專利名稱：一種治療骨質(zhì)疏松的中藥組合物及其制劑和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥新藥研發(fā)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種治療骨質(zhì)疏松的中藥組合物及其制劑和用途。
背景技術(shù)：
骨質(zhì)疏松癥(OP，Osteoporosis)是一種代謝性骨病，是單位體積內(nèi)骨量減少、骨的微結(jié)構(gòu)退化、骨質(zhì)變薄、骨小梁數(shù)目減少、骨髓腔增寬、骨強(qiáng)度減低等，導(dǎo)致骨骼脆性增加和易發(fā)生骨折的全身性疾病，其臨床癥狀主要表現(xiàn)為骨骼疼痛、龜背出現(xiàn)、骨折發(fā)生、易疲勞等等。據(jù)估計，目前我國罹患此病者至少有0.839億人，2010年將達(dá)到1.14億人，2025年為1.513億人。國家“95”攻關(guān)課題“中國部分地區(qū)老年人群骨質(zhì)疏松癥流行病學(xué)研究”報告中指出我國目前40歲以上人群骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生率為16.1％，60歲以上人群為22.6％，80歲以上人群為50％，骨質(zhì)疏松被稱之為無聲無息的流行病。
目前，治療和預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的藥物按其作用階段可分為三類①抗骨吸收劑，如雌激素、二膦酸鹽和降鈣素、依撲拉芬等；②促骨形成劑，如氟化物、甲狀旁腺激素(PTH)片段和同化激素等；③骨礦化藥物，如鈣劑、維生素D及其衍生物等。
雖然治療骨質(zhì)疏松的藥物較多，但尚無能逆轉(zhuǎn)病情的特效藥。鑒于西藥存在的種種弊端，越來越多的人把目光投向中藥防治骨質(zhì)疏松的研究上。近年，應(yīng)用中醫(yī)藥治療骨質(zhì)疏松的臨床及實驗報道有相當(dāng)數(shù)量，其臨床療效得到肯定，實驗研究也取得了許多重要成果。
中醫(yī)治療骨質(zhì)疏松癥多從補(bǔ)腎著手。祖國醫(yī)學(xué)中并無骨質(zhì)疏松這一病名，但根據(jù)其臨床癥狀及發(fā)病機(jī)理，與“骨痹”、“骨痿”等的描述頗為相似，始見于《內(nèi)經(jīng)》。腎主骨，《醫(yī)精經(jīng)義》曰“腎藏精，精生髓，髓生骨，故骨者腎之所合也；髓者精之所生也；精足則髓足，髓在骨內(nèi)，髓足者則骨強(qiáng)”?？梢娔I對骨的生長發(fā)育和維持骨的成分及結(jié)構(gòu)正常具有重要作用。腎虛則骨萎。
補(bǔ)骨脂始載于《開寶本草》，味苦、辛，性溫。有補(bǔ)陽、固精、縮尿、止瀉功能。因而補(bǔ)骨脂常用于腰膝冷痛，陽痿滑精，遺尿，尿頻，黎明泄瀉等，是常用的補(bǔ)腎狀陽藥。現(xiàn)代研究表明，補(bǔ)骨脂含有一類擬雌內(nèi)酯類成分，具有雌激素活性。這一類物質(zhì)是補(bǔ)骨脂治療骨質(zhì)疏松癥最重要的化學(xué)成分，可以減緩骨代謝、減少骨丟失，從而緩解甚至治療骨質(zhì)疏松癥。藥理學(xué)研究亦證實補(bǔ)骨脂具有治療骨質(zhì)疏松，雌性激素樣作用，增強(qiáng)免疫力等活性。體外試驗表明，補(bǔ)骨脂能抑制分離破骨細(xì)胞在骨片上形成的吸收陷窩的增加與擴(kuò)張，從而表明，它對分離破骨細(xì)胞有抑制作用。補(bǔ)骨脂丙酮提取液的非極性部分能增加大鼠骨強(qiáng)度，提高血中無機(jī)磷酸鹽水平，經(jīng)分析證實，其作用成分為補(bǔ)骨脂油脂部分。用補(bǔ)骨脂、牛膝、枸杞等五味中藥配成的混懸液給大鼠灌胃，觀察其對維甲酸所致大鼠骨質(zhì)疏松模型的影響，該混懸液能使模型大鼠血清堿性磷酸酶(S-AKP)降至正常水平，顯著降低尿中Ca/Cr和HOP/Cr水平，并顯著抑制骨吸收，使大鼠骨代謝處于骨形成大于骨吸收的平衡狀態(tài)。
綜上所述，補(bǔ)骨脂具有明顯的治療骨質(zhì)疏松的作用，但具體是哪個有效部位或有效成分所起的作用，還未有文獻(xiàn)詳細(xì)報道。
研究報道補(bǔ)骨脂中的主要成分包括呋喃香豆素類、黃酮類及脂肪類等，其中呋喃香豆素類包括補(bǔ)骨脂素(psoralen)，異補(bǔ)骨脂素(isopsoralen或angelicin)，補(bǔ)骨脂定(psoralidin)，異補(bǔ)骨脂定(iso-psoralidin)等。關(guān)于從補(bǔ)骨脂中提取補(bǔ)骨脂素或(和)異補(bǔ)骨脂素的制備方法有文獻(xiàn)報道。如公開號為CN1294923A的中國專利，公開了補(bǔ)骨脂滴鼻液及其生產(chǎn)方法，該專利中提到將補(bǔ)骨脂粉碎，經(jīng)30～90％酒精水溶液浸泡一至三次，過濾，合并濾液，除酒精，靜置，棄去水層，取黑色粘稠層，加入增溶劑和水，調(diào)pH值為5～8，過濾，濾液配制成補(bǔ)骨脂滴鼻液。該發(fā)明方法雖然提高了補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的提取率，但并沒有報道其確切的提取率，且所得到的提取物中還含有大量的雜質(zhì)。