專利名稱：：一種雷公藤紅素鹽及其制備方法與用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種雷公藤紅素鹽及其制備方法及用途。
背景技術(shù)：
：-雷公藤是治療自身免疫疾病的藥物，它含有多種有效成分,如雷公藤甲素、雷公藤乙素、雷公藤紅素(Celastrol)等。這些有效成分對(duì)多種免疫細(xì)胞有復(fù)雜的影響，包括抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡及改變細(xì)胞因子分泌等。雷公藤紅素為雷公藤中主要成分之一，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下文獻(xiàn)報(bào)道雷公藤紅素具有抗炎(包括抑制COX2活性、NF-kB、NO、白三烯等方面)、抗腫瘤、抗氧化、抗真菌、抗肝炎、殺蟲、抗瘧、避孕、抑制頭屑、治療腎臟病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病(如阿爾茨海默病)等藥理活性。但因雷公藤紅素屬難溶性藥物，其生物利用度較低，并在藥物的給藥途徑上受到很大限制，從而影響其做為新藥的開發(fā)。
發(fā)明內(nèi)容-本發(fā)明的目的是提供一類雷公藤紅素與不同有機(jī)或無機(jī)堿形成的雷公藤紅素鹽，該雷公藤紅素鹽不僅溶解性好，可制成穩(wěn)定的以水為載體的制劑，而且口服生物利用度亦獲得提高。本發(fā)明提供一種水溶性雷公藤紅素鹽，其特征在于如下列結(jié)構(gòu)式(I)表示的鹽或相應(yīng)的異構(gòu)體，其中結(jié)構(gòu)式中的R為堿性氨基酸、有機(jī)胺、無機(jī)堿。本發(fā)明還提供一種雷公藤紅素鹽的制備方法即在反應(yīng)瓶中依次加入雷公藤紅素、堿性氨基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿和乙醇水溶液，室溫下攪拌反應(yīng)，減壓回收，放置結(jié)晶，濾過，干燥，即得。上述制備方法中雷公藤紅素與堿性氨基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿的摩爾配比為1:0.5~3，其中優(yōu)選l:l。上述制備方法中所述的堿性氨基酸可以選自L-精氨酸、D-精氨酸、D、L-精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、組氨酸等；所述的有機(jī)胺可以選自葡甲胺、叔丁胺等;所述的無機(jī)堿可以選自堿金屬的氫氧化物、堿土金屬的氫氧化物如氫氧化鈉、氫氧化鉀等，其中優(yōu)選精氨酸。本發(fā)明提供雷公藤紅素鹽可以與藥學(xué)載體組合，制成藥學(xué)可以接受的各種劑型，包括注射劑、口服固體制劑如片劑、膠囊劑、顆粒劑等。本發(fā)明還提供雷公藤紅素鹽在制備腫瘤治療藥物方面的用途。本發(fā)明還提供雷公藤紅素鹽在制備抗炎藥物方面的用途。雷公藤紅素鹽治療腫瘤的劑量范圍為每人每日5—15mg，靜脈注射?？寡讋┝糠秶鸀槊咳嗣咳?0—40mg，用法口服。因?yàn)樵摻o藥劑量是根據(jù)動(dòng)物藥理試驗(yàn)推算而得，鑒于動(dòng)物與人體的差異性，故實(shí)際臨床用量可以允許有所調(diào)整。另因本發(fā)明獲得的雷公藤紅素鹽水溶性好，可制成注射劑，且生物利用度較高，故抗腫瘤與抗炎皆可采用口服、注射方式給藥。本段對(duì)給藥途徑的論述僅為代表性論述。以下具體實(shí)施方式用以解釋本發(fā)明，并不限于此。具體實(shí)施例方式雷公藤紅素通過購買市售品獲得，如深圳市牌牌科技有限公司生產(chǎn)，純度達(dá)98%以上。實(shí)施例l:雷公藤紅素精氨酸鹽的制備在反應(yīng)瓶中依次加入雷公藤紅素0.45g(0.001mol)、L-精氨酸0.174g(0.001mo1)和100ml62.5。/。乙醇水溶液，室溫下攪拌反應(yīng)6h，減壓回收至20ml，4'C放置結(jié)晶，濾過，干燥，即得紅色粉末狀固體0.49g，收率78.5%。雷公藤紅素精氨酸鹽化學(xué)結(jié)構(gòu)確認(rèn)數(shù)據(jù)如下ESI-MSm/z(100%):624([M-H〗+,2.61),448([Cel-H]+,100),173([Arg-H〗+，8.38);13C-NMR《Hz):184.2,178.5,173.5,171.5,165.3,157.4,146.4,135.1,127.1,119.1,118.7,118.2,55.6,45.0,44.0,43.0,41.9,40.5，39.5,38.5,36.6,34.7,33.5，32.8，31.6,31.0,30.7,29.9，29.8,29.3,28.4,25.9,20.8,18.1,8.9。