shù)成集落。
將外周血液和分離的PBMC暴露于5 Gy或10 Gy電離照射。肌醇/IP-6 組合物的保護(hù)作用通過(guò)評(píng)價(jià)在照射前1小時(shí)用IP-6(0-2.0 mM)預(yù)處理或者 在溫育和集落形成過(guò)程期間存在肌醇/IP-6組合物下經(jīng)照射的PBMC T-CFC 的集落形成能力來(lái)確定。
觀察到肌醇/IP-6組合物對(duì)試驗(yàn)細(xì)胞明顯的保護(hù)作用。 局部用組合物
局部用產(chǎn)品以多種形式存在，所述形式包括固體、液體、懸浮液、半 固體(如乳膏劑、凝膠劑、糊劑或"棒(stick)")、散劑或細(xì)分的液體如噴霧 劑或霧。通常分類(lèi)為"化妝品"的局部用產(chǎn)品的實(shí)例包括皮膚護(hù)理產(chǎn)品如 乳膏劑、洗齊U、增濕劑和"治療化妝品"如去角質(zhì)劑(exfoliant)和域皮膚細(xì) 胞更新劑；芳香品如香料、科隆香水和除臭劑；剃須相關(guān)的產(chǎn)品如乳膏劑、 "爽膚水(brace""和須后產(chǎn)品；脫毛劑和其他除毛發(fā)產(chǎn)品；皮膚清潔劑、 調(diào)色劑和收斂劑；預(yù)潤(rùn)濕巾(pre-moistened wipe)和毛巾(washcloth);曬黑膏 (tanning lotion);沐浴產(chǎn)品如油；眼部護(hù)理產(chǎn)品如洗眼劑和卸妝劑(makeup remover);足部護(hù)理產(chǎn)品如散劑和噴霧劑；皮膚著色劑和化妝產(chǎn)品如粉底 (foundation)、腮紅、口紅、眼影和眼線(xiàn)筆、唇彩和睫毛膏；唇膏和唇棒； 頭發(fā)護(hù)理和治療產(chǎn)品如洗發(fā)劑、護(hù)發(fā)素(conditioner)、著色劑、染料、漂白 劑、直發(fā)器(straightener)和燙發(fā)產(chǎn)品；嬰兒產(chǎn)品如嬰兒洗劑、油、洗發(fā)劑、 散劑和濕巾(wetwipe);女性衛(wèi)生保健品如除臭劑和沖洗劑；皮膚病專(zhuān)家或 化妝師應(yīng)用的皮膚或面部脫皮劑(peel);及其他。通常分為"局部用藥"的 局部用產(chǎn)品的實(shí)例有很多且為各種各樣的，包括非處方藥和/或處方產(chǎn)品如 止汗劑、驅(qū)蟲(chóng)劑、防曬用品和曬斑治療劑、去痤瘡齊"anti-acne agent)、抗生 素、局部呼吸劑、眼用藥如滴眼劑和鹽水溶液、治療性類(lèi)視黃醇、去頭屑 藥、外用鎮(zhèn)痛藥如辣椒素產(chǎn)品、局部避孕藥、局部藥物遞送系統(tǒng)、胃腸試 劑如栓劑、灌腸劑和痔治療劑、生殖系統(tǒng)用藥如陰道治療劑、口服治療劑 如錠劑，以及很多其他具有治療或其他作用的產(chǎn)品。其他局部用產(chǎn)品包括 洗手皂、洗臉皂和身體皂和洗滌劑和皮膚清潔劑的其他形式、以及家用去 污劑和許多其他家用產(chǎn)品如溶劑、噴射劑、拋光劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、蠟和其他在標(biāo)準(zhǔn)使用時(shí)局部施用或局部暴露于身體的形式。
本領(lǐng)域技術(shù)人員當(dāng)然知道要求化妝品組合物沒(méi)有常規(guī)的輔劑和添加劑
通常是不能想象的。在這些中包括，例如稠度增稠劑(consistency-imparting agent)、填充劑、香料(perfbme)、著色劑、乳化劑、添加的活性化合物如維 生素或蛋白質(zhì)、遮光劑、穩(wěn)定劑、驅(qū)蟲(chóng)劑、醇、水、鹽、具有抗微生物、 分解蛋白或溶角蛋白活性的物質(zhì)等。
與本發(fā)明的制劑使用的合適的局部用載體在化妝品和藥物領(lǐng)域中是眾 所周知的，包括這樣的載體(或載體組分)如水；有機(jī)溶劑如醇(特別是能容 易從皮膚中蒸發(fā)的低級(jí)醇如乙醇)、甘醇類(lèi)(如甘油)、脂族醇(如羊毛脂)；水 和有機(jī)溶劑的混合物(如水和醇)，和有機(jī)溶劑如醇和甘油(任選還與水)的混 合物；基于脂質(zhì)的物質(zhì)如脂肪酸、?；视?包括油如礦物油和天然或合成 源的脂肪)、磷酸甘油酯、鞘脂質(zhì)和蠟；基于蛋白質(zhì)的物質(zhì)如膠原和明膠； 基于硅酮的物質(zhì)(非揮發(fā)性和揮發(fā)性)如環(huán)甲硅酮、二甲基硅氧烷 (demethiconol)禾卩二甲基石圭油共多元醇(dimethicone copolyol) (Dow Coming);基于烴的物質(zhì)如凡士林和角鯊?fù)?；陰離子、陽(yáng)離子和兩性表面活 性劑和肥皂；持續(xù)釋放載體如微海綿體(microsponges)和聚合物基質(zhì)；穩(wěn)定 劑和混懸劑；乳化劑；以及其他適于向皮膚給藥的載體和載體成分，以及 如上所述或其他本領(lǐng)域已知的局部用載體組分的混合物。所述載體可還包 含適于提高所應(yīng)用的制劑的穩(wěn)定性或有效性的組分，例如防腐劑、抗氧化 劑、皮膚穿透促進(jìn)劑、持續(xù)釋放材料及類(lèi)似物。這樣的載體和載體成分的 實(shí)例在本領(lǐng)域是眾所周知的，且在這些參考文獻(xiàn)如Martindale—The Extra Pharmacopoeia (Pharmaceutical Press, London 1993)禾口 Martin (編)， Remington's Pharmaceutical Sciences中所述。
合適的載體的選擇取決于特定物理形式和制劑能實(shí)現(xiàn)的遞送方式。適 合的形式的實(shí)例包括液體(包括本發(fā)明的肌醇/IP-6組合物的溶解形式以及 懸浮液、乳劑及類(lèi)似物)；固體和半固體如凝膠劑、泡沬、糊劑、乳膏劑、 軟膏劑、"棒"(如唇膏和腋下除臭棒)、散劑及類(lèi)似物；包含脂質(zhì)體或其他 遞送載體的制劑；直腸或陰道栓劑、乳膏劑、泡沫、凝膠劑、軟膏劑、灌 腸劑或灌洗劑；及其他形式。典型的遞送方式包括使用手指涂布；使用物 理涂藥器如布、薄紙(tissue)、棉拭(swab)、棒或刷涂布(例如通過(guò)僅在涂布前將涂藥器與制劑浸泡、或者通過(guò)準(zhǔn)備好的己包含制劑(如治療的或預(yù)潤(rùn)
濕的繃帶、巾(wipe)、毛巾或棒)的涂藥器涂布或附著至皮膚來(lái)實(shí)現(xiàn))；噴 霧(包括霧、氣溶膠或泡沫噴霧)；滴管涂布(例如用滴耳劑或滴眼劑)；噴灑 (sprinkling)(如與合適的散劑形式的制劑)；浸泡；和注射(特別皮內(nèi)或皮下注 射)。也可有用地應(yīng)用離子電滲療法或其他電磁增強(qiáng)遞送系統(tǒng)例如以增加遞 送至皮膚。