公開號為CN1446814A的中國專利公開了補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的制備方法，提取補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的方法是氯仿浸提，硅膠純化，然后結(jié)晶得到補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素。該方法使用有機(jī)溶劑氯仿，毒性大，且存在溶劑殘留，不適合用于藥物的大規(guī)模化生產(chǎn)。另有公開號為CN1543945A的中國專利公開了從補(bǔ)骨脂中提取單體成分的工藝及其藥物劑型，采用二氧化碳超臨界萃取方法得到補(bǔ)骨脂素，使其有效成分含量超過50％。首先該提取方法得到的只有補(bǔ)骨脂素，其次該方法雖然使有效成分提取率提高，但提取過程中需用到特殊的設(shè)備超臨界萃取斧，工業(yè)化大生產(chǎn)成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述問題，本發(fā)明人對補(bǔ)骨脂的化學(xué)成分及藥理活性進(jìn)行了深入的研究，從補(bǔ)骨脂中分離得到治療骨質(zhì)疏松的有效部位補(bǔ)骨脂總香豆素(其中有效成分為補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素)，并經(jīng)系列藥效試驗證明該有效部位具有較好的治療骨質(zhì)疏松的作用。
本發(fā)明的目的在于提供一種治療骨質(zhì)疏松疾病的中藥組合物，其中的活性成分是來自中藥補(bǔ)骨脂中的有效部位補(bǔ)骨脂總香豆素。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了以所述補(bǔ)骨脂總香豆素為活性成分，用于治療骨質(zhì)疏松疾病的純中藥藥物制劑。
本發(fā)明的另一個目的在于提供用于治療骨質(zhì)疏松疾病的中藥藥物的制備方法，特別是補(bǔ)骨脂總香豆素的制備方法。
本發(fā)明所用的中藥補(bǔ)骨脂為豆科植物補(bǔ)骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果實。秋季果實成熟時采收果序，曬干，搓出果實，除去雜質(zhì)。從生產(chǎn)角度考慮，本發(fā)明選用的補(bǔ)骨脂藥材中補(bǔ)骨脂總香豆素以補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)計的含量應(yīng)該不低于1.0％，補(bǔ)骨脂素的含量應(yīng)該不低于0.5％。
本發(fā)明所述的補(bǔ)骨脂總香豆素可通過下列制備方法得到采用乙醇等低級醇提取，再用大孔樹脂分離純化，得到有效部位補(bǔ)骨脂總香豆素，主要包括補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素，補(bǔ)骨脂總香豆素的含量超過70％，轉(zhuǎn)移率超過70％。該方法所用有機(jī)溶劑毒性低；大孔樹脂不但可重復(fù)使用，而且有利于環(huán)保；提取率較高；提取工藝穩(wěn)定可行，質(zhì)量可控；提取方法簡單；提取成本較低，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。具體制備過程如下(1)提取取補(bǔ)骨脂藥材，粉碎后用含水低級醇提取，將提取液減壓濃縮，濃縮后的浸膏再用有機(jī)溶劑充分溶解，離心，得上清液；(2)除雜將上清液加入樹脂，攪拌均勻，揮干溶劑，干法加載于樹脂柱，先用水洗除雜，再用10％～35％乙醇洗脫除雜；(3)洗脫用大于或者等于50％的乙醇洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，粉碎后得補(bǔ)骨脂總香豆素上述提取過程中所述的補(bǔ)骨脂通常需粉碎，粒度要求過10～40目篩，以利于其中有效成分被充分提取。可采用不同濃度的低級醇提取藥材，提取方法可以是滲漉或者回流提取，提取采用的低級醇可以是甲醇、乙醇、正丁醇、異丙醇中的任意一種，醇的濃度為X，0＜X≤95％，優(yōu)選濃度為30≤X≤80％，優(yōu)選溶劑為乙醇，且乙醇用量為藥材重量(V/W)的8～15倍。提取液減壓濃縮，濃縮后的浸膏再使用1～3倍藥材重量(V/W)的有機(jī)溶劑使有效成分充分溶解，溶解采用的有機(jī)溶劑可以是甲醇、乙醇、正丁醇，異丁醇、丙酮或乙酸乙酯中的任意一種。
上述純化過程中所用樹脂柱的填料可以是極性、弱極性或非極性樹脂，如苯乙烯型(包括甲基苯乙烯型、乙基苯乙烯型)、二乙烯苯型、丙烯酸酯型或丙烯腈型樹脂等，具體可采用D-101型、ZTC型、AB-8型等。
上述方法中減壓濃縮、真空干燥的條件是指溫度為60℃，真空度為-0.09mpa。
上述提取、純化過程中的最優(yōu)條件可通過L9(34)正交表進(jìn)行正交篩選實驗，以補(bǔ)骨脂總香豆素的含量和轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，可篩選出最佳實驗條件。
通過上述方法所得的補(bǔ)骨脂總香豆素，其含量以補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)計在70％以上，相對于藥材其轉(zhuǎn)移率在70％以上。
本法得到的補(bǔ)骨脂總香豆素為土黃色粉末，氣清香，味澀，微苦，易溶于甲醇、乙醇和醋酸乙酯，難溶于水和正己烷。
通過對上述方法制得的補(bǔ)骨脂總香豆素進(jìn)行分離鑒定，得到如下2種主要化合物，見下表表補(bǔ)骨脂總香豆素中主要化學(xué)成分

