專利名稱：一種中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，屬于藥物的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
本中藥復方制劑，以燈盞細辛、赤芍或白芍為原料制成，其特征在于按照重量份數(shù)比計算，它是由燈盞細辛1～10份與赤芍或白芍1～10份經(jīng)提取精制而成；或是由相應重量份燈盞細辛與相應重量份赤芍或白芍藥材經(jīng)提取后得到的藥材提取物制作而成；本中藥復方制劑具有活血化淤、通脈舒絡、改善血循環(huán)和代謝作用功效，適用于中風瘀血阻絡證之半身不遂，口眼歪斜，言語謇澀，苔薄白或薄白膩，脈沉細等，以及腦梗塞有上述見癥狀者，臨床上除用于治療冠心病、心絞痛、心律失常、腦血栓、老年性癡呆等心腦血管疾病外，還用于肝腎綜合癥、心肺病、糖尿病及其并發(fā)癥等疾病。心腦血管疾病如冠心病、腦血栓、老年性癡呆等均是當今世界最常見和危害最大的疾病之一，在許多國家已成為人口死亡的主要原因之一。據(jù)調(diào)查，近年來該類疾病的發(fā)病率有逐年增高趨勢，而且中、青年患者不斷增加，已成為危害我國人民健康的常見病、多發(fā)病。本申請人在研究防治心腦血管疾病的藥物方面做了大量工作，并曾經(jīng)向中國專利局申請了名稱為“治療心腦血管疾病的復方燈盞細辛制劑及其制備方法”、專利申請?zhí)枮?00410040776.2的發(fā)明專利。但是在進一步的研究中發(fā)現(xiàn)，藥物制劑必須要在保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可控安全的基礎(chǔ)之上，才能不斷的更新發(fā)展。為了更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，更好的指導生產(chǎn)，使工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產(chǎn)品質(zhì)地，需要研究、控制該組方制劑質(zhì)量的方法，本申請人深入研究了其質(zhì)量控制方法。目前，本組方產(chǎn)品沒有其他任何相關(guān)資料，在其他的含有燈盞細辛、赤芍或白芍的藥物制劑中，一般僅以野黃芩苷、芍藥苷為檢測指標。但燈盞細辛、赤芍或白芍的化學成分有幾十種，如果用其一、二種活性成分來說明其內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更不用說無藥效性的指標成分了，而且兩者間成分的相互干擾更是沒有相關(guān)研究。因此，本申請人不僅研究了以燈盞細辛、赤芍或白芍的活性成分或特征成分而進行的鑒別與含量測定方法，更建立了指紋圖譜的技術(shù)方案，對其物質(zhì)群整體予以控制，從整體上有效的表征其質(zhì)量。中藥指紋圖譜是指某種中藥材或中成藥中所共有的、具有特征性的某類或數(shù)類成分的色譜或光譜的圖譜。在現(xiàn)階段，中藥大多數(shù)的有效成分沒有明確的情況下，指紋圖譜對于有效控制本發(fā)明產(chǎn)品的質(zhì)量，具有有益的效果。鑒別、含量測定、指紋圖譜聯(lián)合應用，覆蓋面廣，特異性強，是本質(zhì)量控制方法突出的實質(zhì)性特點和顯著的進步。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，這種方法向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測機構(gòu)提供了檢測的指標、檢測的手段、技術(shù)方法等等；以便更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產(chǎn)品質(zhì)地。
本發(fā)明是這樣構(gòu)成的一種以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容(1)以燈盞細辛、白芍或赤芍中全部或部分成分特征為主的指紋圖譜測試方法；(2)燈盞細辛藥材、赤芍或白芍藥材、野黃芩苷、芍藥苷、沒食子酸中全部或部分成分的鑒別測試方法；(3)野黃芩苷、芍藥苷、總黃酮、赤芍總苷或白芍總苷中全部或部分成分的含量測試方法。
所述的以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下指紋圖譜測試的全部或部分內(nèi)容(1)供試品溶液的制備取待測中藥復方制劑適量，以水或甲醇或乙醇中的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制備供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取野黃芩苷或芍藥苷，水或甲醇或乙醇中的一種或幾種為溶劑，溶解至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相A為50～100％乙腈或50～100％甲醇，流動相B為0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1％～3％冰醋酸或0.1％～3％甲酸或0.03％～1％磷酸溶液，梯度洗脫，流動相A比例變化范圍為10～90％，流速為0.5～1.5ml/min、檢測波長為190-400nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫在20～60℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細辛、白芍或赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有4～20個；
(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復方制劑中以燈盞細辛、白芍或赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測中藥復方制劑的指紋圖譜，應符合下列要求中的部分或全部I.待測中藥復方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.80～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±20％；IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±35％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±40％；所述的以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下指紋圖譜測試的全部或部分內(nèi)容(1)供試品溶液的制備精密稱取待測中藥復方制劑適量，加水稀釋或溶解，制成每1ml含1mg的溶液，濾過，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為80％乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15％升至70％，流動相B的比例由85％降至30％；流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細辛、白芍或赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有5～12個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復方制劑中以燈盞細辛、白芍或赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測中藥復方制劑的指紋圖譜，應符合下列要求中的部分或全部I.待測中藥復方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90～1.00；
II.非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10％；IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±20％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±25％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％；所述的以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下鑒別測試方法中的全部或部分內(nèi)容a、中藥復方制劑中野黃芩苷、燈盞細辛中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，加乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過或離心，取濾液或上清液作為供試品溶液；取燈盞細辛對照藥材，先除去脂溶性雜質(zhì)，再參照供試品溶液制法，制成對照藥材溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述對照溶液中的一種或兩種及供試溶液適量，點于同一硅膠薄層板或聚酰胺薄膜上，以甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲酸或乙酸＝5～15∶0.5～5∶0.01～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含三氯化鋁或三氯化鐵顯色劑，供試品色譜中，在與對照色譜相應的位置上，應顯相同顏色斑點；b、中藥復方制劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，以甲醇或乙醇或水中的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制為供試品溶液；以野黃芩苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.2％～3％冰醋酸水溶液或0.2％～3％甲酸水溶液或0.01％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15～70∶85～30為流動相，檢測波長為200～410nm中的一種或幾種；采用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、中藥復方制劑中赤芍或白芍藥材、芍藥苷、沒食子酸中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，加乙醇或甲醇或正丁醇或水中的一種或幾種為溶劑提取，制備供試品溶液；取赤芍或白芍對照藥材，參照供試品溶液制備方法，制成對照藥材溶液；取芍藥苷對照品、沒食子酸對照品的一種或兩種，