專利名稱：對射線敏感的抗癌藥物脂質(zhì)體制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種對射線敏感的抗癌藥物脂質(zhì)體制劑。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是當(dāng)今世界威脅人類生命的主要疾病之一。在居民常見死亡原因 中，腫瘤在發(fā)達(dá)國家占第一位，在發(fā)展中國家占第二位。
目前治療腫瘤的主要方法有手術(shù)、化療和放射，約45%的腫瘤患者可以治 愈，其中放療的治愈率為18%，而在腫瘤患者的治療中，約70%接受過放射治 療，因此，提高放療療效對提高腫瘤的臨床療效非常重要。提高放療療效主要可 以從兩個方面研究，放射物理和放射生物，而提高腫瘤的放射敏感性是放射生物 的一個主要研究方向，由此，放射增敏劑的研究應(yīng)運而生。
放射增敏劑定義為與放射線合并使用、可以增強放射線對腫瘤的殺傷作用、 對正常組織無毒性的藥物。它可以通過改變腫瘤內(nèi)細(xì)胞的周期分布使其進(jìn)入對射 線敏感的時相、抑制放射損傷的修復(fù)、增加乏氧腫瘤細(xì)胞的氧合或者調(diào)控放射敏 感性基因等方式提高腫瘤的局部放射敏感性，進(jìn)而增加放療的療效。放射增敏劑 的研究已經(jīng)有四五十年的歷史，但至今仍沒有令人滿意的用于臨床的放射增敏藥 物。目前臨床使用的放射增敏藥物存在的問題有增敏藥物毒性大、藥物的靶向性 差或者每日放療同時配合每日用藥增加了臨床應(yīng)用的不便等。以順鉑為例，該藥 物本身有著很好的抗癌效果，可以作為化療的一線用藥。同時，順鉑又是高效的 放療增敏劑，能夠顯著增強放療效果。但是順鉑在殺傷腫瘤細(xì)胞同時對人體正常 細(xì)胞也造成很大傷害，毒性反應(yīng)主要包括腎毒性、消化道毒性、骨髓抑制、神經(jīng) 毒性和耳毒性等，嚴(yán)重的毒副作用使得患者往往不能繼續(xù)藥物治療。其他若干化 療藥物和放療增敏劑也都存在類似問題。
為了解決這一問題，研究人員設(shè)想通過制劑手段，如脂質(zhì)體，將抗癌藥物直 接定向于腫瘤部位，并取得了一些成功。Nexstar公司采用脂質(zhì)體技術(shù)制備了抗 癌藥物柔紅霉素脂質(zhì)體制劑，能夠顯著降低該藥的毒性并提高抗腫瘤效果(EP 219922蒽環(huán)類抗腫瘤藥物的磷脂顆粒，W0 1989004656多步法制備親脂藥物脂質(zhì)體)。ALZA公司采用水溶性高分子聚合物修飾脂質(zhì)，制備了阿霉素長循環(huán)脂質(zhì) 體(USP 5213804實體瘤的治療方法與處方，USP 20010051183能夠延長體內(nèi)循 環(huán)時間的脂質(zhì)體)。Celsion公司制備了抗癌藥物熱敏型脂質(zhì)體，將熱療與化療 結(jié)合起來(USP 2007077230，加熱腫瘤組織并給予脂質(zhì)體以治療食管癌等癌癥)。 但對射線敏感的抗癌藥物脂質(zhì)體制劑尚未見專利和文獻(xiàn)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種對射線敏感的抗癌藥物脂 質(zhì)體制劑。本制劑能使具有放療增敏效果的腫瘤化療藥物和放療增敏劑富集在腫 瘤部位并在射線照射下從脂質(zhì)體中釋放發(fā)揮療效，提高具有放療增敏效果的腫瘤 化療藥物和放療增敏劑在病灶部位的有效濃度以及進(jìn)入被感染細(xì)胞的效率，從而 提高藥效，降低用藥劑量，減小毒性。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)
采用脂質(zhì)包裹含有抗癌藥物的活性成分，制成脂質(zhì)體制劑，所述脂質(zhì)體制劑 在射線的作用下釋放藥物。
本發(fā)明所說的抗癌藥物具有放療增敏作用，包括順鉑、5-氟尿嘧啶、環(huán)磷酰 胺、吉西他濱等。
應(yīng)當(dāng)說明的是，許多藥物都適合用于本發(fā)明，除以上藥物外，放療領(lǐng)域內(nèi)的 技術(shù)人員己知的任何放療增敏劑都可以考慮。