實(shí)施例2:雷公藤紅素精氨酸鹽的制備在反應(yīng)瓶中依次加入雷公藤紅素0.45g(0.001mo1)、L-精氨酸0.087g(0.0005mol)和100ml62.5%乙醇水溶液，室溫下攪拌反應(yīng)6h，減壓回收至20ml，4'C放置結(jié)晶，濾過，干燥，即得紅色粉末狀固體0.61g，收率76.4%。實(shí)施例3:雷公藤紅素精氨酸鹽的制備在反應(yīng)瓶中依次加入雷公藤紅素0.45g(0.001mo1)、L-精氨酸0.522g(0.003mo1)和100ml62.5%乙醇水溶液，室溫下攪拌反應(yīng)6h，減壓回收至20ml，4。C放置結(jié)晶，濾過，干燥，即得紅色粉末狀固體0.41g，收率76.3%。實(shí)施例4:雷公藤紅素賴氨酸鹽的制備在反應(yīng)瓶中依次加入雷公藤紅素0.45g(0.001mo1)、賴氨酸0.146g(0.001mo1)和100ml62.5。/。乙醇水溶液，室溫下攪拌反應(yīng)6h，減壓回收至20ml，4'C放置結(jié)晶，濾過，干燥，得紅色粉末狀固體0.45g，收率75.5%。實(shí)施例5:雷公藤紅素葡甲胺鹽的制備在反應(yīng)瓶中依次加入雷公藤紅素0.45g(0.001mo1)、葡甲胺0.195g(0.001mo1)和100加162.5%乙醇水溶液，室溫下攪拌反應(yīng)6h，減壓回收至20ml，4。C放置結(jié)晶，濾過，干燥，即得紅色粉末狀固體0.42g，收率65.1%。實(shí)施例6:雷公藤紅素鈉鹽的制備在反應(yīng)瓶中依次加入雷公藤紅素0.45g(0.001mo1)、氫氧化鈉0.04g(0.001mo1)和3000ml無水乙醇，攪拌反應(yīng)至澄清液，濾過，減壓回收至10ml，4。C放置結(jié)晶，濾過，干燥，得紅色粉末狀固體0.36g，收率73.5%。實(shí)施例8:雷公藤紅素鉀鹽的制備在反應(yīng)瓶中依次加入雷公藤紅素0.45g(0.001mo1)、氫氧化鉀0.056g(0.001mo1)、甲醇1000ml，攪拌反應(yīng)至澄清液，濾過，減壓回收至10ml，4。C放置結(jié)晶，濾過，干燥，得紅色粉末狀固體0.35g，收率70%。實(shí)施例9:雷公藤紅素精氨酸鹽片劑的制備稱取雷公藤紅素精氨酸鹽10g(按實(shí)施例l制備)，混勻，過80目篩，加入微晶纖維素90g、淀粉100g作為稀釋劑組成制劑配方，混勻，噴入75%乙醇為粘合劑制軟材，用24目篩制粒，干燥后整粒，混勻，壓片，制成1000片，包衣，即得，每片含雷公藤紅素精氨酸鹽10mg。實(shí)施例10:雷公藤紅素精氨酸鹽注射液的制備稱取雷公藤紅素精氨酸鹽0.5g(按實(shí)施例l制備)，將注射用水至卯Oml,攪拌使溶解，濾過，取濾液，0.1mol/lNaOH溶液調(diào)pH值至8—9，加注射用水至1000ml，經(jīng)含量測(cè)定符合要求后，初濾，精濾至澄明度檢査合格，灌封，滅菌，即得，0.5mg/ml。實(shí)施例ll:雷公藤紅素葡甲胺鹽膠囊劑的制備稱取雷公藤紅素葡甲胺鹽10g(按實(shí)施例5制備)，混勻，過80目篩，加入預(yù)膠化淀粉190g作為稀釋劑組成制劑配方，混勻，噴入75%乙醇為粘合劑制軟材，用24目篩制粒，干燥后整粒，混勻，裝膠囊，制成1000粒，即得，每粒含雷公藤紅素葡甲胺鹽10mg。試驗(yàn)例l溶解度測(cè)定分別精密稱取研成細(xì)粉雷公藤紅素5mg和雷公藤紅素精氨基鹽(按實(shí)施例1制備)、雷公藤紅素葡甲胺鹽(按實(shí)施例5制備)、雷公藤紅素鈉鹽(按實(shí)施例6制備)各50mg，分別置于25°C±2°C50ml蒸餾水中，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒鐘；觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況。雷公藤紅素仍有可見溶質(zhì)顆粒，其水溶解度小于0.1mg/ml，屬水幾乎不溶物質(zhì)；雷公藤紅素精氨基鹽、雷公藤紅素葡甲胺鹽、雷公藤紅素鈉鹽則完全溶解。