用于制備多種形式的制劑的方法學(xué)和材料還在Anthony L. L. Hunting (編),"A Formulary of Cosmetic Preparations (第2巻)--Creams, Lotions and Milks，" Nacelle Press (England, N丄1993)中描述。參見(jiàn)，例如第7章，第5-14 頁(yè)(油和凝膠劑)；第8章，第15-98頁(yè)(基質(zhì)和乳劑)；第9章，第101-120 頁(yè)("通用制品")；第10章，第121-184頁(yè)(清潔面膜、乳膏劑、洗劑)；第 11章，第185-208頁(yè)(粉底、隔離霜(vanishing)和日用乳膏劑)；第12章， 第209-254頁(yè)(潤(rùn)膚齊ij(emollient));第13章，第297-324頁(yè)(面部治療產(chǎn)品)； 第14章，第325-380頁(yè)(手部產(chǎn)品)；第15章，第381-460頁(yè)(身體和皮膚乳 膏劑和洗劑)；嬰兒第16章，第461-484頁(yè)(嬰兒產(chǎn)品)；它們的內(nèi)容通過(guò)引 用并入本文。
相應(yīng)的需要使得對(duì)藥物制劑的配制作出必要的修正。
在本發(fā)明的含義內(nèi)的藥物局部用組合物通常包含一種或多種以有效濃 度的藥物。為了簡(jiǎn)單性的緣故，為了化妝品和藥物用途之間更清楚的區(qū)分， 適合的產(chǎn)品是指美國(guó)的合法需求(例如Cosmetics Regulations, Food and Drugs Act(化妝品規(guī)章，食品和藥物法案))。
將根據(jù)本發(fā)明所用的活性化合物作為添加劑加至已包含用于其他目的 的其他活性化合物的制劑在這種情況下同樣是有利的。
因此，根據(jù)它們的組成，在本發(fā)明的含義內(nèi)的化妝品或局部用皮膚病 組合物例如可用作護(hù)膚乳膏劑、清潔乳液(cleansing milk)、防曬露、曬黑膏 (sun tan lotion)、營(yíng)養(yǎng)乳膏劑、日霜或晚霜等。使用根據(jù)本發(fā)明的組合物作 為藥物制劑的基質(zhì)是任選可能的且有利的。
特別地，根據(jù)本發(fā)明所用的活性化合物可用作化妝品除臭劑或止汗劑 中的添加劑。而且，可用的具有除臭或抑汗活性的試劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員 已知的常規(guī)物質(zhì)。例如，借助于收斂劑(主要為鋁鹽如水合氯化鋁)可抑制汗的形成。
通過(guò)在化妝品除臭劑中使用抗微生物/殺生物的物質(zhì)，可減少皮膚上的 細(xì)菌群落。同時(shí)，在理想的情況下，應(yīng)僅僅有效減少皮膚中的引起氣味的 微生物。例如，二甘油或三甘油的單羧酸酯是有利的。但是，其他具有抗 微生物活性的物質(zhì)也是適合的。
也方便用于本發(fā)明目的的化妝品和皮膚制劑是以防曬用品的形式的那 些。除根據(jù)本發(fā)明所用的活性化合物之外，這些優(yōu)選另外包含至少一種UVA
過(guò)濾物質(zhì)和/或至少一種UVB過(guò)濾物質(zhì)和/或至少一種無(wú)機(jī)色素。
但是，制備可用的那些化妝品和皮膚科制劑在本發(fā)明的含義內(nèi)也是有
利的，所述制劑的主要目的不是保護(hù)以免日光的照射，但是其包含uv防
護(hù)性物質(zhì)。因此，例如，通常將UV-A和UV-B過(guò)濾物質(zhì)結(jié)合進(jìn)日霜。 有利地，根據(jù)本發(fā)明的制劑包含在UVB范圍內(nèi)吸收UV輻射的物質(zhì)，
其中過(guò)濾物質(zhì)的總量基于所述制劑的總重量例如為按重量計(jì)0.1%至30%、
優(yōu)選按重量計(jì)0.5至10%、特別按重量計(jì)1至6%。
UVB過(guò)濾物可以是油溶性或水溶性的。例如，可提及的油溶性物質(zhì)是
3- 苯亞甲基樟腦及其衍生物，例如3-(4-甲基苯亞甲基)樟腦；4-氨基苯甲酸 衍生物，優(yōu)選4-二甲基氨基苯甲酸2-乙基-己酯(2-ethyl-hexyl
4- dimethylaminobenzoate)、 4-二甲基氨基苯甲酸戊酯；肉桂酸的酯，優(yōu)選 4-甲氧基肉桂酸2-乙基己酯、4-甲氧基肉桂酸異戊酯；水楊酸的酯，優(yōu)選 2-乙基己基水楊酸酯、4-異丙基芐基水楊酸酯、3,3,5-三甲基環(huán)己醇水楊酸 酉旨(homomenthyl salicylate); 二苯甲酮的衍生物，優(yōu)選2-羥基-4-甲氧基二苯 甲酮、2-羥基-4-甲氧基-4'甲基二苯甲酮、2，2，-二羥基-4-甲氧基二苯甲酮； 苯亞甲基丙二酸的酯，優(yōu)選4-甲氧基苯亞甲基丙二酸二(2-乙基己基)酯； 2，4,6-三苯胺基(對(duì)-羰基-2，-乙基-1，-己基氧基)-1,3,5-三嗪。
有利的水溶性物質(zhì)是2-苯基苯并咪唑-5-磺酸及其鹽，例如鈉鹽、鉀 鹽或三乙醇銨鹽；二苯甲酮類(lèi)的磺酸衍生物，優(yōu)選2-羥基-4-甲氧基二苯甲 酮-5-磺酸及其鹽；3-苯亞甲基樟腦的磺酸衍生物如，比如例如，4-(2-氧代 -3-亞冰片基甲基(bomylidenemethyl))-苯磺酸、2-甲基-5-(2-氧代-3-亞冰片 基甲基)磺酸及其鹽。
根據(jù)本發(fā)明可用的提及的UVB過(guò)濾物的列表當(dāng)然并不旨在限定。本發(fā)明還涉及肌醇/IP-6組合物與UVA過(guò)濾物和UVB過(guò)濾物的組合或 者也包含UVA過(guò)濾物和UVB過(guò)濾物的根據(jù)本發(fā)明的化妝品或皮膚科制劑。在根據(jù)本發(fā)明的制劑中使用UVA過(guò)濾物還可以是有利的，所述UVA 過(guò)濾物通常包含于化妝品和/或皮膚科制劑中。這種過(guò)濾物物質(zhì)優(yōu)選二苯甲 酰甲垸的衍生物，特別是1-(4，-叔丁基苯酚)-3-(4，-甲氧基苯基)丙烷-1,3-二 酮和l-苯基-3-(4'-異丙基苯基)丙烷-l,3-二酮。包含這些組合的制劑也是本 發(fā)明的主題。可以使用與針對(duì)過(guò)濾UVB的物質(zhì)所提及的相同量的過(guò)濾UVA 的物質(zhì)。在本發(fā)明的含義內(nèi)的化妝品和/或皮膚科制劑還可包含無(wú)機(jī)色素，所述 無(wú)機(jī)色素通常用于化妝品以保護(hù)皮膚避免UV射線(xiàn)。