專利名稱：從羅漢果植株中提取降血糖和抗糖尿病的活性組合物及其提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從天然物質(zhì)提取生物活性成分，具體而言涉及從羅漢果植林 提取降血糖和抗糖尿病活性物質(zhì)及方法。
背景技術(shù)：
羅漢果植抹為葫,科多年生宿根攀援藤本植物羅漢果(#OM i^/ CS
^TWM/7or/),羅漢果主要栽培在中國的廣西北部，在華南、貴州、江西以 及其它許多地區(qū)都有分布，已有300多年的種植、應(yīng)用歷史，其果有"東方 神果"之稱。中醫(yī)藥學(xué)認(rèn)為，羅漢果具有降血糖作用，可以用來輔助治療糖 尿??；含豐富的維生素C,有抗衰老、抗癌及益膚美容作用；有降血脂及減 肥作用，可輔助治療高脂血癥，改善肥胖者的形象。對羅漢果果實(shí)的生物活 性研究報(bào)道中有關(guān)羅漢果苷V具有抗口腔微生物的活性，另有羅漢果苷的抗 腫瘤活性和有降血糖作用的文獻(xiàn)報(bào)道。羅漢果的果實(shí)通常是在秋末進(jìn)行采 摘，與此同時(shí)，羅漢果植抹的藤就被欲掉，葉被丟棄，其根仍埋在土里。迄 今為止，人們對于羅漢果的利用基本上只利用了其果實(shí)，例如中國專利申請 件200510055228.1號"一種添加了羅漢果提取物的甜味劑及其制備方法" 和200410103484. 9號"羅漢果袋泡茶"，而對羅漢果植林的非果實(shí)部分幾 乎沒有多少研究，其葉和藤也從未加以利用，對于其植抹非果實(shí)部分的生物 活性人們知之甚少，也沒有人從其中獲得任何有活性的提取物。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供從羅漢果植林提取的具有降血糖和抗糖尿病活 性組合物。
本發(fā)明的另 一 目的是提供從羅漢果植抹提取具有降血糖和抗糖尿病活 性天然組合物的提取方法。
迄今為止，在對羅漢果的研究中，非果實(shí)部分及果實(shí)的具有降血糖作用 活性成分的研究尚屬于創(chuàng)新型的研究。發(fā)明人率先通過研究發(fā)現(xiàn)了羅漢果中 具有激發(fā)胰島素分泌、降血糖和抗糖尿病活性有效組分，從羅漢果全植抹， 即葉、藤、根、莖和果實(shí)中分離得到了具有很強(qiáng)的i膚胰島素分泌活性的有 效組分。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，上述活性組分不只是存在于人們已知的羅漢果香中， 而且還存在于羅漢果葉、藤、根、和莖中，活性在羅漢果葉、藤、根、莖和 果實(shí)提取物的中等極性部分，所述的活性主要表現(xiàn)在激發(fā)胰島素分泌而降低 血糖，提取的活性組分可用于藥物及功能性食品和飲料、保健品、日用品及 食品添加劑等，將會(huì)有很大的實(shí)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
為了將這一發(fā)現(xiàn)造福于人類，發(fā)明人對從羅漢果植株提取激發(fā)胰島素分 泌活性成分的方法進(jìn)行了探索。經(jīng)過反復(fù)研究、試驗(yàn)，發(fā)明人提供的從羅漢 果植林提取的具有降血糖和抗糖尿病活性組合物是從羅漢果全植抹中提取、 分離、純化具有降血糖和抗糖尿病活性天然組合物。
發(fā)明人提供的提取活性天然組合物的具體方法包括以下第一步或第一
步和第二步
①將事先曬干的羅漢果植林的各個(gè)部分，即葉、藤、根、莖和果實(shí)分 別或一起進(jìn)行機(jī)械粉碎得到粗粉，或?qū)⑿迈r的羅漢果植抹的葉、藤、根、莖 和果實(shí)分別或一起壓碎得到濕的碎塊，用清水或水溶性有機(jī)溶劑的水溶液浸 泡所述粗粉和碎塊，在室溫提取或加熱提取，得到粗提取液，過濾并干燥得到粗提物，此粗提物即具有所述的活性；
②以中等極性溶劑對粗提取液進(jìn)行萃取以除去雜質(zhì)，水層干燥即得到 具有以上所述的活性的組合物；或?qū)⒋痔崛∫哼^濾，濾液在室溫下通過大孔 吸附樹脂以層析方法進(jìn)行分離，大孔吸附樹脂柱在經(jīng)水洗去未吸附的物質(zhì)后 用乙醇水溶液洗脫，分別收集從40%乙醇水溶液到100%乙醇水溶液的洗脫 液，即得到所需的活性部分；
上述用來進(jìn)行分離的大孔吸附樹脂和硅膠包括市售的各種孔徑和型號 的樹脂和硅膠，如Amberlite XAD系列及山東魯抗醫(yī)藥股份有限/>司的DM 系列的大孔吸附樹脂等。
上述第 一步中所使用的水溶性有機(jī)溶劑主要選自含碳數(shù)介于1 ~ 8的醇 類、烷類及酯類，常用的是乙醇或曱醇，其水溶液濃度為任意濃度。
上述第二步中所用的溶劑為中等極性溶劑，常用的是乙酸乙酯；所用的 乙醇水溶液濃度為任意濃度。
