專(zhuān)利名稱(chēng)：：包含增效比例的干擾素γ和α的穩(wěn)定的制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)，特別是穩(wěn)定的藥物制劑，其包含增效比例的重組干擾素Y和a以用于抑制人類(lèi)的不同組織或器官中的細(xì)胞生長(zhǎng)?，F(xiàn)有技術(shù)I型干擾素(縮寫(xiě)為IFN)的各種效應(yīng)形成了其應(yīng)用的極大治療潛力。IFN應(yīng)用在各種類(lèi)型的癌癥治療中是有益的，其中包括白血病(US5830455)、基底細(xì)胞癌(US5028422)、鱗狀細(xì)胞癌(US5256410)、乳腺癌(US5024833)、胃腸道腫瘤(US5444064;5814640)和光化性角化病(US5002764)。不同細(xì)胞類(lèi)型顯示出對(duì)于IFN的不同敏感性，并且抑制它們生長(zhǎng)的濃度可以在廣泛的范圍內(nèi)變化(BordenE.等人(1981)ProgressinHematology.第XII巻，BrownEB.，編輯，299-339)，對(duì)此顯示出在它們抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的能力(DahlH.(1983).Humaninterferonandcellgrowthinhibition.VII.Reversibi1ityofinterferonactivities.JInterferonAnimal,3:327-332;WillsonJ.K.V.,BUtnerG.等人(1984)Antiproliferativeactivityofhumaninterferonsagainstovariancancercellsgrowninhumantumorstemcellassay.JInterferonAnimal,4:441-447;HuR.，GanY.等人(1993)Evidenceformultiplebindingsitesforseveralcomponentsofhumanlymphoblastoidinterferon-alpha.JBiolChem，268:12591-12595)以及抗腫瘤活性(QuesadaJR.，TalpazM.等人(1986)Clinicaltoxicityofinterferonsincancerpatients:toreview.JClinOncol,4:234-243)方面的差異。IFN在癌癥治療中的使用仍未滿(mǎn)足從體外研究和這些有力的生物分子所具有的性質(zhì)中所產(chǎn)生的期望。已測(cè)試了不同的治療方案但無(wú)明顯的有益效果和影響(StranderH.和ObergK.，(1992)Clinicaluseofinterferons.SolidtumorsINTERFERON.PrinciplesandMedicalApplications.PublishingBaronS.,CoppenhaverDH.,DianzaniF.，F(xiàn)leischmannWR.，Jr.HughesTK.，Jr.KlimpelGR.，NieselDW.，StatonGJ.和TyringSK.，533—561)。在為了實(shí)現(xiàn)療法的更佳效應(yīng)的努力中，以高劑量使用IFN，但由于各種因素，未出現(xiàn)預(yù)期的有益有效應(yīng)答，在所述因素中包括由所述劑量產(chǎn)生不良反應(yīng)(LaneH.C.(1990)Interferon—alphainpatientswithasymptomatichumanimmunodeficiencyvirus(HIV)infection.Arandomized,placebo—controlledtrial.AnnalsofinternalMedicate,112:805-811)。此外，已經(jīng)以利用其增效效應(yīng)的組合形式來(lái)使用IFNs。IFNoc和IFNy的組合已在使用來(lái)自瘢痕瘤成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)物的體外研究中得到描述(TredgetEE.，WangR.等人(2000)Transforminggrowthfactor—betamRMandproteininhypertrophicscartissuesandfibroblasts:antagonismbyIFN-alphaandIFN-gamma//77"roand2'/pa>o.JInterferonCytokineAni歸l，20:143-151)。在這項(xiàng)工作中，提及了IFNot和y的組合利用，但所得到的數(shù)據(jù)來(lái)自體外和來(lái)自源于來(lái)自?xún)和鸟：哿龅募?xì)胞。這些作者未進(jìn)行任何臨床試驗(yàn)，并且未評(píng)估所述IFN組合對(duì)于成人瘢痕瘤的細(xì)胞的影響，所述成人瘢痕瘤是干擾素的弱應(yīng)答者。專(zhuān)利EP0107498顯示了在黑素瘤Hs294T的細(xì)胞系中的干擾素oc和y的組合，但未描述在其他類(lèi)型的細(xì)胞如基底細(xì)胞癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(GL-5)或喉癌(HEp-2)的原代培養(yǎng)物中的這種效應(yīng)。對(duì)于腎和肺轉(zhuǎn)移的治療，還描述了天然IFNoc和重組IFNy的交替利用(FujiiA.,Yui-InK.等人(1999)Preliminaryresultsofthealternatingadministrationofnaturalinterferon-alphaandrecombinantinterferon-gammaformetastasicrenalcellcarcinomaBJUInt.;84:399-404)。IFNa2或ct4或雜合體54oc2BglIIa1與IFNy的組合已在細(xì)胞系RT4(膀胱癌)和A21829(肺腺癌)中得到描述，并具有比單獨(dú)的I型IFN或IFNy更佳的抗增殖效應(yīng)(HubbellH.R.，CraftJ.TO.等人(1987)Synergisticantiproliferativeeffectofrecombinantalpha-interferonswithrecombinantgamma-interferon.JBiolResponseMod，6:141-153)。IFNy(1000IU/mL)和IFNot2(1000IU/mL)中的增效效應(yīng)已在細(xì)胞系A(chǔ)459(肺泡腫瘤)(MartyreM.C.，BeaupainR.等人(1987)PotentiationofantiproliferativeactivitybymixofhumanrecombinantIFN-alpha2and-gammaongrowthofhumancancernodulesmaintainedincontinuousorganotypicculture.EurJCancerClinOncol，23:917-920)以及從大細(xì)胞未分化性癌建立的細(xì)胞系(HandA.，PelinK.等人(1993)Interfe醒-alphaandinterferon-gammacombinedwithchemotherapy:invitrosensitivitystudiesinnon-smallcelllung—cancercelllines.AnticancerDrugs,4:365-368)中顯示。IFNct和IFNy的組合已在使用細(xì)胞系HepG2的研究中(MizukoshiE.,KanekoS.等人(1999)Up-regulationoftypeIinterferonreceptorbyIFN-gamma.JInterferonCytokineAnimal,19:1019-1023)和在細(xì)胞系A(chǔ)VA5中(OkuseC.，RinaudoJ.A.等人(2005)EnhancementofantiviralactivityagainsthepatitisCvirusinvitrobyinterferoncombinationtherapy.AntiviralAnimal,65:23-34)得到描述。這些作者未測(cè)定抗增殖效應(yīng)，也未測(cè)定在細(xì)胞系HepG2中oc和v千擾素的組合的更有效的比例。此外，已在細(xì)胞系Hepal-6(鼠類(lèi)肝瘤)中探究了TNFot和IFNy的增效效應(yīng)(SasagawaT.，HlaingM.等人(2000)SynergisticinductionofapoptosisinmurinehepatomaHepal-6cellsbyIFN-GAMMAandTNF-alpha.BiochemBiophysCommonAni歸l，272:674-680)。在專(zhuān)利US5190751中，描述了IFNct和y的組合對(duì)于B型和T型白血病細(xì)胞系的生長(zhǎng)的抑制。在所評(píng)估的T細(xì)胞系中均未觀察到生長(zhǎng)抑制效應(yīng)的增強(qiáng)，并且在某些實(shí)驗(yàn)條件下，所述組合的效應(yīng)是拮抗性的。在專(zhuān)利EP010749和一個(gè)出版物(CzarnieckiC.W.，F(xiàn)ennieC.W.等人(1984)SynergisticantiviralandantiproliferativeactivitiesofEscherichiacoli-derivedhumanalpha,beta,andgammainterferons.JVirol.49:490-496)中，也顯示了，IFNot和Y的組合不一定是增效的，而且可以是拮抗性的。提及但并未顯示在非常廣泛范圍內(nèi)的所述組合的功效。這些數(shù)據(jù)說(shuō)明，應(yīng)當(dāng)就實(shí)驗(yàn)限定來(lái)評(píng)估IFNa和Y的組合的利用，所述實(shí)驗(yàn)限定允許鑒定何種條件是對(duì)于建立用于治療給定組織或器官中不適當(dāng)?shù)募?xì)胞生長(zhǎng)的最佳組合來(lái)說(shuō)有利的條件。由于這個(gè)原因，為了支持治療和適當(dāng)?shù)膭┝?，?yīng)當(dāng)在體外實(shí)驗(yàn)和對(duì)照臨床試驗(yàn)中進(jìn)行評(píng)估。在使用神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的研究中，IFNy影響惡性特征例如所研究的腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移(KnupferM.M.，KnupferH.等人(2001)Interferon-gammainhibitsgrowthandmigrationofA172humangHoblastomacells.AnticancerAnimal,21:3989-3994)。