專利名稱：：一種多烯紫杉醇脂質復合物及其注射用膠束組合物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種多烯紫杉醇脂質復合物及其注射用膠束組合物，屬于藥物制劑領域。
背景技術：
：多西他賽(Docetaxel)，本品主要成份為多西份賽，其化學名稱名{2Ar—[.2aa,4(3,4a(3,6(3，9cc(aR*，Bs*)，lla,12a,12aoc,12boc]}-p-([(1，1-二曱基乙氧基)羰基]氨基)-oc-羥基苯丙酸[12b-乙酰氧苯曱酰氧-2a,3,4,4a,5，6，9,10，11,12，12a，12b-十二氬-4，6,11-三羥基-4a,8,13,13-四曱基-5-氧代-7，11-亞曱基-1H-環(huán)癸五烯并[3，4]苯并[1,2-b]氧雜丁環(huán)-9-基]酯。其結構式為分子式C43H53N014,分子量807.88多西他賽為多紫杉醇類抗腫瘤藥，通過干擾細胞有絲分裂和分裂間期細胞功能所必需的微管網(wǎng)絡而起抗葉瘤作用。多西他賽可與游離的微管蛋白結合，促進微管蛋白裝配成穩(wěn)定的微管，同時抑制其解聚，導致喪失了正常功能的微管束的產(chǎn)生和微管的固定，從而抑制細胞的有絲分裂。多西他賽與微管的結合不改變原絲的數(shù)目。這一點與目前臨床應用的大多數(shù)紡錘體毒性藥物不同。據(jù)文獻報道，對癌癥病人進行了劑量為20-115mg/m2，靜脈滴注1-2小時時，其AUC呈劑量相關性。本品的藥代特點符合三室藥代動力學模型，cc、(3、y半衰期分別為4分鐘、36分鐘11.1小時。初始階段濃度迅速降低表明藥物分布至周邊室，后一時相部分原因是由于藥物從周邊室相對緩慢地消除。在1小時內(nèi)靜脈滴注給予多西他賽100mg/m2,平均峰濃度為3.7jug/ml.h,總體清除率和穩(wěn)態(tài)分布為21L/h/m2,與113L。多西他賽及其代謝產(chǎn)物主要從糞便排泄。經(jīng)糞便和尿排出的量分別約占所給劑量的75%和6%，僅有少部以原型排出。體外研究表明，多西他賽的血漿蛋白結合率超過約94-97%,地塞米松并不影響多西他賽與蛋白的結合。體外研究表明，多西他賽被CYP3A4同功酶所代謝，這種代謝可以被CYP3A4抑制劑所抑制。適應癥為l、先期化療失敗的晚期或轉移性非小細胞肺癌的治療。除非屬于臨床禁忌，先期治療應包括茵環(huán)類抗癌藥。2、以順鉑為主的化療失敗的晚期或轉移性非小細胞肺癌的治療。多西他賽屬紫杉烷類化合物，其單獨口服給的生物利用度公為8%，將其制成注射劑是提高其生物利用度的手段之一。多西他賽在水中的溶解度極低，僅為lng/ml，嚴重限制了其臨床使用。目前臨床上應用的多西他賽注射劑有凍干針和注射液，為兩支西林瓶包裝，其中一支為多西他賽的吐溫溶液，另一支為乙醇水溶液。臨床應用時，先將乙醇溶液注入多西他賽吐溫溶液中，充分振搖5分鐘后，觀察澄明后才能給患者用藥。由于多西他賽在水中的溶解度極J氐，稀釋后的溶液不穩(wěn)定，常常析晶。因制劑中含有乙醇，注射時一旦滲露到血管外，即會產(chǎn)生疼痛與紅腫。部分病例可發(fā)生嚴重過敏反應，其特征為低血壓與支氣管痙攣，需要中斷治療。停止滴注并立即治療后病人可恢復正常。部分病例也可發(fā)生輕度過敏反應。如臉紅、伴有或不伴有騷癢的紅斑、胸悶、背痛、呼吸困難、藥物熱或寒顫。多西他賽只能用于靜脈滴注。所有病人在接受多西他賽治療期前均必須口服糖皮盾激素類，如地塞米松，在多西他賽滴注一天前服用，每天16mg,持續(xù)至少3天，以預防過敏反應和體液潴留。