專利名稱：：避孕組合物的制作方法避孕組合物發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及防止懷孕的藥物組合物及方法，尤其涉及包括萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物的應(yīng)用。本發(fā)明由美國政府支持在國立衛(wèi)生研究院(NIH)頒發(fā)的U19AI060598下完成。政府享有本發(fā)明的某些權(quán)利。發(fā)明背景殺精劑是現(xiàn)有技術(shù)中已知的多種避孕方法之一。最大眾化的殺精劑含有壬苯聚醇-9(N9)作為活性成分。但N9不向使用者提供針對(duì)性傳播感染(STI)如人免疫缺陷病毒(HIV)、單純皰疹病毒(HSV)及其他病毒和微生物病原體的防護(hù)。實(shí)際上，N9是基于去污劑的殺精劑，可能實(shí)際上對(duì)預(yù)防STI具有不良影響。盡管這類去污劑起作用破裂HIV和HSV膜，它們也可能損害天然陰道屏障，顯著提高對(duì)感染的易感性。本申請(qǐng)人的國際專利申請(qǐng)No.PCT/AU02/00407(W002/079299)(其全部?jī)?nèi)容通過引用并入本文)公開了一類樹狀物(具有多聚陰離子或陽離子表面基團(tuán)的限定包被的高度分枝的大分子)，已顯示出其表現(xiàn)出一系列的抗病毒和抗微生物活性，同時(shí)毒性極低。例如，聚賴氨酸、聚乙二胺(polyamidoamine)(PAMAM)、聚醚羥胺(poly(etherhydroxylamine))(PEHAM)和聚丙烯亞胺(polypropyleneimine)樹狀物，包括以下式I至III所示并且?guī)в休粱撬岜砻婊鶊F(tuán)的化合物，已顯示出表現(xiàn)抗微生物活性，尤其是抗病毒活性。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其中R代表式IV的基團(tuán):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>如果可提供一種在預(yù)防STI傳播中無不良效應(yīng)的避孕化合物，作為本領(lǐng)域目前已知的包括N9在內(nèi)的殺精劑的替代物，將會(huì)是本領(lǐng)域的顯著進(jìn)展。發(fā)明概述申請(qǐng)人驚奇地發(fā)現(xiàn)，某些含有萘基二磺酸表面基團(tuán)且顯示出抗微生物活性的樹枝狀化合物還可起避孕藥作用。本發(fā)明第一方面提供避孕組合物，其包括有效量的包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物，或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；和用于其的藥學(xué)上可接受的栽體、賦形劑和/或稀釋劑。所述避孕組合物可以局部用形式(如泡沫、凝膠、乳膏、膜等)提供。所述組合物可在性交過程中的任何時(shí)間施用，但優(yōu)選在性交前和期間施用。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該避孕組合物可進(jìn)一步包括第二藥學(xué)活性成分。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該避孕組合物還可顯示出抗微生物活性。該抗微生物活性優(yōu)選針對(duì)性傳播感染(STI)。該抗微生物活性優(yōu)選是針對(duì)病毒性性傳播感染(STI)的抗病毒活性，所述病毒性性傳播感染包括HIV、HSV、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒(HBV和HCV)、人乳頭瘤病毒(HPV)和巨細(xì)胞病毒(CMV)的性傳播感染。本發(fā)明另一方面提供選擇性地減少或防止雌性動(dòng)物受孕的方法。該方法包括給動(dòng)物施用有效量的避孕組合物，該組合物包括有效量的包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物，或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；和用于其的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。包括于該方法中的所述組合物還可包括第二藥學(xué)活性成分。再一方面，所述避孕組合物可負(fù)載于與之相容的預(yù)防性裝置的表面上。實(shí)施方式詳述除非上下文中另有清晰指示，在本說明書和權(quán)利要求書中使用的單數(shù)形式"一/該"包括復(fù)數(shù)指示。本說明書和權(quán)利要求書中使用的術(shù)語"包含(comprises)"(或其語法變體)等同于術(shù)語"包括"，不應(yīng)理解為排除其他要素或特征的存在。含有某些特定的具有萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物的組合物出乎意料地顯示出避孕活性。本說明書和權(quán)利要求書中使用的術(shù)語"避孕活性，，指防止或降低雌性動(dòng)物懷孕或生育的可能性的活性。