補(bǔ)骨脂素，分子式C11H6O3，無色針晶，熔點為161～163℃，分子結(jié)構(gòu)式如下 補(bǔ)骨脂素(psoralen)異補(bǔ)骨脂素，分子式C11H6O3，無色針晶，熔點為137～139℃，分子結(jié)構(gòu)式如下 異補(bǔ)骨脂素(isopsoralen)本發(fā)明提供的治療骨質(zhì)疏松的中藥組合物，其含有采用上述制備方法所得的補(bǔ)骨脂總香豆素。大量的藥效學(xué)實驗證明，該中藥組合物具有明顯的治療骨質(zhì)疏松的效果。從藥效學(xué)角度出發(fā)，作為本發(fā)明用于治療骨質(zhì)疏松疾病的中藥組合物，其中所述補(bǔ)骨脂總香豆素以補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)計含量要求在50％以上，但并不局限于此含量。
本發(fā)明提供了包含補(bǔ)骨脂總香豆素在內(nèi)的中藥組合物，并提供了用于治療骨質(zhì)疏松疾病的藥物制劑和相應(yīng)的藥物劑型。該藥物制劑是以上述補(bǔ)骨脂總香豆素為有效活性成分，并包括了藥劑學(xué)上可接受的其他輔料組分，其中所述的補(bǔ)骨脂總香豆素以補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)計含量超過50％。該中藥制劑可以是口服制劑、注射劑及局部給藥制劑，其中口服劑包括膠囊劑、丸劑、片劑、顆粒劑等，注射劑包括注射液及凍干粉針劑等，局部給藥制劑包括軟膏劑、貼劑、噴霧劑等。
在制備口服制劑時可選用的輔料可以是淀粉、糊精或環(huán)糊精、蔗糖、硬脂酸鹽等常規(guī)充填劑。在制備凍干粉針劑時可以通過噴霧干燥、低溫真空干燥、冷凍干燥等方法制備。各制劑的后期制備工藝及設(shè)備均屬制藥領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，本發(fā)明對此不作限定，故在此不予詳述。
本發(fā)明提供的藥物組合物可通過口服、粘膜、經(jīng)皮、肌肉或皮下、靜脈等途徑給藥。
本發(fā)明的創(chuàng)造性還在于通過系列實驗證明有效部位補(bǔ)骨脂總香豆素具有治療骨質(zhì)疏松疾病的作用。為了便于理解本發(fā)明中藥組合物在治療骨質(zhì)疏松疾病方面的藥用價值，發(fā)明人使用上述方法得到的補(bǔ)骨脂總香豆素及其相應(yīng)的藥物劑型完成了系列藥理及藥效學(xué)實驗。針對骨質(zhì)疏松發(fā)病的機(jī)理和臨床表現(xiàn)，結(jié)合中醫(yī)理論對骨質(zhì)疏松的辨證分析，發(fā)明人共設(shè)計了兩個主要藥效學(xué)試驗。選用兩種經(jīng)典的骨質(zhì)疏松模型——卵巢去勢大鼠模型(模擬絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥)和激素誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松模型，觀察了補(bǔ)骨脂總香豆素對骨質(zhì)疏松的治療作用，結(jié)果表明補(bǔ)骨脂總香豆素可升高骨質(zhì)疏松大鼠的骨密度，改善股骨骨小梁的結(jié)構(gòu)，增加骨質(zhì)部分微量元素的含量，增加血鈣、骨鈣素等的含量，改善骨吸收和骨形成的動態(tài)平衡，對骨質(zhì)疏松大鼠有明顯的治療作用。
本發(fā)明的創(chuàng)造性在于提供了一種治療骨質(zhì)疏松疾病的中藥組合物，該組合物的有效成分是從豆科植物補(bǔ)骨脂中提取分離出的補(bǔ)骨脂總香豆素，并提供了補(bǔ)骨脂總香豆素的制備方法，還提供了該中藥組合物的藥物劑型。
本發(fā)明藥用組合物具有如下突出特點(1)有效成分明確，質(zhì)量可控，提取轉(zhuǎn)移率較高；(2)植物原料廉價易得；(3)適應(yīng)癥廣，市場容量大；(4)成本低廉，工藝簡便，易于產(chǎn)業(yè)化。
為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明藥物的治療效果，采用本發(fā)明制備方法得到的補(bǔ)骨脂總香豆素，進(jìn)行以下藥效學(xué)實驗對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明并不限于下列實驗中包含的內(nèi)容。
實驗一補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型的影響一、材料受試藥物補(bǔ)骨脂總香豆素，采用本發(fā)明制備方法制備，性狀土黃色粉末，含量70％陽性對照藥1天可片(阿侖磷酸鈉)，10mg/片，海南曼克星制藥廠陽性對照藥2仙靈骨葆，0.3g/片，貴州仙靈藥業(yè)股份有限公司二、方法Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為空白對照組、模型對照組、陽性對照組1(天可片，1.76mg/kg)、陽性對照組2(仙靈骨葆，500mg/kg)、補(bǔ)骨脂總香豆素小(5mg/kg)、中(10mg/kg)、大(20mg/kg)劑量組，共7組。除空白對照組外，模型對照組、陽性對照組和補(bǔ)骨脂小、中、大劑量組均肌肉注射地塞米松磷酸鈉2mg/kg，2次/周，共8周，造成骨質(zhì)疏松模型，其中陽性藥組和補(bǔ)骨脂各劑量組均同時給予相應(yīng)藥物，每日一次；空白對照組給予等體積溶劑(蒸餾水)，給藥結(jié)束后觀察補(bǔ)骨脂總香豆素對激素誘發(fā)的大鼠骨質(zhì)疏松模型中股骨骨密度、骨形態(tài)學(xué)計量、股骨微量元素含量、血清抗酒石酸鹽酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、血清鈣、血清磷、血清骨鈣素、降鈣素、睪酮等激素水平、尿羥脯氨酸/尿肌酐和脾臟、胸腺、腎臟、腎上腺等臟器系數(shù)的影響。
三、結(jié)果
1.補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型骨密度的影響，結(jié)果見表1。
表1 補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型骨密度(BMD)的影響(x±s)