多西他賽的推薦劑量為70-75mg/m2,靜脈滴注一小時，每三周一次。根據(jù)計算病人所用藥量，用注射器吸取所需劑量，稀釋到5。/。葡萄糖注射液或0.9%氯化鈉注射液中，輕輕搖動，混合均勻，最終濃度不超過O.74mg/ml。為了解決注射劑的使用不便、疼痛和過敏問題，許多人都在研究改變?nèi)苊健⒅瞥芍|體或制成乳劑等方式，以期得到不過敏，穩(wěn)定或具有戎輩巴向性的制劑，但到目前為止還沒有一個很好的解決方案。中國專利200510084055.6公開了一種含有多西他賽的脂肪乳劑及其制備方法，.200610058758.6公開了多西他賽凍干粉針及其制備方法，200610154710.5公開了一種含有多西他賽的脂質微球、凍干脂質微球及制備方法，200710010637.9公開了多西他賽脂肪乳劑及其凍干劑與制備方法，200610012102.0公開了多西多紫杉醇靜脈注射亞微乳劑及其制備方法，96112502.O公開了多紫杉醇水溶性粉針劑及其制備方法，200610082245.9公開了多烯多紫杉醇長循環(huán)脂質體劑型及其制備方法，200510029634.O公開了多烯多紫杉醇脂質體及其制備方法，200610135060.X公開了多烯多紫杉醇亞微乳注射劑及其制備方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種多烯紫杉醇脂質復合物及其注射用膠束組合物。該膠束使多紫杉醇具有更高的化學穩(wěn)定性，不易降解；降低了多紫杉醇的局部刺激性，提高患者順應性，加入長循環(huán)輔料還可避免體內(nèi)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，延長藥物有效時間。通過將多紫杉醇脂質化，從而解決了注射劑的有機溶媒問題和表面活性劑過敏問題。本發(fā)明的又一個目的是提供一種制備本發(fā)明的多紫杉醇脂質復合物的方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種多紫杉醇脂質復合物，其基本上由治療有效量的多紫杉醇、磷脂、膽固醇硫酸鹽或類似膽固醇衍生物、附加劑、長循環(huán)輔料和注射用水組成。在上述技術方案中，本發(fā)明提供的多紫杉醇脂質復合物及其注射用膠束組合物膠束含有以下成分多紫杉醇0.000001~5wt%磷脂0.0001~20wt%膽固醇碌u酸鹽或類似膽固醇衍生物0.0001-20wt°/。長,盾環(huán)輔并+0~15wt%附加劑0~15wt%注射用水余量。所述磷脂包括天然來源的磷脂與合成來源的磷脂，所述天然來源的磷脂為從植物或動物中通過物理加工方法提取出來的磷脂，如大豆卯磷脂、蛋黃卵磷脂、腦磷脂、磷脂酰肌醇、神經(jīng)鞘磷脂、絲氨酸磷脂等；所述合成來源的磷脂為通過半合成或合成方法制得的磷脂，如氫化磷脂、多烯磷脂酰膽堿、腿PC、DPPC、隨PG、DPPG、DPPE、DSPE、DPPA、DSPA及其結構修飾物如PEG化衍生物DSPE-PEG2000等。優(yōu)選的是，該磷脂為大豆卵磷脂。所述膽固醇石克酸鹽或/和類似膽固醇衍生物包括膽固醇碌^酸鈉、膽固醇硫酸鉀、膽固醇磷酸鈉、膽固醇磷酸鉀、膽固醇磺酸鈉、膽固醇磺酸鉀和其它方式修飾的上述膽固醇衍生物及其任意組合。優(yōu)選的是該膽固醇硫酸鹽為膽固醇硫酸鈉。所述長循環(huán)輔料為PEG分子量為PEG分子量為1000-10000的硬脂酸酯、PEG分子量為1000~10000維生素E琥珀酸酯、PEG硬脂酸酯與分子量為200~10000的PEG的混合物、Myrj類、Brij類、PEG—二硬脂?