另外，已報(bào)道了使用IFNy來(lái)治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤的陰性結(jié)果(MahaleyM.S.,BertschL.，Jr.等人(1988)Systemicgamma-interferontherapyforrecurrentgliomas.JNeurosurg，69:826-829)。已證明IFNY和IFNP的同時(shí)使用在抑制細(xì)胞系GBM-18(多抗藥性星形細(xì)胞瘤)的生長(zhǎng)中是有效的(ReddyP.G.等人(1991)Systemicgamma-interferontherapyforrecurrentgliomas.JNatlCancerInst,83:1307-1315)。此外，已描述了用于治療這些肺瘤的IFNy與a-二氟曱基鳥(niǎo)氨酸(DFM0)的組合(US4499072)。專(zhuān)利US5002879描述了在靠近由淋巴因子和IL-2激活的殺傷細(xì)胞之處使用DFM0的類(lèi)似療法。就IFNa而言，它與其他藥物的組合在神經(jīng)膠質(zhì)瘤的治療中沒(méi)有有利效應(yīng)，并且顯示出毒性(BucknerJ.C.,BurchP.A.等人(1998)PhaseIItrialofrecombinantinterferon-alpha-2aandeflornithineinpatientswithrecurrentglioma.JNeurooncol.36:65-70;ChangS.M.，BarkerF.G.等人(1998)Highdoseoraltamoxifenandsubcutaneousinterferonalpha—2aforrecurrentglioma.JNeurooncol,37:169-176)。那么，根據(jù)體外實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)，基于其組合的比例的適當(dāng)選擇，通過(guò)組合使用IFNoc和IFNY可以有利于這種肺瘤類(lèi)型的治療。喉是口腔后的上呼吸消化道的第二個(gè)較常見(jiàn)的癌癥位置。喉癌是最常見(jiàn)的頭與頸肺瘤，并且最通常的喉癌是鱗狀細(xì)胞癌(占所有情況的95%)。在喉肺瘤T3和T3的情況下的存活在大約30%的實(shí)施了喉切除術(shù)的患者中只有5年(DjordjevicV.，MilovanovicJ.等人(2004)Radicalsurgeryofthemalignantlaryngealtumors.MinutesChirLugosl,51:31-35)。已顯示，放射療法和化學(xué)療法對(duì)于這種癌的治療并不有效(ChenW.，GuoX.等人(2004)Long-termfollow-upobservationofclinicaltherapyforlaryngealcarcinomarecurrenceandcervicalmetastasisLinChuangErBiYanHouKeZaZhi.18:536-537)。然而，已證明綜合化學(xué)療法連同使用IFNa—起在喉癌治療中是有益的(MantzC.A.，VokesE.E.，(2001)SequentialinductionchemotherapyandconcomitantchemoradiotherapyinthemanagementoflocoregionallyadvancedlaryngealcancerAnnOncol，12:343-347)。在II期試驗(yàn)中作為對(duì)于喉癌的療法評(píng)估了IL-2和IFNct的組合，但結(jié)果并不令人滿(mǎn)意(ClaymanG.L.,YoungG.等人(1992)Detectionofregulatoryfactorsoflymphokine-activatedkillercellactivityinheadandneckcancerpatientstreatedwithinterleukin—2andinterferonalpha.AnnOtolRhinolLaryngol，101:909-915)。在喉肺瘤的治療中存在的進(jìn)展很少。IFNa和Y的組合使用將能夠促進(jìn)改善現(xiàn)有療法以對(duì)抗這種類(lèi)型的腫瘤。專(zhuān)利US5503828描述了干擾素組合物，其特征在于包含至少50%的IFNct2和IFNot8的等位基因以及一個(gè)或多個(gè)在由IFNa4、a7、a10、a16、a17和a21形成的組中的另外IFN類(lèi)別。同時(shí)，專(zhuān)利US4503035顯示了某些IFNa類(lèi)別的制劑，但其不包括al、oc5、a14和IFNco。這些專(zhuān)利未描述由重組IFNy和IFNoc2的組合形成的制劑。專(zhuān)利US5762923詳細(xì)描述了在水中稀釋的干擾素液體組合物，其具有數(shù)量足以穩(wěn)定IFNct的非離子型去污劑和苯甲醇，所述組合物另外還包含酸緩沖劑。另一方面，專(zhuān)利US4847079描述了干擾素和硫柳汞的藥物組合物，而專(zhuān)利US4675184顯示了千擾素制劑，其含有多元醇和有機(jī)緩沖劑作為穩(wěn)定劑以及pH3-6的常規(guī)栽體或稀釋劑。該組合物可以另外具有陰離子型表面活性劑和/或白蛋白作為穩(wěn)定劑。在專(zhuān)利US5236707和US5431909中描述了使用作為穩(wěn)定劑的胺類(lèi)(脂肪族伯胺)和鋰的有機(jī)鹽，其保護(hù)干擾素不被降解且使之穩(wěn)定。專(zhuān)利US4496537涉及干擾素a的穩(wěn)定的液體制劑，其包括人血清白蛋白組合物、和丙氨酸或甘氨酸、水和能夠維持pH6.5-8.0的緩沖系統(tǒng)。專(zhuān)利US5935566描述了干擾素oc的穩(wěn)定制劑，在其組成中包括能夠使pH維持在4.5-7.1范圍內(nèi)的緩沖系統(tǒng)、作為穩(wěn)定劑的聚山梨酯80、作為螯合劑的EDTA、作為等滲劑的氯化鈉和作為抗微生物防腐劑的間甲酚。專(zhuān)利US0170207描述了干擾素ot的穩(wěn)定制劑，在其組成中包括能夠使pH維持在4.5-9.0范圍內(nèi)的緩沖系統(tǒng)、穩(wěn)定劑、非離子型表面活性劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑。在申請(qǐng)WO89/04177中描述了干擾素y的液體藥物制劑，其包含使pH維持在4.0-6.0范圍內(nèi)的緩沖溶液、多羥基糖(作為穩(wěn)定劑)和非離子型去污劑。專(zhuān)利US4895716涉及用于在甘氨酸/乙酸鹽緩沖溶液中，使用乳糖酸穩(wěn)定干擾素Y的組合物和方法。合的I型千擾素的亞型所形成的藥物組合物，并且未限定那些組合的比例，只描述了用于病毒感染而不是用于腫瘤治療的那些組合。在先前描迷的報(bào)道中，均沒(méi)有利用、表征或提及以增效組合一起包含重組IFNy和cc2的藥物制劑。當(dāng)它們以確定比例進(jìn)行混合時(shí)，存在這樣的可能性，即組合利用IFNy和I型IFN來(lái)治療對(duì)于已建立的療法和/或其組合具有不同程度的抗性的細(xì)胞生長(zhǎng)?？紤]到這些前提，需要開(kāi)發(fā)包含這些IFN的穩(wěn)定藥物制劑，這些效、簡(jiǎn)單和廣泛使用。這將允許i佳地管理所述組合，并且使得在需要這些治療的患者的治療中的使用更可行。發(fā)明詳述本發(fā)明解決了先前提及的問(wèn)題，提供了通過(guò)腸胃外(液體或凍干的)或局部(凝膠、油骨或乳骨)途徑應(yīng)用的穩(wěn)定的藥物制劑。它們包含增效比例的不同量的重組干擾素Y和ct以用于治療特征在于組織或器官的惡性或良性非生理學(xué)細(xì)胞生長(zhǎng)的病理學(xué)事件，并且其另外還包含藥學(xué)上可接受的賦形劑或栽體。這些制劑是使用對(duì)于IFN具有不同敏感性的細(xì)胞系的體外測(cè)定法和在不同腫瘤實(shí)體中的臨床試驗(yàn)的結(jié)果，以及對(duì)于重組IFNy和cx2在藥學(xué)上可接受的不同賦形劑或載體存在下的生物學(xué)和物理化學(xué)穩(wěn)定性所進(jìn)行的評(píng)估的結(jié)果。凍干的穩(wěn)定藥物制劑由在能夠維持pH4.9-7.5的緩沖溶液中混合的重組IFNy和oc2組成，所述緩沖溶液可以是乙酸銨或鈉、琥珀酸鈉、磷酸鈉和/或鉀或者檸檬酸/磷酸鈉。這些制劑還由至少一種選自非還原糖化合物、氨基酸、表面活性劑和穩(wěn)定聚合物的組分組成。非還原糖可以是蔗糖或海藻糖；氨基酸可以是甘氨酸、組氨酸或亮氨酸；而作為表面活性劑可提及聚山梨酯20或聚山梨酯80，和作為穩(wěn)定化聚合物可提及聚乙二醇、葡聚糖或羥乙基淀粉。本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案限定，緩沖溶液應(yīng)以10-20mM的濃度范圍使用。蔗糖或海藻糖應(yīng)以5-100mg/mL使用；甘氨酸、組氨酸或亮氨酸應(yīng)以1-20mg/mL的濃度范圍使用；聚山梨酯應(yīng)以0.01-1mg/mL使用；而聚乙二醇、葡聚糖和羥乙基淀粉以5-50mg/mL的濃度范圍使用。本發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施方案描述了凍干的穩(wěn)定藥物制劑，其包含濃度范圍為5.6x108IU-1.4x108IU的重組IFNy和濃度范圍為6.8x108IU-1.7x108IU的重組IFNcc2;或濃度范圍為2.0x108IU-0.5x10sIU的重組IFNY和濃度范圍為12.0x108IU-3.0x108IU的重組IFNot2;或濃度范圍為4.0x108IU-1.0x10sIU的重組IFNy和濃度范圍為80x108IU-20x108IU的重組IFNoc2;以及0.0802g磷酸二氫鉀、0.249g二水合磷酸氫二鈉、4g蔗糖、0.8g甘氨酸、0.03gTween20、1g聚乙二醇6000和對(duì)于100mL來(lái)說(shuō)足夠量的注射用水，并且對(duì)于O.5mL、1mL、5mL和10mL采用各自的等價(jià)比例。在等效線圖(isobologram)分析后，獲得了對(duì)于使重組IFNy和IFNa以限定組合范圍進(jìn)行混合的限定。在凍干的穩(wěn)定藥物制劑之一中，濃度為5.6x108IU-1.4x108IU的重組IFNy和濃度范圍為6.8x108IU-1.7x108IU的重組IFNa2是根據(jù)源自瘢痕瘤(Kel5a，Kel17a)和源自CBCIII的原代培養(yǎng)物的生長(zhǎng)抑制的研究結(jié)果而得到的。等效線圖分析后，鑒定出了100IU/mL(lOng/mL)重組IFNy與100IU/mL(0.5ng/mL)重組IFNot2b的組合，其分別使體外細(xì)胞生長(zhǎng)減少21%、43%和47%的(參見(jiàn)實(shí)施例1、2和3，圖1、2、3和4，表l)。