專利名稱：：一種葛根芩連藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體涉及中藥組合物，特別是葛根芩連藥物組合物。
背景技術(shù)：
：葛根芩連湯出自《傷寒論，太陽篇》，為醫(yī)圣張仲景名方，由葛根24g、黃芩9g、黃連9g、甘草6g水煎而成，有解表清里，升清止利之功效，主要用于治療"協(xié)熱下利"癥，對菌痢、急性腸炎及小兒病毒性腹瀉等有良好療效。2005版藥典收載該方的制劑有葛根芩連片、微丸，但這些制劑直接以原藥材粉末或藥材的粗提取物、浸膏等制成，提取工藝簡單，方中各有效成分含量低，質(zhì)量難以控制，不能保證療效穩(wěn)定。國知局2006年10月25日公開了一項"葛根芩連湯的制備方法"的發(fā)明專利申請(申請?zhí)枮?00610038718.5)，該申請公開了一種制備葛根芩連湯的方法，該方法具體是以水為溶劑，將葛根、黃芩、甘草合煎、黃連單煎，噴霧干燥后按比例混合。用該方法制備葛根芩連湯，藥材中的葛根素、黃芩苷和小檗堿的轉(zhuǎn)移率達(dá)到65%以上，但是該方法對藥材仍采用粗提方法，所得提取物中含有較多雜質(zhì)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種高含量的葛根芩連藥物組合物，以便于控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證療效穩(wěn)定。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案是一種葛根吝連藥物組合物，其特征在于該組合物的有效成份由以下重量配比的提取物組成葛根提取物4086份、黃芩提取物3565份、黃連提取物1536份、甘草提取物1020份；所述四種提取物中分別含有如下重量百分比的活性成分葛根提取物中含有葛根總異黃酮4085%，黃芩提取物中含有黃芩總黃酮6090%，黃連提取物中黃連總生物堿5085%，甘草提取物中含有甘草酸1230%;所述四種提取物由下列方法制得(1)將葛根、黃芩、黃連三味藥材用水煎煮法，乙醇回流法、超聲波法或滲漉法分別提取得到葛根粗提物、黃芩粗提物和黃連粗提物，將甘草以稀氨水為溶媒用回流法、超聲波法提取得到甘草粗提物(2)將步驟(1)所得葛根粗提物用大孔樹脂法或萃取法精制，黃芩粗提物用酸沉淀法或大孔樹脂法精制，黃連粗提物用酸沉淀法或鹽析法精制，甘草粗提物用酸沉淀法或大孔樹脂法精制，即得。本發(fā)明所述的葛根芩連藥物組合物的有效成分的制備方法由下列步驟組成-(1)將葛根、黃芩、黃連三味藥材用水煎煮法，乙醇回流法、超聲波法或滲漉法分別提取得到葛根粗提物、黃芩粗提物和黃連粗提物，將甘草以稀氨水為溶媒用回流法、超聲波法提取得到甘草粗提物；(2)將步驟(1)所得葛根粗提物用大孔樹脂法或萃取法精制，黃苳粗提物用酸沉淀法或大孔樹脂法精制，黃連粗提物用酸沉淀法或鹽析法精制，甘草粗提物用酸沉淀法或大孔樹脂法精制；(3)將步驟(2)精制后的提取物按比例混合即可。上述方法中，所用的提取方法和精制方法均為本領(lǐng)域公知的方法，具體是所述的煎煮法具體是加612倍量水，煎煮藥材0.51.5h，濾過，再加入410倍量水煎煮0.51.5h，濾過，合并兩次濾液。所述的回流提取法具體將藥材分別以612倍量和410倍量40%95%乙醇或0.51.0%稀氨水回流提取2次，每次l3h，濾過，濾液減壓回收溶劑。所述的滲漉法具體是將藥材粉碎成粗粉，加等量40%95%乙醇靜置24小時，裝入滲漉器，加溶劑至浸沒藥材，加蓋放置2448小時，加38倍體積的溶劑滲漉，收集滲漉液，減壓回收乙醇，即得。所述的超聲提取法具體是在藥材中加入610倍的水或40%95%乙醇或0.5~1.0%稀氨水，超聲提取l2h,濾過，再加入48倍量的水或40%95%乙醇或0.51.0%稀氨水超聲提取l2h，濾過，合并兩次濾液。所述的大孔樹脂吸附法具體是將各藥材粗提取液通過濃縮或加水稀釋調(diào)整濃度為0.0150.2g藥材/ml，按比吸附量0.251.08/1111(藥材重量/樹脂體積)通過大孔樹脂，先以35倍去離子水洗脫，再以37倍柱體積的30%95%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，干燥，即得。所述的萃取法具體是將藥材提取液加水稀釋至一定濃度，加入一定體積乙酸乙酯萃取，收集上層萃取液，減壓回收溶劑，干燥，即得。所述的酸沉淀法具體是取各藥材粗提取溶液，濃縮，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至12，靜置1224小時，濾過或離心分離得沉淀，干燥，即得。所述的鹽析法具體是取各藥材粗提取物溶液，濃縮，加入NaCl至含量為510X，室溫下靜置1224小時，過濾或離心分離得沉淀，干燥，即得。本發(fā)明所述的四種提取物中活性成分含量的測定方法如下所述1、葛根總異黃酮對照品溶液的制備取葛根素對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每lml含10ixg的溶液。