；字Ｒ掖及?、PEG—二棕櫚酰磷脂酰膽堿、PEG—二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、神經(jīng)節(jié)苷脂、聚丙烯酰胺、殼聚糖、聚乙二醇聚十六烷基腈基丙酸酯、分子量為200~10000的PEG、PVP或PVA及其任意組合。優(yōu)選的是神經(jīng)節(jié)苷脂、PEG—二硬脂?；字Ｒ掖及?、PEG—二棕櫚酰磷脂酰膽堿及其任意組合。本發(fā)明提供的多紫杉醇脂質復合物進一步包括0~15wt%的附加劑，優(yōu)選包括0~5wt。/。的附加劑。所述附加劑可起到增加制劑穩(wěn)定性、調節(jié)滲透壓、抗氧化等作用，選自滲透壓調節(jié)劑，如丙三醇、丙二醇、甘露醇等；界面膜穩(wěn)定劑，如油酸、油酸鈉等；金屬離子絡合劑，如EDTA、乙二按四乙酸二鈉鹽、鈣鹽等；防腐劑，如苯扎溴胺、苯扎氯胺、對羥基苯曱酸酯類、山梨酸等；抗氧劑，如維生素C、維生素E等；分子量為200~10000的PEG、PVP或PVA及其任意組合。優(yōu)選的是，該附加劑為丙三醇、,甘露醇、油酸鈉、EDTA、維生素C、維生素E、PEG及其任意組合。本發(fā)明提供的多紫杉醇脂質復合物，具有以下優(yōu)點1、與多紫杉醇的注射液相比，本發(fā)明的制劑使多紫杉醇包裹在脂質復合物中，減少藥物與水的接觸，且可濾過除菌，降低高溫滅菌導致的多紫杉醇失活，使之穩(wěn)定性增加且刺激性降低。2、與多紫杉醇的乳劑、脂質體相比，本發(fā)明的制劑通過長循環(huán)輔料對脂質復合物表面進行修飾，有助于避免體內(nèi)肝脾網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬，延長藥物在體內(nèi)的循環(huán)時間。3、本發(fā)明的制劑可用生理鹽水或葡萄糖注射液進行稀釋或分散，用于靜脈注射給藥，優(yōu)選技術方案中脂質復合物粒度小(平均粒度小于100nm),分布較窄，可濾過除菌，且藥物包封率高，有助于提高注射安全性。本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明的多紫杉醇脂質復合物的制備方法，該方法包括以下步驟(1)將處方量的多紫杉醇、磷脂、膽固醇硫酸鹽或類似膽固醇衍生物或、長循環(huán)輔料、附加劑分散于有機溶劑中，以構成有機相；(2)將長循環(huán)輔料、附加劑溶于注射用水中，以構成水相；(3)在0~60。C的溫度下，在攪拌或/和高剪切條件下將所述有機相和水相混合，再采用減壓蒸發(fā)等方法除去有機溶劑，從而制得多紫杉醇脂質復合物。(4)將所得多紫杉醇脂質復合物用0.22lam的濾膜濾過除菌，分裝，置于4。C下密封保存，即得注射液，其粒徑在20-200腿之間。(5)將上述所得膠束加入凍干保護劑進行凍干處理，即得粉針劑，加溶媒再分散后，其粒徑在20-200nm之間。其中，對所得到的多紫杉醇脂質復合物進行凍干處理的工藝可為將l~40wt%(重量比)的凍干保護劑溶于本發(fā)明的多紫杉醇脂質復合物的水分散體中，該凍干保護劑選自海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化鈉、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘油或甘氨酸及其任意組合，然后分裝于西林瓶中，并置于冷凍干燥機中-45。