使用臨床試驗(yàn)和通過(guò)同情(compassion)治療的病例的報(bào)道，定義了濃度范圍為2.0x108IU-0.5x108IU的重組IFNy和濃度范圍為12.0x108IU-3.0x108IU的重組IFNa2的混合物。隨才幾化的、具有對(duì)照的三盲臨床試驗(yàn)評(píng)估了利用上文限定的穩(wěn)定的凍干制劑在具有基底細(xì)胞癌的患者中進(jìn)行的損傷內(nèi)(I.L.)治療的功效(參見(jiàn)實(shí)施例7，表9、10、11和12)。在同樣有助于限定這些比例的通過(guò)同情治療的病例的報(bào)道中，治療了患有表皮樣癌的患者(患者1)和患有復(fù)發(fā)的多發(fā)性基底細(xì)胞癌并具有先前移植的患者(患者2)(分別參見(jiàn)實(shí)施例8，圖5a、b、c、d，患者1;和圖6a、b、c，患者2)。使用來(lái)自下述研究的結(jié)果分析限定了包含濃度范圍為4.0x10sIU-1.0x108IU的重組IFNy和濃度范圍為80x108IU-20x108IU的重組IFNa2的制劑通過(guò)50IU/mL(5ng/raL)重組IFNy與100IU/mL(0.5ng/mL)重組IFNot2b來(lái)抑制成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(GL-5)細(xì)胞的生長(zhǎng)。以這種方式，達(dá)到55%的生長(zhǎng)抑制(實(shí)施例3)。此外，考慮了使用細(xì)胞系HEp-2的研究的分析。在這種情況下，IFN的量是5IU/mL(0.5ng/mL)重組IFNy與75IU/mL(0.375ng/mL)重組IFNa2b。以此達(dá)到最佳組合，從而使體外細(xì)胞生長(zhǎng)減少76%(參見(jiàn)實(shí)施例1、2和3)。另外開(kāi)發(fā)了液體的穩(wěn)定藥物制劑。在這些制劑中，如對(duì)于凍千制劑所描述的來(lái)維持重組IFNy和oc的比例，但改變它們的藥物學(xué)成分以對(duì)于這些IFN混合物達(dá)到更大的穩(wěn)定性。由于這項(xiàng)工作，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案描述了液體的穩(wěn)定藥物制劑，其包含緩沖溶液以及至少一種選自非還原糖、氨基酸、表面活性劑、穩(wěn)定化聚合物、抗氧化/螯合化合物和等滲劑的組分。這些制劑使用水性溶劑，所述溶劑可以包含或不包含防腐劑，例如對(duì)羥基苯曱酸曱酯或丙酯的混合物。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案在于限定了液體的穩(wěn)定藥物制劑，所述液體的穩(wěn)定藥物制劑使用能夠維持pH4.9-6.5的緩沖溶液。這種緩沖劑可以是乙酸銨或鈉、琥珀酸鈉、磷酸鈉和/或鉀、檸檬酸鹽-磷酸鹽。這些制劑可以使用聚山梨酯20或聚山梨酯80作為表面活性劑；使用EDTA或乙?；?半胱氨酸作為抗氧化劑/螯合劑；而作為氨基酸可以包括組氨酸、L-精氨酸、L-丙氨酸、甘氨酸或賴(lài)氨酸。作為穩(wěn)定化聚合物使用羥乙基淀粉或葡聚糖，和作為等滲劑使用氯化鈉、氯化鉀、丙二醇、甘露醇、甘油、蔗糖或海藻糖。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案限定，液體的穩(wěn)定藥物制劑利用濃度范圍為10-100mM的緩沖溶液。在這種制劑中，以0.01-1mg/mL的濃度范圍使用聚山梨酯；以0.01-1mg/mL的濃度范圍使用EDTA或乙?；?半胱氨酸；以1-20mg/mL的濃度使用組氨酸、L-精氨酸、L-丙氨酸、甘氨酸或賴(lài)氨酸；以5-50mg/mL的濃度范圍使用羥乙基淀粉和葡聚糖，和其中存在足夠量的等滲劑以使得該溶液為等滲的。其他實(shí)施方案解釋了對(duì)于前述重組IFNy和ot的混合物的物理化學(xué)和生物學(xué)穩(wěn)定性來(lái)說(shuō)所需的液體穩(wěn)定藥物制劑的所有藥物學(xué)成分的量。這些液體制劑除IFN外還包含0.708g乙酸鈉、0.079mL乙酸、0.01gTween20、5g甘露醇和對(duì)于100mL來(lái)i兌足夠量的注射用水，并且對(duì)于O.5mL、1mL、5mL和10mL采用各自的等價(jià)比例。本發(fā)明定義了對(duì)于治療良性或惡性的細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)有利的IFNy和a的混合物的比例。這將允許使用更小的劑量、更短的治療時(shí)間來(lái)維持相同的療效，或?qū)崿F(xiàn)超過(guò)至今在使用干擾素治療腫瘤或細(xì)胞生長(zhǎng)的其他異常事件中已達(dá)到的效果。降低劑量將允許預(yù)期出現(xiàn)其更少的不良效應(yīng)或更小的強(qiáng)度，這將為患者提供更佳的生活質(zhì)量并使得他們能夠獲得使用這些有力藥物的益處。本發(fā)明定義了先前未被描述的重組IFNy和IFNoc2的混合物的制劑，所述制劑有助于這種治療性組合的管理和臨床使用以及其商品化。本發(fā)明中描述了用于抑制增殖的、包含增效比例的重組IFNy和a2混合物的、凍干和液體的穩(wěn)定藥物制劑，其具有廣泛范圍的臨床用途。體內(nèi)利用這些制劑顯示，在重要的腫瘤學(xué)疾病中，以同時(shí)和腫瘤內(nèi)組合形式進(jìn)行使用時(shí)，重組IFNy和IFNa2的組合是有效的。當(dāng)與關(guān)于其分開(kāi)的組分而獲得的效應(yīng)相比較時(shí)，這種組合能夠在更短的時(shí)間中和以更高的美學(xué)(esthetic)效果對(duì)腫瘤具有相等的治愈效應(yīng)。這些組合的使用將允許包括對(duì)抗癌癥的更大的治療可能性。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中集合了這些組合，在所述實(shí)施方案中顯示出，所述凍干或液體制劑可以用于治療良性或惡性實(shí)體瘤，其獨(dú)立地或與化學(xué)療法、放射療法或兩者的組合聯(lián)合使用。這些制劑與其他治療劑的聯(lián)合使用得到了從下列獲得的結(jié)果的支持使用重組IFNy和IFNcc2的組合連同順鉑一起治療患巨大基底細(xì)胞腫瘤的患者(參見(jiàn)實(shí)施例IO和圖9)。本發(fā)明中描述了干擾素y和oc2的聯(lián)合使用如何允許減少和/或治愈預(yù)后極差和扭曲美學(xué)效果的腫瘤。根據(jù)其中不受控制的細(xì)胞生長(zhǎng)占優(yōu)勢(shì)的幾種良性和腫瘤學(xué)實(shí)體的特征，它們可以易受使用這些制劑治療的影響。其中有來(lái)自造血組織的細(xì)胞的腫瘤例如急性或慢性髓細(xì)胞性白血病、急性或慢性淋巴細(xì)胞性白血病、以及T或B細(xì)胞白血病和中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤。還可以治療喉癌、喉乳頭狀瘤病、脂肪瘤、表皮樣和真皮內(nèi)嚢腫、脂肪肉瘤、神經(jīng)纖維瘤和皮脂增生。使用這些藥物制劑可以獲益的是來(lái)自外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，例如星形細(xì)胞瘤、多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、室管膜細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)瘤、纖維性星形細(xì)胞瘤、混合性神經(jīng)膠質(zhì)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、視神經(jīng)神經(jīng)膠質(zhì)瘤、原始神經(jīng)外胚層瘤、聽(tīng)神經(jīng)瘤、脊索瘤、顱咽管瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、腦膜瘤、神經(jīng)纖維瘤病、腦假瘤、結(jié)節(jié)狀硬化、轉(zhuǎn)移性腦腫瘤。待治療的其他易感的腫瘤是海綿狀血管瘤、肝細(xì)胞腺瘤、局灶性結(jié)節(jié)性增生、松果體瘤、垂體腺瘤、血管腫瘤、腦脊膜癌病、櫻桃樣血管瘤、皮脂腺增生。皮膚腫瘤例如基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、皮膚纖維瘤、膿性肉芽腫、真皮痣、以及脂溢性和光化性角化病可以從使用這些藥物制劑的治療中獲益。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案描述，這些制劑也可以用于治療增生性事件例如纖維化、發(fā)育異常和增生。根據(jù)在實(shí)施例7、8和10中進(jìn)行和描述的臨床試驗(yàn)的結(jié)果，作為本發(fā)明的實(shí)施方案，限定了所述制劑的肌內(nèi)、腫瘤內(nèi)和損傷周?chē)膽?yīng)用方式。其他實(shí)施方案描述了局部的穩(wěn)定藥物制劑的應(yīng)用，其包含濃度范圍為0.32x106IU-0.08x106IU的IFNy和濃度范圍為2.0x106IU-O.5x106IU的IFNoc2/克半固體。該制劑是由2.2%IFNy、0.58%IFNoc、4%鯨蠟醇、10%凡士林、2%Tween60、G.2%對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯組成的乳骨。此外，油骨的組成被限定為2.2%IFNy、0.58%IFNoc、60%白色固體礦脂(petrolate)、10%重質(zhì)液體礦脂、3%Span20、以及0.2%對(duì)羥基苯甲酸甲酯和對(duì)羥基苯甲酸丙酯。最后，凝膠制劑由2.2%IFNy、0.58%IFNoc、0.5%卡波普940、0.2%對(duì)羥基苯曱酸曱酯和對(duì)羥基苯甲酸丙酯、0.2%氫氧化鈉、0.01%乙二胺四乙酸二鈉鈣和2%乙醇組成。所有這些制劑對(duì)于溫度波動(dòng)具有抵抗力，這對(duì)于該產(chǎn)品的生產(chǎn)、其運(yùn)輸和貯存是有利的。它們防止干擾素聚集，并因此呈現(xiàn)出在該產(chǎn)物的延長(zhǎng)使用期間導(dǎo)致免疫原性的更小風(fēng)險(xiǎn)。半固體的制劑允許由患者自身以非侵入性且安全的形式進(jìn)行使用。作為本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案定義了使用這些局部的穩(wěn)定制劑用于治療皮膚或粘膜的良性或惡性實(shí)體瘤，其獨(dú)立地或與化學(xué)療法、放射療法或兩者的組合聯(lián)合使用。