專利名稱：治療小兒食積的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療小兒食積的中藥組合物，尤其是涉及一種小兒因脾胃不和引起的食積、厭食、瀉痢的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
小兒食積、厭食主要是由于以下原因一是飲食不當(dāng)。有些家長缺乏育兒保健知識，飲食不講科學(xué)，不重視衛(wèi)生，片面強(qiáng)調(diào)吃些高營養(yǎng)的滋補(bǔ)食品，傷及小兒嬌嫩的胃腸，造成胃腸不能正常消化、吸收，以致食欲下降，甚至濫用補(bǔ)品，造成小兒性早熟等疾病。也有家長認(rèn)為孩子吃得越多越壯，使小兒營養(yǎng)過剩，造成脂肪細(xì)胞數(shù)量增多和脂肪細(xì)胞個(gè)體肥大，使多余的脂肪堆積在身體各部，再加上活動較少，使小兒形成肥胖癥。孩子胖而非壯，反是百病之源。二是過于放縱，飲食不節(jié)制。有些家長由于對孩子溺愛，對孩子的各種要求百依百順，養(yǎng)成孩子放縱任性的習(xí)慣，如無節(jié)制的吃零食、喝冷飲、吃瓜果等，使孩子從小養(yǎng)成不良的進(jìn)食習(xí)慣，導(dǎo)致小兒脾胃不和，脾失健運(yùn)，出現(xiàn)積滯、嘔吐、泄瀉、厭食等癥，影響孩子的身體健康。中醫(yī)認(rèn)為脾胃為后天之本，氣血生化之源，一旦脾胃不和，必然引起的食積脹滿，飲食停滯，嘔吐泄痢等癥，中醫(yī)治療脾胃不和多以健脾開胃，消食化積藥物為主。中醫(yī)治療小兒脾胃不和效果顯著，不僅避免了西藥對小兒胃腸的刺激及不良反應(yīng)的出現(xiàn)，而且能夠達(dá)到標(biāo)本兼治的效果。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療小兒食積的中藥組合物； 本發(fā)明的另一目的是提供該中藥組合物的制備方法； 本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供該中藥組合物的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的 本發(fā)明所述治療小兒食積的中藥組合物，它是由以下重量份原料藥組成雞內(nèi)金50～70重量份、六神曲60～80重量份。
上述治療小兒食積的中藥組合物還包括以下原料藥山楂10～20重量份、土白術(shù)20～40重量份。
本發(fā)明所述治療小兒食積的中藥組合物，其制備方法包括以下步驟 (1)取雞內(nèi)金藥材，用流動水清洗，除去其余雜質(zhì)及灰塵等，然后50～60℃烘干，取出，噴以60～80％乙醇，悶潤20～50分鐘，50～60℃左右烘干，即可； (2)取六神曲藥材，噴以50～80％乙醇悶潤至表面全部潤濕，常溫晾干，即可； (3)稱取步驟(1)、(2)所得凈選后的原料藥材雞內(nèi)金50～70重量份、六神曲60～80重量份； (4)將步驟(3)中雞內(nèi)金粉碎至最細(xì)粉，作為活性成份I；或用水對雞內(nèi)金進(jìn)行回流提取，得到水提濃縮液作為活性成份I； (5)將步驟(3)中六神曲粉碎至最細(xì)粉，作為活性成份II； (6)把活性成份I和活性成份II混合并加入附加劑，制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑。
上述的本發(fā)明中藥組合物的制備方法中，附加劑包括蔗糖30～80重量份、淀粉60～90重量份、硬脂酸鎂1～3重量份中的一種或幾種。
本發(fā)明中藥組合物的制備方法中所述的最細(xì)粉的粒徑125～150μm。
本發(fā)明所述的中藥組合物片劑的制備方法，其中制粒時(shí)所用潤濕劑為40％～60％乙醇。
本發(fā)明藥物組合物中雞內(nèi)金健胃消食，六神曲健脾和胃、消食調(diào)中，山楂消食健胃，土白術(shù)健脾、和胃。諸藥合用共奏健脾開胃，消食化積之功效。
本發(fā)明中藥組合物的質(zhì)量控制方法包括以下鑒別方法和/或含量測定方法中的一種或幾種 鑒別 (1)取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材2g，研細(xì)，加乙醚30-40ml，浸泡30-40分鐘，超聲處理10-20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2-4μl，分別點(diǎn)于同一以含4％醋酸鈉制成的硅膠G薄層板上，以乙醚-丙酮(3-61-3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (2)取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材2g，研細(xì)，用乙醚30-40ml，加熱回流20-30分鐘，放冷，濾過，濾液揮干溶劑，殘?jiān)右宜嵋阴?.5ml，作為供試品溶液；取白術(shù)對照藥材0.5g，加正己烷2-5ml，超聲處理110-20分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對照藥材溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(40-601-5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，并應(yīng)顯有一桃紅色主斑點(diǎn)； 含量測定 取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材5g，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，置10ml量瓶中，加0.060～0.070mol/L的鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，濾過，取濾液作為供試品溶液；另取105℃干燥至恒重的酪氨酸對照品適量，加0.065mol/L的鹽酸溶液制成每1ml中含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；取試管6支，其中3支分別精密加入對照品溶液1ml，另3支分別精密加入供試品溶液1ml，置37℃水浴中，保溫3～7分鐘，精密加入預(yù)熱至37℃的血紅蛋白試液5ml，搖勻，并準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，在37℃水浴中反應(yīng)8～12分鐘。立即精密加入3～7％三氯醋酸溶液5ml，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用。另取試管2支，各精密加入血紅蛋白試液5ml，置37℃水浴中保溫8～12分鐘，再精密加入3～7％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供試品溶液1ml，另1支加上述鹽酸溶液1ml，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，分別作為供試品和對照品的空白對照，照分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄IV A)在260～280nm的波長處測定吸收度，計(jì)算，即得； 本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原料藥材0.5g含雞內(nèi)金以胃蛋白酶計(jì)不低于2.0IU/g。