發(fā)明人對活性組合物的降血糖和抗糖尿病活性進(jìn)行過驗(yàn)證試驗(yàn)即取5 ia 1羅漢果植抹各部分的活性提取物溶液力口入200 ja 1的胰島細(xì)胞培養(yǎng)液中， 使其終濃度為5 mg/ml，于37。C培養(yǎng)lh,將此培養(yǎng)液稀釋1: 10;取50ial 稀釋過的培養(yǎng)液檢驗(yàn)胰島素分泌濃度；計(jì)算胰島素濃度與對照對比計(jì)算胰島 素分泌濃度，濃度5 mg/ml的提取物能激發(fā)50多倍胰島素分泌，結(jié)果表明 羅漢果植抹的提取物具有很好的激發(fā)胰島素分泌活性。
本發(fā)明的從羅漢果植抹中提取的降血糖和抗糖尿病活性組合物及其提 取方法，首次發(fā)現(xiàn)并提供了從羅漢果葉，藤，根，莖和果實(shí)中提取、分離、 純化具有激發(fā)胰島素分泌活性的天然組合物，提供的方法是從實(shí)驗(yàn)室到工業(yè) 化規(guī)模的提取技術(shù)。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了將廢棄的羅漢果的葉、莖、藤、根用來制備降血糖和抗糖尿病的提取物，并為其應(yīng)用于制備抗糖尿病相關(guān)的產(chǎn)品，如 藥物、功能性食品、飲料、保健品、日用品及食品添加劑等創(chuàng)造了條件，將 會(huì)有很大的實(shí)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 100g羅漢果葉研磨粉碎后在500ml水中煮沸30min進(jìn)行提 取，此過程重復(fù)3次；將提取液過濾得到濾液約1G00ml;濾液干燥得到7g 具有活性的粗提物，此粗提物具有一定的激發(fā)胰島素分泌及降血糖的活性。
實(shí)施例2 100g羅漢果葉研磨粉碎后在500ml水中煮沸30min進(jìn)行提 取，此過程重復(fù)3次；將提取液過濾得到濾液約1000ml，濾液通過100ml 已進(jìn)行過水平衡的非極性的Amberlite XAD柱；用1000ml水洗以移去未吸 附的物質(zhì)；分別再用乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫；40%到IO(W的洗脫液中含有 激發(fā)胰島素分泌的活性物質(zhì)，收集該部分洗脫液，干燥得到2. 5g的活性提 取物。
實(shí)施例3取50g羅漢果葉研磨粉碎后在250ml水中煮沸30min進(jìn)4亍才是 取，提取重復(fù)3次；將提取液過濾得到濾液約500ml;濃縮濾液，用乙酸乙酯 進(jìn)行30min以上的萃取，重復(fù)3次，得到有機(jī)層和水層；將水層萃取重復(fù)3 次，分離有機(jī)層和水層；合并水層，將其通過50min已進(jìn)行過水平衡的非極 性的Amberlite XAD離子交換柱；用500min水洗以移去未p及附的物質(zhì)；分 別再用乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫；40%到100%的洗脫液中含有激發(fā)胰島素分 泌的活性物質(zhì)，收集該部分洗脫液，干燥得到1. 2g的活性提取物。
實(shí)施例4 取100g羅漢果果實(shí)研磨粉碎后在500ml水中煮沸30min進(jìn) 行提取，此過程重復(fù)3次；將提取液過濾得到濾液約1000ml;濾液通過100ml已進(jìn)行過水平衡的非極性的Amberlite XAD柱；用1000ml水洗以移去未吸 附的物質(zhì)；分別再用乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫；40%到100%的洗脫液中含有 激發(fā)胰島素分泌的活性物質(zhì)，收集該部分洗脫液，干燥得到2. lg的活性提 取物。
實(shí)施例5取50g羅漢果莖研磨粉碎后在250ml水中煮沸30min進(jìn)行提 取，此過程重復(fù)3次；將提取液過濾得到濾液約500ml;濾液通過50ml已進(jìn) 行過水平衡的非極性的Amberlite XAD柱；用500ml水洗以移去未吸附的物 質(zhì)；分別再用乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫；40%到100%的洗脫液中含有激發(fā)胰 島素分泌的活性物質(zhì)，收集該部分洗脫液，干燥得到'1.25g的活性提取物。
實(shí)施例6取50g羅漢果根研磨粉碎后在250ml水中煮沸30min進(jìn)行提 取，此過程重復(fù)3次；將提取液過濾得到濾液約500ml;濾液通過50ml已進(jìn) 行過水平衡的非極性的Amberlite XAD離子交換柱；用500ml水洗以移去未 吸附的物質(zhì)；分別再用乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫；40%到100°/。的洗脫液中含 有激發(fā)胰島素分泌的活性物質(zhì)，收集該部分洗脫液，干燥得到1.25g的活性 提取物。