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案描述了，局部的穩(wěn)定藥物制劑可以用于治療脂肪瘤、表皮樣和真皮內(nèi)嚢腫、脂肪肉瘤、神經(jīng)纖維瘤、皮脂增生、血管瘤、局灶性結(jié)節(jié)性增生、室管膜細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)瘤、纖維性星形細(xì)胞瘤、腦膜瘤、松果體瘤、垂體腺瘤、血管腫瘤、腦脊膜癌病、神經(jīng)纖維瘤病、櫻桃樣血管瘤、皮脂腺增生、基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、皮膚纖維瘤、膿性肉芽腫、真皮痣、脂溢性和光化性角化病、和濕疣。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案描述了試劑盒的配置，其具有包含重組IFNy的小瓶、包含重組IFNcc的小瓶(濃度和關(guān)系如先前描述)，以及包含足夠量的注射用水的小瓶(用于稀釋和/或溶解IFN)。該試劑盒具有合適的注射器和針頭以用于IFN的同時(shí)施用，所述IFN在包含所述IFN之一的小瓶之一中預(yù)先混合。附圖簡(jiǎn)述圖1:1000IU/mL重組IFNy或IFNoc2對(duì)于源自具有瘢痕瘤的成人患者活組織檢查物的成纖維細(xì)胞原代細(xì)胞培養(yǎng)物的生長(zhǎng)抑制。圖2:重組IFNy和IFNot2b的組合對(duì)于來(lái)自瘢痕瘤(Kel5a)的成纖維細(xì)胞原代細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的等效線圖。圖3:重組IFNy和IFNct2b的組合對(duì)于來(lái)自瘢痕瘤(Kell7a)的成纖維細(xì)胞原代細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的等效線圖。圖4:重組IFNy和IFNoc2b的組合對(duì)于來(lái)自基底細(xì)胞癌(CBCIII)的成纖維細(xì)胞原代細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的等效線圖。圖5:重組IFNy和IFNoc2b的組合對(duì)于成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞系GL-5的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的等效線圖。圖6:重組IFNy和IFNa2b的組合對(duì)于來(lái)自喉癌細(xì)胞系HEp-2的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的等效線圖。圖7:用重組IFNy和IFNoc2b的組合進(jìn)行治療的具有表皮樣癌的患者。圖8:用重組IFNy和IFNct2b的組合進(jìn)行治療的具有復(fù)發(fā)性基底細(xì)胞癌的患者。圖9:用重組IFNy和IFNa2b的組合以及順鉑進(jìn)行治療的具有復(fù)發(fā)性基底細(xì)胞癌的患者。A:治療前，B:治療1年后。具體實(shí)施方案/實(shí)施例實(shí)施例1:重組IFNY和oc對(duì)于原代細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制。皮膚活組織檢查物得自正常皮膚和發(fā)展出基底細(xì)胞癌或瘢痕瘤的患者，后者是源于手術(shù)或燒傷的損害而引起的。將組織樣品立即置于DMEM培養(yǎng)基中并且處理以通過(guò)移植法獲得原代培養(yǎng)物。對(duì)于重組IFNY和a的抗增殖效應(yīng)的評(píng)估，評(píng)估了下述原代培養(yǎng)物來(lái)自瘢痕瘤(l、2、5、7、8、15、17、19、20、24、26、27、31、32)的成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)物(CPF)，來(lái)自基底細(xì)胞癌(CBCIII)的CPF和來(lái)自正常皮膚(FibN3和FibN5)的CPF。CPF生長(zhǎng)在包含慶大霉素(50jig/ml)和12%胎牛血清(FBS)的RPMI-1640/DMEM培養(yǎng)基混合物中。所有培養(yǎng)物在具有5%濕度的C02培養(yǎng)箱中于37'C溫育。為了測(cè)定IFN的抗增殖效應(yīng)，將細(xì)胞以5x1(T細(xì)胞/mL接種在96孔平板中。通過(guò)在接種后24小時(shí)更換新鮮培養(yǎng)基來(lái)使它們同步。在96小時(shí)溫育結(jié)束時(shí)，在不同濃度的IFN存在下利用結(jié)晶紫染色法來(lái)測(cè)定3次重復(fù)的評(píng)估實(shí)驗(yàn)條件的生存力，其中測(cè)量在580nm處的吸光度并利用平板閱讀器。結(jié)果定義為基于活細(xì)胞計(jì)數(shù)的生長(zhǎng)％:生長(zhǎng)％=(AT72小時(shí)-ACo小時(shí)/AC72小時(shí)一ACM、時(shí))x100，AT72,w=處理72小時(shí)的細(xì)胞的吸光度，AC72,j、w=處理72小時(shí)的對(duì)照細(xì)胞的吸光度，ACm,-在用IFN處理前的細(xì)胞的吸光度。在圖1中顯示了重組IFNY或ct對(duì)于瘢痕瘤CPF生長(zhǎng)的抗增殖作用。盡管在各種原代培養(yǎng)物中可以觀察到IFNy或oc2b抑制細(xì)胞增殖，而在其他中它們刺激其生長(zhǎng)。作為對(duì)照評(píng)估了FibN3和FibN5原代培養(yǎng)物，以及來(lái)自CBCIII活組織檢查物的原代培養(yǎng)物，和HEp-2、U1752和GL-5細(xì)胞系。實(shí)施例2:重組IFNy或oc對(duì)于建立的細(xì)胞系的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制。所研究的人細(xì)胞系是Jurkat(ATCC,TIB-152)、GL-5(PereaS.E.等人(1993)MinutesCientVenez,44:22-27)、HEp-2(ATCC，CCL23)。細(xì)胞GL-5培養(yǎng)在DMEM中，并且HEp-2培養(yǎng)在包含慶大霉素(50jig/ml)和10%FBS的MEM-CANE中。將Jurkat細(xì)胞溫育在具有慶大霉素和10%FBS的RPMI培養(yǎng)基中。所有培養(yǎng)物在具有5%濕度的C02培養(yǎng)箱中于37。C溫育。為了評(píng)估對(duì)于GL-5和HEp-2細(xì)胞的抗增殖效應(yīng)，將這些細(xì)胞以3xl(T細(xì)胞/mL接種。在Jurkat細(xì)胞的情況下，將其以1Q5細(xì)胞/mL接種。在不同濃度的IFN存在下溫育72小時(shí)后，利用結(jié)晶紫染色法評(píng)估3次重復(fù)的生存力，其中測(cè)量在580nm處的吸光度并利用平板閱讀器。如實(shí)施例l中描述的，將結(jié)果定義為基于活細(xì)胞計(jì)數(shù)的生長(zhǎng)％。如在表1和圖1中觀察到的，細(xì)胞系HEp-2(喉癌)和GL-5(來(lái)自成膠質(zhì)細(xì)胞瘤)對(duì)于IFNy非常敏感而對(duì)于IFNa不敏感。表l.100QIU/mLIFNy或IFNa2b對(duì)于細(xì)胞系的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制。IFN平均值標(biāo)準(zhǔn)差SD變異系數(shù)CV重復(fù)試驗(yàn)HEp-265%13.68%0.21162房y18%6.26%0.35762GL-571%20.26%0.28762房)/24%10.21%0.42142HepG2103%13.17%0.12861/My106%21.67%0.20461Jurkat60%5.28%0.08831房y107%16.89%0.15731在表1中觀察到，細(xì)胞系HepG2(肝瘤)對(duì)于這些IFN不敏感，并且在細(xì)胞系Jurkat(T淋巴瘤)中，IFNa是最有效的，該結(jié)果與IFNa2在治療來(lái)自淋巴組織的肺瘤中的成功利用相一致。實(shí)施例3:重組IFNY和a的組合對(duì)于原代培養(yǎng)物和細(xì)胞系具有更有效的抗增殖作用。利用CBC-III和瘢痕瘤(Kel-5a和Kel-17a)CPF以及細(xì)胞系HEp-2和GL-5，來(lái)對(duì)重組IFNy和ct2b的組合進(jìn)行研究，以限定具有抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的增效活性的最佳混合物。分析在所述研究中獲得的數(shù)據(jù)，以建立等效線圖。根據(jù)源自成人瘢痕瘤(kel5a和kel17a)的活組織檢查物的CPF的等效線圖研究，確定了，用于抑制生長(zhǎng)的最佳增效組合應(yīng)當(dāng)由100IU/mL(10ng/mL)IFNv和100IU/mL(0.5ng/mL)IFNoc2b組成。使用那種組合，細(xì)胞生長(zhǎng)在體外減少20%(Kel5a)和43%(Kel17a)(圖2和3)。在圖4的等效線圖中顯示了，100IU/mL(10ng/mL)IFNy和100IU/mL(0.5ng/mL)IFNct2b的組合是增效的，并且在減少CBCIII的體外細(xì)胞生長(zhǎng)中是最有效的，為47%。根據(jù)圖5中顯示的等效線圖，抑制GL-5細(xì)胞生長(zhǎng)的最佳增效組合是50IU/mL(3ng/mL)IFNy和600IU/mL(5ng/mL)IFNoc2b。使用那種組合，體外細(xì)胞生長(zhǎng)減少55%。在圖6中表示的等效線圖中，顯示了用于獲得對(duì)于HEp-2細(xì)胞的最佳抗增殖效應(yīng)的IFNy和a的最佳增效組合。IFN的量為5IU/mL(0.5ng/mL)IFNy和75IU/mL(0.375ng/mL)IFNot2b。使用那種最佳組合達(dá)到體外細(xì)胞生長(zhǎng)減少76%。實(shí)施例4:pH、離子種類(lèi)和緩沖溶液的濃度對(duì)于干擾素ct-2b和y在水溶液中的混合物的穩(wěn)定性的影響。為了研究重組干擾素y和a的增效組合的液體和凍干制劑的穩(wěn)定性，從它們?cè)诓煌脑囼?yàn)制劑中的相應(yīng)活性藥物成分(IFA)對(duì)IFN進(jìn)行稀釋緩沖溶液、具有單種賦形劑的緩沖溶液混合物和具有多種賦形劑的緩沖溶液混合物。對(duì)于不同制劑的小瓶的代表性樣品實(shí)施不同處理以評(píng)估干擾素的穩(wěn)定性?xún)鋈谘h(huán)、凍干、于37'C攪動(dòng)、光和溫度的影響。在不同的加工后，通過(guò)不同測(cè)定法來(lái)評(píng)估物理化學(xué)穩(wěn)定性物理外觀、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、反相液相層析(RP-HPLC)和分子排阻層析(ME-HPLC)。