專利名稱：胎兒透明標(biāo)本的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種人體標(biāo)本的透明化方法，尤其涉及一種胎兒透明標(biāo)本的制作方法。
背景技術(shù)：
制作透明標(biāo)本是利用一些化學(xué)藥品或物理方法處理機(jī)體組織，使其折光率與透明劑或周圍介質(zhì)相近，以便能透過肌肉組織清晰地觀察胎兒的骨骼生長發(fā)育變化。此方法可顯示一般解剖方法難以觀察清晰的結(jié)構(gòu)，如未完全骨化的胎兒骨等，這種方法對軟組織的損傷達(dá)到最小程度。但目前，胎兒標(biāo)本在制作時由于其骨骼尚未完全發(fā)育，因此成人標(biāo)本的透明化方法不能完全適用于胎兒的標(biāo)本透明制作，且其制作時間長，胎兒透明標(biāo)本效果也不好，無法滿足法醫(yī)、醫(yī)學(xué)及科研工作的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了解決目前胎兒標(biāo)本透明化效果不好，影響其應(yīng)用等問題，提供一種具有方法簡便，制作時間短，透明化效果好，能很好的滿足醫(yī)學(xué)等需要的胎兒透明標(biāo)本的制作方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案一種胎兒透明標(biāo)本的制作方法，它的方法為，(1)收集新鮮胚胎標(biāo)本，即收集脫離母體死亡時間在24小時以內(nèi)正常發(fā)育的胚胎；(2)標(biāo)本固定，將收集到的新鮮胚胎標(biāo)本清洗整理測量頂臀長度即坐高后，分組放入含75％乙醇固定液中固定2-7天；再放入含95％乙醇固定液中3-25天；(3)漂白，將固定好的標(biāo)本放入漂白液中漂白，根據(jù)標(biāo)本大小時間為12小時-10天，漂白后進(jìn)行水洗；(4)脫水，將上述漂白后的標(biāo)本放入95％乙醇液中脫水2-10天；(5)染色，按重量份計，將1-4份氫氧化鉀、0.0002-0.0004份茜素紅與100份水混合，形成的水溶液，將標(biāo)本放入其中進(jìn)行透明染色，染色時應(yīng)以骨著色，軟組織不著色為標(biāo)準(zhǔn)；(6)甘油脫水透明，將染色后的標(biāo)本依次放入不同比例的水與甘油混合液中進(jìn)行脫水透明，最終過渡到純甘油液中保存，完成標(biāo)本的透明制作。
所述步驟(2)中，標(biāo)本分組時按胎齡進(jìn)行，胎齡按克里斯和撕凱姆的計算圖表中的坐高CR計算出，每兩周為一組，共分17組，計自5-38周。
所述步驟(3)中，漂白液組成為，按重量份計，95％乙醇90份、30％過氧化氫1份、蒸餾水9份；漂白時間為，5-8周標(biāo)本為12小時；9-12周標(biāo)本為1-4天；13-16周標(biāo)本為2-4天；17-24周標(biāo)本為2-7天；25-38周標(biāo)本為3-10天。
所述步驟(5)中，染色時染液濃度及染色時間為，5-8周胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，在由1份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色24小時；9-12周胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，在由2份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色48小時；13-16周胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，在由4份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色3-4天；17-24周胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，在由4份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色3-4天；25-38周胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，在由4份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色4-5天。
所述步驟(5)中，對大于16周的標(biāo)本可先放入濃度為6％的氫氧化鉀水溶液中2小時加速透明，在胎兒臍帶透明后再將其放入按重量份計，由4份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液進(jìn)行骨染色。
所述步驟(5)中，在染色中，對過度染色的標(biāo)本進(jìn)行分色，其方法是將標(biāo)本放入按重量份計，由濃度為1％的氫氧化鉀5份與甘油1份組成的溶液中透明又分色，時間為2-15天。
所述步驟(6)中，水與甘油的比例按重量份計，分別為2∶1；1∶1；1∶2；最后為純甘油；標(biāo)本在各不同濃度的甘油液中透明時間依胎兒長度不同為3-25天。
所述步驟(6)中，在甘油脫水透明時，將裝有標(biāo)本的容器放在陽光充足處照射。
本發(fā)明的方法，透明效果好，易于觀察胎兒骨骼發(fā)育情況，比使用的X線攝片觀察效果更加準(zhǔn)確可靠。
本發(fā)明的有益效果是方法簡便，透明效果好，可使胎兒骨骼的骨化部分清晰顯示，能滿足醫(yī)學(xué)、法醫(yī)學(xué)及科研工作的要求。


圖1為本發(fā)明的制作工藝流程與時間表。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖與實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
本發(fā)明的方法為(1)收集新鮮胚胎標(biāo)本，即收集脫離母體死亡時間在24小時以內(nèi)正常發(fā)育的胚胎標(biāo)本。
