專利名稱：葡萄多糖及其提取方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從葡萄或葡萄干中提取葡萄多糖方面的技術(shù)領(lǐng)域，是一種葡萄多糖及其提取 方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
葡萄是我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)和維吾爾醫(yī)學(xué)常用的藥食兼用植物，多糖是葡萄中的主要活性成份 之一，其主要功效是能提高機(jī)體的免疫能力，從而可以治療因免疫功能異常而引起的疾病， 如感冒、麻疹和肝炎等癥。葡萄中的糖類以單糖和寡糖居多，多糖含量大于6%，相對較少。 在以往的多糖提取工藝中，多具有長時間高熱的提取過程，如煎煮和濃縮，這樣不僅會使最 終產(chǎn)品顏色加深，同時也使許多多糖斷裂成寡糖和單糖。根據(jù)研究報道，有明顯藥理作用的 多糖，其分子量多在l萬以上，而單糖和寡糖目前研究認(rèn)為無明顯藥理作用，故研究葡萄多 糖的分離、提取和純化技術(shù)是批量生產(chǎn)高質(zhì)量葡萄多糖的必要條件。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種葡萄多糖及其提取方法和應(yīng)用，其克服了上述現(xiàn)有技術(shù)之不足，能有效 提取得到葡萄多糖，該提取方法簡單，所得葡萄多糖能應(yīng)用于制備用于治療因免疫功能異常 而引起的疾病或用于調(diào)節(jié)因疾病引起機(jī)體免疫功能異常的狀態(tài)方面的藥物組合物。
本發(fā)明的技術(shù)方案之一是通過以下方式得到的 一種葡萄多糖，其按下述步驟得到向 葡萄濃縮液中加入4倍至9倍葡萄濃縮液重量的95%乙醇，常溫下充分?jǐn)嚢?，靜置4小時至12小 時后析出粗多糖，用300目至500目的濾布進(jìn)行過濾，收集得到粗多糖。
本發(fā)明的技術(shù)方案之二是通過以下方式得到的 一種葡萄多糖提取方法，其按下述步驟 進(jìn)行向葡萄濃縮液中加入4倍至9倍葡萄濃縮液重量的95%乙醇，常溫下充分?jǐn)嚢?，靜置4小 時至12小時后析出粗多糖，用300目至500目的濾布進(jìn)行過濾，收集得到粗多糖。
下面是對上述技術(shù)方案之一和技術(shù)方案之二的進(jìn)一步優(yōu)化和/或選擇
可將上述葡萄粗多糖用10倍至20倍葡萄粗多糖重量的水進(jìn)行溶解得到粗多糖水溶液，用 500目的濾布進(jìn)行過濾并收集濾液，將濾液通過截流分子量為l萬的超濾膜過濾，濾液再經(jīng)截 流分子量為100至1000的反滲透膜即納濾膜濃縮，收集得到葡萄多糖濃縮液。
可將上述葡萄多糖濃縮液經(jīng)冷凍干燥得到葡萄多糖干粉。
上述葡萄濃縮液可經(jīng)過以下方法得到以鮮葡萄為原料，經(jīng)挑揀后，用自來水沖洗干凈，
壓汁，除去葡萄皮和葡萄籽，用300目至500目濾布過濾，在5(TC下減壓濃縮得到葡萄濃縮液， 該葡萄濃縮液的比重為l. 05至1. 3。
上述葡萄濃縮液可經(jīng)過以下方法得到以葡萄干為原料，經(jīng)挑揀后，用自來水沖洗干凈， 室溫晾干，粉碎，加入10倍葡萄干重量的蒸餾水，在8(TC下提取3小時，共提取3次，合并提 取液，用300目至500目濾布過濾，在5(TC下減壓濃縮得到葡萄濃縮液，該葡萄濃縮液的比重 為l. 05至1. 3。
本發(fā)明的技術(shù)方案之三是通過以下方式得到的上述所得葡萄多糖在制備用于治療因免 疫功能異常而引起的疾病或用于調(diào)節(jié)因疾病引起機(jī)體免疫功能異常的狀態(tài)方面的藥物組合物 的應(yīng)用。
本發(fā)明能有效提取得到葡萄多糖，該提取方法簡單，所得葡萄多糖能應(yīng)用于制備用于治 療因免疫功能異常而引起的疾病或用于調(diào)節(jié)因疾病引起機(jī)體免疫功能異常的狀態(tài)方面的藥物 組合物。所得葡萄多糖在體內(nèi)、外試驗中具有一致的較強(qiáng)的免疫保護(hù)作用，提示本發(fā)明所得 葡萄多糖作為免疫增強(qiáng)劑和免疫調(diào)節(jié)劑具有良好的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明不受下述實(shí)施例的限制，可根據(jù)上述本發(fā)明的技術(shù)方案和實(shí)際情況來確定具體的 實(shí)施方式。