供試品溶液的制備精密稱取葛根提取物0.05g，置于100ml容量瓶中，加乙醇適量，超聲30min，放至室溫，加乙醇稀釋至100ml，搖勻，精密吸取lml，加乙醇稀釋至25ml。測定法采用紫外分光光度法，以乙醇為空白，測定對照品溶液和供試品溶液在250nm處的吸光度，根據(jù)吸光度計算葛根總異黃酮的含量。2、黃芩總黃酮對照品溶液的制備取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每lml含10ug的溶液。供試品溶液的制備精密稱取黃芩提取物0.02g至100ml容量瓶中，加乙醇適量，7(TC水浴10min，超聲30min，放至室溫，加乙醇稀釋至lOOml，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液5ml至50ml容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻。測定法采用紫外分光光度法，以乙醇為空白，測定對照品溶液和供試品溶液在280nm處的吸光度，根據(jù)吸光度計算黃萃總黃酮的含量。3、黃連總生物堿對照品溶液的制備取鹽酸小檗堿對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每lml含10yg的溶液。供試品溶液的制備精密稱取黃連提取物O.Olg，置于100ml容量瓶中，加乙醇適量，70。C水浴10min，超聲30min，放至室溫，加乙醇稀釋至100ml，搖勻，精密吸取lml，加乙醇稀釋至25ml。測定法采用紫外分光光度法，以乙醇為空白，測定對照品溶液和供試品溶液在350nm處的吸光度，根據(jù)吸光度計算黃連總生物堿的含量。4、甘草酸色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇0.02mol/L乙酸銨冰醋酸(66:33:l)為流動相；檢測波長254nm;理論塔板數(shù)按甘草酸銨峰計算應(yīng)不低于3000。對照品溶液的制備取甘草酸銨對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含50ng甘草酸銨的溶液。供試品溶液的制備精密取甘草提取物0.02g,置于100ml容量瓶中，加甲醇適量，70'C水浴10min，超聲30min，放至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液lral至10ml容量瓶中，加甲醇定容。測定法分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各IOHI，注入液相色譜儀，注入液相色譜儀，測定，計算甘草酸含量。本發(fā)明組合物是治療菌痢、急性腸炎及小兒病毒性腹瀉的口服制劑，如普通片劑、硬膠囊劑、顆粒劑、微丸、分散片、散劑、軟膠囊。本發(fā)明組合物是將傳統(tǒng)藥方葛根芩連湯中的每一味藥材分別提取，根據(jù)不同藥材的有效部位的性質(zhì)采用不同的方法提取并精制，除去了大量的雜質(zhì)，所得到的有效部位——葛根總異黃酮、黃芩總黃酮、黃連總生物堿及甘草酸的含量大大提高，再進(jìn)一步按照合理的配比混合，制成制劑，其質(zhì)量易于控制，療效穩(wěn)定。下面將通過動物實驗來證明本發(fā)明的優(yōu)點。l.抗腹瀉試驗取SPF級昆明小鼠，1822克，雌雄各半，隨機分5組模型對照組(空白對照組)、黃連素(陽性對照組)、葛根芩連微丸對照組(每克微丸相當(dāng)于7克藥材，由廣西花紅藥業(yè)有限公司生產(chǎn))、本發(fā)明組合物取制備例2所述的組合物(每克組合物相當(dāng)20g的藥材)和本制備例6所述的組合物(每克組合物相當(dāng)13g的藥材)動物禁食不禁水12小時后，各組灌胃蓖麻油0.1ml/10g，0.5h后灌胃給藥。將動物扣在小鼠籠蓋上的燒杯下，內(nèi)墊有濾紙，連續(xù)觀察3小時，按周干南的方法，統(tǒng)計每只小鼠的總便數(shù)、稀便數(shù)。并按照周氏法計算腹瀉指數(shù)(DI):稀便率與稀便級的乘積。稀便級的標(biāo)準(zhǔn)如下級數(shù)1234污跡直徑<lcm1-1.9cm2-3cm>3cm統(tǒng)計指標(biāo)的確定糞便次數(shù)以每?；蛎慷?不能分清粒數(shù)者一次)。干便與稀便的區(qū)分以濾紙上有無污跡為標(biāo)準(zhǔn)。級數(shù)直徑的測量圓形者測其直徑，橢圓形或不規(guī)則形測其最長和近似圓的直徑，兩者取平均數(shù)。以腹瀉指數(shù)為考察指標(biāo)，統(tǒng)計方法按照SPSS11.0軟件處理，采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析。