注與空白對照組比較△△△P＜0.001；與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
由上表結(jié)果可見，模型對照組與空白對照組比較，股骨骨干、近心端、遠(yuǎn)心端骨密度值均明顯降低(P＜0.001)，說明造模成功。從股骨骨干骨密度來看，陽性藥天可片組及仙靈骨葆組與模型對照組比較，股骨骨干骨密度值均明顯升高(P＜0.05)；補(bǔ)骨脂總香豆素中、大劑量組與模型對照組比較，股骨骨干骨密度值明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)。從股骨近心端骨密度值來看，陽性藥天可片組及仙靈骨葆組與模型對照組比較，股骨近心端骨密度值均有明顯降低(P＜0.05)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型對照組比較，骨密度值有顯著升高(P＜0.05或P＜0.01)。從股骨遠(yuǎn)心端骨密度值來看，陽性藥天可片組與模型對照組比較，骨密度值明顯升高(P＜0.01)；補(bǔ)骨脂總香豆素中、大劑量組與模型對照組比較，遠(yuǎn)心端骨密度值有顯著升高(P＜0.01)。
2.補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型生化指標(biāo)的影響，結(jié)果見表2～5。
表2 補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型血清鈣及血清磷的影響(x±s)


注與空白對照組比較△△P＜0.05，△△△P＜0.001；與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
由上表結(jié)果可見，模型對照組與空白對照組比較，血鈣值明顯降低(P＜0.001)，證明造模成功；陽性藥天可片及仙靈骨葆組與模型對照組比較，血鈣值明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型對照組比較，血鈣值亦均明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)。
由上表結(jié)果可見，模型對照組與空白對照組比較，血磷值明顯升高(P＜0.01)；陽性藥天可片及仙靈骨葆組與模型對照組比較，血磷值明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)；補(bǔ)骨脂總香豆素中、大劑量組與模型對照組比較，血磷值亦均明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)。
表3補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型血清抗酒石酸鹽酸性磷酸酶(StrACP)及血清堿性磷酸酶(ALP)的影響(x±s)

注與空白對照組比較△△P＜0.01，△△△P＜0.001；與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。由上表結(jié)果可見，模型對照組與空白對照組比較，抗酒石酸鹽酸性磷酸酶及堿性磷酸酶值均明顯升高(P＜0.01或P＜0.001)；陽性藥天可片及仙靈骨葆組與模型對照組比較，抗酒石酸性鹽酸磷酸酶及堿性磷酸酶值均明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型對照組比較，抗酒石酸鹽酸性磷酸酶及堿性磷酸酶值亦均明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)。
表4補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型尿羥脯氨酸/尿肌酐的影響(x±s)

注與空白對照組比較△△△P＜0.001；與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
由上表結(jié)果可見，模型對照組與空白對照組比較，尿羥脯氨酸/尿肌酐值明顯升高(P＜0.001)；陽性藥天可片組及仙靈骨葆組與模型對照組比較，尿羥脯氨酸/尿肌酐值明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型對照組比較，尿羥脯氨酸/尿肌酐值均明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)。
表5補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型血清羥脯氨酸含量的影響(x±s)


注與空白對照組比較△△△P＜0.001；與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
由上表結(jié)果可見，模型對照組與空白對照組比較，血清羥脯胺酸值明顯升高(P＜0.001)；陽性藥天可片及仙靈骨葆組與模型對照組比較，血清羥脯胺酸值明顯降低(P＜0.01)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型對照組比較，血清羥脯氨酸值明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)。
3.補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型臟器系數(shù)的影響，結(jié)果見表6。
表6 補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型臟器系數(shù)的影響(x±s)

注與空白對照組比較△△P＜0.01；與模型對照組比較*P＜0.05。
由上表結(jié)果可見，模型對照組與空白對照組比較，陽性對照組、補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型對照組比較，脾、腎、胸腺系數(shù)均無明顯變化(P＞0.05)。
模型對照組與空白對照組比較，腎上腺系數(shù)明顯降低(P＜0.01)；陽性藥天可片、仙靈骨葆組與模型對照組比較，腎上腺系數(shù)明顯增加(P＜0.05)；補(bǔ)骨脂總香豆素中、大劑量組與模型對照組比較，腎上腺系數(shù)明顯增加(P＜0.05)。
4.補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型內(nèi)分泌的影響，結(jié)果見表7～9。
表7 補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型骨鈣素的影響(x±s)

注與空白對照組比較△△P＜0.01；與模型對照組比較**P＜0.01，***P＜0.001。
由上表結(jié)果可見，模型對照組與空白對照組比較，骨鈣素值明顯降低(P＜0.01)；陽性藥天可片及仙靈骨葆組與模型對照組比較，骨鈣素值均明顯升高(P＜0.01或P＜0.001)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型對照組比較，骨鈣素值均明顯升高(P＜0.01或P＜0.001)。
表8 補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型降鈣素的影響(x±s)