組合物的避孕活性通?？捎啥喾N機(jī)理產(chǎn)生。例如，N9是殺精劑，殺死精子以阻止其使卵子受精。非殺精避孕組合物可起改變陰道內(nèi)環(huán)境的作用。例如，高滲組合物可導(dǎo)致宮頸粘液硬化，從而防止或阻礙精子進(jìn)入子宮頸。其他組合物可在其在陰道內(nèi)與精液接觸時(shí)形成基質(zhì)，該基質(zhì)俘獲精子并限制其到達(dá)子宮頸的能力。維持陰道的酸性環(huán)境也可輔助滅活精子，尤其是在射精后陰道pH從約4升高到"對(duì)精子更友好的"中性至略堿性環(huán)境時(shí)?；蛘?，避孕組合物可誘導(dǎo)頂體喪失。頂體含有允許精子穿入印子中的酶。與之類似，需要透明質(zhì)酸酶來分散卵子周圍的卵泡細(xì)胞，從而允許精子穿透。照此，抑制該酶的組合物可具有避孕活性。本發(fā)明的相同避孕組合物還顯示出抗微生物活性。本說明書和權(quán)利要求書中使用的術(shù)語"抗微生物活性"指組合物或其組分殺死微生物(如細(xì)菌、病毒、真菌和寄生蟲)或抑制其生長(zhǎng)。本說明書和權(quán)利要求書中使用的術(shù)語"樹枝狀化合物"指任何適合的高度分枝的大分子。該樹枝狀化合物可為任何適合的類型。該樹枝狀化合物優(yōu)選包括聚賴氨酸、聚乙二胺(PAMAM)、聚醚羥胺(PEHAM)或聚丙烯亞胺樹狀物支架。該樹枝狀化合物更優(yōu)選選自式I、II或III的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>其中R代表式IV的基團(tuán):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>IV。相應(yīng)地，本發(fā)明第一方面提供有效量的包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物，或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；和用于其的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。尤其優(yōu)選式I的樹枝狀化合物。該樹枝狀化合物可以任何適合的量存在于所述避孕組合物中。優(yōu)選地，基于組合物的總重量，該樹枝狀化合物以約0.5wt。/o至70wt%的量存在于所述組合物中。更優(yōu)選地，基于組合物的總重量，該樹枝狀化合物的存在量為lwt。/。至50wt%，最優(yōu)選lwt。/。至30wt%。適合的藥學(xué)上可接受的堿加成鹽包括，但不限于金屬鹽，如鋁鹽、鈣鹽、鋰鹽、鎂鹽、鉀鹽、鈉鹽和鋅鹽；及由有機(jī)胺如N，N"-二芐基乙二胺、氯普魯卡因、二乙醇胺、乙二胺、二環(huán)己基胺、葡曱胺(N-甲基葡糖胺)和普魯卡因制成的有機(jī)鹽；季胺(如膽堿)的鹽以及锍鹽和磷総鹽。避孕組合物可為局部應(yīng)用的組合物，優(yōu)選以泡沫、凝膠、乳青、膜等形式提供。適合的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和稀釋劑可包括以下的一種或多種任何及全部適合于局部施用的常規(guī)溶劑、分散介質(zhì)、填料、固體載體、水溶液、包衣、媒介物，其他用于藥學(xué)活性物質(zhì)的抗微生物劑、等滲及吸收增強(qiáng)或延遲劑、活性增強(qiáng)或延緩劑；并且是本領(lǐng)域所熟知的。它們描述于例如在Remington'sPharmaceuticalSciences,18thEdition,MackPublishingCompany,Pennsylvania,USA中。除與活性劑不相容的任何常規(guī)載體、賦形劑或稀釋劑之外，考慮其在本發(fā)明的避孕組合物中的應(yīng)用。適合于局部施用的載體包括水包油和油包水乳劑、白軟石蠟、吸水性軟石蠟、羊毛脂乳劑、聚乙二醇類、可可脂、粘膜粘著劑、膠凝劑、緩沖劑、潤(rùn)滑油(如水溶性油，包括如聚乙二醇)、潤(rùn)滑凝膠(包括如水、丙二醇、幾乙基纖維素、苯甲酸和氫氧化鈉)、水溶性油(包括如甘油、丙二醇、聚季銨#5、對(duì)羥苯甲酸曱酯和對(duì)羥苯曱酸丙酯)、乳膏(包括如苯甲醇、棕櫚油、十六烷基酯、蠟、辛基十二烷醇、聚山梨酯60、凈化水、和脫水山梨醇單硬脂酸酯)等。所述載體、賦形劑和/或稀釋劑優(yōu)選包括氫氧化鈉、水溶性油、粘膜粘著劑、膠凝劑、緩沖劑、潤(rùn)滑凝膠、丙二醇、甘油和水中的一種或多種。所述載體、賦形劑和/或稀釋劑更優(yōu)選包括氫氧化鈉、水溶性油、卡波普@、丙二醇、甘油、羥乙基纖維素和水中的一種或多種。它們更優(yōu)選包括氫氧化鈉、EDTA二鈉二水合物(EDTA.2Na.2H20)、對(duì)羥苯曱酸甲酯、對(duì)羥苯曱酸丙酯、卡波普@971、丙二醇、甘油、和凈化水相組合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述避孕組合物還可顯示出抗微生物活性。該抗微生物活性優(yōu)選針對(duì)引發(fā)性傳播感染(STI)的微生物。本發(fā)明的避孕組合物可以足以預(yù)防性傳播感染的量施用。