專利名稱：：摩爾比為1:100至1:350的阿洛夫定和齊多夫定的組合的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及HIV的治療方法和藥物組合物，其中以指定比例給藥以已知的HIV抗病毒劑阿洛夫定(alovudine)和齊多夫定(zidovudine),所述給藥任選地與其他的抗病毒劑聯(lián)合進行。
背景技術(shù)：
：齊多夫定，又名AZT或2，3，-雙脫氧-3，-疊氮-胸苷，是注冊用于治療HIV的第一個核普類似物。齊多夫定抑制了病毒編碼逆轉(zhuǎn)錄酶，因此阻斷了病毒的復(fù)制循環(huán)并且有效地減慢了AIDS的發(fā)展。當首先作為長效單劑治療引入并用于處方中時，齊多夫定會引起多種組織病變，其特征為線粒體機能障礙，包括骨骼肌肌病、擴張性心肌炎和肝中毒。雖然仍然與其他HIV抗病毒劑一起廣泛地使用，但是其毒性問題，尤其是血液毒性問題，以及產(chǎn)生耐受性問題限制了齊多夫定的臨床應(yīng)用。目前的給藥狀態(tài)是每日兩劑，一般為300mgBID(即，每日成人的劑量為600mg，早晚以單獨的300mg片劑服用)。即寸吏是耳關(guān)合的單位劑型例如Combivir(齊多夫定加4立米夫定)或Trizivir(齊多夫定加拉米夫定加阿巴卡韋)也必須采用BID。從患者適應(yīng)性的角度考慮，這不是一種在最恰當時間的方便的劑量方案。但是由于許多需要服用齊多夫定的患者還被要求服用其他HIV抗病毒藥物，例如蛋白酶抑制劑和/或非核苷抑制劑或者癥狀性藥物例如抗真菌劑、抗CMV抗病毒劑、抗精神病劑或免疫刺激劑，因此情況對于HIV患者來說更加糟糕。這些另外的藥物的服用周期通常與齊多夫定的不同(QD、TID等)，導致服藥方式非常復(fù)雜，難以適應(yīng)。例如，嚴重的HIV患者服藥負擔每天超過15-20片的情況并不罕見，他們需要在一天中的多個時間點服藥，一些在餐前一些在餐后，在每個時間點服藥的數(shù)目也有變化。對于容易出現(xiàn)耐藥突變株的HIV來說，缺乏對劑量方案的適應(yīng)性是非常重要的，其中所述突變株的出現(xiàn)是由于對HIV復(fù)制機制能力的錯誤校對而產(chǎn)生的。如果HIV藥物的血清內(nèi)水平和三磷酸核苷的胞內(nèi)4水平降低到某一限度以下時，耐藥突變林的選擇和繁殖會劇烈加速。如果沒有嚴格地執(zhí)行規(guī)定的劑量方案，這種情況下會在HIV患者中迅速發(fā)生。阿洛夫定(又名FLT或2，,3，-雙脫氧-3，-氟胸苷)是一種在二十世紀九十年代早期進行臨床開發(fā)的潛在HIV抗病毒劑。它的開發(fā)在在病毒感染患者中觀察到劑量依賴性血液毒性之后終止?；诩毎囵B(yǎng)實驗，Su油eth等人，J齒^ra"gC/2譜o/7er199640(2):331-335發(fā)現(xiàn)該血液毒性是DNA斷裂和細胞程序死亡所導致的。然而，近來的研究顯示阿洛夫定的毒性是由于對線粒體DNA合成的抑制而產(chǎn)生的。在阿洛夫定原始開發(fā)終止之前登記的國際專利申請WO91/01137,描述了聯(lián)合使用3，-氟化抗病毒劑例如FLT(現(xiàn)在稱為INN阿洛夫定)和某些2',3，-雙脫氧核苷酸包括AZT(現(xiàn)在稱為INN齊多夫定)的協(xié)同抗病毒效果。該專利申請在體外和動物實-驗中例舉了AZT:FLT的比例為1:1和8:1的組合。該專利申請清楚地表明優(yōu)選FLT和AZT以基本上相等的量進行給藥。例如專利申請的第5頁第16行顯示，給出協(xié)同效果的FLT與AZT優(yōu)選范圍是10:1到1:20,其最佳范圍是1:1到1:10的FLT:AZT。WO91/01137中的表1表明，1:1比例的FLT:AZT相對于1:8比例的FLT:AZT具有更優(yōu)越的通過免疫熒光實驗測量的治療指數(shù)，IC5。/IC5()，并且具有相當?shù)耐ㄟ^ELISA測量的治療指數(shù)。國際專利申請WO2004/002433描述了阿洛夫定和另一種名稱為阿巴卡韋的NRTI組成的替代組合物。其在減少病毒方面的協(xié)同作用活性在HIV感染患者的臨床實驗中得到了確認，其中的患者除了原來的反轉(zhuǎn)病毒療法治療以外還需要另外服用7.5mgQD的阿洛夫定。該研究設(shè)計以及全部的結(jié)果在Katlama等人，爿/AS200418(9):1299-1304中有所描述。尤其應(yīng)當注意的是其中排除了已經(jīng)采用齊多夫定進行了治療的患者，因為感覺阿洛夫定和齊多夫定非常類似的結(jié)構(gòu)能夠產(chǎn)生另外的血液毒性。