注與空白對照組比較△△△P＜0.001；與模型對照組比較**P＜0.01，***P＜0.01。從降鈣素的值來看，模型對照組與空白對照組比較，降鈣素值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有顯著性差異(P＜0.001)；陽性藥天可片及仙靈骨葆組與模型對照組比較，降鈣素值均明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.001)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型對照組比較，降鈣素值均明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有顯著性差異(P＜0.01)。
表9 補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型睪酮的影響(x±s)

注與空白對照組比較△△△P＜0.001；與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
從睪酮的值來看，模型對照組與空白對照組比較，睪酮含量明顯降低(P＜0.001)；陽性對照天可片、仙靈骨葆組與模型對照組比較，睪酮含量明顯上升(P＜0.01或P＜0.001)；補(bǔ)骨脂總香豆素各給藥組與模型對照組比較，睪酮含量明顯升高(P＜0.05、P＜0.01或P＜0.001)。
5.補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型骨微量元素的影響，結(jié)果見表10。
表10 補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型骨微量元素的影響(x±s)


注與空白對照組比較△P＜0.05；△△P＜0.01；與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；***P＜0.001。
鈣(％)為每100g骨重中含有的鈣的量，磷同鈣。
由上表結(jié)果可見，模型對照組與空白對照組比較，骨鈣、骨錳含量明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)；陽性藥天可片組與模型對照組比較，骨鈣明顯升高(P＜0.05)，而骨錳較模型對照組亦明顯降低(P＜0.05)；陽性仙靈骨葆組與模型對照組比較，骨鈣值明顯升高(P＜0.001)，而骨錳含量無明顯變化(P＞0.05)；補(bǔ)骨脂總香豆素中、大劑量組的骨鈣值與模型對照組比較明顯升高(P＜0.05)，小、大劑量組的骨錳值與模型對照組比較明顯降低(P＜0.05或P＜0.001)，補(bǔ)骨脂總香豆素對其它微量元素含量影響不明顯(P＞0.05)。
6.補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型骨形態(tài)計量學(xué)的影響，結(jié)果見表11。
表11 補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型骨形態(tài)計量學(xué)的影響(x±s)


注與空白對照組比較△△P＜0.01；△△△P＜0.001；與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；***P＜0.001。
骨靜力學(xué)參數(shù)TBV骨小梁體積，骨小梁體積占被測骨髓腔總體積的百分比；MTPT骨小梁平均寬度，骨小梁兩側(cè)面之間的平均距離(μm)；Nocy骨小梁空骨細(xì)胞陷窩比例，無骨細(xì)胞空陷窩占計數(shù)的骨細(xì)胞陷窩比例；CBV骨皮質(zhì)體積，骨皮質(zhì)總體積除掉血管、佛氏管等空腔的體積占骨皮質(zhì)總體積的比例；骨動力學(xué)參數(shù)MAR礦化沉積速率，兩條四環(huán)素標(biāo)記帶之間平均距離除以兩次標(biāo)記的間隔時間(μm/天)；MOSW平均類骨質(zhì)寬度，類骨質(zhì)兩側(cè)面之間的平均距離(μm)。
由上表結(jié)果可見，模型對照組與空白對照組比較，骨小梁體積、骨小梁平均寬度、骨小梁空骨細(xì)胞陷窩比例、骨皮質(zhì)體積、骨礦化沉積速率及平均類骨質(zhì)寬度均明顯降低(P＜0.05、P＜0.01或P＜0.001)；陽性天可片組與模型對照組比較，骨小梁體積、骨小梁平均寬度、骨小梁空骨細(xì)胞陷窩比例、骨皮質(zhì)體積及平均類骨質(zhì)寬度均明顯升高(P＜0.05或P＜0.001)，而骨礦化沉積速率無明顯變化(P＞0.05)；陽性藥仙骨靈葆組與模型對照組比較，骨小梁體積、骨小梁平均寬度、骨小梁空骨細(xì)胞陷窩比例、骨皮質(zhì)體積、骨礦化沉積速率及平均類骨質(zhì)寬度均明顯升高(P＜0.05、P＜0.01或P＜0.001)；補(bǔ)骨脂總香豆素各劑量組與模型對照組比較，骨小梁體積、骨皮質(zhì)體積、骨礦化沉積速率及平均類骨質(zhì)寬度均有不同程度的升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有顯著性差異(P＜0.05、P＜0.01或P＜0.001)，而骨小梁平均寬度及骨小梁空骨細(xì)胞陷窩比例兩指標(biāo)，補(bǔ)骨脂總香豆素只有中、大劑量組有顯著性升高(P＜0.05、P＜0.01或P＜0.001)。
以上實驗結(jié)果說明補(bǔ)骨脂總香豆素可升高激素致大鼠骨質(zhì)疏松模型的骨密度，改善股骨骨小梁的結(jié)構(gòu)，增加骨質(zhì)部分微量元素的含量，增加血鈣、骨鈣素、降鈣素及睪酮含量，降低血清抗酒石酸鹽酸性性磷酸酶、堿性磷酸酶、羥脯氨酸含量，降低尿羥脯氨酸/尿肌酐的比值，改善骨吸收和骨形成的動態(tài)平衡。
結(jié)論補(bǔ)骨脂總香豆素對激素致大鼠骨質(zhì)疏松有明顯的防治作用。
實驗二 補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型的影響一、材料受試藥物補(bǔ)骨脂總香豆素，采用本發(fā)明制備方法制備，性狀土黃色粉末，含量80％陽性對照藥己烯雌酚，北京益民制藥廠，片劑，0.5mg/片，批號030107，二、方法采用雌性大鼠摘除雙側(cè)卵巢，造成骨質(zhì)疏松模型，摘除卵巢8周后即可表現(xiàn)出骨質(zhì)疏松癥狀，灌胃給予補(bǔ)骨脂總香豆素5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg，每日1次，每周6次，共13周，陽性藥組給予乙烯雌酚22.5μg/kg，同時同實驗一夜設(shè)正常對照組，觀察補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型股骨骨密度、骨形態(tài)學(xué)計量、股骨微量元素含量、血清抗酒石酸鹽酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、血清鈣、血清磷、血清鈣調(diào)節(jié)相關(guān)激素水平和臟器系數(shù)的影響。
三、結(jié)果1.補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型骨密度的影響，結(jié)果見表12。
表12 補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型骨密度的影響(x±s)


