專利名稱：：一種治療多臟器功能不全綜合征時(shí)血瘀癥的中藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種治療多臟器功能不全綜合征時(shí)血瘀癥的中藥組合物及其制劑，屬于中醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
。技術(shù)背景當(dāng)機(jī)體受到嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、燒傷等嚴(yán)重打擊后，發(fā)生2個(gè)或2個(gè)以上器官序貫性功能衰竭，被稱為多臟器功能衰竭綜合征(multiplesystemorganfailure,MS0F)。而多臟器功能不全綜合征(multipleorgandysfunctionsyndrome,MODS)是指各種疾病導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)失橫，包括早期多臟器功能不全到多臟器功能衰竭的全過程。目前，多臟器功能衰竭病死率仍高達(dá)60—94%，是嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷和大手術(shù)的病死原因。MS0F和M0DS是當(dāng)前危重病急救醫(yī)學(xué)研究探索的重要課題。循環(huán)衰竭(休克)是多臟器功能不全和多臟器功能衰竭中的一個(gè)常見的重要病理環(huán)節(jié)。休克的微循環(huán)學(xué)說認(rèn)為，休克是一個(gè)以急性微循環(huán)障礙為特征的臨床綜合征。休克時(shí)血管的血流量和血流變學(xué)發(fā)生了改變。休克的微循環(huán)變化具有一定的規(guī)律，根據(jù)微循環(huán)的改變，休克分為三個(gè)階段，即微循環(huán)缺血期、微循環(huán)淤血期和凝血系統(tǒng)紊亂(DIC)期。在休克的初期，有效循環(huán)血量急劇減少，血容量重新分布，引起機(jī)體出現(xiàn)多種自身反應(yīng)。如果在休克早期的微循環(huán)缺血時(shí)不能即使被糾正，組織細(xì)胞的缺血缺氧則持續(xù)加重。組織中酸性代謝物大量堆積，而導(dǎo)致毛細(xì)血管大量開放，血管內(nèi)容量明顯增多，毛細(xì)血管網(wǎng)出現(xiàn)大量血液淤積，使休克進(jìn)入微循環(huán)淤血期。同時(shí)由于毛細(xì)血管內(nèi)壓力升高，血管通透性增加，液體從血管內(nèi)大量進(jìn)入組織間隙，導(dǎo)致微循環(huán)血量的進(jìn)一步下降，這時(shí)休克表現(xiàn)得更為嚴(yán)重。如果休克仍未得到救治，微循環(huán)障礙進(jìn)一步惡化，淤滯在微循環(huán)的血液濃縮，血液流動(dòng)更為緩慢，血小板、紅細(xì)胞聚集，出現(xiàn)DIC后全身微循環(huán)灌注量嚴(yán)重不足，細(xì)胞受損乃至細(xì)胞死亡。研究證明，當(dāng)發(fā)生M0DS和MS0F時(shí)，凝血、抗凝和纖溶系統(tǒng)也發(fā)生一系列紊亂。對(duì)于本病尚未發(fā)現(xiàn)中醫(yī)學(xué)在歷代醫(yī)學(xué)中的論述，更沒有合理的中醫(yī)學(xué)病名診斷，其臨床上多有氣虛血瘀之象，主要表現(xiàn)為神疲乏力，氣短心悸，聲低懶言，口唇紫暗，小便量少，舌淡暗，脈虛而細(xì)數(shù)。毒邪內(nèi)陷，損傷臟器或亡津失血后或創(chuàng)傷后，首先出現(xiàn)氣血逆亂，臟腑功能失調(diào)，進(jìn)而正氣虧虛，心、肝、脾、肺、腎等多臟器受到嚴(yán)重?fù)p害，臟腑功能活動(dòng)衰退。正氣虧虛，神形失養(yǎng)，故神疲乏力；宗氣不足，心脈失養(yǎng)，故氣短心悸，聲低懶言；腎氣不足，氣化無力，故小便量少。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種治療多臟器功能不全綜合征時(shí)血瘀癥的中藥組合物。本發(fā)明要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是提供以上述中藥組合物為活性成份的藥物制劑。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案-一種治療多臟器功能不全綜合征時(shí)血瘀癥的中藥組合物，由下述重量份數(shù)的原料經(jīng)提取制成黃芪80—120份丹參40—60份川芎10—20份赤芍10—20份紅花10—20份當(dāng)歸10—20份。