專利名稱：用于治療瘧疾的odcase抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及使用某些6-取代的尿苷化合物治療和預(yù)防瘧疾的方法。本 發(fā)明還涉及具有ODCase(乳清酸脫羧酶卿制活性的新的尿苷化合物和包含 這些化合物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
ODCase (EC 4丄1.23)在尿苷-5'-0-—磷酸(UMP)的從頭合成中起重要作 用。UMP是從天冬氨酸從頭合成的結(jié)構(gòu)單元，用于合成其他嘧啶核苷酸如 尿苷-5'-0-三磷酸(UTP)、胞苷-5'-(9-三磷酸(CTP)、胸苷-5'-0-三磷酸(TMP) 和2'-脫氧-胞苷-5'-(9-三磷酸(dCTP)(圖l)。嘧啶核苷酸是用于合成RNA和 DNA的結(jié)構(gòu)單元，RNA和DNA是細(xì)胞復(fù)制和存活的重要分子。由于其在 細(xì)胞核酸從頭合成中的重要作用，ODCase存在于細(xì)胞、古細(xì)菌、寄生蟲 和人類中，即幾乎所有物種，除了病毒中。該酶催化乳清苷一磷酸(OMP) 脫羧成尿苷一磷酸(UMP)(

圖1最后步驟中的化合物1和2)。酶學(xué)家對(duì)該酶特 別感興趣，因?yàn)樵?5'C的水中，在中性pH7.0下，與未催化的脫羧反應(yīng)相 比，其顯示超過17個(gè)數(shù)量級(jí)的驚人水平的催化速率水平增加。i'"OMP的未 催化脫羧發(fā)生需要約7800萬年，而酶脫羧在幾毫秒時(shí)間量程。因此， ODCase是酶領(lǐng)域最高效的成員之一。"，叫"
有趣的是，在脫羧反應(yīng)的催化過程中，自然界中發(fā)現(xiàn)的脫羧酶使用輔 因子或共價(jià)中間體。vi'vii例如，硫胺素二磷酸依賴型吲哚丙酮酸脫羧酶 (IPDC)使用硫胺素作為輔因子，在脫羧過程中與輔因子形成共價(jià)中間體。 認(rèn)為ODCase在催化脫羧時(shí)相當(dāng)獨(dú)特，它無需任何輔因子、金屬或共價(jià)中 間體的幫助而具有這樣的效能。'，"'"'當(dāng)跨物種觀察這種酶時(shí)， 一個(gè)有趣的 差別是在某些更高級(jí)的有機(jī)體如人類或小鼠中，ODCase是雙功能酶UMP 合酶的一部分。viii在致病有機(jī)體如細(xì)菌、真菌和寄生蟲中，ODCase是單功能酶。ix'x在所有物種中，ODCase(無論單功能或雙功能的)作為二聚單元是 有活性的。
通常，針對(duì)ODCase的研究集中于瘧疾、癌癥和少數(shù)抗病毒研究。在 過去二十年中，廣泛研究了 OMP的一些類似物以理解ODCase的催化機(jī) 理。i"'xi在這些類似物中，6-氮雜-UMP (3)和6-羥基-UMP (或BMP， 4)、 P比 唑呋喃菌素、黃苷-5'-—磷酸(XMP， 12)和6-硫代甲酰氨基-UMP (13)是研 究對(duì)抗ODCase的一些有效抑制劑(圖2)。 ^'^，^然而，由于其毒性和缺少 特異性，抑制劑候選藥的開發(fā)已受到限制。x"構(gòu)效關(guān)系研究和抗ODCase 的抑制劑設(shè)計(jì)也非常有限或未進(jìn)行。因此，在二十世紀(jì)八十年代和二十世 紀(jì)九十年代，ODCase作為藥物耙未獲得很多推動(dòng)(traction)。
暫不論ODCase明顯的藥理學(xué)益處，僅由于其獨(dú)特的催化性質(zhì)， ODCase已是生化學(xué)家和結(jié)構(gòu)生物學(xué)家中意的酶。在2000年獲得幾種 ODCases的X-射線晶體結(jié)構(gòu)之前和之后，提出了許多機(jī)理。x，i""—'盡管 討論了共價(jià)催化的理念，但在提出的機(jī)理中，沒有一種包括共價(jià)物形成作 為在ODCase脫羧過程中的關(guān)鍵步驟。由嗜熱自養(yǎng)甲烷桿菌 fAfe^a""06acfen'wm //2e/7woawfo/ro/ /2/cM/^CWiO分*斤ODCase的{崔化位；^、， 顯 示兩種天冬氨酸殘基(Asp70和Asp75B，后者由二聚的ODCase的第二個(gè)亞 單位促成)和兩種賴氨酸殘基(Lys42和Lys72)通過氫鍵的強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)而保持(圖 3)。分析ODCase與多種配體的幾種共結(jié)晶的結(jié)構(gòu)，證實(shí)了這些殘基在活性 位點(diǎn)內(nèi)在其各自位置緊緊固定，且這些殘基的側(cè)鏈位置的移動(dòng)小于0.5 A。 已有證據(jù)不支持任何活性位點(diǎn)的殘基與底物在催化中或者與任何已知抑制
劑形成共價(jià)鍵。"i，xvi，xix'"^提出上述四種殘基對(duì)OMP的C-6羧酸基團(tuán)施加強(qiáng)
大的空間和靜電壓力并消除羧基。xvi
現(xiàn)今已知十種不同物種的ODCase的X-射線晶體結(jié)構(gòu)。在2000年， ODCase的四種X-射線晶體結(jié)構(gòu)使人們了解了該酶的催化機(jī)理?；谂c過 渡態(tài)類似物BMP (4)復(fù)合的釀酒酵母(S. cweviw'"e) ODCase的結(jié)構(gòu)，提出了 OMP脫羧的過渡態(tài)穩(wěn)定化機(jī)理。xviii基于與產(chǎn)物UMP復(fù)合的ODCase(枯草 桿菌，加cz7/ws"Mfc)的晶體結(jié)構(gòu)，Appleby等人也提出了類似的提議。xvii 這些作者提出，脫羧反應(yīng)通過親電取代進(jìn)行，其中C-6被Lys62質(zhì)子化，同 時(shí)釋放二氧化碳分子。xvii Harris等人提出的提議基于與BMP共結(jié)晶的大腸桿菌(￡. co")的ODCase酶結(jié)構(gòu)。^基于0麼(l)上的羧酸部分與ODCase活 性位點(diǎn)中的Asp71殘基的接近，提出OMP脫羧依賴于Asp71與底物羧基之 間共享質(zhì)子的存在。Wu等人提出了涉及靜電排斥的相似機(jī)理。xvi OMP 脫羧的這種機(jī)理基于Jencks在1975年描述的Circe效應(yīng)。xxiii Circe效應(yīng)說明 僅需使底物的反應(yīng)基團(tuán)不穩(wěn)定。底物的非反應(yīng)性部分與酶活性位點(diǎn)之間的 強(qiáng)相互作用提供了直接使底物的反應(yīng)基團(tuán)不穩(wěn)定的能量。^i靜電排斥機(jī)理 指向活性位點(diǎn)天冬氨酸殘基。在四種不同的物質(zhì)中，該殘基的位點(diǎn)和功能 高度保守。催化性殘基Asp70和Lys72位于接近底物OMP的嘧啶環(huán)的反應(yīng)中 心C-6，并假定Asp70 (嗜熱自養(yǎng)甲烷桿菌)為酶-底物復(fù)合物提供靜電去穩(wěn)定 作用?；钚晕稽c(diǎn)中的Lys72提供質(zhì)子以中和在羧酸根離去后產(chǎn)生的負(fù)碳離 子。xvi盡管在過去二十年中研究了一些X-射線結(jié)構(gòu)和深入的酶學(xué)，但由于 仍未解決的機(jī)理和新螺旋(twist)， ODCase對(duì)于生化學(xué)家仍然是個(gè)挑戰(zhàn)(見下 文)。
在ODCase的活性位點(diǎn)中，提出首先結(jié)合OMP的一磷酸基團(tuán)，該基團(tuán) 提供底物結(jié)合至ODCase所需的最大能量。^v如將底物催化成產(chǎn)物的二級(jí) 速率常數(shù)&cat/XM)所測(cè)量的，從底物分子上除去磷酸導(dǎo)致顯著降低催化效 率。""在一個(gè)有趣的試驗(yàn)中，亞磷酸二價(jià)陰離子(HPO。與ODCase(來自 釀酒酵母)的結(jié)合導(dǎo)致缺少磷酸基團(tuán)的截短的底物的脫羧二級(jí)速率常數(shù)增加 80,000倍。目因此，磷酸基團(tuán)是ODCase結(jié)合的重要組分。因此，要使核苷 藥物(正確的術(shù)語為前藥)具有抗ODCase的體內(nèi)活性，必須在細(xì)胞內(nèi)通過任 何核苷激酶將核苷化合物轉(zhuǎn)化為其一磷酸形式，然后抑制ODCase (無論是 病原體還是人類細(xì)胞)。在臨床使用的幾種核苷藥物中，這與其他核苷藥物 如AZT、 3TC、吉西他濱非常相似，因此ODCase抑制劑的"核苷形式"很 可能作為藥物起作用。
如果人們仔細(xì)分析生物化學(xué)和藥理學(xué)基礎(chǔ)，會(huì)發(fā)現(xiàn)ODCase作為藥物 靶是最吸引人的酶之一。例如，由于瘧原蟲種如惡性瘧原蟲r ./fl/czj^rw/^ 和間日瘧原蟲(P. v/mx)缺少補(bǔ)救途徑，所以這些寄生蟲依賴它們自身從頭 合成嘧啶核苷酸。^i然而在人類中，通過從頭合成和補(bǔ)救途徑合成嘧啶核 苷酸。^i因此，已提出抑制瘧原蟲ODCase是設(shè)計(jì)針對(duì)抗瘧化合物的策 略，有限數(shù)目的乳清酸鹽類似物被作為抗瘧原蟲的可能藥物研究。xxii，xxviii，^這些化合物中的大多數(shù)具有非常高的極性(polar)，具有藥代動(dòng)力 學(xué)不佳的問題。
持續(xù)需要作為治療劑的新的ODCase抑制劑，例如用于預(yù)防和治療疫疾。
發(fā)明概述
制備了尿苷的幾種C6衍生物，發(fā)現(xiàn)它們是抗ODCase的非共價(jià)的(競(jìng)爭(zhēng) 的)和共價(jià)的(可逆的)抑制劑。這些化合物還顯示有效的抗瘧原蟲活性。
因此，本發(fā)明包括治療或預(yù)防瘧疾的方法，其包括向有此需要的個(gè)體 給藥抗癥有效量的化合物，所述化合物選自式I的化合物、其互變異構(gòu)體 及其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物和前藥
其中
R'選自CN、 N3、 I、 Br、 NH2、 N02、 C(0)d.6烷基、NHC廣C6垸基、
N(CrCV烷基)2、 NHC(0)C廣C6烷基和NHC(0)Od-C6垸基；
112選自H、鹵素、d-C6烷基、d-C6烷氧基、氟取代的C,-C6垸基、氟取
代的d-C6垸氧基、N3、 NH2和CN;
R3選自O(shè)H、 NH2、 H和NHC(O)CrCV烷基；
Z選自
VI VII<formula>formula see original document page 12</formula>
其中
R"選自H、 d-Q烷基和羥基取代的d-C6烷基;RS和W之一為氫而另一個(gè)選自H、 OH和F， W和R"之一為氫而另一個(gè)
選自H、 OH和F;或者
R5和R6或R5'和R"可共同為=0或=CH2;
R7選自H、 F禾口OH;
R8選自H、 C(O)CrCV烷基、P(0)(OH)2、 P(0)(OCrC6烷基)2和P(O)(Od-
C6烷基)OH;
R9選自H、 N3、 CN、 C廣CV烷基；且 X-Y選自-CH2-0-、 -0-012-和-8-(:112-。
在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明包括選自如上文所定義的式I的化合物 及其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物和前藥的化合物用于預(yù)防或治療瘧疾的用
途，以及選自如上文所定義的式I的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合 物和前藥的化合物用于制備預(yù)防或治療瘧疾的藥物的用途。
本發(fā)明還包括在有此需要的個(gè)體中預(yù)防或治療瘧原蟲感染的方法，其 包括向所述個(gè)體給藥選自如上文所定義的式I的化合物及其藥學(xué)可接受的 鹽、溶劑合物和前藥的化合物。本發(fā)明還包括在從個(gè)體中分離的血漿或血
液樣品中抑制ODCase的方法，其包括向所述血漿或血液樣品中添加抑制 有效量的選自如上文所定義的式I的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合 物和前藥的化合物。
本發(fā)明還包括選自如上文所定義的式I的化合物及其藥學(xué)可接受的 鹽、溶劑合物和前藥的化合物用于預(yù)防或治療個(gè)體中的瘧原蟲感染的用 途，以及選自如上文所定義的式I的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合 物和前藥的化合物用于制備預(yù)防或治療個(gè)體中的瘧原蟲感染的藥物的用 途。更進(jìn)一步，本發(fā)明還包括選自如上文所定義的式I的化合物及其藥學(xué) 可接受的鹽、溶劑合物和前藥的化合物用于在從個(gè)體中分離的血漿或血液 樣品中抑制ODCase的用途，以及選自如上文所定義的式I的化合物及其 藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物和前藥的化合物用于制備在從個(gè)體中分離的血 漿或血液樣品中抑制ODCase的藥物的用途。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，包括用于治療或預(yù)防瘧疾的藥物組合物，所 述藥物組合物包含抗瘧有效量的選自如上文所定義的式I的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物和前藥的化合物，以及藥學(xué)可接受的載體或稀釋 劑。
本發(fā)明己證明某些新的6-取代尿苷衍生物可用作ODCase抑制劑，特 別是用于治療和預(yù)防瘧疾。因此，本發(fā)明還包括選自下列的化合物及它們 的藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物和前藥 6-(二甲氨基)尿苷； 5-氟-6-氨基尿苷； 5-溴-6-氨基尿苷；
5- 氟-6-疊氮基尿苷； l'-羥甲基-6-碘-尿苷；
6- (二甲氨基)2'-脫氧尿苷；
5-氟-6-氨基2'-脫氧尿苷； 5-溴-6-氨基2'-脫氧尿苷； 5-氟-6-疊氮基2'-脫氧尿苷； 5-氯-6-碘2'-脫氧尿苷； 5-氯-6-疊氮基2'-脫氧尿苷； 5-甲氧基-6-碘2'-脫氧尿苷； 5-甲氧基-6-疊氮基2'-脫氧尿苷； 5-甲氧基-6-氨基2'-脫氧尿苷； 5-溴-6-碘2'-脫氧尿苷；
5- 溴-6-疊氮基2'-脫氧尿苷；
6- (二甲氨基)尿苷5'-—磷酸； 5-氟-6-氨基尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-氨基尿苷5'-—磷酸；
5- 氟-6-疊氮基尿苷5'-—磷酸； 1 '-羥甲基-6-碘-尿苷-5 '-—磷酸
6- (二甲氨基)2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-氟-6-氨基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-氨基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-氟-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸；5-氯-6-碘2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-氯-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-甲氧基-6-碘2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-甲氧基-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-甲氧基-6-氨基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-碘2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸；
5- 氟-6-碘尿苷5'-—磷酸；
6- 碘尿苷5'-乙酸；和 6-碘2'-脫氧尿苷5'-乙酸。
本發(fā)明還包括藥物組合物，所述藥物組合物包含選自下列的化合物及 它們的藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物和前藥以及藥學(xué)可接受的載體 6-(二甲氨基)尿苷； 5-氟-6-氨基尿苷；
5-溴-6-氨基尿苷；
5- 氟-6-疊氮基尿苷；
r-羥甲基-6-碘-尿苷；
6- (二甲氨基)2'-脫氧尿苷； 5-氟-6-氨基2'-脫氧尿苷； 5-溴-6-氨基2'-脫氧尿苷； 5-氟-6-疊氮基2'-脫氧尿苷； 5-氯-6-碘2'-脫氧尿苷； 5-氯-6-疊氮基2'-脫氧尿苷； 5-甲氧基-6-碘2'-脫氧尿苷； 5-甲氧基-6-疊氮基2'-脫氧尿苷； 5-甲氧基-6-氨基2'-脫氧尿苷； 5-溴-6-碘2'-脫氧尿苷；
5- 溴-6-疊氮基2'-脫氧尿苷；
6- (二甲氨基)尿苷5'-—磷酸； 5-氟-6-氨基尿苷5'-—磷酸；5-溴-6-氨基尿苷5'~—磷酸；
5- 氟-6-疊氮基尿苷5'-—磷酸； 1 '-羥甲基-6-碘-尿苷-5'-—磷酸
6- (二甲氨基)2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-氟-6-氨基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-氨基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-氟-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5_氛_6-碘2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-氯-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-甲氧基-6-碘2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-甲氧基-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-甲氧基-6-氨基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-碘2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸；
5- 氟-6-碘尿苷5'-—磷酸；
6- 碘尿苷5'-乙酸；和 6-碘2'-脫氧尿苷5'-乙酸。