該量可取決于有待預(yù)防的特定性傳播感染，和個(gè)體患者參數(shù)，包括年齡、身體健康狀況、身材大小、體重及并行治療。這些因素為本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知，只需通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)便可確定。STI的常見病原包括，但不限于乳頭瘤病毒、沙眼衣原體、白色念珠菌、陰道毛滴蟲、單純皰疹病毒(HSV)、巨細(xì)胞病毒(CMV)、淋病奈瑟氏菌、人免疫缺陷病毒(HIV)、蒼白密螺旋體、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒(HBV和HCV)、肉芽腫鞘桿菌、杜克雷嗜血桿菌、疥螨、陰虱、支原體、陰道加德那菌。所述抗微生物活性優(yōu)選是抗病毒活性，表現(xiàn)出對(duì)抗性傳播病毒包括HIV、HSV、HCV、HBV、人乳頭瘤病毒(HPV)和CMV的活性。本發(fā)明的避孕組合物還可包括第二藥學(xué)活性成分，例如，但不限于，選自麻醉藥、鎮(zhèn)痛藥、抗寄生蟲藥、抗細(xì)菌藥、抗體、抗病毒藥、抗真菌藥、抗炎藥、抗原生動(dòng)物藥、抗感染藥、抗微生物藥、生物制劑、避孕藥、激素及類似物、礦物質(zhì)、肌肉松弛藥、天然產(chǎn)物、營養(yǎng)藥品和營養(yǎng)品、疼痛治療劑、肽和多肽及維生素中的一種或多種化合物。所述第二藥學(xué)活性成分優(yōu)選選自第二殺微生物成分、殺精劑和避孕劑中的一種或多種。第二藥學(xué)活性成分可選自，但不限于，鬼臼樹脂、四環(huán)素、制霉菌素、氟康唑、甲硝唑、阿昔洛韋、青霉素、頭孢瘞肟、壯觀霉素、立妥威、紅霉素、頭孢曲松、復(fù)方新諾明、復(fù)方新諾明、苯甲酸節(jié)酯、馬拉硫磷、孟苯醇醚、孕激素、雌激素、雌二醇等中的一種或多種。其他適合于防止受孕(避孕)及優(yōu)選預(yù)防STI的合適的第二藥學(xué)活性成分為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知。還提供了避孕抗微生物組合物，其包括有效量的包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物，或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；和用于其的藥學(xué)上可接受的栽體、賦形劑和/或稀釋劑。該組合物可用于選擇性地減少或防止受孕，及預(yù)防性傳播感染，尤其是病毒性性傳播感染。本發(fā)明再一方面提供選擇性地減少或防止雌性動(dòng)物(包括人)受孕的方法，該方法包括給動(dòng)物施用有效量的避孕組合物，該組合物包括有效量的包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物，或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；和用于其的藥學(xué)上可接受的栽體、賦形劑和/或稀釋劑。該避孕組合物可在任何時(shí)間施用，即在性交前和/或性交過程中和/或性交后，但優(yōu)選在性交前和/或性交過程中施用。包括于本發(fā)明的方法中的所述避孕組合物可如上所述還包括第二藥學(xué)活性成分。孕的藥物。所述樹枝狀化合物優(yōu)選包括聚賴氨酸、聚乙二胺(PAMAM)、聚醚羥胺(PEHAM)或聚丙烯亞胺樹狀物支架。該樹枝狀化合物更優(yōu)選選自式I、II或III的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>其中R代表式IV的基團(tuán):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>IV尤其優(yōu)選式I的樹枝狀聚合物。本發(fā)明另一方面提供選擇性地減少或防止雌性動(dòng)物(包括人)受孕并預(yù)防一種或多種性傳播感染的方法。該方法包括給動(dòng)物施用有效量的避孕組合物，該組合物包括有效量的包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物，或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；和用于其的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。所預(yù)防的STI優(yōu)選是病毒性STI，包括HIV、HSV、HBV、HCV、HPV和CMV感染。上述樹枝狀化合物還可用于制備選擇性地減少或防止雌性動(dòng)物受孕并預(yù)防一種或多種性傳播感染的藥物。在本發(fā)明再一方面，該避孕組合物可負(fù)栽于與之相容的預(yù)防性裝置的表面上。相應(yīng)地，提供了選擇性地減少或防止雌性動(dòng)物(包括人)受孕的方法，該方法包括提供有效量的避孕組合物，該避孕組合物包括包含一個(gè)或多個(gè)萘基磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物，或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；和用于其的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑；和預(yù)防性裝置；該避孕組合物負(fù)載在所述預(yù)防性裝置的表面并與其相容。