通過(guò)對(duì)于每應(yīng)的抑制的生物學(xué)測(cè)定法來(lái)評(píng)估生物學(xué)穩(wěn)定性。所有這些制劑設(shè)計(jì)研究使用中間濃度的干擾素的混合物(0.5miuIFNy和3.0MIUIFNcc2b)來(lái)進(jìn)行。使用獲得的制劑的最終變化形式(一式兩份地制備)，制備了增效組合物并評(píng)估了其穩(wěn)定性。感觀特征:通過(guò)對(duì)于制劑的外觀進(jìn)行分析來(lái)進(jìn)行測(cè)定(是否保持無(wú)色、透明和無(wú)蛋白質(zhì)聚集)。在凍干制劑中，還分析了凍干產(chǎn)物的外觀。水份含量:凍干產(chǎn)物的殘留水份的含量通過(guò)KarlFischer坱量滴定技術(shù)來(lái)進(jìn)行測(cè)定，其中使用濕度測(cè)量?jī)xRadiometer(ModelTIM550)?；瘜W(xué)穩(wěn)定性:蛋白質(zhì)的純度和降解程度在配備有C8Vydac柱防護(hù)裝置的C8Vydac柱(Vydac，Hesperia，CA)中通過(guò)RP-HPLC進(jìn)行測(cè)定，其中使用配備有溶劑釋放、二極管排列檢測(cè)器、烤箱和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)的Merck-HitachiHPLC系統(tǒng)。蛋白質(zhì)的純度還通過(guò)SDS-PAGE進(jìn)4亍測(cè)定。聚集物測(cè)定:重組IFNy和IFNcc2b的聚集通過(guò)分子排阻HPLC進(jìn)行測(cè)量，其中使用Superdex-75HR10/30柱(AmershamPharmaciaBiotechAB，Sweden)，以及配備有溶劑釋放系統(tǒng)、二極管排列檢測(cè)器、烤箱和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)的Merck-HitachiHPLC系統(tǒng)。共價(jià)聚集物的含量通過(guò)SDS-PAGE進(jìn)行測(cè)定。干擾素oc的ELISA:在我們的實(shí)驗(yàn)室中已開(kāi)發(fā)了這種測(cè)定法(H.Santana.，EspinoY.等人(1999)Asandwichtypeenzyme-linkedimmunosorbentassayfortheanalysisofrecombinanthumaninterferona-2b.BiotechnologyTechniques,13，341-346)。該測(cè)定法使用單克隆抗體并根據(jù)所報(bào)告的方法來(lái)進(jìn)行。測(cè)量結(jié)果在本文中報(bào)告為在來(lái)自每種制劑變化形式的不同樣品中干擾素a-2b的殘留ELISA活性的百分比，以最初樣品中的ELISA活性作為100%。干擾素y的elisa:在我們的實(shí)驗(yàn)室中已開(kāi)發(fā)了這種測(cè)定法(Bouy6nR.,SantanaH.等人(2003)Developmentandvalidationofanenzyme-1inkedimmunosorbentassay(ELISA)forrecombinanthumangammainterferon.JournalofImmunoassayandImmunochemistry,24:1-10)。該測(cè)定法使用單克隆抗體并根據(jù)所報(bào)告的方法來(lái)進(jìn)行。測(cè)量結(jié)果在本文中報(bào)告為在來(lái)自每種制劑變化形式的不同樣品中干擾素Y的殘留ELISA活性的百分比，以最初樣品中的elisa活性作為100%?？共《旧锘钚缘亩?生物活性的測(cè)量如FerreroJ.,OchagaviaME.等人(1994,Titulaci6ndelaactividadantiviraldelinterfer6nutilizandoelsistemadeequiposSUMA."/ofeci3o/c^'aJ/7//cacra，11:34-42)所述的來(lái)進(jìn)行。生物活性的計(jì)算如FerreroJ.,DuanyL.等人(1997，Nuevoprogramadecdlculo，cuantificaci6ndelaactividadantiviraldeinterferonesmediantelainhibici6ndelefectocitopatog6nicoutilizandoelsistemadeequiposSUMA.5/c^ec/7o/柳'ajp//ca^3，14:267-269)所述的來(lái)進(jìn)行。在本文中將生物活性報(bào)告為殘留生物活性的百分比，以最初樣品的生物活性作為100%。為了了解pH在活性成分的穩(wěn)定性中的影響，制備了在不同緩沖溶液中包含0.5miuifny和3.omiuifna2b的不同制劑；即，檸檬酸鹽/砩酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液和乙酸鹽緩沖液。制備包含重組IFNy和IFNa2b的混合物與緩沖溶液的制劑并對(duì)其實(shí)施凍融循環(huán)或貯存于45x:，并且以不同時(shí)間間隔通過(guò)ELISA進(jìn)行分析。將這些制劑制備為具有4-8的pH，并且所有緩沖溶液濃度為0.1M。表2、3和4報(bào)告了在3次凍融循環(huán)后和以確定的時(shí)間間隔，于45。c從3-12天進(jìn)行的測(cè)定法的結(jié)果。表2.在不同pH的0.1M檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖水溶液中，重組IFNy和IFNa2b混合物(0.5MIUIFNy和3.0MIUIFNa2b)于45'C和在凍融循環(huán)期間的穩(wěn)定性。IFNy和IFNa2b的濃度以百分比(％)表示。<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>表3.在不同pH的0.1M磷酸鹽緩沖水溶液中，重組IFNy和IFNot2b混合物(0.5MIUIFNy和3.0MIUIFNot2b)于45。C和在凍融循環(huán)期間的穩(wěn)定性。IFNy和IFNot2b的濃度以百分比(％)表示。<table>complextableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>D=天；ND=無(wú)法測(cè)定。IFN/5=在磷酸鹽緩沖液pH5.0中的制劑；IFN/6=在磷酸鹽緩沖液pH6.0中的制劑；IFN/7=在磷酸鹽緩沖液pH7.0中的制劑；IFN/8=在磷酸鹽緩沖液pH8.0中的制劑。來(lái)自這些表(2、3、4)的數(shù)據(jù)表明，具有5-8的pH值的制劑在凍融循環(huán)期間具有足夠的穩(wěn)定性，優(yōu)選地對(duì)于接近于5和7的pH和在乙酸鹽、磷酸鹽和檸檬酸鹽-磷酸鹽緩沖液中。對(duì)于5-5.6的pH值，在水溶液中的熱穩(wěn)定性更大，優(yōu)選地在乙酸鹽和磷酸鹽緩沖液中。來(lái)自表5的數(shù)據(jù)表明，緩沖劑濃度較高的制劑在pH5.5下在凍融循環(huán)期間顯示出比濃度較低的那些制劑更好的穩(wěn)定性，特別是對(duì)于在不同的評(píng)估緩沖液中的IFNy。然而，在pH5.5下熱穩(wěn)定性的結(jié)果在乙酸鹽緩沖液中更好，隨后為磷酸鹽。未觀察到對(duì)于濃度的依賴(lài)性。在檸檬酸鹽-磷酸鹽緩沖液中的熱穩(wěn)定性在低濃度的緩沖液中更好。表4.在不同pH的0.1M檸檬酸鹽緩沖和乙酸鹽緩沖水溶液中，重組IFNy和IFNa2b混合物(0.5MIUIFNy和3.0MIUIFNa2b)于45X:和在凍融循環(huán)期間的穩(wěn)定性。IFNy和IFNa2b的濃度以百分比(％)表示。<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表5.在不同濃度的檸檬酸鹽-磷酸鹽、磷酸鹽和乙酸鹽緩沖水溶液pH5.5中，重組IFNy和IFNa2b混合物(0.5MIUIFNy和3.0MIUIFNa2b)<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>IFN/Fk25:在磷酸鉀緩沖液(pH5.5，25mM)中的制劑；IFN/Fk50:在磷酸鉀緩沖液(pH5.5，50mM)中的制劑；IFN/FklOO:在磷酸鉀緩沖液(pH5.5，100mM)中的制劑；IFN/FNa25:在磷酸鈉緩沖液(pH5.5，25mM)中的制劑；IFN/FNa50:在磷酸鈉緩沖液(pH5.5,50mM)中的制劑；IFN/FNa100:在磷酸鈉緩沖液(pH5.5，100mM)中的制劑；IFN/A25:在乙酸鹽緩沖液(pH5.5，25mM)中的制劑；IFN/A50:在乙酸鹽緩沖液(pH5.5，50mM)中的制劑；IFN/A100:在乙酸鹽緩沖液(pH5.5，100mM)中的制劑。實(shí)施例5:凍干的制劑(1.4x106IUIFNy和1.7x106IUIFNoc2b/瓶)。組成2.8x108IUIFNy、3.4x108IUIFNot2b、0.0802g磷酸二氫鉀、0.249g二水合磷酸氫二鈉、4g蔗糖、Q.8g甘氨酸、0.03gTween20、1g聚乙二醇6000、對(duì)于100mL來(lái)說(shuō)足夠量的注射用水。測(cè)量除干擾素外的所有組分并用注射用水進(jìn)行稀釋。檢查溶液的pH，并且必要時(shí)用稀釋的(1:2)乙酸或用1MNaOH調(diào)整至7.2±0.2的值。添加IFNy和IFNot2b的活性藥物成分并稀釋至合適的濃度。將溶液過(guò)濾成無(wú)菌形式，并且裝入小瓶中并在IOO級(jí)區(qū)域中蓋上塞子以進(jìn)行凍干。小瓶通過(guò)IOO級(jí)隧道進(jìn)行輸送并置于凍干儀中，在那里實(shí)施凍干過(guò)程。最終，將小瓶覆蓋并密封；并將產(chǎn)物貯存于2-8TC。表6顯示了所使用的凍干循環(huán)的主要參數(shù)。表6.凍干循環(huán)的參數(shù)概括。每個(gè)時(shí)期的溫度的計(jì)時(shí)圖(chronogram)。<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>以確定的時(shí)間間隔，獲取樣品并分析產(chǎn)物的殘留水份含量、IFNy和IFNa2b的含量(經(jīng)由ELISA)、生物活性、純度(經(jīng)由RP-HPLC)以及凍干和重構(gòu)的產(chǎn)物的外觀。結(jié)果呈現(xiàn)于表7中。表7.產(chǎn)物的殘留水份含量、IFNy和IFNct2b的含量、生物活性、純度(經(jīng)由RP-HPLC)的數(shù)據(jù)。溫度5'C。凍干制劑1.4MIUIFNy和1.7MIUIFNot2b/瓶。