注與正常組比較△△△P＜0.001；與模型組比較*P＜0.05，***P＜0.001。
由上表結(jié)果可見，模型組與正常組比較，股骨骨干骨密度值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有極顯著性(P＜0.001)；陽性組與模型組比較，股骨骨干骨密度值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有極顯著性(P＜0.001)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型組比較，股骨骨干骨密度值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有極顯著性(P＜0.001)。
從股骨頭骨密度值來看，模型組與正常組比較，股骨頭骨密度值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有極顯著性(P＜0.001)；陽性組與模型組比較，股骨頭骨密度值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有極顯著性(P＜0.001)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型組比較，股骨頭骨密度值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.01，P＜0.001)。
從膝蓋骨骨密度值來看，模型組與正常組比較，膝蓋骨骨密度值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有極顯著性(P＜0.001)；陽性組與模型組比較，膝蓋骨骨密度值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有極顯著性(P＜0.001)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型組比較，膝蓋骨骨密度值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.001)。
2.補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型生化指標(biāo)的影響，結(jié)果見表13～14。
表13 補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型血清鈣及血清磷的影響(x±s)


注與正常組比較△P＜0.05；△△△P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
由上表結(jié)果可見，模型組與正常組比較，血鈣值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05)；陽性組與模型組比較，血鈣值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型組比較，血鈣值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理中、大劑量組差異有顯著性(P＜0.05或P＜0.001)。
由上表結(jié)果可見，模型組與正常組比較，血磷值明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有極顯著性(P＜0.001)；陽性組與模型組比較，血磷值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有極顯著性(P＜0.001)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型組比較，血磷值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.01或P＜0.001)。
表14 補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型血清抗酒石酸鹽酸性磷酸酶(StrACP)及血清堿性磷酸酶(ALP)的影響(x±s)

注與正常組比較△△△P＜0.001；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
由上表結(jié)果可見，模型組與正常組比較，抗酒石酸鹽酸性磷酸酶及堿性磷酸酶值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.001)；陽性組與模型組比較，抗酒石酸鹽酸性磷酸酶及堿性磷酸酶值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有極顯著性(P＜0.001或P＜0.01)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型組比較，抗酒石酸鹽酸性磷酸酶及堿性磷酸酶值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05或P＜0.001)。
3.補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型內(nèi)分泌的影響，結(jié)果見表15。
表15 補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型內(nèi)分泌的影響(x±s)

注與正常組比較△P＜0.05；△△△P＜0.001；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
由上表結(jié)果可見，模型組與正常組比較，血骨鈣素、降鈣素及雌二醇值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.001)；陽性組與模型組比較，以上各指標(biāo)明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)；補(bǔ)骨脂總香豆素各劑量組與模型組比較，以上各指標(biāo)明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理大劑量組，及中劑量的降鈣素差異有顯著性(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)。
4.補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型臟器系數(shù)的影響，結(jié)果見表16。
表16 補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型臟器系數(shù)的影響(％；x±s)


注與正常組比較△△P＜0.01，△△△P＜0.001；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
由上表結(jié)果可見，脾、腎、胸腺系數(shù)各組之間比較均無明顯變化(P＞0.05)。模型組與正常組比較，腎上腺、子宮系數(shù)明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.01或P＜0.001)；陽性組與模型組比較，腎上腺、子宮系數(shù)明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.01或P＜0.001)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型組比較，腎上腺、子宮系數(shù)明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)。
5.補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型骨微量元素的影響，結(jié)果見表17。
表17 補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型骨微量元素的影響(x±s)

注與正常組比較△P＜0.05；與模型組比較*P＜0.05，***P＜0.001；
鈣、磷、鎂(％)值的含義每100g骨含有的鈣、磷、鎂量。
由上表結(jié)果可見，模型組與正常組比較，骨鈣、骨磷及骨鎂含量明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05)；陽性組與模型組比較，骨鈣、骨磷及骨鎂含量明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型組比較，骨鈣、骨磷及骨鎂含量明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)。而骨錳、骨鋅及骨銅含量各組之間比較均無明顯變化(P＞0.05)。
6.補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型骨形態(tài)計量學(xué)的影響，見表18。
表18 補(bǔ)骨脂總香豆素對去勢大鼠骨質(zhì)疏松模型骨形態(tài)計量學(xué)的影響(x±s)

