專利名稱：一種治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于治療家畜、家禽瀉痢的復(fù)方注射劑-復(fù)方白苦苓注射液，及其制備方法。
背景技術(shù)：
瀉痢是家畜排便次數(shù)增多，糞便稀薄，清濁不分，運(yùn)化失健等證候群的習(xí)慣性稱呼，俗名拉稀。各種家畜多可發(fā)，而對(duì)斷奶前仔豬的拉稀癥，稱為仔豬泄瀉，本病一年四季都可發(fā)生。本病的發(fā)生多由于飼養(yǎng)管理不當(dāng)，寒濕或濕熱內(nèi)侵，或由于飲喂不潔，或因母乳過稠或過多傷及仔豬脾胃。寒濕內(nèi)侵，傷及腎陽和脾胃，則命門火衰，火不生土，致使脾胃運(yùn)化腐熟無力，傳導(dǎo)失司，清濁不分而致瀉痢。濕熱內(nèi)侵可致脾胃運(yùn)化失調(diào)，濕熱下注大小腸，遂發(fā)清濁不分，傳導(dǎo)失職，糞便臭，蕩瀉如水等癥，同時(shí)胃腸功能受損，運(yùn)化無力，致食欲不振。
現(xiàn)代研究表明，瀉痢由大腸桿菌引起。大腸桿菌病是一類重要的人畜共患病。在家畜中，尤以初生幼畜特別易感，并引起患畜生長(zhǎng)遲緩，生產(chǎn)能力低下，甚至造成死亡，給畜牧業(yè)帶來嚴(yán)重?fù)p失。瀉痢是仔豬生產(chǎn)中廣泛存在的一種常見病和多發(fā)病，它不僅給養(yǎng)豬業(yè)帶來了直接的死亡和巨額的藥費(fèi)開支，還間接地影響到病愈豬的發(fā)育，成為養(yǎng)豬業(yè)經(jīng)濟(jì)效益的重要制約因素，為了促進(jìn)綠色畜禽產(chǎn)品的開發(fā)和生產(chǎn)，使用中草藥制劑進(jìn)行治療成為了養(yǎng)殖戶的首選。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用于治療畜禽瀉痢的注射液。
本發(fā)明的另一個(gè)目的還在于提供一種用于治療畜禽瀉痢的注射液的制備方法。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第一個(gè)目的，采用如下技術(shù)解決方案一種治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液，其每10000ml注射液中含有苦參堿提取物0.5-20g由0.5-1kg陳皮提取的揮發(fā)油由5-5.28kg茯苓、3-3.17kg白頭翁、1-1.05kg甘草和0.5-1kg陳皮經(jīng)水提醇沉得到的提取液抗氧化劑5-20g增溶劑 40-60g滲透壓調(diào)節(jié)劑85-90g注射用水余量。
上述治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液，其優(yōu)選的實(shí)施方式是，每10000ml含有苦參堿提取物10.0g由1kg陳皮提取的揮發(fā)油由5kg茯苓、3kg白頭翁、1kg甘草和1kg陳皮經(jīng)水提醇沉得到的提取液抗氧化劑10g增溶劑 60ml
滲透壓調(diào)節(jié)劑90g注射用水加至10000mL。
上述優(yōu)選的處方組成，經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，其治療效果略優(yōu)于其它含量組成。
抗氧化劑和增溶劑是為了保證注射液質(zhì)量和穩(wěn)定性，在本發(fā)明的注射液中，抗氧化劑可以用亞硫酸氫鈉或抗壞血酸等或其混合物，增溶劑可以用吐溫80等。滲透壓調(diào)節(jié)劑的作用是使本發(fā)明注射液的滲透壓調(diào)節(jié)至家畜的正常生理范圍內(nèi)。一般來說，不同的滲透壓調(diào)節(jié)劑由于其分子大小和極性不同，即使相同重量，不同滲透壓調(diào)節(jié)劑所產(chǎn)生的滲透壓也可不同。同時(shí)還必須注意，在本發(fā)明中，其它組分(如活性成分、揮發(fā)油等)對(duì)滲透壓也產(chǎn)生一定影響，鑒于以上原因，每種滲透壓調(diào)節(jié)劑的用量須根據(jù)制劑中其它組分的用量以及該種所選定的滲透壓調(diào)節(jié)劑的分子大小和極性強(qiáng)弱而定。在本發(fā)明中滲透壓調(diào)節(jié)劑可以選用氯化鈉、葡萄糖等以及這些調(diào)節(jié)劑的混合物上述的注射液可以采用下述方法制備原料提取(1)陳皮揮發(fā)油的提取將0.5-1kg中藥陳皮放入不銹鋼蒸餾器中，用1200ml 57-85℃的熱水浸泡1個(gè)小時(shí)，然后用蒸汽加熱回流，回收蒸餾液，剩余的液固混合液回收不銹鋼桶中備用；(2)茯苓、陳皮、白頭翁和甘草水提醇沉液的制備 將5-5.28kg茯苓、3-3.17kg白頭翁、1-1.05kg甘草和提取過揮發(fā)油的陳皮渣混合均勻，用10000ml冷水浸泡1個(gè)小時(shí)，然后用蒸汽煮至沸騰，再煎熬2個(gè)小時(shí)，收集過濾液7000ml；再向剩余固體中加入3000ml水，煮沸后煎熬1個(gè)小時(shí)，合并過濾液，濃縮至3000ml，攪拌下加入95％的乙醇25500ml，使溶液含醇量達(dá)到85％，醇沉24小時(shí)，過濾，濾液用冷凝回收裝置回收乙醇，將藥液濃縮至3000ml，再向其中加入95％的乙醇25500ml，使藥液含醇量達(dá)到85％，進(jìn)行二次醇沉，醇沉24小時(shí)，用抽濾瓶抽濾，取清液，用冷凝回收裝置回收乙醇，將藥液濃縮至3000ml，用注射用水補(bǔ)足至9000ml-9500ml，用不銹鋼桶密閉，4℃低溫保存，備用；配制按注射液的組成量取白頭翁、茯苓、陳皮和甘草混合提取液和陳皮揮發(fā)油，加入所需量的增溶劑，攪拌溶解澄清，再按注射液的組成加入苦參堿提取物，攪拌混合均勻，然后用蒸汽加熱溶解至澄清，取少量溶液，溶解所需量的抗氧化劑，再混合兩液，混合均勻，加入滲透壓調(diào)節(jié)劑并調(diào)整PH值至4.5-7.5，以0.45μm微孔濾膜過濾、灌封、滅菌，即得所需注射液。