由下述詳述，本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)會(huì)變得顯而易見。然而要理 解，所述詳述和具體實(shí)施例給出的本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案僅作為示例，因 為從這些詳述中，處于本發(fā)明的主旨和范圍內(nèi)的多種改變和修飾對(duì)本領(lǐng)域 技術(shù)人員會(huì)是顯而易見的。
附圖簡(jiǎn)述
圖l示意地說明由天冬氨酸從頭合成尿苷一磷酸(現(xiàn)有技術(shù))。 圖2示意地說明已知作為ODCase抑制劑的乳清苷一磷酸(OMP)類似 物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
圖3說明來自嗜熱自養(yǎng)甲烷桿菌的ODCase催化位點(diǎn)的X-射線結(jié)構(gòu)。圖4MM當(dāng)用化合物Ii治療惡性瘧原蟲、對(duì)抗3D7和ItG分離物以及 對(duì)抗CHO細(xì)胞系時(shí)的抑制曲線。
圖5說明在小鼠中使用化合物Ii進(jìn)行體內(nèi)效能(efficiacy)研究過程中， 小鼠血液中的寄生蟲血癥圖片。箭頭指出來自小鼠的寄生蟲感染的血液細(xì) 胞。
圖6說明被戶."^g/^/感染并用化合物Ii治療時(shí)的小鼠的存活率。 圖7說明用多劑量化合物Ii治療小鼠的效能研究結(jié)果。
發(fā)明詳述 I.定義
在用于本文時(shí)，術(shù)語"C,V烷基"表示包含一至"n"個(gè)碳原子的直鏈 禾口/或支鏈飽和烷基，且包括(根據(jù)n的值)甲基、乙基、丙基、異丙基、正 丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、2,2-二甲基丁基、正戊基、2-甲基戊 基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、正己基等，其中變量n代表垸基中碳原子 的最大整數(shù)。
在用于本文時(shí)，術(shù)語"氟取代的C,V烷基"表示包含一至n個(gè)碳原子 的直鏈和/或支鏈飽和烷基，其中一個(gè)或所有氫原子被氟替代，且包括(根 據(jù)"n"的值)三氟甲基、五氟乙基、氟甲基等，其中變量n代表烷基中碳 原子的最大整數(shù)。
在用于本文時(shí)，術(shù)語"羥基取代的C^垸基"表示包含一至n個(gè)碳原 子的直鏈和/或支鏈飽和烷基，其中一個(gè)或兩個(gè)氫原子被羥基氟替代，且包 括(根據(jù)"n"的值)CH2OH、 CHOHCH2CH3、 CH2CHOHCH2CH2OH等， 其中變量n代表垸基中碳原子的最大整數(shù)。
在用于本文時(shí)，術(shù)語"鹵代"表示鹵素，且包括氯、氟、溴和碘。
在用于本文時(shí)，術(shù)語"互變異構(gòu)體"表示通過氫原子或質(zhì)子的形式遷 移，伴隨單鍵和相鄰雙鍵的轉(zhuǎn)換而可互相轉(zhuǎn)化的化合物。在其中可能發(fā)生 互變異構(gòu)的溶液中，會(huì)達(dá)到互變異構(gòu)體的化學(xué)平衡?；プ儺悩?gòu)體的確切比 率取決于幾個(gè)因素，包括溫度、溶劑和pH。
在用于本文時(shí)，術(shù)語"溶劑合物"表示其中合適的溶劑分子結(jié)合進(jìn)晶 格中的式I的化合物或式I的化合物的鹽。合適的溶劑在給藥劑量下是生理學(xué)可耐受的。合適溶劑的實(shí)例包括乙醇、水等。當(dāng)水為溶劑時(shí)，該分子 被稱為"水合物"。在用于本文時(shí)，術(shù)語"本發(fā)明的化合物"表示式I的化合物及其鹽、 溶劑合物和前藥。術(shù)語"藥學(xué)可接受的鹽"表示適于患者治療或與患者治療相容的酸加 成鹽或堿加成鹽。在用于本文時(shí)，術(shù)語"藥學(xué)可接受的酸加成鹽"表示本發(fā)明的任何堿 化合物或其任何中間體的任何無毒的有機(jī)鹽或無機(jī)鹽?？梢孕纬伤峒映甥}的本發(fā)明的堿性化合物包括例如其中R1、 W和/或113為NH2和NHC"6烷 基的化合物。形成合適的鹽的示例性無機(jī)酸包括鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷 酸，以及金屬鹽如磷酸氫二鈉和硫酸氫鉀。形成合適的鹽的示例性有機(jī)酸 包括一元、二元和三元羧酸如乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、 戊二酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、馬來酸、苯甲 酸、糴乙酸、苯乙烯酸和水楊酸，以及磺酸如對(duì)甲苯磺酸和甲磺酸?？梢?形成單酸鹽或二酸鹽，且這樣的鹽可以作為水合形式、溶劑化形式或基本 上無水的形式存在。通常，與本發(fā)明的化合物的游離堿形式相比，它們的 酸加成鹽更溶于水和多種親水有機(jī)溶劑，且通常顯示更高的熔點(diǎn)。對(duì)適當(dāng) 的鹽的選擇會(huì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。其他非藥學(xué)可接受的酸加成鹽如 草酸鹽可以用于例如本發(fā)明的化合物的分離、用于實(shí)驗(yàn)室用途或用于隨后 轉(zhuǎn)化為藥學(xué)可接受的酸加成鹽。在用于本文時(shí)，術(shù)語"藥學(xué)可接受的堿加成鹽"表示本發(fā)明的任何酸 化合物或其任何中間體的任何無毒的有機(jī)堿加成鹽或無機(jī)堿加成鹽?？梢?形成堿加成鹽的本發(fā)明的酸性化合物包括例如其中RS為磷酸的鹽。形成合 適的鹽的示例性無機(jī)堿包括氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化^、 氫氧化鎂或氫氧化鋇。形成合適的鹽的示例性有機(jī)堿包括脂族、脂環(huán)族或 芳族的有機(jī)胺如甲胺、三甲胺和甲基吡啶、烷基氨或氨。對(duì)適當(dāng)?shù)柠}的選 擇會(huì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。其他非藥學(xué)可接受的堿加成鹽可以用于例 如本發(fā)明的化合物的分離、用于實(shí)驗(yàn)室用途或用于隨后轉(zhuǎn)化為藥學(xué)可接受 的酸加成鹽。在用于本文時(shí)，術(shù)語"瘧疾"表示傳染性疾病，也稱為瘧疾熱或沼澤 熱，通常由瘧原蟲屬原生寄生蟲引起，適宜為惡性瘧原蟲、間日癥原蟲、卵形瘧原蟲(尸.ova/e)或三日瘧原蟲(尸.ma/an'ae)。這種寄生蟲主要通過雌性 按蚊傳播。瘧原蟲入侵并消耗其宿主的紅細(xì)胞，這導(dǎo)致癥狀如發(fā)熱、貧血 和在嚴(yán)重情況下，可能導(dǎo)致死亡的昏迷。本發(fā)明的化合物的術(shù)語"治療有效量"、"有效量"或"足夠量"是 在向個(gè)體(包括哺乳動(dòng)物如人類)給藥時(shí)足以實(shí)現(xiàn)有益或期望結(jié)果(包括臨床 結(jié)果)的量，且同樣，"有效量"或其同義詞取決于它所應(yīng)用的語境。例 如，在抑制ODCase的語境中，例如它是與未給藥所述化合物時(shí)獲得的響 應(yīng)相比足夠?qū)崿F(xiàn)在ODCase活性中的這樣的抑制的化合物的量。在疾病的 語境中，本發(fā)明的化合物的治療有效量用于治療、調(diào)節(jié)、減輕、逆轉(zhuǎn)或影 響哺乳動(dòng)物中的瘧疾。"有效量"意在表示化合物的量足以治療、預(yù)防或 抑制瘧疾或與瘧疾相關(guān)的疾病。在一些合適的實(shí)施方案中，癥疾或與癥疾 相關(guān)的疾病或障礙是由瘧原蟲寄生蟲引起的，適宜為惡性瘧原蟲、間日瘧 原蟲、卵形瘧原蟲或三日瘧原蟲，因此它的量是當(dāng)向個(gè)體(包括哺乳動(dòng)物如 人類)給藥時(shí)足以治療、預(yù)防或抑制瘧疾或與瘧疾或瘧原蟲如癥原蟲寄生蟲 相關(guān)的疾病或障礙。將對(duì)應(yīng)于這樣的量的本發(fā)明給定的化合物的量會(huì)取決 于多種因素，例如給定的藥物或化合物、藥物劑型、給藥途徑、疾病或障 礙的類型、正被治療的個(gè)體或宿主的種類等，但仍可由本領(lǐng)域技術(shù)人員常 規(guī)地確定。而且，在用于本文時(shí)，本發(fā)明的化合物的"治療有效量"是與 對(duì)照相比，預(yù)防、抑制、遏制(suppress)或減輕個(gè)體中的瘧疾(例如通過臨 床癥狀或瘧原蟲如瘧原蟲生物體的量確定)的量。如本文所定義，本發(fā)明的 化合物的治療有效量可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法 容易地確定。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物的治療有效量為約0.1至約7 mg/kg體重，適宜為約1至約5 mg/kg體重，且更適宜為約2至約3 mg/kg 體重。技術(shù)人員會(huì)理解某些因素可能影響有效治療個(gè)體的瘧疾、或預(yù)防個(gè) 體患上瘧疾所需的劑量，這些因素包括但不限于疾病或障礙的嚴(yán)重性、前 期治療、個(gè)體的總體健康和/或年齡以及存在的其他疾病。而且，用治療有效量的本發(fā)明的化合物"治療"或"預(yù)防"個(gè)體的方案可以由單次給藥組成，或者可選地包括一系列應(yīng)用。例如，可以至少每周一次給藥本發(fā)明的化合物。然而，在另一實(shí)施方案中，對(duì)于給定的治療，可以從約每周一次至約每日一次向患者給藥所述化合物。治療期的長(zhǎng)度取決于多種因素，例如疾病的嚴(yán)重性、患者的年齡、本發(fā)明的化合物的濃度和活性，或它們的組合。還要理解在特定的治療或預(yù)防方案過程中，可以提高或降低用于治療或預(yù)防的化合物的有效劑量。通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)診斷測(cè)定法可以改變劑量且為顯而易見的。在一些情況下，可能需要長(zhǎng)期給藥?？梢栽诒┞队诏懠不虔懺x如瘧原蟲寄生蟲之前、過程中或之 后給藥本發(fā)明的化合物。在用于本文時(shí)，"同時(shí)給藥"表示將兩種物質(zhì)向個(gè)體給藥，以使它們 在個(gè)體中同時(shí)均為生物學(xué)活性的。給藥的確切細(xì)節(jié)要取決于兩種物質(zhì)在共存時(shí)的藥代動(dòng)力學(xué)，且如果藥代動(dòng)力學(xué)合適，可以包括在給藥一種物質(zhì)24 小時(shí)之內(nèi)給藥另一種物質(zhì)。設(shè)計(jì)合適的給藥方案對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是常 規(guī)的。在特定實(shí)施方案中，將基本上同時(shí)給藥兩種物質(zhì)，即相隔幾分鐘內(nèi) 給藥，或在包含兩種物質(zhì)的單個(gè)組合物中給藥。在用于本文時(shí)，且也如本領(lǐng)域所理解，"治療"是獲得有益或期望結(jié)果，包括臨床結(jié)果的方法。有益或期望的臨床結(jié)果可包括但不限于減輕 或改善一種或多種癥狀或病癥、減小疾病的程度、穩(wěn)定(即不使惡化)疾病 的狀態(tài)、防止疾病的傳播、延遲或減緩疾病進(jìn)程、改善或減輕疾病狀態(tài)、 和去除(無論部分或整體)疾病，無論是可檢測(cè)還是不可檢測(cè)的。"治療" 也可以指與如果不接受治療時(shí)期望的存活期相比延長(zhǎng)的存活期。"減輕"疾病或障礙表示與未治療障礙相比，減少障礙或疾病狀態(tài)的 程度和/或不希望的臨床表現(xiàn)和/或減緩或延長(zhǎng)進(jìn)展的時(shí)程。在用于本文時(shí)，術(shù)語"防止"或"預(yù)防"或其同義詞指減少患者患瘧 疾或顯示與癥疾相關(guān)的癥狀的風(fēng)險(xiǎn)或可能性。"抑制"、"遏制"或"減少"功能或活性如ODCase活性是指當(dāng)與 重要病癥或參數(shù)之外的其他相同病癥相比時(shí)，或者可選地與不同病癥相比 時(shí)減少功能或活性。在用于本文時(shí)，術(shù)語"個(gè)體"包括動(dòng)物界的所有成員，包括人類。所 述個(gè)體適宜地為人類。II.本發(fā)明的方法本發(fā)明包括治療或預(yù)防瘧疾的方法，其包括向有此需要的個(gè)體給藥抗 瘧有效量的化合物，所述化合物選自式I的化合物、其互變異構(gòu)體及它們 的藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物和前藥其中W選自CN、 N3、 I、 Br、 NH2、 N02、 C(0)C^垸基、NHd-Q烷基、N(C,-C6烷基)2、 NHC(0)CVC6烷基和NHC(0)OCrC6烷基；W選自H、卣素、Ci-(V烷基、CrCV烷氧基、氟取代的d-Q垸基、氟取代的d-C6烷氧基、N3、 NH2和CN;R3選自O(shè)H、 NH2、 H和NHC(O)CrCV烷基；Z選自其中W選自H、 d-CV垸基和羥基取代的CrCV烷基；RS和116之一為氫而另一個(gè)選自H、 OH和F， W和R"之一為氫而另一選自H、 OH和F;或者RS和W或RS'和R"可共同為-O或=CH2;R7選自h、 f和oh;R8選自H、 C(O)C廣Q烷基、P(0)(OH)2、 P(0)(Od誦C6烷基)2和P(O)(OC,-Q垸基)OH;R9選自H、 N3、 CN、 d-C6烷基；且 X-Y選自-CH2-0-、 -0-CH24n-S-CHr。在本發(fā)明的方法中，式I的化合物中的W選自CN、 N3、 I、 Br、 NH2、 N02、 (:(0)(:.6垸基、NHd-C6垸基、N(C廣C6烷基)2、 NHC(0)C廣C6 垸基和NHC(0)Od-C6垸基。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，式I的化合物中的 R'選自I、 Br、 N02、 N(C廣Q烷基)2、 NHC(0)d-C4烷基和NHC(0)OCrC4 烷基。在本發(fā)明的更多實(shí)施方案中，式I的化合物中的W選自I、 Br、 N02、 N(CH3)2、 NHC(0)CH3和NHC(0)CH3。仍在本發(fā)明的更多實(shí)施方案 中，式I的化合物中的R'選自I、 Br和N(CH3)2。式I的化合物中的W為 I(碘)。在本發(fā)明的方法中，式I的化合物中的W選自H、鹵素、d-C6烷 基、C,-C6烷氧基、氟取代的CrC6垸基、氟取代的d-C6烷氧基、N3、 皿2和CN。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，式I的化合物中的R"選自H、鹵 素、d-C4烷基、d-Q垸氧基、氟取代的d-C4垸基、氟取代的d-Q烷氧 基、N3、朋2和CN。在本發(fā)明的更多實(shí)施方案中，式I的化合物中的R2 選自H、氟、氯、溴、CH3、 OCH3、 CF3、 CF30、 N3、 NH2和CN。仍在 本發(fā)明的更多實(shí)施方案中，式I的化合物中的W選自H、氟、氯、溴、 OCH3和CF" CF30。在本發(fā)明的方法中，式I的化合物中的W選自O(shè)H、 NH2、 H和 NHC(0)d-C6烷基。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，式I的化合物中的^選自 OH和NH2。當(dāng)式I的化合物的R"選自O(shè)H和NH2時(shí)，式I的化合物可按下列互變異構(gòu)體之一存在其中W為O或NH。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，W為O，有利的互變異構(gòu) 體是<formula>formula see original document page 23</formula>在本發(fā)明的方法中，式I的化合物中的Z選自<formula>formula see original document page 23</formula>