實(shí)施例7取50g羅漢果葉研磨粉碎后在250ml水中煮沸30min進(jìn)行提 取，此過程重復(fù)3次；將提取液過濾得到濾液約500ml;'濃縮濾液，用中等極 性溶劑乙酸乙酯進(jìn)行30min以上的萃取，重復(fù)3次，得到有機(jī)層和水層；將 水層萃取重復(fù)3次，分離有機(jī)層和水層；合并水層，干燥得到所需活性組合 物。
實(shí)施例8取50g羅漢果莖研磨粉碎后在250ml水中煮沸30min進(jìn)行提 取，此過程重復(fù)3次；將提取液過濾得到濾液約500ml;濃縮濾液，用中等極性溶劑乙酸乙酯進(jìn)行30min以上的萃取，重復(fù)3次，得到有機(jī)層和水層；將 水層萃取重復(fù)3次，分離有機(jī)層和水層；合并水層，將其干燥得到所需活性 組合物。
實(shí)施例9取市售的25g羅漢果提取物粉末在250ml水中溶解；將提取 液過濾并通過50ml已進(jìn)行過水平衡的非極性的Amber lite XAD離子交換柱； 用500ml水洗以移去未吸附的物質(zhì)；分別再用乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫；40% 到100°/ 的洗脫液中含有激發(fā)胰島素分泌的活性物質(zhì)，收集該部分洗脫液，干 燥得到20g的活性提取物。
實(shí)施例IO取市售的25g羅漢果提取物粉末在250ml水中溶解，用中等 極性溶劑乙酸乙酯進(jìn)行30min以上的萃取，重復(fù)3次，得到有機(jī)層和水層； 將水層萃取重復(fù)3次，分離有機(jī)層和水層；合并水層，將其干燥得到所需活 性組合物。
權(quán)利要求
1從羅漢果植株提取的具有降血糖和抗糖尿病的活性組合物，其特征在于該活性組合物是從羅漢果全植株中提取、分離、純化具有降血糖和抗糖尿病活性的天然組合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的活性組合物的提取方法，其特征包括以下第 一步或第一步和第二步① 將事先曬干的羅漢果植抹的各個(gè)部分，即葉、藤、根、莖和果實(shí)分別 或一起進(jìn)行機(jī)械粉碎得到粗粉，或?qū)⑿迈r的羅漢果植抹的葉、藤、根、莖和 果實(shí)分別或一起壓碎得到濕的碎塊，用清水或水溶性有機(jī)溶劑浸泡所述粗粉 和碎塊，室溫提取或加熱提取，得到粗提取液，過濾并干燥得到具有活性的 粗提物；② 以中等極性溶劑對粗提取液進(jìn)行萃取以除去雜質(zhì)，水層干燥即得到 具有以上所述的活性組合物；或?qū)⑻崛』旌衔镞^濾，濾液在室溫下通過大孔 吸附樹脂以層析方法進(jìn)行分離，大孔吸附樹脂柱在經(jīng)水洗去未吸附的物質(zhì)后 用乙醇水溶液洗脫，收集40%到100%乙醇水溶液的洗脫液，即得到所需的活 性組合物。
3,按照權(quán)利要求2所述的提取方法，其特征在于用來進(jìn)行分離的大孔 吸附樹脂和硅膠包括市售的各種孔徑和型號的樹脂和硅膠，即Amberlite XAD系列或山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司的DM系列的大孔吸附樹脂。
4.按照權(quán)利要求2所述的提取方法，其特征在于上所述第一步中所使 用的水溶性有機(jī)溶劑主要選自含碳數(shù)介于1~8的醇類、烷類及酯類，常用 的是乙醇或曱醇，其水溶液濃度為任意濃度。
5.按照權(quán)利要求2所述的提取方法，其特征在于所述第二步中所用溶 劑為中等極性溶劑，常用的是乙酸乙酯；所用的乙醇水溶液濃度為任意濃度。
全文摘要
本發(fā)明公開了從羅漢果植株中提取的降血糖和抗糖尿病活性組合物及其提取方法，該活性組合物是從羅漢果全植株中提取、分離、純化具有降血糖和抗糖尿病活性的天然組合物；提取方法包括以下一步或兩步將干的羅漢果植株粉碎得到粗粉，或?qū)⑿迈r植株壓碎得到濕的碎塊，用水或水溶性有機(jī)溶劑浸泡，室溫提取或加熱提取，得到粗提取液，過濾并干燥得到活性粗提物；以中等極性溶劑萃取粗提取液，干燥即得到具有以上所述的活性組合物；或?qū)⒋痔崛∫哼^濾，濾液通過大孔吸附樹脂層析分離，經(jīng)水洗后用乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，即得到活性組合物。本方法首次提供了從羅漢果植株中提取、分離、純化具有生物活性的組合物，其應(yīng)用將有很大的實(shí)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)意義。
文檔編號A61P3/10GK101297852SQ200710077750
公開日2008年11月5日 申請日期2007年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月30日
發(fā)明者英 周, 黃赤夫 申請人:英 周