表l本發(fā)明提取物對動物腹瀉指數(shù)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注:*，與模型相比，P<0.01結(jié)論給藥l小時后，黃連素組、微丸組、制備例2組合物腹瀉指數(shù)與模型組相比，差異有顯著性意義。說明制備例2組合物能夠降低腹瀉動物的腹瀉指數(shù)；給藥2小時后黃連素組、微丸組、制備例2和制備例6組合物腹瀉指數(shù)與模型組相比，差異有顯著性意義，說明本發(fā)明提組合物能夠降低腹瀉動物的腹瀉指數(shù)；給藥3小時后微丸組的腹瀉指數(shù)與模型組相比則差異無顯著性意義。說明給藥3小時后微丸不能減少腹瀉動物的腹瀉指數(shù)。而黃連素組、制備例2組合物組的腹瀉指數(shù)與模型組相比，差異有顯著性意義，說明制備例2所述的組合物3小時后還能夠降低腹瀉動物的腹瀉指數(shù)。2.小腸推進(jìn)運動實驗1822g的SPF昆明小鼠，18-22克，雌雄各半，隨機分為5組正常對照組、復(fù)方地芬諾酯陽性對照組、葛根芩連微丸對照組、本發(fā)明藥物組合物組(分為2組，分別用制備例2和制備例6所述的藥物組合物給藥)。動物禁食不禁水12小時后，各組均灌胃給藥l次，給藥后111每只動物灌胃4%活性炭羧甲基纖維素0.21111/只，20分鐘后脫頸椎處死，開腹分離腸系膜，剪取上端至幽門下端至回盲部的腸管，置于托盤上，輕輕將腸管拉直，用水沖洗。測量總長度，將幽門至活性炭前沿的距離作為活性炭在小腸內(nèi)推進(jìn)距離，按照推進(jìn)率=小腸推進(jìn)距離/小腸總長度計算。以推進(jìn)率為指標(biāo)考察，統(tǒng)計方法按照SPSS11.0軟件處理，釆用單因素方差分析方法。_表2本發(fā)明藥物組合物對正常動物小腸推進(jìn)運動的影響_<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>結(jié)論復(fù)方地芬諾酯組、葛根芩連微丸組、本發(fā)明藥物組合物組的小腸推進(jìn)率與正常組相比差異有顯著性意義，說明本發(fā)明藥物組合物能夠減少正常動物小腸的推進(jìn)率。3.對新斯的明引起小鼠腸功能推進(jìn)亢進(jìn)的影響SPF昆明小鼠，18-22克，雌雄各半，隨機分為6組正常對照組、模型對照組、復(fù)方地芬諾酯陽性對照組、葛根芩連微丸對照組、本發(fā)明藥物組合物組(分為2組，分別用制備例2和制備例6所述的藥物組合物給藥)。動物禁食不禁水12小時后，各組均灌胃給藥1次，各組動物均皮下注射甲硫酸新斯的明0.15mg/kg，15分鐘后，每只動物灌胃4%活性炭羧甲基纖維素0.21111/只，20分鐘后脫頸椎處死，開腹分離腸系膜，剪取上端至幽門下端至回盲部的腸管，置于托盤上，輕輕將腸管拉直，用水沖洗。測量總長度，將幽門至活性炭前沿的距離作為活性炭在小腸內(nèi)推進(jìn)距離，按照推進(jìn)率=小腸推進(jìn)距離/小腸總長度計算。以推進(jìn)率為指標(biāo)考察，統(tǒng)計方法按照SPSS11.0軟件處理，采用單因素方差分析方法。表3本發(fā)明藥物組合物對新斯的明引起小鼠腸功能推進(jìn)亢進(jìn)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注:*，與模型相比，P<0.01.結(jié)論復(fù)方地芬諾酯組、葛根芩連微丸組、制備例2藥物組合物組、制備例6藥物組合物組小腸推進(jìn)率與模型組相比差異有顯著性意義，說明本發(fā)明制備例2及制備例6藥物組合物能夠抑制新斯的明造成的小腸推進(jìn)功能亢進(jìn)，減少動物小腸的推進(jìn)率。4.解熱實驗SPF大鼠，140-160克，雌。實驗前測量大鼠肛溫，取溫度范圍在36.838.3之間的動物，然后除正常對照組外在其余各組動物頸部以下的背部皮下注射15%的啤酒酵母生理鹽水溶液10ml/kg,正常對照組注射同體積生理鹽水。并且按摩注射部位以利充分吸收。室溫保持在2224'C，注射后即禁食。18小時后再次測量動物的肛溫，體溫低于38'C的不能用于實驗。然后隨機分為6組模型對照組、安乃近陽性組、葛根芩連微丸對照組、本發(fā)明藥物組合物組(分為2組，分別用制備例2和制備例6所述的藥物組合物給藥)。并灌胃給藥，給藥1小時、2小時、3小時、4小時分別測量動物肛溫。以各組動物給藥前后的溫度差為指標(biāo)考察，統(tǒng)計方法按照SPSS11.0軟件處理，采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)的方差分析。表4本發(fā)明藥物組合物對發(fā)熱動物的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注:*，與模型相比，P<0.01.結(jié)論給藥1小時后，安乃近組、微丸組、本發(fā)明藥物組合物組動物體溫升高的度數(shù)與模型組相比有減少的趨勢，但是差異沒有顯著性意義。正常組動物體溫的變化與模型組相比差異有顯著性意義，說明造模成功。