阿巴卡韋一般是通過300mgBID或600mgQD進行給藥的。這相當于阿洛夫定比阿巴卡韋的摩爾比為1:70。在專利說明書中協(xié)同抗病毒作用在摩爾比為1:200的細胞培養(yǎng)中得到了證實。然而，既沒有測量到組合物的細胞毒性，也沒有測量到線粒體毒性。在其中的對比實施例中，摩爾比介于這些值之間的阿洛夫定阿巴卡韋不能夠逆轉(zhuǎn)阿洛夫定的線粒體毒性。核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的相互作用，尤其是線粒體毒性，是一種復(fù)雜并且缺乏了解的現(xiàn)象。在Vidal等人，爿w",cra6jgC/zemoAer200650(11):3824-3832報告的非常全面的系列研究中，NRTI替諾福韋顯示出明顯提高的2',3，-雙脫氧肌苷(ddl)線粒體毒性(通過mtDNA貧化測定)。在3uM2，，3，-雙脫氧肌苷:30uM替諾福韋的劑量下(即，1:10的摩爾基數(shù))，mtDNA的減少大約為80%,在較高摩爾比下的為>90%。相反，當在3、40和200uM齊多夫定比30um替諾福韋下(即1:10、1:1左右和6.5:1左右)測試時，替諾福韋沒有影響齊多夫定的線粒體毒性。發(fā)明概述現(xiàn)在我們發(fā)現(xiàn)，以完全超出現(xiàn)有技術(shù)的特定比例范圍對阿洛夫定和齊多夫定進行聯(lián)合給藥，產(chǎn)生了出乎意料的降低線粒體毒性的相互作用，同時保持了阿洛夫定和齊多夫定的協(xié)同抗病毒效力。根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供了一種治療或預(yù)防HIV的方法，其包括以1:100到l:350的摩爾比范圍對阿洛夫定和齊多夫定進行同時或順續(xù)的給藥。適宜地，所述方法包括向有需要的對象給予安全且有效量的阿洛夫定和齊多夫定，從而治療或預(yù)防HIV。本發(fā)明的一個相關(guān)方面提供了阿洛夫定和齊多夫定在制造同時或順續(xù)給藥的藥物中的用途，借此所述藥物適于以阿洛夫定與齊多夫定的比例為1:100到1:350的劑量進行定量給藥。一個相關(guān)的方面，提供了同時或順續(xù)給藥的阿洛夫定和齊多夫定在治療或預(yù)防HIV中的用途。本發(fā)明的第二方面提供了適于在所述方法中使用的藥物組合物，該組合物以1:100到1:350的摩爾比范圍包含阿洛夫定和齊多夫定。相應(yīng)地，本發(fā)明還提供了藥盒組件，其包括含有阿洛夫定的藥物組合物和含有齊多夫定的藥物組合物，其特征在于阿洛夫定和齊多夫定以1:100到1:350的摩爾比范圍存在于藥盒中。適宜地，所述藥盒組件還另外包括指導同時或順續(xù)地給藥以用于治療或預(yù)防HIV的包含阿洛夫定藥物組合物和包含齊多夫定藥物組合物的說明書。本發(fā)明的組合物緩解了現(xiàn)有技術(shù)中采用齊多夫定和阿洛夫定治療的缺點，齊多夫定/阿洛夫定的組合明顯地降低了線粒體毒性并且因此6改善了安全性，提高了患者的適應(yīng)性，改善了日常濃度水平的一致性并且減少了耐藥突變林的產(chǎn)生。雖然不希望受到理論的束縳，但是我們的原始數(shù)據(jù)提出了在阿洛夫定和齊多夫定之間采用特征比例能夠使齊多夫定干擾線粒體轉(zhuǎn)運機制，從而防止了活性代謝物阿洛夫定三磷酸酯受到特別敏感的線粒體DNA聚合酶的不利影響。以前，該有益效果在現(xiàn)有技術(shù)中的AZT/FLT組合物中并沒有發(fā)現(xiàn)，因為現(xiàn)有技術(shù)的組合物是以由基本上等摩爾量的兩種核苷所引起的細胞毒性和線粒體DNA的減少為特征的。與現(xiàn)有技術(shù)中WO91/01137中的組合物相反，其中該專利是在0.1到1mg/kg/天的阿洛夫定劑量結(jié)合1-10mg/kg/天的齊多夫定劑量的基礎(chǔ)上進行判斷的，本發(fā)明提出了使0.005到0.05mg/kg/天左右的阿洛夫定劑量結(jié)合l-10mg/kg/天相應(yīng)的阿洛夫定劑量。最近的臨床研究提出。WO91/01137中優(yōu)選的1:10的比例，所述比例是以齊多夫定的有效劑量為基礎(chǔ)計的，產(chǎn)生了毒性水平的阿洛夫定和/或齊多夫定。方便地，本發(fā)明的組合物和方法使用1:150到l:250比例范圍內(nèi)的，例如1:150到1:200范圍內(nèi)的阿洛夫定和齊多夫定。對于70kg的成人來說，阿洛夫定的一般最大日常劑量為4mg/天左右。因此，根據(jù)本發(fā)明方法的劑量方案通常包括每天2-4mg的阿洛夫定劑量和每天300-900mg的齊多夫定劑量。