本發(fā)明所說的射線能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞產(chǎn)生殺傷作用,包括X射線、y射線、(3 射線以及重粒子等。
本發(fā)明所說的脂質(zhì)體，其結(jié)構(gòu)為脂質(zhì)雙分子層構(gòu)成的囊泡結(jié)構(gòu)，包括單層脂 質(zhì)體、多層脂質(zhì)體和多室脂質(zhì)體，其粒徑在20nm到200nm之間。
本發(fā)明所說的脂質(zhì)為各種天然或人工合成的陽離子磷脂、陰離子磷脂、中性 磷脂、以上磷脂的聚乙二醇修飾產(chǎn)物或膽固醇和上述脂質(zhì)的混合物，該混合物中 包含選自磷脂酰甘油(PG)和磷脂酰膽堿(PC)或其中的一種。
本發(fā)明所說的磷脂，具有兩親性，形成雙分子層囊泡結(jié)構(gòu)裝載藥物，或直接 形成脂質(zhì)顆粒裝載藥物。
本發(fā)明所說的脂質(zhì)所包含的磷脂酰甘油(PG)和磷脂酰膽堿(PC)在脂質(zhì)中 的摩爾百分比之和為5 100%。本發(fā)明可以通過薄膜分散法、凍干法、乙醇注入法或高壓乳勻法等方法實現(xiàn)， 也可通過逆相蒸發(fā)法實現(xiàn)，后者有更高的包封率，可達(dá)40%以上。
采用激光粒度散射儀(英國MALVEN公司)檢測實施例1得到的脂質(zhì)復(fù)合物 (脂質(zhì)體制劑)，其粒徑在200納米以下，且分布集中，呈單峰分布。采用原子 力顯微鏡(AFM)觀察的圖片也證實其平均粒徑在20納米到200納米之間。
通過本發(fā)明制劑的體外藥物釋放實驗證實，本發(fā)明制得的射線敏感的脂質(zhì)體 貯存時能夠穩(wěn)定包裹藥物，在射線作用下，較普通脂質(zhì)體能夠更加迅速的釋放藥 物。
本發(fā)明的有益效果表現(xiàn)在以下方面
本射線敏感的抗癌藥物脂質(zhì)體制劑能夠顯著延長藥物在動物體內(nèi)的循環(huán)時 間，使藥物能夠長時間維持對腫瘤的抑制。將所述該類藥物中的順鉑制成脂質(zhì)體， 以C57小鼠作為受試動物，進(jìn)行藥物動力學(xué)實驗。相對于游離的順鉑(CDDP)溶 液，順鉑脂質(zhì)體(LDDP)注射后游離順鉑達(dá)峰濃度13. 79u g/ml，為前者的4倍多， 而半衰期為19.47小時，為前者的15倍(圖l)。這些藥物動力學(xué)特征的改變， 一方面能夠延長藥物在體內(nèi)的維持時間，改善抗腫瘤效果，另一方面能夠減少注 射次數(shù)，大大方便了患者，改善了順應(yīng)性。
本發(fā)明的脂質(zhì)復(fù)合物能夠有效地延長荷瘤動物的生存時間，以C57BL/6N近 交系Lewis肺癌荷瘤小鼠進(jìn)行動物實驗，包裹順鉑的藥物與普通劑型的順鉑比 較，順鉑脂質(zhì)體可延長局部腫瘤的生長時間及荷瘤鼠生存時間，P值均<0. 01，(表 1)。另外，與放療結(jié)合，順鉑脂質(zhì)體對荷瘤鼠生存時間的影響有協(xié)同作用，P= 0.000。所述的順鉑脂質(zhì)體顯示了藥物的長效性，用藥后1小時(h)、 24h和72h 與放療聯(lián)合，較普通劑型的順鉑比較，均可延長局部腫瘤動物的生存時間，P均 〈0.05 (表2)。對小鼠皮毛觀察，順鉑脂質(zhì)體組的皮毛與無用藥組相同，而普通 劑型的順鉑的皮毛表現(xiàn)為無光澤。


圖1是包裹順鉑的脂質(zhì)體的藥物動力學(xué)實驗， 其中，CDDP:普通的順鉑，LDDP:順鉑脂質(zhì)體。
具體實施方式
實施例l將含144.4rag氫化豆磷脂(HSPC)、 68. lmg膽固醇(cholesterol), 54. 8mg 聚乙二醇2000-二硬酯酰磷酯酰乙醇胺(DSPE-PEG2000) ， 14. 7mg 二棕櫚酰磷脂 酰膽堿(DPPC)，溶于12ml有機溶劑中，另外配制3ml 8mg/ml的順鉑氯化鈉溶 液，混合后高速乳勻，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓除去有機溶劑，使其成為均勻混懸液， 超聲1小時，形成半透明的脂質(zhì)體的混懸液。