給藥2小時后，安乃近組、微丸組、本發(fā)明制備例2藥物組合物組動物體溫升高的度數(shù)與模型組相比減少，差異有顯著性意義。給藥3小時后，安乃近組、微丸組、本發(fā)明制備例2和制備例6藥物組合物組動物體溫升高的度數(shù)與模型組相比減少，差異有顯著性意義。給藥4小時后，安乃近組、微丸組、本發(fā)明制備例2和制備例6藥物組合物組動物體溫升高的度數(shù)與模型組相比減少，差異有顯著性意義，說明本發(fā)明藥物組合物能夠降低發(fā)熱大鼠的體溫。上述動物實驗說明本發(fā)明所述藥物組合物能有效減少動物腹瀉、小腸推進(jìn)，并具有控制體溫升高以及退熱的作用。具體實施方式制備例例1(顆粒劑)取葛根1000g，加6倍量水煎煮0.5h，濾過，再加入4倍量水煎煮0.5h，濾過，合并兩次濾液，濃縮至0.1g藥材/ml，按比吸附量1.0g/ml(藥材重量/樹脂體積)通過D-101大孔樹脂柱，即用1Kg大孔樹脂填充柱。先以3倍柱體積去離子水洗脫，再以3倍柱體積30%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得葛根提取物，其中含58%葛根總異黃酮。取黃芩375g，加6倍量水煎煮lh，濾過，再加入4倍量水煎煮lh，濾過，合并兩次濾液，濾液稀釋至0.04g藥材/ml，按比吸附量0.25g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用1.5Kg大孔樹脂填充柱。以5倍柱體積去離子水洗脫，再用7倍柱體積的70%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得黃芩提取物，其中含77%黃芩總黃酮。取黃連375g，加8倍量水煎煮lh，濾過，再加入6倍量水煎煮lh，濾過，合并兩次濾液，濃縮至原體積的1/3，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至l，加入NaCl至含量為5%(M/V)，靜置12h，離心(3000r/min)，取沉淀，干燥，即得黃連提取物，其中含67%黃連總生物堿。取甘草250g，加入6倍量的0.5%稀氨水超聲提取lh，濾過，再加入4倍量的0.5%稀氨水超聲提取lh，濾過，合并兩次濾液，加10%NaOH溶液調(diào)pH值至7，用適量的水稀釋該濾液至0.015g藥材/ml，按比吸附量0.25g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用1Kg大孔樹脂填充柱。先以5倍柱體積去離子水洗脫，再以7倍柱體積50%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得甘草提取物，其中含24%甘草酸。將上述工藝所制備的葛根提取物75g，黃芩提取物44g,黃連提取物23g，甘草提取物12.5g混合均勻，然后與450g糖粉、395.5g糊精混合均勻，以50%乙醇為粘合劑制顆粒，干燥，整粒，分裝為1000袋，即得。每日服用3袋X3次。例2(膠囊劑)取葛根1000g，加12倍量95%乙醇回流提取lh，濾過，再加入10倍量95%乙醇回流提取lh，濾過，合并兩次濾液，減壓回收溶劑，得流浸膏，加水稀釋至一定濃度，加入2.5倍體積乙酸乙酯萃取兩次，收集上層萃取液，減壓回收溶劑，干燥，即得葛根提取物，其中含40%葛根總異黃酮。取黃芩粗粉375g，以6倍、4倍量60%乙醇回流提取2次，每次2h，濾過，濾液減壓回收乙醇，補足蒸餾水至藥材的15倍量，加稀鹽酸調(diào)pH12，于70'C調(diào)pH1.5~2，保溫30min，靜置，抽濾，沉淀用水洗至pH6.5~7.0，干燥，即得黃芩提取物，其中含60%黃芩總黃酮。取黃連藥材375g以8倍、6倍量50%乙醇回流提取2次，每次3h,濾過，濾液減壓回收乙醇，加稀鹽酸調(diào)pH12，靜置24h，離心(3000r/min)，取沉淀，干燥，即得黃連提取物，其中含50%黃連總生物堿。取甘草粗顆粒250g，以6倍、4倍1.0%稀氨水回流提取2次，每次lh，濾過，合并濾液，加稀鹽酸調(diào)pH12，抽濾，取沉淀，水洗至中性，干燥，即得甘草提取物，其中含12%的甘草酸。將上述工藝所制備的葛根提取物40g，黃芩提取物35g，黃連提取物15g，甘草提取物10g混合均勻，與187.5g乳糖、12.5g交聯(lián)PVP混合均勻，以70%乙醇為粘合劑制顆粒，低于60'C千燥，整粒，裝膠囊1000粒，每日服用3粒X3次。例3(丸劑)取葛根1000g，加10倍量40。/。乙醇超聲提取2.0h,濾過，再加入8倍量40%乙醇超聲提取2肌，濾過，合并兩次濾液，減壓回收溶劑，得流浸膏，加水稀釋至一定濃度，加入2.5倍體積乙酸乙酯萃取兩次，收集上層萃取液，減壓回收溶劑，干燥，即得葛根提取物，其中含53%葛根總異黃酮。取黃芩375g，粉碎得粗粉，加等量95%乙醇浸潤2h，裝滲漉筒中，繼續(xù)添加2倍量95W乙醇加蓋放置24h，收集初漉液，繼續(xù)加3倍體積95%乙醇滲漉，收集滲漉液，合并兩次濾液，回收乙醇，用適當(dāng)水稀釋該濾液至上樣濃度0.04g藥材/ml，按比吸附量0.31g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用1.2Kg大孔樹脂填充柱。