特別優(yōu)選的成人劑量方案包括2-3mg/天，例如2mg和2.5mg每天的日常阿洛夫定劑量。目前優(yōu)選的成人劑量方案具有450-600mg范圍內(nèi)的，尤其是600mg的每日齊多夫定劑量。2.5mg阿洛夫定和600mg齊多夫定的每日劑量相當于1:218的摩爾比，其中使用244作為阿洛夫定的分子量，使用269作為齊多夫定的分子量。在定義比例范圍內(nèi)的阿洛夫定和齊多夫定的聯(lián)合給藥可以順序或基本上順序地發(fā)生，例如當阿洛夫定和齊多夫定是在單獨的劑量單元中各自給藥的時，其一般為膠嚢和片劑或者它們中的一種。齊多夫定一4殳的給藥方式是BID,例如300mgBID。然而，通常優(yōu)選的阿洛夫定給藥方式是QD,所以本發(fā)明的一種方便的順續(xù)給藥方式包括早晨給予300mg齊多夫定片劑和2、3或4mg阿洛夫定片劑，并且晚上給予300mg齊多夫定(反之亦然)。為了簡化服藥方案，一種代替性的但是目前較少采用的方案包括給藥以300mg齊多夫定片劑或膠囊和l、1.5或2mg含有阿洛夫定的片劑或膠嚢，早晚一起或緊接著連續(xù)吞服。順序給藥劑型例如前段所描述的那些劑型可以以單獨的包裝存在，例如各自包含泡罩包裝的齊多夫定片劑或泡罩包裝的阿洛夫定片劑的單獨的紙盒。其他的例子可以包括裝有齊多夫定和阿洛夫定的膠嚢或片劑的單獨藥瓶。通常至少一個藥瓶或紙盒會包括包裝說明書或其他的印刷說明書，其建議阿洛夫定應(yīng)當以1:100到1:350的特征比例與齊多夫定共同給藥。然而，方便地，通常的紙盒同時包括含有阿洛夫定的泡罩板和含有齊多夫定的泡罩板。在優(yōu)選的順序給藥劑型中，獨立的阿洛夫定和齊多夫定片劑或膠嚢是以下述的空間排布存在于同一泡罩板上的，所述空間排布能夠提供各組分正確劑量的視覺刺激。例如，如果阿洛夫定的計劃劑量為2、3或4mgQD,齊多夫定的劑量為300mgBID,則泡罩板可以設(shè)置成一行阿洛夫定片劑平行于兩行各自具有相同數(shù)目齊多夫定的片劑。因此，患者能夠很容易地確定在給定的給藥時機是應(yīng)當同時服用阿洛夫定和齊多夫定還是僅服用齊多夫定。泡罩板上單獨的泡罩可以標記有標記，例如一周中的笫幾天，從而獲得進一步的支持順從性。然而，優(yōu)選地，阿洛夫定和齊多夫定存在于一個常用的單位劑型，例如膠嚢或糖衣丸或者更優(yōu)選的片劑中。所述單位劑型可以是適于BID給藥的，即每個劑量單元中含有計劃每日劑量一半的阿洛夫定和齊多夫定組分，假設(shè)在任一定量給藥時機處僅給予單個的片劑或膠嚢。根據(jù)該實施方式的一般單位劑型包括含有300mg齊多夫定和1或1.25mg阿洛夫定的膠嚢或片劑。如果劑量方式需要同時攝入多個相同的劑量單元(如在洛匹那韋/利托那韋組合物KaletraTM的情況下，其一般以兩個軟片劑的形式每天給藥三次，每個片劑含有133mg洛匹那韋和33mg利托那韋)，可以相應(yīng)地調(diào)節(jié)每個單位劑型中阿洛夫定和齊多夫定的量。一種代替性的單位劑型適于QD給藥。QD給藥能夠促進順從性，同時使毒性最小化，并且提供了協(xié)同的抗病毒效果。因此，為成人設(shè)計的片劑或月交嚢可以含有2-4mg阿洛夫定和300-600mg齊多夫定。優(yōu)選的單位劑型包括82mg阿洛夫定和300mg、400mg、500mg或者尤其是600mg齊多夫定；2.5mg阿洛夫定和300mg、400mg、500mg或者尤其是600mg齊多夫定；3mg阿洛夫定和300mg、400mg、500mg或者尤其是600mg齊多夫定；或者4mg阿洛夫定和300mg、400mg、500mg或者尤其是600mg齊多夫定。由于在HIV治療中聯(lián)合治療已經(jīng)是普遍采用的規(guī)則而不是例外情況，因此本發(fā)明的方法和藥物組合物可以進一步包括一種或兩種另外的藥物活性劑，尤其是另外的HIV抗病毒劑。所述另外的HIV抗病毒劑或抗病毒集可以采用機理分類類別中的任何一種，例如核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTI),非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTI),蛋白酶抑制劑(PI)，整合酶抑制劑，融合抑制劑，成熟抑制劑等。另外的HIV抗病毒劑一般以它們的常規(guī)劑量進行聯(lián)合給藥或聯(lián)合制劑。