C預凍3h,然后以5。C/h升溫至-5(TC，維持10h,再以5。C/h升溫至(TC,維持8h，最后升溫至IO'C保溫10小時后出箱，加塞密封即可。實施例1取多紫杉醇500mg，蛋黃卵磷脂2.Og,膽固醇硫酸鈉400mg,維生素E10mg，溶解于30。C的曱醇中作為有機相；將PEG4000.5g溶于90ml注射用水中，加熱至3(TC作為水相，在3(TC攪拌下將有才幾相注入水相，持續(xù)攪拌5min，再減壓旋轉蒸去甲醇，得帶藍色乳光的多紫杉醇脂質復合物，測其平均粒徑為65士15nm。加注射用水補至總體積為100ml,用0.22nm的微孔濾膜濾過除菌，分裝4ml/支，12rC滅菌30min，即得注射液。在制得的脂質復合物加入海藻糖5g,注射用水至100ml，用O.22ym的微孔濾膜濾過除菌，分裝4ml/支，無菌操作下冷凍干燥，即得。將凍干后的制劑用生理鹽水稀釋，測其平均粒徑為73土16nm。實施例2取多紫杉醇1.Og，大豆卵磷脂3.Og,膽固醇硫酸鈉500mg,溶解于35。C的無水乙醇中作為有機相；將PEG2001.Og溶于90ml注射用水中，加熱至35。C作為水相，在35。C攪拌下將有機相注入水相，持續(xù)攪拌10min,再減壓旋轉蒸去乙醇，得帶藍色乳光的多紫杉醇脂質復合物，測其平均粒徑為72土120nm。加注射用水補至總體積為100ml,用0.22jam的樣t孔濾膜濾過除菌，分裝4ml/支，121。C滅菌30min,即得注射液。在制得的脂質復合物加入海藻糖5g，注射用水至100ml，用O.22nm的微孔濾膜濾過除菌，分裝4ml/支，無菌操作下冷凍干燥，即得。將凍干后的制劑用生理鹽水稀釋，測其平均粒徑為76士16nm。實施例3取多紫杉醇500mg,大豆卵磷脂10g，膽固醇磺酸鈉5g，溶解于35。C的四氫吹喃中作為有才幾相；將poloxamer1885g溶于950ml注射用水中，加熱至35。C作為水相，在35。C攪拌下將有機相注入水相，持續(xù)攪拌10min，再減壓旋轉蒸去四氫呋喃，得帶藍色乳光的多紫杉醇脂質復合物，測其平均粒徑為70±19nm加注射用水補至總體積為100ml，用0.22|nm的微孔濾膜濾過除菌，分裝4ml/支，12rC滅菌30min,即得注射液。在制得的脂質復合物加入海藻糖5g，注射用水至100ml，用0.22jam的微孔濾膜濾過除菌，分裝4ml/支，無菌操作下冷凍干燥，即得。將凍干后的制劑用生理鹽水稀釋，測其平均粒徑為74±18nm。實施例4表l列舉了幾種多紫杉醇脂質復合物的處方(表中所列輔料為權利要求1-11所述)及凍干針劑和注射劑的規(guī)格(以多紫杉醇計)，但所用處方組成、各輔料配比及制劑規(guī)格不限于下表所列濃度。制備方法與工藝同實施例l-3。表l多紫杉醇脂質復合物處方<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實施例(1)刺激性試驗取健康家兔6只分別固定于兔箱內(nèi)，隨機分成2組，每組3只家兔，左右耳緣靜脈分別滴注生理鹽水和多紫杉醇注射液、多紫杉醇脂質復合物注射液。即左耳給生理鹽水，右耳給多紫杉醇注射液或多紫杉醇脂質復合物注射液(用0.9%的氯化鈉注射液稀釋)。多紫杉醇注射液和多紫杉醇脂質復合物注射液給藥劑量相同，均為10mg/只，溶液總體積均為12ml/只/次。左耳耳緣靜脈滴注生理鹽水，滴注量及滴注速度同^r品組。每日各滴注l次，連續(xù)3天，觀察兔耳緣靜脈刺激反應。