以5倍柱體積去離子水洗脫，再用3倍柱體積的95%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得黃芩提取物，其中含84%黃芩總黃酮。取黃連375g，以50%乙醇12倍、10倍量回流提取2次，每次3h，濾過，濾液減壓回收乙醇，加稀鹽酸調(diào)pH12，靜置24h，離心(3000r/min)，取沉淀，干燥，即得黃連提取物，其中含65%黃連總生物堿。取甘草粗顆粒250g，以10倍、8倍量的1.0%稀氨水超聲提取2次，每次2h，濾過，合并濾液，加稀鹽酸調(diào)pH12,抽濾，取沉淀，水洗至中性，干燥，即得甘草提取物，其中含18%的甘草酸。將上述工藝所制備的葛根提取物62g，黃芩提取物60g，黃連提取物26g，甘草提取物20g混合均勻，然后與滑石粉100g,微晶纖維素682g,阿斯巴甜50g，以50%乙醇為粘合劑過24目篩制顆粒，放入制丸機中制丸，干燥，分裝，包裝，得1000袋，即得。每日服用3袋X3次。例4(片劑)取葛根1000g，加12倍量水煎煮1.5h，濾過，再加入10倍量水煎煮1.5h，濾過，合并兩次濾液，濃縮至0.2g藥材/ml,按比吸附量0.3g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用3.3Kg大孔樹脂填充柱。先以5倍柱體積去離子水洗脫，再以7倍柱體積70%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得葛根提取物，其中含85%葛根總異黃酮。取黃芩375g，加12倍量水煎煮1.5h，濾過，再加入8倍量水煎煮1.5h，濾過，合并兩次濾液，用適當(dāng)水稀釋該濾液至上樣濃度0.04g藥材/mL，按比吸附量0.25g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用1.5Kg大孔樹脂填充柱。以5倍柱體積去離子水洗脫，再用7倍柱體積的80°/。乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得黃芩提取物，其中含90%黃芩總黃酮。取黃連375g，加12倍量水煎煮1.5h，濾過，再加入10倍量水煎煮l,5h，濾過，合并兩次濾液，濃縮至原體積的1/3，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至l，加入NaCl至含量為10%(M/V)，靜置24h，濾液離心(3000r/min)，取沉淀，干燥，即得黃連提取物，其中含85%黃連總生物堿。取甘草250g，加入6倍量的0.5%稀氨水超聲提取1.5h，濾過，再加入4倍量的0.5%稀氨水超聲提取1.5h，濾過，合并兩次濾液，加10%NaOH溶液調(diào)pH值至7，用適量的水稀釋該濾液0.02g藥材/ml，按比吸附量0.3g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用1Kg大孔樹脂填充柱。先以5倍柱體積去離子水洗脫，再以7倍柱體積50%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得甘草提取物，其中含28%甘草酸。將上述工藝所制備的葛根提取物86g，黃芩提取物64g，黃連提取物36g，甘草提取物17g混合均勻，然后與222g微晶纖維素，以50%乙醇為粘合劑制顆粒，干燥，整粒，加入25g交聯(lián)CMC-Na，混合均勻，壓片IOOO片，每日服用3片X3次。例5(分散片)取葛根1000g，加8倍量水超聲提取lh，濾過，再加入6倍量水超聲提取lh,濾過，合并兩次濾液，濃縮至0.15g藥材/ml，按比吸附量0.5g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用2Kg大孔樹脂填充柱。先以5倍柱體積去離子水洗脫，再以5倍柱體積70%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得葛根提取物，其中含78%葛根總異黃酮。取黃芩375g，加10倍量水煎煮lh，濾過，再加入8倍量水煎煮，濾過，合并兩次濾液，用適當(dāng)水稀釋該濾液至上樣濃度0.04g藥材/ml,按比吸附量0.25g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用1.5Kg大孔樹脂填充柱。以5倍柱體積去離子水洗脫，再用7倍柱體積的80%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得黃芩提取物，其中含83%黃芩總黃酮。