本實施例中PC與PG在磷脂中的摩爾百分比之和為51%。 以本實施例制得的制劑作為實驗組，同樣劑量的順鉑溶液作為對照組，與 對照組相比，在C060r射線6Gy方案下，荷瘤小鼠的生存時間由23天延長至37 (用 藥后lh放療資料)天。
結(jié)果顯示，本發(fā)明脂質(zhì)復(fù)合物能夠有效地延長荷瘤動物的生存時間，以 C57BL/6N近交系Lewis肺癌荷瘤小鼠進(jìn)行動物實驗，包裹順鉑的藥物與普通劑 型的順鉑比較，順鉑脂質(zhì)體可延長局部腫瘤的生長時間及荷瘤鼠生存時間，P分 別為0.000， 0.000。另外，與放療結(jié)合，順鉑脂質(zhì)體對荷瘤鼠生存時間的影響 有協(xié)同作用，P=0.000。所述的順鉑脂質(zhì)體顯示了藥物的長效性，用藥后24h、 72h與放療聯(lián)合，較普通劑型的順鉑比較，均可延長局部腫瘤動物的生長時間， P分別為0.009、 0.008,對小鼠皮毛觀察，順鉑脂質(zhì)體組的皮毛與無用藥組相同， 而普通劑型的順鉑的皮毛表現(xiàn)為無光澤。
表l是Lewis肺癌荷瘤小鼠用藥后局部腫瘤生長時間和小鼠生存時間的比較。
表2是LDDP與CDDP聯(lián)合6Gy放療對Lewis肺癌荷瘤小鼠的生存影響比較。
表1
中位生存 P, (Vs對P2(Vs T5V*P， (Vs對P2(Vs 組別 時間(天)照組CDDP) (天) 照組 CDDP) 對照組29 6.16
CDDP 25 >0.05 10.00 0.008
LDDP41.5 <0.01 O.0118.95 0.000 0.000
T5V:局部腫瘤生長為實驗前5倍所需要的時間表2
中位生存時間 皮毛失去光澤
組別 -
LDDP CDDP P LDDP CDDP
用藥后lh照射 37 23 〈0.05 ±* +
用藥后24h照射 60 29 〈0.05 — +
用藥后72h照射 53 24 〈0.05 — +
* +:皮毛失去光澤；-皮毛正常
實施例2
將含57mg 二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)的有機溶劑溶液加到茄形瓶中，30 'C水浴，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑使其成膜后，保持真空1小時以除盡溶劑，向茄 形瓶中加入10mg/ml 5-Fu的HEPES溶液lml，強烈振蕩，室溫放置2h ,超聲振 蕩，形成半透明均勻的脂質(zhì)體的混懸液。
本實施例中PC與PG在磷脂中的摩爾百分比之和為100%。 以本實施例制得的制劑作為實驗組，同樣劑量的5-Fu溶液作為對照組，與 對照組相比，在同樣的放射治療方案下，荷瘤小鼠的生存時間得到延長10-15 天。
實施例3
將含12.6mg 二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、 12.8mg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿 (DPPC)、 4.7mg聚乙二醇2000-二硬酯酰磷酯酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)的有機 溶劑溶液加到茄形瓶中，水浴，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)使其成膜后，向茄形瓶中加入40mg/ml 環(huán)磷酰胺溶液lml，振搖，室溫放置2h，過高壓乳勻機10次，形成半透明的脂 質(zhì)體的混懸液。
本實施例中PC與PG在磷脂中的摩爾百分比之和為95%。 以本實施例制得的制劑作為實驗組，同樣劑量的環(huán)磷酰胺溶液作為對照組， 與對照組相比，在同樣的放射治療方案下，荷瘤小鼠的生存時間延長7-10天。實施例4
