專利名稱：一種抗氧化劑生物微膠囊的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供一種抗氧化劑生物微膠囊的制備方法，涉及到酵母細胞的培養(yǎng)、處理和微膠 囊制備的方法，更進一步涉及通過該方法所制備的抗氧化劑生物微膠囊。技術(shù)背景近年來，功能性食品的防病保健作用受到越來越廣泛的重視。植物抗氧化劑特別是多酚 化合物在心血管疾病的防治及防癌抑癌等方面的獨特作用已使其成為了一個重要的研究領(lǐng) 域。但是抗氧化劑本身不穩(wěn)定，很容易氧化變質(zhì)，有的還有苦澀等不良味道，這極大地限制 了其廣泛應(yīng)用。用適宜的壁材將抗氧化劑微膠囊化，通過在其周圍形成由壁材組成的保護層 而與外界隔絕，可防止由于氧氣、光照等造成的氧化變質(zhì)，保持抗氧化劑的抗氧化活性；可 以掩蓋某些抗氧化劑的酚類氣味，提高其可接受性及其穩(wěn)定性；還可以通過不同壁材的組成 及不同條件的調(diào)控，控制抗氧化劑的釋放速度，延長其保質(zhì)期；抗氧化劑的微膠囊化擴大了 抗氧化劑的使用范圍，減少了其使用量，從而也就減小了其毒性，降低了成本。雖然微膠囊技術(shù)已在食品、化妝品、藥品工業(yè)領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用，但只用食品級的壁 材來實現(xiàn)芯物質(zhì)特別是水溶性物質(zhì)的穩(wěn)定化還存在許多困難，往往要用到聚合物或者價格昂 貴的卵磷脂。解決制備成本過高和壁材及輔助料的安全性的問題是微膠囊研究中急需解決的 問題之一，尋找原料易得、價廉、適用范圍廣、微囊化制備簡單、對人類和生態(tài)環(huán)境安全的 壁材將極大地促進微膠囊技術(shù)的發(fā)展。尤其是在食品、醫(yī)藥工業(yè)領(lǐng)域，只能使用蛋白質(zhì)、碳 水化合物和蠟等天然高分子壁材，所得的微膠囊脆弱，對芯物質(zhì)適應(yīng)性小，不耐壓、不耐熱， 加工性能差，而且產(chǎn)品的顆粒大小不均勻，因此，能用于工業(yè)化生產(chǎn)的卻并不多，有的微囊 化的過程中還會用到有毒的溶劑或輔料等。生物微膠囊以其制備簡單、損耗小、生物相容性 好、后處理方便等特性占有重要地位， 一直受到許多研究者的關(guān)注。酵母細胞安全無毒，易 于培養(yǎng)，天然的細胞結(jié)構(gòu)使其具有包埋物質(zhì)的潛能，經(jīng)過適當(dāng)改性，完全能成為一種新型的、 最為經(jīng)濟的微膠囊壁材，己成功用于精油和風(fēng)味物質(zhì)的包埋，而且近年來在藥物輸送體系中 也已得到了應(yīng)用。自從上個世紀70年代，英國科學(xué)家發(fā)現(xiàn)霉菌、酵母等真菌微生物適于作微膠囊壁材以來， 人們就在不斷地進行改進。1973年，法國專利FR2179528報道了工業(yè)用酵母經(jīng)過質(zhì)壁分離 劑處理后，包埋了氯化釹、氯化鎂和洋蔥提取物；1977年，美國的Shank等利用在低氮高碳 源培養(yǎng)基上培養(yǎng)的脂肪含量高達40 60%的酵母細胞包埋了油溶性化合物(USA4001480);1983年，英國的Dunlop公司利用一種既能溶于油又能溶于水的公共溶劑，找到了一種以脂 肪含量高于10%的酵母菌制備微膠囊的方法(EP-0085805A1); 1987年，英國的AD2公司又 作了進一步的改進，通過將酵母細胞放在含有囊心的濃溶液或分散液中溶脹，在室溫條件下 攪拌進行擴散滲透的方法，使脂肪含量低于10%的酵母細胞也能作為微膠囊的壁材使用而無 需公共溶劑的參與(EP0242135A2)。此外，漂白劑和紡織柔軟劑中的芳香類物質(zhì)也被成功地 包埋于酵母細胞中(EP 0414282A1, 0414283A1)。 WO 93/11869則先用H202除臭后再制成 了液體漂白催化劑的微膠囊。