所述預(yù)防性裝置可為任何適合的類型?？墒褂帽茉刑住m頸帽、避孕隔膜、陰道海綿、宮內(nèi)裝置、陰道栓等。優(yōu)選避孕套。所述樹枝狀化合物可以任何適合的方式接觸所述預(yù)防性裝置的表面。例如，可將所述樹枝狀化合物包被在所述預(yù)防性裝置的一個(gè)或多個(gè)表面上或浸漬入所述預(yù)防性裝置的一個(gè)或多個(gè)表面中。所述樹枝狀化合物可共價(jià)結(jié)合到所述預(yù)防性裝置的一個(gè)或多個(gè)表面。根據(jù)本發(fā)明的方法的樹枝狀化合物可以足以防止懷孕的量施用。例如，包括在本發(fā)明避孕組合物中的樹枝狀化合物的量可為0.5wt。/。到70wt%,基于所述組合物的總重量。所施用的避孕組合物的量可在0.1至10g的范圍內(nèi)，優(yōu)選在0.5至8g的范圍內(nèi)，更優(yōu)選在l至5g的范圍內(nèi)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述方法中使用的避孕組合物還可如上述顯示出抗微生物活性。本發(fā)明的更多特征將體現(xiàn)在下列實(shí)施例中，包含這些實(shí)施例僅旨在例示而非限制本發(fā)明。實(shí)施例實(shí)施例1-避孕組合物(3%w/w活性劑)的制備表1.3Mw/w避孕組合物的成分<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>實(shí)驗(yàn)方案i.在制備前清洗設(shè)備。ii.在不銹鋼罐中將氫氧化鈉(NF)溶解于凈化水中。iii.在不銹鋼容器中將EDTA二鈉二水合物(USP)加入到凈化水中，用高剪切混合器攪拌至溶解。iv.分別加入對(duì)幾苯甲酸甲酯(NF)和對(duì)羥苯甲酸丙酯(NF)，混合至完全分散。v.緩慢加入卡波普⑧971P(NF),攪拌混合物至卡波普⑧"IP(NF)完全分散，并形成平滑凝膠。vi.將丙二醇(USP)和甘油(USP)加入到所述容器管中，混合溶液至內(nèi)容物完全分散。vii.加入步驟ii所得的氫氧化鈉溶液至pH大于4.0。viii.加入經(jīng)計(jì)算產(chǎn)生3。/。w/w凝膠的適量SPL7013。ix.加入步驟ii所得的氫氧化鈉溶液至達(dá)到所期望的PH,如pH4.5或pH5.0。x.測(cè)量pH后，加入凈化水至總體積，混合溶液直至所有成分分散，并形成均質(zhì)凝膠。xi.測(cè)量批量產(chǎn)率。實(shí)施例2-殺精活性測(cè)試進(jìn)行改進(jìn)的Sander-Cramer測(cè)定來評(píng)價(jià)本發(fā)明的避孕組合物的殺精活性。此測(cè)定法測(cè)定精子制動(dòng)的最小有效濃度(MEC)。從2%(對(duì)于水溶性化合物)或4%(對(duì)于水不溶性化合物)的儲(chǔ)液制備2倍連續(xù)稀釋液。將250jaL每一稀釋液與50mL含有60xi06活動(dòng)精子/mL的正常精液樣品混合。在CASA系統(tǒng)(Hamilton-Thorne，IVOS;Beverly,MA)的輔助下評(píng)價(jià)精子樣品是否正常。將精液與化合物等份試樣用顯微鏡檢查，同時(shí)于室溫下溫育30秒鐘。如果在初始檢查中或在培養(yǎng)基中溫育1小時(shí)后觀察到任何活動(dòng)的精子，則將該稀釋液標(biāo)記為"失敗"。用誘導(dǎo)精子完全制動(dòng)的最高稀釋度計(jì)算給定化合物的MEC。用6至10個(gè)精液樣品獲得更可靠的結(jié)果。將N9(MEC=~0.1-0.2mg/mL)和溶劑用作對(duì)照。顯示MEC小于lmg/mL的化合物具有強(qiáng)有力的精子制動(dòng)活性。結(jié)果與結(jié)論本發(fā)明的組合物被標(biāo)記為"失敗"，未能確定MEC?？磥肀景l(fā)明的組合物的避孕活性并非殺精活性的結(jié)果。對(duì)照試劑N9的殺精活性是由于此試劑的細(xì)胞毒性。因此，所述避孕組合物無殺精活性提示其與N9不同，且其不會(huì)對(duì)人有細(xì)胞毒性。實(shí)施例3在兔中的避孕有效性新西蘭白兔的典型精液中含有約2-3x108個(gè)精子，如果將其通過插管遞送到宮頸陰道，則將遞送約5000個(gè)半數(shù)受精劑量(FD5。)。如在本文中使用，一個(gè)半數(shù)受精劑量定義為將導(dǎo)致給定兔群體中50%懷孕的精子量。相比之下，人的精液遞送小于1個(gè)FD5。。因此，為了與預(yù)測(cè)在人中的避孕效力更相關(guān)，應(yīng)將待測(cè)試劑和精子都遞送到宮頸陰道，且遞送的總精子數(shù)應(yīng)該降低。將兔的實(shí)驗(yàn)方案用于測(cè)試多種制劑，包括羥基纖維素(HEC)安慰劑凝膠。如表2所示分配實(shí)驗(yàn)受試者。