優(yōu)選的原料重量份數(shù)為黃芪100份丹參50份川芎15份赤芍15份紅花15份當(dāng)歸15份；或黃芪120份丹參60份川芎12份赤芍20份紅花20份當(dāng)歸12份。中醫(yī)理論認(rèn)為，氣為血之帥，即氣有推動(dòng)血行的作用，氣行則血行，氣虛則推動(dòng)血液運(yùn)行的動(dòng)力不夠，導(dǎo)致血液瘀滯脈中，難以運(yùn)行，形成血瘀。瘀血內(nèi)阻，則可見口唇紫暗。舌淡暗，脈虛而細(xì)數(shù)均為氣虛血瘀之征。由此可見，多臟器功能受損，勢必形成氣虛血瘀之證，而氣虛血瘀反之又可加重臟器功能的損害。因此，益氣活血是其治療的重要手段。補(bǔ)益正氣，同時(shí)佐以活血化瘀之品，使血脈通暢，有助于各臟腑功能活動(dòng)的恢復(fù)，減少臟器的損害。所以中西醫(yī)結(jié)合治療休克及MODS，在進(jìn)行病因治療、補(bǔ)充血容量以及其他復(fù)蘇治療的基礎(chǔ)上，配合中醫(yī)益氣活血法，符合中醫(yī)學(xué)基本理論，同時(shí)也擴(kuò)展了中醫(yī)活血化瘀治療的范圍。本發(fā)明重用黃芪為君。黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。黃芪甘溫益氣，升陽舉元，以治其本。同時(shí)氣為血之帥，使用黃芪有益氣活血之效，故為君。丹參、川芎為臣。丹參為唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根莖，苦微寒，功擅活血化瘀，通常血脈。川芎為傘形科植物川芎LigusticumchuanxiongHort.的干燥根莖，辛溫，辛散溫通，活血行氣。赤芍、紅花、當(dāng)歸為佐。其中赤芍毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall.或川赤芍PaeoniaveitchiiLynch的干燥根，苦微寒，活血通絡(luò)；紅花為菊科植物紅花CarthamustinctoriusL.的干燥花，辛溫，亦為常用活血化瘀之品。本方丹參、川芎、赤芍、紅花等同用，意在增強(qiáng)本方活血化瘀之作用。當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根，甘辛苦溫、補(bǔ)血和血，在方中可防治諸活血之品耗血之弊，又與黃芪配伍，益氣養(yǎng)血，輔助正氣。本方諸藥合用，共奏益氣活血之功效。一種治療多臟器功能不全綜合征時(shí)血瘀癥的中藥制劑，由上述中藥組合物和藥學(xué)可接受的輔料制成。所述中藥制劑可以為湯劑、口服液、散劑、丸劑、普通片劑、普通膠囊、顆粒劑、緩釋片劑、舌下含片、口腔速崩片、分散片、腸溶片、腸溶膠囊、延遲釋放片、定時(shí)/位釋放片、緩釋膠囊、控釋膠囊、含有微丸或小片的膠囊、含有微丸或小片的pH依賴型膠囊、顆粒劑、口服液、膜劑、貼劑等劑型。所述藥劑學(xué)可接受的輔料選自淀粉、微晶纖維素、無機(jī)鹽類、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化鈉、半胱氨酸、硬脂酸鎂、檸檬酸和亞硫酸鈉等的一種或幾種物質(zhì)的組合物，屬于本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)。本發(fā)明中，因該處方中藥味活性成分多為水、醇溶性，故制劑可以為顆粒劑。當(dāng)歸含揮發(fā)油，具有補(bǔ)血和血的作用；川芎含川芎嗪、藁本內(nèi)酯等成分，具有活血行氣的作用，此兩味藥采用乙醇等醇溶劑可以把有效成分提出來，去除雜質(zhì)。黃芪含黃芪甲苷、黃芪皂苷，具有益氣活血之效；赤芍含芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷，具有活血通絡(luò)之功；丹參含二萜醌類化合物，功善活血化瘀、通暢血脈；紅花含紅花苷、新紅花苷等，具有活血化瘀作用。以上四位藥材的水溶性成分具有補(bǔ)氣、活血等活性作用，故此四味藥材采用水提法。本發(fā)明顆粒劑按照下述方法制得本發(fā)明處方量的黃芪、丹參、赤芍、紅花加8—IO倍量水煎煮二次，每次1一2小時(shí)，合并濾液，濾過；川芎、當(dāng)歸用5—8倍量70一90%乙醇加熱回流提取二次，每次1一2小時(shí)，合并醇提，回收乙醇得藥液，與水煎液合并，濃縮至相對(duì)密度1.12-1.16(55°C)的藥液，噴霧干燥，粉碎成干浸膏粉，加入適量硬脂酸鎂和糊精，混合均勻，干法制成顆粒。