WO 94/22572描述了一種先將待包埋物質(zhì)的溶液進入到細胞 中，然后通過物理或化學(xué)方法使待包埋物殘留其中的制備生物微膠囊的方法。2000年成立的 Fluid Technologies Plc.公司專門生產(chǎn)風(fēng)味物質(zhì)的酵母微膠囊，日本也開發(fā)成功了油脂的酵母 微膠囊產(chǎn)品。所有這些專利文獻中至今還未見抗氧化劑生物微膠囊的制備方法。綠原酸存在于多種植物當(dāng)中，由于它能作用于活性氧，是有效的羥自由基清除劑，具有心 血管防護，抗菌抗病毒、抗誘變抗癌，降脂降糖，抗白血病和免疫調(diào)節(jié)等廣泛的藥理作用。 然而其鄰二酚羥基結(jié)構(gòu)使其易于氧化成高活性的醌，在儲存及加工過程中還易發(fā)生酯基轉(zhuǎn)移。 Kono等報道，綠原酸的抗氧化功能源于其兒茶酚和共軛的雙鍵結(jié)構(gòu)。因此，綠原酸的穩(wěn)定化 是發(fā)揮其功能作用的前提保證。此外，白藜蘆醇作為一種植物抗毒素，具有廣泛的生理和藥理活性，包括抗氧化、心血 管防護、抗炎、抗血小板凝集、抗癌和雌激素功能，但白藜蘆醇易于氧化和極端的光敏性也 使其應(yīng)用受到了極大的限制。所以，現(xiàn)在需要一種高效制備抗氧化劑綠原酸和白藜蘆醇生物微膠囊的方法。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明技術(shù)原理是采用將培養(yǎng)的酵母細胞經(jīng)過化學(xué)方法處理后，與抗氧化劑溶液高頻度 接觸，使抗氧化劑通過擴散或滲透進入到酵母細胞中，利用抗氧化劑的羥基、芳香環(huán)與酵母 細胞壁或細胞膜之間的氫鍵作用、疏水相互作用以及范德華力等使抗氧化劑保留在酵母細胞 中，從而制得生物微膠囊。因此，本發(fā)明第一個目的是提供一種制備水溶性抗氧化劑生物膠囊的方法，包括 (l)以酵母細胞為出發(fā)菌株，經(jīng)斜面培養(yǎng)和種子培養(yǎng)后，接種在發(fā)酵培養(yǎng)基中進行搖瓶培養(yǎng)；(2)將所得的細胞離心，洗滌后，重新懸浮在具有自溶促進功能的自溶促進劑中，在40 6(TC的溫度下進行振蕩處理24 48小時后，離心、洗滌，凍干得到微膠囊化用壁材。其中所 述的自溶促進劑任一選自吐溫-80、 TritonX-100、溴化十六垸基三甲基銨、十二垸基硫酸鈉、 乙酸乙酯、乙醇、鹽酸、氫氧化鈉、氯化鉀以及氯化鈉； (3) 將酵母細胞壁材與水溶性抗氧化劑溶液高頻度接觸，離心，洗去細胞表面的抗氧化劑， 凍干后磨細，即得抗氧化劑的酵母細胞微膠囊。(4) 如果需要，采用高效液相色譜法測定微膠囊中抗氧化劑的含量。(5) 包埋度定義包埋度(％)=實際包埋量/微膠囊重量乂 100%高頻度接觸定義以可實現(xiàn)溶液組分充分混和的轉(zhuǎn)速進行振蕩的頻度。本領(lǐng)域公知的 轉(zhuǎn)速50rpm/min以上或加壓2MPa以上，例如50-75rpm/min、 75-200rpm/min、或200rpm/min 以上的振蕩頻度。在一個具體實施方案中，所述的抗氧化劑為1%的綠原酸，所述的溶液為水溶液。在另 一個具體實施方案中，微膠囊的制備步驟如下將lg酵母細胞與l-20mLl^的綠原酸溶液 高頻度接觸。24小時后取出，離心，用水洗滌除去表面未包埋的綠原酸，冷凍干燥。在另一具體實施方案中，所述的吐溫-80的加入重量為0.1 5%;或所述的TritonX-lOO的加入重量為0.1~5%;或所述的溴化十六烷基三甲基銨的加入重量為0.1 5%;或所述的十二烷基硫酸鈉的加入重量為0.1 5%;或所述的乙酸乙酯的加入重量為0.5 10%;或所述的乙醇的加入重量為0.5~10%;或所述的鹽酸的加入重量為0.5 10%;或所述的氫氧化鈉的加入重量為1 20%;或所述的氯化鈉的加入重量為1 20%;或所述的氯化鉀的加入重量為1 20%。