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述對照溶液中的一種或兩種及供試溶液適量，分別點于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲醇或乙醇-甲酸或乙酸＝2～10∶0.5～5∶0.5～5∶0.01～5為展開劑，展開，取出，晾干，先后或分別噴以含三氯化鐵的顯色劑或含三氯化鋁的顯色劑或含硫酸的顯色劑或含香草醛的顯色劑中的一種或幾種，供試品色譜中，在與對照色譜相應的位置上，應顯相同顏色斑點；d、中藥復方制劑中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，加甲醇或乙醇或水中的一種或幾種提取或溶解或稀釋至合適濃度，作為供試品溶液；以芍藥苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15～60∶85～40流動相，檢測波長為200～410nm中的一個或幾個；采用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；所述的以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下鑒別測試方法中的全部或部分內(nèi)容a、中藥復方制劑中燈盞細辛藥材、野黃芩苷中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，加甲醇提取，制備供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；取燈盞細辛對照藥材，先除去脂溶性雜質(zhì)，再參照供試品溶液制法，制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述對照溶液中的一種或兩種及供試溶液適量，點于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸＝7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；b、中藥復方制劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液＝50∶50為流動相，檢測波長為335nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；
c、中藥復方制劑中赤芍藥材、芍藥苷、沒食子酸的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取芍藥苷、沒食子酸對照品的甲醇溶液作為對照品溶液；取赤芍藥材，參照供試品溶液的制備方法制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取對照藥材或?qū)φ掌啡芤褐械囊环N或兩種、及供試溶液適量，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸＝6∶1.5∶1.5∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，先噴以5％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點；再噴以香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點；d、中藥復方制劑中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，加甲醇提取或稀釋，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芍藥苷對照品的甲醇溶液為對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％甲酸溶液＝40∶60為流動相，檢測波長為230nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
所述的以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下含量測定的全部或部分內(nèi)容a、中藥復方制劑中野黃芩苷的含量測定取待測中藥復方制劑適量，以甲醇或乙醇或水中的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制為供試品溶液；以野黃芩苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.2％～3％冰醋酸水溶液或0.2％～3％甲酸水溶液或0.01％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15～70∶85～30為流動相，檢測波長為200～410nm中的一種或幾種；采用液相色譜法試驗，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，以外標一點法或標準曲線法進行計算，中藥復方制劑中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于15mg；b、中藥復方制劑中芍藥苷的含量測定取待測中藥復方制劑適量，加甲醇或乙醇或水中的一種或幾種提取或溶解或稀釋至合適濃度，濾過，作為供試品溶液；以芍藥苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15～60∶85～40流動相，檢測波長為200～410nm中的一個或幾個；采用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法或標準曲線法進行計算，中藥復方制劑中每日用劑量含芍藥苷的不得少于15mg；c、中藥復方制劑中總黃酮的含量測定取待測中藥復方制劑適量，用甲醇或水或乙醇中的一種或幾種提取或稀釋至合適濃度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，采用分光光度法，在300～600nm波長中的一處或兩處測定吸收度，以外標一點法或標準曲線法進行計算；中藥復方制劑中每日用劑量含總黃酮不得少于20mg；d、中藥復方制劑中赤芍總苷或白芍總苷的含量測定取待測中藥復方制劑適量，置量瓶中，加強堿溶液適量使稀釋或溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置具塞試管中，置沸水浴水解0.5小時～5小時，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至量瓶中，用甲醇或乙醇或流動相反復蕩洗試管壁，定至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以苯甲酸對照品的制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝10～60∶90～40流動相，檢測波長為200～410nm波長范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法或標準曲線法進行計算含量后再由公式白芍總苷或赤芍總苷含量％＝苯甲酸含量％×480.48/122.13，計算白芍總苷或赤芍總苷的含量，各制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含白芍總苷或赤芍總苷的限度不得少于20mg。
所述的以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下含量測定的全部或部分內(nèi)容a、中藥復方制劑中野黃芩苷的含量測定取待測中藥復方制劑適量，精密稱定或量取，加甲醇提取或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液＝50∶50為流動相，檢測波長為335nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，中藥復方制劑中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于30mg；b、中藥復方制劑中芍藥苷的含量測定取待測中藥復方制劑適量，精密稱定或量取，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芍藥苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％甲酸溶液＝40∶60為流動相，檢測波長為230nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，中藥復方制劑中每日用劑量含芍藥苷的不得少于30mg；c、中藥復方制劑中總黃酮的含量測定取待測中藥復方制劑中適量，置量瓶中，加甲醇適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標一點法進行計算，各制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計，不得少于40mg；d、中藥復方制劑中赤芍總苷或白芍總苷的含量測定取待測中藥復方制劑適量，精密稱定或量取，置量瓶中，加5％氫氧化鈉溶液適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置具塞試管中，置沸水浴水解2小時，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用甲醇或流動相反復蕩洗試管壁，定至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以苯甲酸對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液＝30∶70為流動相，檢測波長為230nm，柱溫35℃；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，白芍總苷或赤芍總苷含量＝苯甲酸含量×480.48/122.13，計算白芍總苷或赤芍總苷的含量，中藥復方制劑每日用劑量中含白芍總苷或赤芍總苷的限度不得少于40mg。
所述的以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復方制劑的含量測定結(jié)果，按照重量百分比計算，可測定成分的總量占制劑中扣除輔料和水分外的總固體量的25％以上。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明能更加完善的控制以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量。中藥成分復雜，如果只用其中一、兩種成分來說明其內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更無法判斷其藥效的指標成分。因此本申請人制定了指紋圖譜、鑒別和含量測定來全面控制注射劑的質(zhì)量。由于中藥復方制劑中的每種藥材所含的化學成分都很復雜，并且制劑成型后相互干擾，對鑒別、含量測定、指紋圖譜均會造成較大影響。原來曾適用于單味藥材的鑒別、含量測定或指紋圖譜測試方法，在用于測試含有該藥材的復方制劑時往往無法實施。因此，復方制劑的質(zhì)量控制方法必須在原單味藥材相應方法的基礎(chǔ)上作以較大改進，或放棄原方法而建立完全不同的新方法。也就是說，本發(fā)明所述的質(zhì)控方法并非是處方中單味藥材質(zhì)控方法的簡單疊加，而是經(jīng)大量試驗研究后發(fā)明的。