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明為常年臨床實(shí)踐總結(jié)出的經(jīng)驗(yàn)方。該方中無劇毒藥物，無配伍禁忌，使用量均在藥典規(guī)定范圍內(nèi)。長期臨床應(yīng)用未發(fā)現(xiàn)毒副反應(yīng)，該方制劑經(jīng)動(dòng)物劑型毒性試驗(yàn)未見毒性反應(yīng)。中藥益氣活血法具有抗血細(xì)胞聚集，降低血液粘稠度，改善血流變以及消栓等作用。多年來，在治療M0DS及MS0F時(shí)，配合中藥益氣活血法，明顯提高療效，有效減少死亡率。下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，并非對(duì)本發(fā)明的限定，依照本領(lǐng)域公知的現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的實(shí)施方式并不限于此，因此凡依照本發(fā)明公開內(nèi)容所作出的本領(lǐng)域的等同替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。圖1為實(shí)施例3中兩組IL-6水平變化。圖2為實(shí)施例3中兩組IL-10水平變化。圖3為實(shí)施例3中兩組IL-6/IL-10水平變化。圖4為兩組PCT水平變化。圖5為實(shí)施例3中兩組TNG-a水平變化。圖6為兩組PLT水平變化。圖7為實(shí)施例3中兩組PT水平變化。圖8為實(shí)施例3中兩組D-dimer水平變化。具體實(shí)施方式實(shí)施例l.制備顆粒劑(參芪活血顆粒)一.原料均符合《中國藥典》2000版對(duì)于各該藥材和輔料的規(guī)定黃芪1000g丹參500g川芎150g赤芍150g紅花150g當(dāng)歸150g糊精5g硬脂酸鎂適量注藥材均為飲片，故省略清洗、凈選等步驟。糊精和硬脂酸鎂符合《中國藥典》2000版二部相關(guān)項(xiàng)下規(guī)定。二.制法以上六味，黃芪、丹參、赤芍、紅花先后加10倍、8倍量水煎煮二次，每次1.5小時(shí)，合并濾液，濾過；川芎、當(dāng)歸用6倍量80%乙醇加熱回流提取二次，每次1.5小時(shí)，合并醇提液，回收乙醇得藥液，與水煎液合并，濃縮至相對(duì)密度1.12-1.16(55'C)的藥液，噴霧干燥，粉碎成干浸膏粉，加入硬脂酸鎂5g和適量糊精，混合均勻，干法制成顆粒1000克，分裝，即得。功能與主治主治氣虛血瘀證，適用于多臟器功能不全綜合征(MDOS)、伴凝血纖溶紊亂及微循環(huán)障礙的輔助治療。規(guī)格10g/袋，為棕色顆粒，味微苦。用法及用量口服，一次10g，一日3次。實(shí)施例2.制備顆粒劑(參芪活血顆粒)一.原料均符合《中國藥典》2000版對(duì)于各該藥材和輔料的規(guī)定黃芪1200g丹參600g川芎120g赤芍200g紅花200g當(dāng)歸120g糊精5g硬脂酸鎂適量注藥材均為飲片，故省略清洗、凈選等步驟。糊精和硬脂酸鎂符合《中國藥典》2000版二部相關(guān)項(xiàng)下規(guī)定。二.制法同實(shí)施例1。實(shí)施例3.工藝中試驗(yàn)證處方和制法同實(shí)施例1，結(jié)果見表1。表l:中試驗(yàn)證結(jié)果批號(hào)中試030312投藥量(Kg)21水提投藥量(Kg)18醇提投藥量(Kg)3干膏粉量(Kg)7.51出膏率(％)35.76糊精量(Kg)2.44硬脂酸鎂量(Kg)0.05顆粒量(Kg)9.79成品量(Kg)9.43成品率(％)94.3該方法成品率高，工藝穩(wěn)定。實(shí)施例4.中藥芪參活血顆粒臨床抗炎和抗凝作用研究一.臨床資料從2005年2月至2006年10月，共入選北京地區(qū)8個(gè)參研中心的123例重度膿毒癥病人，其中對(duì)110例患者進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)測定分析，123例患者進(jìn)行了28天病死率分析。膿毒癥診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)美國1991年胸科醫(yī)師學(xué)會(huì)和危重病學(xué)會(huì)(ACCP/SCCM)聯(lián)合會(huì)議制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。入選病人平均年齡61.81土15.937(年齡范圍21~91歲)，入選時(shí)平均臟衰個(gè)數(shù)3.17士1.146(1~6個(gè))，入院時(shí)主要感染器官以肺部感染(37%)為主。