這種復(fù)方注射液，其中的白頭翁和甘草也可以直接使用市售的提取物，則也可以采用下述的技術(shù)方案一種治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液，其每10000ml注射液中含有苦參堿提取物0.5-20g由0.5-1kg陳皮提取的揮發(fā)油由5-5.28kg茯苓和0.5-1kg陳皮經(jīng)水提醇沉得到的提取液白頭翁提取物0.5-20g甘草提取物 0.5-1.0g
抗氧化劑5-20g增溶劑 40-60g滲透壓調(diào)節(jié)劑85-90g注射用水余量。
上述注射液，其優(yōu)選的實(shí)施方式是苦參堿提取物10.0g由1kg陳皮提取出的揮發(fā)油由5kg陳皮和1kg茯苓經(jīng)水提醇沉得到的提取液白頭翁提取物 10g甘草提取物0.5g抗氧化劑 10g增溶劑60ml滲透壓調(diào)節(jié)劑 90g注射用水 加至10000mL。
其制備方法為原料提取(1)陳皮揮發(fā)油的提取將0.5-1kg中藥陳皮放入不銹鋼蒸餾器中，用1200ml 57-85℃的熱水浸泡1個(gè)小時(shí)，然后用蒸汽加熱回流，回收蒸餾液，剩余的液固混合液回收不銹鋼桶中備用；(2)茯苓、陳皮水提醇沉液的制備 將5-5.28kg茯苓和提取過揮發(fā)油的陳皮渣混合均勻，用10000ml冷水浸泡1個(gè)小時(shí)，然后用蒸汽煮至沸騰，再煎熬2個(gè)小時(shí)，收集過濾液7000ml；再向剩余固體中加入3000ml水，煮沸后煎熬1個(gè)小時(shí)，合并過濾液，濃縮至3000ml，攪拌下加入95％的乙醇25500ml，使溶液含醇量達(dá)到85％，醇沉24小時(shí)，過濾，濾液用冷凝回收裝置回收乙醇，將藥液濃縮至3000ml，再向其中加入95％的乙醇25500ml，使藥液含醇量達(dá)到85％，進(jìn)行二次醇沉，醇沉24小時(shí)，用抽濾瓶抽濾，取清液，用冷凝回收裝置回收乙醇，將藥液濃縮至3000ml，用注射用水補(bǔ)足至9000ml，用不銹鋼桶密閉，4℃低溫保存，備用；取茯苓、陳皮混合提取液和陳皮揮發(fā)油，加入所需量的增溶劑，攪拌溶解澄清，再加入所需量的苦參堿提取物、白頭翁提取物、甘草提取物，攪拌混合均勻，然后用蒸汽加熱溶解至澄清，取少量溶液，溶解所需要的抗氧化劑，再混合兩液，混合均勻，加所需的滲透壓調(diào)節(jié)劑并調(diào)整PH值至4.5-7.5，以0.45μm微孔濾膜過濾、灌封、滅菌，即得所需注射液。
本發(fā)明的目的是提供治療畜禽瀉痢藥物-復(fù)方白苦苓注射液處方及其制備方法，本制劑是治療畜禽瀉痢藥物復(fù)方白苦苓注射液，作為注射液劑型，可供注射或口服使用，以期提高生物利用度，提高中藥快速發(fā)揮藥效，對(duì)仔豬黃、白痢的治愈率分別為96.7％，93.3％。其制備方法是保障該制劑有效、安全的措施，可有效的防治畜禽瀉痢。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的治療畜禽瀉痢藥物注射液及其制備方法做進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1
每10000ml注射液組成為苦參堿提取物10.0g陳皮揮發(fā)油1000ml(相當(dāng)于原生陳皮1kg)5kg茯苓、3kg白頭翁、1kg甘草和1kg陳皮經(jīng)水提醇沉得到的提取液9000ml亞硫酸氫鈉抗氧化劑10g增溶劑吐溫80 60ml氯化鈉滲透壓調(diào)節(jié)劑90g注射用水 加至10000mL采用下述方法制備原料提取(1)陳皮揮發(fā)油的提取將1kg中藥陳皮放入不銹鋼蒸餾器中，用1200ml 57-85℃的熱水浸泡1個(gè)小時(shí)，然后用蒸汽加熱回流，回收蒸餾液1000ml，剩余的液固混合液回收不銹鋼桶中備用；(2)茯苓、陳皮、白頭翁和甘草水提醇沉液的制備 將5kg茯苓、3kg白頭翁、1kg甘草和提取過揮發(fā)油的陳皮渣混合均勻，用10000ml冷水浸泡1個(gè)小時(shí)，然后用蒸汽煮至沸騰，再煎熬2個(gè)小時(shí)，收集過濾液7000ml；再向剩余固體中加入3000ml水，煮沸后煎熬1個(gè)小時(shí)，合并過濾液，濃縮至3000ml，攪拌下加入95％的乙醇25500ml，使溶液含醇量達(dá)到85％，醇沉24小時(shí)，過濾，濾液用冷凝回收裝置回收乙醇，將藥液濃縮至3000ml，再向其中加入95％的乙醇25500ml，使藥液含醇量達(dá)到85％，進(jìn)行二次醇沉，醇沉24小時(shí)，用抽濾瓶抽濾，取清液，用冷凝回收裝置回收乙醇，將藥液濃縮至3000ml，用注射用水補(bǔ)足至9000ml-9500ml，用不銹鋼桶密閉，4℃低溫保存，備用；配制按注射液的組成取白頭翁、茯苓、陳皮和甘草混合提取液和陳皮揮發(fā)油，加入所需量的增溶劑，攪拌溶解澄清，再按注射液的組成加入苦參堿提取物，攪拌混合均勻，然后用蒸汽加熱溶解至澄清，取少量溶液，溶解所需量的抗氧化劑，再混合兩液，混合均勻，加入滲透壓調(diào)節(jié)劑并調(diào)整PH值至4.5-7.5，以0.45μm微孔濾膜過濾、灌封、滅菌，即得所需注射液。