通過實驗證明，本發(fā)明質(zhì)量控制方法對以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制更為有效，方法精密度、穩(wěn)定性均較高。
實驗例1 注射用無菌粉末中以燈盞細辛、白芍或赤芍成分特征為主的指紋圖譜的研究。
1色譜柱的選擇研究過程中，選用了常規(guī)的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm，5μm)Kromasil C18(200mm×4.6mm，5μm)、Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)三種牌號的色譜柱，結(jié)果顯示三種牌號的色譜柱均可達到較好的分離效果，其中DiamonsilC18色譜柱分離效果最好，柱效最高。故選用Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)為實驗研究柱。
2流動相的選擇研究過程中分別考察了(1)甲醇-水(25∶75)，(2)乙腈-水(50∶50)；(3)甲醇-0.05磷酸二氫鉀(10∶90)；(4)乙腈溶液-0.5％磷酸(梯度洗脫)；(5)甲醇溶液-0.005moL/L磷酸二氫鈉(梯度洗脫)；(6)乙腈溶液-0.1％磷酸(梯度洗脫)等6種流動相系統(tǒng)；結(jié)果顯示流動相(1)條件下，少數(shù)峰峰形不好并有重疊；流動相(2)條件下，峰形拖尾，峰與峰重疊較多；流動相(3)條件下，1小時內(nèi)出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動相(4)、(5)、(6)條件下，50～100％乙腈或50～100％甲醇0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1％～3％冰醋酸或0.1％～3％甲酸或0.03％～1％磷酸溶液＝10～90∶90～10范圍內(nèi)梯度洗脫，效果較佳；最佳條件為流動相A為80％乙腈，流動相B為0.1％磷酸，梯度洗脫，從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15％升至70％，流速為1.0ml/min，在該條件下，峰形好，出峰快而完全且分布均勻。
3檢測波長的確定在上述最佳流動相條件下，分別考察了190～410nm下的色譜峰情況，結(jié)果表明，230nm檢測時能兼顧各成分色譜峰的峰度、分離度和基線，效果最佳，故選擇230nm為本品指紋圖譜檢測波長。
4儀器參數(shù)選用了液相色譜分析領(lǐng)域主流配置和性能良好的LC-10Avp高效液相色譜儀，WML-2010色譜工作站，柱溫40℃，流速1.0ml/min。
5供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加水制成每1ml含1mg的溶液，即得。
6參照物溶液的制備稱取野黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每1ml約含0.15mg的溶液，搖勻，即得。
7根據(jù)10批樣品制定標準指紋圖譜，并制定待測中藥復方制劑的指紋圖標準如下I.待測中藥復方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10％；IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±20％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±25％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％；實驗例2 注射液中燈盞細辛藥材、野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法為了突出燈盞細辛的特征，選擇了燈盞細辛對照藥材、野黃芩苷作為其特征，但是由于藥材中存在較多與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，例如赤芍中的芍藥苷、芍藥花苷。只有排除這些成分的干擾，才能獲得理想的色譜效果。薄層色譜法效果優(yōu)劣的關(guān)鍵因素為展開條件，特別是展開劑的組成。因此，試驗篩選了多種展開條件，部分展開條件與結(jié)果如下燈盞細辛藥材、野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法條件結(jié)果正己烷-苯-甲酸乙酯-甲酸(5∶5∶10∶4)聚酰胺薄膜 對照品展開至前沿醋酸乙酯-苯-乙酸(5∶4∶3)硅膠H薄層板陰性有干擾醋酸乙酯-苯-甲酸(5∶4∶3)硅膠G薄層板分離不清晰乙醇-丙酮-甲酸(5∶5∶2)聚酰胺薄膜 陰性有干擾甲苯-醋酸乙酯(8∶1)硅膠H薄層板未充分展開苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10∶5∶0.5)硅膠G薄層板 分離不清晰分離清晰，Rf值適中，陰性無甲醇-醋酸乙酯-甲酸(7∶2∶1)聚酰胺薄膜干擾經(jīng)過篩選，確定了最佳展開條件以聚酰胺膜為固定相，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸(7∶2∶1)為展開劑，在此條件下，野黃芩苷的Rf值適中，和其它斑點分離清晰，陰性無干擾。
實驗例3 注射用濃溶液中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法為了突出燈盞細辛的特征，選擇了野黃芩苷作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，例如赤芍中的芍藥苷、芍藥花苷，只有排除這些成分的干擾，才能獲得理想的色譜效果。液相色譜法效果優(yōu)劣的關(guān)鍵因素為洗脫條件，特別是流動相的組成。因此，試驗篩選了多種洗脫條件，部分洗脫條件與結(jié)果如下注射用濃溶液中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法條件 結(jié)果甲醇-0.05mol/L磷酸氫二鈉(80∶20)分離不清晰八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-0.05mol/L磷酸氫二鈉(90∶10)分離不清晰八烷基硅烷鍵合硅膠甲醇-四氫呋喃-0.05mol/L磷酸氫二鈉(20∶10∶70) 陰性有干擾八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-四氫呋喃-0.05mol/L磷酸氫二鈉(20∶10∶70) 峰形不太對稱八烷基硅烷鍵合硅膠甲醇-四氫呋喃-1％冰醋酸水溶液(20∶10∶70) 陰性有干擾十八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-四氫呋喃-1％冰醋酸水溶液(20∶10∶70) 峰形不太對稱十八烷基硅烷鍵合硅膠甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)分離清晰，峰行尖銳，對稱，陰十八烷基硅烷鍵合硅膠性無干擾經(jīng)過篩選，確定了最佳條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)為流動相，在此條件下，野黃芩苷保留時間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
實驗例4 注射用無菌粉末中芍藥苷、沒食子酸的薄層色譜鑒別方法
為了突出赤芍或白芍藥材的特征，選擇了赤芍或白芍藥材、芍藥苷、沒食子酸作為其特征斑點，但是由于藥材中存在較多與芍藥苷、沒食子酸結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，例如燈盞細辛中的野黃芩苷。薄層色譜法效果優(yōu)劣的關(guān)鍵因素為展開條件，特別是展開劑的組成。因此，試驗篩選了多種展開條件，部分展開條件與結(jié)果如下注射用無菌粉末中芍藥苷、沒食子酸的薄層色譜鑒別方法條件結(jié)果苯-醋酸乙酯(5∶1)硅膠G薄層板 對照品展開至前沿二氯甲烷-甲醇-甲酸(7∶6∶5)硅膠H薄層板分離不清晰三氯甲烷-乙醇-冰醋酸(9∶5∶2)硅膠H薄層板 陰性有干擾甲醇-醋酸乙酯-甲酸(10∶1∶0.2)硅膠G薄層板 陰性有干擾氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸(7∶1∶2)硅膠H薄層板 分離不清晰石油醚-醋酸乙酯-乙醇-冰醋酸(10∶5∶1.5∶0.01)硅膠G分離不清晰薄層板三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶1.5∶1.5∶0.5)硅膠G分離清晰，Rf值適中，陰性無薄層板 干擾經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(6∶1.5∶1.5∶0.5)為展開劑，在此條件下，芍藥苷、沒食子酸的Rf值適中，和其它斑點分離清晰，陰性無干擾。三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲醇或乙醇-甲酸或乙酸＝2～10∶0.5～5∶0.5～5∶0.01～5實驗例5 注射用無菌粉末中野黃芩苷的含量測定1儀器與試藥島津HPLC系統(tǒng)，包括LC-10ATvp泵，SPD-10Avp紫外-可見光檢測；Rheodyne 7725i手動進樣閥(美國Rheodyne公司)；WML色譜工作站(廣西威瑪龍色譜科技公司)；TCQ-250超聲波清洗器(北京醫(yī)療設備二廠，功率250W；頻率19～33kHz)。
2色譜條件選擇試驗選用了Hypersil C18(5μm，200mm×5.0mm，大連依利特)；Kromasil C18(5μm，200mm×5.0mm，大連依利特)和Diamonsil(鉆石)C18色譜柱(5μm，250mm×4.6mm，迪馬公司)；保護柱為SecurityGuard C184mm×3mm(美國Phenomenex inc.)；流動相以甲醇-0.1％磷酸溶液、甲醇-0.1％甲酸溶液、乙腈-0.1％磷酸溶液為流動相，結(jié)果以用甲醇-0.1％磷酸溶液(50∶50)為流動相最佳，以上色譜柱均能較好的對制劑中野黃芩苷進行分離，再綜合考慮柱壓、分離時間和分離情況等因素，確定柱溫為40℃。