入選病人按隨機(jī)信封分為兩組A組(中西醫(yī)結(jié)合組)，B組(單純西藥組)。A組58例，男47例，女ll例；平均年齡64.94±15.587歲；入選時(shí)臟衰個(gè)數(shù)3.27土1.056個(gè)；入選時(shí)Marshall評(píng)分5.54±2.293，APACHEII評(píng)分14.71±7.888。B組52例，男39例，女13例；平均年齡66.71±13.694歲；入選時(shí)臟衰個(gè)數(shù)3,54±1.324個(gè)；入選時(shí)Marshall評(píng)分5.35±3.224，APACHEII評(píng)分14.35±6.811。二.治療方法A組芪參活血顆粒(北京市衛(wèi)生局批準(zhǔn)的院內(nèi)制劑，按實(shí)施例1方法制備)，10克，口服或胃管入，3次/日，連續(xù)10天，其它治療按SSC膿毒癥治療指南進(jìn)行。B組常規(guī)治療(按照SSC膿毒癥治療指南進(jìn)行)3.主要藥物及試劑(1)芪參活血顆粒10g/袋，實(shí)施例l，由長城制藥廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)050901(2)IL-6、IL-IO、TNF-a試劑盒美國RapidBio公司，進(jìn)口原裝。(3)PCT試劑盒:德國B.R.A.H.M.SAktiengesellschaft公司，進(jìn)口原裝。(4)DIC試劑盒美國DadeBehring公司，進(jìn)口原裝。4.監(jiān)測指標(biāo)和檢測方法監(jiān)測時(shí)間點(diǎn)為治療前及治療后5天、10天。監(jiān)測指標(biāo)包括(1)凝血指標(biāo)血小板、DIC初篩指標(biāo)(PT、APTT、TT、Fbg、D-dimer、FDP)。(2)炎癥指標(biāo)IL-6、IL-10、IL-6/IL-10、TNF-a及PCT水平。(3)APACHEII評(píng)分和Marshall評(píng)分。(4)記錄治療期間使用升壓藥物、抗生素、機(jī)械通氣的天數(shù)、ICU內(nèi)治療天數(shù)、輸血和血小板量。(5)統(tǒng)計(jì)28天病死率。(6)記錄服用中藥期間出現(xiàn)的不良反應(yīng)事件。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法釆用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(X土SD)表示。計(jì)量資料兩兩比較計(jì)采用T檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用單因素方差分析；計(jì)數(shù)資料應(yīng)用四格表卡方檢驗(yàn)分析。以P〈0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。三.結(jié)果1.兩組治療前后炎癥因子的變化。IL-6:見圖l，兩組治療前無顯著性差異，治療后兩組IL-6水平均呈下降趨勢，中西醫(yī)結(jié)合組治療后第IO天水平明顯低于單純西藥組(P=0.029)。IL-10:見圖2，兩組治療前無顯著性差異，治療后單純西藥組第10天的IL-10水平明顯高于中西醫(yī)結(jié)合組，其水平達(dá)114.158±67.034pg/ml(P=0.013)。IL-6/IL-10:見圖3，兩組治療前無顯著性差異，治療后兩組均呈下降趨勢，但兩組之間無顯著性差異。PCT:見圖4，兩組治療前無顯著性差異，治療后較治療前自身比較兩組PCT水平均顯著下降，但目前兩組間在各時(shí)間點(diǎn)無顯著差異。TNF-a:見圖5，兩組治療前無顯著性差異，治療后中西醫(yī)結(jié)合組第5、10天TNF-a水平較單純西藥組均明顯降低(P=0.035，P=0.013)。2.兩組治療前后凝血指標(biāo)的變化。血小板見圖6，治療前兩組無顯著性差異，治療后第IO天中西醫(yī)結(jié)合組PLT水平高于單純西藥組，但兩組之間尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，*P=0.149VSB組。PT時(shí)間見圖7，兩組治療前無顯著性差異，治療后單純西藥組較治療前自身比較無顯著變化，而中西醫(yī)結(jié)合組治療后第10天較治療前自身比較PT時(shí)間顯著縮短，但兩組之間無顯著差異。