實(shí)施例2苦參堿提取物10.0g陳皮揮發(fā)油1000ml(相當(dāng)于原生藥陳皮1kg)由1kg陳皮5kg茯苓經(jīng)水提醇沉得到的提取液9000-8500ml白頭翁提取物10g甘草提取物 0.5g抗氧化劑10g增溶劑 60ml滲透壓調(diào)節(jié)劑葡萄糖 90g注射用水加至10000mL。
其制備方法為原料提取(1)陳皮揮發(fā)油的提取 將1kg中藥陳皮放入不銹鋼蒸餾器中，用1200ml 57-85℃的熱水浸泡1個(gè)小時(shí)，然后用蒸汽加熱回流，回收蒸餾液950-1050ml，剩余的液固混合液回收不銹鋼桶中備用；(2)茯苓、陳皮水提醇沉液的制備將5kg茯苓和提取過揮發(fā)油的陳皮渣混合均勻，用10000ml冷水浸泡1個(gè)小時(shí)，然后用蒸汽煮至沸騰，再煎熬2個(gè)小時(shí)，收集過濾液7000ml；再向剩余固體中加入3000ml水，煮沸后煎熬1個(gè)小時(shí)，合并過濾液，濃縮至3000ml，攪拌下加入95％的乙醇25500ml，使溶液含醇量達(dá)到85％，醇沉24小時(shí)，過濾，濾液用冷凝回收裝置回收乙醇，將藥液濃縮至3000ml，再向其中加入95％的乙醇25500ml，使藥液含醇量達(dá)到85％，進(jìn)行二次醇沉，醇沉24小時(shí)，用抽濾瓶抽濾，取清液，用冷凝回收裝置回收乙醇，將藥液濃縮至3000ml，用注射用水補(bǔ)足至9000ml，用不銹鋼桶密閉，4℃低溫保存，備用；取茯苓、陳皮混合提取液8500ml和1000ml陳皮揮發(fā)油，加入50ml吐溫-80，攪拌溶解澄清，再加入10g苦參堿提取物、白頭翁提取物10g、甘草提取物1g，攪拌混合均勻，然后用蒸汽加熱溶解至澄清，取少量溶液，溶解10g 硫酸氫鈉，再混合兩液，混合均勻，加入氯化鈉調(diào)等滲并調(diào)整PH值，以0.45μm微孔濾膜過濾、灌封、滅菌，即得所需注射液。
實(shí)施例3苦參堿提取物 0.6g0.6kg陳皮提取的揮發(fā)油600ml5.28kg茯苓、3.17kg白頭翁、1.05kg甘草和0.6kg陳皮經(jīng)水提醇沉得到的提取液 9000ml抗氧化劑 19g增溶劑 45ml滲透壓調(diào)節(jié)劑 85g注射用水 加至10000mL。
其制備方法參照實(shí)施例1進(jìn)行。
實(shí)施例4苦參堿提取物 19.0g陳皮揮發(fā)油 500ml(相當(dāng)于原生藥陳皮0.5kg)由1.03kg陳皮5.26kg茯苓經(jīng)水提醇沉得到的提取液9000-8500ml白頭翁提取物 19g甘草提取物 1.0g抗氧化劑 6g增溶劑 50ml滲透壓調(diào)節(jié)劑葡萄糖 85g注射用水 加至10000mL。
實(shí)驗(yàn)例一復(fù)方注射液的治療試驗(yàn)為了驗(yàn)證復(fù)方白苦苓注射液的臨床治療效果，本試驗(yàn)對(duì)臨床中自然發(fā)病的仔豬黃、白痢病例進(jìn)行了治療試驗(yàn)。試驗(yàn)選取重慶市種豬場(chǎng)自然發(fā)病的仔豬黃、白痢150頭，隨機(jī)分成本發(fā)明的復(fù)方注射液治療組(分成0.2ml/kg體重、0.1ml/kg體重、0.05ml/kg體重三個(gè)劑量組)、恩諾沙星粘桿菌素治療對(duì)照組和感染陽性對(duì)照組進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明以0.2ml/kg體重、0.1ml/kg體重劑量肌肉注射，一日一次，連用三次，本發(fā)明的復(fù)方注射液對(duì)仔豬黃、白痢的治愈率分別為96.7％，93.3％，與恩諾沙星粘桿菌素按照0.2ml/kg體重，一日一次，連用三次的治愈率90.0％比較，無顯著差異(P＞0.05)；而感染陽性對(duì)照組的死亡率達(dá)到了25％。與恩諾沙星粘桿菌素治療組比較，本發(fā)明的復(fù)方注射液三個(gè)治療組35日齡相對(duì)增重率分別為134％，112％，92％，而感染陽性對(duì)照常組的相對(duì)增重率僅為71％，以復(fù)方注射液高、中劑量組治療的仔豬獲得良好的增重。結(jié)果提示本發(fā)明的復(fù)方注射液對(duì)仔豬大腸桿菌病具有良好療效，治療用量下用藥后增重良好。
1材料和方法1.1藥品和試劑恩諾沙星粘桿菌素注射液，規(guī)格10ml/支，批號(hào)051028，重慶市天龍牧業(yè)科技有限公司提供；本發(fā)明的復(fù)方白苦苓注射液規(guī)格10ml；含苦參堿0.01g，按實(shí)施例1中處方和方法制備。
其它試劑按常規(guī)配制。
1.2試驗(yàn)動(dòng)物選取重慶市種豬場(chǎng)自然感染大腸桿菌，體重相近的5-10日齡仔豬150頭。
1.3飼料試驗(yàn)?zāi)肛i飼喂相同的不含任何抗菌藥物的全價(jià)飼料。
1.4方法將150頭仔豬按照窩間對(duì)照的原則隨機(jī)分成5組，分別為第I組感染陽性對(duì)照組 不給任何藥物，只按0.1ml/kg體重肌注0.9％的葡萄糖生理鹽水。
第II組恩諾沙星粘桿菌素治療組 按照0.2ml/kg體重肌注，一天一次，連用三日。
第III組復(fù)方白苦苓注射液高劑量組 按照0.2ml/kg體重進(jìn)行肌注，一天一次，連用三日。
第IV組復(fù)方白苦苓注射液中劑量組 按照0.1ml/kg體重進(jìn)行肌注，一天一次，連用三日。
第V組低劑量組按照0.05ml/kg體重進(jìn)行肌注，一天一次，連用三日。