本發(fā)明中藥組合物的質(zhì)量控制方法優(yōu)選以下鑒別方法和/或含量測定方法中的一種或幾種 鑒別 (1)取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材2g，研細(xì)，加乙醚30ml，浸泡30分鐘，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一以含4％醋酸鈉制成的硅膠G薄層板上，以乙醚-丙酮(41)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)； (2)取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材2g，研細(xì)，用乙醚30ml，加熱回流20分鐘，放冷，濾過，濾液揮干溶劑，殘?jiān)右宜嵋阴?.5ml，作為供試品溶液；取白術(shù)對照藥材0.5g，加正己烷2ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對照藥材溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(501)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，并應(yīng)顯有一桃紅色主斑點(diǎn)； 含量測定 取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材5g，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，置10ml量瓶中，加0.065mol/L的鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，濾過，取濾液作為供試品溶液；另取105℃干燥至恒重的酪氨酸對照品適量，加0.065mol/L的鹽酸溶液制成每1ml中含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；取試管6支，其中3支分別精密加入對照品溶液1ml，另3支分別精密加入供試品溶液1ml，置37℃水浴中，保溫5分鐘，精密加入預(yù)熱至37℃的血紅蛋白試液5ml，搖勻，并準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，在37℃水浴中反應(yīng)10分鐘；立即精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用；另取試管2支，各精密加入血紅蛋白試液5ml，置37℃水浴中保溫10分鐘，再精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供試品溶液1ml，另1支加上述鹽酸溶液1ml，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，分別作為供試品和對照品的空白對照，照分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄IV A)在275nm的波長處測定吸收度，計(jì)算，即得； 本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原料藥材0.5g含雞內(nèi)金以胃蛋白酶計(jì)不低于2.0IU/g。
本發(fā)明所提供的中藥組合物的制備方法和質(zhì)量控制方法，是通過大量具體創(chuàng)造性試驗(yàn)篩選后得到。制備方法中通過對各味藥材有效成份分析，根據(jù)臨床需要，制定出合適的工藝路線。鑒別方法中通過對樣品處理方法的篩選，使得鑒別顯色效果明顯，而且方法經(jīng)濟(jì)適用、結(jié)果快速。含量測定方法中通過對供試品處理方法的篩選，使得含量測定方法可以很有效的對產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量控制，并且用該方法測定的產(chǎn)品要相比其他方法測定的產(chǎn)品在藥理效果上表現(xiàn)的更為穩(wěn)定，臨床效果更好。
下述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。

具體實(shí)施例方式 試驗(yàn)例1、制備工藝試驗(yàn)研究 本發(fā)明中藥組合物處方中原料藥雞內(nèi)金主要含胃蛋白酶、淀粉酶、類角蛋白及谷氨酸、精氨酸、天門冬氨酸、頡氨酸等17種氨基酸，六神曲主要含有有酵母菌，其他成份有揮發(fā)油、甙類、脂肪油及維生素B等，山楂提取物主要有效成份為有機(jī)酸及山楂黃銅類，白術(shù)含有蒼術(shù)酮、白術(shù)內(nèi)酯A和B等揮發(fā)油。其中蛋白質(zhì)、氨基酸類、酶類、揮發(fā)油類物質(zhì)在提取過程中極易被破壞，所以在設(shè)計(jì)制備工藝時(shí)根據(jù)各味藥所含有效成份的不同，經(jīng)過多次考察，最后確定在制備不同制劑時(shí)采用不同的原料藥提取方法，這樣不僅滿足了制劑的需要，而且最大限度保留了藥物中的有效成份。下面是片劑部分工藝試驗(yàn)的結(jié)果。
1、粉碎度考察 由于小兒服用藥物一般比較困難，常采用沖服或通過咀嚼服用，而藥材粉碎度對于藥物的口感有很大的影響，因此應(yīng)盡可能提高藥材的粉碎度以保持良好的口感，但如果粉末過細(xì)，則易附著于沖頭表面，造成粘沖和拉沖。為此我們做了粉碎度考察。
1.1 雞內(nèi)金細(xì)度考察 取雞內(nèi)金藥材850g，粉碎，分別過4號(65目)、5號(80目)、6號(100目)篩，計(jì)算收率，結(jié)果如表1。
表1 雞內(nèi)金藥材細(xì)度考察結(jié)果(n＝3)
經(jīng)粉碎試驗(yàn)表明粉碎度愈細(xì)，粉碎收率愈低，但口感愈好，口中的砂粒感愈小。因此選用藥材粉碎過6號篩，其粒徑為125～150μm。
1.2 六神曲、土白術(shù)和山楂細(xì)度考察 取六神曲1650g、土白術(shù)600g、山楂300g粉碎，分別過4號(65目)、5號(80目)、6號(100目)篩，計(jì)算收率，結(jié)果如表2。