D-dimer:見圖8，兩組治療前無顯著性差異，治療后中西醫(yī)結(jié)合組第5天水平低于單純西藥組，P=0.067，雖未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但顯示了加用芪參活血顆粒有降低D一dimer水平的趨勢。(*P=0.067VSB組，ftP=0.218VSB組)3.兩組治療前后Marshall評(píng)分和APACHEII評(píng)分的變化。兩組治療后較治療前自身比較Marshall評(píng)分和APACHEII評(píng)分均顯著下降，中西醫(yī)結(jié)合組低于單純西藥組。4.住ICU時(shí)間及28天病死率中西醫(yī)結(jié)合組住ICU平均時(shí)間明顯低于單純西藥組(P=0.041)。中西醫(yī)結(jié)合組28天病死率為21%，單純西藥組為39%，提示了加用芪參活血顆粒有降低28天病死率的趨勢。四.討論1.芪參活血顆粒的抗炎作用。本研究中我們觀察到中西醫(yī)結(jié)合組IL-6、TNF-a水平較單純西藥組明顯下降，該結(jié)果提示了芪參活血顆粒能降低膿毒癥患者血清細(xì)胞因子水平，從而可能減輕膿毒癥時(shí)失控性SIRS和MODS的發(fā)生，提高治愈率。我們?cè)谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)單純西藥組第10天的IL-10水平明顯高于中西醫(yī)結(jié)合組，其水平達(dá)114.158±67.034pg/ml。對(duì)這一現(xiàn)象我們考慮既往人們一直認(rèn)為IL-10是抗炎因子，可以抑制促炎因子IL-6、TNF-a等的生成，阻礙促炎因子的作用，從而抑制過度的炎癥反應(yīng)，保護(hù)機(jī)體。但近年來Marchant等人研究發(fā)現(xiàn)，膿毒癥休克患者IL-10水平(58pg/ml)顯著大于膿毒癥患者(12pg/ml)。因而有學(xué)者認(rèn)為過高的IL-10水平可以導(dǎo)致機(jī)體免疫麻痹，消弱自身抵抗力，反而促進(jìn)了病情的惡化。因而本研究中觀察到的單純西藥組較高的IL-IO水平在此是起保護(hù)作用，還是導(dǎo)致了免疫麻痹，以及與單純西藥組較高的死亡率之間是否有一定關(guān)系，尚待進(jìn)一步研究。而中西醫(yī)結(jié)合組，IL-IO水平呈先降然后緩慢上升趨勢，提示芪參活血顆粒可能具有雙向調(diào)節(jié)IL-IO的作用。2.芪參活血顆粒的抗凝作用。本研究中我們觀察到中西醫(yī)結(jié)合組D-dimer水平較治療前自身比較顯著下降，且第5天時(shí)D-dimer水平低于單純西藥組(P=0.067)。D-dimer為纖維蛋白的降解產(chǎn)物，D-dimer水平的下降，提示纖維蛋白的生成減少。因而本研究提示了芪參活血顆?？赡軠p少血管內(nèi)纖維蛋白的生成和沉積，減少微血管內(nèi)血栓形成。既往研究證實(shí)芪參活血顆粒的前身中藥912液可防治急性DIC動(dòng)物AT-III水平的下降，而且對(duì)內(nèi)毒素性DIC時(shí)FIB的升高有一定的預(yù)防作用。因此推測本研究D-dimer的下降與該藥能降低AT-III水平，從而使纖維蛋白生成減少有關(guān)。在本研究中我們還觀察到中西醫(yī)結(jié)合組血小板治療后平均水平較單純西藥組升高，但兩組間尚未達(dá)到顯著性差異。3.芪參活血顆粒有降低病死率的趨勢。中西醫(yī)結(jié)合組28天病死率明顯低于單純西藥組，P=0.056，提示中西醫(yī)結(jié)合組有降低28天病死率的趨勢?？紤]與本研究中觀察到的芪參活血顆粒可降低炎癥因子IL-6、TNF-a等及降低D-dimer水平，從而可能減輕膿毒癥時(shí)失控性SIRS和MODS的發(fā)生，減少血管內(nèi)纖維蛋白的生成和沉積有關(guān)。4.不良反應(yīng)。中西醫(yī)結(jié)合組治療過程中，未發(fā)現(xiàn)明顯出血及其他嚴(yán)重并發(fā)癥。本研究結(jié)果顯示芪參活血顆?？山档虸L-6、TNF-a水平及住ICU時(shí)間；對(duì)D-dimer水平及28天病死率顯示一個(gè)良好的降低趨勢；臨床應(yīng)用芪參活血顆粒無嚴(yán)重并發(fā)癥出現(xiàn)。本研究為臨床應(yīng)用芪參活血顆粒治療膿毒癥提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)施例5.中藥復(fù)方對(duì)膿毒癥大鼠脾臟Caspase3表達(dá)影響的對(duì)比研究一.