代表性的NRTI包括雙脫氧胸苷(d4T,Zerit)，2，,3，-雙脫氧胞苷(ddC)，2，,3，-雙脫氧肌普(ddl,Videx),阿巴卡韋(ABC,Ziagen)，拉米夫定(3TC,Epivir)恩曲他濱(FTC,Emtriva),racevir(夕卜消旋的FTC)阿德福韋(ADV),恩他卡韋(BMS200475),阿洛夫定(FLT),替諾福韋地索普西富馬酸鹽(TNF,Viread),amdoxavir(DAPD),D-d4FC(DPC-817),dOTC(ShireSPD754),艾夫他濱(elvucitabine)(AchillionACH-126443),BCH10681(Shire)SPD-756,racivir,D畫FDOC,GS7340,INK-20(硫醚磷酯AZT,Kucera),2'3'-雙脫氧-3'-氟代鳥普(FLG)以及它的前藥例如MIV-210，reverset(RVT,D-D4FC,PharmassetDPC-817)。代表性的NNRTI包括地拉夫定(Rescriptor),衣非韋侖(DMP-266，Sustiva),奈韋拉平(BIRG-587，Viramune),(+)胡桐素A和B(AdvancedLifeSciences),卡泊韋林(AG1549fS-1153;Pfizer),GW-695634(GW-8248;GSK),MIV-150(Medivir),MV026048(MIV-160MedivirAB),MIV-170(Medivir)NV-0522(IdenixPharm.),R-278474(Johnson&Johnson),RS-1588(IdenixPharm.),TMC-120/125(Johnson&Johnson),nlpivi腦(TMC-278,165335;Johnson&Johnson),UC-781(BiosynInc.)和YM215389(Yama醒shi)。代表性的HIV蛋白酶抑制劑包括BEA-403(Medivir),PA-457(Panacos)，KPC-2(KuceraPharm.),5HGTV-43(EnzoBiochem),安潑那韋(VX-478,Agenerase),阿扎那韋(Reyataz)，印地那韋硫酸鹽(MK-639,Crixivan),Lexiva(fosamprenavircalcium,GW—433908或908,VX-175),利托那韋(Norvir),洛匹那韋+利托那韋(ABT-378,Kaletra),替普拉那維，那非那韋曱磺酸鹽(Viracept),沙奎那韋(Invirase，F(xiàn)ortovase),AG1776(JE-2147,KNI-764;NipponMiningHoldings),AG-1859(Pfizer),DPC-681/684(BMS),GS224338;GileadSciences),KNI-272(NipponMiningHoldings),Nar-DG-35(Narhex)，P(PL)-IOO(P-1946;ProcyonBiopharma),P-1946(ProcyonBiopharma),R-944(Hoffmann-LaRoche),RO曙0334649(Hoffmann-LaRoche),TMC-114(Johnson&Johnson),VX-385(GW640385;GSK/Vertex),VX-478(Vertex/GSK)。其他HIV抗病毒劑包括引入抑制劑，包括融合抑制劑，CD4受體抑制劑，CCR5共受體抑制劑和CXCR4共受體抑制劑，或者它們的藥學上可接受的鹽或前藥。引入抑制劑的例子是AMD-070(AMD]1070;A證Med)，BlockAide/CR(ADVENTRXPharm.),BMS806(BMS-378806;BMS),Enfurvirtide(T-20,R698,Fuzeon),KRH1636(KurehaPharmaceuticals),ONO-4128(GW-873140,AK-602,E-913;ONOPharmaceuticals)，Pro-140(ProgeniesPharm)，PR0542(ProgeniesPharm.),SCH-D(SCH-417690;Schering-Plough),T畫1249(R724;Roche/Trimeris),TAK-220(TakedaChem.Ind.)，TNX-355(Tanox)和UK-427,857(Pfizer)。整合酶抑制劑的例子L-870810(Merck&Co.),c-2507(Merck&Co.)和S(RSC)-1838(Shionogi/GSK)。目前，希望用于本發(fā)明的方法和藥物組合物中的另外抗病毒劑是MIV-160,又名順-l-(5-氰基吡啶-2-基)-3-(4,7-二氟-l,la,2,7b)-四氬環(huán)丙烯并[c]色烯-l-基)脲。MIV-160的合成描述于WO02/070516中。適宜的成人劑量包括250-1500mg,例如400或800mg,—般為QD或BID。