在本發(fā)明的實(shí)施方案中，Z為式II。在本發(fā)明的方法，式I的化合物中的W選自H、 CrQ烷基和羥基取 代的CVCV烷基。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，式I的化合物中的W為H。在本發(fā)明的方法中，式I的化合物包括以下化合物，其中W和115'獨(dú) 立地選自H、 OH和F且W和R"獨(dú)立地選自H、 OH和F，條件是當(dāng)115不 為H時(shí)則W為H,且當(dāng)W不為H時(shí)則R"為H;或者115和116或W和R6' 可共同為K)或-CH2。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，115和W均為OH且W和 R"均為H。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，115為H， W為OH， W和R6' 均為H。在本發(fā)明的方法中，式I的化合物中的W選自H、 F和OH，適宜地 為H或OH。在本發(fā)明的方法中，式I的化合物中的RS選自H、 C(0)Q-C6垸基、 P(0)(OH)2、 P(0)(Od-Q垸基)2和P(O)(OQ-CV烷基)OH。在本發(fā)明的實(shí)施 方案中，式I的化合物中的R8選自H、 C(0)d-C4垸基、P(0)(OH)2、 P(0)(Od-C4烷基)2和P(O)(OCrQ烷基)OH。在本發(fā)明的更多實(shí)施方案 中，式I的化合物中的R8選自H、 C(0)CH3、 P(0)(OH)2、 P(0)(OCH3)2和 P(0)(OCH3)OH。仍在本發(fā)明的更多實(shí)施方案中，式I的化合物中的RS選 自H、 C(0)CH3和P(0)(OH)2。在本發(fā)明的方法中，式I的化合物中的R"選自H、 N3、 CN、 CrQ垸 基。！^適宜地為H。在本發(fā)明的方法中，式I的化合物中的X-Y選自-CHrO-、 -O-CH;r和-S-CH2-。 X-Y適宜地為-O-CH;r。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，RS為OH且Z為式I1。在這些化合物中，優(yōu) 選酮互變體形式。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是本發(fā)明的方法中的式I 的化合物具有以下結(jié)構(gòu)在本發(fā)明的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法中的式I的化合物選自下述化 合物和它們的藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物及前藥 6-氰基尿苷； 6-氰基尿苷-5'-—磷酸； 6-疊氮基尿苷； 6-疊氮基尿苷-5'-0-—磷酸； 6-氨基尿苷-5'-0-—磷酸； 6-氨基尿苷； 6-甲基尿苷；6-甲基尿苷-5'-0-—磷酸； 6-碘-尿苷；6-iV-甲氨基尿苷；6-AUV-二甲基氨基尿嘧啶；6-W-二甲基氨基尿苷；6-AT-甲基氨基尿苷-5'-0-—磷酸；6-碘尿苷-5'-0-—磷酸；5-氟-6-氨基尿苷；5-溴-6-碘尿苷；5-氟-6-疊氮基尿苷;5-氟-6-碘尿苷；磷酸； 5-溴-6-碘尿苷-5'-0-—磷酸； 5-氟-6-疊氮基尿苷-5'-0-—磷酸；5- 氟-6-碘尿苷-5'-0-—磷酸；6- 甲氧基羰基尿苷； 6-乙氧基羰基尿苷；6-甲氧基羰基尿苷-5'-0-—磷酸； 6-乙氧基羰基尿苷-5'-0-—磷酸；r-羥甲基-6-碘-尿苷；和1 '-羥甲基-6-碘-尿苷-5 '-—磷酸。所有式I的化合物均具有超過一個(gè)不對(duì)稱中心。當(dāng)本發(fā)明的化合物具 有超過一個(gè)不對(duì)稱中心時(shí)，它們可以作為非對(duì)映異構(gòu)體存在。要理解所有 這樣的異構(gòu)體及其以任何比例的混合物均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。在本發(fā) 明的適當(dāng)實(shí)施方案中，立體化學(xué)是發(fā)現(xiàn)的尿苷的天然形式，如上所示。要 理解盡管式I的化合物的相對(duì)立體化學(xué)適宜如上所示，但這樣的式I的化 合物也可含由一定量的(例如小于20%，優(yōu)選小于10%,更優(yōu)選小于5%) 具有變化的(altemate)立體化學(xué)的式I的化合物。在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明包括選自如上文所定義的式I的化合物 及其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物和前藥的化合物用于預(yù)防或治療瘧疾的用途，以及選自如上文所定義的式I的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合 物和前藥的化合物用于制備預(yù)防或治療瘧疾的藥物的用途。本發(fā)明還包括在有需要的個(gè)體中預(yù)防或治療瘧原蟲感染的方法，其包 括向所述個(gè)體給藥選自如上文所定義的式I的化合物及其藥學(xué)可接受的 鹽、溶劑合物和前藥的化合物。本發(fā)明還包括在從個(gè)體中分離的血漿或血 液樣品中抑制ODCase的方法，其包括向所述血漿或血液樣品中添加抑制 有效量的選自如上文所定義的式I的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合 物和前藥的化合物。本發(fā)明還包括選自如上文所定義的式I的化合物及其藥學(xué)可接受的 鹽、溶劑合物和前藥的化合物用于預(yù)防或治療個(gè)體內(nèi)的瘧原蟲感染的用 途，以及選自如上文所定義的式I的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物和前藥的化合物用于制備預(yù)防或治療個(gè)體中的瘧原蟲感染的藥物的用 途。更進(jìn)一步，本發(fā)明還包括選自如上文所定義的式I的化合物及其藥學(xué) 可接受的鹽、溶劑合物和前藥的化合物用于在從個(gè)體中分離的血漿或血液樣品中抑制ODCase的用途，以及選自如上文所定義的式I的化合物及其 藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物和前藥的化合物用于制備在從個(gè)體中分離的血 漿或血液樣品中抑制ODCase的藥物的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，包括用于治療或預(yù)防瘧疾的藥物組合物，所 述藥物組合物包含抗瘧有效量的選自如上文所定義的式I的化合物及其藥 學(xué)可接受的鹽、溶劑合物和前藥的化合物，以及藥學(xué)可接受的載體或稀釋 劑。本發(fā)明的化合物適宜配制成藥物組合物，以適于體內(nèi)給藥的生物學(xué)相 容的形式向人類個(gè)體給藥。通過用于制備可向個(gè)體給藥的藥學(xué)可接受的組合物的已知方法，可以 制備包含本發(fā)明的化合物的組合物，從而將有效數(shù)量的活性物質(zhì)與藥學(xué)可接受的載體混合。合適的載體描述于例如Remington's Pharmaceutical Sciences (2003- 20th版)和美國藥典1999年出版的國家處方集(USP 24 NF19)。在此基礎(chǔ)上，所述組合物非排他地包括所述化合物以及一種或多 種藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑的溶液，并包含在具有適當(dāng)pH且與生理溶液等滲的緩沖溶液中。式I的化合物可按游離堿的形式、鹽的形式、溶劑合物和作為水合物 被藥用。所有形式均處于本發(fā)明的范圍內(nèi)?？梢杂帽景l(fā)明的化合物形成酸 和堿加成鹽，以用作游離堿形式的來源，即使期望所述特定鹽本身只作為 中間產(chǎn)物，例如當(dāng)只為了純化和鑒定而形成所述鹽時(shí)。因此可以用本發(fā)明 的化合物形成的所有鹽均處于本發(fā)明的范圍內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明的方法，可按多種形式將本發(fā)明的所述化合物向患者給藥，這取決于所選的給藥途徑，正如本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解的。例如，可以通過口服、胃腸外、口腔、舌下、鼻腔、直腸、貼片、泵或經(jīng)皮給藥進(jìn) 行給藥本發(fā)明的化合物并因此配制藥物組合物。胃腸外給藥包括靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、經(jīng)上皮、鼻腔、肺內(nèi)、鞘內(nèi)、直腸和局部給藥模 式。胃腸外給藥可以通過在所選時(shí)間段內(nèi)連續(xù)輸注。本發(fā)明的化合物可以例如與惰性稀釋劑或與可同化可食用的載體一起 口服給藥，或者它可被包裹在硬或軟殼明膠膠囊中，或者它可被壓制成片 劑，或者它可以直接摻入膳食中。對(duì)于口服治療給藥，可以將本發(fā)明的化 合物與賦形劑結(jié)合并以可食用的片劑、含片劑、糖錠劑、膠囊劑、酏劑、 混懸劑、糖漿劑、糯米紙囊劑等形式使用。本發(fā)明的化合物也可以胃腸外給藥?？梢栽谒信c表面活性劑如羥丙 基纖維素適當(dāng)混合來制備本發(fā)明的化合物的溶液劑。也可以在甘油、液體乙二醇、DMSO及它們與醇或不與醇的混合物中，以及在油中制備分散 體。在普通貯存和使用條件下，這些制劑包含防腐劑以防止微生物生長(zhǎng)。 本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)知道如何制備合適的制劑。選擇和制備合適的制劑的常 規(guī)方法和成分描述于例如Remington's Pharmaceutical Sciences (2003- 20th 版)和美國藥典1999年出版的國家處方集(USP 24 NF19)。適合注射使用的藥物形式包括無菌水溶液或分散體或用于臨時(shí)制備無 菌可注射溶液或分散體的無菌粉末。在所有情況下，所述形式必須是無菌 的且必須是達(dá)到能易于注射的程度的液體。用于鼻腔給藥的組合物可以常規(guī)配制成氣霧劑、滴劑、凝膠劑和散 劑。氣霧劑劑型通常包括活性物質(zhì)在生理學(xué)可接受的含水或無水溶劑中的 溶液或細(xì)懸浮液，且通常以無菌形式的單劑量或多劑量數(shù)量存在于密封容 器內(nèi)，所述密封容器可以采用與霧化裝置使用的藥筒或再填充物的形式。 或者，所述密封容器可以是整體配藥裝置(unitary dispensing device),例如意在用后拋棄的單劑量鼻用吸入器或配有計(jì)量閥門的氣霧劑分散器。當(dāng)所 述劑型包括氣霧劑分散器時(shí)，它會(huì)包含推進(jìn)劑，所述推進(jìn)劑可以是壓縮氣 體如壓縮空氣或者是有機(jī)推進(jìn)劑如氟氯烴。所述氣霧劑劑型也可以采用泵-噴霧器的形式。適合口腔或舌下給藥的組合物包括片劑、錠劑和軟錠劑，其中將所述 活性成分與載體如糖、阿拉伯膠、黃芪蓍膠或明膠和甘油配制在一起。用 于直腸給藥的組合物合宜地為包含常規(guī)栓劑基質(zhì)如可可脂的栓劑形式。本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)或與藥學(xué)可接受的載體組合向動(dòng)物給藥，如 上所述，其比率通過所述化合物的溶解度和化學(xué)性質(zhì)、所選的給藥途徑和 標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐確定。本發(fā)明的化合物的劑量可以根據(jù)許多因素變化，所述因素為例如所述 化合物的藥效學(xué)性質(zhì)、給藥模式、接受者的年齡、健康和體重、癥狀的性 質(zhì)和程度、治療的頻率和如果存在的共同治療的類型，以及所述化合物在 要被治療的動(dòng)物中的清除率。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以基于上述因素確定適當(dāng) 的劑量。可按適當(dāng)?shù)膭┝砍跏冀o藥本發(fā)明的化合物，所述劑量可以根據(jù)臨床響應(yīng)按需要調(diào)整。對(duì)于短期離體細(xì)胞治療，例如30分鐘至1小時(shí)或更 長(zhǎng)時(shí)間，可以使用比長(zhǎng)期體內(nèi)治療更高的化合物劑量。在本發(fā)明的實(shí)施方 案中，每個(gè)劑型單位(適合給藥的組合物)包含約1 mg至約500 mg活性成 分(本發(fā)明的一種或多種化合物)。在這些藥物組合物中，基于組合物的總 重，所述活性成分的存在量一般以約0.5至95wtM的量存在。本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)使用或與抑制ODCase活性的其他藥劑同時(shí) 使用，或與對(duì)于瘧疾的其他治療類型(可以調(diào)節(jié)或不調(diào)節(jié)ODCase)聯(lián)用。III.本發(fā)明的新化合物制備了具有酶ODCase抑制活性和抗瘧活性的新化合物。因此，本發(fā) 明包括這些新化合物的所有用途，包括它們?cè)谟糜谥委熁蝾A(yù)防瘧疾的治療 方法和組合物中的用途、它們?cè)谠\斷測(cè)定中的用途和它們作為研究工具以 及作為原料和/或中間體來制備其他化學(xué)體的用途。因此，本發(fā)明提供了選自下列的式I的化合物和它們的藥學(xué)可接受的 鹽、溶劑合物和前藥 6-(二甲氨基)尿苷； 5-氟-6-氨基尿苷； 5-溴-6-氨基尿苷；5- 氟-6-疊氮基尿苷； r-羥甲基-6-碘-尿苷；6- (二甲氨基)2'-脫氧尿苷； 5-氟-6-氨基2'-脫氧尿苷； 5-溴-6-氨基2'-脫氧尿苷； 5-氟-6-疊氮基2'-脫氧尿苷； 5-氯-6-碘2'-脫氧尿苷；5-氯-6-疊氮基2'-脫氧尿苷； 5-甲氧基-6-碘2'-脫氧尿苷； 5-甲氧基-6-疊氮基2'-脫氧尿苷； 5-甲氧基-6-氨基2'-脫氧尿苷； 5-溴-6-碘2'-脫氧尿苷；5- 溴-6-疊氮基2'-脫氧尿苷；6- (二甲氨基)尿苷5'-—磷酸；5-氟-6-氨基尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-氨基尿苷5'-—磷酸；5- 氟-6-疊氮基尿苷5'-—磷酸； 1 '-羥甲基-6-碘-尿苷-5'-—磷酸6- (二甲氨基)2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-氟-6-氨基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-氨基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-氟-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-氯-6-碘2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-氯-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-甲氧基-6-碘2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-甲氧基-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-甲氧基-6-氨基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-碘2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸；5- 氟-6-碘尿苷5'-—磷酸；6- 碘尿苷5'-乙酸；和 6-碘2'-脫氧尿苷5'-乙酸，。本發(fā)明還包括藥物組合物，其含有藥用有效量的一種或多種上述化合 物和藥學(xué)可接受的載體。本發(fā)明還包括一種或多種上述化合物或其藥學(xué)可 接受的鹽、溶劑合物和前藥作為藥物的用途。VI.制備本發(fā)明的化合物的方法根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明的化合物可以通過與本領(lǐng)域己確立的
相似方法制備。特別地，將尿嘧啶、胞嘧啶或胸腺嘧啶環(huán)的5和/或6位官
能化的反應(yīng)是熟知的。例如，在降低的溫度下，例如在約-60°(:至約-
90°C，用強(qiáng)堿如烷基鋰或二異丙胺鋰處理尿嘧啶、胞嘧啶或胸腺嘧啶，然 后與式W-LG的試劑反應(yīng)，其中R，如式I所定義，LG是合適的離去基團(tuán) 如鹵素，提供了在嘧啶環(huán)6-位用Ri取代的化合物。在尿嘧啶或胞嘧啶的 嘧啶環(huán)5-位用合適的離去基團(tuán)取代的化合物是可商購或本領(lǐng)域己知的?？?以在降低的溫度如約-60'C至約-卯'C下將這些化合物轉(zhuǎn)化為它們相應(yīng)的陰 離子，并與式R2-LG的試劑反應(yīng)，其中W如式I所定義，LG是合適的離 去基團(tuán)如鹵素，以提供在嘧啶環(huán)5-位用W取代的化合物。使用本領(lǐng)域技 術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)，可以將多種W和W基團(tuán)轉(zhuǎn)化為其他的R'和R2 基團(tuán)。例如，可以將疊氮基還原以提供胺基，其可以使用已知的化學(xué)將胺 基一烷基化、二烷基化或?；?。
嘧啶化合物可以在標(biāo)準(zhǔn)條件下與式Z-LG的試劑反應(yīng)，其中Z如式I 所定義，LG是合適的離去基團(tuán)，以提供式I的核苷或式I的前體。這樣的 反應(yīng)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)是熟知的?？梢栽谂cZ偶聯(lián)之前或之后，在嘧 啶環(huán)上取代合適的R1、 RS和/或RS基團(tuán)。
嘧啶化合物和式Z-LG的試劑可商購或者可以使用本領(lǐng)域已知的方法 制備?？梢允褂靡阎姆磻?yīng)將磷酸基團(tuán)酰化或加成到核苷的5'位上。
在一些情況下，可能必須修飾上述化學(xué)(例如通過使用保護(hù)基)以防止 由反應(yīng)基團(tuán)如連接作為取代基的反應(yīng)基團(tuán)引起的副反應(yīng)。這可以通過常規(guī) 保護(hù)基實(shí)現(xiàn)，例如在"Protective Groups in Organic Chemistry" McOmie， J.F.W. Ed" Plenum Press， 1973和在Greene, T.W.和Wuts， P.G.M.， "Protective Groups in Organic Synthesis" ， John Wiley & Sons, 3rd Edition, 1999中所述。
使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)獲得期望的化合物鹽。例如，在合適的溶劑中用酸或堿 處理中性化合物并通過過濾、萃取或任何其他合適的方法分離所形成的。本發(fā)明的化合物的溶劑合物的形成將取決于所述化合物和溶劑。通 常，通過將所述化合物溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲行纬扇軇┖衔锊⑼ㄟ^冷卻或使用 反溶劑來分離溶劑合物。通常在環(huán)境條件下將所述溶劑合物干燥或共沸。
式I的化合物的前藥可以是例如與可用的羥基、硫醇、氨基或羧基形 成的常規(guī)酯。例如，可以在堿存在下并任選在惰性溶劑(如?；鹊倪拎と?液)中，使用活化的酸將可用的羥基或氨基基團(tuán)?；Ｒ呀?jīng)用作前藥的一些 普通酯是苯基酯、脂族(Q-C24)酯、酰氧基甲酯、氨基甲酸酯和氨基酸酯。
本發(fā)明包括本發(fā)明的化合物的放射標(biāo)記形式，例如通過在結(jié)構(gòu)內(nèi)結(jié)合
3H、 "C或"C或放射活性的鹵素如1251和"F來標(biāo)記的本發(fā)明的化合物。 可以使用本領(lǐng)域己知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備經(jīng)放射標(biāo)記的本發(fā)明的化合物。例 如，可以使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將氚結(jié)合到本發(fā)明的化合物中，例如通過使用氚氣 和催化劑，將合適的前體氫化成本發(fā)明的化合物?；蛘?，可以使用標(biāo)準(zhǔn)碘 化條件，例如[1251]碘化鈉在氯胺-丁的存在下，在合適的溶劑如二甲基甲酰 胺中，由相應(yīng)的三烷基錫衍生物(適宜為三甲基錫)制備包含放射活性碘的 本發(fā)明的化合物。可以使用標(biāo)準(zhǔn)的鈀催化的錫化條件，例如六甲基二錫在 四(三苯基膦)鈀(0)的存在下，在惰性溶劑如二氧雜環(huán)己垸中，在升高的溫 度，適宜為50-100。C下，由相應(yīng)的無放射活性鹵代、適宜為碘化物制備三 烷基錫化合物。此外，例如通過K[18F]/K222與合適的前體化合物如包含 合適的離去基團(tuán)如甲苯磺?；氖絀的化合物的反應(yīng)，可以制備包含放射 活性氟的本發(fā)明的化合物，所述離去基團(tuán)可以由"F陰離子代替。 下列非限制性的實(shí)施例說明本發(fā)明