試驗(yàn)材料體重270290g的雄性SD大鼠，購買于北京市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)中心；芪參活血顆粒(長城制藥廠，按實(shí)施例2方法制備)，批號(hào)為050905，同實(shí)施例2;利復(fù)星為北京雙鶴藥業(yè)生產(chǎn)，批號(hào)為0503112;研究顯微鏡，美國光學(xué)儀器公司；20uL、100yL、1000uL移液器及吸頭。戊巴比妥鈉，上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站分裝廠，批號(hào)860122;多聚甲醛，上海太平洋化工集團(tuán)公司溶劑廠，Caspase3免疫組化試劑盒、武漢博士德生物工程有限公司；多聚左旋賴氨酸(Poly-L-Lysine),中國聯(lián)星實(shí)業(yè)有限公司(SigmaP1139,25mg，進(jìn)口分裝)二.試驗(yàn)方法1.動(dòng)物模型的建立及分組實(shí)驗(yàn)室室溫2426°C。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)3d以上，術(shù)前稱重，大鼠采用O.1%戊巴比妥鈉按照0.4ml/100g劑量腹腔注射麻醉后，沿腹正中線作一1.5cm長的切口，在血管弓內(nèi)結(jié)扎末端l/2盲腸，用7頭號(hào)皮針頭在盲腸上穿通2次形成盲腸漏，然后將盲腸還納腹腔，IO號(hào)絲線逐層縫合腹壁切口，術(shù)畢，立即皮下注射林格平衡液50ml/kg抗休克，假手術(shù)組動(dòng)物只開腹、關(guān)腹與復(fù)蘇，但盲腸不結(jié)扎與穿孔，動(dòng)物隨機(jī)分為5組假手術(shù)組(18只)、膿毒癥模型組(18只)、利復(fù)星組(18只)、復(fù)方清熱顆粒U8只)、芪參活血顆粒組(18只)和通腑顆粒組(18只)，每只大鼠于晨8時(shí)給予食物20g,自由飲水。各組大鼠觀察至3、24、72小時(shí)時(shí)相點(diǎn)處死，分別留取脾臟組織標(biāo)本待測。2.給藥方法芪參活血顆粒組每ml液體中含生藥各2.44g/ml。術(shù)前半小時(shí)給藥一次，后每日同時(shí)間給藥，假手術(shù)組、模型組給予等容量的生理鹽水，各組按照lml/100g的容量給藥，每天一次。3.指標(biāo)項(xiàng)目及檢測方法處死取動(dòng)物后取脾臟，Cas印se3應(yīng)用免疫組化的方法進(jìn)行檢測脾石蠟切片的陽性表達(dá)，引用image-pro軟件分析測定免疫組化的陽性面積與陽性指數(shù)，陽性指數(shù)=陽性面積X平均光密度。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)(x土s)表示，方差齊、數(shù)據(jù)成正態(tài)分布者，計(jì)量資料采用方差分析，組間比較采用q檢驗(yàn)，以p〈0.05為差異具有顯著性。二結(jié)果不同組別各時(shí)間段Caspase3陽性指數(shù)的比較假手術(shù)組的凋亡表達(dá)一直處于低水平，變化不大，3小時(shí)模型組凋亡明顯增加高于其他各組(pi.000)，利復(fù)星組的凋亡也明顯高于假手術(shù)組與三種中藥復(fù)方組(p=0.001)，中藥組明顯高于假手術(shù)組(p=0.000);24小時(shí)各組的凋亡表達(dá)達(dá)到一個(gè)高峰，各組之間的比較意義與3小時(shí)相同，到72小時(shí)，Caspase3表達(dá)下降，各組的比較發(fā)現(xiàn)利復(fù)星組與模型組的表達(dá)仍然明顯高于中藥復(fù)方(p=0.001)，中藥復(fù)方表達(dá)明顯高于假手術(shù)組(1^0.014)。表2:各組脾臟Caspase3陽性指數(shù)的比較table4ComparisonpositiveexponentofCaspase3invariousgroupsanddifferenttime<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>※表示與模型組比較p〈0.05，tf表示與利復(fù)星比較p〈0.05，&表示與假手術(shù)組比較0<0.05四.討論膿毒癥時(shí)，由于細(xì)菌及內(nèi)毒素的不斷入侵，T淋巴細(xì)胞在受到外來抗原刺激后被激活，當(dāng)出現(xiàn)異常的活化信號(hào)或非特異性的損傷時(shí)可導(dǎo)致淋巴細(xì)胞的凋亡。