受試仔豬的母豬都給予充足的飲用水和充足的不含任何抗菌藥物的全價(jià)飼料，完全保證仔豬下痢情況不受外界環(huán)境和應(yīng)激反應(yīng)的影響。試驗(yàn)前準(zhǔn)確稱取受試仔豬的體重，然后進(jìn)入試驗(yàn)。豬只康復(fù)后，繼續(xù)正常飼喂35天，準(zhǔn)確稱確受試仔豬的體重，確定其相對(duì)增重率。
(詳細(xì)分組情況見表1)表1自然感染大腸桿菌治療試驗(yàn)分組及處理情況

1.5病例的菌種分離及鑒定采集發(fā)病仔豬的糞便，用玻棒接種在麥康凱瓊脂平板上，劃線分離，在人工恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18小時(shí)；挑取疑似大腸桿菌菌落5-10個(gè)以上接種在普通瓊脂斜面上做供試品；同時(shí)做一份稀釋液做的無菌陰性對(duì)照和一份標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌做的陽性對(duì)照，在人工恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。挑選供試菌形成中等大小，圓形微凸起，表面光滑濕潤(rùn)，淺灰色半透明菌落，進(jìn)一步染色鏡檢，初步判定后可進(jìn)一步進(jìn)行生化試驗(yàn)進(jìn)行確定是大腸桿菌。
1.6病例的組織觀察隨機(jī)選取場(chǎng)內(nèi)發(fā)生的拉黃色稀便的仔豬，進(jìn)行臨床癥狀檢查和組織學(xué)解剖檢查，從臨床癥狀判定其是否屬于大腸桿菌病。
1.7療效評(píng)價(jià)指標(biāo)及標(biāo)準(zhǔn)對(duì)發(fā)病仔豬逐日觀察臨床癥狀，對(duì)精神狀態(tài)、糞便等臨床內(nèi)容進(jìn)行觀察。
1.7.1死亡率 凡在試驗(yàn)期內(nèi)，經(jīng)預(yù)防或治療無效，臨床出現(xiàn)仔豬黃、白痢典型癥狀并死亡者，經(jīng)剖檢具典型仔豬大腸桿菌病病變特征，細(xì)菌學(xué)分離鑒定為陽性者，確定為感染死亡。據(jù)死亡數(shù)計(jì)算各組死亡率。
1.7.2有效率經(jīng)1-3次用藥后，仔豬黃、白痢臨床癥狀減輕，但糞便仍未成條型，顏色灰白，肛門粘膜紅腫部分消失，停藥后無復(fù)發(fā)、癥狀未加重者計(jì)為有效，并計(jì)算有效率。
1.7.3治愈率經(jīng)1-3次用藥后，仔豬無異?；蚺R床癥狀完全消失，糞便形狀、顏色、肛門均正常，停藥后無復(fù)發(fā)者，計(jì)為治愈。據(jù)治愈數(shù)計(jì)算各組治愈率。
1.7.435日齡增重及其相對(duì)增重率記錄試驗(yàn)仔豬的初始體重及35日齡體重，以恩諾沙星粘桿菌素治療組的平均增重與復(fù)方白苦苓注射液各劑量治療組和感染陽性對(duì)照組平均增重之比計(jì)算相對(duì)增重率，公式如下 1.8數(shù)據(jù)分析和處理用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)的顯著性檢驗(yàn)，死亡率、有效率用x2檢驗(yàn)，增重用t檢驗(yàn)。
2、結(jié)果2.1病例的菌種分離及鑒定結(jié)果分離的細(xì)菌經(jīng)濕微鏡檢查，可見細(xì)菌兩端鈍圓，多數(shù)散在排列，偶有2-3個(gè)連在一起的革蘭氏陰性短桿菌，可初步判定為大腸桿菌，進(jìn)一步進(jìn)行生化試驗(yàn)，結(jié)果顯示分離的大腸桿菌對(duì)甘露醇、麥芽糖、葡萄糖、蔗糖、鼠李糖產(chǎn)氣產(chǎn)酸，棉籽糖、山梨醇、鳥氨酸脫氫酶實(shí)驗(yàn)為陽性，枸緣酸鹽，阿拉伯醇實(shí)驗(yàn)為陰性，符合大腸桿菌的生化特點(diǎn)，可判斷該次分離的細(xì)菌為大腸桿菌。
2.2病例臨床觀察及組織解剖結(jié)果隨機(jī)選取場(chǎng)內(nèi)發(fā)生的拉黃色稀便的仔豬，其可視粘膜、皮膚、肌肉蒼白，剖檢胃粘膜水腫，胃底粘膜呈現(xiàn)紅色；小腸漿膜充血，腸類充滿大量黃色粘稠物和液體，可判定為典型的仔豬黃痢病。
2.3自然病例治療試驗(yàn)結(jié)果以及增重率對(duì)豬場(chǎng)發(fā)生的自然病例進(jìn)行治療，一般病例經(jīng)復(fù)方白苦苓注射液高、中劑量組治療一次，均可獲得較好的效果，表現(xiàn)為排便次數(shù)減少，糞便變干，皮毛干凈，精神明顯好轉(zhuǎn)，好動(dòng)，食欲增強(qiáng)，體重增加。稍嚴(yán)重病例經(jīng)兩次治療后，基本治愈，在治療三次后，除個(gè)別豬只外，合部痊愈，有效率分別為100％，100％，治愈率分別為96.7％，93.3％；而復(fù)方白苦苓注射液低劑量組一次用藥后，下痢減輕，但效果不顯著，二次用藥后，效果明顯，三次用藥后基本痊愈，其有效率達(dá)到了100％，治愈率為86.7％。恩諾沙星粘桿菌素注射液以1ml·kg-1、體重劑量注射給藥進(jìn)行治療，注射二次后效果明顯，注射三次后，基本治愈，其有效率為93.3％，治愈率為90％。而感染陽性對(duì)照組的在沒用藥的情況下，豬只泄痢嚴(yán)重，死亡率達(dá)到40％，余下耐過豬只，長(zhǎng)勢(shì)緩慢，有成為僵豬的趨勢(shì)。經(jīng)35日后，準(zhǔn)確稱取各受試組豬只的體重，并計(jì)算其相對(duì)增重率，結(jié)果復(fù)方白苦苓注射液各劑量治療組相對(duì)恩諾沙星粘桿菌素治療組，相對(duì)增重率分別134％，112％，92％，而感染陽性對(duì)照常組的相對(duì)增重率僅為71％，以復(fù)方白苦苓注射液高、中劑量組治療的仔豬獲得良好的增重。結(jié)果詳見表2。