<formula>formula see original document page 31</formula>
VI.實(shí)施例
眾會(huì)激/a浙/6游會(huì)成
<formula>formula see original document page 31</formula>a) TBDMSiCl，咪唑；CH2C12; b) NaCN DMF; c) 50% aq. TFA; d) POCl3，Py,H20， CH3CN， 0oC。
如上面的路線所示，從5-溴-尿苷衍生物開始合成靶分子la和Ib。根 據(jù)文獻(xiàn)方法制備2'，3'-0-異亞丙基-5-溴尿苷。皿在堿性條件下，用 TBDMSiCl將2',3'-0-異亞丙基-5-溴尿苷中的伯醇保護(hù)為甲硅烷基醚。然后 使用氰化鈉將完全受保護(hù)的化合物轉(zhuǎn)化為6-氰基衍生物。皿i用50%三氟乙 酸水溶液將保護(hù)基脫保護(hù)，以獲得化合物Ia，然后用三氯氧磷進(jìn)行一磷酸
化提供期望的靶分子Ib。皿ii'xxxiii'xxxiv最后，使用(NH^C03水溶液將化合
物轉(zhuǎn)化為其銨鹽。
(a) 5'-0-(叔丁基二甲基甲硅垸基)-2'，3'吞異亞丙基-5-溴尿苷在(TC,用 咪唑(0.093 g， 1.38腿ol)和TBDMSiCl (0.103 g， 0.69 mmol)處理2'，3'-O-異亞丙基-5-溴尿苷(0.25 g， 0.69 mmol)的干燥CH2C12 (5.0 mL)溶液。然后 使反應(yīng)混合物達(dá)到室溫并攪拌1 h。用CH2Cl2稀釋反應(yīng)混合物，用水、鹽 水洗滌有層機(jī)，用Na2S04干燥。將有機(jī)層減壓濃縮，通過硅膠柱色譜法 (EtOAc:己烷，l:9)純化粗化合物，以獲得作為泡沬的化合物5'-0-(叔丁基 二甲基甲硅垸基)-2'，3'-0-異亞丙基-5-溴尿苷(0.32 g， 98%)。 ]H NMR (CDC13)S 0.12 (s， 6H), 0.91 (s, 9H)， 1.36 (s, 3H), 1.59 (s, 3H), 3.79 (dd， 1H， /= 2.7， 11.5 Hz), 3.93 (dd, 1H, /= 2.1, 11.5 Hz)， 4.39 (brd， 1H， 《/= 2.1 Hz), 4.67 (dd， 1H, /= 3.0， 6,0 Hz)， 4.72 (dd, 1H, J= 2.1, 6.0 Hz)， 5.89 (d, 1H, /= 3.0 Hz), 7.卯(s， 1H)， 8.41 (brs, 1H)。
(b) 5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2'，3'力-異亞丙基-6-氰基尿苷在室溫 下，用NaCN (0.052 g, 1.07 mmol)處理5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2'，3'-O-異亞丙基-5-溴尿苷(0.32 g， 0.71 mmol)的干DMF (3 mL)溶液并將所 得混合物攪拌24 h。用水(20 mL)稀釋反應(yīng)混合物，使溶液的pH達(dá)到-6， 用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。用鹽水洗滌合并的乙酸乙酯層，干燥(Na2S04) 并減壓濃縮。通過硅膠柱色譜法(EtOAc:己烷，l:3)純化粗化合物，以定量 收率獲得5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2'，3'-0-異亞丙基-6-氰基尿苷(0.28 g)。 ^NMR (CDC13) 5 ppm 0.06 (s， 6H)， 0.89 (s， 9H)， 1.35 (s， 3H), 1.57 (s， 3H)， 3.81-3.85 (m, 2H)， 4.13-4,18 (m, 1H)， 4.76 (dd, 1H, /= 4.8， 6.6 Hz), 5.12 (dd， 1H， /= 2.4， 6.6 Hz), 6.03 (d， 1H， /= 2.4 Hz)， 6.29 (s, 1H)， 8.88 (brs， 1H); 13C NMR (CDC13) 5 ppm 4.79， 18.84, 25.74， 26.27, 27.52， 63.64， 81.45， 83.65，.84， 113.11, 115.06， 127.71， 148.57, 160.55。(c) 6-氰基尿苷(Ia).在0°C，用50°/。含水TFA (5 mL)處理化合物5'-(9-(叔丁 基二甲基甲硅烷基)-2',3'-0-異亞丙基-6-氰基尿苷(0.12 g， 0.30mmo1)，然 后使其達(dá)到室溫并攪拌2 h。蒸發(fā)溶劑，通過硅膠柱色譜法(EtOH:CHCl3, l:9)純化粗化合物，以定量收率得到6-氰基尿苷(Ia) (0.076 g)。 UV人，= 283 nm; NMR (DMSO-^6/D20) S ppm 3.41-3.66 (m， 3H), 4.00 (t, 1H, / = 5.7， 6.0 Hz)， 4.45 (dd, 1H, /= 5.1, 6.0 Hz), 5.73 (d， 1H, /= 5.1 Hz), 6.66 (s， 1H)。(d) 6-氰基尿苷-5'-—磷酸(Ib).在0°C，用吡啶(0.28 mL， 2.081 mmol)處理 POCl3 (0.3 mL， 3.271 mmol)、 H20 (0,037 g， 2.081 mmol)和CH3CN (2 mL) 的攪拌溶液，向其中添加6-氰基尿苷(0.2 g， 0.743 mmol)。在0。C攪拌5 h 后，用50mL冷水終止反應(yīng)，再繼續(xù)攪拌1 h。將反應(yīng)混合物濃縮，通過 Dowex離子交換樹脂(l.O M甲酸)純化粗化合物，以得到6-氰基尿苷-5'-— 磷酸(IO) (0.12 g， 46%)。 UV (H20): X^狀=283 nm; NMR (D20) S 3.98-4.26 (m, 3H), 4.43 (t， 1H， /= 6.3 Hz), 4.77 (dd， 1H, /= 3.9, 6.3 Hz), 5.95 (d, 1H，《7=3.9 Hz), 6.64 (s, 1H)。實(shí)應(yīng)粼2.'眾舍激Jc、 /rf、 /《浙//游合成o o oW W上 W。▽0 (\^0 HO OHX 入R-TBDMSId、N3O4HN'2-04P-0、O^Y '叫HO OH IeOHN'，-0~\^' 、N3 HO OHIf(轉(zhuǎn)化為其銨鹽)反應(yīng)條件(a)NaN3， DMF， r.t.; (b) 50% TFA， r丄；(c) POCl3，吡啶，H20， CH3CN， 0oC; (d)H2， PD/C， MeOH， r丄通過LDA和碘，在完全保護(hù)的尿苷C-6位引入碘基團(tuán)，用疊氮基進(jìn) 一步取代碘，產(chǎn)生6-疊氮基衍生物，如上面的路線所示。xxxv使用三氟乙酸 將異亞丙基和叔丁基二甲基甲硅垸基脫保護(hù)，得到6-疊氮基-尿苷Id。用 三氯氧磷將Id—磷酸化得到其一核苷酸，然后用Pd/C還原疊氮基團(tuán)，得 到收率良好的化合物6-氨基-尿苷-5'-0-—磷酸Ie。 xxxvi，皿vii'x^iii將化合物 Id的疊氮基團(tuán)還原得到6-氨基-尿苷Ic。用三氯氧磷將化合物Ic磷酸化得 到其一核苷酸6-疊氮基-尿苷-5'-0-—磷酸Ie。(a) 6-疊氮基-5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2'，3'-0-異亞丙基尿苷.將5'-0-(叔丁基二甲基甲硅垸基)-2',3'-0-異亞丙基-6-碘尿苷(0.25 g， 0.48 mmol)溶 于干燥DMF (3 mL)，加入NaN3 (0.034 g， 0.53 mmol)。將混合物在室溫下 在暗處攪拌1小時(shí)。在真空下蒸發(fā)有機(jī)溶劑，將粗產(chǎn)物溶于乙酸乙酯(15 mL)，用鹽水洗滌并干燥(Na2S04)。蒸發(fā)有機(jī)層，通過硅膠柱色譜法(1% EtOH:CHCl3)純化粗產(chǎn)物。在暗處純化化合物并蒸發(fā)溶劑，以92%的收率 得到標(biāo)題化合物6-疊氮基-5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2'，3'-0-異亞丙基 尿苷(0.19g， 0.44mmo1)，為淺棕色固體。！H NMR (CDC13) d 0.06 (s, 6H), 0.89 (s, 9H), 1.34 (s， 3H) 1.54 (s， 3H)， 3.74-3.85 (m, 2H), 4.08-4.15 (m， 1H)， 4.80 (dd， 1H， 《/= 4.8， 6.3 Hz)， 5.14 (dd, 1H, /= 1.5, 6.3 Hz), 5.50 (s, 1H), 6.09 (dd， 1H,J= 1.5 Hz)， 9.12 (brs， 1H)。(b) 6-疊氮基尿苷(W).在0。C，用50%含水三氟乙酸(3 mL)處理6-疊氮基-5'-0-(叔丁基二甲基甲硅垸基)-2'，3'-0-異亞丙基尿苷(0.300 g， 0.683 mmol) 的攪拌溶液。然后使反應(yīng)混合物達(dá)到室溫，再攪拌一小時(shí)。蒸發(fā)溶劑并通 過柱色譜法(10-15% EtOH在CHCl3中)純化粗產(chǎn)物，以89%的收率得到6-疊氮基尿苷Id (0.17 g， 0,61 mmol)，為淺棕色固體。UV (H20):入鵬=285 nm; !H NMR (D20) S 3.77 (dd， 1H, /= 5.4， 12.0 Hz)， 3,89-4.00 (m, 2H), 4.43 (t: /= 6.9 Hz 1H), 4.77 (dd, 1H, /= 3.6, 6.9 Hz), 5.76 (s， IH)， 6.07 (d, 1H， /= 3.6 Hz)。 HRMS (ESI) C9HuN506Na (M + Na+)的計(jì)算值308.0601，實(shí)測(cè)值 308.0597。(c) 6-疊氮基尿苷-5'-O"—磷酸(If)，在0。C，用吡啶(0.26mL， 3.24 mmol)處 理水(0.03g， 1.89 mmol)和POCl3 (0.28 mL， 2.97 mmol)在無水乙腈(3 mL)中的攪拌溶液，攪拌IO分鐘。添加6-疊氮基尿苷Id，在0。C將混合物再 攪拌5小時(shí)。用25mL冷水終止反應(yīng)，再繼續(xù)攪拌一小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，通 過柱色譜法(Dowex離子交換堿性樹脂，0.1 M甲酸)純化粗產(chǎn)物，以60% 的收率得到作為糖漿劑的一核苷酸If (0.23 g， 0.63 mmol)。 UV (H20) Xmax =283 nm; ，H NMR (D20) S 3.78-3.85 (m, 1H), 3.89-4,00 (m， 2H), 4.34 (t, /= 6.9 Hz 1H), 4.80 (m， 1H), 5.73 (s, IH)， 6.04 (brs， 1H). 31P NMR (D20) S ppm 2.47, HRMS (ESI，負(fù)性)QHnNsC^P (M')的計(jì)算值364.0299，實(shí)測(cè)值 364.0307。(d) 6-氨基尿苷-5'-0-—磷酸Ie.將一核苷酸If (0.06 g， 0.15 mmol)溶于50% 含水甲醇并添加10% Pd/C (10 mg)。將混合物在氫氣氛和室溫下攪拌2小 時(shí)。通過Cdite⑧過濾混合物并蒸發(fā)溶劑至干，以85%的收率得到6-氨基 尿苷國5'-0-—磷酸Ie,為糖漿劑。UV (H20)入鵬=270 nm; & NMR (D20) 5 3.96-4.05 (m， 2H)， 4.12-4.24 (m, 2H), 4.51 (t, /= 6.6 Hz IH)， 4.81 (s, 1H), 6.20 (d, / = 6.6, 1H). HRMS (ESI，負(fù)性)C9H13N309P (M，的計(jì)算值338.0394，實(shí) 測(cè)值338.0403。(e) 6-氨基尿苷(Ic).使用上面實(shí)施例2(d)所述的方法，通過在MeOH中，在 Pd/C的存在下，用氫處理6-疊氮基尿苷(Id)以獲得化合物Ic。^C^賄h眾合激/g界/A游會(huì)成反應(yīng)條件(a) i.丙酮/I^， ii, TBDMSC1,咪唑/0€2(:12， 0-25。C; (b) LDA， CH3I， THF，-78。C; (c) 50% TFA， r丄；(d) POCl3,吡啶，H20， CH3CN， 0°C.根據(jù)文獻(xiàn)方法，由尿苷合成靶分子。皿ix通過LDA和甲基碘在C-6位 引入甲基。"用TFAX"將保護(hù)基脫保護(hù)得到化合物Ig，然后用三氯氧磷一 磷酸化x'ii'x"ii得到一磷酸化的核苷Ih。最后，通過在0'C用0.5MNH4OH溶 液中和，將一磷酸化合物Ib轉(zhuǎn)化為銨鹽，凍千以獲得作為粉末的銨鹽。(a) 5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2'，3'-0-異亞丙基尿苷，在室溫下，滴加 H2S04 (0.5 mL)處理尿苷(lg, 4.098 mmol)的干燥丙酮(50 mL)的攪拌懸浮 液，將所得混合物再攪拌l h并用Et3N中和。蒸發(fā)溶劑，通過柱色譜法(5-8% MeOH在CHC13中)純化粗產(chǎn)物，以定量收率得到2',3'-0-異亞丙基尿苷 (1.15 g)，為白色固體。！H NMR (CDC13) d: 1.36 (s, 3H,-CH3)， 1.57 (s, 3H,-CH3)， 3.80 (dd， 1H， /= 3.3， 12.0 Hz, H-5')， 3.91 (dd， 1H， /= 2.7， 12.0 Hz， H-5")， 4.26-4.30 (m， 1H, H畫4'), 4.95 (dd, 1H, /= 3.3, 6.3 Hz, H畫3')， 5.02 (dd， 1H， /= 2.7, 6.3 Hz, H-2') 5.56 (d， 1H, /= 2.7 Hz, H-l'), 5.72 (d， 1H， 8.1 Hz， H-5)，7.36(d， 1H, /=8.1 Hz, H-6)。在0。C，用咪唑(0.095 g， 1.408 mmol)和 TBDMSC1 (0.105 g， 0.704 mmol)處理2'，3'-0-異亞丙基尿苷(0.2 g， 0,704 mmol)的干燥CH2C12 (3 mL)的攪拌溶液。使反應(yīng)混合物到達(dá)室溫并攪拌1 h。在真空下蒸發(fā)溶劑，將固體溶于乙酸乙酯(30mL)，用水(15mL)、鹽水 (15 mL)洗滌，并干燥(Na2S04)。蒸發(fā)溶劑，通過柱色譜法(5% MeOH在 CHC13中)純化粗產(chǎn)物，以96%的收率得到5'-0-(叔丁基二甲基甲硅垸基)-2',3'-0-異亞丙基尿苷(0.268 mg)，為泡沫狀固體。& NMR (CDC13): d 0.10 (s， 6H，-CH3)， 0.90 (s， 9H,-CH3)， 1.36 (s， 3H，-CH3) 1,59 (s, 3H，-CH3), 3.79 (dd， 1H， 《/= 2.7, 11.2 Hz， H5')， 3.92 (dd, 1H， 《/= 2.4， 11.2 Hz, H國5")， 4,30-4.33 (m， 1H， H國4'), 4.67 (dd， 1H， 《/= 2.7， 6.0 Hz, H國3')， 4.75 (dd， 1H， /= 3.0, 6.0 Hz, H-2')， 5.66 (d, 1H， /= 8.1 Hz， H誦5), 5.96 (dd， 1H， /= 3.0 Hz, H誦l')， 7.68 (d， 1H, / =8.1 Hz， H-6), 8.47 (brs， 1H，-NH)。(b) 5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-甲基-2'，3'-0-異亞丙基尿苷.在-78。C， 用5'-0-(叔丁基二甲基甲硅垸基)-2'，3'-0-異亞丙基尿苷(0.25 g， 0.628 mmol) 的干燥THF 1.5 mL溶液處理LDA (0.62 mL， 1.256 mmol， 2.0 M THF溶液)的干燥THF (2 mL)攪拌溶液。在攪拌1 h后，添加甲基碘(0.628 mmol)的 干燥THF (2 mL)溶液，在相同溫度下將混合物再攪拌5 h。用AcOH (0.3 mL)終止反應(yīng)，然后使其到達(dá)室溫并溶于乙酸乙酯(25 mL)。用飽和 NaHC03溶液(10 mL)、鹽水(IO mL)洗滌有機(jī)層，并干燥(Na2S04)。蒸發(fā)溶 劑，通過柱色譜法(己垸-乙酸乙酯，70:30)純化粗產(chǎn)物，得到5'-0-(叔丁基 二甲基甲硅烷基)-6-甲基-2'，3'-O-異亞丙基尿苷，為泡沫狀白色固體。
(c) 6-甲基尿苷(Ig).在0°C，用50%含水三氟乙酸(3 mL)處理5'-0-(叔丁基 二甲基甲硅垸基)-6-甲基-2'，3'-0-異亞丙基(0.300 g)的攪拌溶液，然后使其 到達(dá)室溫并攪拌2 h。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜法(10-15% EtOH在CHC13中) 純化粗產(chǎn)物，得到6-甲基尿苷(Ig)，為白色固體。
(d) 6-甲基尿苷-5'-0-—磷酸(Ih).在0'C，用吡啶(0.261 mL， 3.24 mmol)處 理H20 (0.034 g， 1.89 mmol)和POCl3 (0.277 mL， 2.973 mmol)在干燥乙腈 (3 mL)中的攪拌溶液并將混合物攪拌10分鐘。添加6-甲基尿銜Ig) (0.675 mmol)，在相同溫度下將混合物再攪拌5h。用25mL冷水終止反應(yīng)，再繼 續(xù)攪拌lh。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜法(Dowex離子交換堿性樹脂，0.1M甲 酸)純化粗產(chǎn)物，得到6-甲基尿苷-5'-0-—磷酸(Ih)，為糖漿劑。如前所述 將一磷酸衍生物轉(zhuǎn)化為二銨鹽。
<formula>formula see original document page 37</formula>反應(yīng)條件(a) i.丙酮/H", ii. TBDMSC1，咪唑/CH2Cl2, 0-25°C; (b) LDA,12, THF,-78。C; (c) 50% TFA， r.t.; (d) POCl3，吡啶，H20, CH3CN， 0°C.