于末次給藥24h后將兔子放血處死，取下兩耳進行組織切片檢查(切片位置距進針位置2，6cm),根據(jù)病變程度，"i己為"—，，，"+，，，"++,，，"+++，，，"++++,，。切片病理學檢查結果表明1)左耳陰性對照(氯化鈉注射液)的各取材點耳緣靜脈管壁完整，血管無明顯擴張。內(nèi)皮細胞清晰、無腫脹、壞死，管壁及管周無明顯炎癥細胞浸潤，管壁內(nèi)未見血栓形成等病變。2)右耳陽性對照(多紫杉醇注射液)組的各取材點血管明顯擴張為"++"，內(nèi)皮細胞腫脹、壞死為"++",見血栓形成為"++"，管壁及管周見出血及炎癥細胞浸潤為"+++，，。3)右耳多紫杉醇脂質復合物注射液組的各取材點耳緣靜脈管壁完整，血管無明顯擴張。管腔內(nèi)未見血栓形成等病變。多紫杉醇脂質復合物組形態(tài)學明顯好于市售多紫杉醇注射液組，無明顯刺激性。試驗結果表明，多紫杉醇脂質復合物注射液對家兔耳靜脈血管未見明顯刺激作用。(2)溶血性試驗取家兔血10mL,置于涂有肝素的離心試管中，4000rpm離心5min，棄去上層血漿，將血細胞用生理鹽水10mL沖洗多次，每次沖洗后離心除去上清液，直至上清液不呈紅色為止，然后吸取一定量紅細胞，按體積比稀釋制備2°/。的紅細胞混懸液，4。C冰箱中冷藏備用。記錄方式"--"凝集不溶血，但出現(xiàn)紅細胞凝聚成團，搖晃后能重新分開。"-"不溶血紅細胞全部下沉，上層為淡黃色略微混濁的溶液。"+"部分溶血溶液呈淡黃色或淺紅色，試管底部有少量紅細胞殘留。"++"溶血溶液呈紅色，試管底部無紅細胞殘留。表2溶血性試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>結果顯示，所制的多紫杉醇脂質復合物溶液未引起紅細胞的溶血反應,符合靜脈注射的標準。(3)過敏性試驗'將實施例1所制的多紫杉醇脂質復合物注射液加用0.9%氯化鈉注射液稀釋，制成供試品溶液。采用臨床推薦劑量lmg/ml/kg，給豚鼠腹腔注射該供試品溶液0.5ml，隔日一次，共三次，給藥后第14天及第21天分別股靜脈注射該供試品溶液1.0ml，結果均未見豚鼠有過敏反應。給予2%新鮮蛋清的豚鼠在給予蛋清后第14天及第21天分別經(jīng)股靜脈注射蛋清后均出現(xiàn)過敏反應，且皆于15min內(nèi)死亡。結果顯示，浙制多紫杉醇脂質復合物溶液不引起豚鼠過敏反應，符合靜脈注射的標準。權利要求1、一種多烯紫杉醇脂質復合物，由治療有效量的多烯紫杉醇、磷脂、膽固醇硫酸鹽或/和類似膽固醇衍生物組成。2、一種由權利要求1所述的多烯紫杉醇脂質復合物組成的注射用膠束組合物，其含有以下成分—.0.000001~-20wt%石粦脂0.0001~20wt%多紫杉醇膽固醇硫酸鹽或/和類似膽固醇衍生物長循環(huán)輔枓附加劑注射用水0.0001~20wt0~15wt0~15wt°/余量(3、根據(jù)權利要求l所述多烯紫杉醇脂質復合物，其特征在于多紫才」醇脂質復合物顆粒懸浮于水性介質中，粒徑在20-200nm之間.4、根據(jù)權利要求1和2所述的一種多烯紫杉醇脂質復合物及其注射用膠束組合物，其中所述磷脂選自所有天然來源和合成來源的磷脂及其任意組合。5、根據(jù)權利要求4所述的一種多烯紫杉醇脂質復合物及其注射用膠束組合物，所述天然來源的磷脂為從植物或動物中通過各種加工方法提取出來的磷脂，如大豆磷脂、蛋貧磷脂、腦磷脂、磷脂酰肌醇、神經(jīng)鞘磷脂、絲氨酸磷脂等；所述合成來源的磷脂為通過半合成或合成方法制得的磷脂，如氬化磷脂、多烯磷脂酰膽堿、DMPC、DPPC、DMPG、DPPG、DPPE、DSPE、DPPA、DSPA及其結構》務飾物如PEG化衍生物DSPE-PEG2000等。