取黃連375g，加10倍量水煎煮lh，濾過，再加入8倍量水煎煮lh，濾過，合并兩次濾液，濃縮至原體積的1/3，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1，加入NaCl至含量為10%(M/V)，靜置24h，溶液離心(3000r/min)，留取沉淀，干燥，即得黃連提取物，其中含73%黃連總生物堿。取甘草250g，加入10倍量的0.5%稀氨水超聲提取lh，濾過，再加入8倍量的0.5M稀氨水超聲提取lh，濾過，合并兩次濾液，加10%NaOH溶液調(diào)pH值至7，用適量的水稀釋該濾液至0.015g藥材/ml，按比吸附量0.258/1111通過D-101大孔樹脂柱，即用1Kg大孔樹脂填充柱。先以5倍柱體積去離子水洗脫，再以7倍柱體積50%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得甘草提取物，其中含30%甘草酸。將上述工藝所制備的葛根提取物82g，黃芩提取物54g,黃連提取物35.5g，甘草提取物20g混合均勻，粉碎成細(xì)粉，與143.5g微晶纖維素、100g交聯(lián)CMC-Na，15g阿斯巴甜混合均勻，以50%乙醇為粘合劑制顆粒，干燥，整粒，壓片IOOO片,每日服用3片X3次。例6(散劑)取葛根1000g，粉碎成粗粉，加等量50M乙醇浸潤4h，裝滲漉筒中，繼續(xù)添加2倍量50^乙醇加蓋放置48h，收集初漉液，繼續(xù)加8倍體積50%乙醇滲漉，收集滲漉液，合并兩次滲漉液，回收乙醇，濃縮至0.15g藥材/ml，按比吸附量0.5g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用1Kg大孔樹脂填充柱。先以5倍柱體積去離子水洗脫，再以5倍柱體積70%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得葛根提取物，其中含82%葛根總異黃酮。取黃芩375g，粉碎成粗粉，加等量70%乙醇浸潤4h，裝滲漉筒中，繼續(xù)添加2倍量70%乙醇加蓋放置24h，收集初漉液，繼續(xù)加2倍體積70%乙醇滲漉，收集滲漉液，合并兩次滲漉液，回收乙醇，向濃縮液中補足蒸餾水至藥材的15倍量，加稀鹽酸調(diào)pH12，于7(TC調(diào)pH1.52，保溫30min，靜置，抽濾，沉淀用水洗至pH6.57.0，干燥，即得黃岑提取物，其中含73%黃芩總黃酮。取黃連375g，加入10倍量的40%乙醇超聲提取lh，濾過，再加入8倍量的40%乙醇超聲提取lh，濾過，合并兩次濾液，減壓濃縮至原體積的1/3，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值K2，加入NaCl至含量為8%(M/V),靜置24h，溶液離心(3000r/min)，取沉淀，干燥，即得黃連提取物，其中含71%黃連總生物堿。取甘草250g，加入10倍量的0.5%稀氨水超聲提取2h，濾過，再加入8倍量的0.5X稀氨水超聲提取2h，濾過，合并兩次濾液，加100/。NaOH溶液調(diào)pH值至7,用適量的水稀釋該濾液至0.015g藥材/ml，按比吸附量0.25g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用1Kg大孔樹脂填充柱。先以5倍柱體積去離子水洗脫，再以7倍柱體積50%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得甘草提取物，其中含25%甘草酸。將上述工藝所制備的葛根提取物65g，黃芩提取物50g,黃連提取物28g，甘草提取物19g混合均勻，粉碎成細(xì)粉，與38g蛋白糖混合均勻，分裝成1000袋，每日服用3袋X3次。例7(軟膠囊)取葛根1000g，粉碎成粗粉，加等量80X乙醇浸潤2h，裝滲漉筒中，繼續(xù)添加2倍量80^乙醇加蓋放置24h，收集初漉液，繼續(xù)加4倍體積80%乙醇滲漉，收集滲漉液，合并兩次滲漉液，回收乙醇，濃縮至0.15g藥材/m1，，按比吸附量0.5g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用2Kg大孔樹脂填充柱。先以5倍柱體積去離子水洗脫，再以6倍柱體積60%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得葛根提取物，其中含76%葛根總異黃酮。取黃萃375g，加入10倍量的50。/。乙醇超聲提取lh，濾過，再加入8倍量的50%乙醇超聲提取lh，濾過，合并兩次濾液，濃縮至原體積的1/3,于70'C調(diào)pH12，保溫30min，靜置，抽濾，沉淀用水洗至pH6.57.0，干燥，即得黃芩提取物，其中含76%黃芩總黃酮。取黃連375g，加入10倍量的50%乙醇超聲提取lh，濾過，再加入8倍量的50%乙醇超聲提取lh，濾過，合并兩次濾液，減壓濃縮至原體積的1/3，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值1~2，加入NaCl至含量為10%(M/V)，靜置24h，溶液離心(3000r/min)，取沉淀，干燥，即得黃連提取物，其中含76%黃連總生物堿。