表2-研究中涉及的兔數(shù)目<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>用lml注射器上的30號(hào)針頭皮下注射100IU的人絨毛膜促性腺激素(0.1ml;Sigma)準(zhǔn)備雌性新西蘭兔(~7lbs=~3kg)。用連于5ml注射器的聚乙蹄輸液管的軟插管將待測(cè)制劑(2ml)投遞到兔宮頸陰道內(nèi)。將從2只雄兔中收集的新鮮兔精液合并并用兔精漿稀釋5倍。施用待測(cè)制劑后5分鐘，將0.5ml經(jīng)稀釋的精液(用0.4ml精漿稀釋的0.lml精液)投遞到宮頸陰道中與待測(cè)制劑相同的區(qū)域。這一授精劑量遞送~10個(gè)FD5。，其足以產(chǎn)生平均7個(gè)胚胎/兔避孕效力測(cè)定如下通過授精后15天處死動(dòng)物，解剖分離出子宮角以確定動(dòng)物是否懷孕，而對(duì)懷孕的動(dòng)物，計(jì)數(shù)植入胚胎數(shù)。結(jié)果表3-避孕有效性研究的結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>*Fisher精確雙尾檢驗(yàn)A曼-懷二氏非配對(duì)雙尾檢驗(yàn)因此，當(dāng)與HEC安慰劑凝膠相比時(shí)，在HEC中或?qū)嵤├?的制劑中的活性成分在兔模型中顯示出顯著的避孕效應(yīng)。比較HEC中和實(shí)施例1的制劑中的活性成分的避孕效應(yīng)，差異不顯著。完成上述測(cè)試后，進(jìn)行試驗(yàn)性觀察以估計(jì)避孕效力的持續(xù)時(shí)間，結(jié)果總結(jié)于下表表4-避孕效力的持續(xù)時(shí)間<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>結(jié)合這些試驗(yàn)性結(jié)果顯示，活性成分在HEC中的制劑或根據(jù)實(shí)施例1的制劑在施用后~24小時(shí)是高度有效的避孕劑?；趯?duì)懷孕率或胚胎數(shù)的分析對(duì)表4中數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，U)懷孕率通過Fisher精確兩尾檢驗(yàn)P-O.05;(ii)胚胎通過曼-懷二氏非配對(duì)非參數(shù)兩尾檢驗(yàn)P-O.016。另外，48小時(shí)和7天的結(jié)果強(qiáng)烈提示此避孕效應(yīng)是可逆的。結(jié)論在HEC中配制或根據(jù)實(shí)施例1的本發(fā)明組合物，在人工授精前5分鐘遞送時(shí)(表3)，及在授精前~24小時(shí)遞送時(shí)(表4),在所述兔模型中顯示出顯著的避孕效應(yīng)。實(shí)施例4-評(píng)價(jià)本發(fā)明的避孕組合物對(duì)HSV-2易感性的影響的研咒進(jìn)行研究，通過測(cè)量小鼠對(duì)2型單純皰疹病毒(HSV-2)感染的易感性，以檢測(cè)本發(fā)明的避孕組合物的潛在的不良效應(yīng)，所述病毒通常引發(fā)生殖器皰滲。這是重要的，因?yàn)闅⒕M合物如N9已被提出可削弱天然的陰道屏障并顯著增加對(duì)總體STI感染的易感性。美國Baltimore的JohnsHopkins大學(xué)的RichardCone用小鼠HSV-2陰道傳播模型評(píng)價(jià)了與殺精劑和可導(dǎo)致對(duì)病原體(如HSV-2)易感的其他避孕組合物關(guān)聯(lián)的毒性。方法小鼠模型在評(píng)價(jià)易感性前，用孕激素(DepoProvera,乙酸曱羥孕酮)處理6-8周齡的雌性CF-1小鼠(Harian，Indianapolis,IN,USA)，以增加HSV-2易感性，并使所述小鼠比處于不同動(dòng)情周期階段的小鼠就易感性而言更均一。病毒接種物5x108TCID5。/mL的HSV-2G林操作步驟將20jaL本發(fā)明的避孕組合物施用于陰道，12小時(shí)后施用于10pLBartels培養(yǎng)液中遞送的HSV-2低劑量接種物(0.1ID5。)。對(duì)照動(dòng)物接受20juLPBS替代待測(cè)產(chǎn)品。在施用待測(cè)產(chǎn)品后12小時(shí)遞送病毒接種物的原因是之前的實(shí)驗(yàn)(參考文獻(xiàn)ConeRA，HoenTE，WangXX&MoenchTR.MicrobicidalDetergentsIncreaseHSVSusceptibilityinMiceWithoutCausingVisibleEpithelialDefects.Abstract#02421，"Microbicides2004"Conference,London,UK;March2004)顯示這是施用N9后出現(xiàn)對(duì)HSV-2感染的易感峰值的時(shí)間。本研究中，共40只小鼠接受了本發(fā)明的避孕組合物，并且共40只小鼠接受了PBS。結(jié)果經(jīng)本發(fā)明的避孕組合物處理的40只小鼠中僅1只感染HSV-2。相比之下，對(duì)照組中40只小鼠中有7只感染。換言之，施用本發(fā)明的避孕組合物后易感性未增加。