3檢測波長的選擇根據(jù)野黃芩苷對照品紫外光譜圖的檢測結(jié)果。野黃芩苷在335nm處有最大吸收，故選擇335nm作為檢測波長。
4陰性干擾試驗分別取野黃芩苷對照品溶液、制劑供試品溶液、缺燈盞細辛藥材的陰性對照溶液分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果缺燈盞細辛藥材陰性對照圖譜在野黃芩苷峰位置處無色譜峰。
5供試品溶液的制備 本品為粉末，易溶解于水中，故取本品適量，精密稱定，用水溶解并稀釋至一定濃度，搖勻，即得。
6線性關(guān)系考察和工作曲線繪制6.1對照品儲備液的制備 稱取野黃芩苷對照品15.50mg(含量97.12％)于50ml容量瓶中，分別加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含0.3010mg的對照品儲備液。
6.2線性關(guān)系考察分 別精密吸上述對照品儲備液1、1.5、2、2.5、3、3.5ml于10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得每1ml含野黃芩苷0.03010、0.04515、0.06020、0.07525、0.09030、0.10535mg的對照品工作液，分別精密吸取上述工作液10μl，注入液相色譜，記錄色譜，以峰面積(Y)為縱坐標，進樣量(X)為橫坐標，繪制出工作曲線，以最小二乘法計算，得回歸方程Y＝182202944X-13956，r＝0.9998。擬合為過原點的直線方程為Y＝18022825X，分別將最小進樣濃度和最大進樣濃度所得的峰面積代入上兩個方程中分別計算，結(jié)果低濃度進樣測定結(jié)果的相對偏差為0.33％，高濃度進樣測定結(jié)果的相對偏差為0.12％，說明工作曲線截距近似為零，故采用外標一點法計算含量。在本實驗條件下，野黃芩苷進樣濃度在0.0301～0.105mg/ml范圍內(nèi)呈直線關(guān)系。
野黃芩苷線性關(guān)系考察進樣濃度0.030100.045150.060200.075250.090300.10535(mg/ml)峰面積540002 805785 10837041349363161539419187857重復性試驗取一供試品，按供試品溶液的制備方法制備9份供試液，分別進樣測定，結(jié)果如下制劑中野黃芩苷含量測定重復性試驗


結(jié)果表明，方法重復性良好。
8回收率試驗 采用加樣回收率試驗，精密稱取已測定野黃芩苷含量(14.33％)的樣品，分別精密加入野黃芩苷適量，按供試品溶液制備方法制備供試液，測定，結(jié)果如下野黃芩苷回收率試驗結(jié)果

結(jié)果表明，方法對野黃芩苷的回收率良好。
9供試品溶液穩(wěn)定性考察 取同一供試品，按供試品溶液制備方法制備供試液，分別于0、1、2、4、8小時進樣，結(jié)果如下供試品溶液穩(wěn)定性考察時間(h) 0124 8平均值 RSD(％)峰面積1104601 1098676 1082647 1100740 10836091094054 0.93結(jié)果表明，供試品溶液在8小時內(nèi)穩(wěn)定。
10樣品測定 取成品制劑，依法測定，結(jié)果如下。
三批中試樣品中野黃芩苷含量測定結(jié)果(mg/支)批號12平均值1批 32.0630.6231.342批 29.8129.5529.683批 28.1428.8428.49實驗例6 注射用無菌粉末中芍藥苷含量測定1儀器與試藥芍藥苷對照品 中國生物制品檢定所，供含量測定用。
2色譜柱條件的選擇 試驗選用了Hypersil C18(5μm，200mm×5.0mm，大連依利特)；Kromasil C18(5μm，200mm×5.0mm，大連依利特)和Diamonsil(鉆石)C18色譜柱(5μm，250mm×4.6mm，迪馬公司)；保護柱為SecurityGuard C184mm×3mm(美國Phenomenex inc.)；流動相以甲醇-0.1％磷酸溶液、甲醇-0.1％甲酸溶液、乙腈-0.1％磷酸溶液為流動相。結(jié)果用甲醇-0.1％甲酸溶液(40∶60)為流動相，色譜柱采用Diamonsil(鉆石)C18色譜柱最佳，再綜合考慮柱壓、分離時間和分離情況等因素，確定柱溫為40℃。
3檢測波長的選擇 根據(jù)芍藥苷對照品的紫外光譜圖的檢測結(jié)果。芍藥苷在230nm處有最大吸收，故選擇230nm為檢測波長。
4陰性干擾試驗 分別取芍藥苷對照品溶液、制劑供試品溶液、缺赤芍藥材的陰性對照溶液分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果，缺赤芍藥材陰性對照圖譜在芍藥苷峰位置處無吸收峰。
5供試品溶液的制備 取本品0.1g，精密稱定，置50ml量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。
6線性關(guān)系考察和工作曲線繪制6.1對照品儲備液的制備 稱取芍藥苷12.12mg于25ml容量瓶中，分別加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml含0.4848mg的對照品儲備液。
6.2線性關(guān)系考察 分別精密吸上述對照品儲備液0.5、1、2、3、4、5ml于10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得每1ml含芍藥苷0.02424、0.04848、0.09696、0.14544、0.19392、0.2424mg的對照品工作液，分別精密吸取上述工作液10μl，注入液相色譜，記錄色譜，以峰面積(Y)為縱坐標，進樣量(X)為橫坐標，繪制工作曲線，以最小二乘法計算，得回歸方程Y＝11283302X-2530，r＝0.9999。擬合為過原點的直線方程為Y＝11268659X，將最小進樣濃度和最大進樣濃度所得的峰面積分別代入上兩個方程中計算，結(jié)果低濃度進樣測定結(jié)果的相對偏差為0.4％，高濃度進樣測定結(jié)果的相對偏差為0.1％，在本實驗條件下，對照品溶液進樣濃度在0.024～0.24mg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈直線關(guān)系，截距近似為零，故采用外標一點法計算含量。
芍藥苷線性關(guān)系考察進樣濃度0.02424 0.04848 0.09696 0.14544 0.19392 0.2424(mg/ml)峰面積273620 536873 1113552 1614915 2185113 27394697重復性試驗 取一供試品，按供試品溶液的制備方法制備9份供試液，分別進樣，記錄色譜結(jié)果如下重復性試驗

試驗結(jié)果表明，方法的重復性良好。
8回收率試驗 采用加樣回收率試驗，精密稱取已測定芍藥苷含量的成品適量，精密加入芍藥苷，按供試品溶液制備方法制備供試液，測定，結(jié)果如下芍藥苷回收率試驗結(jié)果


結(jié)果表明，方法對芍藥苷回收率良好。
9供試品溶液穩(wěn)定性考察 取同一供試品，按供試品溶液制備方法制備供試液，分別于0、1、2、4、8小時進樣，結(jié)果如下供試品溶液芍藥苷穩(wěn)定性考察時間(h)0 1 248平均值 RSD(％)峰面積 1041206 1028914 1074929 1025477 1047162 10435381.9結(jié)果表明，供試品溶液中芍藥苷在8小時內(nèi)穩(wěn)定。
10樣品測定取成品制劑，依法測定并計算芍藥苷含量。
三批中試制劑樣品中芍藥苷含量測定結(jié)果(mg/支)批號 1 2 平均值1批 48.69 48.27 48.482批 46.05 46.59 46.323批 48.73 47.85 48.29具體實施方式
實施例1采用液相色譜法測定注射用無菌粉末中以燈盞細辛、赤芍成分特征為主的指紋圖譜。
(1)供試品溶液的制備精密稱取樣品粉末適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含O.15mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為80％乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15％升至70％，流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)以燈盞細辛和赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜；以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有8個；(5)以上述方法作為中藥復方制劑中以燈盞細辛、赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測中藥復方制劑的指紋圖譜，應符合以下要求I.待測中藥復方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10％；IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±20％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±25％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％；實施例2采用液相色譜法測定注射用濃溶液中以燈盞細辛、白芍成分特征為主的指紋圖譜。
(1)供試品溶液的制備精密量取樣品適量，加甲醇稀釋10倍，搖勻，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為50％乙腈，流動相B為0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由20％升至90％，流速為1.5ml/min，檢測波長為337±2nm，柱溫為60℃；(4)以燈盞細辛和白芍成分特征為主的標準指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各5μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜；以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有7個；(5)以上述方法作為中藥復方制劑中以燈盞細辛、白芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；((6)待測中藥復方制劑的指紋圖譜，應符合以下要求I.待測中藥復方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；實施例3采用液相色譜法測定注射液中以燈盞細辛、赤芍成分特征為主的指紋圖譜。