在另一個具體實施方案中，搖瓶培養(yǎng)的步驟如下斜面種子活化4小時后接入種子培養(yǎng) 基，培養(yǎng)24小時后再按10%的接種量接入裝有50mL發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL搖瓶中進行發(fā)酵 培養(yǎng)，發(fā)酵時間24小時，發(fā)酵溫度28-32'C，轉(zhuǎn)速180r/min。還在另一個具體實施方案中，酵母細胞處理的步驟如下培養(yǎng)的酵母細胞離心、洗滌后， 直接冷凍干燥，或重新懸浮于0.1 20%的自溶促進劑溶液中，在40 6(TC下處理24 48小 時后，離心，冷凍干燥。本發(fā)明第二個發(fā)明目的是提供一種脂溶性抗氧化劑生物微膠囊的制備方法。(l)采用酵母細胞為出發(fā)菌株，經(jīng)斜面培養(yǎng)和種子培養(yǎng)后，接種在發(fā)酵培養(yǎng)基中進行搖瓶 培養(yǎng)；(2)將所得的細胞離心，洗滌后，重新懸浮在具有自溶促進功能的自溶促進劑中，在40 6CrC的溫度下進行振蕩處理24 48小時后，離心、洗滌，凍干得到微膠囊化用壁材。其中所 述的自溶促進劑任一選自吐溫-80、 TritonX-lOO、溴化十六烷基三甲基銨、十二烷基硫酸鈉、 乙酸乙酯、乙醇、鹽酸、氫氧化鈉、氯化鉀以及氯化鈉；(3)將酵母細胞壁材與脂溶性抗氧化劑溶液高頻度接觸，離心，洗去細胞表面的抗氧化 劑，凍干后磨細，即得抗氧化劑的酵母細胞微膠囊。(4)如果需要，采用高效液相色譜法測定微膠囊中抗氧化劑的含量。 其中包埋度和高頻度接觸定義可參見前文。在一個具體實施方案中，所述的抗氧化劑為1%的白藜蘆醇，所述的溶液為乙醇溶液。在另一具體實施方案中，所述的吐溫-80的加入重量為0.1 5%;或所述的TritonX-100的加入重量為0.1 5。/。；或所述的溴化十六烷基三甲基銨的加入重量為0.1 5%;或所述的十二烷基硫酸鈉的加入重量為0.1 5%;或所述的乙酸乙酯的加入重量為0.5 10%;或所述的乙醇的加入重量為0.5 10%;或所述的鹽酸的加入重量為0.5 10%;或所述的氫氧化鈉的加入重量為1~20%;或所述的氯化鈉的加入重量為1 20%;或所述的氯化鉀的加入重量為1 20%。在另一個具體實施方案中，搖瓶培養(yǎng)的步驟如下斜面種子活化4小時后接入種子培養(yǎng) 基，培養(yǎng)24小時后再按10%的接種量接入裝有50mL發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL搖瓶中進行發(fā)酵 培養(yǎng)，發(fā)酵時間24小時，發(fā)酵溫度28-32t)，轉(zhuǎn)速180r/min。還在另一個具體實施方案中，酵母細胞處理的步驟如下培養(yǎng)的酵母細胞離心、洗滌后， 直接冷凍干燥，或重新懸浮于0.1 20%的自溶促進劑溶液中，在40 60'C下處理24 48小 時后，離心，冷凍干燥。還在另一個具體實施方案中，微膠囊的制備步驟如下將lg酵母細胞與l-20mL 1%脂 溶性抗氧化劑溶液高頻度接觸，24小時后取出，離心，用乙醇洗滌除去表面未包埋的抗氧化 劑。冷凍干燥。在一個具體實施方案中，所述的菌株為釀酒酵母(Safcc/zara附j(luò);cescewv/w'fleHan.)，斜面培 養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，種子培養(yǎng)基為高糖培養(yǎng)基，發(fā)酵培養(yǎng)基為高糖培養(yǎng)基。在另一個具體實施方案中，所述的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基均為YPD培養(yǎng)基，組成如下.-蛋白胨20.0g (單位(g/L)，下同)、酵母提取物10.0g、葡萄糖10.0g、添水至1000mL, pH4-5。在另一個具體實施方案中，所述的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基均為產(chǎn)脂培養(yǎng)基，組成如下 蛋白胨3.0g、酵母提取物8.0g、蔗糖170.0g、添水至1000mL。