之前的研究中，經(jīng)N9處理的42個(gè)動(dòng)物中有29個(gè)感染，經(jīng)殺精成分1處理的30個(gè)動(dòng)物中有20個(gè)感染，經(jīng)殺精成分2處理的41個(gè)動(dòng)物中有25個(gè)感染。為測(cè)定之前研究中小鼠的相對(duì)易感性，對(duì)用待測(cè)產(chǎn)品處理的每組小鼠，用PBS處理兩組對(duì)照小鼠。一個(gè)對(duì)照組接種0.1ID5。，而另一組接種10ID5Q。然后用每個(gè)對(duì)照組中感染的動(dòng)物分?jǐn)?shù)構(gòu)建劑量-響應(yīng)圖(感染分?jǐn)?shù)相對(duì)于logID)，在低劑量點(diǎn)和高劑量點(diǎn)之間畫線性內(nèi)插。然后將實(shí)驗(yàn)組中感染的小鼠分?jǐn)?shù)標(biāo)繪在此圖上，以確定此實(shí)驗(yàn)組中低劑量接種物的有效ID。相對(duì)易感性定義為遞送到實(shí)驗(yàn)小鼠的低劑量接種物的有效ID除以其遞送到對(duì)照動(dòng)物的ID。經(jīng)N9處理的動(dòng)物比對(duì)照動(dòng)物對(duì)HSV-2感染29.7倍更易感(P<0.001，F(xiàn)ishers精確兩側(cè)t檢驗(yàn))，而經(jīng)殺精成分1和殺精成分2處理的動(dòng)物分別為29.1倍(P<0.001)和17.5倍(P<0.001)更易感。結(jié)論本發(fā)明的避孕組合物不表現(xiàn)出在HSV-2感染小鼠模型中導(dǎo)致易感性增加。本研究表明所述避孕組合物無細(xì)胞毒性，且提示這對(duì)用于人將是安全的。N9和其他殺精殺微生物劑可導(dǎo)致易感性增加(參考文獻(xiàn)ConeRA，HoenTE，WangXX&MoenchTR.MicrobicidalDetergentsIncreaseHSVSusceptibilityinMiceWithoutCausingVisibleEpithelialDefects.Abstract#02421，"Microbicides2004"Conference,London,UK;March2004)。實(shí)施例5-卡波普⑧凝膠中3。/。w/w活性成分的避孕套相容性研究陰道制劑中的某些特定成分可損害避孕套完整性。用此方法測(cè)定本發(fā)明的組合物對(duì)避孕套的影響。單獨(dú)包裝的由天然橡膠膠乳制成的一次性男性避孕套符合ASTM編號(hào)D3492-97(美國測(cè)試和材料學(xué)會(huì)，橡膠避孕物的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格，男性避孕套)檢測(cè)方法規(guī)定的特定最低要求。該檢測(cè)方法設(shè)計(jì)為確保避孕套質(zhì)量始終如一。測(cè)定經(jīng)處理和未處理避孕套的下列參數(shù)爆裂壓力、爆裂容積、長(zhǎng)度、厚度和寬度。如果組合物損害避孕套，預(yù)期爆裂壓力和爆裂容積會(huì)較低。避孕套長(zhǎng)度也可能受影響。對(duì)于所有檢測(cè)，將避孕套從其單獨(dú)包裝中取出并展開。用軟刷將每個(gè)避孕套全長(zhǎng)涂敷本發(fā)明組合物的凝膠制劑。將單個(gè)避孕套放在有襯托盤上，并于37。C和90%相對(duì)濕度下溫育不少于1小時(shí)。每個(gè)溫育期后，并在檢測(cè)前，用干的非摩砂性布除去避孕套上的過量凝膠。依次檢測(cè)每個(gè)經(jīng)處理避孕套的空氣爆裂壓力和容積。通過對(duì)未處理避孕套和用缺乏任何活性藥學(xué)成分的安慰劑凝膠處理的避孕套進(jìn)行類似檢測(cè)而得到基線數(shù)據(jù)，以進(jìn)行比較。表5中提供了這些實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)。表5-暴露于避孕組合物不少于1小時(shí)后乳膠避孕套的空氣爆裂壓力和容積<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>避孕套類型避孕套批次平均爆裂壓力，kPa(n=80)觀察到的變化基線安慰劑經(jīng)SPL7013處理的基線-安慰劑基線-經(jīng)處理的安慰劑-經(jīng)處理的乳膠，非潤(rùn)滑的12.0(0.1)1.9(0.1)L9(0.1)-0.1(0.0)-O.1(o.o)0.0(o.o)22.1(0.1)2.0(0.1)2.0(0.1)-O.1(0.0)-0.1(0.0)0.0(0.0)32.0(0.1)1.9(0.1)1.9(0.1)-O.1(0.0)-O.1(0.0)0.0(0.0)乳膠，硅酮潤(rùn)滑的11.6(0.1)1.6(0.1)1.6(0.1)0.0(0.0)0.0(0.0)0.0(0.0)21.7(0.1)1.6(0.1)1.7(0.1)_0.1(0.0)0.0(0.0)0.1(0.0)31.6(0.1)1.5(0.1)1.5(0.1)-O.1(0.0)-O.1(0.0)0.0(0.0)乳膠，水基潤(rùn)滑劑2.1(0.1)2.1(0.2)2.0(0.2)0.0(0.1)-O.1(0.1)-0.1(0.0)22.2(0.1)2.2(0.1)2.2(0.2)0.0(0.0)0.0(0.1)0.0(0.1)32.1(0.1)2.1(0.1)2.1(0.2)0.0(0.0)0.0(0.1)0.0(0.1)除了檢測(cè)空氣爆裂壓力和容積外，還研究了經(jīng)本發(fā)明組合物的凝膠制劑處理后避孕套的拉伸強(qiáng)度。