(1)供試品溶液的制備取樣品，用0.45μm的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取芍藥苷適量，加50％乙醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為甲醇，流動相B為0.1％甲酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至40分鐘，流動相A的比例由10％升至60％，從40分鐘至60分鐘，流動相A的比例由60％升至80％，從60分鐘至65分鐘，流動相A的比例由80％降至10％，流速為0.5ml/min，檢測波長為190±2nm，柱溫為20℃；(4)以燈盞細辛和赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜；以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有4個；(5)以上述方法作為中藥復方制劑中以燈盞細辛、赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)將待測中藥復方制劑的指紋圖譜與上述標準指紋圖譜對比，相似度應為0.90～1.00。
實施例4采用液相色譜法測定注射用無菌粉末中以燈盞細辛、赤芍成分特征為主的指紋圖譜。
(1)供試品溶液的制備精密稱取樣品粉末適量，加80％甲醇制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加80％甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為0.005mol/L磷酸二氫鈉溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至60分鐘，流動相A的比例由10％升至70％，流速為1.2ml/min，檢測波長為303±2nm，柱溫為40℃；(4)以燈盞細辛和赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜；以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有20個；(5)以上述方法作為中藥復方制劑中以燈盞細辛、赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測中藥復方制劑的指紋圖譜，應符合以下要求I.待測中藥復方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.80～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±20％；IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±35％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±40％；實施例5注射用無菌粉末中燈盞細辛、野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取本品0.1g，加甲醇20ml提取，制備供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；取燈盞細辛對照藥材1g，先用三氯甲烷除去脂溶性雜質(zhì)，再參照供試品溶液制法，制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各3μl，分別以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸＝7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的條斑。
實施例6注射用無菌粉末中燈盞細辛、野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取本品0.1g，加50％乙醇20ml提取，制備供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加50％乙醇制成每1ml含1mg的溶液；取燈盞細辛對照藥材0.5g，先用三氯甲烷除去脂溶性雜質(zhì)，再參照供試品溶液制法，制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸＝10∶4∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鋁乙醇溶液，105℃烘5分鐘，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例7注射液中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取本品5ml，蒸干，殘渣加甲醇10ml提取，制備供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各2μl，分別以條狀帶點于同一聚酰胺膜上，以乙醇-醋酸丁酯-甲酸＝5∶0.5∶3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以4％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的條斑。
實施例8注射用濃液中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取本品2ml，用5倍量乙醇稀釋，制備供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各10μl，分別點于同一聚酰胺膜上，以乙醇-醋酸丁酯-甲酸＝5∶5∶0.01為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％三氯化鋁乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
實施例9注射用無菌粉末中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取樣品10mg，加甲醇20ml提取，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的對照溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液＝50∶50為流動相，檢測波長為335nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液各5μl，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；實施例10注射用濃溶液中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取樣品0.2ml，加乙醇20ml稀釋，制備供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.05mg的對照溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.01％磷酸水溶液＝15∶85為流動相，檢測波長為200nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液各15μl，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；實施例11注射液中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取樣品2ml，加乙醇20ml稀釋，制備供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加乙醇制成每1ml含0.05mg的對照溶液，采用液相色譜法，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液＝70∶30為流動相，檢測波長為410nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；實施例12注射用無菌粉末中芍藥苷、沒食子酸的薄層色譜鑒別方法取樣品0.2g，加甲醇20ml提取，制備供試品溶液；另取芍藥苷、沒食子酸對照品，加甲醇制成每ml含芍藥苷2mg、沒食子酸0.5mg的對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取供試溶液與對照溶液1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸＝6∶1.5∶1.5∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，先噴以5％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點；再噴以5％香草醛硫酸溶液，105℃烘至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點；實施例13注射用濃溶液中白芍藥材、芍藥苷、沒食子酸的薄層色譜鑒別方法取樣品0.2ml，加甲醇20ml稀釋，制備供試品溶液；另取芍藥苷、沒食子酸對照品，加甲醇制成每ml含芍藥苷2mg、沒食子酸0.5mg的對照品溶液；取白芍藥材0.5g，加甲醇20ml提取，制備對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取供試溶液與對照溶液適量，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸＝10∶0.5∶5∶0.01為展開劑，展開，取出，晾干，先噴以10％三氯化鋁乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點；再噴以10％香草醛硫酸溶液，加熱斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點；實施例14注射液中赤芍藥材、芍藥苷的薄層色譜鑒別方法取樣品2ml，加乙醇20ml稀釋，制備供試品溶液；另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每ml含芍藥苷1mg的對照品溶液；取赤芍藥材0.5g，加甲醇20ml提取，制備對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取供試溶液與對照溶液3μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸＝2∶0.5∶5∶5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％香草醛硫酸溶液，加熱斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點；實施例15注射用無菌粉末中