注與正常組比較△△△P＜0.001；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
由上表結(jié)果可見，模型組與正常組比較，骨小梁體積、骨小梁平均寬度、骨皮質(zhì)體積及平均類骨質(zhì)寬度均明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有極顯著性(P＜0.001)；陽性組與模型組比較，以上各指標(biāo)均明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有極顯著性(P＜0.001)；補(bǔ)骨脂總香豆素各劑量組與模型組比較，上訴各指標(biāo)均有不同程度的升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)。
另外，模型組與正常組比較，骨小梁空骨細(xì)胞陷窩比例明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有極顯著性(P＜0.001)；陽性組與模型組比較，骨小梁空骨細(xì)胞陷窩比例明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有極顯著性(P＜0.001)；補(bǔ)骨脂總香豆素小、中、大劑量組與模型組比較，骨小梁空骨細(xì)胞陷窩比例明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理差異有顯著性(P＜0.05，P＜0.01或P＜0.001)。
上述實驗結(jié)果說明補(bǔ)骨脂總香豆素能升高去勢大鼠的骨密度及改善股骨骨小梁結(jié)構(gòu)，增加骨質(zhì)部分微量元素的含量，調(diào)整激素水平，改善反應(yīng)骨吸收及骨形成水平的血清生化指標(biāo)。
結(jié)論補(bǔ)骨脂總香豆素對卵巢去勢致大鼠骨質(zhì)疏松有明顯的治療作用。
具體實施例用以下的實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明并不限于下列實施例包含的內(nèi)容。補(bǔ)骨脂總香豆素的制備方法取補(bǔ)骨脂藥材(藥材中補(bǔ)骨脂總香豆素平均含量2.07％)2000g，粉碎成過10目篩的藥粉，70％乙醇浸泡24小時后滲漉提取，將滲漉液在60℃減壓濃縮至相對密度為1.10～1.15(50℃)的濃縮液，加1倍藥材重量體積即2000ml無水乙醇溶解，離心除雜后得上清液，向上清液加入D-101型大孔吸附樹脂，攪拌均勻，70℃水浴揮干溶劑，干法上D-101大孔吸附樹脂柱，分別用蒸餾水和10％乙醇分別除雜，最后用50％乙醇洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮(60℃，-0.09MPa)，真空干燥(60℃，-0.09MPa)，粉碎，得補(bǔ)骨脂總香豆素樣品43.8g，其中補(bǔ)骨脂總香豆素的含量為71％，補(bǔ)骨脂總香豆素的轉(zhuǎn)移率是75.1％。
補(bǔ)骨脂總香豆素的制備方法取補(bǔ)骨脂藥材(藥材中補(bǔ)骨脂總香豆素平均含量2.07％)2000g，粉碎成過40目篩的藥粉，95％乙醇浸泡24小時后滲漉提取，將滲漉液在60℃減壓濃縮至相對密度為1.10～1.15(50℃)的濃縮液，加3倍藥材重量體積即6000ml乙酸乙酯溶解，離心除雜后得上清液，向上清液加入ZTC型大孔吸附樹脂，攪拌均勻，70℃水浴揮干溶劑，干法上ZTC型大孔吸附樹脂柱，用蒸餾水和35％乙醇分別除雜，最后用60％乙醇洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮(60℃，-0.09MPa)，真空干燥(60℃，-0.09MPa)，粉碎，得補(bǔ)骨脂總香豆素樣品48.78g，其中補(bǔ)骨脂總香豆素的含量為82.0％，補(bǔ)骨脂總香豆素的轉(zhuǎn)移率是74.07％。
補(bǔ)骨脂總香豆素的制備方法取補(bǔ)骨脂藥材(藥材中補(bǔ)骨脂總香豆素平均含量2.07％)2000g，粉碎成過40目篩的藥粉，30％乙醇回流提取，將回流提取液在60℃減壓濃縮至相對密度為1.10～1.15(50℃)的濃縮液，加2倍藥材重量體積即4000ml丙酮溶解，離心除雜后得上清液，向上清液加入AB-8型大孔吸附樹脂，攪拌均勻，70℃水浴揮干溶劑，干法上AB-8型大孔吸附樹脂柱，用蒸餾水和30％乙醇分別除雜，最后用70％乙醇洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮(60℃，-0.09MPa)，真空干燥(60℃，-0.09MPa)，粉碎，得補(bǔ)骨脂總香豆素樣品52.74g，其中補(bǔ)骨脂總香豆素的含量為68.8％，補(bǔ)骨脂總香豆素的轉(zhuǎn)移率是67.2％。
補(bǔ)骨脂總香豆素的制備方法取補(bǔ)骨脂藥材(藥材中補(bǔ)骨脂總香豆素平均含量2.07％)2000g，粉碎成過40目篩的藥粉，80％乙醇浸泡20小時后滲漉提取，將滲漉液在60℃減壓濃縮至相對密度為1.10～1.15(50℃)的濃縮液，加2倍藥材重量體積即3000ml正丁醇溶解，離心除雜后得上清液，向上清液加入D-101型大孔吸附樹脂，攪拌均勻，70℃水浴揮干溶劑，干法上D-101型大孔吸附樹脂柱，用蒸餾水和20％乙醇分別除雜，最后用80％乙醇洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮(60℃，-0.09MPa)，真空干燥(60℃，-0.09MPa)，粉碎，得補(bǔ)骨脂總香豆素樣品55.92g，其中補(bǔ)骨脂總香豆素的含量為73.2％，補(bǔ)骨脂總香豆素的轉(zhuǎn)移率是75.8％。
補(bǔ)骨脂總香豆素的制備方法取補(bǔ)骨脂藥材(藥材中補(bǔ)骨脂總香豆素平均含量2.07％)2000g，粉碎成過40目篩的藥粉，50％乙醇回流提取，將回流提取液在60℃減壓濃縮至相對密度為1.10～1.15(50℃)的濃縮液，加2倍藥材重量體積即2000ml無水乙醇溶解，離心除雜后得上清液，向上清液加入ZTC-1型大孔吸附樹脂，攪拌均勻，70℃水浴揮干溶劑，干法上ZTC-1型大孔吸附樹脂柱，用蒸餾水和20％乙醇分別除雜，最后用70％乙醇洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮(60℃，-0.09MPa)，真空干燥(60℃，-0.09MPa)，粉碎，得補(bǔ)骨脂總香豆素樣品55.92g，其中補(bǔ)骨脂總香豆素的含量為73.2％，補(bǔ)骨脂總香豆素的轉(zhuǎn)移率是82.8％。