表2 六神曲、土白術(shù)細(xì)度考察結(jié)果(n＝3)
結(jié)果表明粉碎度愈細(xì)，粉碎收率愈低，但口感愈好，口中的砂粒感愈小。因此選用藥材粉碎過6號篩，其粒徑為125～150μm。
2、輔料的選擇 稱取雞內(nèi)金425g、六神曲825g、山楂150g、土白術(shù)300g，粉碎至粒徑為125～150μm，加入輔料，混勻，制粒，干燥，整粒，再加入適量的硬脂酸鎂，壓片，即得。通過比較壓片的難易、片劑外觀、口感，選擇合適的輔料及輔料用量比例，結(jié)果見下表3 表3 輔料選擇試驗(yàn)結(jié)果
從上表可以看出，片劑輔料選擇蔗糖、淀粉，與藥粉比例以523為佳，制得片劑口感及外觀均較其他輔料處方好。
3、制粒工藝考察 按照上述優(yōu)選工藝，稱取雞內(nèi)金、六神曲、山楂、白術(shù)、蔗糖粉和淀粉，將雞內(nèi)金、六神曲、山楂、土白術(shù)粉碎，混合均勻，進(jìn)行全粉末壓片，結(jié)果表明，藥粉的流動性較差，容易造成片重差異不合格或松片現(xiàn)象，同時(shí)有粘沖現(xiàn)象。
在本發(fā)明藥物中加入了蔗糖和淀粉兩種輔料，但這兩種輔料的流動性和可壓性均不夠理想，因此考慮將藥粉進(jìn)行制粒以改善流動性和可壓性。同時(shí)適當(dāng)加入潤滑劑以改善顆粒的流動性，減少顆粒與沖模之間的摩擦力，保證片劑劑量的準(zhǔn)確、光潔。試驗(yàn)結(jié)果如下 表4-1 制粒工藝考察(1)

結(jié)果表明采用50％乙醇為潤濕劑進(jìn)行制粒，藥粉黏性適當(dāng)，制粒容易，顆粒松軟，色澤均勻，故選用50％乙醇為潤濕劑制粒。
按上述優(yōu)選方法制粒，經(jīng)過整粒，然后比較加入不同潤滑劑后，顆粒的流動性及壓片的難以等情況。
表4-2 制粒工藝考察(2)
結(jié)果表明加入0.4％硬脂酸鎂作為潤滑劑，混合均勻，壓片，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明加入后可以有效地消除粘沖現(xiàn)象，片劑表面光潔，顆粒流動性好，劑量準(zhǔn)確。因此選用硬脂酸鎂作為潤滑劑。
4、藥材凈選 本發(fā)明藥物中部分藥材為全粉碎入藥，因此藥材的凈選工藝對于制劑的質(zhì)量和品質(zhì)具有十分重要的意義。
4.1 雞內(nèi)金的凈選 本發(fā)明藥物制劑中雞內(nèi)金采用生品入藥，因雞內(nèi)金為動物類藥材稚科動物家雞的干燥沙囊內(nèi)壁，在對市場上雞內(nèi)金藥材的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在市場上銷售的雞內(nèi)金藥材，常含有部分的腐爛、變質(zhì)的藥材，常帶有部分雞的內(nèi)臟物質(zhì)和雜質(zhì)，同時(shí)含有大量的微生物，如果不對雞內(nèi)金進(jìn)行凈選和抑菌處理是不能直接入藥。文獻(xiàn)報(bào)道雞內(nèi)金的主要有效成分為胃蛋白酶，胃蛋白酶在干燥狀態(tài)下活力比較穩(wěn)定，可以100℃加熱10分鐘不破壞，最適pH值為1.5～2.0，溶于20％乙醇溶液中；但在堿性條件下不穩(wěn)定。因此我們采用以下工藝對其進(jìn)行凈選 取雞內(nèi)金藥材，置挑選臺上，挑選出霉變、腐爛的藥材，再用流動水清洗，除去其余雜質(zhì)及灰塵等，然后60℃左右烘干，取出，噴以75％乙醇，悶潤30分鐘，60℃左右烘干，即可。
4.2 六神曲的凈選 六神曲為辣蓼、青蒿、蒼耳、赤小豆、苦杏仁等藥加入面粉或麩皮混和后，經(jīng)發(fā)酵而制成的曲劑，易染菌。研究表明曲劑以直接入藥效果最好，但由于曲劑為生物發(fā)酵制品，所以含雜菌量很高，且常有霉變現(xiàn)象，因此入藥前需要對藥材進(jìn)行凈選。研究表明在六神曲藥材中，藥材的表面含有大量的雜菌，而藥材的內(nèi)部中則主要含酵母菌。我們采用下列方法進(jìn)行藥材的處理。
先挑選出霉腐、蟲蛀者，其余噴以70％乙醇悶潤至表面全部潤濕，室溫晾干，即可。
試驗(yàn)例2 質(zhì)量控制方法試驗(yàn)研究 在本發(fā)明中藥組合物質(zhì)量控制方法中對山楂提取物中熊果酸、土白術(shù)進(jìn)行了薄層鑒別；雞內(nèi)金為君藥，其有效成份含量的控制對本發(fā)明藥物的療效有顯著性意義，進(jìn)行了含量測定。以下是部分質(zhì)量控制方法試驗(yàn)結(jié)果。
1、鑒別方法 (1)山楂的鑒別 供試品溶液的制備取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材2g，研細(xì)，加乙醚30ml，浸泡30分鐘，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。
對照品溶液的制備取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。
陰性對照品溶液的制備按照供試品制備方法制備缺山楂的陰性對照樣品，再按照供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。
照薄層色譜法(附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各2μl，分別點(diǎn)于不同的薄層板上，展開。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。比較不同展開條件下，供試品溶液和對照品溶液的展開效果，結(jié)果見下表5 表5 薄層色譜展開條件的選擇 從上表可以看出，選擇展開條件2，供試品在與對照品相應(yīng)位置，各斑點(diǎn)顯色清晰，分離效果好，重現(xiàn)性好，陰性無干擾，符合試驗(yàn)要求。
(2)白術(shù)的薄層鑒別 方法一取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材2g，研細(xì)，用乙醚30ml，加熱回流20分鐘，放冷，濾過，濾液揮干溶劑，殘?jiān)右宜嵋掖?.5ml，作為供試品溶液。按照供試品制備方法制備缺白術(shù)的陰性對照樣品，再按照供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。取白術(shù)對照藥材0.5g，加正己烷2ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、陰性對照品溶液及對照藥材溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(501)為展開劑，置用展開劑預(yù)飽和15分鐘的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，并應(yīng)顯有一桃紅色主斑點(diǎn)，陰性無干擾。