取甘草250g，加入10倍量的0.5X稀氨水超聲提取lh，濾過，再加入8倍量的0.5%稀氨水超聲提取lh，濾過，合并兩次濾液，加10%NaOH溶液調(diào)pH值至7，用適量的水稀釋該濾液至0.015g藥材/ml,，按比吸附量0.25g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用1Kg大孔樹脂填充柱。先以5倍柱體積去離子水洗脫，再以7倍柱體積50%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得甘草提取物，其中含27%甘草酸。將上述工藝所制備的葛根提取物83g，黃芩提取物63g，黃連提取物31g,甘草提取物17.5g混合均勻，粉碎成細(xì)粉，與302gPEG-400混合均勻，分裝成1000粒，每日服用3粒X3次。例8(顆粒劑)取葛根1000g，加8倍量水煎煮1.0h，濾過，再加入6倍量水煎煮l.Oh，濾過，合并兩次濾液，濃縮至0.15g藥材/ml，按比吸附量0.58/加1通過0-101大孔樹脂柱，即用2Kg大孔樹脂填充柱。先以4倍柱體積去離子水洗脫，再以6倍柱體積30%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得葛根提取物，其中含63%葛根總異黃酮。取黃芩375g，加8倍量水煎煮lh，濾過，再加入6倍量水煎煮lh，濾過，合并兩次濾液，濾液稀釋至0.05g藥材/ml，按比吸附量0.30g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用1.3Kg大孔樹脂填充柱。以5倍柱體積去離子水洗脫，再用7倍柱體積的70%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得黃芩提取物，其中含75%黃芩總黃酮。取黃連375g，加8倍量水煎煮lh，濾過，再加入6倍量水煎煮lh，濾過，合并兩次濾液，濃縮至原體積的1/3，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至l，加入NaCl至含量為8%(M/V)，靜置24h，離心(3000r/min),取沉淀，干燥，即得黃連提取物，其中含67%黃連總生物堿。取甘草250g，加入8倍量的0.6%稀氨水超聲提取lh，濾過，再加入6倍量的0.6%稀氨水超聲提取lh，濾過，合并兩次濾液，加1()Q/。NaOH溶液調(diào)pH值至7，用適量的水稀釋該濾液至0.015g藥材/ml，按比吸附量0.25g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用1Kg大孔樹脂填充柱。先以5倍柱體積去離子水洗脫，再以7倍柱體積50%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得甘草提取物，其中含23%甘草酸。將上述工藝所制備的葛根提取物72g,黃芩提取物58g,黃連提取物30g,甘草提取物16g混合均勻，然后與450g糖粉、374g糊精混合均勻，以50%乙醇為粘合劑制顆粒，干燥，整粒，分裝為1000袋，即得。每日服用3袋X3次。例9(丸劑)取葛根1000g,力卩12倍量95%乙醇超聲提取1.5h，濾過，再加入10倍量95%乙醇超聲提取1.5h，濾過，合并兩次濾液，減壓回收溶劑，得流浸膏，加水稀釋至一定濃度，加入2.5倍體積乙酸乙酯萃取兩次，收集上層萃取液，減壓回收溶劑，干燥，即得葛根提取物，其中含55%葛根總異黃酮。取黃芩375g，粉碎得粗粉，加等量70X乙醇浸潤2h，裝滲漉筒中，繼續(xù)添加2倍量70X乙醇加蓋放置3h，收集初漉液，繼續(xù)加2倍體積70%乙醇滲漉，收集滲漉液，合并兩次濾液，回收乙醇，用適當(dāng)水稀釋至上樣濃度0.04g藥材/ml，按比吸附量0.6g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用2JKg大孔樹脂填充柱。以4倍柱體積去離子水洗脫，再用5倍柱體積的70%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得黃芩提取物，其中含86°/。黃芩總黃酮。取黃連375g，以50%乙醇12倍、10倍量回流提取2次，每次2h，濾過，濾液減壓回收乙醇，加稀鹽酸調(diào)pH12，靜置48h，離心(3000r/min),取沉淀，干燥，即得黃連提取物，其中含63%黃連總生物堿。取甘草粗顆粒250g，以12倍、10倍0.5%稀氨水回流提取2次，每次3h，濾過，合并濾液，加稀鹽酸調(diào)pH12,抽濾，取沉淀，水洗至中性，干燥，即得甘草提取物，其中含16%的甘草酸。將上述工藝所制備的葛根提取物51g，黃芩提取物60g，黃連提取物29g，甘草提取物19g混合均勻，然后與滑石粉100g，微晶纖維素691g，阿斯巴甜50g，以50%乙醇為粘合劑過24目篩制顆粒，放入制丸機中制丸，干燥，分裝，包裝，得1000袋，即得。