還在另一個具體實施方案中，種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基都為豆芽汁蔗糖培養(yǎng)基，配制如 下取黃豆芽200.0g，洗凈,放入水中煮沸30min,用紗布過濾，取豆芽汁加蔗糖30.0g，添水至 1000mL,調(diào)節(jié)pF^7.2。本發(fā)明的第三個發(fā)明目的是提供根據(jù)前述方法所制備的抗氧化劑生物微膠囊，其中在一個實施方案中，所制備的抗氧化劑生物微膠囊是水溶性抗氧化劑生物膠囊，其中涉 及的抗氧化劑為綠原酸，優(yōu)選1%的綠原酸，涉及的溶液為水溶液。在另一個實施方案中，所制備的抗氧化劑生物微膠囊是脂溶性抗氧化劑生物膠囊，其中 涉及的抗氧化劑為白藜盧醇，優(yōu)選1%的白藜盧醇，涉及的溶液為乙醇溶液。本發(fā)明的有益效果近年來，隨著人工合成抗氧化劑被嚴格限制使用，天然、廉價的抗 氧化劑的開發(fā)和利用倍受人們的重視。但由于其本身的易氧化性或光敏性又給其應(yīng)用帶來了 諸多困難。采用原料易得、價廉、適用范圍廣、微囊化制備簡單、對人類和生態(tài)環(huán)境安全的 酵母細胞作為壁材進行包埋后，不僅能防止由于氧氣、光照等造成的氧化變質(zhì)，保持抗氧化 劑的抗氧化活性，還可以掩蓋某些抗氧化劑的酚性氣味，提高其可接受性及其穩(wěn)定性。本專 利技術(shù)對于實現(xiàn)微膠囊的國產(chǎn)化，改變我國微膠囊產(chǎn)品依賴進口的局面，同時為抗氧化劑作 為食品添加劑得到大規(guī)模應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。不僅能填補我國在這一領(lǐng)域的空白，對我國醫(yī)藥工 業(yè)、臨床醫(yī)學(xué)和食品工業(yè)均具有重大的社會效益和經(jīng)濟效益。
具體實施方式
實施例1如前所述，進行搖瓶培養(yǎng)酵母細胞，然后收集并洗滌酵母。加入重量為0.5%-5%的吐溫-80，在40 60。C的溫度下進行振蕩處理24 48小時，以使 其充分自溶，然后離心、洗滌，凍干。將lg酵母細胞與l-20mLl冗綠原酸水溶液，在30 60'C下進行高頻度接觸，24小時后 取出，離心，用水洗去表面未包埋的綠原酸后，冷凍干燥。最后通過高效液相色譜法測定微膠囊中抗氧化劑的含量。應(yīng)當(dāng)指出所加入的自溶促進劑的作用在于促進細胞自溶，如果加入高濃度的自溶促進 劑則反應(yīng)時間更短，如果加入低濃度的自溶促進劑則反應(yīng)時間更長。因此在合適濃度范圍內(nèi)， 加入不同濃度的自溶促進劑，本領(lǐng)域技術(shù)人員顯然可以通過控制時間長短來達到預(yù)期效果。 因此實施例中并不必要列出上述濃度范圍內(nèi)任何點的濃度數(shù)值。實施例2培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例1，除了加入的自溶促進劑為TritonX-lOO。 實施例3培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例1,除了加入的自溶促進劑為溴化十六烷基三甲基銨。實施例4培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例1,除了加入的自溶促進劑為十二烷基硫酸鈉。所 得生物微膠囊中綠原酸包埋度比未經(jīng)自溶處理者高3.75%。實施例5培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例1,除了加入的自溶促進劑為乙酸乙酯。所得生物 微膠囊中綠原酸包埋度比未經(jīng)自溶處理者高17.96%。實施例6培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例l，除了加入的自溶促進劑為乙醇。 