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取樣品20mg，加甲醇20ml提取，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取芍藥苷對照品加甲醇制成每ml含0.1mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％甲酸溶液＝40∶60為流動相，檢測波長為230nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例16注射用濃溶液中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取樣品0.1ml，加甲醇20ml稀釋，制備供試品溶液；取芍藥苷對照品加甲醇制成每ml含0.1mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-1％磷酸＝15∶85為流動相，檢測波長為200nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液各5μl，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例17注射液中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取樣品1ml，加乙醇20ml稀釋，制備供試品溶液；取芍藥苷對照品加95％乙醇制成每ml含0.05mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.005mol/L磷酸二氫鉀溶液＝60∶40為流動相，檢測波長為410nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液各1～10μl，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
實施例18注射用無菌粉末中野黃芩苷的含量測定取樣品20mg，精密稱定，加甲醇50ml提取，制備供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每ml含0.1mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液＝50∶50為流動相，檢測波長為335nm；分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，制劑中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于40mg；實施例19注射用濃溶液中野黃芩苷的含量測定精密量取樣品0.2ml，加乙醇50ml稀釋，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加乙醇制成每ml含0.05mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15∶85為流動相，檢測波長為410nm；分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，制劑中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于15mg；實施例20注射液中野黃芩苷的含量測定精密量取樣品0.5ml，加甲醇50ml稀釋，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每ml含0.05mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.2％甲酸水溶液＝70∶30為流動相，檢測波長為200nm；分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各5μl，注入液相色譜儀，以標準曲線法進行計算，制劑中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于30mg；實施例21注射用無菌粉末中芍藥苷的含量測定取樣品20mg，精密稱定，加甲醇50ml提取，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取芍藥苷對照品，加甲醇制成每ml含0.1mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％甲酸溶液＝40∶60為流動相，檢測波長為230nm；分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，制劑中每日用劑量含芍藥苷的不得少于60mg；實施例22注射用無菌粉末中芍藥苷的含量測定取樣品100mg，精密稱定，加甲醇100ml提取，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取芍藥苷對照品，加甲醇制成每ml含0.02mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-3％甲酸溶液＝15∶85為流動相，檢測波長為200nm；分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，以標準曲線法進行計算，制劑中每日用劑量含芍藥苷的不得少于15mg；實施例23注射液中芍藥苷的含量測定精密量取樣品1ml，加甲醇稀釋至10ml，制備供試品溶液；取芍藥苷對照品，加甲醇制成每ml含0.05mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.005mol/L磷酸二氫鈉溶液＝60∶40為流動相，檢測波長為410nm；分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各20μl，注入液相色譜儀，以標準曲線法進行計算，制劑中每日用劑量含芍藥苷的不得少于20mg；實施例24注射用濃溶液中芍藥苷的含量測定精密量取樣品0.3ml，加乙醇稀釋至10ml，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取芍藥苷對照品，加50％乙醇制成每ml含0.05mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-3％冰醋酸水溶液＝30∶70為流動相，檢測波長為360nm；分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，以標準曲線法進行計算，制劑中每日用劑量含芍藥苷的不得少于30mg；實施例25注射用濃溶液中總黃酮的含量測定精密量取樣品1ml，加甲醇稀釋至100ml，制備供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每ml含野黃芩苷0.1mg的對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度；分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，各制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計，不得少于20mg；
實施例26注射用無菌粉末中總黃酮的含量測定精密量取樣品1g，加乙醇100ml提取，制備供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加乙醇制成每ml含野黃芩苷0.1mg的對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在300nm的波長處測定吸收度，以標準曲線法進行計算，各制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計，不得少于40mg；實施例27注射用濃溶液中總黃酮的含量測定精密量取樣品1ml，加水稀釋至100ml，制備供試品溶液；取野黃芩苷對照品，加水醇制成每ml含野黃芩苷0.1mg的對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在600nm的波長處測定吸收度，以外標一點法進行計算，各制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計，不得少于30mg；實施例28注射液中赤芍總苷的含量測定精密量取樣品1ml，置10ml量瓶中，加5％氫氧化鈉溶液并定至刻度，搖勻，精密量取5ml，置具塞試管中，置沸水浴水解2小時，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用甲醇反復蕩洗試管壁，定至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取苯甲酸對照品，加甲醇制成每ml含苯甲酸0.05mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液＝30∶70為流動相，檢測波長為230nm，柱溫35℃；分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，赤芍總苷含量＝苯甲酸含量×480.48/122.13，計算赤芍總苷的含量，中藥復方制劑每日用劑量中含白芍總苷或赤芍總苷的限度不得少于20mg。
實施例29注射用濃溶液中白芍總苷的含量測定精密量取樣品0.2ml，置10ml量瓶中，加10％氫氧化鉀溶液并定至刻度，搖勻，精密量取5ml，置具塞試管中，置沸水浴水解5小時，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用乙醇反復蕩洗試管壁，定至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取苯甲酸對照品，加甲醇制成每ml含苯甲酸0.03mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.05％冰醋酸溶液＝10∶90為流動相，檢測波長為200nm，柱溫20℃；分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各15μl，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，白芍總苷含量＝苯甲酸含量×480.48/122.13，計算白芍總苷含量，制劑每日用劑量中含白芍總苷的限度不得少于40mg。