包括MIV-160的本發(fā)明的實施方式能夠方便地與細胞色素拮抗劑共給藥，尤其是與Cyp4503A4抑制劑例如葡萄果汁或更優(yōu)選利托那韋。利托那韋是一種已經(jīng)注冊用于治療HIV的蛋白酶抑制劑，其推薦成人劑量為600mgBID,但是當用作加強劑(booster)時，可以采用低得多的劑量，一般為100或200mgBID。使用加強劑一般可以使MIV-160的劑量降低。本發(fā)明該方面的一般的單元劑量實施方式包括如下片劑，其含有<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>其他的本發(fā)明中所采用的NNRTI是MIV-170,又名N-[(lS,laR,7bR)-4,7畫二氟-l,la,2，7b-四氫環(huán)丙烯并[c]色烯曙l畫基卜N，-[5-(4-(磺酰氨基)苯氧基)-2-吡啶基]脲。MIV-170的合成在WO05/066131中給出。一般的成人劑量為100-900mg/天左右，尤其是300-600mgQD。MIV-170與特;f正比例的阿洛夫定和齊多夫定的組合通常不需要利托那韋加強，因為其已經(jīng)明顯地改善了口服生物利用度。該實施方式的一般給藥方案包括:<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>現(xiàn)在回到對本發(fā)明的一般性描述，阿洛夫定和齊多夫定通常并不被認為是難以制劑的，常規(guī)的醫(yī)學方法、賦形劑和載體都是可以廣泛地獲得的。阿洛夫定和齊多夫定與任意上述另外抗病毒劑進行聯(lián)合制劑時，可能需要采用本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的適于另外抗病毒劑的制劑。優(yōu)選的另外抗病毒劑MIV-160、MIV-170和利托那韋都不能對制劑構(gòu)成難以克服的挑戰(zhàn)。這樣的公知醫(yī)學方法包括將制定特征比例范圍內(nèi)的阿洛夫定和齊多夫定以及任意的另外抗病毒劑與常規(guī)的藥物載體混合的步驟。通常，制劑是通過將活性試劑與液體載體或精細粉碎的固體載體或者二者進行均勻且緊密地混合，然后如果需要，將產(chǎn)品成型而制備的。本發(fā)明提供了用于制備藥物組合物的方法，其包括將指定特征比例范圍的阿洛夫定和齊多夫定以及任選的一種或兩種另外的抗病毒劑與藥物可接受的載體或介質(zhì)結(jié)合或混合。如果藥物制劑的制造涉及緊密混合藥物賦性劑并且活性成分是鹽的形式，則通常優(yōu)選使用性質(zhì)為非堿性的賦性劑，即酸性或中性的賦形劑。本發(fā)明的口服給藥制劑可以以不連續(xù)的單元的形式存在，例如膠嚢、扁形膠嚢劑或片劑，其各自含有預(yù)定量的活性試劑。代替地它們可以以粉末或顆粒的形式存在；以活性試劑在水溶液或非水溶液中的溶液或懸浮液的形式存在，或者以水包油液體乳化液或油包水液體乳化液的形式存在，以丸劑等形式存在。對于口服給藥的組合物(例如片劑和膠嚢)來說，術(shù)語"適宜的載體"包括介質(zhì)例如常用的賦性劑，比如粘合劑例如糖漿，阿拉伯膠，明膠，山梨糖醇，黃芪膠，聚乙烯吡咯烷酮(Povidone),曱基纖維素，乙基纖維素，羧曱基纖維素鈉，羥丙基-甲基纖維，蔗糖和淀粉；填料和載體，例如玉米淀粉，明膠，乳糖，蔗糖，微晶纖維素，高嶺土，甘露糖醇，磷酸二鈣，氯化鈉和海藻酸；以及潤滑劑例如硬脂酸4美，硬脂酸鈉以及其他金屬硬脂酸鹽，硬脂酸甘油酯，硬脂酸，硅酮油，滑石蠟，油劑和膠體氧化硅。還可以使用調(diào)味劑例如胡椒薄荷，冬青油，櫻桃香精等。加入著色劑可能也是合意的，從而使得劑型容易被識別。片劑還可以用本領(lǐng)域中公知的方法進行包衣。片劑可以通過壓制或模制的形式制備，其任選地含有一種或多種輔助組分。壓制片劑可以通過在適宜的機器中壓制流動形式例如粉末或顆粒形式的活性試劑而制備，所述活性試劑任選地與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合。模制片劑可以通過在適宜的機器中將用惰性液體稀釋劑潤濕的粉末化合物的混合物壓模而制備。所述片劑可以任選地被包衣或刻痕，并且可以配制成能夠提供緩釋或控釋的活性試劑的形式。其他適于口服給藥的制劑包括糖錠，其包含的活性試劑處于調(diào)味基質(zhì)中，所述調(diào)味基質(zhì)通常是蔗糖和阿拉伯膠或黃芪膠；錠劑，其包含的活性試劑處于惰性基質(zhì)中，所述惰性基質(zhì)例如是明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠；以及漱口水，其包含的活性試劑處于適宜的液體載體中。