這些是鈦、鋅、鐵、 鋯、硅、錳、鋁、鈰的氧化物及其混合物、以及其中所述氧化物為活性劑 的改性物(modifications它們特別優(yōu)選基于二氧化鈦的色素?？梢允褂冕?對(duì)上述組合所提及的量。根據(jù)本發(fā)明的化妝品和皮膚科制劑可包含化妝品活性化合物、輔劑和/ 或添加劑如通常用于這些制劑的那些，例如抗氧化劑、防腐劑、殺菌劑、 芳香劑、預(yù)防起泡的物質(zhì)、著色劑、具有著色作用的色素、增稠劑、表面 活性物質(zhì)、乳化劑、潤(rùn)膚劑、增濕劑和/或保濕物質(zhì)、脂肪、油、蠟或其他 化妝品或皮膚科制劑的常用組分如醇、多元醇、聚合物、泡沫穩(wěn)定劑、電 解質(zhì)、有機(jī)溶劑或硅酮衍生物。有利的是在本發(fā)明的含義內(nèi)的制劑中加入另外的抗刺激劑或抗炎活性 化合物，特別是丁醇(a-十八烷基甘油醚)、鯊油醇(a-9-十八烯基甘油醚)、 鮫肝醇(a-十六烷基甘油基醚)、紅沒(méi)藥醇和/或泛醇。還有利的是在本發(fā)明的含義內(nèi)的制劑中加入常用抗氧化劑。根據(jù)本發(fā) 明，可用的方便的抗氧化劑是所有適于或用于化妝品和/或皮膚科應(yīng)用的抗 氧化劑。有利地，所述抗氧化劑選自由下列組成的組氨基酸(例如甘氨酸、組 氨酸、酪氨酸、色氨酸)及其衍生物，咪唑類(lèi)(例如尿刊酸)及其衍生物，肽 如D,L-肌肽、D-肌肽、L-肌肽及其衍生物(例如鵝肌肽)，類(lèi)胡蘿卜素，胡 蘿卜素(例如a-胡蘿卜素、,胡蘿卜素、番茄紅素)及其衍生物，硫辛酸及其 衍生物(例如二氫硫辛酸)、金硫葡糖、丙基硫氧嘧啶及其他硫醇(例如硫氧還蛋白、谷胱甘肽、半胱氨酸、胱氨酸、胱胺及其糖基、N-乙?；?、甲基、乙基、丙基、戊基、丁基和月桂基、棕櫚酰基、油基、Y-亞油醇基(linoleyl)、 膽甾醇基和甘油酯)及其鹽，硫代二丙酸二月桂酯、硫代二丙酸雙十八酯、 硫代二丙酸及其衍生物(酯、醚、肽、脂質(zhì)、核苷酸、核苷和鹽)以及以非常 低耐受的劑量(例如pmol至pmol/kg)的亞砜亞胺(sulphoximine)化合物(例如 丁硫氨酸亞砜亞胺、高半胱氨酸亞砜亞胺、丁硫氨酸砜(buthionine sulphone)、五-、六-和七-硫氨酸亞砜亞胺)，此外還有(金屬)螯合劑(例如a-羥基脂肪酸、棕櫚酸、植酸、乳鐵蛋白)、a-羥基酸(例如檸檬酸、乳酸、馬 來(lái)酸)、腐殖酸、膽汁酸、膽汁提取物、膽紅素、膽綠素、EDTA、 EGTA及其衍生物、不飽和脂肪酸及其衍生物(例如Y-亞麻酸、亞油酸、油酸)、葉 酸及其衍生物、泛醌和泛醇及其衍生物、維生素C及衍生物(例如抗壞血酸 棕櫚酸鹽、抗壞血酸磷酸鎂、抗壞血酸乙酸鹽)、生育酚及衍生物(例如維生 素E乙酸酯)以及安息香樹(shù)膠的苯甲酸松酯、蕓香酸及其衍生物、阿魏酸及 其衍生物、丁基羥基甲苯、丁基羥基茴香醚、去甲二氫化愈創(chuàng)木酸、三羥 基丁酰苯、尿酸及其衍生物、甘露糖及其衍生物、鋅及其衍生物(例如ZnO、 ZnS04)、硒及其衍生物(例如硒基蛋氨酸)、芪及其衍生物(例如氧化芪、反 式氧化芪)和提及的活性化合物的根據(jù)本發(fā)明適合的衍生物(鹽、酉旨、醚、糖、 核苷酸、核苷、肽和脂質(zhì))。該制劑中的抗氧化劑(一種或多種化合物)的量?jī)?yōu)選基于所述制劑總重 量的按重量計(jì)0.001-30%、特別優(yōu)選按重量計(jì)0.05-20%、尤其按重量計(jì) 1畫(huà)10%。如果維生素E和/或其衍生物是抗氧化劑，那么有利的是選擇它們基于 所述制劑總重量的范圍為按重量計(jì)0.001至10%的各自濃度。如果在本發(fā)明的含義內(nèi)的化妝品或皮膚科制劑是溶液或乳劑或分散 劑，那么下列可用作溶劑水溶液或含水溶液；油，如癸酸或辛酸的甘油 三酯，但優(yōu)選蓖麻油；脂肪、蠟和其他天然和合成脂肪物質(zhì)，優(yōu)選脂肪酸 與低碳數(shù)的醇例如與異丙醇、丙二醇或丙三醇的酯，或者脂肪醇與低碳數(shù) 目的鏈烷酸類(lèi)或與脂肪酸的酯；低碳數(shù)目的醇、二醇或多元醇，以及它們 的醚，優(yōu)選乙醇、異丙醇、丙二醇、丙三醇、乙二醇、乙二醇單乙醚或單 丁醚、丙二醇單甲醚、單乙醚或單丁醚、二甘醇單甲醚或單乙醚和類(lèi)似產(chǎn)特別是，使用上述溶劑的混合物。在含醇溶劑的情況下，水可以是又 一組分。本發(fā)明的含義內(nèi)的乳齊U、油凝膠劑(oleogel)或水分散體(hydrodispersion) 或脂分散體(lipodispersion)的油相有利選自鏈長(zhǎng)度為3至30個(gè)C原子的飽 和和/或不飽和、支鏈和/或非支鏈的鏈烷羧酸與鏈長(zhǎng)度為3至30個(gè)C原子 的飽和和/或不飽和、支鏈和/或非支鏈的醇的酯類(lèi)；選自芳族羧酸和鏈長(zhǎng)度 為3至30個(gè)C原子的飽和和/或不飽和、支鏈和/或非支鏈的醇的酯類(lèi)。然 后這樣的酯油可有利選自由下列組成的組肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙 酯、硬脂酸異丙酯、油酸異丙酯、硬脂酸正丁酯、月桂酸正己酯、油酸正 癸酯、硬脂酸異辛酯、硬脂酸異壬酯、異壬酸異壬酯、棕櫚酸2-乙基己酯、 月桂酸2-乙基己酯、硬脂酸2-己基癸酯、棕櫚酸2-辛基十二烷基酯、油酸 油酯、芥酸油酯、瓢兒菜醇油酸酯、瓢兒菜醇芥酸酯以及這樣的酯的合成、 半合成和天然混合物，例如霍霍巴油。此外，該油相可有利地選自由支鏈和非支鏈烴和烴蠟、硅油、二垸基 醚組成的組，由飽和或不飽和、支鏈或非支鏈的醇類(lèi)組成的組，以及脂肪 酸三甘油酯即鏈長(zhǎng)度為8至24個(gè)C原子、特別是12-18個(gè)C原子的飽和和 /或不飽和、支鏈和/或非支鏈的鏈烷羧酸的三甘油酯。所述脂肪酸三甘油酯 可例如有利地選自由合成、半合成和天然油如橄欖油、葵花油、大豆油、 花生油、菜籽油、杏仁油、棕櫚油、椰子油、棕櫚仁油及類(lèi)似物組成的組。 抗炎組合物在一方面，本發(fā)明的肌醇/IP-6組合物可與抗炎劑在化妝品基質(zhì)或牙擦 劑(linament)(牙周病)中配制，用于局部預(yù)防炎癥和/或繼炎癥之后的組織 損害的局部應(yīng)用。多種甾體和非甾體抗炎劑可與肌醇/IP-6化合物組合。