另精密稱取研成細(xì)粉雷公藤紅素精氨基鹽、雷公藤紅素葡甲胺鹽、雷公藤紅素鈉鹽各100mg，置于25'C士2'C50ml蒸餾水中，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒鐘；觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，雷公藤紅素精氨基鹽、雷公藤紅素葡甲胺鹽、雷公藤紅素鈉鹽均有少量可見溶質(zhì)顆粒。因此雷公藤紅素精氨基鹽、雷公藤紅素葡甲胺鹽、雷公藤紅素鈉鹽水溶解度大于lmg/ml，屬水微溶物質(zhì)。試驗(yàn)例2雷公藤紅素鹽與雷公藤紅素口服生物利用度比較1.藥液配制分別稱取雷公藤紅素精氨酸鹽(按實(shí)施例1制備)、雷公藤紅素葡甲胺鹽(按實(shí)施例5制備)、雷公藤紅素鈉鹽(按實(shí)施例6制備)適量,加去離子水溶解,分別配成濃度為5mg/mL溶液，為樣A、B、C;稱取雷公藤紅素適量，力卩1%羧甲基纖維素鈉溶液混懸，制成5mg/mL混懸液，為樣D。2.灌胃給藥方案大鼠禁食16h，自由飲水，分別灌胃給藥樣A、B、C、D,劑量分別為50mg/kg。分別于給藥前5min和給藥后15min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、300mm、、360min、480min取血，分離血清。3.樣品處理血漿樣品的處理精密吸取血漿便樣品0.2mL，精密加入冷藏的10%三氯乙酸40pL，渦旋3min，12000r/min離心10min，吸取上清液約120|iL置于尖底進(jìn)樣瓶中，HPLC自動(dòng)進(jìn)樣。4樣品的測(cè)定4.1儀器1100系列高效液相色譜儀(美國Agilent公司);包括G1312A二元泵，G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器。4.2血漿樣品測(cè)定的色譜條件色譜柱discoverODS柱(250mmx4mm,5^m);流動(dòng)相:乙腈:水(87:13);流速lmL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)425nm。4.3結(jié)果_表1雷公藤紅素精氨酸鹽與雷公藤紅素的生物利用度比較<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>上述結(jié)果顯示口服雷公藤紅素精氨酸鹽、葡甲胺鹽、鈉鹽血藥濃度(Cmax)遠(yuǎn)高于口服雷公藤紅素血藥濃度(Cmax)，表明雷公藤紅素鹽生物利用度顯著提高。試驗(yàn)例3雷公藤紅素鹽抗腫瘤作用觀察受試物靜脈注射對(duì)U14宮頸癌、PC-3、及Lewis肺癌的抑瘤活性。實(shí)驗(yàn)選用SPF級(jí)C57BL/6小鼠。設(shè)陰性對(duì)照組、雷公藤紅素組、雷公藤紅素精氨酸鹽組(按實(shí)施例l制備)。采用腋下接瘤方法，接瘤后次日隨機(jī)分組，連續(xù)靜脈給藥10天，末次給藥24小時(shí)后，脫頸椎處死小鼠，剝?nèi)×鼋M織，稱重，計(jì)算抑瘤率。結(jié)果顯示雷公藤紅素精氨酸鹽靜脈給藥具有顯著的抑瘤作用，優(yōu)于雷公藤紅素。詳見表2:表2雷公藤紅素鹽對(duì)各種瘤株的抑瘤率(％)劑量(mg/kg)PC-3U14宮頸癌Lewis肺癌3605346雷公藤紅素組14534293807467雷公藤紅素精氨酸鹽組1645748試驗(yàn)例4雷公藤紅素鹽對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響1.材料與動(dòng)物雷公藤紅素精氨酸鹽按實(shí)施例1制備。地塞米松批號(hào)0601146，鄭州羚銳制藥有限公司生產(chǎn)。二甲苯杭州中山化學(xué)有限公司生產(chǎn)。昆明種小鼠，昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2.分組及方法取昆明種小白鼠80只,隨機(jī)分為8組。模型組(生理鹽水)、雷公藤紅素高劑量組(ig，2mg/kg)、中劑量組(ig，4mg/kg)、低劑量組(ig，8mg/kg)、雷公藤紅素精氨酸鹽高劑量組(ig，2mg/kg)、中劑量組(ig，4mg/kg)、低劑量組(ig，8mg/kg)、地塞米松陽性對(duì)照組(iv，2mg/kg)。