阿洛夫定和/或齊多夫定可以以游離核苷或其常規(guī)的藥學上可接受的鹽或水合物的形式配制。常規(guī)的鹽包括酸加成鹽例如鹽酸鹽、氬溴酸鹽、檸檬酸鹽、曱苯磺酸鹽和馬來酸鹽以及與磷酸或硫酸形成的鹽。在另一方面，適宜的鹽是石咸基鹽例如堿金屬鹽如鈉或鉀鹽，石咸土金屬鹽如釣或鎂鹽，或者有機胺鹽如三乙胺鹽。溶劑化物的例子包括水合物?；蛘?，阿洛夫定和/或齊多夫定可以以前藥的形式配制，所述前藥在體內(nèi)釋放阿洛夫定/齊多夫定或阿洛夫定/齊多夫定單磷酸鹽。能夠在體內(nèi)釋放核普的常規(guī)核普前藥包括5，-烷基酯例如乙?；?、特戊?；蛴仓；セ蛘?，-氨基酯例如L-纈氨酰、L-異亮氨?；騆-乳酰-L-纈氨酰酯。能夠在體內(nèi)是放齊多夫定單磷酸鹽的前藥包括fosivudine,例如fosivudinetidoxil。能夠在體內(nèi)釋放阿洛夫定的前藥包括EP350287、EP545966、EP741740和EP763049中描述的fosivudine類似物，例^口石舞夫定酉旨(fosalvudinetidoxil):R其中n是11,m是9并且R是F(fosalvudine)或N3(fosivudine)。在本說明書和權(quán)利要求書中所涉及的阿洛夫定和齊多夫定也指這樣的鹽、水合物以及前藥，其中的重量(例如日常劑量)一般都被向上調(diào)節(jié)到與其相對于游離核苷增加的分子量相一致。藥物級別的齊多夫定現(xiàn)在是通用的并且可以從世界范圍內(nèi)的許多廠家廣泛地獲得。阿洛夫定可以使用EP470355或WO94/26762中描述的鋁或鐵催化的脫水核普(anhydronucleoside)路線或類似路線方便地合成。Fosivudine和Fosalvudine是在以上所引用的專利中制備的。MIV-160和MIV-170的合成4安照以上所述進4亍。實施方式的詳細描述下，描述本發(fā)明的各個方面。細胞株實驗中測定的線粒體毒性以下描述的實驗是用來說明在給藥以阿洛夫定、齊多夫定或者二者后對線粒體DNA合成的抑制作用的。幾種支持HIV生長的適宜的細胞抹是易得的，其中包括支持HIV生長的那些細胞抹，包括源自SwedishInstituteforInfectiousDiseaseControl(SMI)Sweden的CEMxl74細胞林，MT-4(可商購獲得的)以及HepG2(可商購獲得的)。簡而言之，將100ul細胞以1x104細胞/ml的濃度接種在96孔板上，在RPMI1640培養(yǎng)基(來自Gibco)中進行指數(shù)生長培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基摻有10%的加熱滅活胎牛血清(來自Gibco)和青霉素-鏈霉素(來自Gibco)。培養(yǎng)基每3或4天更換一次，并且將細胞每周稀釋1:10進行再次培養(yǎng)。所有的培養(yǎng)物都要進行支原體感染的例行檢查并且在37。C下在濕潤的5%。02的氣氛下生長。所有的測試藥物在用培養(yǎng)基進一步稀釋到適宜濃度之前首先要被溶于10mM的二甲基亞砜(DMSO)中。按照之前的報道(Zhang,H等人，A/o/.尸/wm^co/199446:1063-1069),使用改進的Taqman技術(shù)進行線粒體DNA分析，其分析過程概要如下。將細胞用測試藥物處理一系列的時間段，所述藥物例如是阿洛夫定、fosalvudine、齊多夫定、阿巴卡韋等或者阿洛夫定/fosalvudine和齊多夫定/阿巴卡韋的多種組合物。各種比例描述在各自的表格中。在暴露于藥物中14天以后，收集細胞。使用QiAampDNA血液迷你藥盒(QIAGEN，Chatsworth,CA),按照供應(yīng)商對QiageneBlood&BodyFluidSpinProtocol的指示制備總細胞DNA,并且進行DNA擴增。由AppliedBiosystems制備線粒體DNATaqman和人類核DNA的振能量轉(zhuǎn)移(FRET)產(chǎn)生了光譜響應(yīng)J這要歸因于在DNA擴增期i;TaqDNA聚合酶的5，—〉3'核酸外切酶活性。該方法^^用了具有激光掃描技術(shù)的PCR基實驗，從而激發(fā)了存在于特別設(shè)計的TaqMan探針中的熒光染料線粒體DNA探針相當于D-環(huán)，5'氟標記，6-FAM-ACGCTGGAGCCGGAG-MGBNFQ;核DNA探針相當于18S核糖RNA,5,氟標記，6，F(xiàn)AM-TCGAACGTCTGCCC-MGBNFQ以及一對DNA擴增引物(正向線粒體DNA引物5，-CACGCGATAGCATTGCGA-3，和反相線粒體DNA引物5，-AGGAATCAAAGACAGATACTGCGA-3，。