實施例30注射用無菌粉末中白芍總苷的含量測定精密量取樣品0.5g，置10ml量瓶中，加5％氫氧化鉀溶液溶解并定容至刻度，搖勻，精密量取5ml，置具塞試管中，置沸水浴水解0.5小時，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用乙醇反復蕩洗試管壁，定至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；取苯甲酸對照品，加甲醇制成每ml含苯甲酸0.08mg的對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝60∶40為流動相，檢測波長為410nm，柱溫60℃；分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各20μ1，注入液相色譜儀，以標準曲線法進行計算，白芍總苷含量＝苯甲酸含量×480.48/122.13，計算白芍總苷含量，制劑每日用劑量中含白芍總苷的限度不得少于30mg。
實施例31采用液相色譜法測定注射用無菌粉末中以燈盞細辛、赤芍成分特征為主的指紋圖譜。
(1)供試品溶液的制備精密稱取樣品粉末適量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，搖勻，用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為80％乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15％升至70％，流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)以燈盞細辛和赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜；以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有8個；(5)以上述方法作為中藥復方制劑中以燈盞細辛、赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測中藥復方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90～1.00。
權(quán)利要求
1.一種以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容(1)以燈盞細辛、白芍或赤芍中全部或部分成分特征為主的指紋圖譜測試方法；(2)燈盞細辛藥材、赤芍或白芍藥材、野黃芩苷、芍藥苷、沒食子酸中全部或部分成分的鑒別測試方法；(3)野黃芩苷、芍藥苷、總黃酮、赤芍總苷或白芍總苷中全部或部分成分的含量測試方法。
2.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下指紋圖譜測試的全部或部分內(nèi)容(1)供試品溶液的制備取待測中藥復方制劑適量，以水或甲醇或乙醇中的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制備供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取野黃芩苷或芍藥苷，水或甲醇或乙醇中的一種或幾種為溶劑，溶解至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相A為50～100％乙腈或50～100％甲醇，流動相B為0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.1％～3％冰醋酸或0.1％～3％甲酸或0.03％～1％磷酸溶液，梯度洗脫，流動相A比例變化范圍為10～90％，流速為0.5～1.5ml/min、檢測波長為190-400nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫在20～60℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細辛、白芍或赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的測試手段；依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有4～20個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復方制劑中以燈盞細辛、白芍或赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測中藥復方制劑的指紋圖譜，應符合下列要求中的部分或全部I.待測中藥復方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.80～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的10％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±20％；IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±35％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±40％。
3.按照權(quán)利要求2所述的以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下指紋圖譜測試的全部或部分內(nèi)容(1)供試品溶液的制備精密稱取待測中藥復方制劑適量，加水稀釋或溶解，制成每1ml含1mg的溶液，濾過，即得；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為80％乙腈，流動相B為0.1％磷酸溶液，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至80分鐘，流動相A的比例由15％升至70％，流動相B的比例由85％降至30％；流速為1.0ml/min，檢測波長為230±2nm，柱溫為40℃；(4)標準指紋圖譜的制定以上述方法作為制定以燈盞細辛、白芍或赤芍成分特征為主的標準指紋圖譜的測試手段；分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)10批或10批以上供試品所測得的圖譜，制定標準指紋圖譜，以確定的參照物色譜峰的保留時間為基準，計算其它共有色譜峰的相對保留時間，所述標準指紋圖譜中，共有峰有5～12個；(5)以(1)～(3)所述方法作為待測中藥復方制劑中以燈盞細辛、白芍或赤芍成分特征為主的指紋圖譜的測試手段，制備待測樣品的指紋圖譜；(6)待測中藥復方制劑的指紋圖譜，應符合下列要求中的部分或全部I.待測中藥復方制劑的指紋圖譜與標準指紋圖譜的相似度，應為0.90～1.00；II.非共有峰面積不得超過總峰面積的5％；III.除參照物色譜峰之外的其他共有色譜峰與參照物色譜峰的相對保留時間的比值與標準指紋圖譜比較，相對偏差不得超過±10％；IV.共有峰中單峰面積占總峰面積比大于20％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±20％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于10％小于20％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±25％；共有峰中單峰面積占總峰面積比大于5％小于10％的峰，與標準指紋圖譜相應峰峰面積的比值相對偏差不得超過±30％。
4.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下鑒別測試方法中的全部或部分內(nèi)容a、中藥復方制劑中野黃芩苷、燈盞細辛中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，加乙醇或甲醇或正丁醇提取，濾過或離心，取濾液或上清液作為供試品溶液；取燈盞細辛對照藥材，先除去脂溶性雜質(zhì)，再參照供試品溶液制法，制成對照藥材溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述對照溶液中的一種或兩種及供試溶液適量，點于同一硅膠薄層板或聚酰胺薄膜上，以甲醇或乙醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲酸或乙酸＝5～15∶0.5～5∶0.01～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以含三氯化鋁或三氯化鐵顯色劑，供試品色譜中，在與對照色譜相應的位置上，應顯相同顏色斑點；b、中藥復方制劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，以甲醇或乙醇或水中的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制為供試品溶液；以野黃芩苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.2％～3％冰醋酸水溶液或0.2％～3％甲酸水溶液或0.01％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15～70∶85～30為流動相，檢測波長為200～410nm中的一種或幾種；采用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、中藥復方制劑中赤芍或白芍藥材、芍藥苷、沒食子酸中一種或幾種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，加乙醇或甲醇或正丁醇或水中的一種或幾種為溶劑提取，制備供試品溶液；取赤芍或白芍對照藥材，參照供試品溶液制備方法，制成對照藥材溶液；取芍藥苷對照品、沒食子酸對照品的一種或兩種，制成對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述對照溶液中的一種或兩種及供試溶液適量，分別點于同一硅膠薄層板上，以三氯甲烷或二氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯或醋酸丁酯-甲醇或乙醇-甲酸或乙酸＝2～10∶0.5～5∶0.5～5∶0.01～5為展開劑，展開，取出，晾干，先后或分別噴以含三氯化鐵的顯色劑或含三氯化鋁的顯色劑或含硫酸的顯色劑或含香草醛的顯色劑中的一種或幾種，供試品色譜中，在與對照色譜相應的位置上，應顯相同顏色斑點；d、中藥復方制劑中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，加甲醇或乙醇或水中的一種或幾種提取或溶解或稀釋至合適濃度，作為供試品溶液；以芍藥苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15～60∶85～40流動相，檢測波長為200～410nm中的一個或幾個；采用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，供試品色譜中，應具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