由尿苷合成化合物Ii和Ij。使用二異丙基酰胺鋰在保護(hù)的尿苷C-6位 引入碘基團(tuán)，然后用碘處理。x"v再用TFA脫保護(hù)得到化合物Ii，隨后用三 氯氧磷磷酸化得到一核苷酸Ij。 x一vi，^i然后，通過在O'C用0.5 M NH4OH 溶液中和將化合物Ij轉(zhuǎn)化為其銨鹽，凍干以得到作為粉末的銨鹽。
(a) 5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2'，3'-0-異亞丙基尿苷.在室溫下，滴加 H2S04 (0.5 mL)處理尿苷(l g， 4.1 mmol)的無水丙酮(50 mL)攪拌懸浮液， 并將所得混合物再攪拌一小時(shí)。然后用Et3N中和反應(yīng)物并濃縮。通過柱 色譜法(5-8% MeOH:CHCl3)純化粗混合物，以得到2',3'-0-異亞丙基尿苷 (1,15 g，定量)，為白色固體。H NMR (CDC13) d ppm 1.36 (s， 3H，-CH3), 1.57 (s, 3H,-CH3)， 3.80 (dd， 1H， H陽5'), 3.91 (dd, 1H, H-5")， 4.26-4.30 (m, 1H, H-4')， 4.95 (dd， 1H, H-3')， 5.02 (dd, 1H, H-2') 5.56 (d, 1H， H國l'), 5.72 (d, 1H, H-5), 7.36 (d， 1H， H國6)。
在0。C，用咪唑(0.095 g， 1.4 mmol)和TBDMSiCl (0.105 g， 0.7 mmol) 處理2',3'-(9-異亞丙基尿苷(0.2 g， 0.7 mmol)的無水CH2C12 (3 mL)攪拌溶 液。使反應(yīng)混合物到達(dá)室溫，再攪拌一小時(shí)。在真空下蒸發(fā)溶劑，將粗化 合物溶于乙酸乙酯(30 mL)，用水(15 mL)、鹽水(15 mL)洗滌并干燥 (Na2S04)。蒸發(fā)溶劑，通過柱色譜法(5% MeOH在CHC13中)純化粗產(chǎn)物， 獲得5'-0-(叔丁基二甲基甲硅垸基)-2'，3'-0-異亞丙基尿苷(0.27 mg, 96%收 率)，為泡沫NMR (CDC13) d ppm 0.10 (s， 6H, CH3)， 0,90 (s， 9H， CH3)， 1.36 (s， 3H， CH3) 1.59 (s, 3H， CH3)， 3.79 (dd， 1H， H5')， 3.92 (dd， 1H, H-5")， 4.30-4.33 (m, 1H, H-4')， 4.67 (dd， 1H， H-3')， 4.75 (dd， 1H， H畫2')， 5.66 (d， 1H, H-5)， 5.96 (dd， 1H, H畫l'), 7.68 (d， 1H， H-6)， 8,47 (brs， 1H，-NH)。
(b) 5'-CK叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-碘-2'，3'-0-異亞丙基尿苷.在-78'C，用 溶于1.5 mL無水THF的5'-CK叔丁基二甲基甲硅垸基)-2',3'-0-異亞丙基尿 苷(0.25§， 0.6 mmol)處理LDA (0.62 mL， 1.3mmo1， 2.0 M THF溶液)的無 水THF (2 mL)攪拌溶液。在攪拌1 h后，添加碘(0.16 g， 0.6 mmol)的無水 THF(2mL)溶液，在相同溫度下將混合物再攪拌5 h。用AcOH (0.3 mL)終 止反應(yīng)，然后使其到達(dá)室溫并溶于乙酸乙酯(25 mL)。用飽和NaHC03溶液(IO mL)、 5% Na2S203溶液(IO mL)、鹽水(IO mL)洗滌有機(jī)層并干燥 (Na2S04)。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜法(己烷-乙酸乙酯，70:30)純化粗產(chǎn)物， 得到5'-CK叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-碘-2',3'-0-異亞丙基尿苷(0.224 g, 68%)，為黃色泡沫NMR (CDC13) d ppm 0.06 (s, 6H, CH3), 0.89 (s， 9H, 3CH3)， 1.35 (s, 3H， CH3) 1.56 (s, 3H， CH3), 3.76-3.86 (m， 2H, H5'， H-5")， 4.15-4.20 (m, 1H, H-4'), 4.81 (dd, 1H， 《/= 4.2， 6.3 Hz, H-3'), 5.18 (dd， 1H, /= 2.0， 6.3 Hz， H-2')， 6.09 (s， 1H, H畫5)， 6.45 (dd, 1H, /= 2.0 Hz， H-l'), 8.78 (brs， 1H, NH)。
(c) 6-碘-尿苷(Ii).在0°C，用50%含水TFA (3 mL)處理5'-0-(叔丁基二甲基 甲硅烷基)-6-碘-2'，3'-0-異亞丙基尿苷(0.300 g， 0.572 mmol)的攪拌溶液， 使其到達(dá)室溫并在暗處攪拌2 h。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜法(10-15% EtOH 在CHCl3中)純化粗產(chǎn)物，得到6-碘尿苷Ii (0.182 g， 0,49 mmol， 86%)， 為淺棕色固體。UV (H20): Xmax = 268謹(jǐn)(e = 8975); ，H NMR (D20) S ppm 3.77 (dd, 1H, H-5')， 3.91 (dd， 1H， H-5")， 3.978-4.032 (m， 1H， H-4')， 4.43 (t， 1H, H-3'), 4.84 (dd， 1H, H-2'), 6.06 (d， 1H， H-l')， 6.67 (s， 1H, H-5). HRMS (ESI) CsHnl^OeNal (M+Na+)計(jì)算值392.9554，實(shí)測(cè)值392.9565。
(d) 6-碘尿苷-5'-0-—磷酸(Ij).在0。C，用吡啶(0.261 mL， 3.24 mmol)處理 H20 (0.034 g， 1.89 mmol)和POCl3 (0.28 mL， 2.97 mmol)的無水乙腈(3 mL) 攪拌溶液，攪拌10分鐘。添加6陽碘尿苷(0.250 g， 0.67mmo1)，在O'C將混 合物再攪拌5 h。然后用25 mL冷水終止反應(yīng)，再繼續(xù)攪拌一小時(shí)。蒸發(fā) 溶劑，通過柱色譜法(Dowex離子交換堿性樹脂，O.IM甲酸)純化粗產(chǎn)物， 得到6-碘尿苷-5'-0-—磷酸(Ij) (0.207 g， 68%)，為糖漿劑。UV (H20): Xmax =267 nm (e = 28卯)；'H NMR (D20) S ppm 3.78 (dd， 1H， H-5')， 3.91 (dd, 1H, H-5")， 3.98-4.03 (m， 1H, H-4')， 4.43 (t， H誦3'), 4.84 (dd， 1H， H-2')， 6.05 (d， 1H, H-l'), 6.67 (s, 1H， H-5). 31P NMR (D20) S ppm 2.214. HRMS (ESI,負(fù)性) C9HuN209PI (lvr)計(jì)算值448.9252，實(shí)測(cè)值448.9263。反應(yīng)條件(a) THF， I2，-78°C， LDA; (b) NH2Me， EtOH， TEA; (c) NHMe2， EtOH, TEA; (d) TFA, H20; (e) POCl3,吡啶，H20， CH3CN。
(a) 5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-iV-甲基氨基-2'，3'-0-異亞丙基尿苷.將
5'-CK叔丁基二甲基甲硅垸基)-6-碘-2'，3'-0-異亞丙基尿苷(262 mg, 0.5 mmol) 溶于20mL干燥乙醇中，然后添加甲胺(187mg)，再添加三乙胺(l mL)。將 反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3 h，消耗掉所有原料。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干 并通過柱色譜法(CHCl3:Me01^ 9:1)純化，以獲得98mg 5'-0-(叔丁基二甲 基甲硅烷基)-6-甲氨基-2',3'-0-異亞丙基尿苷(收率50%)。
(b) 5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-iV,iV-二甲基氨基-2'，3'-0-異亞丙基尿苷. 除使用二甲胺代替甲胺外，方法同上。反應(yīng)在3 h內(nèi)完成。柱色譜法使用溶劑己垸:EtoAc-l:l純化產(chǎn)物(收率77.1%)。
(c) 6-A^V-二甲基氨基尿嘧啶.將TFA (10mL)和H20 (10 mL)混合，冷卻到 (TC并加至包含5'-0-(叔丁基二甲基甲硅垸基)-6-A^-二甲基氨基-2',3'-0-異 亞丙基尿苷的燒瓶中。將混合物在該溫度下攪拌2 h，然后在室溫下再攪 拌一小時(shí)。將混合物蒸發(fā)至干，用三乙胺中和混合物，通過柱色譜法 (CHCl3:MeOH-17:3)純化所得混合物，以得到6-AT,iV-二甲基氨基尿嘧啶。
(d) 6-碘尿苷(Ii).用三氟乙酸處理5'-<9-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-碘-2'，3'-O-異亞丙基尿苷并使用柱色譜法純化產(chǎn)物。
(e) 6-;V,iV-二甲基氨基尿苷(11)).用二甲胺的乙醇和三乙胺溶液處理6-碘尿 苷(Ii),如上所述。通過柱色譜法(EtOAc: MeOH = 8:1)純化產(chǎn)物，以得到 70mg6-A/^-二甲基氨基尿苷(11)，收率卯.3%。
(f) 6-;V-甲基氨基尿苷(Ik).用三氟乙酸水溶液處理5'-0-(叔丁基二甲基甲硅 烷基)-6界甲基氨基-2'，3'-0-異亞丙基尿苷以得到6-iV-甲基氨基尿苷(Ik)。
(g) 6-iV-甲基氨基尿苷-5'-0-—磷酸(Im).在0°C ，用吡啶(37 mg)處理POCl3 (67 mg， 0.44 mmol)、 H20 (5 mg)和CH3CN (0.5 mL)的攪拌溶液。添加6-琴 甲基氨基尿苷Ik (30 mg, 0.11 mmol)，在該溫度下攪拌3 h。用1 mL冷水 終止反應(yīng)，再攪拌一小時(shí)。減壓蒸發(fā)混合物并通過HPLC純化殘余物，得 到2 mg6-AT-甲基氨基尿苷-5'力-一磷酸(Im)。
鄉(xiāng)亂'f展教5-泉攻微類纖
使用實(shí)施例1-5所述的方法，用5-氟尿苷代替尿苷作為原料，制備5-氟-6-氨基尿苷(In)、 5-氟-6-疊氮基尿苷(10)、 5-氟-6-碘尿苷(Ip)、及其一核 苷酸形式(分別為Iq、 Ir和Is)。
通過利用適當(dāng)受保護(hù)的核苷取代上文實(shí)施例所示的C6取代基，可以 合成其他化合物。文獻(xiàn)中大多數(shù)方法是普通的并可由本領(lǐng)域技術(shù)人員實(shí) 現(xiàn)。<formula>formula see original document page 42</formula>
反應(yīng)條件(a) i.丙酮/HT, ii. TBDMSC1，咪唑/CH;jCl2, 0-25°C; (b) LDA, ClC02Me， THF，-78。C; (c) 50% TFA， r丄；(d) POCl3,吡啶，H20， CH3CN, 0。C 。
由尿苷合成化合物It和Iu。通過LDA和氯甲酸甲酯在C-6位引入甲 氧基羰基。用TFA將保護(hù)基脫保護(hù)，然后用三氯氧磷一磷酸化，得到一磷 酸化的核苷。最后，通過在O-C用0.5 MNH4OH溶液中和，將一磷酸化合 物Iu轉(zhuǎn)化為銨鹽，并凍干以獲得作為粉末的銨鹽。
(a) 5'-0-(叔丁基二甲基甲硅垸基)2'，3'-0-異亞丙基尿苷.在室溫下，滴加 H2S04 (0.5 mL)處理尿苷(lg, 4.098 mmol)的干燥丙酮(50 mL)攪拌懸浮液， 將所得混合物再攪拌1 h，并用Et3N中和。蒸發(fā)溶劑，通過柱色譜法(5-8% MeOH在CHC13中)純化粗產(chǎn)物，以定量收率得到2',3'-0-異亞丙基尿苷 (1.15 g)，為白色固體。!HNMR (CDC13) d: 1.36 (s, 3H,-CH3), 1.57 (s， 3H，-CH3), 3.80 (dd， 1H， /= 3.3, 12.0 Hz， H畫5')， 3.91 (dd， 1H, J= 2.7， 12.0 Hz, H-5"), 4.26-4.30 (m， 1H， H-4'), 4.95 (dd， 1H， 《/= 3.3, 6.3 Hz， H-3'), 5.02 (dd， 1H, /= 2.7， 6.3 Hz， H畫2') 5.56 (d， 1H, /= 2.7 Hz， H-l')， 5.72 (d, 1H, /= 8,1 Hz, H-5), 7.36 (d, 1H， /= 8.1 Hz， H-6)。在0°C，用咪唑(0.095 g， 1.408 mmol)和 TBDMSC1 (0.105 g， 0.704 mmol)處理2,3-0-異亞丙基尿苷(0.2 g， 0.704 mmol)的干燥CH2C12 (3 mL)攪拌溶液。使反應(yīng)混合物到達(dá)室溫并攪拌1 h。在真空下蒸發(fā)溶劑，使固體溶于乙酸乙酯(30mL)，用水(15mL)、鹽水(15 mL)洗滌并干燥(Na2S04)。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜法(5% MeO在CHCl3 中)純化粗產(chǎn)物，以96%的收率得到2 (0.268 mg)，為泡沫狀固體。& 畫R (CDC13): d 0.10 (s， 6H，-CH3), 0.90 (s, 9H，-CH3), 1.36 (s， 3H,-CH3) 1.59 (s， 3H，-CH3)， 3.79 (dd， 1H， 《/= 2.7， 11.2 Hz， H5')， 3.92 (dd， 1H， 《/= 2.4， 11.2 Hz， H-5")， 4.30-4.33 (m, 1H, H-4')， 4.67 (dd， 1H， /= 2.7, 6.0 Hz， H-3'), 4.75 (dd， 1H， /= 3.0， 6.0 Hz, H隱2')， 5.66 (d， 1H， 《/= 8.1 Hz， H-5)， 5.96 (dd, 1H， /= 3.0 Hz， H-l'), 7.68 (d， 1H, /= 8.1 Hz, H誦6)， 8.47 (brs, 1H,國NH)。 (b) 5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-甲氧基羰基-2'，3'-0-異亞丙基尿苷. 在-78。C，用LDA (0.62 mL， 1.256 mmol， 2.0 M THF溶液)處理5'-0-(叔 丁基二甲基甲硅烷基)2',3'-0-異亞丙基尿苷(0.25 g， 0.628 mmol)的干燥 THF (2 mL)攪拌溶液。在攪拌1 h后，添加氯甲酸甲酯(0.048 g， 0.628 mmol)的干燥THF (2 mL)溶液，在相同的溫度下將混合物再攪拌5 h。用 AcOH(0.3 mL)終止反應(yīng)，然后使其到達(dá)室溫并溶于乙酸乙酯(25 mL)。 用飽和NaHCCV溶液(10 mL)、 5% Na2S203溶液(IO mL)、鹽水(IO mL)洗 滌有機(jī)層并干燥(Na2S04)。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜法(己垸-乙酸乙酯， 70:30)純化粗產(chǎn)物，以64%的收率得到標(biāo)題化合物(0.18 g)，為糖漿劑。 !H NMR (CDC13): d 0.056 (s, 6H,-CH3), 0.88 (s， 9H,-CH3), 1.34 (s, 3H，-CH3) 1.54 (s， 3H,-CH3), 3.75 (dd， 1H， J= 7.2， 10.9 Hz， H5'), 3.81 (dd， 1H， /= 5.1, 10.9 Hz， H5')， 3.93 (s， 3H ~CH3)， 4.06-4.12 (m， 1H， H國4')， 4.71 (dd， 1H， 《/ = 4.8, 6.4 Hz, H國3'), 5.15 (dd, 1H, /= 2.0，1 6.4 Hz, H-2')， 5.89 (d, 1H, /= 2.1 Hz， H-l')， 6.07 (s, 1H, H-5), 9.32 (brs， 1H,-NH)。
(c) 6-甲氧基羰基尿苷(It).在0°C，用50%含水TFA (3 mL)處理化合物5'-0-(叔丁基二甲基甲硅垸基)-6-甲氧基羰基-2'，3'-0-異亞丙基尿苷(0.23 g， 0.504 mmol)的攪拌溶液，然后使其到達(dá)室溫并攪拌2 h。蒸發(fā)溶劑并通過 柱色譜法(10-15% EtOH在CHC13中)純化粗產(chǎn)物，以89%的收率獲得It (0.135 g)，為固體。！HNMR(DMSO-D20):5 3.37(dd, lH, /=6.6，12.0Hz, H-5'), 3.54 (dd， 1H， /= 3.6, 12.0 Hz, H國5〃)， 3.62-3.67 (m, 1H， H-4')， 3.80 (s, 3H，-C02C&)， 388-3.97 (m， 1H， H-3'), 4.41 (dd， 1H, /= 4.2， 6.3 Hz, H-2')， 5.34 (d, 1H，J= 4.2 Hz, H-l')， 5.95 (s， 1H， H-5)。(d) 6-甲氧基羰基尿苷-5'-0-—磷酸(Iu).在0°C，用吡啶(0.154 mL， 1.卯7 mmol)處理H20 (0.02 g， 1.112 mmol)禾口 P0C13 (0.16 mL， 1.748 mmol)的干 燥乙腈(3 mL)攪拌溶液并攪拌10分鐘。添加化合物It (0.12 g， 0.397 mmol)，在相同的溫度下將混合物再攪拌5h。用25mL冷水終止反應(yīng)，再 繼續(xù)攪拌lh。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜法(Dowex離子交換堿性樹脂，0.1M 甲酸)純化粗產(chǎn)物，得到作為糖漿劑的Iu。 UV (H20):人max = 274腿；；]H NMR (D20): S 3,99 (s, 3H~C02C//5)， 4.02-4.08 (m， 2H, H-5'，5〃)， 4.16-4.23 (m， 1H， H-4'), 4.37 (t， /= 6.6 Hz 1H, H-3')， 4.75 (dd， 1H， 《/= 3.3, 6.6 Hz, H-2'), 5.70 (d， 1H， J= 3.6 Hz, H-l'), 6.26 (s, 1H， H-5)。