本發(fā)明優(yōu)選劑型膠囊劑的制備方法處方取采用上述實施例制備所得的樣品補(bǔ)骨脂總香豆素100克，共制成1000粒。
制法取補(bǔ)骨脂總香豆素100g，粉碎過80目篩，加入50g藥用淀粉，攪拌使混合均勻，噴入10％的聚維酮K30稀乙醇溶液，制軟材，過40目篩制粒，60℃干燥，分裝于3#膠囊中，質(zhì)檢，包裝，即得。每粒膠囊中含有補(bǔ)骨脂總香豆素為100mg。
本發(fā)明優(yōu)選劑型補(bǔ)骨脂總香豆素片劑的制備方法處方取采用上述實施例制備所得的樣品補(bǔ)骨脂總香豆素100克，共制成1000片。
制法取上述干燥(60℃)處理過的補(bǔ)骨脂總香豆素100g，研磨粉碎，過80目篩。加入過80目篩的淀粉98g及硬脂酸鎂2g，混合均勻，干燥后壓成1000片，每片含補(bǔ)骨脂總香豆素為100mg。
本發(fā)明優(yōu)選劑型補(bǔ)骨脂總香豆素凍干粉針劑型的制備方法處方取采用上述實施例1制備所得的樣品補(bǔ)骨脂總香豆素100克，共制成1000支。其中補(bǔ)骨脂總香豆素以補(bǔ)骨脂計含量為82％。
制法取上述補(bǔ)骨脂總香豆素100g，加入注射用水約2800mL，65℃水浴使溶解，加入總配制量2.0‰活性炭(6.0g)，攪拌半小時，過濾，于濾器上加水至3000mL，繼以0.45μm、0.22μm微孔濾膜分級過濾，濾液以每瓶3mL定量分裝于西林瓶中(3mL/支)，冷凍干燥，回充高純度氮氣，加塞，軋蓋，包裝，即得。
權(quán)利要求
1.一種治療骨質(zhì)疏松的中藥組合物，其特征在于其主要活性成分為補(bǔ)骨脂總香豆素，是通過以下方法得到(1)提取取補(bǔ)骨脂藥材，粉碎后用含水低級醇提取，將提取液減壓濃縮，濃縮后的浸膏再用有機(jī)溶劑充分溶解，離心，得上清液；(2)除雜將上清液加入樹脂，攪拌均勻，揮干溶劑，干法加載于樹脂柱，先水洗除雜，再用10％～35％乙醇洗脫除雜；(3)洗脫用大于或者等于50％的乙醇洗脫樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，粉碎后得補(bǔ)骨脂總香豆素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于提取采用的有機(jī)溶劑可以是甲醇、乙醇、正丁醇、異丙醇中的任意一種，醇的濃度為X，0＜X≤95％。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的中藥組合物，其特征在于提取采用的醇的濃度為X，30≤X≤80％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于提取方法可以是滲漉或者回流提取。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于提取方法中溶解浸膏采用的有機(jī)溶劑可以是甲醇、乙醇、正丁醇，異丁醇、丙酮或乙酸乙酯中的任意一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于純化過程中所用樹脂可以為苯乙烯、二乙烯苯、丙烯酸酯或丙烯腈中的任意一種或幾種為骨架材料的極性、弱極性或非極性樹脂。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的中藥組合物，其特征在于所用的樹脂為D-101型、ZTC型、AB-8型樹脂。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于補(bǔ)骨脂總香豆素中主要包括兩種化合物，分別為補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于補(bǔ)骨脂總香豆素的含量以補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)計在50％以上。
10.一種治療骨質(zhì)疏松的中藥制劑，其特征在于其中含有權(quán)利要求1～9項中任一項權(quán)利要求所述的中藥組合物和藥學(xué)上可接受的輔料組分。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的中藥制劑，其特征在于該中藥制劑可以是口服制劑、注射劑或局部給藥制劑，其中口服劑包括膠囊劑、丸劑、片劑、顆粒劑，注射劑包括注射液或凍干粉針劑，局部給藥制劑包括軟膏劑、貼劑、噴霧劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的中藥制劑，其特征在于該制劑可以通過口服、粘膜、經(jīng)皮、肌肉、皮下、靜脈途徑給藥。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的中藥制劑，其特征在于口服制劑中補(bǔ)骨脂總香豆素的含量以補(bǔ)骨脂素(C11H6O3)計在50％以上。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的中藥制劑，其特征在于注射劑中補(bǔ)骨脂總香豆素的含量在80％以上。
15.權(quán)利要求1～14項任一權(quán)利要求所述的中藥組合物及其中藥制劑在制備治療骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥新藥研究開發(fā)領(lǐng)域，具體涉及一種治療骨質(zhì)疏松的中藥組合物，其活性成分為從我國傳統(tǒng)中藥補(bǔ)骨脂中提取的有效部位補(bǔ)骨脂總香豆素。本發(fā)明還提供了該中藥組合物的制備方法及其相應(yīng)的藥物劑型。本發(fā)明所述的補(bǔ)骨脂總香豆素首次用于骨質(zhì)疏松的治療，治療效果顯著。
文檔編號A61K9/16GK101057885SQ20061007630
公開日2007年10月24日 申請日期2006年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月20日
發(fā)明者周亞偉 申請人:周亞偉