<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>*填充體積為0.5mL/瓶；STI:均勻的、白色的、凍干的；重構(gòu)后,透明的無(wú)色溶液，基本上不含顆粒。實(shí)施例6:凍干的制劑(0.5x106IUIFNy和3.0x106IUIFNa2b/瓶)。組成1.0x108IUIFNy、6.0x108IUIFNa2b、0.0802g磷酸二氫鉀、0.249g二水合磷酸氫二鈉、4g蔗糖、0.8g甘氨酸、0.03gTween20、1g聚乙二醇6000、對(duì)于100mL來(lái)說(shuō)足夠量的注射用水。制備方法與在實(shí)施例5的凍干制劑中描述的相同。以確定的時(shí)間間隔，獲取樣品并分析產(chǎn)物的殘留水份含量、IFNY和IFNa2b的含量(經(jīng)由ELISA)、生物活性、純度(經(jīng)由RP-HPLC)以及凍干和重構(gòu)的產(chǎn)物的外觀。結(jié)果呈現(xiàn)于表8中。表8.產(chǎn)物的殘留水份含量、IFNy和IFNa2b的含量、生物活性、純度(經(jīng)由RP-HPLC)的數(shù)據(jù)。溫度5'C。凍干制劑0.5MIUIFNy和3.OMIUIFNoc2b/瓶。<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>*填充體積為O.5mL/瓶；STI:均勻的、白色的、凍干的；重構(gòu)后，透明的無(wú)色溶液，基本上不含顆粒。實(shí)施例7:使用凍干的穩(wěn)定藥物制劑(0.5x106IUIFNy和3.0x106IUIFNoc2b/瓶)的臨床試驗(yàn)。在CBC中于損傷內(nèi)應(yīng)用。實(shí)施例6中描述的穩(wěn)定的凍干藥物制劑用于實(shí)施三盲、具有對(duì)照、隨機(jī)化的臨床試驗(yàn)，所述臨床試驗(yàn)包括59位患者，他們經(jīng)臨床和組織學(xué)診斷出具有有著直徑小于4厘米的損傷的皮膚的任何部位和類(lèi)型的CBC。通過(guò)隨機(jī)化將患者分配至3個(gè)治療組。組I、II和III分別用一半劑量的重組IFNoc2b(1.5x106IU/mL);或重組IFNy(0.25x106IU/mL);或穩(wěn)定的凍干制劑(0.5x106IU/mLIFNy和3.0x106IU/mLIFNa2b/瓶)以損傷內(nèi)的方式來(lái)治療損傷。IFN在連續(xù)3周期間每周應(yīng)用3次，在繼續(xù)的9周期間每周l次，或者直至損傷完全消失，在那時(shí)評(píng)估治療的臨床功效。使用IFNa2b、IFNv和所述制劑(O.5xl06IU/mLIFNy和3.0x106IU/mLIFNot2b/瓶)的組分別有9.5%、35.3%和5.3%的損傷在損傷大小減少方面少于50%。在剩余的損傷中，觀察到90.5o/。、57.9°/。和94.7%(分別為組I、II和III)的客觀應(yīng)答(完全消失或減少超過(guò)起始大小的50%)。損傷無(wú)一進(jìn)一步發(fā)展(參見(jiàn)表9)。在"未結(jié)束治療的患者"的層面中，觀察到使用該制劑進(jìn)行治療的優(yōu)越性(相對(duì)于使用IFNct2b的治療而言17%的差異，和相對(duì)于IFNy而言27%的差異)，所述制劑包含具有增效的抗增殖效應(yīng)的重組IFNy和a2b。在"具有少于11周的治療的患者"的層面中，觀察到該制劑的優(yōu)越性(相對(duì)于IFNy而言約30%的差異，和相對(duì)于IFNot2b而言27%的差異)，以及更高的完全應(yīng)答比例(相對(duì)于IFNoc2b而言>40%的優(yōu)越性，和相對(duì)于IFNy治療而言〉30。/。)。關(guān)于具有少于12次注射的患者，在使用該制劑的治療組中達(dá)到100%的有利應(yīng)答(其中50%是完全應(yīng)答)。在其他2個(gè)治療組中，有利應(yīng)答的百分比為67%(其中33.3%是完全應(yīng)答)，即達(dá)到約33%的差異，這支持了聯(lián)合療法。參見(jiàn)表9。表9.根據(jù)治療時(shí)間進(jìn)行分層次的臨床應(yīng)答的評(píng)估,所述治療使用一半劑量的凍干制劑<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>如在表10中可以觀察到的，使用包含重組IFNy和a2b的穩(wěn)定的凍干制劑，可以在比使用分開(kāi)的所述干擾素更短的時(shí)間內(nèi)獲得臨床完全應(yīng)答，相對(duì)于IFNct而言具有提前約4周的差異。表IO.關(guān)于到達(dá)完全應(yīng)答時(shí)所需時(shí)間的評(píng)估。使用一半劑量的凍干制<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>沒(méi)有在治療病例中觀察到瘢痕瘤的形成，相反地所有治療病例具有損傷的良好疤痕形成，其具有正常的敏感性、正常或輕微降低的彈性且不存在干燥、脆性和粗糙。就顏色而言，在大多數(shù)用該制劑治療的患者中觀察到在治療部位處的正常著色(47.4%)，這是在使用IFNot的組中所觀察到的結(jié)果(28.6%)的2倍。在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，在用該制劑治療的組中，相對(duì)于用單獨(dú)的IFNoc2b治療的組(52.4%)，觀察到更大百分比的平坦傷口(63.2%),這顯示在表ll中。表ll.在治療結(jié)束時(shí)的美學(xué)評(píng)估。使用一半劑量的凍干制劑進(jìn)行治療0.5MIUIFNy和3.0MIUIFNot2b/瓶。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>干擾素的組合沒(méi)有促進(jìn)不利事件，因?yàn)榫退鼈兊漠a(chǎn)生或強(qiáng)度而言，在治療組之間沒(méi)有檢測(cè)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。一般而言，它們是輕微(71.2%)或中等的并且是良好耐受的。它們自身不呈現(xiàn)嚴(yán)重或非常嚴(yán)重的不利事件(表12)。表12.不利事件的頻率(相對(duì)于檢測(cè)到的不利事件總數(shù)目而言的％)。使用一半劑量的凍干制劑進(jìn)行治療0.5MIUIFNy和3.0MIUIFNot2b/瓶。<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>如在這個(gè)表中可以觀察到的，每個(gè)治療組中最常見(jiàn)的不利事件是發(fā)熱(38.5%;60.8%和26.2%)、肌痛(38.5%;3.9%和31%)和寒戰(zhàn)(12.8%;19.6%和21.4%)，分別對(duì)于IFNa、IFNy和所述組合。所呈現(xiàn)的不利事件總計(jì)在用IFNy治療的患者組中略微更嚴(yán)重。一般而言，相對(duì)于IFNct組，聯(lián)合治療達(dá)到32%的完全應(yīng)答的優(yōu)越性、提前約4周和具有少于25%的注射。該組合不促進(jìn)不利事件，并且對(duì)于具有完全臨床應(yīng)答的患者，在結(jié)束治療后l年進(jìn)行隨訪期間沒(méi)有發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)。從美容觀點(diǎn)來(lái)看，該結(jié)果非常好，主要導(dǎo)致平坦且常色的傷口。實(shí)施例8:在具有對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)治療不易感的皮膚腫瘤患者中重組IFNy和a2b混合物的同情使用的結(jié)果。病例報(bào)告?；颊?初始EPRHC:302396年齡82歲性別男先前個(gè)人病理學(xué)(APP):n/r于17/10/01移交至NationalInstituteofOncologyandRadiology(IN0R)，在胸的前區(qū)具有皮膚腫瘤，已接受電灼療法治療，這之后以潰瘍形式生長(zhǎng)，已于03/07/01手術(shù)切除。結(jié)果棘細(xì)胞癌不完全切除。該患者在原始腫瘤的位置處達(dá)到3cin的持續(xù)性腫瘤損傷，具有高的邊緣。在物理觀察時(shí)未呈現(xiàn)區(qū)域性的轉(zhuǎn)移性神經(jīng)節(jié)。對(duì)腫瘤進(jìn)行了放射療法，并于29/01/02結(jié)束6°Co50Gy+X-射線12Gy。總劑量/腫瘤為62Gy。一個(gè)月后，該患者顯示出使固定至鎖骨和胸鎖乳突肌的下三分之一處的腫瘤。在短時(shí)間內(nèi)，腫瘤繼續(xù)快速生長(zhǎng)，于04/03/02顯示出在右鎖骨的中間三分之一、頸底部和部分胸骨上的10x8cm的大潰瘍傷口，全都朝向胸的前部。建議對(duì)其進(jìn)行手術(shù)干預(yù)。他的家人拒絕進(jìn)行手術(shù)干預(yù)，因?yàn)樗?2歲并具有高手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。然后，推薦使用IFN進(jìn)4亍損傷內(nèi)治療。具有大尺寸(12.5x9cni和厚度1-1.5cm)的腫瘤固定至骨和肌肉。計(jì)劃將IFN應(yīng)用在周長(zhǎng)的3個(gè)扇區(qū)中。每個(gè)扇區(qū)以在約5cm3的組織(1.5x1.5x1.5)中用1.5mL溶液進(jìn)行浸潤(rùn)，采用在6mL注射用水中的0.5x106IUIFNy+6x106IUIFNa2b的劑量，每周3次，共3周(圖7a)。在第5次應(yīng)用產(chǎn)物(第2周)后，決定應(yīng)用更高劑量的IFNY(2倍，1x106IU)。提議逐步增加劑量，以試圖獲得對(duì)如此大的腫瘤的更佳結(jié)果，因?yàn)樵谙惹皠┝恐胁淮嬖诓涣夹?yīng)，以及根據(jù)其中證明了這兩種干擾素的增效效應(yīng)的臨床研究的先前信息。總之，該患者在2個(gè)月的治療中接受了總劑量25x106IUIFNY+162x106IUIFNot2b的27次應(yīng)用。在第5次應(yīng)用中，注意到傷口邊緣變平至正常皮膚的水平(圖7b)。治療開(kāi)始后l個(gè)月，該患者提到右上肢的強(qiáng)烈疼痛，觀察到臂神經(jīng)叢的浸潤(rùn)，鎖骨的暴露、壞死和骨折。在第20次應(yīng)用時(shí)，觀察到在注射位置處腫瘤生長(zhǎng)停止，但在其中以葉樣形狀生長(zhǎng)的腫瘤中心處并非如此(圖7c)。甚至在第24次應(yīng)用時(shí)也觀察到這種情況。此外在肺瘤潰瘍的中心處出現(xiàn)敗血癥和壞死。治療開(kāi)始后正好2個(gè)月(第27次應(yīng)用)，該患者遭受經(jīng)由鎖骨下動(dòng)脈的浸潤(rùn)而引起的強(qiáng)烈動(dòng)脈出血；該患者的血紅蛋白降低至80g/L，并且治療中斷15天，在這結(jié)束時(shí)由于持續(xù)出血和具有進(jìn)行性衰弱而恢復(fù)。