實(shí)應(yīng)河《必會(huì)激/v務(wù)/w游合成<formula>formula see original document page 44</formula>反應(yīng)條件(b) LDA， ClC02Et, THF，-78。C; (c) 50% TFA， r.t.; (d) POCl3, 吡啶，1120, CH3CN，0°C。
由5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)2'，3'-0-異亞丙基尿苷合成靶分子Iv 和Iw。通過LDA和氯甲酸乙酯在C-6位引入乙氧基羰基。用TFA將保護(hù) 基脫保護(hù)，然后用三氯氧磷一磷酸化得到一磷酸化的核苷Iv。通過在0'C 用0.5 MNH4OH溶液中和，將一磷酸鹽Iw轉(zhuǎn)化為銨鹽，凍干以得到作為 粉末的銨鹽。
'-O,叔丁基二甲基甲硅烷基)-6-乙氧基羰基-2'，3'-O-異亞丙基尿苷.在 78°C，用LDA(0.62mL， 1.256 mmol， 2.0 M THF溶液)處理5'-0-(叔丁基二甲基甲硅垸基)2'，3'-0-異亞丙基尿苷(0，25 g， 0.628 mmol)的干燥THF (2 mL)攪拌溶液。在攪拌lh后，添加氯甲酸乙酯(0.048 g， 0.628 mmol)的干 燥THF(2mL)溶液，在相同溫度下將混合物再攪拌5 h。用AcOH(0.3mL) 終止反應(yīng)，然后使其到達(dá)室溫并溶于乙酸乙酯(25 mL)。用飽和NaHC(V溶 液(IO mL)、 5% Na2S203溶液(IO mL)、鹽水(IO mL)洗滌有機(jī)層并干燥 (Na2S04)。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜法(己烷-乙酸乙酯，70:30)純化粗產(chǎn)物， 以64%的收率得到作為糖漿的標(biāo)題化合物(0.18 g)。
(b) 6-乙氧基羰基尿苷(Iv).在0°C，用50%含水TFA (3 mL)處理5'-0-(叔丁 基二甲基甲硅烷基)-6-乙氧基羰基-2',3'-0-異亞丙基尿苷(0.23 g， 0.504 mmol)的攪拌溶液，然后使其到達(dá)室溫并攪拌2 h。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜 法(10-15% EtOH在CHCl3中)純化粗產(chǎn)物，以89%的收率得到作為固體的 Iv (0.135 g)。
(c) 6-乙氧基羰基尿苷-5'-0-—磷酸(Iw).在0'C，用吡啶(0.154 mL， 1.907 mmol)處理H20 (0.02 g， 1.112 mmol)和P0C13 (0.16 mL， 1.748聽ol)的干 燥乙腈(3 mL)攪拌溶液并攪拌10分鐘。添加化合物Iv(0.12 g， 0.397 mmol)，在相同溫度下將混合物再攪拌5h。用25mL冷水終止反物，再繼 續(xù)攪拌lh。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜法(Dowex離子交換堿性樹脂，O.IM甲 酸)純化粗產(chǎn)物，得到作為糖漿劑的Iw。通過在Or用0.5 M NH4OH溶液 中和，將一磷酸鹽Iw轉(zhuǎn)化為銨鹽，凍干以得到作為粉末的銨鹽。實(shí)應(yīng)伊/9:眾合激/JC游會(huì)成<formula>formula see original document page 46</formula>反應(yīng)條件(a)丙酮，濃H2S04， r.t.; (b) PCC， 4 A分子篩，DCM， r丄；(c) NaBH4,EtOH、 0°C; (d) 50% HC104， 二甲氧基丙烷，丙酮，r.t.; (e)對(duì)甲基苯 甲酰氯，三乙胺，DCM; (f)預(yù)甲硅烷化的(presilylated)尿嘧啶，TMSOTf， CH3CN， 0。C至r上；(g) TBDMSC1， DMAP, TEA, DCM， r丄；(h) LDA, 12， THF,-78°C; (i) 7N NH3的甲醇溶液，r.t.; (j) POCl3，吡啶，H20， CH3CN, 0°C 。
將D-果糖選擇性地保護(hù)、氧化，然后還原。通過2,2-二甲氧基丙烷和 催化量的50。/。HClO4的丙酮溶液，使所得化合物重排。在干燥乙腈中使經(jīng) 修飾的糖與尿嘧啶偶聯(lián)得到兩種異構(gòu)體即a-異構(gòu)體和P-異構(gòu)體的混合物， 比率為 1:1?？梢栽谝粋€(gè)步驟中將期望的P-異構(gòu)體碘化，用7NNH3的甲 醇溶液脫保護(hù)并磷酸化，以得到期望的一磷酸鹽。保護(hù)基將在水解過程中 脫離。最后可以將核苷轉(zhuǎn)化為銨鹽Ix。 (a) 1，2:4，5-二-0-異丙叉基-P-吡喃果糖在室溫下，用注射器向D-果糖(15 g， 83.26 mmol)的干燥丙酮懸浮液 中添加濃H2S04 (1.4 mL)。在室溫下攪拌懸浮液，在3 h內(nèi)慢慢變得清 澈。將其冷卻到0 °C，添加NaOH (4.65 g)的水(42 mL)溶液以中和硫酸。 在減壓下除去溶劑，用二氯甲烷(2x)萃取殘余物。用水(2x)洗滌合并的萃取 物，然后用無水Na2S04干燥。在過濾后，除去溶劑以得到作為白色固體 的粗產(chǎn)物。將粗產(chǎn)物溶于二甲醚，添加己垸以沉淀出作為白色固體的純產(chǎn) 物(8.5 g)。(b) l，2:4，5-二-0-異丙叉基-P-D-赤型-2，3-己二酮-2，6-吡喃糖在室溫和N2下，在20分鐘內(nèi)，向1,2:4，5-二-0-異丙叉基-p-吡喃果糖 (8.24 g， 31.67 mmol， 1.0當(dāng)量)和粉末化4 A分子篩(20 g)的二氯甲垸(200 mL)混合物中分次添加PCC (20.5 g， 3.0當(dāng)量)。將混合物在室溫下攪拌5 h，然后用大量醚稀釋并過濾。使濾液通過cdite墊。使濾液通過硅膠墊。 在真空下除去溶劑，以得到作為白色固體的產(chǎn)物(7.8 g， 95%收率)。它不 經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步。(c) 1，2:4，5-二-0-異丙叉基-P-D-阿洛酮糖吡喃糖在15 QC，向1,2:4，5-二-0-異丙叉基-P-D-赤型-2,3-己二酮-2,6-吡喃糖 (16.4 g， 63.52 mmol， 1.0當(dāng)量)的乙醇(160 mL)溶液中一次性添加NaBH4 固體(1.45 g， 38.11 mmol， 0.6當(dāng)量)。將混合物攪拌1.5 h，然后在減壓下 蒸發(fā)到幾乎干燥。添加飽和NH4Cl (100 mL)溶液，并將混合物在室溫下攪 拌3h。用醚(3x)萃取它。用鹽水(2x)洗滌合并的萃取物，用無水Na2S04干 燥并過濾。除去溶劑以得到作為油的粗產(chǎn)物，將其直接用于下一反應(yīng)。(d) 1，:2:3，l二-0-異丙叉基-P-D-阿洛酮糖呋喃糖在0 QC，向粗制1，2:4,5-二-0-異丙叉基-P-D-阿洛酮糖吡喃糖(14.4 g) 的丙酮(150 mL)溶液中添加二甲氧基丙垸(4 mL)和60 % HC104 (1.0 mL)。 在相同的溫度下將混合物攪拌3h。添加氫氧化銨溶液(2 mL)。在蒸發(fā)后， 添加水。用醚(3x)萃取混合物。用鹽水(2x)洗滌合并的萃取物，用無水 Na2S04干燥并過濾。蒸發(fā)溶劑得到作為油的粗產(chǎn)物(10.5 g)，該產(chǎn)物在真 空干燥后固化。(e) 6-0-(4-甲苯酰基)-l，2:3，4-二-0-異亞丙基-D-阿洛酮糖呋喃糖在0 °C，向粗制1，2:3，4-二-0-異丙叉基-P-D-阿洛酮糖呋喃糖(10.5 g， 40. 35 mmol， 1.0當(dāng)量)、DMAP (0.49 g， 4.035 mmol， 0.1當(dāng)量)和TEA (20.42 g， 201.75腿ol， 5.0當(dāng)量)的攪拌溶液滴加對(duì)甲苯酰氯(6.86 g， 44.39 mmol， 1.1當(dāng)量)。使所得淺黃色溶液緩慢到達(dá)室溫，然后在室溫下 攪拌過夜。添加飽和NaHC03溶液。在攪拌30分鐘后，分離有機(jī)層并用 水(2x)洗滌，用無水Na2S04干燥。過濾并蒸發(fā)溶劑，得到粗產(chǎn)物，通過硅 膠柱色譜法(50:1-20:1己垸/EtOAc)純化它，得到作為白色固體的純產(chǎn)物 (10.0 g)。(f) l-3'，4'-0-異亞丙基-6'-0-(4-甲苯?；?-P-D-阿洛酮糖呋喃酰萄尿嘧啶向包含尿嘧啶(2.2 g)的燒瓶中添加HMDS (15 mL)和TMSC1 (2.4 mL)。在N2下將所得懸浮液加熱到120 QC并在該溫度下攪拌4 h，然后該 懸浮液變成清澈的溶液。將其冷卻到室溫，在真空中除去揮發(fā)性材料。將 殘余物在真空下保持45分鐘，然后溶于干燥乙腈(25 mL),在室溫下通過 套管轉(zhuǎn)移到6-O(4"甲苯?；?-l,2:3，4-二-0-異亞丙基-D-阿洛酮糖呋喃糖 (4.2 g， 11.1 mmol， 1.0當(dāng)量)的溶液中。將混合物冷卻到0 GC，通過注射 器添加TMSOTf (2.96g， 2.41 mL， 13.31 mmol， 1.2當(dāng)量)。使溶液緩慢到 達(dá)室溫然后攪拌過夜。滴加飽和NaHC03溶液。在攪拌30分鐘后，添加 水。用EtOAc (3x)萃取混合物。用鹽水(2x)洗滌合并的萃取物，用無水 MgS04干燥并過濾。蒸發(fā)溶劑得到粗產(chǎn)物，通過硅膠色譜(100:1-40:1 CH2Cl2/MeOH)純化它，得到作為白色固體的純1-[3'，4'-0-異亞丙基-6'-0-(4-甲苯?；?-a-D-阿洛酮糖呋喃?；鵠尿嘧啶和1-[3'，4'-0異亞丙基-6'-0-(4-甲苯?；?-p-D-阿洛酮糖呋喃?；鵠尿嘧啶( 1:1比率，4.26 g， 88.7 °/。收 率)。(g) l-[3'，4'-0-異亞丙基-6'-0-(4-甲苯?；?-P-D-阿洛酮糖呋喃酰基I-6-碘尿 嘧啶(預(yù)言性的)在-78。C,用LDA (1.984 mmol， 2.0 M THF溶液)的干燥THF (2 mL)溶 液處理l-[3',4'-0-異亞丙基-6'-0-(4-甲苯?；?-P-D-阿洛酮糖呋喃酰基]-尿嘧 啶(0.628 mmol)的干燥THF (5 mL)攪拌溶液。在攪拌1 h后，添加碘(0.161 g， 0.628 mmol)的干燥THF (2 mL)溶液，在相同溫度下將混合物再攪拌5 h。用AcOH (0.3 mL)終止反應(yīng)，然后使其到達(dá)溫度并溶于乙酸乙酯(25mL)。用飽和NaHC03溶液(10 mL)、鹽水(IO mL)洗滌有機(jī)層并干燥 (Na2S04)。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜法(己烷-乙酸乙酯，70:30)純化粗產(chǎn)物得 到標(biāo)題化合物。
(h) 1-1'-0-(叔丁基二甲基甲硅垸基)-3'，4'-0-異亞丙基-6'-0-(4-甲苯?；?-p-D-阿洛酮糖呋喃?；鵯-6-碘尿嘧啶(預(yù)言性的)
將化合物l-[3',4'-0-異亞丙基-6'-0-(4-甲苯?；?-P-D-阿洛酮糖呋喃酰 基]-6-碘尿嘧啶(1.51 g, 3.48 mmol， 1.0當(dāng)量)、TBDMSC1 (0.63 g， 4.18 mmol， 1.2 eq.)、咪唑(1.19 g， 17.42 mmol)和DMAP在干燥二氯甲烷(50 mL)中的混合物在室溫下攪拌過夜。添加飽和NaHC03溶液。分離有機(jī)層 并用二氯甲烷萃取水層。用水洗滌合并的有機(jī)層，用無水MgS04干燥，過 濾。除去溶劑得到粗產(chǎn)物，將其從乙酸乙酯/己垸中重結(jié)晶得到純產(chǎn)物。
(i) l-[l'-0-(叔丁基二甲基甲硅垸基)-3'，4'-0-異亞丙基-P-D-阿洛酮糖呋喃酰 基-6-碘尿嘧啶(預(yù)言性的)
將l-[l'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-3',4'-0-異亞丙基-6'-0-(4-甲苯酰 基)-j3-D-阿洛酮糖呋喃?；鵠-6-碘尿嘧啶(1.22 g)溶于7 N NH3的甲醇溶液。 將溶液在室溫下攪拌2天。在減壓下除去溶劑。通過硅膠柱色譜法(50:1-20:1 CH2Cl;j/MeOH)純化殘余物，得到純產(chǎn)物。 (j) l'-羥甲基-6-碘-尿苷-5'-—磷酸及其銨鹽(Ix)(預(yù)言性的)
在0。C，向POCl3 (0.676 g， 4.4讓ol， 4.4當(dāng)量)的干燥乙腈(4 mL)溶 液中添加吡啶(0.380 g， 4.8腿ol， 4.8當(dāng)量)和水(0.050 g， 2.8 mmol， 2.8 當(dāng)量)。在攪拌后，添加1-[1'-0-(叔丁基二甲基甲硅垸基)-3',4'-0-異亞丙基-(3-D-阿洛酮糖呋喃?；鵠-6-碘尿嘧啶(0.429 g， 1.0 mmol， 1.0當(dāng)量)。將所 得溶液攪拌4.5h并添加冰水(20mL)。將混合物再攪拌1.5 h，然后在真空 下蒸發(fā)。將殘余物負(fù)載到堿性樹脂Dowex柱上。用大量水(~ 300 mL)洗滌 柱，然后用5%甲酸洗滌以得到產(chǎn)物酸。在0C用0.5N氫氧化銨小心中和 該油并凍干，以得到化合物Ix。
眾會(huì)欽/j游合成<formula>formula see original document page 50</formula>反應(yīng)條件(a)乙酸酐，吡啶,r.t. l小時(shí)。
制備6-碘尿苷(Ii)在2 mL干燥吡啶(50 mg, 0.135 mmol)中的攪拌混合 物。向該混合物中添加0.068 mmol乙酸酐的干燥吡啶(2 mL)溶液。將該混 合物攪拌25分鐘，添加另外0.034 mmol乙酸酐的干燥吡啶(l mL)溶液， 然后添加另外0.017 mmol乙酸酐的吡啶(l mL)溶液。在攪拌15分鐘后， 將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干，通過柱色譜法(3% MeOH在CHC13中)純化產(chǎn)物， 以得到10mg(18n/。收率)目標(biāo)化合物Iy。
眾合欽/z浙/做游合成
<formula>formula see original document page 50</formula>
反應(yīng)條件(a) i.丙酮/H+， ii. TBDMSC1，咪唑/CH2Cl2， 0-25°C; (b) LDA, 12, THF,-78。C; (c) 50% TFA， r.t.; (d) P0C13,吡啶，H20, CH3CN, 0°C 。
由5-溴尿苷合成化合物Iz和Iaa。通過LDA和碘在C-6位引入碘。 用TFA將保護(hù)基脫保護(hù)，然后用三氯氧磷一磷酸化，得到一磷酸化的核苷。最后，通過在0。C用0.5 MNH4OH溶液中和，將一磷酸鹽化合物轉(zhuǎn)化 為Iaa的銨鹽，凍干以得到作為粉末的銨鹽。
(a) 5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)2'，3'-0-異亞丙基-5-溴尿苷.在室溫下，滴 加H2S04 (0.5 mL)處理5-溴尿苷(lg)的干燥丙酮(50 mL)攪拌懸浮液，將所 得混合物再攪拌1 h，并用Et3N中和。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜法(5-8% MeOH在CHCl3中)純化粗產(chǎn)物，以定量收率得到作為白色固體的2,3-0-異 亞丙基-5-溴尿苷(U5 g)。在0'C，用咪唑(0.095 g， 1.408 mmol)和 TBDMSC1 (0.105 g， 0.704 mmol)處理2,3-0-異亞丙基-5-溴尿苷(0.2 g)的干 燥CH2C12 (3 mL)攪拌溶液。使反應(yīng)混合物到達(dá)室溫并攪拌1 h。在真空下 蒸發(fā)溶劑，將固體溶于乙酸乙酯(30 mL)，用水(15 mL)、鹽水(15 mL)洗滌 并干燥(Na2S04)。蒸發(fā)溶劑，通過柱色譜法(5Y。MeOH在CHCl3中)純化粗 產(chǎn)物，以96%的收率得到作為泡沫狀固體的標(biāo)題化合物。
(b) 5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)-2'，3'-0-異亞丙基5-溴-6-碘-尿苷.在 -78。C，用LDA (1.984 mmol， 2.0 M THF溶液)的干燥THF (2 mL)溶液處理 5'-0-(叔丁基二甲基甲硅烷基)2'，3'-0-異亞丙基-5-溴尿苷(0.628 mmol)的干 燥THF (5 mL)攪拌溶液。在攪拌1 h后，添加碘(0.161 g， 0.628 mmol)的 干燥THF (2 mL)溶液，在相同溫度下將混合物再攪拌5 h。用AcOH (0.3 mL)終止反應(yīng)，然后使其到達(dá)室溫并溶于乙酸乙酯(25 mL)。用飽和 NaHC03溶液(10 mL)、鹽水(IO mL)洗滌有機(jī)層并干燥(Na2S04)。蒸發(fā)溶劑 并通過柱色譜法(己烷-乙酸乙酯，70:30)純化粗產(chǎn)物，以卯％收率得到作為 泡沫狀黃色固體的標(biāo)題化合物。
(c) 5-溴-6-碘尿苷(Iz).在0°C ，用50%含水TFA (3 mL)處理5'-0-(叔丁基二 甲基甲硅烷基)-2'，3'-0-異亞丙基5-溴-6-碘-尿苷(0.300 g)的攪拌溶液，然后 使其到達(dá)室溫并遮光攪拌2 h。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜法(10-15% EtOH在 CHCl3中)純化粗產(chǎn)物，以85%的收率得到作為淺棕色固體的Iz (0.182 g， 0.492 mmol)。
(d) 5-溴-6-碘尿苷-5'-0-—磷酸銨鹽(Iaa).在0'C，用吡啶(0.261 mL， 3.24 mmol)處理H20 (0.034 g， 1.89 mmol)和POCl3 (0.277 mL， 2.973 mmol)的干 燥乙腈(3 mL)攪拌溶液并攪拌10分鐘。添加化合物Iz (0.675 mmol)并在相 同溫度下將混合物再攪拌5 h。用25mL冷水終止反應(yīng)，再繼續(xù)攪拌lh。蒸發(fā)溶劑并通過柱色譜法(Dowex離子交換堿性樹脂，0.1 M甲酸)純化粗產(chǎn) 物，以61%的收率得到作為糖漿劑的一磷酸鹽衍生物。最后，通過在0'C 用0.5 M NH4OH溶液中和將一磷酸鹽化合物轉(zhuǎn)化為Iaa的銨鹽，凍干以得 到作為粉末的銨鹽。
實(shí)週"..惡鵬嚴(yán)虛潛辦師欲蕭定