可使用甾體抗炎劑，其包括但不限于皮質(zhì)激素類(lèi)如氫化可的松、羥基 曲安西龍、a-甲基地塞米松、磷酸地塞米松、倍氯美松雙丙酸酯、戊酸氯 倍他索、地奈德、去氧米松、醋酸去氧皮質(zhì)酮、地塞米松、二氯松、雙醋 二氟拉松、戊酸二氟米松、fluadrenolone、氟氯奈德、氟氫可的松、特戊酸 二氟美松、醋酸氟輕松(fluosinolone acetonide)、氟輕松(fluoci腿ide)、氟可 丁基酯(flucortine butylester)、氟可龍、醋酸氟潑尼定(氟潑尼定(fluprednylidene))、氟羥可舒松、哈西奈德、氫化可的松、丁酸氫化可的松、 甲潑尼龍、曲安奈德、可的松、可托多松、flucetonide、氟氫可的松、二醋 酸7又氟拉木公(difluorosone diacetate)、 fluradrenolone acetonide、甲夢(mèng)5松、安西 法爾(amcinafel)、安西非特、倍他米松與其酯的平衡態(tài)(balance)、氯潑尼 松、醋酸氯潑尼松、氯可托龍(clocortelone)、 clescinolone、 二氯松、二氟潑 尼酯、氟二氯松、氟尼縮松、氟米龍、氟培龍、氟潑尼龍(fluprednisolone)、 戊酸氫化可的松、氫化可的松環(huán)戊丙酸酯、氫可他酯、甲潑尼松、帕拉米 松、潑尼松龍、潑尼松、倍氯美松雙丙酸酯、曲安西龍及其混合物。用于 本發(fā)明的優(yōu)選的甾體抗炎劑是氫化可的松。
用于本發(fā)明組合物的特定的非甾體抗炎劑除了其他，包括但不限于 吡羅昔康、伊索昔康、替諾昔康、舒多昔康、CP-14,304、阿斯匹林、雙水 楊酯、貝諾酯、三柳膽鎂(trilisate)、痛熱寧(safapryn)、氯喹、二氟尼柳、 芬度柳、雙氯芬酸、芬氯酸、吲哚美辛、舒林酸、托美丁、伊索克酸、呋 羅芬酸、硫平酸、齊多美辛、阿西美辛、芬替酸、佐美酸、環(huán)氯茚酸、奧 昔平酸、聯(lián)苯乙酸、甲滅酸、甲氯芬那酸、氟芬那酸、氟尼酸、托芬那酸、 布洛芬、萘普生、苯噁洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、非諾洛芬、芬布芬、吲 哚洛芬、吡洛芬、卡洛芬、噁丙嗪、普拉洛芬、咪洛芬、硫噁洛芬、舒洛 芬、阿明洛芬、噻洛芬酸、保泰松、羥布宗、非普拉宗、阿扎丙宗和三甲 保泰松(trimethazone)。還可以使用這些非載體抗炎劑的混合物、以及這些 劑的藥學(xué)可接受的鹽和酯。例如，依托芬那酯，其為氟芬那酸衍生物，特 別用于局部應(yīng)用。在所述非甾體抗炎劑中，優(yōu)選布洛芬、萘普生、氟芬那 酸、甲芬那酸、甲氯芬那酸、吡羅昔康和聯(lián)苯乙酸，且最優(yōu)選布洛芬、萘 普生和氟芬那酸。
最后，所謂的"天然"抗炎劑在本發(fā)明中有用。例如，可以使用小燭 樹(shù)蠟、a紅沒(méi)藥醇、蘆薈(aloevem)、 Manjistha (從茜草屬的植物、特別是茜 草(^^^0^^//")中提取)、和Guggul(從沒(méi)藥屬中的植物、特別是印度穆 庫(kù)爾沒(méi)藥(Co/mw》/wra MwhJ)中提取)。
盡管水性溶劑通常優(yōu)選，但是配制成溶液的本發(fā)明的藥物/化妝品組合 物可包括藥學(xué)上或化妝學(xué)上(cosmetically)可接受的有機(jī)溶劑。術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)可 接受的有機(jī)溶劑"和"化妝學(xué)上可接受的有機(jī)溶劑"是指除能將肌醇/IP-6化合物、還任選抗炎劑或其他劑分散或溶解在其中之外，還具有可接受的安全性(例如刺激和敏化特性)以及良好的審美特性(例如不感覺(jué)油膩或發(fā)粘)的有機(jī)溶劑。這種溶劑的最典型的實(shí)例是異丙醇。其他合適的有機(jī)溶劑的
實(shí)例包括丙二醇、聚乙二醇(200-600)、聚丙二醇(425-2025)、丙三醇、1,2,4-丁三醇、山梨醇酯、1,2,6-己三醇、乙醇、丁二醇、水及其混合物。這些溶液包含約0.01%至約5%、優(yōu)選約0.5%至約2%的抗炎劑。
本文所用的"潤(rùn)膚劑"是指用于預(yù)防或減輕干燥和用于保護(hù)皮膚的材料。多種合適的潤(rùn)膚劑是已知的且可在本文使用。通過(guò)引用并入本文的Sagarin, Cosmetics, Science and Technology,第2版,第1巻，第32-43頁(yè)(1972)包括很多合適材料的實(shí)例。有用潤(rùn)膚劑的種類(lèi)的實(shí)例包括下列烴油和蠟，其包括礦物油、凡士林、石蠟、純地蠟(ceresin)、地蠟(ozokerite)、微晶蠟、聚乙烯和全氫角鯊烯；硅油，例如二甲基聚硅氧垸類(lèi)、甲基苯基聚硅氧烷類(lèi)、水溶性和醇溶性硅氧烷二醇共聚物；三甘油酯，例如植物和動(dòng)物脂肪和油，其包括蓖麻油、紅花油、棉籽油、玉米油、橄欖油、魚(yú)肝油、杏仁油、鱷梨油、棕櫚油、芝麻油和大豆油；乙酰甘油酯，例如乙?；瘑胃视王?；乙氧基化甘油酯，例如乙氧基化甘油單硬脂酸酯；含有10至20個(gè)碳原子的脂肪酸的烷基酯，例如脂肪酸的甲酯、異丙酯和丁酯、月桂酸己酯、月桂酸異己酯、棕櫚酸異己酯、棕櫚酸異丙酯、油酸癸酯、油酸異癸酯、硬脂酸十六酯、硬脂酸癸酯、異硬脂酸異丙酯、己二酸二異丙酯、己二酸二異己酯、己二酸二己基癸酯、癸二酸二異丙酯、月桂醇乳酸酯(amyllactate)、乳酸肉豆蔻醇酯和乳酸十六酯；含有10至20個(gè)碳原子的脂肪酸的鏈烯基酯，其包括肉豆蔻酸油醇酯、硬脂酸油醇酯和油酸油酯；含有10至20個(gè)碳原子的脂肪酸，例如壬酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、異硬脂酸、羥基硬脂酸、油酸、亞油酸、蓖麻油酸、花生酸、山崳酸和芥酸；含有10至20個(gè)碳原子的脂肪醇，例如月桂醇、肉豆蔻醇、鯨蠟醇、十六醇、硬脂醇、異硬脂醇、羥基硬脂醇、油醇、蓖麻油醇、山崳醇和瓢兒菜醇以及2-辛基十二醇；脂肪醇醚例如含有10至20個(gè)碳原子的乙氧基化脂肪醇，其包括含有在其中連接的1至50個(gè)環(huán)氧乙烷基或1至50個(gè)環(huán)氧丙垸基的月桂醇、鯨蠟醇、硬脂醇、異硬脂醇、油醇和膽固醇；醚酯，例如乙氧基化脂肪醇的脂肪酸酯；羊毛脂及衍生物，例如羊毛脂、羊毛脂油、羊毛脂蠟、羊毛脂醇、羊毛脂脂肪酸、羊毛酸異丙酯、乙氧基化羊毛脂、乙氧基化羊毛脂醇、乙氧基化膽固醇、丙氧基化羊毛脂醇、乙酰化羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、亞油酸羊毛脂醇酯、蓖麻油酸羊毛脂醇酯、蓖麻油酸羊毛脂醇酯的乙酸酯、乙氧基化醇酯的乙酸酯、羊毛脂的氫解物、乙氧基化氫化羊毛脂、乙氧基化山梨醇羊毛脂以及液體和半固體羊毛脂吸收