將83. 7mg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、 4. 5mg 二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG) 溶于叔丁醇中，將4mg吉西他濱配成水溶液，兩者混合成為透明均勻溶液，凍干, 以生理鹽水水合，過高壓乳勻機10次，形成半透明的脂質(zhì)體的混懸液。 本實施例中PC與PG在磷脂中的摩爾百分比之和為100%。 以本實施例制得的制劑作為實驗組，同樣劑量的吉西他濱溶液作為對照組， 與對照組相比，在同樣的放射治療方案下，荷瘤小鼠的生存時間獲得了延長至 IO天左右。
權(quán)利要求
1、一種對射線敏感的抗癌藥物脂質(zhì)體制劑，其特征在于，以脂質(zhì)包裹含有抗癌藥物的活性成分制成脂質(zhì)體制劑，所述脂質(zhì)體制劑在射線的作用下釋放藥物。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的對射線敏感的抗癌藥物脂質(zhì)體制劑，其特征是，所述的抗癌藥物具有放療增敏作用，選自順鉑、5-氟尿嘧啶、環(huán)磷酰胺或吉西他濱。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的對射線敏感的抗癌藥物脂質(zhì)體制劑，其特征是，所述的射線具有對腫瘤細(xì)胞殺傷的作用,選自X射線、y射線、(3射線或重粒子。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的對射線敏感的抗癌藥物脂質(zhì)體制劑，其特征是，所述的脂質(zhì)體為脂質(zhì)雙分子層構(gòu)成的囊泡結(jié)構(gòu)，包括單層脂質(zhì)體、多層脂質(zhì)體和/或多室脂質(zhì)體。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的對射線敏感的抗癌藥物脂質(zhì)體制劑，其特征是，所述的脂質(zhì)體，其粒徑在20nm到200nm之間。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的對射線敏感的抗癌藥物脂質(zhì)體制劑，其特征是，所述的脂質(zhì)選自天然或人工合成的陽離子磷脂、陰離子磷脂、中性磷脂或以上磷脂的聚乙二醇修飾產(chǎn)物、膽固醇或其混合物，所述的混合物其中包含選自磷脂酰甘油和磷脂酰膽堿的一種或兩種。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6的所述的對射線敏感的抗癌藥物脂質(zhì)體制劑，其特征是，所述的磷脂具有兩親性，其形成雙分子層囊泡結(jié)構(gòu)裝載藥物，或直接形成脂質(zhì)顆粒裝載藥物。
8、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的對射線敏感的抗癌藥物脂質(zhì)體制劑，其特征是，所述的脂質(zhì)，包含磷脂酰甘油和磷脂酰膽堿中的一種或兩種，兩者在脂質(zhì)中的摩爾百分比之和為5 100%。
全文摘要
本發(fā)明屬藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種對射線敏感的抗癌藥物脂質(zhì)體制劑。本發(fā)明以脂質(zhì)包裹含有抗癌藥物的活性成分制成脂質(zhì)體制劑，在射線的作用下釋放藥物。本制劑能使具有放療增敏效果的腫瘤化療藥物和放療增敏劑富集在腫瘤部位并在射線照射下從脂質(zhì)體中釋放發(fā)揮療效，提高具有放療增敏效果的腫瘤化療藥物和放療增敏劑在病灶部位的有效濃度和在體內(nèi)的停留時間以及進(jìn)入被感染細(xì)胞的效率，從而提高了藥物的抗腫瘤作用，降低用藥劑量和藥物毒性，延長腫瘤患者生存期。本發(fā)明制劑可用于治療各種腫瘤。
文檔編號A61K9/127GK101455641SQ20071017209
公開日2009年6月17日 申請日期2007年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月11日
發(fā)明者徐宇虹, 楊煥軍, 葛勇前, 蔣國梁, 劍 陳 申請人:復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院