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步論述 實(shí)施例l，新鮮葡萄中葡萄多糖的制備
取新鮮葡萄5000克，經(jīng)挑揀后，用自來水沖洗干凈，壓汁，除去葡萄皮和葡萄籽，過濾，濾 液減壓濃縮。在濃縮液中加入4倍或9倍量95%乙醇，常溫下充分?jǐn)嚢?，靜置沉淀4小時或12小 時，過濾，回收乙醇，收集粗多糖，濾布以水洗滌3次，洗滌液與粗多糖合并，攪拌溶解，得 粗多糖水溶液，過濾，收集濾液，將濾液通過超濾膜和反滲透膜后得葡萄多糖濃縮液，葡萄 多糖濃縮液可直接利用，也可進(jìn)一步冷凍干燥得葡萄多糖干粉。
實(shí)施例2，葡萄干中葡萄多糖的制備
取葡萄干2000克，經(jīng)挑揀后，用自來水沖洗干凈，室溫晾干，置容器中，加入10倍量蒸 餾水，8(TC提取3小時，共3次，合并提取液，5(TC減壓濃縮。在濃縮液中加入4倍或9倍量 95%乙醇，常溫下充分?jǐn)嚢瑁o置沉淀4小時或12小時，過濾，回收乙醇，收集粗多糖，濾布 以水洗滌3次，洗滌液與粗多糖合并，攪拌溶解，得粗多糖水溶液，過濾，收集濾液，將濾 液通過超濾膜和反滲透膜后，得到葡萄多糖濃縮液，葡萄多糖濃縮液可直接利用，也可進(jìn)一 步冷凍干燥得葡萄多糖干粉。
對于上述實(shí)施例1和實(shí)施例2，可進(jìn)一步進(jìn)入下述的優(yōu)化和/或選擇
(1) 提取新鮮葡萄經(jīng)挑揀后，洗凈，壓汁，除去皮和籽，得葡萄原汁，此原汁采用 300目至500目濾布過濾，濾液減壓濃縮至一定量(比重為1.05或1.3);葡萄干以自來水洗 凈，晾干，粉碎，然后再加10倍量蒸餾水8(TC回流提取，提取液同樣采用濾布過濾，濾液在 5(TC下減壓濃縮至一定量(比重為1.05或1.3)。
(2) 醇沉為了使多糖充分沉淀下來，采用4倍或9倍量95%乙醇進(jìn)行醇沉，使溶液中乙 醇濃度在80%以上，即往步驟1所產(chǎn)生的葡萄濃縮液中加入4倍或9倍量95%乙醇，使溶液中乙 醇濃度在80%以上，此操作要在不斷攪拌下進(jìn)行，醇沉4小時或12小時。
(3) 過濾采用300目至500目濾布過濾，得粗多糖，濾液回收乙醇，粗多糖以水溶解， 濾布以蒸餾水洗三次，水洗液合于粗多糖水溶液中。
(4) 超濾采用天津膜天膜工程技術(shù)有限公司的中空纖維膜組件，膜材料為聚砜，截 流分子量為l萬，工作壓力0.05 MPa或O. 15MPa。
(5) 反滲透采用國產(chǎn)納濾膜組件，膜材料為醋酸纖維素(CA)、醋酸-三醋酸纖維素 (CA-CTA)等，截流分子量100或1000，脫去鹽和一些小分子物質(zhì)，工作壓力O. 3MPa或
0.8MPa。
以上實(shí)例僅為了對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，而本發(fā)明的范圍不受所舉實(shí)施例的局限。 本發(fā)明提供的是一種新型的天然藥物抓葡萄多糖，可用于治療因免疫功能異常而引起的
疾病或調(diào)節(jié)因疾病引起機(jī)體免疫功能異常的狀態(tài)，為證明其效果，將上述實(shí)施例l或?qū)嵤├?br> 2所得葡萄多糖，進(jìn)行了體內(nèi)外藥效學(xué)試驗，其結(jié)果如下 1、體外藥效學(xué)試驗
為觀察實(shí)施例1或?qū)嵤┝?所得葡萄多糖(以下簡稱為VTP)作為提高和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功 能治療藥物的效果，本實(shí)驗采用卡介苗(BCG)整體致敏，脂多糖(LPS)離體攻擊法建立了 大鼠原代肝細(xì)胞免疫損傷模型，研究VTP在體外對大鼠免疫性肝損傷的治療作用。經(jīng)尾靜脈 注射BCG 8mg/ml致敏大鼠12天后，采用兩步灌流法取肝細(xì)胞，接種肝細(xì)胞與24孔板16小時后， 加入10mg/1的LPS攻擊，同時給予葡萄多糖進(jìn)行干預(yù)，分別于3、 6、 12和24小時取細(xì)胞上清 液，測定其丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天冬門氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的活性。