實施例7培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例1，除了加入的自溶促進劑為鹽酸。 實施例8培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例1，除了加入的自溶促進劑為氫氧化鈉。所得生物 微膠囊中綠原酸包埋度比未經(jīng)自溶處理者高43.52 % 。實施例9培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例l，除了加入的自溶促進劑為氯化鈉。 實施例10培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例l,除了加入的自溶促進劑為氯化鉀。實施例11培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例l,除了加入的抗氧化劑為l-20mLl冗白藜蘆醇乙 醇溶液。
實施例12培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例11，除了加入的自溶促進劑為TritonX-100。 實施例13培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例ll,除了加入的自溶促進劑為溴化十六垸基三甲基銨。實施例14培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例ll，除了加入的自溶促進劑為十二垸基硫酸鈉。 實施例15培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例ll，除了加入的自溶促進劑為乙酸乙酯。 實施例16培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例ll，除了加入的自溶促進劑為乙醇。 實施例17培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例ll，除了加入的自溶促進劑為鹽酸。 所得生物微膠囊中白藜蘆醇包埋度比未經(jīng)自溶處理者高25.06%。實施例18培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例ll，除了加入的自溶促進劑為氫氧化鈉。所得生物 微膠囊中白藜蘆醇包埋度比未經(jīng)自溶處理者高18.08%。實施例19培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例ll，除了加入的自溶促進劑為氯化鈉。 實施例20培養(yǎng)、處理酵母及包埋步驟同實施例ll，除了加入的自溶促進劑為氯化鉀。所得生物微 膠囊中白藜蘆醇包埋度比未經(jīng)自溶處理者高1.28%。 從上述實施例的結(jié)果中，經(jīng)過分析我們發(fā)現(xiàn)1. 所制備的酵母細胞壁材對綠原酸和白藜蘆醇的包埋度分別為6.93%~8.76%和3.62% 4.81%。經(jīng)過改性處理后，酵母細胞制備壁材對水溶性綠原酸和脂溶性白藜戸醇的包埋度都 有不同程度的提高，對綠原酸的包埋度分別比改性前提高了 3.75% 43.52%不等(參見實施例 1-10)，白藜蘆醇的包埋度則提高了 1.28% 25.06%不等(參見實施例11-20)。2. 制得的綠原酸酵母微膠囊在25°0/75% RH, 25°C/90% RH和60 。C下能保持穩(wěn)定，而且 在模擬胃液中，綠原酸在2 h內(nèi)的釋放率達95X以上，5 h后，綠原酸已釋放完全。3. 綠原酸酵母微膠囊化后，其對羥自由基和DPPH自由基的清除能力顯著提升。當(dāng)微膠囊 乙醇提取液中綠原酸濃度為17.54mg/L時，其對羥自由基清除率預(yù)測值為39.56%，而實測值 為63.52±1.59%;當(dāng)綠原酸濃度為123.14 mg/L時，預(yù)測值為50.19%,實測值為74. 