正向核DNA引物5，-GCGGCGACGACCCA-3，和反相細胞核DNA引物5，-GGCGACTACCATCGAAAGTTG-3，)。它是一套用于實時檢測pCR的完全整合的系統(tǒng)，在熒光5，核酸酶實驗中使用的試劑為ABIPRISM7700和TaqMan試劑。細胞的生長受到細胞核DNA的控制(16S核蛋白體DNA)。線粒體實-瞼的結(jié)果以線粒體DNA和細胞核DNA相對于對照組(沒有暴露于藥物中)的抑制百分率表示。實施例1在源自T淋巴細胞的MT4細胞株中進行上述實驗。在以下表1中所報告的摩爾濃度下使用阿洛夫定或齊多夫定進行單劑治療或者使用阿洛夫定加齊多夫定的組合物進行聯(lián)合治療表1<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>從表1中明顯可以看出，采用阿洛夫定的單劑治療，即使是O.luM的低濃度都可以在該實驗中導致線粒體DNA復(fù)制數(shù)降低70%。該抑制-故以1:100摩爾比存在的齊多夫定所消除?，F(xiàn)在來看1uM阿洛夫定10uM齊多夫定的組合，其比例在以上所提到的WO91/01137特別優(yōu)選的范圍內(nèi)，可以注意到存在顯著的細胞毒性(通過核DNA復(fù)制數(shù)降低60%所反映)并且線粒體DNA復(fù)制數(shù)明顯降低。在臨床期，該細胞毒性是以與單獨使用阿洛夫定相比降低的線粒體毒性為標志的。然而，問題在于在現(xiàn)有技術(shù)中阿洛夫定/齊多夫定的組合存在非常明顯的線粒體毒性水平。相反，在本發(fā)明范圍內(nèi)的摩爾比為1:100(以wt:wt為基礎(chǔ)則相當于1:110)的阿洛夫定和齊多夫定完全消除了線粒體DNA復(fù)制數(shù)降低的問題。實施例2在MT4細胞林中使用其他濃度的阿洛夫定和/或齊多夫定重復(fù)上述實驗。原始數(shù)據(jù)和統(tǒng)計數(shù)據(jù)在表2A中給出。所述數(shù)據(jù)總結(jié)在以下表2B中表2A處理相對復(fù)制數(shù)降低％mtDNASDnDNASDmtDNAnDNA齊多夫定60uM7487301160138906638卯57440齊多夫定30uM993321133615836935257217043齊多夫定10uM856782100863891446242554040阿洛夫定0.6uM96998139141740000889132880阿洛夫定0.3uM2474813641711600001587606822阿洛夫定0.1uM4347091752895633119938744350.6uM阿洛夫定十60uM齊多夫定5209371178993030073212233800.3uM阿洛夫定+3uM齊多夫定985449790051380000307833070.1uM阿洛夫定十10uM齊多夫定7581916501517卯00077259820未治療的細胞77749228760814800009790600表2B<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>因此，該實驗證實了實施例1中阿洛夫定的線粒體毒性可以通過使用明顯較大摩爾濃度的齊多夫定進行聯(lián)合給藥而逆轉(zhuǎn)。實施例3在MT-4細胞中使用阿洛夫定單磷酸鹽前藥磷夫定酯和/或齊多夫定進行進一步的線粒體貧化實驗，所述磷夫定酯是按照EP741740中的實施例19合成的。結(jié)果在表3中給出。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>通過mtDNA貧化測定，單劑治療中的阿洛夫定(在以單磷酸鹽前藥的形式給藥的情況下)再次顯示出明顯的線粒體毒性。該毒性通過使用100倍大濃度的齊多夫定進行聯(lián)合給藥而逆轉(zhuǎn)。對比實施例1在MT-4細胞中測定阿洛夫定與阿洛夫定加阿巴卡韋相比的線粒體毒性。摩爾比為70:1的阿巴卡韋和阿洛夫定在II期臨床實-瞼中顯示出協(xié)同增效活性，參見WO2004/002433。該專利申請還描述了在細胞培養(yǎng)實驗中在200:1的摩爾比下的協(xié)同增效抗病毒活性。