使用SYBR-Green方法，進(jìn)行測(cè)定比較本發(fā)明的化合物的抗瘧原蟲活 性。^i"簡(jiǎn)言之，將化合物溶于DMSO以得到10 mg/mL的濃度。將15微 升RPMI-A添加到96-孔碟的每個(gè)孔中，然后將40 nL RPMI-A和10 化 合物溶液添加到第一孔，將孔的內(nèi)容物混合，取出50pL并依次添加到系 列中的下一孔，重復(fù)該過程直至倒數(shù)第二孔為止。這使得板依次具有一系 列的兩倍稀釋，除了系列的最后一個(gè)孔，它只包含RPMI-A。將15微升寄 生蟲培養(yǎng)物(2%血細(xì)胞比容，2%寄生蟲血癥)添加到各孔中，然后在37°C 的95。/。N2、 3%C02、和2%02下將板溫育72小時(shí)。
CHO細(xì)胞(ATCC, Manassas， VA)在添加有10Q/。胎牛血清(Sigma, St. Louis， MO)、 25 mM HEPES和慶大霉素(gentimicin) (RPMI-10)的RPMI-1640中生長(zhǎng)。將細(xì)胞接種到96孔板中并在每個(gè)孔中長(zhǎng)成至50%匯合/100 HL RPMI-IO，然后只添加DMSO或者在DMSO中溶解成10 mg/mL濃度 的實(shí)驗(yàn)化合物。如下制備化合物梯度將與10 nL化合物溶液混合的90 pL RPMI-10依次添加到系列的第一孔、混合、將100 pL轉(zhuǎn)移到下一孔并 重復(fù)直至倒數(shù)第二孔為止。在48小時(shí)后，如下確定細(xì)胞存活率棄去孔 中的培養(yǎng)基并添加在RPMI-IO中的100 jiL 10 mg/mL 3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]陽2，5-二苯基四唑溴(MTT, Sigma，StLouis，MO)，將板再溫育一小時(shí)，然 后除去培養(yǎng)基并添加100 DMSO，在650 nm處讀取吸光度。x"x應(yīng)用劑 量-響應(yīng)曲線的非線性回歸分析，使用計(jì)算機(jī)程序SigmaPlot (Jandd Scientific),確定個(gè)體化合物的值ICso。
(a)酶學(xué)在反應(yīng)緩沖液(50 mM Tris， 20 mM DTT， 40mMNaCl， pH 7.5)中，在室溫下溫育來自嗜熱自養(yǎng)甲烷桿菌(^0的ODCase和化合物 Id。 Id的濃度為酶濃度的lx、 2.5x、 3.5x和5x，分別相當(dāng)于50、 125、 175和250 ^M。在溫育開始30分鐘、2、 4、 8、 12、 24、 48和96小時(shí)后測(cè)量酶-抑制劑反應(yīng)混合物中剩余的酶活性。從反應(yīng)混合物中取出等份(l
JiL)并用測(cè)定緩沖液(50mMTris， lmMDTT， pH 7.5)稀釋到2.5 mL。在稀 釋后，有效酶濃度為20nM，抑制劑濃度為20、 50、 70和100 nM。通 過注射5 ^iL 11.41 mM OMP (在測(cè)定緩沖液中制備)引發(fā)每個(gè)抑制測(cè)定。最 后的底物(OMP)濃度為40 jiM。
以類似的方式測(cè)定對(duì)來自惡性瘧原蟲(/y)的ODCase的抑制。在 0.5x、 lx、 1.2x禾卩2x，分別相當(dāng)于25、 50、 72和100 jiM實(shí)驗(yàn)化合物的存 在下溫育戶/ODCase (50 ^M)。對(duì)照反應(yīng)不含實(shí)驗(yàn)化合物。所有樣品在50 mMTris， 10 mM DTT， 20 mM NaCl, pH 8.0中制備并在室溫下溫育。在 37。C下，在高至48小時(shí)內(nèi)測(cè)量ODCase的剩余活性。在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，用 反應(yīng)緩沖液(50 mM Tris， lmM DTT, pH 8.0)將3 pL等份溫育混合物稀釋 到2.5 mL的最終體積。通過將6 2.85 mM OMP單次注射到ITC樣品室 中引發(fā)反應(yīng)。最終底物濃度為12^M。
每個(gè)樣品(15、 30和45分鐘溫育時(shí)間)中的尸/ODCase濃度為60 nM。 Id的濃度為30、 60和72 nM，分別相當(dāng)于0.5x、 lx和1.2x酶濃度。樣品 在37 。C溫育。通過注射3 nL 2.85 mM OMP測(cè)量這些樣品中剩余的酶活 性。通過將OMP和6-碘-UMP同時(shí)注射到ITC樣品室中的60 nM酶溶液 中，測(cè)量t-0時(shí)的酶活性。制備配體(底物和實(shí)驗(yàn)化合物)的溶液，使得在 注射3 ^L后，在反應(yīng)細(xì)胞中獲得最終濃度為30、 60和75 nM的實(shí)驗(yàn)化合 物和6 ^iM OMP。具有60 nM酶的對(duì)照樣品在37 °C溫育15-45分鐘，在 添加3 nL 2.85 mM OMP后測(cè)量酶活性。
(b)數(shù)據(jù)分析.由獲自等溫滴定熱量測(cè)定(功對(duì)時(shí)間)的等溫曲線，由反應(yīng) 進(jìn)行曲線(progress curves)的線性部分得到酶活性。在所有計(jì)算中假定不存 在抑制劑翻轉(zhuǎn)的共價(jià)抑制。<formula>formula see original document page 53</formula>
由ln(酶活性n/。)對(duì)時(shí)間的斜率得到各抑制劑濃度下的抑制速率(Q。由
下列方程的斜率非線性擬合得到酶抑制常數(shù)^nact和&。
其中A是特異性抑制劑濃度下的抑制速率，Mnact為失活速率，^為失 活分裂常數(shù)。1斜率=(2)
失活速率^aet源自y-軸截距的倒數(shù)。形成可逆復(fù)合的抑制常數(shù)&源 自負(fù)X-軸的倒數(shù)。
由下式計(jì)算失活半衰期11/2:
tw-0.693/^ct (3)
(c) 結(jié)晶學(xué)分析使用BioRAD蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒并以BSA作為標(biāo)準(zhǔn) 確定所有A^ODCase濃度。在由20 mMHEPES-NaOHpH 7.5、 150mM氯 化鈉和5 mM DTT組成的結(jié)晶緩沖液中制備包含6-碘-UMP (Id， 10 mM)的 ODCase(lO mg/mL)。將該蛋白質(zhì)溶液(2 ^L)與包含1.1-1.3 M檸檬酸鈉、 5%( v/v)二氧雜環(huán)己烷和100 mM MES pH 6.5的2 (xL貯備液混合，然后使 用懸滴技術(shù)進(jìn)行結(jié)晶。第二天，微接種引起形成衍射-質(zhì)量晶體，這些晶體 需要一周達(dá)到其完全尺寸。當(dāng)收集時(shí)，將晶體立即浸入添加有用于保護(hù)結(jié) 晶的15。/。(v/v)甘油的母液中，然后在100K干氮流中閃蒸凍干。衍射數(shù)據(jù) 收集至1.6 A分辨率，光束14BM-C BioCARS, Advanced Photon Source, IL， USA。使用來自CCP4程序套件的DENZO， SCALEPACK和TRUNCATE 程序還原所收集的數(shù)據(jù)。"'"i晶體屬于P2,空間群，其單元細(xì)胞參數(shù)為a = 57.8 A， b = 73.3A， c = 59.lA， p= 119.3。?；贛f ODCase-BMP復(fù)合物 (PDB編號(hào)1X1Z)的坐標(biāo)系計(jì)算各相。借助于程序O構(gòu)建原子模型并使用
程序CNS， 1.1版精修，得到最終Rc:ystal和Rfree因子分別為15.9%和 18.7%。 'i"，"v表SI顯示數(shù)據(jù)收集和最終精修統(tǒng)計(jì)。原子坐標(biāo)和結(jié)構(gòu)因子已 存入蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫。
(d) 原始血液細(xì)胞測(cè)定.
使用下列方法進(jìn)行人類原始血液細(xì)胞測(cè)定。將3 ml PBS (OCI培養(yǎng)基 設(shè)備)添加到來自正常成人對(duì)照的3 ml無血清血液中。將6 ml Ficoll-Paque Plus (Amersham 17-1440-03)吸移到15 ml離心管中。用PBS覆蓋稀釋的血 液。在室溫下在2500rpm不間斷離心IO分鐘。
取出并棄去上層相(PBS)。將PBS/Ficoll界面處的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至清潔的 15ml離心管中。添加10mLPBS。然后，在室溫下在1250 rpm離心10分 鐘。棄去上清液，將細(xì)胞小丸懸浮到添加有5.5xl0-5M 2ME (Fisher 03446-IOO)和5% FBS (Hyclone SH30397-03 Lot # KPG21604)的Iscove's改良 Dulbecco's培養(yǎng)基(Gibco 12440，由OCI Media facility制備)中。以50，000 細(xì)胞/孔將細(xì)胞鋪到96-孔平底板(Costar 3595)中。添加伴刀豆球蛋白A (Pharmacia 17-0450-01)使最終濃度為1.5微克/ml。所有條件重復(fù)三次。
包括未經(jīng)處理的對(duì)照(只含Con A)。在37。 C、 5% C02和卯°/。相對(duì)濕 度下，將細(xì)胞培育48小時(shí)或72小時(shí)。在培育期最后8小時(shí)，每孔添加10 微升0.5 uCi H3 (Perkin Elmer NET027A)。將孔轉(zhuǎn)移到Unifilter-96 GFC板 (Perkin Elmer 6005174)中。
將板在37° C干燥1小時(shí)。每孔添加25微升Microscint O閃爍液 (Perkin Elmer 6013611)。通過讀取放射活性計(jì)數(shù)收集數(shù)據(jù)。
(e)對(duì)抗瘧原蟲的小鼠效能研究
尸.c/w6m^ c/wkn^'(Pcc) AS感染它們是通常用于小鼠效能研究的 兩禾中不同小鼠癥疾種類p. c/za6m^z' c/za6m^/ AS和尸.6wrg/ e/。 Pcc菌株誘 導(dǎo)更大的寄生蟲負(fù)荷，甚至使一些小鼠菌株死亡。如果將戶.6"rg/^'菌株 給予小鼠，它們會(huì)產(chǎn)生較少的寄生蟲但會(huì)病得很重。Po:菌株在小鼠中提 供了機(jī)會(huì)來觀察寄生蟲數(shù)目在合理健康動(dòng)物的情況下是否減少。因此，效 能模型中使用P"菌株。
如(Podoba JE和Stevenson, 1991)[2]所述保持血液階段PCCAS。通過 腹膜內(nèi)注射受1 x 106 R c/^6ai^' c/wkn^' AS-感染的紅細(xì)胞(PCCAS)引發(fā) 試驗(yàn)動(dòng)物的感染。通過在用Diff Quik (American Scientific Products, Mississauga, ON)染色的薄血涂片上確定寄生蟲血癥，在18天中每天監(jiān)測(cè) 感染過程。要測(cè)定的化合物在RPMI 1640中以遞送總體積為0.5mL的靶劑 量所需的濃度制備，然后用過濾器滅菌。在使用前，在4'C貯存化合物。 在注射后，每天監(jiān)測(cè)寄生蟲在外周循環(huán)中的存在，直至第一次觀察到寄生 蟲為止。然后連續(xù)三天，每天為小鼠注射單獨(dú)的RPMI 1640或溶于RPMI 的化合物。每天評(píng)價(jià)動(dòng)物的健康，通過檢查血膜確定寄生蟲血癥。對(duì)無活 性且被認(rèn)為患有末期疾病的動(dòng)物迅速實(shí)施安樂死。
00結(jié)果發(fā)現(xiàn)化合物Ii在體外抗寄生蟲活性評(píng)價(jià)中表現(xiàn)出有效的抗瘧原蟲活
性，其對(duì)抗惡性瘧原蟲ItG和3D7分離物的IC5o分別為4.4士1.3 mM和6.2士0.7 mM (圖4)。因此，化合物Ii是ODCase的共價(jià)抑制劑，其核苷類似物提供了 新一類的抗瘧抑制劑?；衔颕i對(duì)中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)、細(xì)胞毒素 (Vero)和人類成纖維細(xì)胞(HFF)細(xì)胞系的毒性分別為366 ± 45 mM (IC50)、 >300 mM (CC5。)和"0QmM (IC5。)。而且，觀察到對(duì)人類原始血液細(xì)胞 (PBLs)的毒性不高于200 mM。這些結(jié)果顯示化合物Ii可以磷酸化成其一磷 酸衍生物Ij并抑制寄生蟲(體外和體內(nèi))。
使用Ii進(jìn)行小鼠中的效能研究，以測(cè)試該化合物的體內(nèi)潛能。用類似 于人類瘧原蟲惡性瘧原蟲的小鼠菌株i3. 6wg/^'感染小鼠。/>. 6"rg/^/菌株 對(duì)li的敏感性低約20倍，從而必須相應(yīng)調(diào)整小鼠體內(nèi)的劑量。在以兩個(gè)不 同的劑量0.6 mg/小鼠(n-3)和6 mg/小鼠(n-3)給予藥物后，監(jiān)測(cè)小鼠體內(nèi)的 寄生蟲血癥。對(duì)照組小鼠不用K進(jìn)行任何治療。圖5說明與對(duì)照相比，經(jīng)藥 物治療的小鼠中的寄生蟲血癥減少，且這是劑量依賴性的。圖6描述了Ii治 療的動(dòng)物相對(duì)于對(duì)照的存活曲線，且清楚地確證當(dāng)用Ii治療時(shí)，寄生蟲血 癥減少且存活時(shí)間延長(zhǎng)。
上面的圖7證實(shí)與未用任何藥物治療的動(dòng)物相比，更高劑量的Ii增強(qiáng)該 化合物抗瘧疾的效能，伴隨受治療動(dòng)物的存活率提高。
測(cè)試了化合物Ia、 Ib、 Ic、 Id、 Ie、 If、 Ij、 Ip、 Io、 In和It對(duì)抗惡性瘧 原蟲和間日瘧原蟲的抗瘧活性。這些化合物說明ICs。的范圍為約20 mM至 約2000 jiM。
盡管已經(jīng)參考目前認(rèn)為優(yōu)選的實(shí)施例來描述本發(fā)明，但要理解本發(fā)明 不限于所公開的實(shí)施例。相反，本發(fā)明意在覆蓋處于所附權(quán)利要求的主旨 和范圍內(nèi)的多種修飾和等價(jià)排列。
所有出版物、專利和專利申請(qǐng)以其全部引入本文作為參考，其程度如 同具體和單獨(dú)說明將每個(gè)單個(gè)的出版物、專利或?qū)＠暾?qǐng)以其全部引入本
文作為參考。當(dāng)發(fā)現(xiàn)本申請(qǐng)的術(shù)語與引入本文作為參考的文件中的定義不 同時(shí)，則將本文提供的定義作為該術(shù)語的定義。說明書中參考文獻(xiàn)的完整引用
i. Warshel， A.; Florian， J. Computer simulations of enzyme catalysis: finding out what has
been optimized by evolution.淑/.』cad t/.SU. l柳，P5, 5950-5955.
".Radzicka, A.; Wolfenden, R. A proficient enzyme. Sc/ewce 1995， 267， 90-93.
"'.Miller, B. G.; Wolfenden, R. Catalytic proficiency: The unusual case of OMP
decarboxylase, Z ev.腸由肌2002， 7/， 847-885.
1V'V. Sievers， A.; Wolfenden, R. Equilibrium of formation of the 6-carbanion of UMP， a potential intermediate in the action of OMP decarboxylase. /爿w. CTie附.Soc. 2002， /2《 13986-13987.
v. Snider， M. J.; Wolfenden, R. The rate of spontaneous decarboxylation of amino acids. / 爿w. C/ie附.Soc. 2000， /"， 11507-11508.
vl. Schutz A. G. R.; Konig， S.; Hubner, G.; Tittmann, K. Intermediates and transition states in thiamin diphosphate-dependent decarboxylases. A kinetic and NMR study on wild-type indolepyruvate decarboxylase and variants using indolepyruvate, benzoylformate, and pyruvate as substrates. 5!'oc/ie/m'W/^ 2005， 44， 6164-6179.
vii. Tittmann, K.; Golbik, R.; Uhlem咖，K.; Khailova, L.; Schneider, G.; Patel, M.; Jordan, F.;
Chipm叫D. M.; Duggleby， R. G.; Htibner， G. NMR analysis of covalent intermediates in
thiamin diphosphate enzymes. 5foc/ie/m's/77 2003， 42， 7885-7891.
V1". Reichard, P. The enzymatic synthesis of pyrimidines. Zcfv. ￡n^y/no/. A/of.歷o/. 1959，
263-294.
IX. Donovan, W. P.; Kushnerm， S. R. Purification and characterization of orotidine-5'-monophosphate decarboxylase from Escherichia coli K-12. J J fl"er/o/. 1983， "6， 620-624, x . Pragobpol， S.; Gero， A. M.; Lee, C. S.; O'Sullivan, W. J. Orotate phosphoribosyltransferase and orotidyate decarboxylase from C/v7/ /di" Subcellular location of the enzymes and a study of substrate channeling. XrcA. 5wc/ie附.5foj A;v51. 1984， 230,285-293.