結(jié)果表明正常大鼠肝細(xì)胞上清AST和ALT活力隨時間的延長變化不大；與正常對照組比 較，BCG+LPS損傷后模型組大鼠肝細(xì)胞上清AST和ALT活力隨時間的延長逐步升高，在12小時 明顯升高，肝損傷細(xì)胞模型建立成功；VTP 5、 20、 80mg/l各劑量組在6、 12和24小時均可不 同程度地使升高的AST和ALT下降，其作用與陽性對照藥物聯(lián)苯雙酯(DDB)相似；VTP高劑量
組在3小時可顯著降低AST和ALT，并與低、中劑量組間存在顯著差異；而VTP各劑量組在6、 12和24小時均可顯著降低AST和ALT，且高劑量組與低、中劑量組間存在顯著差異，存在明顯 的劑量依賴關(guān)系，即隨著藥物濃度的增加，降酶活性逐步增強(qiáng)。說明VTP具有較強(qiáng)的免疫保 護(hù)作用，可顯著降低免疫性損傷對肝細(xì)胞功能的影響，提示VTP作為免疫調(diào)節(jié)劑應(yīng)有良好的 前景。
2、體內(nèi)藥效學(xué)試驗
為觀察實(shí)施例1或?qū)嵤├?所得葡萄多糖(以下簡稱為VTP)作為提高和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功 能治療藥物的效果，本實(shí)驗采用BCG聯(lián)合LPS誘導(dǎo)小鼠建立免疫性肝損傷模型，研究VTP在體 內(nèi)對小鼠免疫性肝損傷的治療作用。經(jīng)尾靜脈注射BCG lmg/ml致敏小鼠，次日開始灌胃給予 VTP干預(yù)治療，連續(xù)12天，第12天時經(jīng)尾靜脈注射LPS7. 5 yg/只，16小時后稱重，各組小鼠 摘眼球取血后，立即脫頸椎處死，取肝右葉相同部位的一小塊肝組織，以4。C 0.9%的生理鹽 水制成10%的肝勻漿，測定AST、 ALT和SOD的活性及NO和MDA的含量。另夕卜，取每組小鼠肝左 葉相同部位肝組織，用10%甲醛固定，石蠟包埋切片；常規(guī)HE染色，觀察肝組織病理改變情 況。
結(jié)果表明與正常對照組比較，BCG+LPS模型組小鼠肝組織勻漿AST 、 ALT和SOD活力顯 著降低，MDA和NO含量顯著增加，病理檢査可見肝組織有大量炎性細(xì)胞浸潤，并出現(xiàn)大片壞 死，說明模型建立成功；VTP分為50、 150、 300mg/kg低、中、高3個劑量組，其中，高劑量 組可顯著升高小鼠肝組織勻漿AST 、 ALT和SOD活力，降低MDA和NO含量，并能明顯改善受損 肝組織的炎性浸潤和壞死，說明VTP對免疫性肝損傷具有較強(qiáng)的治療和保護(hù)作用。
綜上所述，VTP在體內(nèi)、外試驗中具有一致的較強(qiáng)的免疫保護(hù)作用，提示VTP作為免疫增 強(qiáng)劑和免疫調(diào)節(jié)劑具有良好的應(yīng)用前景。
權(quán)利要求
1、一種葡萄多糖，其特征在于該葡萄多糖按下述步驟得到向葡萄濃縮液中加入4倍至9倍葡萄濃縮液重量的95％乙醇，常溫下充分?jǐn)嚢瑁o置4小時至12小時后析出粗多糖，用300目至500目的濾布進(jìn)行過濾，收集得到粗多糖。
全文摘要
本發(fā)明涉及從葡萄或葡萄干中提取葡萄多糖方面的技術(shù)領(lǐng)域，是一種葡萄多糖及其提取方法和應(yīng)用，該葡萄多糖按下述步驟得到向葡萄濃縮液中加入4倍至9倍葡萄濃縮液重量的95％乙醇，常溫下充分?jǐn)嚢?，靜置4小時至12小時后析出粗多糖，用300目至500目的濾布進(jìn)行過濾，收集得到粗多糖。本發(fā)明能有效提取得到葡萄多糖，該提取方法簡單，所得葡萄多糖能應(yīng)用于制備用于治療因免疫功能異常而引起的疾病或用于調(diào)節(jié)因疾病引起機(jī)體免疫功能異常的狀態(tài)方面的藥物組合物。所得葡萄多糖在體內(nèi)、外試驗中具有一致的較強(qiáng)的免疫保護(hù)作用，提示本發(fā)明所得葡萄多糖作為免疫增強(qiáng)劑和免疫調(diào)節(jié)劑具有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號A61K31/715GK101104648SQ20071020135
公開日2008年1月16日 申請日期2007年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月14日
發(fā)明者濤 劉, 周曉輝, 軍 趙, 龍 馬 申請人:新疆醫(yī)科大學(xué)