方法二取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材10g，研細(xì)，置500ml圓底燒瓶中，加水250ml，連接揮發(fā)油測定器，自測定器上端加水至刻度，并溢流入燒瓶時(shí)為止，再加入石油醚(60～90℃)1ml，加熱并保持微沸2小時(shí)，放冷，取石油醚層作為供試品溶液。按照供試品制備方法制備缺白術(shù)的陰性對照樣品，再按照供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。另取白術(shù)對照藥材1.8g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各3μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，但斑點(diǎn)不清晰，且該方法重現(xiàn)性不好。
方法三取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材2g，研細(xì)，加乙酸乙酯20ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。按照供試品制備方法制備缺白術(shù)的陰性對照樣品，再按照供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。另取白術(shù)對照藥材0.5g，加乙酸乙酯10ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷-甲苯-乙酸乙酯(1433)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜圖中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，各斑點(diǎn)顯色較淺，且該方法重現(xiàn)性不好。
比較以上方法，方法一的效果最好，不僅展開效果好、顯色清晰，而且重現(xiàn)性好。
2、含量測定 雞內(nèi)金中胃蛋白酶為其有效成分和特征性成分，為了控制制劑質(zhì)量，我們采用分光光度法對雞內(nèi)金中的胃蛋白酶活力進(jìn)行測定。
1、儀器、試劑及試藥 754型紫外—可見分光光度計(jì)上海分析儀器廠 電熱恒溫水溫箱 美國丹法(Denver)十萬分之一電子分析天平 鹽酸 分析純 批號20030423 北京化工廠 三氯醋酸 分析純 批號20030215 北京化工廠 L—酪氨酸對照品 中國藥品生物制品鑒定所 批號140609—200109 牛血紅蛋白 中國藥品生物制品鑒定所 批號140608—200301 2、測定方法的選擇 對照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的L—酪氨酸對照品適量，加0.065mol/L的鹽酸溶液制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液，即得。
牛血紅蛋白試液的制備 取牛血紅蛋白1g，置100ml量瓶中，加0.065mol/L的鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 取本發(fā)明中藥組合物3份，每份相當(dāng)于原藥材1g，精密稱定，置10ml量瓶中，加0.065mol/L的鹽酸溶解并稀釋至刻線，濾過，取濾液作為供試品溶液。
樣品測定 取試管6支，其中3支各精密加入對照品溶液1ml，另3支各精密加入供試品溶液1ml，置37℃水浴中，保溫5分鐘，精密加入預(yù)熱至37℃的血紅蛋白試液5ml，搖勻，并準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，在37℃水浴中反應(yīng)10分鐘。立即精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用。另取試管2支，各精密加入血紅蛋白試液5ml，置37℃水浴中保溫10分鐘，再精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供試品溶液1ml，另1支加上述鹽酸溶液1ml，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，分別作為供試品和對照品的空白對照，照分光光度法(附錄IV A)在275nm的波長處測定吸收度，算出平均值A(chǔ)s和A，按下式計(jì)算。

(As對照品平均吸收度；A供試品平均吸收度；Ws1ml對照品溶液中含酪氨酸的量，μg；w供試品取樣量，g；n供試品的稀釋倍數(shù)。)結(jié)果見表6 表6 胃蛋白酶活力測定結(jié)果表
結(jié)果表明3份本發(fā)明藥物含量測定的RSD％為1.18％，方法具有重現(xiàn)性好、簡單、快速的特點(diǎn)，故可以用于含量測定。
3、加樣回收率試驗(yàn) 對照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的L—酪氨酸對照品適量，加0.065mol/L的鹽酸溶液制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液，即得。
牛血紅蛋白試液的制備 取牛血紅蛋白2.5g，置250ml量瓶中，加0.065mol/L的鹽酸溶液溶解并稀釋至刻線，搖勻，即得。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 取雞內(nèi)金粉末約0.07g，精密稱定，至10ml量瓶中，加0.065mol/L的鹽酸溶解并稀釋至刻線，濾過，取濾液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。
供試品溶液的制備 取本發(fā)明中藥組合物共6份，每份約相當(dāng)于原藥材0.8g，精密稱定，分別置10ml量瓶中，加0.065mol/L的鹽酸溶解并稀釋至刻線，濾過，取濾液作為供試品溶液。
測定方法 標(biāo)準(zhǔn)溶液的測定 取具塞試管3支，各管均加入血紅蛋白試液5.0ml，于37℃恒溫水浴中保溫10min，其中1支作為空白，加5％三氯醋酸液5.0ml，混勻，所有試管均精密加入標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0ml，立即混勻，準(zhǔn)確反應(yīng)10min，除空白試管外，其余試管再分別加入5％三氯醋酸液5.0ml，立即混勻，靜置15min，分別濾過，濾液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別量取標(biāo)準(zhǔn)溶液和標(biāo)準(zhǔn)空白溶液各1.0ml，照分光光度法(附錄IV A)在275nm的波長處測定吸收度，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)管的平均吸收度。