Ko賊L. P.; Pai， E.F.; Bello, A. M.; Fujihashi, M.; Poduch， E. (2005) Inhibitors of orotidine monophosphate decarboxylase (ODCase) activity, US Application^ 60/596,537, patent pending.
xu. Christopherson, R. I.; Lyons, S. D.; Wilson, P. K. Inhibitors of de Novo nucleotide
biosynthesis as drugs.爿cc. C/ie附.2002,35， 961-971.X1". Scott, H. V.; Gero， A. M.; O'Sullivan， W. J. /" vzTro inhibition of P/cw/wo^w/w/a/c(pan/附 by pyrazofUrin, an inhibitor of pyrimidine biosynthesis ate ovo. A/o/. 5z'oc/zew.尸aras"o/. 1986, 7& 3-15.
X1V. Levine， H. L.; Brody, R. S.; Westheimer, F. H. Inhibition of orotidine-5'-phosphate decarboxylase by l-(5'-phospho-beta畫d-ribofiiranosyl)barbituric acid， 6 azauridine 5'-phosphate, and uridine 5'-phosphate, 5foc/2e/m'W/7 1980, 79， 4993-4999.
w. Harris, P.; Poulsen, J. C. N.; Jensen, K. F.; Larsen, S. Substrate binding induces domain
movements in orotidine 5'-monophosphate decarboxylase. / Afo/. 5z'o/. 2002， 1019-
1029.
xv'. Wu， N.; Mo, Y.; Gao,丄；Pai， E. F. Electrostatic stress in catalysis: structure and mechanism of the enzyme orotidine monophosphate decarboxylase. /Voc. A^///. v4cflf/. Scr 2000,97, 2017-2022.
xv". Appleby, T. C.; Kinsland， C.; Begley， T. P.; Ealick， S. E. The crystal structure and mechanism of orotidine 5'-monophosphate decarboxylase. iVoc. JVaW. Jcfld SW. f/5L4 2000, 97, 2005-2010.
xviii. Miller, B. G.; Hassell， A. M.; Wolfenden, R.; Milburn， M. V.; Short, S. A. Anatomy of a proficient enzyme: the structure of orotidine 5'-monophosphate decarboxylase in the presence and absence of a potential transition state analog. iVoc. iVaf/.5W. 2000, 97， 2011-2016.
x'x. Lee， T. S.; Chong， L. T.; Chodera， J. D.; Kollm叫P. A. An alternative explanation for the catalytic proficiency of orotidine 5'-phosphate decarboxylase. 爿附.C/je/n. Soc. 2001， 7_23， 12837-12848.
Miller, B. G.; Butterfoss, G. L.; Short, S. A.; Wolfenden, R. Role of enzyme-ribofiiranosyl contacts in the ground state and transition state for orotidine 5'-phosphate decarboxylase: a role for substrate destabilization 5z.oc/ie/7j&^v 2001,40， 6227-6232.
咖.Warshel, A.; Strajbl, M.; Villa, J.; Florian， J. Remarkable rate enhancement of orotidine 5'-monophosphate decarboxylase is due to transition-state stabilization rather than to ground-state destabilization.歷ocAew&r^ 2000， 39， 14728-14738.
咖.Harris, P.; Navarro Poulsen， J. C.; Jensen, K. F.; Larsen， S. Structural basis for the catalytic mechanism of a proficient enzyme: orotidine 5'-monophosphate decarboxylase. ^ocZ/e/m^o7 2000， 39, 4217-4224.
咖'.Jencks, W. P. Binding energy, specificity, and enzymic catalysis: the Circe effect. Xrfv. ￡w2J7mo/.及e/a"dv4reflw Afo/. 5/o/. 1975, 219-410.xx'v. Miller, B. G.; Snider， M. J.; Short, S. A.; Wolfenden, R. Contribution of enzyme-phosphoribosyl contacts to catalysis by orotidine 5'-phosphate decarboxylase.腸c/ie加'WA7 2000,找8113-8118.
柳.Amyes， T. L.; Richard, J. P.; Tait， J. J. Activation of orotidine 5'-monophosphate decarboxylase by phosphate dianion: the whole substrate is the sum of two parts. /
Soc. 2005， "7， 15708-15709. 柳1. Gero, A. M.; O'Sulliv肌，W. J. Purines and pyrimidines in malarial parasites, Ce〃s 19卯，/6， 467-484.
柳".Jones, M. E. Pyrimidine nucleotide biosynthesis in animals: Genes， enzymes, and regulation of UMP biosynthesis,Z ev. 5i'oc/iem. 1980， 49， 253-279. xxviii. Seymour, K. K.; Lyons, S. D.; Phillips, L.; Rieckm咖，K. H.; Christopherson, R. I. Cytotoxic effects of inhibitors of tfe wovo pyrimidine biosynthesis upon /VostwWmw 々/c/]pfln/加，歷'od/e;^W/j 1994， 5268-5274.
狄'x. Krungkrai, J.; Krungkrai, S. R.; Phakanont， K. Anti-malarial activity of orotate analogs that inhibit dihydroorotase and dihydroorotate dehydrogenase. 歷ocA柳.戶A。a wflco/. 1992， ",1295-1301.
鵬.Hirota， K.; Tomishi， T.; Maki, Y.; Sajiki， H. A^c/eoy'Vfej在M/c/eoZ/ffey 1998， 77， 161-173.
' Tanaka， H.; Hayakawa, H.; Haraguchi， K.; Miyasaka, T. Introduction of an azido group to the C-6 position of uridine by the use of a 6-iodouridine derivative. JVMc/eo"Wes t& M<c/eoricks 1985，《607-612.
''.Tanaka， H.; Hayakawa， H.; Miyasaka, T. "Umpolung" of reactivity at the C-6 position of uridine: a simple and general method for 6-substituted uridines, re/raAe^o" 1982， 3S, 2635-2642.
'".Sowa， T.; Ouchi， S. Facile synthesis of 5'-nucleotides by selective phosphorylation of a primary hydroxyl group of nucleosides with phosphoryl chloride. 5"http://. CAe加.Soc. 扭1975，銀2084-20卯.
"" Ueda， T.; Yamamoto， M.; Yamane, A.; Imazawa， M.; Inoue， H. Conversion of uridinenucleotides to the 6-cyano derivatives: synthesis of orotidylic acid. Qw6o^/. /eowcfey iVwc/eo"'^ 1978, 5， 261-271.
xxxix. Poduch, E.; Bello， A.M.; Tang, S.; Fujihashi, M.; Pai, E.F.; Kotra， L.P. Merf. Oiew. 2006，伐4937-4935.
xl. Tanaka， H.; Hayakawa, H.; Haraguchi, K.; Miyasaka, T. M/c/ecw'Vfes & iVwc/eo"Vfes 1985， 4， 607-612.
xli. Tanaka， H.; Hayakawa^ H.; Miyasaka, T. r"ra/iec/ro" 1982, 3S, 2635-2642. xlii. Sowa，T.; Ouchi, S. 5m//. Soc. Jp". 1975， 4S， 2084-2090.
xh". Ueda, T; Yam咖oto, M.; Yamane, A.; Imazawa, M.; Inoue， H. Car&o/^. iVwc/eow'cfey
淑/eoricfe 1978,5， 261-271. xllv. Tanaka， H.; Hayakawa, H.; Haraguchi, K.; Miyasaka, T. Introduction of an azido group to
the C-6 position of uridine by the use of a 6-iodouridine derivative. M/c/eowVfes
爆/eoricfes 1985,《607-612. xlv. Tanaka, H.; Hayakawa, H.; Miyasaka, T. "Umpolung" of reactivity at the C-6 position of
uridine: a simple and general method for 6-substituted uridines. re/r。/ ef//"cw 1982， 38，
2635-2642.
xlvi. Sowaj T.; Ouchi, S. Facile synthesis of 5'-nucleotides by selective phosphorylation of a primary hydroxyl group of nucleosides with phosphoryl chloride. 5w//. Soc. 1975， "， 2084-20卯.
xlv". Ueda， T; Y咖amoto， M; Yamane， A.; Imazawa， M.; Inoue， H. Conversion of uridine nucleotides to the 6-cyano derivatives: synthesis of orotidylic acid. M/c/eo"Vfey M/c/eoricfes 1978, 5， 261-271.
xlviii. Smilkstein, M; Sriwilaijaroen, N.; Kelly，丄X.; Wilairat, P.; Riscoe, M. Simple and inexpensive fluorescence-based technique for high-throughput anti-malarial drug screening.爿w"'附!'cra6. C/iewo決er. 2004, 4S， 1803-1806.
氣Campling, B. G.; Pym， J.; Galbraith, P. R.; Cole, S. P. Use of MTT assay for rapid determination of chemosensitivity of human leukemic blast cells.丄ewfe;w/a1988， /2, 823 — 831.
(1) Alejandro G. Marangoni, Enzyme Kinetics: A Modern Approach. John Wiley & Sons. Inc. 2003.
(h) Otwinowski, Z.; Minor, W., Processing of X-ray Diffraction Data Collected in Oscillation Mode. In Afocrowo/ecw/ar Co^to/Zogra/j/zy,尸flrt爿,Carter, C. W.， Jr.; Sweetj R. M.， Eds. Academic Press: 1997; Vol. 276， pp 307-326.(")Collaborative Computional Project, N. The CCP4 suite: programs for protein crystallography.爿c/a 07加〃og/" D腸/ O^toZ/ogr 1994， 50, 760-763.
(Im) Jones, T. A.; Zou, J.-Y.; Cowan, S. W. Improved Methods for Building Protein Models in Electron Density Maps and the Location of Errors in these Models. Co^to//ogr」1991,47,110-119.
(Iiv) B腦ger， A. T.; Adams， P. D.; Clore, G. M.; DeLano， W. L.; Gros， P.; Grosse-Kunstleve, R. W.; Jiang,丄S.; Kuszewski, J.; Nilges, M.; Pannu, N. S.; Read, R. J.; Rice, L. M.; Simonson， T.; Warren, G. L Crystallography & NMR system: A new software suite for macromolecular structure determination.C/^/aZ/ogr Z)歷o/ O^jto/Zogr 1998' Part 5， 905-921.
權(quán)利要求
1.治療或預(yù)防瘧疾的方法，其包括向有此需要的個(gè)體給藥抗瘧有效量的化合物，所述化合物選自式I的化合物、其互變異構(gòu)體及它們的藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物和前藥其中R1選自CN、N3、I、Br、NH2、NO2、C(O)C1-6烷基、NHC1-C6烷基、N(C1-C6烷基)2、NHC(O)C1-C6烷基和NHC(O)OC1-C6烷基；R2選自H、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、氟取代的C1-C6烷基、氟取代的C1-C6烷氧基、N3、NH2和CN；R3選自O(shè)H、NH2、H和NHC(O)C1-C6烷基；Z選自其中R4選自H、C1-C6烷基和羥基取代的C1-C6烷基；R5和R6之一為氫而另一個(gè)選自H、OH和F，及R5′和R6′之一為氫而另一個(gè)選自H、OH和F；或者R5和R6或R5′和R6′可共同為＝O或＝CH2；R7選自H、F和OH；R8選自H、C(O)C1-C6烷基、P(O)(OH)2、P(O)(OC1-C6烷基)2和P(O)(OC1-C6烷基)OH；R9選自H、N3、CN、C1-C6烷基；且X-Y選自-CH2-O-、-O-CH2-和-S-CH2-。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述式I的化合物中的R'選自I、 Br、 N02、 N(d-CV烷基)2、 NHC(0)CrC4烷基和NHC(0)Od-C4烷基。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述式I的化合物中的R'選自I、 Br、 N02、 N(CH3)2、 NHC(0)CH3和NHC(0)CH3 。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述式I的化合物中的W選自I、 Br 和N(CH3)2。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所述式I的化合物中的R1為I。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的方法，其中所述式I的化合物中的R2 選自H、鹵素、d-C4垸基、CrCV烷氧基、氟取代的C,-C4垸基、氟取代 的CrCV烷氧基、N3、 NH2和CN。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述式I的化合物中的W選自H、 氟、氯、溴、CH3、 OCH3、 CF3、 CF30、 N3、朋2和CN。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述式I的化合物中的W選自H、 氟、氯、溴、OCH3和CF3、 CF30。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的方法，其中所述式I的化合物的113選 自O(shè)H和NH2。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述式I的化合物中的113為OH且 所述式I的化合物具有下列互變異構(gòu)體結(jié)構(gòu)<formula>formula see original document page 4</formula>
11. 根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的方法，其中在所述式I的化合物 中，Z為式II。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)的方法，其中所述式I的化合物中的 R4為H。
13. 根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的方法，其中W和W均為OH且R6 和R"均為H。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的方法，其中W為H, RS'為OH且 R6和R6'均為H。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的方法，其中所述式I的化合物中的 R7為H或OH。
16. 根據(jù)權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)的方法，其中所述式I的化合物中的 R8選自H、 C(0)C廣C4烷基、P(0)(OH)2、 P(0)(OC廠C4垸基)2和P(O)(OC廣 C4烷基)OH。
17. 根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中所述式I的化合物中的RS選自H、 C(0)CH3、 P(0)(OH)2、 P(0)(OCH3)2和P(0)(OCH3)OH。
18. 根據(jù)權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)的方法，其中所述式I的化合物中的 R8選自H、 C(0)CH3和P(0)(OH)2。
19. 根據(jù)權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的方法，其中所述式I的化合物中的 R9為H。
20. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中X-Y為-0-CH2-。
21. 根據(jù)權(quán)利要求1-20中任一項(xiàng)的方法，其中所述式I的化合物具有 下列結(jié)構(gòu)
22.根據(jù)權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)的方法，其中所述式I的化合物選自 下列化合物和它們的藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物及前藥 6-氰基尿苷； 6-氰基尿苷-5'-—磷酸； 6-疊氮基尿苷； 6-疊氮基尿苷-5'-0-—磷酸； 6-氨基尿苷-5'-0-—磷酸； 6-氨基尿苷； 6-甲基尿苷；6-甲基尿苷-5'-0-—磷酸；6-碘-尿苷； 6-iV-甲基氨基尿苷；6-7V;iV-二甲基氨基尿嘧啶；6-JV,iV-二甲基氨基尿苷；甲基氨基尿苷-5'-(9-—磷酸； 6-碘尿苷-5'-0-—磷酸； 5-氟-6-氨基尿苷；.5-溴-6-碘尿苷；.5-氟-6-疊氮基尿苷；.5-氟-6-碘尿苷；.5-氟-6-氨基尿苷-5'-<9-—磷酸； 5-溴-6-碘尿苷-5'-0-—磷酸； 5-氟-6-疊氮基尿苷-5'-0-—磷酸；.5- 氟-6-碘尿苷-5'-0-—磷酸；6- 甲氧基羰基尿苷； 6-乙氧基羰基尿苷；6-甲氧基羰基尿苷-5 '-O-—磷酸； 6-乙氧基羰基尿苷-5'-0-—磷酸； l'-羥甲基-6-碘-尿苷；和1 '-羥甲基-6-碘-尿苷-5 '-—磷酸。
23. 預(yù)防或治療在個(gè)體中瘧原蟲感染的方法，其包括向所述個(gè)體給藥抗瘧有效量的式I的化合物及其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物和前藥，其中所述式I的化合物如權(quán)利要求1-22中任一項(xiàng)所定義。
24. 本發(fā)明還包括在從個(gè)體分離的血漿或血液樣品中抑制ODCase的方 法，其包括向所述血漿或血液樣品添加抑制有效量的如上所定義的式I的 化合物及其藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物和前藥，其中所述式I的化合物如 權(quán)利要求l-22中任一項(xiàng)所定義。
25. 選自下列的式I的化合物和它們的藥學(xué)可接受的鹽、溶劑合物及前藥6-(二甲氨基)尿苷；5-氟-6-氨基尿苷5-溴-6-氨基尿苷；5-氟-6-疊氮基尿苷；l'-羥甲基-6-碘-尿苷；6-(二甲氨基)2'-脫氧尿苷；5-氟-6-氨基2'-脫氧尿苷； 5-溴-6-氨基2'-脫氧尿苷； 5-氟-6-疊氮基2'-脫氧尿苷； 5-氯-6-碘2'-脫氧尿苷； 5-氯-6-疊氮基2'-脫氧尿苷； 5-甲氧基-6-碘2'-脫氧尿苷； 5-甲氧基-6-疊氮基2'-脫氧尿苷； 5-甲氧基-6-氨基2'-脫氧尿苷； 5-溴-6-碘2'-脫氧尿苷；5- 溴-6-疊氮基2'-脫氧尿苷；6- (二甲氨基)尿苷5'-—磷酸； 5-氟-6-氨基尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-氨基尿苷5'-—磷酸；5- 氟-6-疊氮基尿苷5'-—磷酸； r-羥甲基-6-碘-尿苷-5'-—磷酸6- (二甲氨基)2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-氟-6-氨基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-氨基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-氟-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-氯-6-碘2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-氯-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-甲氧基-6-碘2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-甲氧基-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸; 5-甲氧基-6-氨基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-碘2'-脫氧尿苷5'-—磷酸； 5-溴-6-疊氮基2'-脫氧尿苷5'-—磷酸；5- 氟-6-碘尿苷5'-—磷酸；6- 碘尿苷5'-乙酸；和 6-碘2'-脫氧尿苷5'-乙酸。
26.藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求25的一種或多種化合物以及為 此的藥學(xué)可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明包括通過向有需要的個(gè)體給藥抗瘧有效量的6-取代尿苷衍生物來治療或預(yù)防瘧疾的方法。本發(fā)明還包括用作治療劑，特別用于治療瘧疾的新的6-取代尿苷衍生物。
文檔編號(hào)A61P33/06GK101321775SQ200680045499
公開日2008年12月10日 申請(qǐng)日期2006年10月3日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月3日
發(fā)明者A·M·貝洛, E·F·派, L·P·科特拉, M·藤橋 申請(qǐng)人:大學(xué)健康網(wǎng)絡(luò)