5.按照權(quán)利要求4所述的以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下鑒別測試方法中的全部或部分內(nèi)容a、中藥復方制劑中燈盞細辛藥材、野黃芩苷中一種或兩種的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，加甲醇提取，制備供試品溶液；另取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；取燈盞細辛對照藥材，先除去脂溶性雜質(zhì)，再參照供試品溶液制法，制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取上述對照溶液中的一種或兩種及供試溶液適量，點于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸＝7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；b、中藥復方制劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液＝50∶50為流動相，檢測波長為335nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰；c、中藥復方制劑中赤芍藥材、芍藥苷、沒食子酸的薄層色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，加甲醇提取，離心，取上清液作為供試品溶液；另取芍藥苷、沒食子酸對照品的甲醇溶液作為對照品溶液；取赤芍藥材，參照供試品溶液的制備方法制成對照藥材溶液；采用薄層色譜法試驗，分別吸取對照藥材或?qū)φ掌啡芤褐械囊环N或兩種、及供試溶液適量，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸＝6∶1.5∶1.5∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，先噴以5％三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點；再噴以香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點；d、中藥復方制劑中芍藥苷的液相色譜鑒別方法取待測中藥復方制劑適量，加甲醇提取或稀釋，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芍藥苷對照品的甲醇溶液為對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％甲酸溶液＝40∶60為流動相，檢測波長為230nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時間一致的色譜峰。
6.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下含量測定的全部或部分內(nèi)容a、中藥復方制劑中野黃芩苷的含量測定取待測中藥復方制劑適量，以甲醇或乙醇或水中的一種或幾種為溶劑，提取或稀釋或溶解，制為供試品溶液；以野黃芩苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈-水或0.2％～3％冰醋酸水溶液或0.2％～3％甲酸水溶液或0.01％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15～70∶85～30為流動相，檢測波長為200～410nm中的一種或幾種；采用液相色譜法試驗，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，測試，以外標一點法或標準曲線法進行計算，中藥復方制劑中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于15mg；b、中藥復方制劑中芍藥苷的含量測定取待測中藥復方制劑適量，加甲醇或乙醇或水中的一種或幾種提取或溶解或稀釋至合適濃度，濾過，作為供試品溶液；以芍藥苷對照品制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝15～60∶85～40流動相，檢測波長為200～410nm中的一個或幾個；采用液相色譜法試驗，分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法或標準曲線法進行計算，中藥復方制劑中每日用劑量含芍藥苷的不得少于15mg；c、中藥復方制劑中總黃酮的含量測定取待測中藥復方制劑適量，用甲醇或水或乙醇中的一種或幾種提取或稀釋至合適濃度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液；以隨行溶劑為空白，采用分光光度法，在300～600nm波長中的一處或兩處測定吸收度，以外標一點法或標準曲線法進行計算；中藥復方制劑中每日用劑量含總黃酮不得少于20mg；d、中藥復方制劑中赤芍總苷或白芍總苷的含量測定取待測中藥復方制劑適量，置量瓶中，加強堿溶液適量使稀釋或溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置具塞試管中，置沸水浴水解0.5小時～5小時，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至量瓶中，用甲醇或乙醇或流動相反復蕩洗試管壁，定至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以苯甲酸對照品的制備對照品溶液，采用液相色譜法，色譜柱用烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.05％～3％冰醋酸水溶液或0.05％～3％甲酸水溶液或0.001％～1％磷酸水溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.005mol/L～0.3mol/L磷酸二氫鉀溶液＝10～60∶90～40流動相，檢測波長為200～410nm波長范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫在20～60℃范圍內(nèi)；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法或標準曲線法進行計算含量后再由公式白芍總苷或赤芍總苷含量％＝苯甲酸含量％×480.48/122.13，計算白芍總苷或赤芍總苷的含量，各制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含白芍總苷或赤芍總苷的限度不得少于20mg。
7.按照權(quán)利要求6所述的以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下含量測定的全部或部分內(nèi)容a、中藥復方制劑中野黃芩苷的含量測定取待測中藥復方制劑適量，精密稱定或量取，加甲醇提取或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％磷酸水溶液＝50∶50為流動相，檢測波長為335nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，中藥復方制劑中每日用劑量含野黃芩苷的不得少于30mg；b、中藥復方制劑中芍藥苷的含量測定取待測中藥復方制劑適量，精密稱定或量取，加甲醇溶解或稀釋至合適濃度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以芍藥苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.1％甲酸溶液＝40∶60為流動相，檢測波長為230nm；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，中藥復方制劑中每日用劑量含芍藥苷的不得少于30mg；c、中藥復方制劑中總黃酮的含量測定取待測中藥復方制劑中適量，置量瓶中，加甲醇適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，照分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標一點法進行計算，各制劑以相當于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計，不得少于40mg；d、中藥復方制劑中赤芍總苷或白芍總苷的含量測定取待測中藥復方制劑適量，精密稱定或量取，置量瓶中，加5％氫氧化鈉溶液適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，置具塞試管中，置沸水浴水解2小時，取出，放至室溫，定量轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用甲醇或流動相反復蕩洗試管壁，定至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；以苯甲酸對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液＝30∶70為流動相，檢測波長為230nm，柱溫35℃；分別吸取供試品溶液與對照品溶液適量，注入液相色譜儀，以外標一點法進行計算，白芍總苷或赤芍總苷含量＝苯甲酸含量×480.48/122.13，計算白芍總苷或赤芍總苷的含量，中藥復方制劑每日用劑量中含白芍總苷或赤芍總苷的限度不得少于40mg。
8.按照權(quán)利要求6或7所述的以燈盞細辛、赤芍或白芍制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述中藥復方制劑的含量測定結(jié)果，按照重量百分比計算，可測定成分的總量占制劑中扣除輔料和水分外的總固體量的25％以上。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種由燈盞細辛和赤芍(或白芍)制成的中藥復方制劑的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量控制方法包括該組方制劑中燈盞細辛、赤芍(或白芍)的指紋圖譜測試方法和/或鑒別測試方法和/或含量測定方法，本發(fā)明為該復方制劑的質(zhì)量控制提供了一種可靠、穩(wěn)定、全新的方法，使該制劑的工藝控制更加嚴格合理，質(zhì)量更加穩(wěn)定，同時為大生產(chǎn)提供了可靠穩(wěn)定的檢測方法，為確?；颊哂盟幍陌踩?、有效性提供了數(shù)字化的說明。
文檔編號A61P3/10GK1935199SQ200610152978
公開日2007年3月28日 申請日期2006年9月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月22日
發(fā)明者于文風 申請人:北京奇源益德藥物研究所