供試品溶液的測定 取具塞試管11支，各管均加入血紅蛋白試液5.0ml，于37℃恒溫水浴中保溫10min，其中1支作為空白，加5％三氯醋酸液5.0ml，混勻，所有試管均精密加入供試品溶液1.0ml，立即混勻，準(zhǔn)確反應(yīng)10min，除空白試管外，其余試管再分別加入5％三氯醋酸液5.0ml，立即混勻，靜置15min，分別濾過，濾液作為供試品溶液。分別量取供試品溶液和供試品空白溶液各1.0ml，照分光光度法(附錄IV A)在275nm的波長處測定吸收度，計(jì)算出供試品溶液的平均吸收度。
回收率％＝(供試品溶液平均吸收度-供試品空白對照液的平均吸收度)/(標(biāo)準(zhǔn)溶液平均吸收度-標(biāo)準(zhǔn)空白對照液的平均吸收度)×100％，結(jié)果見表7 表7 胃蛋白酶活力回收率表
(6號為供試品空白 7號為標(biāo)準(zhǔn)溶液) 結(jié)果表明胃蛋白酶活力回收率在99.18％～102.50％之間，平均回收率為100.00％，符合規(guī)定，故本方法可行。
通過上述方法學(xué)試驗(yàn)研究，結(jié)果表明，采用紫外分光廣度法測定本發(fā)明藥物中胃蛋白酶活力，該方法具有簡便、可靠、快速的特點(diǎn)，適合制劑的含量測定和質(zhì)量評價(jià)。
試驗(yàn)例3 藥效學(xué)試驗(yàn)研究 1 材料 1.1 試驗(yàn)藥物及試劑 本發(fā)明藥物I，按照實(shí)施例1制備的制劑；本發(fā)明藥物II，按照實(shí)施例2制備的制劑；本發(fā)明藥物III，按照實(shí)施例3制備的制劑；陽性對照藥物，市售小兒健脾散；鹽酸腎上腺素注射液，廣州明興制藥廠生產(chǎn)。
1.2 動物及實(shí)驗(yàn)環(huán)境 SD大鼠，清潔級，體重180～220g，雌雄兼用；NIH小鼠、ICR小鼠、昆明種小鼠，清潔級，體重18～22g，雌雄兼用；新西蘭兔，普通級，體重2.0～2.5kg。
2 方法和結(jié)果 2.1 兔離體腸管運(yùn)動試驗(yàn) 兔槌擊頭部致死，立即取出十二指腸置臺氏液中，用臺氏液洗去腸腔內(nèi)容物，取長約2.0cm的腸管懸掛于盛有20ml臺氏液的麥?zhǔn)显」苤?，恒?7±0.5℃，并通入空氣，用WXT-自動平衡記錄儀描記運(yùn)動曲線，待腸管運(yùn)動基本規(guī)則后進(jìn)行如下試驗(yàn)。本發(fā)明藥物I～I(xiàn)II、陽性對照藥物分別取日用量，實(shí)驗(yàn)時(shí)以蒸餾水配制成混懸液，離體實(shí)驗(yàn)則離心后取上清液。
對十二指腸自發(fā)活動的影響分別加入本發(fā)明藥物I～I(xiàn)II及陽性對照藥物上清液各0.5ml，觀察記錄給藥前后運(yùn)動曲線的變化，以自發(fā)活動興奮百分率表示。自發(fā)活動興奮百分率＝(加藥后5min收縮幅度-加藥前收縮幅度)/加藥前收縮幅度×100％。
對腎上腺素(Adr)引起十二指腸收縮抑制的對抗作用加入1g/L的Adr溶液0.1mL，待再次進(jìn)入穩(wěn)定期后，分別加入本發(fā)明藥物I～I(xiàn)II及陽性對照藥物上清液各0.5ml，觀察記錄給藥前后運(yùn)動曲線的變化，以對抗腎上腺素百分率表示，對抗腎上腺素百分率＝(加藥后5min收縮幅度-加藥前收縮幅度)/(加Adr前收縮幅度-加藥前收縮幅度)×100％。見表8。
表8 對家兔離體十二指腸運(yùn)動的影響(x±s) 注與陽性對照藥物比較**P<0.01，*P<0.05。
結(jié)果表明本發(fā)明藥物與陽性對照藥物對家兔離體十二指腸自發(fā)活動均有興奮作用，對腎上腺素引起的十二指腸收縮抑制有明顯的解除作用，部分腸管加藥后收縮幅度大于加腎上素前的基礎(chǔ)水平，本發(fā)明藥物的作用優(yōu)于陽性對照藥物，其中本發(fā)明藥物I的作用最顯著。
2.2 對正常小鼠胃排空的作用 小鼠50只，隨機(jī)分為5組。本發(fā)明藥物、陽性對照藥物均按日用量的20倍設(shè)計(jì)。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食12小時(shí)，分別灌服藥物或蒸餾水20ml/kg，給藥后2小時(shí)，每鼠灌胃0.04％酚紅溶液(含1.5％羧甲基纖維素)0.2ml，20分鐘后處死動物，結(jié)扎賁門和幽門后取出胃，置于30ml 0.5N NaOH溶液中，沿胃大彎剪開胃，充分洗下胃內(nèi)容物，取5ml3000rpm離心10分鐘，吸上清液用722型分光光度計(jì)于560nm波長測吸光度(OD值)。標(biāo)準(zhǔn)管吸取0.2ml酚紅溶液直接加入30ml 0.5N NaOH溶液中測OD值，以樣本OD值與標(biāo)準(zhǔn)管OD值的比值計(jì)算胃酚紅殘留率，以胃酚紅殘留率為指標(biāo)評價(jià)胃排空速度。結(jié)果見下表9 表9 對正常小鼠胃排空的影響(x±s) 與空白對照組比較*P<0.05，**P<0.01；與陽性對照藥物組比較#P<0.05。
以上結(jié)果表明，本發(fā)明藥物及陽性對照藥物對正常小鼠胃排空均有促進(jìn)作用。其中本發(fā)明藥物的作用均高于陽性對照藥物，尤其本發(fā)明藥物I與陽性對照藥物比較有顯著性差異。
2.3 對腎上腺素負(fù)荷小鼠胃排空的影響 小鼠60只分層隨機(jī)分為6組，用腎上腺素制備胃排空抑制模型，同2.1所述方法進(jìn)行試驗(yàn)，給藥前禁食12小時(shí)，給藥后1小時(shí)45分除正常對照組外，各組小鼠皮下注射腎上腺素0.5mg/kg，15分鐘后灌胃酚紅溶液，30分鐘后處死動物，按上述方法分別測量胃酚紅殘留率。
表10 對腎上腺素負(fù)荷小鼠胃排空的影響(x±s) 與腎上腺素組比較*P<0.05，**P<0.01；與陽性對照藥物組比較#P<0.05。
以上結(jié)果表明，腎上腺素組胃酚紅殘留率顯著升高，本發(fā)明藥物組和陽性藥物對照組胃酚紅殘留率則較單純腎上腺素組明顯下降，本發(fā)明藥物與陽性對照藥物對腎上腺素引起胃排空抑制有一定的拮抗作用，其中本發(fā)明藥物組中本發(fā)明藥物I的拮抗作用較陽性對照藥物有顯著性增強(qiáng)。
2.4 對大鼠胃酸、胃蛋白酶分泌的影響 大鼠55只隨機(jī)分5組，本發(fā)明藥物I～I(xiàn)II及陽性對照藥物均按臨床成人日用量的20倍設(shè)計(jì)給藥。給藥體積均為10ml/100g體重，空白對照組給等體積蒸餾水。大鼠禁食不禁水24小時(shí)后在乙醚輕度麻醉下開腹結(jié)扎幽門，立即在十二指腸注入藥物或蒸餾水，關(guān)腹縫合創(chuàng)口，送回籠中。手術(shù)后5小時(shí)處死動物，收集胃液2000rpm離心10分鐘。分別測量胃液量、游離酸度、總酸度、總酸排出量、胃蛋白酶活性及胃蛋白酶排出量。胃酸采用酸堿中和滴定法，胃蛋白酶活性采用麥特氏法，結(jié)果見表11。