表2自然感染大腸桿菌治療試驗(yàn)各組的療效情況及相對(duì)增重率

I組 感染陽性對(duì)照組 II組 恩諾沙星粘桿菌素治療組III組 復(fù)方白苦苓注射液高劑量組IV組 復(fù)方白苦苓注射液中劑量組 V組復(fù)方白苦苓注射液低劑量組 “-”表示為未測(cè)定3、討論3.1試驗(yàn)中各治療組的治療有效率和治愈率均在90％以上，其中，復(fù)方白苦苓注射液三個(gè)劑量組的有效率都達(dá)到了100％，而恩諾沙星粘桿菌素注射液治療組的有效率才93.3％，這可能和中藥本身的整體調(diào)節(jié)作用有關(guān)，其效果有劑量依賴性。復(fù)方白苦苓注射液的低劑量組的有效率雖然高于恩諾沙星粘桿菌素注射液治療組，但治愈率卻低于該組。這是因?yàn)閺?fù)方白苦苓注射液僅為抑菌劑，低劑量治療對(duì)于已以存在的細(xì)菌效果不佳，而恩諾沙星粘桿菌素注射液能夠殺滅細(xì)菌。
3.2相對(duì)增重試驗(yàn)可看出，復(fù)方白苦苓注射液高、中劑量組的增重率明顯高于恩諾沙星粘桿菌素治療組，這是因?yàn)閺?fù)方白苦苓注射液中的陳皮具有理氣健脾的作用，能改善試驗(yàn)豬只的食欲，促進(jìn)豬只的生長(zhǎng)增重。同時(shí)，方中的甘草有養(yǎng)心復(fù)脈、補(bǔ)中溫陽、協(xié)調(diào)陰陽的作用，能夠增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，提高機(jī)體的抵抗能力，從整體上對(duì)機(jī)體進(jìn)行調(diào)進(jìn)，促進(jìn)疾病的轉(zhuǎn)歸。方中的其它幾味中藥，諸如白頭翁、苦參、茯苓有較強(qiáng)的燥濕利水，殺菌止痢的功效，幾者合用，標(biāo)本兼治，治調(diào)結(jié)合，促進(jìn)了機(jī)體的迅速好轉(zhuǎn)和增重。而恩諾沙星粘桿菌素注射液有較強(qiáng)的殺菌止痢的效果，而沒有促進(jìn)食欲，增強(qiáng)免疫的功能，所以病豬的增長(zhǎng)相對(duì)要緩慢一點(diǎn)。
4、結(jié)論4.1根據(jù)本次試驗(yàn)結(jié)果，復(fù)方白苦苓注射液按照0.1ml/kg體重進(jìn)行肌注治療，能夠取得良好的臨床治療效果，且對(duì)豬只的生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用，值得臨床推廣。
實(shí)驗(yàn)例二復(fù)方白苦苓注射液對(duì)小鼠的腸碳黑推動(dòng)試驗(yàn)為研究復(fù)方白苦苓注射液的藥效，本試驗(yàn)采用碳末推進(jìn)試驗(yàn)法，考察該藥對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腸蠕動(dòng)的影響，結(jié)果表明，復(fù)方白苦苓注射液能夠緩和、抑制腸的蠕動(dòng)。
1、材料和方法1.1藥品和試劑1.1.1復(fù)方白苦苓注射液10ml苦參堿0.01g，按實(shí)施例2中處方及工藝制備1.1.2硫酸阿托品注射液成都維爾京元亨藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，2ml:1mg，批號(hào)030816。
1.1.30.9％生理鹽水實(shí)驗(yàn)室用分析純氯化鈉加蒸餾水配制、分裝、滅菌而成。
1.1.4墨汁購于榮昌縣新華書店1.1.510％阿拉伯膠溶液實(shí)驗(yàn)室用分析純阿拉伯膠加蒸餾水配制而成。
1.2方法1.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇和分組選取昆明系體重相近的小白鼠30只，飼養(yǎng)1周，觀察確認(rèn)健康，無消化道疾病，進(jìn)入試驗(yàn)。將小白鼠隨機(jī)分為3組，分別為空白組A、白苦苓注射液組B、阿托品組C，每組10只，正常飼養(yǎng)，備用。
1.2.2墨汁液的配制墨汁液按10％阿拉伯膠+5％墨汁配制。
1.2.3小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)(李儀奎中藥藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)1991.06320-323)選取備用的健康小白鼠30只，禁食24小時(shí)，然后，各組注射藥物2小時(shí)后，灌服墨汁，按0.2ml/10g體重灌胃，給墨汁后60min脫頸椎處死，打開腹腔分離腸系膜，剪取上端到幽門，下端至回盲部的腸管，置于托盤上。輕輕將小腸拉成直線，腸管長(zhǎng)度作為″小腸總長(zhǎng)度″。從幽門至墨汁前沿的距離作為″墨汁在腸內(nèi)的推進(jìn)距離″。用公式計(jì)算墨汁的推進(jìn)百分率，并注意觀察各組小腸容積是否增大。墨汁推進(jìn)率(％)＝墨汁在腸內(nèi)的推進(jìn)距離(cm)/小腸全長(zhǎng)(cm)×100％2、結(jié)果與討論試驗(yàn)表明，用藥組都能顯著的減弱腸蠕動(dòng)，與生理鹽水組相比差異極顯著(P＜0.01)；其中硫酸阿托品溶液的推進(jìn)距離最短，推進(jìn)率也最小，這是因?yàn)榱蛩岚⑼衅肥强鼓憠A藥，作用于胃腸道平滑肌，能夠顯著減弱胃腸道平滑肌及膀胱平滑肌的收縮，減緩胃腸道的蠕動(dòng)，減輕泄痢癥狀。復(fù)方白苦苓注射液組，墨汁推進(jìn)距離間于空白對(duì)照組與硫酸阿托品之間，這說明復(fù)方白苦苓注射液對(duì)腸異常蠕動(dòng)有效果。詳見表3。