在這些檢測(cè)中，將避孕套從其單獨(dú)包裝中取出并展開。根據(jù)ISO4074:2002從所述避孕套剪下避孕套材料的待測(cè)小片，并將這些小片放在有襯托盤上。剪下的避孕套待測(cè)小片全部用所述凝膠包被，放在有襯托盤上，并于37。C和90%相對(duì)濕度下溫育不少于l小時(shí)。溫育期后，并在檢測(cè)前，用異丙醇除去樣品小片上的過量潤(rùn)滑劑，并使待測(cè)小片完全干燥。根據(jù)ISO4074:2002規(guī)定的操作步驟測(cè)定待測(cè)小片的拉伸強(qiáng)度。表6提供了這些測(cè)定的數(shù)據(jù)。表6-暴露于避孕組合物不少于1小時(shí)后乳膠避孕套待測(cè)小片的拉伸強(qiáng)度和延伸性質(zhì)<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>結(jié)果通過空氣爆裂特性和拉伸強(qiáng)度測(cè)量的涂有避孕組合物和安慰劑組合物的避孕套的完整性未受所述避孕組合物損害。將認(rèn)識(shí)到，可以對(duì)本文寬泛描述的發(fā)明作出除具體描述以外的變化和改動(dòng)，而不偏離本發(fā)明的精神和范圍。要理解本發(fā)明延伸至包括所有這些變化和改動(dòng)。還將理解在本說明書中公開并定義的發(fā)明延伸至所提到的或從文本或附圖顯而易見的兩種或多種個(gè)別特征的所有替代組合。所有這些不同組合構(gòu)成本發(fā)明的多種不同替代方面。權(quán)利要求1.避孕組合物，其包括有效量的包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物，或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；和用于其的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。2.權(quán)利要求l的避孕組合物，其中所述樹枝狀化合物包括聚賴氨酸、聚乙二胺(PAMAM)、聚醚羥胺(PEHAM)或聚丙烯亞胺樹狀物支架。3.權(quán)利要求1的避孕組合物，其中所述樹枝狀化合物選自式I、II或III的化合物NHR<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中R代表式IV的基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。4.權(quán)利要求3的避孕組合物，其中所述樹枝狀化合物是式I的化合物。5.權(quán)利要求3的避孕組合物，其中所述樹枝狀化合物是式I、II或III的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。6.權(quán)利要求5的避孕組合物，其中所述鹽是金屬鹽，選自鋁鹽、鈣鹽、鋰鹽、鎂鹽、鉀鹽、鈉鹽和鋅鹽中的一種或多種。7.權(quán)利要求5的避孕組合物，其中所述鹽是有機(jī)鹽，選自N，N，-二千基乙二胺、氯普魯卡因、二乙醇胺、乙二胺、環(huán)己胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)和普魯卡因中的一種或多種。8.權(quán)利要求5的避孕組合物，其中所述鹽選自季胺、锍鹽和磷鑰鹽中的一種或多種。9.權(quán)利要求1的避孕組合物，其中所述組合物還顯示出抗微生物活性。10.權(quán)利要求9的避孕組合物，其中所述抗微生物活性針對(duì)性傳播微生物。11.權(quán)利要求10的避孕組合物，其中所述性傳播微生物是病毒，選自人免疫缺陷病毒(HIV)、單純皰疹病毒(HSV)、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒(HBV和HCV)、人乳頭瘤病毒(HPV)和巨細(xì)胞病毒(CMV)中的一種或多種。12.權(quán)利要求l的避孕組合物，其中基于所述組合物的總重量，所述樹枝狀化合物以約0.5wt。/。至約70wt。/。的量存在于所述組合物中。13.權(quán)利要求1的避孕組合物，其中所述組合物還包括第二藥學(xué)活性化合物。14.權(quán)利要求13的避孕組合物，其中所述第二藥學(xué)活性化合物選自鬼臼樹脂、四環(huán)素、制霉菌素、氟康唑、甲硝唑、阿昔洛韋、青霉素、頭孢噻肟、壯觀霉素、立妥威、紅霉素、頭孢曲松、復(fù)方新諾明、復(fù)方新諾明、苯甲酸芐酯、馬拉硫磷、孟苯醇醚、孕激素、雌激素和雌二醇中的一種或多種。15.避孕抗微生物組合物，其包括有效量的包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物，或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；和用于其的藥學(xué)上可接受的栽體、賦形劑和/或稀釋劑；其中抗微生物活性是針對(duì)性傳播病毒。