6、根據(jù)權利要求l和2所述的一種多烯紫杉醇脂質復合物及其注射用膠束組合物，其中所述膽固醇硫酸鹽或/和類似膽固醇衍生物包括膽固醇硫酸鈉、膽固醇硫酸鉀、膽固醇磷酸鈉、膽固醇磷酸鉀、膽固醇磺酸鈉、月旦固醇磺酸鉀和其它方式修飾的上述膽固醇衍生物及其任意組合。7、根據(jù)權利要求2所述的一種多烯紫杉醇脂質復合物及其注射用膠束組合物，其中所述長循環(huán)輔料為PEG分子量為1000-10000的硬脂酸酯、PEG分子量為1000-10000維生素E琥珀酸酯、PEG硬脂酸酯與分子量為200~10000的PEG的混合物、Myrj類、Brij類、PEG—二硬脂?；字Ｒ掖及?、PEG—二棕櫚酰磷脂酰膽堿、PEG—二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、神經(jīng)節(jié)苷脂、聚丙烯酰胺、殼聚糖、聚乙二醇聚十六烷基腈基丙酸酯、分子量為200~10000的PEG、PVP或PVA及其任意組合；其中所述附加劑選自滲透壓調節(jié)劑、界面膜穩(wěn)定劑、金屬離子絡合劑、防腐劑、抗氧劑、分子量為200~10000的PEG、PVP或PVA及其4壬意組合。8、一種制備如權利要求1~7所述的一種多烯紫杉醇脂質復合物及其注射用膠束組合物的方法，該方法包括以下步驟(1)將處方量的多紫杉醇、磷脂、膽固醇硫酸鹽或類似膽固醇衍生物或、長循環(huán)輔料、附加劑分散于有機溶劑中，以構成有機相；(2)將長循環(huán)輔料、附加劑溶于注射用水中，以構成水相；(3)在0~60。C的溫度下，在攪拌或/和高剪切條件下將所述有機相和水相混合，再采用減壓蒸發(fā)等方法除去有機溶劑，從而制得多紫杉醇脂質復合物。(4)將所得多紫杉醇脂質復合物用0.22Mm的濾膜濾過除菌，分裝即注射液，粒徑為20-200nm。9、根據(jù)權利要求8所述的一種多烯紫杉醇脂質復合物及其注射用膠束組合物的方法，其中所述有機溶劑選自二氯曱烷、氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、乙醚、四氫呋喃或異丙醇及其任意組合。10、根據(jù)權利要求8所述的一種多烯紫杉醇脂質復合物及其注射用膠束組合物的方法，其中向所述制得的多紫杉醇脂質復合物進一步加入凍干保護劑以制成凍干制劑，臨用前加無菌注射用水或生理鹽水重建后靜脈注射或肌注給藥，粒徑為20-200nm;上述凍干保護劑選自海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化鈉、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘氨酸及其任意組合.,全文摘要本發(fā)明提供了一種多烯紫杉醇脂質復合物及其注射用膠束組合物，屬于藥物制劑。該多烯紫杉醇脂質復合物由治療量的多紫杉醇、磷脂、膽固醇硫酸鹽或/和類似膽固醇衍生物、附加劑與注射用水組成。通過將多烯紫杉醇脂質化，從而解決了注射劑的有機溶媒問題和表面活性劑過敏問題。本發(fā)明提供的多烯紫杉醇脂質復合物注射劑具有副作用小，血管刺激性低，載藥量高，粒徑分布窄、可濾過除菌，藥物穩(wěn)定性好等優(yōu)點。文檔編號A61K9/127GK101439033SQ20071015846公開日2009年5月27日申請日期2007年11月22日優(yōu)先權日2007年11月22日發(fā)明者颯徐,德瑞克·王,李林穗申請人:沈陽沃森藥物研究所