表3不同處理對(duì)小白鼠小腸蠕動(dòng)的影響

3、結(jié)論現(xiàn)代病理研究表明，動(dòng)物感染病源引起泄痢，主要是因?yàn)椴≡捶纸獾挠泻Ξa(chǎn)物和病源本身，對(duì)腸粘膜感受器產(chǎn)生了化學(xué)性的刺激作用，促使腸管蠕動(dòng)增加，引起了泄痢。通過本試驗(yàn)證明，復(fù)方白苦苓注射液可以明顯減弱腸的蠕動(dòng)，可緩解泄痢癥狀，達(dá)到治標(biāo)的效果。
實(shí)驗(yàn)例三復(fù)方白苦苓注射液的體外抗菌作用實(shí)驗(yàn)研究1、材料和儀器1.1藥品與試劑復(fù)方白苦苓注射液按實(shí)施例1中處方及工藝制備牛肉膏(北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司)氯化鈉(成都市聯(lián)合化工試劑研究所)蛋白胨(成都長(zhǎng)壽生物制劑有限公司)營(yíng)養(yǎng)瓊脂(北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司)、1.2菌種大腸桿菌(K88)西南農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室提供1.3儀器S.SW-CJ-IFD生物潔凈工作臺(tái)(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)METTLER AE240電子分析天平(沈陽龍?zhí)匐娮佑邢薰?PYX-150Z-B振蕩培養(yǎng)箱(廣東韶關(guān)科力實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)PYX-150S-A生化培養(yǎng)箱(廣東韶關(guān)科力實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)YX280A型手提式不銹鋼蒸氣消毒器(上海三申醫(yī)療器械有限公司)2、實(shí)驗(yàn)方法2.1細(xì)菌菌量的選擇采用菌落計(jì)數(shù)法(張均田.現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法.北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社.1998.10，1409-1417)，將保存的大腸桿菌菌種接種在營(yíng)養(yǎng)肉湯中，在振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16-18h，取菌懸液按10倍稀釋法稀釋10-110-2、10-3……10-10(在試管里分別加9ml生理鹽水，再在第1管中加1ml經(jīng)培養(yǎng)的細(xì)菌菌液，再從第1管中吸1ml加入第2管……依次類推)，然后分別從各試管中吸各稀釋了菌液0.1ml接種在加有營(yíng)養(yǎng)瓊脂的平皿上，用接種棒推開，使之均勻生長(zhǎng)，放入37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-20h。觀察結(jié)果，挑選生長(zhǎng)30-300個(gè)菌落以下的濃度的細(xì)菌稀釋倍數(shù)，作為最佳的細(xì)菌濃度。
2.2最小抑菌濃度(MIC)的測(cè)定取12支小試管(第11、12管分別作為藥液對(duì)照管和菌液對(duì)照管)，分別各加1ml營(yíng)養(yǎng)肉湯，在第一管中加1ml藥液，吸1ml至第2管，從第2管再吸1ml至第3管……依次類推(按照二倍稀釋法，李儀奎.中藥藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法學(xué).上海上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1991286)，第11管不加藥液，第12管不加菌，(主要看藥液是否被污染)。取經(jīng)過16-18h培養(yǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)液，稀釋為10-9后，分別加0.1ml在11支試管中，每支小試管內(nèi)總量為1.1ml。將試驗(yàn)管和對(duì)照管放置在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16-18h，檢查結(jié)果。先觀察藥物對(duì)照管和細(xì)菌對(duì)照管的情況，然后觀察各試驗(yàn)管中細(xì)菌生長(zhǎng)的情況，與藥物作對(duì)照比較。如澄清，則表明無細(xì)菌生長(zhǎng)，則該管的藥物有抗菌作用；如渾濁，則表明有細(xì)菌生長(zhǎng)，則該管的藥物對(duì)細(xì)菌無抗菌作用。再吸0.1ml此液在有營(yíng)養(yǎng)瓊脂的平皿上，放入生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16-18h，挑選生長(zhǎng)5個(gè)菌落以下的平皿作為最低殺菌濃度。