表11 對胃液分泌量、胃酸分泌、胃蛋白酶分泌的影響(-x±s) 與空白對照組比較*P<0.05，**P<0.01；與陽性對照藥物組比較#P<0.05。
結(jié)果表明，本發(fā)明藥物組的胃液量、總酸排出量明顯增加，對胃蛋白酶排出量也有一定的促進(jìn)作用。但陽性對照藥物對胃液量及總酸排出量表現(xiàn)明顯的抑制作用。本發(fā)明藥物促進(jìn)胃蛋白酶排除的作用優(yōu)于陽性對照藥物，以本發(fā)明藥物I的作用最好。
2.5 對脾虛小鼠常溫游泳時(shí)間的影響 選取25～28g的ICR小鼠64只，雌雄各半，先用生大黃煎液30g/kg給小鼠灌胃，每天1次，連續(xù)給9d，以造成小鼠脾虛模型。然后按下表1分組并灌胃給藥，每天1次，連續(xù)7d，同期另沒正常組。于末次給藥30min，測定各組小鼠游泳持續(xù)時(shí)間(水溫29℃、負(fù)重10％)，結(jié)果見表12。
表12 常溫下對脾虛小鼠游泳時(shí)間的影響(-x±s) 注與正常組比.##P<001；與陰性對照組比.**P<0.01。
表明本發(fā)明藥物及陽性對照藥物均能顯著延長脾虛小鼠在常溫下的游泳時(shí)間，本發(fā)明藥物的作用優(yōu)于陽性對照藥物，其中本發(fā)明藥物I的作用最好。
2.6 對脾虛小鼠常壓下耐缺氧存活時(shí)間的影響 按照2.5的方法造成小鼠脾虛模型。各組每天1次，連續(xù)7d。末次給藥30min，按常規(guī)方法測小鼠常壓缺氧時(shí)間，結(jié)果見表13。
表13 常壓下對脾虛小鼠耐缺氧存活時(shí)間的影響(x±s) 注與正常組比.##P<0.01；與陰性對照組比.**P<0.01，*P<0.05；與陽性藥物對照組比較※P<0.05。
以上結(jié)果表明，本發(fā)明藥物及陽性對照藥物均能明顯延長脾虛小鼠在常壓缺氧條件下的存活時(shí)間，本發(fā)明藥物I的作用顯著優(yōu)于陽性對照藥物。
從以上藥效學(xué)試驗(yàn)可以看出，本發(fā)明藥物具有良好的健脾開胃、消食化積的作用，尤其是本發(fā)明藥物I，對家兔離體十二指腸運(yùn)動的影響、對正常小鼠胃排空的影響、對腎上腺素負(fù)荷小鼠胃排空的影響、對大鼠胃酸、胃蛋白酶分泌的影響、常溫下對脾虛小鼠游泳時(shí)間的影響及常壓下對脾虛小鼠耐缺氧存活時(shí)間的影響都有非常顯著的效果。
具體實(shí)施例 實(shí)施例1 取雞內(nèi)金藥材，用流動水清洗，除去其余雜質(zhì)及灰塵等，然后50℃烘干，取出，噴以80％乙醇，悶潤20分鐘，50℃烘干，備用；取六神曲藥材，噴以60％乙醇悶潤至表面全部潤濕，常溫晾干，備用；按以下處方量稱取經(jīng)凈選的原料藥材 雞內(nèi)金60g、六神曲65g、山楂15g、土白術(shù)30g 以上四味，分別粉碎至100目，加入白砂糖粉68g，淀粉102g，混勻，過篩，用50％乙醇制粒，60℃干燥，整粒，加入0.4％硬脂酸鎂，混勻，壓制成1000片，即得。
鑒別 (1)取本品5片，研細(xì)，加乙醚30ml，浸泡30分鐘，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一以含4％醋酸鈉制成的硅膠G薄層板上，以乙醚-丙酮(41)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn). (2)取本品5片，研細(xì)，用乙醚30ml，加熱回流20分鐘，放冷，濾過，濾液揮干溶劑，殘?jiān)右宜嵋阴?.5ml，作為供試品溶液。取白術(shù)對照藥材0.5g，加正己烷2ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對照藥材溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(501)為展開劑，置用展開劑預(yù)飽和15分鐘的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，并應(yīng)顯有一桃紅色主斑點(diǎn)。
含量測定 取本品10g，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，置10ml量瓶中，加0.065mol/L的鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，濾過，取濾液作為供試品溶液；另取105℃干燥至恒重的酪氨酸對照品適量，加0.065mol/L的鹽酸溶液制成每1ml中含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；取試管6支，其中3支分別精密加入對照品溶液1ml，另3支分別精密加入供試品溶液1ml，置37℃水浴中，保溫5分鐘，精密加入預(yù)熱至37℃的血紅蛋白試液5ml，搖勻，并準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，在37℃水浴中反應(yīng)10分鐘，立即精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用；另取試管2支，各精密加入血紅蛋白試液5ml，置37℃水浴中保溫10分鐘，再精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供試品溶液1ml，另1支加上述鹽酸溶液1ml，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，分別作為供試品和對照品的空白對照，照分光光度法(附錄IV A)在275nm的波長處測定吸收度，計(jì)算；本品含雞內(nèi)金以胃蛋白酶計(jì)不低于2.0IU/g。
實(shí)施例2 取雞內(nèi)金藥材，用流動水清洗，除去其余雜質(zhì)及灰塵等，然后60℃烘干，取出，噴以75％乙醇，悶潤30分鐘，60℃烘干，備用；取六神曲藥材，噴以70％乙醇悶潤至表面全部潤濕，常溫晾干，備用；按以下處方量稱取經(jīng)凈選的原料藥材 雞內(nèi)金50g、六神曲80g、山楂15g、土白術(shù)30g 以上四味，取雞內(nèi)金加8倍量水煎煮3次，第一次煎煮3小時(shí)，第二次煎煮2小時(shí)，第三次煎煮1次，合并煎液，濃縮至相對密度為1.20(50℃)，備用；將六神曲、山楂、土白術(shù)分別粉碎至100目，加入上述浸膏，混勻，減壓干燥，粉碎至100目，加入白砂糖粉60g，淀粉95g，混勻，過篩，用50％乙醇制粒，60℃干燥，整粒，加入0.4％硬脂酸鎂，混勻，壓制成1000片，即得。