性基質(zhì)；多元醇和聚醚衍生物如丙二醇、雙丙二醇、聚丙二醇2,000和4,000、聚氧乙烯聚氧丙二醇、聚氧丙烯聚氧乙二醇、丙三醇、山梨醇、乙氧基化山梨醇、羥丙基山梨醇、聚乙二醇200-6,000、甲氧基聚乙二醇350、 550、750、 2,000和5,000、聚[氧化乙烯]均聚物(100，000-5，000,000)、聚亞烷基二醇及衍生物、己二醇(2-甲基-2,4-戊二醇)、1，3-丁二醇、1,2，6-己三醇、乙基己二醇USP(2-乙基-l，3-己二醇)、C15-C18鄰位二醇和三羥甲基丙烷的聚氧丙烯衍生物；多元醇酯，其包括乙二醇單-和二-脂肪酸酯、二甘醇單-和二-脂肪酸酯、聚乙二醇(200-6,000)單-和二-脂肪酸酯、丙二醇單-和二-脂肪酸酯、聚丙二醇2,000單油酸酯、聚丙二醇2,000單硬脂酸酯、乙氧基化丙二醇單硬脂酸酯、甘油基單-和二-脂肪酸酯、聚甘油聚脂肪酸酯、乙氧基化甘油單硬脂酸酯、1,3-丁二醇單硬脂酸酯、1，3-丁二醇雙硬脂酸酯、聚氧乙烯多元醇脂肪酸酯、脫水山梨糖醇脂肪酸酯和聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯；蠟酯，例如蜂蠟、鯨蠟、肉豆蔻酸肉豆蔻醇酯、硬脂酸硬脂醇酯；蜂蠟衍生物，例如聚氧乙烯山梨醇蜂蠟，它是蜂蠟與各種環(huán)ft^乙烷含量的乙氧基化山梨醇的反應(yīng)產(chǎn)物，形成醚-酯的混合物；包括巴西棕櫚蠟和小燭樹(shù)蠟的植物蠟；磷脂類(lèi)，例如卵磷脂及衍生物；甾醇，例如膽固醇和膽固醇脂肪酸酯；以及酰胺，例如脂肪酸酰胺、乙氧基化脂肪酸酰胺、固體脂肪酸烷醇酰胺。
提供皮膚調(diào)理(conditioning)的特別有用的潤(rùn)膚劑是甘油、己三醇、丁三醇、乳酸及其鹽、脲、吡咯烷酮羧酸及其鹽、氨基酸、胍、雙甘油、三甘油。優(yōu)選的皮膚調(diào)理劑是丙氧基化甘油衍生物。
本發(fā)明的組合物還可通過(guò)噴霧來(lái)遞送。用于本發(fā)明的含義內(nèi)的化妝品和/或皮膚科制劑的合適推進(jìn)劑可從氣溶膠容器中噴射，它們是通常已知的易揮發(fā)的、液化的推進(jìn)劑如烴(丙烷、丁烷、異丁垸)，它們可按它們自身或以混合物使用。也可有利使用壓縮空氣。當(dāng)然，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，雖然無(wú)毒推進(jìn)劑氣體、特別是氟代烴
和氯氟碳(CFC)能從根本上適用于以氣溶膠制劑的形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，雖然如
此，但是由于它們對(duì)環(huán)境或其他共存環(huán)境的影響不確定，故應(yīng)放棄使用。防腐劑
本發(fā)明的肌醇/IP-6化合物可在易腐的物品如食品和藥物中用作防腐劑，它們用于預(yù)防在新鮮水果表面的真菌生長(zhǎng)或可在它們的組合物中包含這種防腐劑。目前，使用化學(xué)品如citrashine鄰苯基苯酚噻苯噠唑(citrashineorthophenilphenol thiabendazole)。例如，穩(wěn)定性試驗(yàn)顯示當(dāng)肌醇/IP-6化合物用作食品解除新鮮水果的表面上的防腐劑時(shí)，它們高度穩(wěn)定。微生物和真菌生長(zhǎng)得到抑制，而食品組分未受到影響。如果服用，本發(fā)明的防腐劑產(chǎn)生毒性或不良反應(yīng)的可能性低于目前復(fù)雜的化學(xué)抗真菌劑。用于分為防腐劑的用途的肌醇/IP-6或可接受的鹽或衍生物的優(yōu)選濃度為約低于0.025%。當(dāng)然，更高的百分比例如多達(dá)99.9%也是有效的。鋅指和鐵指激素受體蛋白與衰老和致癌作用
在生理學(xué)濃度時(shí)，過(guò)渡金屬離子如鐵、鈷和銅對(duì)于生物學(xué)功能是必要的元素；但是在更高水平時(shí)，它們是有毒的。這對(duì)于鐵而言特別正確。過(guò)渡金屬離子、特別是鐵的毒性是事實(shí)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域存在于關(guān)鍵酶和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)分子(DNA結(jié)合蛋白質(zhì))內(nèi)，它們正常結(jié)合鋅(鋅指結(jié)構(gòu)域)，但是可用存在于細(xì)胞中的其他過(guò)渡金屬來(lái)替代鋅。升高的鐵水平以數(shù)種方式促成致癌作用；鐵具有產(chǎn)生損害DNA的高活性自由基的能力，并且快速增殖的變異細(xì)胞已增加對(duì)鐵用于DNA復(fù)制(核糖核苷酸還原酶)和用于線(xiàn)粒體的能量生成的需求。
鐵可在含鋅的睪酮、黃體酮和其他激素類(lèi)的激素受體蛋白中替代鋅。鐵也可產(chǎn)生損害特異性調(diào)節(jié)區(qū)中的DNA的自由基并且可能誘導(dǎo)前列腺、子宮和其他器官中的致癌作用。因此，經(jīng)典的激素可調(diào)節(jié)鐵指受體蛋白。這種激素增強(qiáng)由異常的鐵指受體蛋白介導(dǎo)的自由基對(duì)DNA調(diào)節(jié)區(qū)的破壞作用。通過(guò)分別使用特異性藥物如鐵螯合劑和自由基清除劑的組合來(lái)阻礙異常鐵指蛋白質(zhì)和自由基的生成而將鋅指蛋白質(zhì)維持于完好的含鋅形式是可行的。因此，肌醇/IP-6組合物及其藥理學(xué)可接受的衍生物和鹽以上述的劑量可用于預(yù)防涉及致癌作用和衰老的異常鐵指蛋白質(zhì)的生成。實(shí)施例15 (預(yù)示的)
肌醇/IP-6在吸收基質(zhì)中的局部用或陰道內(nèi)制劑
肌醇/IP-6在吸收基質(zhì)中的局部用或陰道內(nèi)制劑通過(guò)將0.001%至 99.9%、優(yōu)選1%至50%、最優(yōu)選5%至20。/。的肌醇/IP-6摻合至吸收基質(zhì)來(lái) 制備。吸收基質(zhì)通常是無(wú)水基質(zhì)，它具有多次吸收其重量的水以形成乳劑 且仍保持軟膏狀稠度的性質(zhì)。吸收基質(zhì)可在它們的組成方面不同，而且通 常是動(dòng)物甾醇與凡士林如親水型凡士林(Hydrophilic Petrolatum), U.S.P的混 合物。最常用的可商購(gòu)的產(chǎn)品是Eucerin和Aquaphor (Beiersdorf)和Polysorb (Fougera)。局部用制劑的一種優(yōu)選的實(shí)施方案通過(guò)將10。/。肌醇/IP-6化合物 溶解于去離子水然后將溶液摻合至wt/wt等量的Aquaphor來(lái)制備。此外， 該肌醇/IP-6化合物或其衍生物可摻合至香脂(balm)或棒，它們用來(lái)應(yīng)用至 唇以治療皰疹感染。人們應(yīng)理解，所述肌醇/IP-6衍生物可在局部用制劑中 用來(lái)代替肌醇/IP-6。應(yīng)理解，適當(dāng)濃度的取代的肌醇/IP-6衍生物可用來(lái)代 替肌醇/IP-6而不偏離本發(fā)明的范圍。也應(yīng)理解，這種制劑可用于治療局部 疾患如病毒感染、真菌感染、易感染性細(xì)菌感染、輻射攻擊(包括紫外線(xiàn)、 醫(yī)療或原子輻射)、皮膚癌或任何其他由上述機(jī)理介導(dǎo)的疾患。 實(shí)施例l5 (預(yù)示的)