62±0. 54 %。當(dāng)微膠囊乙醇提取液中綠原酸濃度為17. 54 mg/L時，對DPPH自由基的清除率為48.91士0.48 %，高于預(yù)測值44.85%;當(dāng)綠原酸濃度為23.14 mg/L時，預(yù)測值為56.99%，實測值為 64.66±0.74%;當(dāng)綠原酸濃度為35.08 mg/L時，預(yù)測值為75.44%，實測值為87. 48±0. 75%; 當(dāng)綠原酸濃度為46.28 mg/L時，預(yù)測值為84.87%，實測值為91. 75±0.15%;可見，綠原酸微 囊化后，其抗氧化性能顯著提高。4. 制得的白藜蘆醇酵母微膠囊在6(TC下能保持穩(wěn)定。而且，在25"/75%朋和25°0/90% RH光照下(ca.3001x)貯存10天后的白藜蘆醇保有率分別為97. 58±1. 81%和93.13±1.81%， 顯著高于未微囊化的79.88土2. 05%和77. 77±1. 50% 。5. 微囊化后白藜蘆醇的在水中的溶解度為6.67土0.03 mg/100 mL，比結(jié)晶型白藜蘆醇的 1.96±0.01 mg/100 mL高2倍以上，比無定形白藜戶醇的3.06土0. 02 mg/100 mL也要高出l倍以 上，表明白藜戶醇酵母微膠囊化以后，其生物利用度提高了1 2倍。6. 酵母微膠囊化的白藜蘆醇對羥自由基和DPPH自由基的清除能力顯著提高。當(dāng)微膠囊乙 醇提取液中白藜蘆醇濃度為9.64mg/L時，其對羥自由基的清除能力預(yù)測值為20.00%，而實測 值為30.11±1.69%:當(dāng)白藜蘆醇濃度為15.60 mg/L時，預(yù)測值為29.78%，實測值為33.86士2.73 %。當(dāng)微膠囊乙醇提取液中白藜蘆醇濃度為10.18 mg/L時，對DPPH自由基的清除率為 34.98±1.12%，高于預(yù)測值27.31Q/^;當(dāng)白藜蘆醇濃度為19. 28 mg/L時，預(yù)測值為41.30%， 實測值為50.68±1.36%;當(dāng)白藜蘆醇濃度為31.22 mg/L時，預(yù)測值為53.72%，實測值為 63.53±0.31%?？梢姡邹继J醇微囊化后，其抗氧化性能顯著提高。7. 酵母細胞微膠囊化的白藜蘆醇在模擬胃液中90min內(nèi)釋放率達90X,這一釋放特性對 于提高白藜蘆醇由于代謝和排泄過于迅速而引起的低生物利用度極為有利。由于白藜戶醇無 法在血管外的組織中積累且血漿中白藜蘆醇半衰期極短，因而微囊化白藜蘆醇的緩釋性能對 于維持白藜蘆醇的生物活性極為重要。
可見，對于制備水溶性抗氧化劑生物膠囊，綠原酸經(jīng)過酵母細胞微膠囊化后，不僅達到 了穩(wěn)定化的目的，而且并未顯著降低其釋放速度，通過酵母細胞微膠囊化，綠原酸對DPPH 自由基和羥自由基的清除能力得到了明顯提升；對于制備脂溶性抗氧化劑生物膠囊，白藜蘆醇酵母微膠囊化后，能顯著降低其極端的光 敏性。通過酵母細胞微膠囊化，不僅其水溶性提高了2倍以上，對DPPH自由基和羥自由基 的清除能力得到了明顯提升，而且微膠囊的緩釋性能對于提高白藜蘆醇由于過于迅速的代謝 和排泄導(dǎo)致的低生物利用度極為有利。
權(quán)利要求
1.一種制備抗氧化劑生物微膠囊的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟(1)采用酵母細胞作為出發(fā)菌珠，經(jīng)斜面培養(yǎng)和種子培養(yǎng)后，接種在發(fā)酵培養(yǎng)基中進行搖瓶培養(yǎng)；(2)將所得的細胞離心，洗滌后，重新懸浮在具有自溶促進功能的自溶促進劑中，在40～60℃的溫度下進行振蕩處理24～48小時后，離心、洗滌，凍干，得到用于微膠囊化的酵母細胞壁材，其中所述的自溶促進劑任一選自吐溫-80或TritonX-100、溴化十六烷基三甲基銨、十二烷基硫酸鈉、乙酸乙酯、乙醇、鹽酸、氫氧化鈉、氯化鈉或氯化鉀。(3)將酵母細胞壁材與1％抗氧化劑溶液高頻度接觸，離心，洗去細胞表面的抗氧化劑，凍干后磨細，即得抗氧化劑的酵母細胞微膠囊；(4)如果需要，采用高效液相色譜法測定微膠囊中抗氧化劑的含量。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的抗氧化劑為綠原酸，所述的抗氧化劑溶液 為水溶液。