2.3細(xì)菌的敏感性試驗(yàn)取12支小試管，分別在12支試管中加1ml滅菌水，再在第1管中加1ml原生藥，從第1管中吸取1ml至第2管，混勻，從第2管中吸取1ml至第3管……依次類推，從第11管吸取1ml至第12管，混勻，從第12管吸取1ml丟棄。取經(jīng)過16-18h培養(yǎng)的細(xì)菌菌液，經(jīng)過稀釋至10-9，加2ml在營(yíng)養(yǎng)瓊脂中鋪菌層。放牛津杯，加約0.29ml的經(jīng)過二倍稀釋的藥液。放入生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16-18h，觀察結(jié)果。如有抑菌圈，則表明呈陰性，此藥液的濃度對(duì)其敏感；如無抑菌圈，則表明呈陽性，此藥液的濃度無敏感性。
3、結(jié)果3.1菌濃度的選擇通過四次實(shí)驗(yàn)表明，10-9是最適合的菌濃度，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂上生長(zhǎng)了平均為70個(gè)菌落。實(shí)驗(yàn)表明每毫升有活菌數(shù)7.0×109。(見表4)表4菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果


3.2復(fù)方白苦苓注射液最低抑菌濃度通過多次試驗(yàn)觀察結(jié)果表明，復(fù)方白苦苓注射液在各種不同的藥液濃度對(duì)同一稀釋菌液的抑菌作用不同。實(shí)驗(yàn)表明復(fù)方白苦苓注射液對(duì)大腸桿菌的最低抑菌濃度為(MIC)2mg/ml(見表5)；復(fù)方白苦苓注射液的最低殺菌濃度為(MBC)15.6mg/ml(見表6)。
表5復(fù)方白苦苓注射液對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃度(MIC)的測(cè)定結(jié)果

表6復(fù)方白苦苓注射液對(duì)大腸桿菌的最低殺菌濃度的測(cè)定結(jié)果

3.3細(xì)菌的敏感性試驗(yàn)通過數(shù)次試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方白苦苓注射液對(duì)大腸桿菌的抑制作用明顯，且作用有劑量依賴性(見表7)表7復(fù)方白苦苓注射液對(duì)大腸桿菌抑制作用的實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果


4、結(jié)果與討論4.1本實(shí)驗(yàn)測(cè)得復(fù)方白苦苓注射液對(duì)大腸桿菌的體外最低抑菌濃度為2mg/ml，由此可見，大腸桿菌對(duì)復(fù)方白苦苓注射液敏感，復(fù)方白苦苓注射液對(duì)大腸桿菌有良好的體外抗菌作用。
4.2通過藥敏實(shí)驗(yàn)觀察復(fù)方白苦苓注射液對(duì)大腸桿菌的抗菌作用效果明顯，具有較好的殺菌作用。由表4可知，復(fù)方白苦苓注射液在7.85mg/ml中抑菌圈為18.1mm，由此可見，大腸桿菌隨著復(fù)方白苦苓注射液藥液濃度的增加，在相同量的情況下，抑菌圈的直徑也逐漸增大。
權(quán)利要求
1.一種治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液，其特征在于，每10000ml注射液中含有苦參堿提取物 0.5-20g由0.5-1kg陳皮提取的揮發(fā)油由5-5.28kg茯苓、3-3.17kg白頭翁、1-1.05kg甘草和0.5-1kg陳皮經(jīng)水提醇沉得到的提取液抗氧化劑 5-20g增溶劑 40-60g滲透壓調(diào)節(jié)劑 85-90g注射用水 余量。
2.如權(quán)利要求1所述的治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液，其特征在于每10000ml含有苦參堿提取物 10.0g1kg陳皮提取的揮發(fā)油5kg茯苓、3kg白頭翁、1kg甘草和1kg陳皮經(jīng)水提醇沉得到的提取液抗氧化劑 10g增溶劑 60ml滲透壓調(diào)節(jié)劑 90g注射用水 加至10000mL。
3.如權(quán)利要求1或2所述的治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液，其特征在于所述的抗氧化劑為亞硫酸氫鈉或抗壞血酸或其混合物。
4.如權(quán)利要求1或2所述的治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液，其特征在于所述的增溶為吐溫80。
5.如權(quán)利要求1或2所述的治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液，其特征在于所述的滲透壓調(diào)節(jié)劑為氯化鈉或葡萄糖或這些調(diào)節(jié)劑的混合物。