痤液制劑(Acne Formulation )和曬斑治療
用于治療和控制痤瘡的制劑在合適的局部用洗劑中包含按重量計(jì)約 7.5%至約10。/。的肌醇/IP-6化合物。該痤瘡制劑可包含約1%至約99%肌醇 /IP-6化合物、其衍生物或類(lèi)似物。優(yōu)選地，所述組合物還可包含其他痤瘡 藥物如類(lèi)視黃醇衍生物。優(yōu)選的范圍為約5%至約15%。該洗劑每天應(yīng)用至 皮膚兩次或三次。
上述洗劑還可用于控制曬傷的癥狀。 實(shí)施例16 (預(yù)示的) 全身給藥
包含約1%至100。/?；钚猿煞值募〈?IP-6化合物的全身制劑可以口服、 靜脈內(nèi)或通過(guò)任何可接受的途徑給藥。例如，已證明在00明膠膠囊中以 1,250 mg/膠囊制備的肌醇/IP-6組合物有效預(yù)防和/或改善電離輻射暴露的 不利的健康影響。該制劑可按有味或無(wú)味的口服溶液提供。同樣，可以制備可注射的形式。
如上所述，對(duì)于70Kg個(gè)體，安全且有效的全身日劑量的范圍可為750 mg至5克，其中優(yōu)選的范圍為1至4克，且最優(yōu)選的劑量為1.5克至2.5 克。
試劑盒
還可供應(yīng)試劑盒，以便與用于保護(hù)免遭電離輻射暴露或用于電離輻射 暴露的療法的主題肌醇/IP-6組合物一起使用。因此，本發(fā)明的主題組合物 可通常以?xún)龈尚问?散劑或膠囊劑)、片劑或咀嚼片劑或容器中的含水溶液劑 單獨(dú)或與另外的所需類(lèi)型的肌醇/IP-6組合物的組合供應(yīng)。該肌醇/IP-6組合 物優(yōu)選以口服和局部用制劑兩者的單位劑量與一組使用說(shuō)明書(shū)一起包含在 該試劑盒中。通常而言，理想的是包含稀釋該活性成分的惰性填充劑 (extender)或賦形劑，其中該賦形劑可按總組合物的按重量計(jì)約1至99.999% 存在。該試劑盒可任選包含單獨(dú)或作為口服或局部用制劑的組分的一種或 多種抗微生物劑、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑、防曬劑或防曬用品、碘片、化妝品著色劑或 涂料、鎮(zhèn)痛藥、預(yù)濕小毛巾(towlette)、防腐軟膏或巾(wipe)、或者食品。用 于試劑盒及其組分的包裝優(yōu)選是可處理的，甚至更優(yōu)選是可生物降解的。
包括但不限于本說(shuō)明書(shū)中所引用的專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)的所有出版物引入 本文作為參考，如同表示每個(gè)獨(dú)立的出版物明確而獨(dú)立地以等同全文列出 的方式引作參考。
上文的描述全部公開(kāi)了包括其優(yōu)選實(shí)施方案在內(nèi)的本發(fā)明。本文明確 公開(kāi)的實(shí)施方案的各種修飾和改進(jìn)在下列權(quán)利要求的范圍內(nèi)。在沒(méi)有進(jìn)一 步詳細(xì)描述下，認(rèn)為本領(lǐng)域技術(shù)人員可使用在前的描述來(lái)利用本發(fā)明至最 充分的程度。因此，本文實(shí)施例應(yīng)被解釋為只是示例性的，而非以任何方 式限定本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的實(shí)施方案中要求保護(hù)的獨(dú)占的(exclusive) 性質(zhì)或特權(quán)如下述所定義。
權(quán)利要求
1.用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中電離輻射暴露的急性短期不利的健康影響的方法，所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物給藥有效量的包含任意組合的IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物的藥物組合物；并預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物中電離輻射暴露的急性短期不利的健康影響。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述藥物組合物還包含肌醇。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述藥物組合物還包含至少一種藥學(xué)可接受的賦形劑或載體。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述藥物組合物是液體、洗劑、 乳膏劑、凝膠劑、軟膏劑、散劑、片劑、咀嚼片劑、栓劑或膠囊劑。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述藥物組合物是腸內(nèi)制劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述藥物組合物包含按重量計(jì)約 0.1%至約100%的量的任意組合的IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受 的衍生物。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述藥物組合物包含按重量計(jì)約 0.1%至約50%的量的任意組合的IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受 的衍生物，且還包含按重量計(jì)約0.1%至約50%的量的任意組合的肌醇、其 藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述藥物組合物包含約30:1至約 1:30的比率的任意組合的肌醇和IP-6、它們的藥學(xué)可接受的鹽或它們的藥 學(xué)可接受的衍生物。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述任意組合的肌醇和IP-6、它 們的藥學(xué)可接受的鹽或它們的藥學(xué)可接受的衍生物以約5:1至約1:5的比率 存在。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述藥物組合物是腸胃外制劑。