3. 如權(quán)利要求l-2所述的方法，其特征在于所述的抗氧化劑為白藜蘆醇，所述的抗氧化劑 溶液為乙醇溶液。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于 所述的吐溫-80的加入重量為0.1 5%;或 所述的TritonX-lOO的加入重量為0.1 5%;或 所述的溴化十六烷基三甲基銨的加入重量為0.1 5%;或 所述的十二垸基硫酸鈉的加入重量為0.1~5%;或 所述的乙酸乙酯的加入重量為0.5 10%;或 所述的乙醇的加入重量為0.5 10%;或 所述的鹽酸的加入重量為0.5 10Q/。；或 所述的氫氧化鈉的加入重量為1 20%;或 所述的氯化鈉的加入重量為1 20%;或 所述的氯化鉀的加入重量為1 20%。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于所述的菌株為釀酒酵母 (5"flcc^ww^ce;y cewv/w'fle Han.)，斜面培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，種子培養(yǎng)基為高糖培養(yǎng)基，發(fā) 酵培養(yǎng)基為高糖培養(yǎng)基。
6.如權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基均為YPD培養(yǎng)基，組成如下蛋白胨20.0g、酵母提取物10.0g、 葡萄糖10.0g、添水至1000mL， pH4-5。
7. 如權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基均為產(chǎn) 脂培養(yǎng)基，組成如下蛋白胨3.0g、酵母提取物8.0g、蔗糖170.0g、添水至1000mL。
8. 如權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基都為豆芽汁蔗糖培養(yǎng)基，配制如下取黃豆芽200.0g，洗凈，放 入水中煮沸30min，用紗布過濾,取豆芽汁加蔗糖30.0g，添水至1000mL,調(diào)節(jié)pH-7.2。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1-8的方法所制備的抗氧化劑生物微膠囊。
全文摘要
本發(fā)明提供一種抗氧化劑生物微膠囊的制備方法，涉及到酵母細胞的培養(yǎng)、處理和微膠囊制備的方法，更進一步涉及通過該方法所制備的抗氧化劑生物微膠囊。將在合適的條件下?lián)u瓶培養(yǎng)的酵母細胞經(jīng)過吐溫-80或TritonX-100、溴化十六烷基三甲基銨、十二烷基硫酸鈉、乙酸乙酯、乙醇、鹽酸、氫氧化鈉、氯化鉀及氯化鈉等進行改性處理后，離心、洗滌，凍干。將酵母細胞壁材與水溶性的綠原酸或脂溶性的白藜蘆醇高頻度接觸，離心，洗去細胞表面的抗氧化劑，凍干后磨細，即得大小均勻，不黏結(jié)，抗氧化性能更強且表面無抗氧化劑的酵母細胞微膠囊。實現(xiàn)了綠原酸的穩(wěn)定化，有效降低了白藜蘆醇的光降解速度，水溶性增加了2-3倍且具有緩釋性能。
文檔編號A61P39/06GK101125289SQ20071013755
公開日2008年2月20日 申請日期2007年8月7日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月1日
發(fā)明者石國榮, 饒力群 申請人:饒力群;石國榮