該患者2個(gè)月后由于動(dòng)脈破裂而死亡。注射部位維持無(wú)胂瘤生長(zhǎng)。在前8次應(yīng)用中，記錄了某些不利事件如發(fā)熱(39。C)、寒戰(zhàn)、損傷周?chē)募t斑和衰弱，但所有這些具有輕微強(qiáng)度和是短期的。結(jié)論在注射位置處達(dá)到了臨床應(yīng)答，持續(xù)至少2個(gè)月，不良效應(yīng)不顯著。患者2初始LGRHC:158390年齡65歲性別女，APP:n/r患者遭受基于全臉的多發(fā)性癌。該患者在具有移植物的左眼的下眼瞼中進(jìn)行幾次手術(shù)千預(yù)和輻射。目前顯示出在眼瞼邊緣處具有直徑5mm的肺瘤復(fù)發(fā)和在眼瞼下朝向顴骨處具有另一個(gè)平坦的疤痕樣傷口(圖8a)。備選治療將是進(jìn)行新的手術(shù)，而反對(duì)理由是已是多次治療的病例。在同一眼的上眼瞼中具有另一個(gè)先前未治療的7mm的基底癌。于08/05/02提議用IFN進(jìn)行損傷內(nèi)治療(在4mL中的0.5x106IUIFNy+3x106IUIFNoc2b，每周3次，共3周)。總之，該患者接受總劑量為35x106IU干擾素(5x106IUIFNy+30x106IUIFNa卩b)的IO次應(yīng)用。在四分之一浸潤(rùn)中，皰痕樣傷口消失并且在眼瞼中在腫瘤位置處具有壞死的潰瘍(圖8b)。治療后2個(gè)月，觀察到在眼瞼中沒(méi)有腫瘤和顴骨的疤痕樣平坦傷口消失(圖8c)。獲得局部-區(qū)域性效應(yīng)。觀察到左眼的上眼瞼的基底癌減少50%,所述基底癌未用IFN直接治療而是手術(shù)切除。3年后，該患者仍保持用IFN浸潤(rùn)的損傷的控制。記錄了輕微強(qiáng)度和短期的某些不利事件，例如發(fā)熱(39°C)、寒戰(zhàn)和在接受治療的眼中的結(jié)膜水腫(其使用冷敷而減輕)。結(jié)論患者直至2005年8月(最后1次控制)具有完全的臨床應(yīng)答，具有最低限度的不良效應(yīng)。實(shí)施例9:凍干的制劑(0.5x106IUIFNy和lOx106IUIFNcx2b/瓶)。組成1.0x108IUIFNy、20x108IUIFNcc2b、0.0802g磷酸二氫鉀、0.249g二水合磷酸氫二鈉、4g蔗糖、0.8g甘氨酸、0.03gTween20、lg聚乙二醇6000、對(duì)于100mL來(lái)說(shuō)足夠量的注射用水。制備方法與在實(shí)施例5的凍干制劑中描述的相同。以確定的時(shí)間間隔，獲取樣品并分析產(chǎn)物的殘留水份含量、IFNY和IFNot2b的含量(經(jīng)由ELISA)、生物活性、純度(經(jīng)由RP-HPLC)以及凍干和重構(gòu)的產(chǎn)物的外觀。結(jié)果呈現(xiàn)于表13中。表13.產(chǎn)物的殘留水份含量、IFNy和IFNoc2b的含量、生物活性、純度(經(jīng)由RP-HPLC)的數(shù)據(jù)。溫度5匸。凍千制劑0.5MIUIFNy和lO.0MIUIFNoc2b/瓶。<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>*填充體積為0.5mL/瓶；STI:均勻的透明的無(wú)色溶液，基本上不含顆粒。白色的、凍干的；重構(gòu)后實(shí)施例10:與順柏相組合地使用由0.5MIUIFNy和10.0MIUIFNot2b/瓶組成的穩(wěn)定的凍千制劑。病例報(bào)告?；颊?初始JGAHC:年齡33歲性別男APP:n/r在INOR中患者被記錄為具有穿透左眼的內(nèi)角(internalangle)的基底細(xì)胞癌，接受了幾次手術(shù)干預(yù)和輻射。目前，該患者具有到達(dá)頭骨底部的骨的發(fā)生潰瘍的腫瘤(圖9a)。通過(guò)軸向計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)(TAC)進(jìn)行驗(yàn)證，觀察到在鼻和眼眶內(nèi)壁的自身骨中的腔，對(duì)于左鼻孔而留下的無(wú)法忍受的惡臭，和相同位置處的膿性的黃色分泌物。由于傷口擴(kuò)大，決定進(jìn)行使用下述的聯(lián)合治療以21天的間隔用6個(gè)循環(huán)的劑量的順柏進(jìn)行全身性化學(xué)療法，和同時(shí)局部用該制劑(0.5MIUIFNy和10.0MIUIFNcc2b/瓶)進(jìn)行浸潤(rùn)，每周3次，共3周。在第3次應(yīng)用結(jié)束時(shí)，已經(jīng)觀察到顯著的部分臨床應(yīng)答，其允許眼瞼打開(kāi)和惡臭減少。同時(shí)呈現(xiàn)出中等強(qiáng)度的結(jié)膜水腫。在l個(gè)月后觀察到完全的臨床應(yīng)答。保持這種應(yīng)答，直至化學(xué)療法結(jié)束。不利事件很少，稍微有點(diǎn)發(fā)熱和寒戰(zhàn)以及在傷口的疤痕位置處提及的疼痛。1年后該患者保持完全的臨床應(yīng)答(圖9b)。實(shí)施例11:液體的穩(wěn)定藥物制劑(1.4x106IUIFNy和1,7x106IUIFNa2b/瓶)。組成2.8x108IUIFNy、3.4x108IUIFNa2b、0.708g乙酸鈉、0.079mL乙酸、0.01gTween20、5g甘露醇、對(duì)于100mL來(lái)說(shuō)足夠量的注射用水。測(cè)量除干擾素外的所有組分并用注射用水進(jìn)行懸浮。檢查溶液的pH,并且必要時(shí)用稀釋的乙酸(1:2)或用1MNaOH調(diào)整至5.5±0.2的值。添加重組IFNy和IFNoc2b的活性藥物成分并稀釋至合適的濃度。將溶液過(guò)濾成無(wú)菌形式。將該制劑裝入小瓶中并且在100級(jí)區(qū)域中覆蓋和密封。最終，將產(chǎn)物貯存于2-8C。從制備的制劑中獲取幾個(gè)樣品，并于2'C和8'C貯存6個(gè)月的時(shí)間。以確定的時(shí)間間隔，獲取樣品并分析產(chǎn)物的殘留水份含量、IFNY和IFNot2b的含量(經(jīng)由ELISA)、生物活性、純度(經(jīng)由RP-HPLC)以及凍干和重構(gòu)的產(chǎn)物的外觀。結(jié)果呈現(xiàn)于表14中。表14.產(chǎn)物的pH、IFNy和IFNct2b的含量、生物活性、純度(經(jīng)由RP-HPLC)的數(shù)據(jù)。溫度5'C。液體制劑1.4MIUIFNy和1.7MIUIFNoc2b/瓶。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>*填充體積為0.5mL/瓶；STI:透明的無(wú)色溶液，基本上不含顆粒。實(shí)施例12:液體的穩(wěn)定藥物制劑(0.5x106IUIFNy和3.0x106IUIFNa2b/瓶)。組成2，0x108IUIFNy、12.0x108IUIFNoc2b、0.708g乙酸鈉，0.079mL乙酸、0.01gTween20、5g甘露醇、對(duì)于100mL來(lái)說(shuō)足夠量的注射用水。制備方法與在實(shí)施例11的液體制劑中描述的相同。以確定的時(shí)間間隔，獲取樣品并分析產(chǎn)物的IFNy和IFNa2b的含量(經(jīng)由ELISA)、生物活性、純度(經(jīng)由RP-HPLC)和溶液的澄清度。結(jié)果呈現(xiàn)于表15中。<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>表16.產(chǎn)物的pH、IFNy和IFNoc2b的含量、生物活性、純度(經(jīng)由RP-HPLC)的數(shù)據(jù)。溫度5。C。液體制劑0.5MIUIFNy和lO.0MIUIFNa2b/瓶。<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>*填充體積為0.5mL/瓶；STI:透明的無(wú)色溶液，基本上不含顆粒。實(shí)施例14:半固體的藥物制劑(0.16x106IUIFNy和1.0x106IUIFNcc2b/克半固體)。用于局部應(yīng)用的藥物制劑，優(yōu)選地如乳骨、油骨或凝膠。該藥物制劑包含重組干擾素y和干擾素ct2作為有效成分。組成為1.6x107IUIFNy和lx108IUIFNct2b，這是對(duì)于100克半固體來(lái)說(shuō)足夠的量。乳膏的制備:為了制備乳青，于75'C融化固體凡士林和鯨蠟醇，并通過(guò)持續(xù)攪動(dòng)進(jìn)行混合，維持至過(guò)程結(jié)束。一旦經(jīng)均質(zhì)化，就將Tween60摻入至該混合物中。另一方面，將對(duì)羥基苯甲酸甲酯和丙酯溶解于90C的水中，并且在溫度降低至75。C時(shí)摻入至先前的混合物中。隨后使該乳狀液緩慢冷卻直至37'C,并摻入至包含重組IFNy和IFNcc2b的水溶液中。在15g管中，將所得到的乳骨貯存于41C(參見(jiàn)表17)。表17.乳青制劑的成分。<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>油膏的制備:在一個(gè)容器中，將對(duì)羥基苯甲酸酯溶解于90'C的水中，并放置冷卻至37'C。在另一個(gè)容器中，在持續(xù)攪動(dòng)下將液體礦脂和Span20混合。隨后，將2個(gè)容器中的內(nèi)容物混合，并且在溫度已降低至37。C以下時(shí)摻入重組IFNy和IFNoc2b，維持持續(xù)攪動(dòng)。隨后摻入白色礦脂直至達(dá)到均質(zhì)化。在15g管中，將所得到的油青貯存于4'C(參見(jiàn)表18)。表18.油骨制劑的成分。<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>凝膠的制備:將EDTA、對(duì)羥基苯甲酸酯和乙醇溶解于分開(kāi)的容器中，并隨后添加丙二醇。然后在持續(xù)攪動(dòng)下將這些溶液混合，并在劇烈攪動(dòng)下緩慢摻入卡波普940，直至獲得不存在團(tuán)塊的渾濁的分散液。另外在合適的容器中制備1N氫氧化鈉溶液，并在攪動(dòng)下緩慢加入至包含該制劑的其余組分的分散液中。然后，在溫和攪動(dòng)下?lián)饺隝FNy和IFNa2b。一旦形成凝膠，就于4。C裝入15g管中(參見(jiàn)表19)。表19.凝膠制劑的成分。<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>權(quán)利要求1.通過(guò)腸胃外(液體或凍干的)或局部(凝膠、油膏或乳膏)途徑應(yīng)用的穩(wěn)定藥物制劑，其包含增效比例的不同量的重組干擾素γ和α以用于治療特征在于組織或器官的惡性或良性非生理學(xué)細(xì)胞生長(zhǎng)的病理學(xué)事件，并且其另外還包含藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體。2.