實(shí)施例3 取雞內(nèi)金藥材，用流動水清洗，除去其余雜質(zhì)及灰塵等，然后60℃烘干，取出，噴以75％乙醇，悶潤30分鐘，60℃烘干，備用；取六神曲藥材，噴以70％乙醇悶潤至表面全部潤濕，常溫晾干，備用；按以下處方量稱取經(jīng)凈選的原料藥材 雞內(nèi)金70g、六神曲60g 以上二味，分別粉碎至100目，加入白砂糖粉50g，淀粉75g，混勻，過篩，用50％乙醇制粒，60℃干燥，整粒，加入0.4％硬脂酸鎂，混勻，壓制成1000片，即得。
含量測定 取本品10g，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，置10ml量瓶中，加0.065mol/L的鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，濾過，取濾液作為供試品溶液；另取105℃干燥至恒重的酪氨酸對照品適量，加0.065mol/L的鹽酸溶液制成每1ml中含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；取試管6支，其中3支分別精密加入對照品溶液1ml，另3支分別精密加入供試品溶液1ml，置37℃水浴中，保溫5分鐘，精密加入預(yù)熱至37℃的血紅蛋白試液5ml，搖勻，并準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，在37℃水浴中反應(yīng)10分鐘，立即精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用；另取試管2支，各精密加入血紅蛋白試液5ml，置37℃水浴中保溫10分鐘，再精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供試品溶液1ml，另1支加上述鹽酸溶液1ml，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，分別作為供試品和對照品的空白對照，照分光光度法(附錄IV A)在275nm的波長處測定吸收度，計(jì)算；本品含雞內(nèi)金以胃蛋白酶計(jì)不低于2.0IU/g。
實(shí)施例4 取雞內(nèi)金藥材，用流動水清洗，除去其余雜質(zhì)及灰塵等，然后55℃烘干，取出，噴以80％乙醇，悶潤25分鐘，55℃烘干，備用；取六神曲藥材，噴以65％乙醇悶潤至表面全部潤濕，常溫晾干，備用；按以下處方量稱取經(jīng)凈選的原料藥材 雞內(nèi)金70g、六神曲80g、山楂10g、土白術(shù)20g 以上四味，分別粉碎至100目，加入白砂糖粉64g，淀粉96g，混勻，過篩，用50％乙醇制粒，60℃干燥，整粒，加入0.4％硬脂酸鎂，混勻，壓制成1000片，即得。
實(shí)施例5 取雞內(nèi)金藥材，用流動水清洗，除去其余雜質(zhì)及灰塵等，然后60℃烘干，取出，噴以75％乙醇，悶潤30分鐘，60℃烘干，備用；取六神曲藥材，噴以70％乙醇悶潤至表面全部潤濕，常溫晾干，備用；按以下處方量稱取經(jīng)凈選的原料藥材 雞內(nèi)金50g、六神曲60g、山楂20g、土白術(shù)40g 以上四味，分別粉碎至100目，加入白砂糖粉68g，淀粉102g，混勻，過篩，用50％乙醇制粒，60℃干燥，整粒，加入0.4％硬脂酸鎂，混勻，壓制成1000片，即得。
實(shí)施例6 取雞內(nèi)金藥材，用流動水清洗，除去其余雜質(zhì)及灰塵等，然后60℃烘干，取出，噴以75％乙醇，悶潤30分鐘，60℃烘干，備用；取六神曲藥材，噴以70％乙醇悶潤至表面全部潤濕，常溫晾干，備用；按以下處方量稱取經(jīng)凈選的原料藥材 雞內(nèi)金60g、六神曲70g、山楂15g、土白術(shù)30g 以上四味，分別粉碎至100目，加入淀粉75g，混勻，過篩，用50％乙醇制粒，60℃干燥，整粒，加入0.4％硬脂酸鎂，混勻，裝入1000粒膠囊，即得。
實(shí)施例7 取雞內(nèi)金藥材，用流動水清洗，除去其余雜質(zhì)及灰塵等，然后60℃烘干，取出，噴以75％乙醇，悶潤30分鐘，60℃烘干，備用；取六神曲藥材，噴以70％乙醇悶潤至表面全部潤濕，常溫晾干，備用；按以下處方量稱取經(jīng)凈選的原料藥材 雞內(nèi)金60g、六神曲65g、山楂15g、土白術(shù)30g 以上四味，分別粉碎至100目，加入淀粉75g，混勻，過篩，用水泛丸，60℃干燥，即得。
權(quán)利要求
1、一種治療小兒食積的中藥組合物，其特征在于它是由以下重量份原料藥組成雞內(nèi)金50～70重量份、六神曲60～80重量份。
2、如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物還包括以下原料藥山楂10～20重量份、土白術(shù)20～40重量份。
3、如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其制備方法包括以下步驟
(1)取雞內(nèi)金藥材，用流動水清洗，除去其余雜質(zhì)及灰塵等，然后50～60℃烘干，取出，噴以60～80％乙醇，悶潤20～50分鐘，50～60℃烘干，即可；
(2)取六神曲藥材，噴以50～80％乙醇悶潤至表面全部潤濕，常溫晾干，即可；
(3)稱取步驟(1)、(2)所得凈選后的原料藥材雞內(nèi)金50～70重量份、六神曲60～80重量份；
(4)將步驟(3)中雞內(nèi)金粉碎至最細(xì)粉，作為活性成份I；或用水對雞內(nèi)金進(jìn)行回流提取，得到水提濃縮液作為活性成份I；
(5)將步驟(3)中六神曲粉碎至最細(xì)粉，作為活性成份II；
(6)把活性成份I和活性成份II混合并加入附加劑，制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑。
4、如權(quán)利要求3所述的中藥組合物制備方法，其中附加劑包括蔗糖30～80重量份、淀粉60～90重量份、硬脂酸鎂1～3重量份中的一種或幾種。
5、如權(quán)利要求3所述的中藥組合物制備方法，其中最細(xì)粉其粒徑為125～150μm。
6、如權(quán)利要求3所述的中藥組合物片劑的制備方法，其中制粒時(shí)所用潤濕劑為40％～60％乙醇。
7、如權(quán)利要求1～3任一項(xiàng)所述的中藥組合物，其質(zhì)量控制方法包括以下鑒別方法和/或含量測定方法中的一種或幾種
鑒別
(1)取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材2g，研細(xì)，加乙醚30-40ml，浸泡30-40分鐘，超聲處理10-20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2-4μl，分別點(diǎn)于同一以含4％醋酸鈉制成的硅膠G薄層板上，以乙醚-丙酮(3-61-3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