11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述藥物組合物包含按重量計(jì) 約0.01%至約20%的量的任意組合的IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可 接受的衍生物。
12. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述藥物組合物包含按重量計(jì) 約0.01%至約20%的量的任意組合的IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可 接受的衍生物，且還包含按重量計(jì)約0.01%至約20%的量的任意組合的肌 醇、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物。
13. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述藥物組合物包含按重量計(jì) 約0.1%至約10%的量的任意組合的IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接 受的衍生物，且還包含按重量計(jì)約0.1%至約10%的量的任意組合的肌醇、 其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物。
14. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述藥物組合物包含按重量計(jì) 約0.5°/。至約5%的量的任意組合的IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接 受的衍生物，且還包含按重量計(jì)約0.5%至約5%的量的任意組合的肌醇、 其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物。
15. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述藥物組合物包含約30:1至 約1:30的比率的任意組合的肌醇和IP-6、它們的藥學(xué)可接受的鹽或它們的 藥學(xué)可接受的衍生物。
16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述任意組合的肌醇和IP-6、 它們的藥學(xué)可接受的鹽或它們的藥學(xué)可接受的衍生物以約5:1至約1:5的比 率存在。
17. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述藥物組合物還包含抗氧化 劑、抗微生物劑、化學(xué)治療劑、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑或營(yíng)養(yǎng)食品、鎮(zhèn)痛藥、防曬劑、 增濕劑或它們的任意組合。
18. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述肌醇和IP-6以藥學(xué)可接受 的鹽、異構(gòu)體、酉旨、衍生物或它們的任意組合的形式存在。
19. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述藥物組合物在電離輻射暴露 前給藥至少一天。
20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述給藥每天進(jìn)行至少兩次。
21. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述給藥每天進(jìn)行至少三次。
22. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述藥物組合物以至少一種含有 總計(jì)為約1克至約IO克的任意組合的肌醇、IP-6、它們的藥學(xué)可接受的鹽 或它們的藥學(xué)可接受的衍生物的劑量給藥。
23. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述藥物組合物以至少一種含有 約2克至約5克的任意組合的肌醇、IP-6、它們的藥學(xué)可接受的鹽或它們的 藥學(xué)可接受的衍生物的劑量給藥。
24. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述藥物組合物以散劑、片劑或 膠囊劑口服給藥，并以洗劑、乳膏劑、軟膏劑或凝膠劑局部給藥。
25. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述電離輻射暴露包括紫外線(xiàn)、X射線(xiàn)、Y射線(xiàn)、宇宙射線(xiàn)、粒子束或它們的任意組合。
26. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述電離輻射來(lái)源于一種或多種 天然源。
27. 根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述一種或多種天然源包括 太陽(yáng)、外層空間或存在于大氣、地面、礦床、礦石、地下水、水體或石頭 中的放射性元素。
28. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述電離輻射來(lái)源于一種或多種 人源性源。
29. 根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述人源性源包括紫外線(xiàn)、 治療性輻射源、核電站、核燃料、核武器、核塵埃和放射性消耗裝置。
30. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述不利的健康影響包括皮膚 燒傷、疹、粘膜退化或出血、胃腸道退化或出血、腹瀉、貧血或過(guò)度疲勞。