權(quán)利要求1的凍干的穩(wěn)定藥物制劑，其包含緩沖溶液以及至少一種選自非還原糖化合物、氨基酸、表面活性劑和穩(wěn)定化聚合物的組分。3.權(quán)利要求2的凍干的穩(wěn)定藥物制劑，其中使用具有維持pH4.9-7.5的能力的緩沖溶液，例如乙酸銨或鈉、琥珀酸鈉、砩酸鈉和/或鉀和檸檬酸-磷酸鈉，其中使用蔗糖或海藻糖作為非還原糖，使用甘氨酸、組氨酸或亮氨酸作為氨基酸，使用聚山梨酯20或聚山梨酯80作為表面活性劑，和使用聚乙二醇或葡聚糖或羥乙基淀粉作為穩(wěn)定化聚合物。4.權(quán)利要求3的凍干的穩(wěn)定藥物制劑，其中以10-20mM的濃度范圍使用緩沖溶液；其中以5-100mg/mL的濃度范圍使用蔗糖或海藻糖；其中以l-20mg/mL的濃度范圍使用甘氨酸、組氨酸或亮氨酸；其中以0.01-1mg/mL的濃度范圍使用聚山梨酯；和其中以5-50rag/mL的濃度范圍使用聚乙二醇、葡聚糖或羥乙基淀粉。5.權(quán)利要求2的凍干的穩(wěn)定藥物制劑，其由下述成分組成濃度范圍為5.6x108IU-1.4x108IU的IFNy和濃度范圍為6.8x108IU-1.7x10sIU的IFNoc2、0.0802g磷酸二氫鉀、0.249g二水合磷酸氫二鈉、4g蔗糖、0.8g甘氨酸、0.03gTween20、1g聚乙二醇6000和對(duì)于100mL來(lái)說(shuō)足夠量的注射用水，并且對(duì)于0.5mL、1mL、5mL和10mL采用各自的等價(jià)比例。6.權(quán)利要求2的凍干的穩(wěn)定藥物制劑，其由下述成分組成對(duì)于100mL來(lái)說(shuō)，濃度范圍為2.0x108IU-0.5x108IU的IFNy和濃度范圍為12.0x108IU-3.0x108IU的IFNa2、0.0802g磷酸二氫鉀、0.249g二水合磷酸氫二鈉、4g蔗糖、0.8g甘氨酸、0.03gTween20、1g聚乙二醇6000和對(duì)于100mL來(lái)說(shuō)足夠量的注射用水，并且對(duì)于0.5mL、1mL、5mL和lOmL采用各自的等價(jià)比例。7.權(quán)利要求2的凍干的穩(wěn)定藥物制劑，其由下述成分組成濃度范閨為4.0x10sIU-1.0x108IU的IFNy和濃度范圍為80x108IU-20x108IU的IFNcc2、0.0802g磷酸二氬鉀、0.249g二水合磷酸氬二鈉、4g蔗糖、0.8g甘氨酸、0.03gTween20、lg聚乙二醇6000和對(duì)于100mL來(lái)說(shuō)足夠量的注射用水，并且對(duì)于0.5raL、1mL、5mL和10mL采用各自的等價(jià)比例。8.權(quán)利要求1的液體的穩(wěn)定藥物制劑，其包含緩沖溶液以及至少一種選自非還原糖化合物、氨基酸、表面活性劑、穩(wěn)定化聚合物、螯合/抗氧化化合物和等滲劑的組分，該液體制劑使用水性溶劑，所述水性溶劑可以包含或不包含防腐劑例如對(duì)羥基苯甲酸曱酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯的混合物。9.權(quán)利要求8的液體的穩(wěn)定藥物制劑，其中使用具有維持pH4.9-6.5的能力的緩沖溶液，例如乙酸銨或鈉、琥珀酸鈉、磷酸鈉和/或鉀和檸檬酸鹽-磷酸鹽，和其中使用聚山梨酯20或聚山梨酯80作為表面活性劑；使用EDTA或乙?；?半胱氨酸作為抗氧化劑/螯合劑；使用組氨酸、L-精氨酸、L-丙氨酸、甘氨酸或賴(lài)氨酸作為氨基酸；使用羥乙基淀粉或葡聚糖作為穩(wěn)定化聚合物；和使用氯化鈉、氯化鉀、丙二醇、甘露醇、甘油、蔗糖或海藻糖作為等滲劑。10.權(quán)利要求9的液體的穩(wěn)定藥物制劑，其中以10-100mM的濃度范圍使用緩沖溶液；其中以0.01-1mg/mL的濃度范圍使用聚山梨酯；其中以O(shè).01-1mg/mL的濃度范圍使用EDTA或乙?；?半胱氨酸；以l-20mg/mL的濃度范圍使用組氨酸、L-精氨酸、L-丙氨酸、甘氨酸或賴(lài)氨酸；以5-50mg/mL的濃度范圍使用羥乙基淀粉和葡聚糖；和其中等滲劑的量足以使得所述溶液為等滲的。11.權(quán)利要求9的液體的穩(wěn)定藥物制劑，其由下述成分組成濃度范圍為5.6x108IU-1.4x108IU的IFNy和濃度范圍為6.8x108IU-1.7x108IU的IFNot2、0.708g乙酸鈉、0.079mL乙酸、0.01gTween20、5g甘露醇和對(duì)于100mL來(lái)說(shuō)足夠量的注射用水，并且對(duì)于0.5mL、1mL、5mL和10mL采用各自的等價(jià)比例。12.權(quán)利要求9的液體的穩(wěn)定藥物制劑，其由下述成分組成濃度范圍為2.0x10sIU-0.5x108IU的IFNy和濃度范圍為12.0x108IU-3.0x108IU的IFNot2、0.708g乙酸鈉、0.079mL乙酸、0.01gTween20、5g甘露醇和對(duì)于100mL來(lái)說(shuō)足夠量的注射用水，并且對(duì)于0.5mL、1mL、5mL和10mL采用各自的等價(jià)比例。13.權(quán)利要求9的液體的穩(wěn)定藥物制劑，其由下述成分組成濃度范圍為4.0x108IU-l.0x108IU的IFNy和濃度范圍為80x108IU-20x108IU的IFNa2、0.708g乙酸鈉、0.079mL乙酸、0.01gTween20、5g甘露醇和對(duì)于100mL來(lái)說(shuō)足夠量的注射用水，并且對(duì)于0.5mL、1mL、5mL和10mL采用各自的等價(jià)比例。14.權(quán)利要求1-13的穩(wěn)定藥物制劑，其獨(dú)立地或與化學(xué)療法、放射療法或兩者的組合聯(lián)合用于治療惡性或良性實(shí)體瘤。15.權(quán)利要求14的穩(wěn)定藥物制劑，其用于治療喉癌、喉乳頭狀瘤病、急性髓細(xì)胞性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、急性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、T細(xì)胞白血病、B細(xì)胞白血病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、脂肪瘤、表皮樣嚢腫、真皮內(nèi)嚢腫、脂肪肉瘤、神經(jīng)纖維瘤、皮脂增生、海綿狀血管瘤、肝細(xì)胞腺瘤、局灶性結(jié)節(jié)性增生、星形細(xì)胞瘤、多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、室管膜細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)瘤、青少年纖維性星形細(xì)胞瘤、混合性神經(jīng)膠質(zhì)瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、視神經(jīng)神經(jīng)膠質(zhì)瘤、脊索瘤、顱咽管瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、腦膜瘤、松果體瘤、垂體腺瘤、原始神經(jīng)外胚層瘤、聽(tīng)神經(jīng)瘤、血管腫瘤、腦脊膜癌病、神經(jīng)纖維瘤病、腦假瘤、結(jié)節(jié)狀硬化、轉(zhuǎn)移性腦腫瘤、櫻桃樣血管瘤、皮脂腺增生、基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、皮膚纖維瘤、膿性肉芽腫、真皮痣、脂溢性角化病、光化性角化病。16.權(quán)利要求1-13的穩(wěn)定藥物制劑，其用于治療增生性事件例如纖維化、發(fā)育異常和增生。17.權(quán)利要求1-13的穩(wěn)定藥物制劑，其用于肌內(nèi)、腫瘤內(nèi)和損傷周?chē)┯谩?8.權(quán)利要求1的局部的穩(wěn)定藥物制劑，其包含濃度范圍為0.32x106IU-0.08x106IU的重組IFNy和濃度范圍為2.0x106IU-0.5x106IU的重組IFNcx2/克半固體。19.權(quán)利要求18的穩(wěn)定藥物乳青，其包含2.2%IFNy、0.58%IFNa2b、4%鯨蠟醇、10%凡士林、2%Tween60、0.2%對(duì)鞋基苯曱酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯和81.2%蒸餾水，csp。20.權(quán)利要求18的穩(wěn)定油骨，其包含2.2%IFNy、0.58%IFNct2、60%白色固體礦脂、10%重質(zhì)液體礦脂、3%Span20、0.2%對(duì)羥基苯曱酸甲酯和對(duì)羥基苯甲酸丙酯以及24.02%蒸餾水，csp。21.權(quán)利要求18的穩(wěn)定藥物制劑凝膠，其包含2.2%IFNy、0.58%IFNot2、0.5%卡波普940、0.2%對(duì)羥基苯甲酸甲酯和對(duì)羥基苯曱酸丙酯、0.2%氬氧化鈉、0.01%乙二胺四乙酸二鈉鉀、2%乙醇和84.31%蒸餾水，CSp。22.權(quán)利要求18-21的局部的穩(wěn)定藥物制劑，其獨(dú)立地或與化學(xué)23.權(quán)利要求22的局部的穩(wěn)定藥物制劑，其用于治療脂肪瘤、表皮樣嚢腫、真皮內(nèi)嚢腫、脂肪肉瘤、神經(jīng)纖維瘤、皮脂增生、血管瘤、局灶性結(jié)節(jié)性增生、室管膜細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)瘤、青少年纖維性星形細(xì)胞瘤、腦膜瘤、松果體瘤、垂體腺瘤、血管腫瘤、腦脊膜癌病、神經(jīng)纖維瘤病、櫻桃樣血管瘤、皮脂腺增生、基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、皮膚纖維瘤、膿性肉芽腫、真皮痣、脂溢性角化病、光化性角化病和濕疣。24.權(quán)利要求5-7和11-13的藥物提供形式，其包含一瓶或多瓶重組IFNy,以及相應(yīng)瓶數(shù)的重組IFNct2,以便以這樣的方式混合IFN小瓶的內(nèi)容物，即維持在所提及的權(quán)利要求中限定的IFNy和IFN(x濃度，并且其中所述藥物提供形式另外還包含具有注射用水的小瓶、注射器和針頭，它們足以執(zhí)行所述IFN的混合和將所述混合物應(yīng)用至患者。全文摘要本發(fā)明涉及以腸胃外(液體或凍干的)或局部(凝膠、油膏或乳膏)方式應(yīng)用的穩(wěn)定藥物制劑，其包含增效比例的不同量的重組干擾素γ和α以用于治療涉及組織或器官的惡性或良性非生理學(xué)細(xì)胞生長(zhǎng)的病理學(xué)事件。文檔編號(hào)A61K38/21GK101351219SQ200680050242公開(kāi)日2009年1月21日申請(qǐng)日期2006年10月27日優(yōu)先權(quán)日2005年11月2日發(fā)明者A·阿吉萊拉巴雷托,H·桑塔納米利安,I·貝洛里韋羅,L·阿納薩加斯蒂安古洛,P·洛佩斯紹拉,R·派斯梅雷萊斯,Y·加西亞韋加申請(qǐng)人:遺傳工程與生物技術(shù)中心