按照實施例1中的描述測試各個濃度下的阿巴卡韋、阿洛夫定和阿巴卡韋加阿洛夫定表4處理平均qtymtDNASD線粒體DNA抑制％0.1uM阿洛夫定549900214665401uM阿巴卡韋75654467855180.1uM阿洛夫定+1uM阿巴卡韋48932614426748未處理的細胞77179120672200.2uM阿洛夫定1875741243548220uM阿巴卡韋506181404843510.2uM阿洛夫定十20uM阿巴卡韋22620117327378未處理的細胞1030000■3330結(jié)果顯示，阿洛夫定的線粒體毒性沒有通過以低或高摩爾比(1:10阿洛夫定:阿巴卡韋和1:100阿洛夫定:阿巴卡韋)加入NRTI阿巴卡韋而得到逆轉(zhuǎn)。這表示在抗病毒效力方面獲得的協(xié)同作用與線粒體毒性的拮抗機理沒有機理上的聯(lián)系。所有的參考文獻，包括本申請中涉及的專利和專利申請，都被全文引入本文中作為參考。在整個說明書和隨后的權(quán)利要求書中，除非上下文另有要求，詞語"包含，，及其變形例如將被理解為表示包括了所指出整體或步驟或整體群，但不排除任何其他的整體或步驟或者整體或步驟的群。權(quán)利要求1.一種藥物組合物，其包含摩爾比在1:100到1:350范圍內(nèi)的阿洛夫定和齊多夫定。2.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述比例范圍在1:150到1:250的范圍內(nèi),優(yōu)選為1:150到1:200。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物組合物，其進一步包含一種或兩種另外的藥物活性劑。4.根據(jù)權(quán)利要求3的藥物組合物，其中所述另外的藥物活性劑是HIV抗病毒劑MIV-170;或者所述另外的藥物活性劑是HIV抗病毒劑MIV-160,MIV-160是單獨使用的或者是與加強劑量的利托那韋一起使用的。5.根據(jù)前述權(quán)利要求任意一項的藥物組合物，其是以QD單位劑型的形式存在的。6.根據(jù)權(quán)利要求5的藥物組合物，其包含2-4mg的阿洛夫定和300-900mg的齊多夫定。7.根據(jù)權(quán)利要求6的藥物組合物，其包含600mg的齊多夫定。8.根據(jù)權(quán)利要求1到5任意一項的藥物組合物，其中所述阿洛夫定是以阿洛夫定單磷酸鹽前藥磷夫定酯的形式給藥的。9.一種治療或預(yù)防HIV的方法，其包括用比例在1:100到1:350范圍內(nèi)的阿洛夫定和齊多夫定進行同時或順序給藥。10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述比例在1:150到1:250的范圍內(nèi)，優(yōu)選為1:150到200。11.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其進一步包括同時或順序給藥以一種或兩種另外的藥物活性劑。12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中所述另外的藥物活性劑包含HIV抗病毒劑MIV170;或者MIV-160,MIV-160是單獨使用的或者是與加強劑量的利托那韋一起使用的。13.根據(jù)權(quán)利要求9-12任意一項的方法，其中所述阿洛夫定和齊多夫定是以QD單位劑型的形式存在的。14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述單位劑型包含2-4mg的阿洛夫定和300-900mg的齊多夫定。15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中所述單位劑型包含600mg的齊多夫定。16.根據(jù)權(quán)利要求9到12任意一項的方法，其中阿洛夫定的劑量是2-4mgQD,齊多夫定的劑量是300mgBID。17.根據(jù)權(quán)利要求9到16任意一項的方法，其中阿洛夫定是以阿洛夫定單磷酸鹽前藥磷夫定酯的形式給藥的。18.—種藥盒組件，其包含(i)含有阿洛夫定的藥物組合物；和(ii)含有齊多夫定的藥物組合物；其特征在于阿洛夫定和齊多夫定是以1:100到1:350的摩爾比范圍存在于藥盒中的。全文摘要以明顯超出現(xiàn)有技術(shù)的比例對阿洛夫定和齊多夫定進行聯(lián)合給藥，以在線粒體DNA貧化實驗中完全或基本上消除阿洛夫定的線粒體毒性。本發(fā)明因此提供了以1∶100到1∶350的摩爾比范圍含有阿洛夫定和齊多夫定的藥物組合物以及用于治療或預(yù)防多重耐藥HIV的方法，所述方法包括以特征摩爾比例對阿洛夫定和齊多夫定進行同時或順序給藥。文檔編號A61P31/18GK101437525SQ200780016316公開日2009年5月20日申請日期2007年5月4日優(yōu)先權(quán)日2006年5月5日發(fā)明者B·奧伯格,泓張申請人:美迪維爾公司