不僅出現(xiàn)非成熟淋巴細(xì)胞凋亡，成熟淋巴細(xì)胞也出現(xiàn)明顯的凋亡；在脾臟和淋巴結(jié)內(nèi)細(xì)胞凋亡1796.01±513.231684.96±453.767204.23±1801.52'&5847.61±1161.075047.69±1061.04《&3874.66±1083.443545.67±872.25※*&3040.29±888.49※的發(fā)生不如胸腺中明顯。但是大鼠成年后胸腺開始萎縮，在免疫過程中的作用就遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如脾臟的功能重要，雖然淋巴細(xì)胞對(duì)外界的刺激異常敏感是細(xì)胞自身的一種保護(hù)機(jī)制，但是未成熟T淋巴細(xì)胞大量凋亡將引起釋放至外周淋巴器官中的成熟淋巴細(xì)胞減少，繼而直接和間接損害免疫功能，最終將導(dǎo)致免疫抑制，這種抑制以T淋巴細(xì)胞功能抑制尤為突出。另一方面膿毒癥時(shí)淋巴細(xì)胞凋亡增加代表機(jī)體免疫系統(tǒng)的一種代償，以抑制早期失控的炎癥反應(yīng)，以提高機(jī)體的生存率。細(xì)胞凋亡是平衡炎癥反應(yīng)和抗炎過程之間的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。常見得檢測部位為胸腺，淋巴結(jié)，骨髓與脾臟，大量的基因可能與PCD(程序性細(xì)胞凋亡)的發(fā)生有關(guān)，如c-fos、c-myc、TGF-e、p-53、bcl-2、apt-4、apt-5、nuc-l、ced-2、ced-3、egl-l等，它們促進(jìn)或抑制PCD的發(fā)生，但只有少部分被確定為PCD所需，如p53、cmyc的表達(dá)可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，bcl2則可抑制凋亡的發(fā)生，caspase3屬于胱氨酸一天冬氨酸蛋白酶家族，在凋亡執(zhí)行階段起中心作用。目前己鑒定出人體內(nèi)的Caspase有12種，按序列同源性及功能可分為3組①細(xì)胞因子處理組Caspasel、4、5、13、14;②凋亡起始組Caspase2、8、9、10;③凋亡效應(yīng)組Caspase3、6、7。Caspase3(CPP32)是該家族成員中最重要的凋亡執(zhí)行者，Caspase3廣泛分布于各種類型的細(xì)胞中，在細(xì)胞內(nèi)以無活性的前體(酶原)形式存在，被激活后裂解產(chǎn)生17kD的活性亞單位(pl7)方能發(fā)揮作用。從實(shí)驗(yàn)中我們可以看出模型組的Caspase3表達(dá)明顯升高，說明淋巴細(xì)胞凋亡明顯增加，在24小時(shí)達(dá)到高峰，72小時(shí)有所下降，但模型組在72小時(shí)內(nèi)中保持較高的細(xì)胞凋亡，明顯高于其他各組；利復(fù)星組表達(dá)也較高，但明顯低于模型組，明顯高于中藥復(fù)方組。膿毒癥患者尸檢研究顯示，許多參與獲得性免疫反應(yīng)的炎癥細(xì)胞凋亡增加。CD8+T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)雖并未發(fā)生凋亡增加，但是，膿毒癥明顯減少B細(xì)胞、CD4+細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的數(shù)目。B淋巴細(xì)胞、CD4T細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的數(shù)目減少會(huì)分別削弱抗體的產(chǎn)生、巨噬細(xì)胞的激活和抗原的遞呈能力，從而減弱機(jī)體抗感染能力。Hotchkiss等研究19例膿毒癥患者中有15例外周血淋巴細(xì)胞絕對(duì)值小于正常的下限，這說明淋巴細(xì)胞凋亡增加。而阻止淋巴細(xì)胞凋亡可以降低膿毒癥小鼠的死亡率。Oberholzec等通過基因轉(zhuǎn)染技術(shù)抑制小鼠胸腺淋巴細(xì)胞的凋亡可以明顯減少菌血癥的發(fā)生，并可以提高膿毒癥小鼠的存活率。故而我們檢測脾臟淋巴細(xì)胞的Caspase3表達(dá)，早期凋亡本身可能也是對(duì)炎癥反應(yīng)的一種保護(hù)機(jī)制，但是過度的凋亡必將引起免疫細(xì)胞大量的減少，使免疫反應(yīng)處于一種麻痹狀態(tài)，免疫平衡失衡，促進(jìn)了膿毒癥向膿毒癥休克及多器官功能不全的方向發(fā)展。抑制過度的凋亡，必能增加淋巴細(xì)胞的增殖，該實(shí)驗(yàn)提示中藥能明顯減輕免疫細(xì)胞的凋亡。這種機(jī)制是明顯降低Caspase3的陽性指數(shù)的表達(dá)。權(quán)利要求1.