每日服用3袋X3次。例10(片劑)取葛根1000g,加10倍量水超聲提取lh，濾過，再加入8倍量水超聲提取lh，濾過，合并兩次濾液，濃縮至0.15g藥材/ml，按比吸附量0.3g/ml通過D-lOl大孔樹脂柱，即用3.3Kg大孔樹脂填充柱。先以4倍柱體積去離子水洗脫，再以5倍柱體積40%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得葛根提取物，其中含74%葛根總異黃酮。取黃芩375g，加10倍量水煎煮lh，濾過，再加入8倍量水煎煮lh，濾過，合并兩次濾液，用適當(dāng)水稀釋該濾液至上樣濃度0.04g藥材/ml，按比吸附量0.25g/ml通過D-101大孔樹脂柱，即用1.5Kg大孔樹脂填充柱。以5倍柱體積去離子水洗脫，再用7倍柱體積的70%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得黃芩提取物，其中含83%黃芩總黃酮。取黃連375g,加10倍量水煎煮lh，濾過，再加入8倍量水煎煮lh，濾過，合并兩次濾液，濃縮至原體積的1/3，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1，加入NaCl至含量為10%(M/V)，靜置24h，溶液離心(3000r/min)，留取沉淀，干燥，即得黃連提取物，其中含70%黃連總生物堿。取甘草250g，加入8倍量的0.5X稀氨水超聲提取lh，濾過，再加入6倍量的0.5X稀氨水超聲提取lh，濾過，合并兩次濾液，加10%NaOH溶液調(diào)pH值至7，用適量的水稀釋該濾液至0.015g藥材/ml，按比吸附量0.25§/1111通過0-101大孔樹脂柱，即用1Kg大孔樹脂填充柱。先以5倍柱體積去離子水洗脫，再以7倍柱體積50%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓除去溶劑，干燥，即得甘草提取物，其中含30%甘草酸。將上述工藝所制備的葛根提取物85g，黃苳提取物62g，黃連提取物33.5g，甘草提取物17.5g混合均勻，粉碎成細(xì)粉，與222g微晶纖維素混合均勻，以50%乙醇為粘合劑制顆粒，干燥，整粒，加入30g交聯(lián)CMC-Na，壓片1000片海日服用3片X3次。權(quán)利要求1、一種葛根芩連藥物組合物，其特征在于該組合物的有效成分由以下重量配比的提取物組成葛根提取物40～86份、黃芩提取物35～65份、黃連提取物15～36份、甘草提取物10～20份；所述四種提取物中分別含有如下重量百分比的活性成分葛根提取物中含有葛根總異黃酮40～85％，黃芩提取物中含有黃芩總黃酮60～90％，黃連提取物中黃連總生物堿50～85％，甘草提取物中含有甘草酸12～30％；所述四種提取物由下列方法制得(1)將葛根、黃芩、黃連三味藥材用水煎煮法、乙醇回流法、超聲波法或滲漉法分別提取得到葛根粗提物、黃芩粗提物和黃連粗提物，將甘草以稀氨水為溶媒用回流法、超聲波法提取得到甘草粗提物；(2)將步驟(1)所得葛根粗提物用大孔樹脂法或萃取法精制，黃芩粗提物用酸沉淀法或大孔樹脂法精制，黃連粗提物用酸沉淀法或鹽析法精制，甘草粗提物用酸沉淀法或大孔樹脂法精制即得。2、權(quán)利要求l所述的葛根芩連藥物組合物的有效成分的制備方法，該方法由下列步驟組成(1)將葛根、黃芩、黃連三味藥材分別用水煎煮法、乙醇回流法、超聲波法或滲漉法提取得到葛根粗提物、黃芩粗提物和黃連粗提物，將甘草以稀氨水為溶媒用回流法、超聲波法提取得到甘草粗提物；(2)將步驟(1)所得葛根粗提物用大孔樹脂法或萃取法精制，黃芩粗提物用酸沉淀法或大孔樹脂法精制，黃連粗提物用酸沉淀法或鹽析法精制，甘草粗提物用酸沉淀法或大孔樹脂法精制；(3)將步驟(2)精制后的提取物混合即可。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的葛根芩連藥物組合物，該組合物可制備成普通片劑、分散片、膠囊劑、顆粒劑、微丸、散劑、軟膠囊。全文摘要本發(fā)明提供了一種葛根芩連藥物組合物，該組合物的活性成分由以下重量配比的提取物組成葛根提取物40～86份、黃芩提取物35～65份、黃連提取物15～36份、甘草提取物10～20份；所述四種提取物中主要有效部位的含量分別為葛根提取物中含有葛根總異黃酮40～85％，黃芩提取物中含有黃芩總黃酮60～90％，黃連提取物中含黃連總生物堿50～85％，甘草提取物中含有甘草酸12～30％；所述四種提取物是將傳統(tǒng)方劑葛根芩連處方中的每一味原料藥分別提取，再根據(jù)不同藥材的有效部位的性質(zhì)采用不同的方法提取并精制得到。本發(fā)明組合物可用于制備治療菌痢、急性腸炎及小兒病毒性腹瀉的制劑。文檔編號A61K36/185GK101156906SQ200710030818公開日2008年4月9日申請日期2007年10月12日優(yōu)先權(quán)日2007年10月12日發(fā)明者羅佳波,譚曉梅申請人:南方醫(yī)科大學(xué)