31. 用于安全地增加向需要電離輻射治療的哺乳動(dòng)物所提供的治療性電離輻射的劑量的方法，所述方法包括在暴露于治療性輻射電離輻射之前向哺乳動(dòng)物給藥包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物的藥物組合物；并將所述哺乳動(dòng)物暴露于大于在不存在所述藥物組合物時(shí)所述哺乳動(dòng)物 的最大安全劑量的劑量的治療性輻射電離輻射。
32. 用于保護(hù)工人以免工作場(chǎng)所電離輻射暴露的短期不利的健康影響 的方法，所述方法包括在暴露于工作場(chǎng)所電離輻射之前向工人給藥包含根據(jù)權(quán)利要求1所述 的組合物的藥物組合物；并保護(hù)所述工人以免工作場(chǎng)所電離輻射暴露的不利的健康影響。
33. 用于保護(hù)軍事人員以免人源性電離輻射暴露的短期不利的健康影響的方法，所述方法包括在暴露于軍事電離輻射之前向軍事人員給藥包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物的藥物組合物；并保護(hù)所述軍事人員以免人源性電離輻射暴露的不利的健康影響。
34. 用于保護(hù)軍事人員以免人源性電離輻射暴露的短期不利的健康影 響的試劑盒，所述試劑盒包含容器，其含有包含任意組合的IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物的多種藥物組合物，所述多種藥物組合物包括有效保護(hù)軍事人 員以免人源性電離輻射暴露的短期不利的健康影響的局部用制劑和口服制 劑。
35. 根據(jù)權(quán)利要求34所述的試劑盒，其中所述多種藥物組合物以單位 劑量供應(yīng)。
36. 根據(jù)權(quán)利要求34所述的試劑盒，其包含足以使用至少一天的單位
37. 根據(jù)權(quán)利要求34所述的試劑盒，其中所述多種藥物組合物的至少 一種還包含任意組合的肌醇、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物。
38. 根據(jù)權(quán)利要求37所述的試劑盒，其中所述多種藥物組合物以至少 一種各自包含總計(jì)為約1克至約IO克的任意組合的肌醇、IP-6、它們的藥 學(xué)可接受的鹽或它們的藥學(xué)可接受的衍生物的劑量給藥。
39. 用于預(yù)防哺乳動(dòng)物中電離輻射暴露的急性短期不利的健康影響的 局部用制劑，所述局部用制劑包含有效預(yù)防哺乳動(dòng)物中電離輻射暴露的急性短期不利的健康影響的有效量的組合物，所述組合物包含任意組合的IP-6、其藥理學(xué)可接受的鹽或其 藥理學(xué)可接受的衍生物和至少一種藥理學(xué)可接受的載體。
40. 根據(jù)權(quán)利要求39所述的局部用制劑，其中所述組合物是洗劑、乳 膏劑或凝膠劑。
41. 根據(jù)權(quán)利要求39所述的局部用制劑，其中所述電離輻射暴露的急 性短期不利的健康影響包括曬斑。
42. 根據(jù)權(quán)利要求39所述的局部用制劑，其中所述組合物在所述電離 輻射暴露前足夠的時(shí)間施用至所述哺乳動(dòng)物的皮膚以使所述任意組合的 IP-6、其藥理學(xué)可接受的鹽或其藥理學(xué)可接受的衍生物被皮膚的細(xì)胞吸收。
43. 根據(jù)權(quán)利要求39所述的局部用制劑，其中所述藥物組合物在所述 電離輻射暴露前3至12小時(shí)施用至所述哺乳動(dòng)物的皮膚?！?br> 44. 根據(jù)權(quán)利要求39所述的局部用制劑，其還包含抗氧化劑、抗微生 物劑、營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)劑或營(yíng)養(yǎng)食品、鎮(zhèn)痛藥、防曬劑、日光曬黑制劑(sim tanning preparation)、增濕劑或它們的任意組合。
45. 根據(jù)權(quán)利要求39所述的局部用制劑，其還包含任意組合的肌醇、 其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物。
46. 根據(jù)權(quán)利要求40所述的局部用制劑，其中所述組合物包含按重量 計(jì)約0.1%至約50%的量的任意組合的IP-6、其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可 接受的衍生物，且還包含按重量計(jì)約0.1%至約50%的量的任意組合的肌醇、 其藥學(xué)可接受的鹽或其藥學(xué)可接受的衍生物。
47. 根據(jù)權(quán)利要求46所述的局部用制劑，其中所述組合物包含約30:1 至約1:30的比率的任意組合的肌醇和IP-6、它們的藥學(xué)可接受的鹽或它們的藥學(xué)可接受的衍生物。
48.根據(jù)權(quán)利要求46所述的局部用制劑，其中所述任意組合的肌醇和 IP-6、它們的藥學(xué)可接受的鹽或它們的藥學(xué)可接受的衍生物以約5:1至約1:5 的比率存在。
全文摘要
肌醇六磷酸(IP-6)是聚磷酸化的碳水化合物，具有預(yù)防活性氧物質(zhì)介導(dǎo)的誘變、細(xì)胞損傷和致癌作用的有效抗氧化活性。IP-6也活化DNA修復(fù)機(jī)理。亞致死的輻射通過(guò)導(dǎo)致細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期停滯及凋亡的自由基、活性氧物質(zhì)和嘧啶交聯(lián)物的形成而導(dǎo)致DNA損害。IP-6和/或肌醇及它們的藥學(xué)可接受的鹽和衍生物(包括焦磷酸酯和檸檬酸酯衍生物)顯著解除輻射的有害作用，從而以保護(hù)性的方式影響細(xì)胞周期進(jìn)程(更多處于保護(hù)性G1期的細(xì)胞)，并減少細(xì)胞凋亡和胱天蛋白酶-3激活。具有15種類(lèi)似效能的IP-6的多種鹽被使用，且IP-6+肌醇的組合提供免于輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷的最佳保護(hù)。因此，IP-6和肌醇是保護(hù)以免核輻射、太陽(yáng)輻射及其他輻射損傷的有效試劑。
文檔編號(hào)A61K31/66GK101578042SQ200780030445
公開(kāi)日2009年11月11日 申請(qǐng)日期2007年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月16日
發(fā)明者A·M·沙姆斯丁, I·武塞尼克 申請(qǐng)人:Ip-6研究公司