6.一種權(quán)利要求1所述的治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液的制備方法，其特征在于(1)陳皮揮發(fā)油的提取將0.5-1kg中藥陳皮放入不銹鋼蒸餾器中，用1200ml 57-85℃的熱水浸泡1個(gè)小時(shí)，然后用蒸汽加熱回流，回收蒸餾液，剩余的液固混合液回收不銹鋼桶中備用；(2)茯苓、陳皮、白頭翁和甘草水提醇沉液的制備 將5-5.28kg茯苓、3-3.17kg白頭翁、1-1.05kg甘草和提取過揮發(fā)油的陳皮渣混合均勻，用10000ml冷水浸泡1個(gè)小時(shí)，然后用蒸汽煮至沸騰，再煎熬2個(gè)小時(shí)，收集過濾液7000ml；再向剩余固體中加入3000ml水，煮沸后煎熬1個(gè)小時(shí)，合并過濾液，濃縮至3000ml，攪拌下加入95％的乙醇25500ml，使溶液含醇量達(dá)到85％，醇沉24小時(shí)，過濾，濾液用冷凝回收裝置回收乙醇，將藥液濃縮至3000ml，再向其中加入95％的乙醇25500ml，使藥液含醇量達(dá)到85％，進(jìn)行二次醇沉，醇沉24小時(shí)，用抽濾瓶抽濾，取清液，用冷凝回收裝置回收乙醇，將藥液濃縮至3000ml，用注射用水補(bǔ)足至9000ml-9500ml，用不銹鋼桶密閉，4℃低溫保存，備用；配制按注射液的組成量取白頭翁、茯苓、陳皮和甘草混合提取液和陳皮揮發(fā)油，加入所需量的增溶劑，攪拌溶解澄清，再按注射液的組成加入苦參堿提取物，攪拌混合均勻，然后用蒸汽加熱溶解至澄清，取少量溶液，溶解所需量的抗氧化劑，再混合兩液，混合均勻，加入滲透壓調(diào)節(jié)劑并調(diào)整PH值至4.5-7.5，以0.45μm微孔濾膜過濾、灌封、滅菌，即得所需注射液。
7.一種治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液，其特征在于其每10000ml注射液中含有苦參堿提取物 0.5-20g由0.5-1kg陳皮提取的揮發(fā)油由5-5.28kg茯苓和0.5-1kg陳皮經(jīng)水提醇沉得到的提取液白頭翁提取物 0.5-20g甘草提取物 0.5-1.0g抗氧化劑 5-20g增溶劑 40-60g滲透壓調(diào)節(jié)劑 85-90g注射用水 余量。
8.如權(quán)利要求7所述的治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液，其特征在于每10000ml注射液中含有苦參堿提取物 10.0g1kg陳皮提取出的揮發(fā)油5kg陳皮和1kg茯苓水提醇沉提取液白頭翁提取物 10g甘草提取物0.5g抗氧化劑 10g增溶劑60ml滲透壓調(diào)節(jié)劑 90g注射用水 加至10000mL。
9.如權(quán)利要求7或8所述的治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液，其特征在于所述的抗氧化劑為亞硫酸氫鈉或抗壞血酸或其混合物，所述的增溶為吐溫80，所述的滲透壓調(diào)節(jié)劑為氯化鈉或葡萄糖以及這些調(diào)節(jié)劑的混合物。
10.一種權(quán)利要求7所述的治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液的制備方法，其特征在于(1)陳皮揮發(fā)油的提取將0.5-1kg中藥陳皮放入不銹鋼蒸餾器中，用1200ml 57-85℃的熱水浸泡1個(gè)小時(shí)，然后用蒸汽加熱回流，回收蒸餾液，剩余的液固混合液回收不銹鋼桶中備用；(2)茯苓、陳皮水提醇沉液的制備 將5-5.28kg茯苓和提取過揮發(fā)油的陳皮渣混合均勻，用10000ml冷水浸泡1個(gè)小時(shí)，然后用蒸汽煮至沸騰，再煎熬2個(gè)小時(shí)，收集過濾液7000ml；再向剩余固體中加入3000ml水，煮沸后煎熬1個(gè)小時(shí)，合并過濾液，濃縮至3000ml，攪拌下加入95％的乙醇25500ml，使溶液含醇量達(dá)到85％，醇沉24小時(shí)，過濾，濾液用冷凝回收裝置回收乙醇，將藥液濃縮至3000ml，再向其中加入95％的乙醇25500ml，使藥液含醇量達(dá)到85％，進(jìn)行二次醇沉，醇沉24小時(shí)，用抽濾瓶抽濾，取清液，用冷凝回收裝置回收乙醇，將藥液濃縮至3000ml，用注射用水補(bǔ)足至9000ml，用不銹鋼桶密閉，4℃低溫保存，備用；取茯苓、陳皮混合提取液和陳皮揮發(fā)油，加入所需量的增溶劑，攪拌溶解澄清，再加入所需量的苦參堿提取物、白頭翁提取物、甘草提取物，攪拌混合均勻，然后用蒸汽加熱溶解至澄清，取少量溶液，溶解所需要的抗氧化劑，再混合兩液，混合均勻，加所需的滲透壓調(diào)節(jié)劑并調(diào)整PH值至4.5-7.5，以0.45μm微孔濾膜過濾、灌封、滅菌，即得所需注射液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療畜禽瀉痢的復(fù)方注射液，每10000ml注射液中含有苦參堿提取物0.5－20g、由0.5－1kg陳皮提取的揮發(fā)油、由5－5.28kg茯苓、3－3.17kg白頭翁、1－1.05kg甘草和0.5－1kg陳皮經(jīng)水提醇沉得到的提取液，以及抗氧化劑5－20g、增溶劑40－60g、滲透壓調(diào)節(jié)劑85－90g和注射用水余量。還公開了一種制備方法。本制劑是治療畜禽瀉痢藥物復(fù)方白苦苓注射液，作為注射液劑型，可供注射或口服使用，以期提高生物利用度，提高中藥快速發(fā)揮藥效，對(duì)仔豬黃、白痢的治愈率分別為96.7％，93.3％。其制備方法是保障該制劑有效、安全的措施，可有效的防治畜禽瀉痢。
文檔編號(hào)A61P1/12GK1969987SQ20061016094
公開日2007年5月30日 申請(qǐng)日期2006年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月6日
發(fā)明者劉娟, 黃勇, 蒲德倫 申請(qǐng)人:重慶市天龍牧業(yè)科技有限公司