16.權(quán)利要求12的避孕抗微生物組合物，其中所述性傳播病毒選自HIV、HSV、HBV、HCV、HPV和CMV。17，選擇性地減少或防止包括人在內(nèi)的雌性動(dòng)物受孕的方法，所述方法包括給動(dòng)物施用有效量的避孕組合物，所述組合物包括有效量的包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物，或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；和用于其的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。18.權(quán)利要求17的方法，其中所述樹枝狀化合物是式I的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>19.權(quán)利要求17的方法，其中所述避孕組合物還包括第二藥學(xué)活性成分。20.權(quán)利要求19的方法，其中所迷第二藥學(xué)活性化合物選自鬼臼樹脂、四環(huán)素、制霉菌素、氟康唑、曱硝唑、阿昔洛韋、青霉素、頭孢噻肟、壯觀霉素、立妥威、紅霉素、頭孢曲松、復(fù)方新諾明、復(fù)方新諾明、苯甲酸千酯、馬拉硫磷、孟苯醇醚、孕激素、雌激素和雌二醇中的一種或多種。21.選擇性地減少或防止雌性動(dòng)物受孕和預(yù)防一種或多種性傳播感染的方法，所述方法包括提供有效量的包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物，或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；和用于其的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。22.權(quán)利要求21的方法，其中所述性傳播感染是選自HIV、HSV、HBV、HCV、HPV和CMV的病毒感染。23.選擇性地減少或防止包括人在內(nèi)的雌性動(dòng)物受孕的方法，所述方法包括提供有效量的避孕組合物，所述避孕組合物包括包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物，或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；和用于其的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑；和預(yù)防性裝置；所述避孕組合物負(fù)載在所述預(yù)防性裝置表面并與其相容。24.權(quán)利要求23的方法，其中所述預(yù)防性裝置是避孕套。25.權(quán)利要求23的方法，其中所述避孕組合物負(fù)載在預(yù)防性裝置的外表面。26.權(quán)利要求23的方法，其中所述避孕組合物還包括第二藥學(xué)活性化合物。27.權(quán)利要求26的方法，其中所述第二藥學(xué)活性化合物選自鬼臼樹脂、四環(huán)素、制霉菌素、氟康唑、甲硝唑、阿昔洛韋、青霉素、頭孢噻肟、壯觀霉素、立妥威、紅霉素、頭孢曲松、復(fù)方新諾明、復(fù)方新諾明、苯甲酸節(jié)酯、馬拉疏磷、孟苯醇醚、孕激素、雌激素和雌二醇中的一種或多種。28.包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物在制備用于選擇性地減少或防止雌性動(dòng)物受孕的藥物中的應(yīng)用。29.包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物在制備用于選擇性地減少或防止雌性動(dòng)物受孕和預(yù)防一種或多種性傳播感染的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及避孕組合物，其包括有效量的包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物，或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；和用于其的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。所述避孕組合物還可顯示出抗微生物活性。本發(fā)明還涉及選擇性地減少或防止包括人在內(nèi)的雌性動(dòng)物受孕的方法，所述方法包括給動(dòng)物施用有效量的避孕組合物，所述組合物包括有效量的包含一個(gè)或多個(gè)萘基二磺酸表面基團(tuán)的樹枝狀化合物，或所述樹枝狀化合物的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物；和用于其的藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。文檔編號(hào)A61K31/785GK101405010SQ200780010036公開日2009年4月8日申請(qǐng)日期2007年3月21日優(yōu)先權(quán)日2006年3月22日發(fā)明者T·D·麥卡錫申請(qǐng)人:星藥股份有限公司