(2)取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材2g，研細(xì)，用乙醚30-40ml，加熱回流20-30分鐘，放冷，濾過，濾液揮干溶劑，殘?jiān)右宜嵋阴?.5ml，作為供試品溶液；取白術(shù)對照藥材0.5g，加正己烷2-5ml，超聲處理110-20分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對照藥材溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(40-601-5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，并應(yīng)顯有一桃紅色主斑點(diǎn)；
含量測定
取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材5g，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，置10ml量瓶中，加0.060～0.070mol/L的鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，濾過，取濾液作為供試品溶液；另取105℃干燥至恒重的酪氨酸對照品適量，加0.065mol/L的鹽酸溶液制成每1ml中含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；取試管6支，其中3支分別精密加入對照品溶液1ml，另3支分別精密加入供試品溶液1ml，置37℃水浴中，保溫3～7分鐘，精密加入預(yù)熱至37℃的血紅蛋白試液5ml，搖勻，并準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，在37℃水浴中反應(yīng)8～12分鐘，立即精密加入3～7％三氯醋酸溶液5ml，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用；另取試管2支，各精密加入血紅蛋白試液5ml，置37℃水浴中保溫8～12分鐘，再精密加入3～7％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供試品溶液1ml，另1支加上述鹽酸溶液1ml，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，分別作為供試品和對照品的空白對照，照分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄IVA)在260～280nm的波長處測定吸收度，計(jì)算，即得。
8、如權(quán)利要求7所述中藥組合物，其質(zhì)量控制方法優(yōu)選以下鑒別方法和/或含量測定方法中的一種或幾種
鑒別
(1)取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材2g，研細(xì)，加乙醚30ml，浸泡30分鐘，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一以含4％醋酸鈉制成的硅膠G薄層板上，以乙醚-丙酮(41)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
(2)取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材2g，研細(xì)，用乙醚30ml，加熱回流20分鐘，放冷，濾過，濾液揮干溶劑，殘?jiān)右宜嵋阴?.5ml，作為供試品溶液；取白術(shù)對照藥材0.5g，加正己烷2ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對照藥材溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(501)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，并應(yīng)顯有一桃紅色主斑點(diǎn)；
含量測定
取本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原藥材5g，研細(xì)，取0.5g，精密稱定，置10ml量瓶中，加0.065mol/L的鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，濾過，取濾液作為供試品溶液；另取105℃干燥至恒重的酪氨酸對照品適量，加0.065mol/L的鹽酸溶液制成每1ml中含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；取試管6支，其中3支分別精密加入對照品溶液1ml，另3支分別精密加入供試品溶液1ml，置37℃水浴中，保溫5分鐘，精密加入預(yù)熱至37℃的血紅蛋白試液5ml，搖勻，并準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，在37℃水浴中反應(yīng)10分鐘，立即精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液備用；另取試管2支，各精密加入血紅蛋白試液5ml，置37℃水浴中保溫10分鐘，再精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供試品溶液1ml，另1支加上述鹽酸溶液1ml，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，分別作為供試品和對照品的空白對照，照分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄IVA)在275nm的波長處測定吸收度，計(jì)算，即得；
本發(fā)明中藥組合物相當(dāng)于原料藥材0.5g含雞內(nèi)金以胃蛋白酶計(jì)不低于2.0IU/g。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療小兒食積的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。本發(fā)明藥物組合物由雞內(nèi)金、六神曲、山楂、土白術(shù)等原料藥為活性成份或其水提物為活性成份和藥學(xué)上可接受的附加劑組成，其制備方法簡便、易行，能夠最大限度的保留藥物中的有效成份、發(fā)揮藥物療效，質(zhì)量控制方法對山楂、土白術(shù)做了薄層鑒別，藥雞內(nèi)金做了含量測定，可以有效控制藥品質(zhì)量，保證藥物療效的穩(wěn)定性。
文檔編號A61K36/00GK101455690SQ20071017952
公開日2009年6月17日 申請日期2007年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月14日
發(fā)明者付立家, 付建家 申請人:北京亞東生物制藥有限公司