灌胃給藥3天，末次給藥后40min，將50pl二甲苯涂于小鼠右耳廓兩面致炎，左耳作為對(duì)照，致炎后lh斷頸處死動(dòng)力，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑9mm的打孔器分別在同一部位打下耳片，即時(shí)稱重，計(jì)算各組腫脹度及抑制率。腫脹度(mg)=左耳耳片重(mg)—右耳耳片重(mg)抑制率(％)=(模型組平均耳片重一給藥組平均耳片重)/模型組平均耳片重\100%3.結(jié)果雷公藤紅素精氨酸鹽可顯著抑制二甲苯引起的耳廓腫脹，優(yōu)于雷公藤紅素。詳見表3。表3雷公藤紅素精氨酸鹽對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(x±s，n=10)組別劑量(mg/kg)腫脹度(mg)抑制率(％)模型組-22.52±2.45-地塞米松組-4.18±2.5981.4雷公藤紅素組214.75土2.16'34.5412.25士2.66'45.6(ig)承*89.53±2.1857.7雷公藤紅素精氨酸鹽212.08土2.14'46.449.28±2.67**58.8(ig)*承+87.23±2.1167.9注與模型組比較*P<0.05，"尸<0.01,***戶<0.001。權(quán)利要求1.一種水溶性雷公藤紅素鹽，其特征在于如下列結(jié)構(gòu)式(I)表示的鹽或相應(yīng)的異構(gòu)體，其中結(jié)構(gòu)式中的R為堿性氨基酸、有機(jī)胺、無機(jī)堿。2.權(quán)利要求1所述雷公藤紅素鹽的制備方法，其特征在于在反應(yīng)瓶中依次加入雷公藤紅素、堿性氨基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿和乙醇水溶液，室溫下攪拌反應(yīng)，減壓回收，放置結(jié)晶，濾過，干燥，即得。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雷公藤紅素鹽的制備方法，其特征在于所述的雷公藤紅素與堿性氨基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿的摩爾配比為1:0.5~3。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雷公藤紅素鹽的制備方法，其特征在于所述的雷公藤紅素與堿性氨基酸或有機(jī)胺或無機(jī)堿的摩爾配比為1:1。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雷公藤紅素鹽的制備方法，其特征在于所述的堿性氨基酸可以選自L-精氨酸、D-精氨酸、D、L-精氨酸、賴氨酸、鳥氨酸、組氨酸中的任何一種。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雷公藤紅素鹽的制備方法，其特征在于所述的有機(jī)胺可以選自葡甲胺、叔丁胺中的任何一種。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雷公藤紅素鹽的制備方法，其特征在于所述的無機(jī)堿可以選自堿金屬的氫氧化物、堿土金屬的氫氧化物如氫氧化鈉、氫氧化鉀中的任何一種。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雷公藤紅素鹽，其特征在于所述雷公藤紅素鹽與藥學(xué)載體組合，可制成藥學(xué)可以接受的各種劑型，包括注射劑、口服固體制劑。9.權(quán)利要求1所述的雷公藤紅素鹽在制備抗腫瘤藥物的應(yīng)用。10.權(quán)利要求1所述的雷公藤紅素鹽在制備抗炎藥物的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明提供了一種雷公藤紅素鹽。具體為雷公藤紅素與醫(yī)學(xué)上可接受的堿性氨基酸(如精氨酸、賴氨酸等)或有機(jī)胺(如葡甲胺等)或無機(jī)堿(如氫氧化鈉、氫氧化鉀等)中的一種所成的鹽。該鹽可以解決雷公藤紅素的溶解性，制成穩(wěn)定的以水為載體的制劑，而且口服生物利用度亦獲得提高。其結(jié)構(gòu)通式如上其中結(jié)構(gòu)式中的R為堿性氨基酸、有機(jī)胺、無機(jī)堿。文檔編號(hào)A61P31/04GK101279995SQ20071001415公開日2008年10月8日申請(qǐng)日期2007年4月3日優(yōu)先權(quán)日2007年4月3日發(fā)明者關(guān)玉昆,珂劉,劉軍鋒,卉許,烽趙,萌邵申請(qǐng)人:煙臺(tái)靶點(diǎn)藥物研究有限公司