一種治療多臟器功能不全綜合征時(shí)血瘀癥的中藥組合物，其特征在于由下述重量份數(shù)的原料經(jīng)提取制成黃芪80—120份丹參40—60份川芎10—20份赤芍10—20份紅花10—20份當(dāng)歸10—20份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療多臟器功能不全綜合征時(shí)血瘀癥的中藥組合物，其特征在于所述原料的重量份數(shù)為-黃芪100份丹參50份川芎15份赤芍15份紅花15份當(dāng)歸15份。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療多臟器功能不全綜合征時(shí)血瘀癥的中藥組合物，其特征在于所述原料的重量份數(shù)為-黃芪120份丹參60份川芎12份赤芍20份紅花20份當(dāng)歸12份。4.一種治療多臟器功能不全綜合征時(shí)血瘀癥的中藥制劑，由權(quán)利要求1至3中任何一項(xiàng)所述的中藥組合物和藥劑學(xué)可接受的輔料制成。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種治療多臟器功能不全綜合征時(shí)血瘀癥的中藥制劑，其特征在于所述中藥制劑為湯劑、口服液、散劑、丸劑、普通片劑、普通膠囊、顆粒劑、緩釋片劑、舌下含片、口腔速崩片、分散片、腸溶片、腸溶膠囊、延遲釋放片、定時(shí)/位釋放片、緩釋膠囊、控釋膠囊、含有微丸或小片的膠囊、含有微丸或小片的pH依賴型膠囊、顆粒劑、口服液、膜劑或貼劑。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種治療多臟器功能不全綜合征時(shí)血瘀癥的中藥制劑，其特征在于所述藥劑學(xué)可接受的輔料選自淀粉、微晶纖維素、無機(jī)鹽類、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化鈉、半胱氨酸、硬脂酸鎂、檸檬酸和亞硫酸鈉等的一種或幾種物質(zhì)的組合物。7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種治療多臟器功能不全綜合征時(shí)血瘀癥的中藥制劑，其特征在于所述制劑為顆粒劑，按照下述方法制得處方量的黃芪、丹參、赤芍、紅花加8—10倍量水煎煮二次，每次1一2小時(shí)，合并濾液，濾過；川芎、當(dāng)歸用5—8倍量70_卯％乙醇加熱回流提取二次，每次1一2小時(shí)，合并醇提，回收乙醇得藥液，與水煎液合并，濃縮至相對(duì)密度1.12-1.16(55°C)的藥液，噴霧干燥，粉碎成干浸膏粉，加入適量硬脂酸鎂和糊精，混合均勻，干法制成顆粒。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種治療多臟器功能不全綜合征時(shí)血瘀癥的中藥制劑，其特征在于按照下述方法制得處方量的黃芪、丹參、赤芍、紅花加10倍、8倍量水煎煮二次，每次1一2小時(shí)，合并濾液，濾過；川芎、當(dāng)歸用6倍量80%乙醇加熱回流提取二次，每次1—2小時(shí)，合并醇提，回收乙醇得藥液，與水煎液合并，濃縮至相對(duì)密度1.12-1.16(55°C)的藥液，噴霧干燥，粉碎成干浸膏粉，加入適量硬脂酸鎂和糊精，混合均勻，干法制成顆粒。全文摘要本發(fā)明涉及一種治療多臟器功能不全綜合征時(shí)血瘀癥的中藥組合物及其制劑，屬于中醫(yī)藥領(lǐng)域。一種治療多臟器功能不全的中藥組合物，由下述重量份數(shù)的原料經(jīng)提取制成黃芪80-120份，丹參40-60份，川芎10-20份，赤芍10-20份，紅花10-20份，當(dāng)歸10-20份。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明為常年臨床實(shí)踐總結(jié)出的經(jīng)驗(yàn)方。該方中無劇毒藥物，無配伍禁忌，使用量均在藥典規(guī)定范圍內(nèi)。長期臨床應(yīng)用未發(fā)現(xiàn)毒副反應(yīng)，該方制劑經(jīng)動(dòng)物劑型毒性試驗(yàn)未見毒性反應(yīng)。多年來，在治療MODS及MSOF時(shí)，明顯提高療效，減少了死亡率。文檔編號(hào)A61K36/185GK101396441SQ20071012253公開日2009年4月1日申請(qǐng)日期2007年9月26日優(yōu)先權(quán)日2007年9月26日發(fā)明者張淑文,王寶恩申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院