(2)對所收集的標(biāo)本進(jìn)行整理、測量、確定胎齡并分組將其放入含75％乙醇固定液內(nèi)保存。具體方法為胎齡按克里斯和撕凱姆的計算圖表中坐高(CR)計算出。每兩周為一組，共分17組，計自5-38周；在測量胚胎坐高的同時標(biāo)本固定將收集到的新鮮胚胎標(biāo)本清洗整理測量頂臀長度(即坐高)分組后放入含75％乙醇固定液中固定一周。再放入含95％乙醇固定液中3-20天(依胎體長度而定)；為便于觀察，標(biāo)本大于60mm時應(yīng)去皮、去內(nèi)臟、去腦。固定液可選乙醇或甲醛，但以乙醇固定后制作的標(biāo)本透明效果好，使用甲醛固定的標(biāo)本，透明后見在骨骼兩端有黑色沉淀。
(3)漂白將固定好的標(biāo)本放入漂白液中漂白。
漂白液組成為，按重量份計，95％乙醇90份、30％過氧化氫1份、蒸餾水9份；漂白時間為，5-8周標(biāo)本為12小時；9-12周標(biāo)本為1-4天；13-16周標(biāo)本為2-4天；17-24周標(biāo)本為2-7天；25-38周標(biāo)本為3-10天。如圖1所示。
(4)脫水將上述漂白后的標(biāo)本放入含95％乙醇液中脫水2-10天。脫水越徹底，標(biāo)本透明效果越好。
(5)染色按重量份計，由1-4份的氫氧化鉀與0.0002-0.0004份茜素紅、100份水組成水溶液，將標(biāo)本放在其中進(jìn)行透明染色，染色時應(yīng)以骨著色，軟組織不著色為標(biāo)準(zhǔn)。染液中氫氧化鉀濃度應(yīng)根據(jù)標(biāo)本坐高長度的不斷變化而調(diào)整才能得到理想的透明染色效果。
具體的染液濃度與染色時間的關(guān)系如下如圖1所示5-35mm(5-8周)胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，在由1份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色24小時；36-80mm(9-12周)胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，由2份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色48小時；81-140mm(13-16周)胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，在由4份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色34天。
141-210mm(17-24周)胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，在由4份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色3-4天。
211-360mm(25-38周)胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，在由4份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色4-5天。
為保證染色效果和染色速度，應(yīng)經(jīng)常更換染液，新染液可使標(biāo)本骨染色速度提前10-24小時。
為縮短染色時間增加透明效果對胎體長度大于110mm胚胎(大于16周者)可先放入濃度為6％的氫氧化鉀水溶液2小時加速透明，觀察胎兒齊帶透明后再將其放入按重量份計，由4份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水組成的水溶液進(jìn)行骨染色。
在染色中，胎兒軟組織常被染上顏色，影響標(biāo)本的觀察，此時可對過度染色的標(biāo)本進(jìn)行分色，其方法是將標(biāo)本放入按重量份計含1％氫氧化鉀5份與甘油1份的溶液中既透明又分色。分色時間以胎題長度不同而不同，為2-15天，具體見圖1所示。
(6)甘油脫水透明將染色后的標(biāo)本放入不同比例的水、甘油混合液中進(jìn)行脫水透明。最終過渡到純甘油液中保存，完成標(biāo)本的透明制作。所用水與甘油的比例按重量份計為2∶1；1∶1；1∶2；最后為純甘油。標(biāo)本在各不同濃度的甘油液中透明時間依胎兒長度不同為3-25天。其中，水與甘油的比例按重量份計為2∶1時，透明時間為4-20天；水與甘油的比例按重量份計為1∶1時，透明時間為3-21天；水與甘油的比例按重量份計為1∶2時，透明時間為6-20天；純甘油時，透明時間為25天。如圖1所示。
因甘油穿透力較弱，在標(biāo)本放入甘油透明過程中，標(biāo)本過大時，可將裝有標(biāo)本的容器放在陽光充足處照射，此法可加速甘油透明速度，得到滿意的透明效果。此項(xiàng)改進(jìn)可使甘油透明的速度提高3-5倍。
權(quán)利要求
1.一種胎兒透明標(biāo)本的制作方法，其特征是它的方法為，(1)收集新鮮胚胎標(biāo)本，即收集脫離母體死亡時間在24小時以內(nèi)正常發(fā)育的胚胎；(2)標(biāo)本固定，將收集到的新鮮胚胎標(biāo)本清洗整理測量頂臀長度即坐高后，分組放入含75％乙醇固定液中固定2-7天；再放入含95％乙醇固定液中3-25天；(3)漂白，將固定好的標(biāo)本放入漂白液中漂白，根據(jù)標(biāo)本大小時間為12小時-10天，漂白后進(jìn)行水洗；(4)脫水，將上述漂白后的標(biāo)本放入95％乙醇液中脫水2-10天；(5)染色，按重量份計，將1-4份氫氧化鉀、0.0002-0.0004份茜素紅與100份水混合，形成的水溶液，將標(biāo)本放入其中進(jìn)行透明染色，染色時應(yīng)以骨著色，軟組織不著色為標(biāo)準(zhǔn)；(6)甘油脫水透明，將染色后的標(biāo)本依次放入不同比例的水與甘油混合液中進(jìn)行脫水透明，最終過渡到純甘油液中保存，完成標(biāo)本的透明制作。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胎兒透明標(biāo)本的制作方法，其特征是所述步驟(2)中，標(biāo)本分組時按胎齡進(jìn)行，胎齡按克里斯和撕凱姆的計算圖表中的坐高CR計算出，每兩周為一組，共分17組，計自5-38周。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的胎兒透明標(biāo)本的制作方法，其特征是所述步驟(3)中，漂白液組成為，按重量份計，95％乙醇90份、30％過氧化氫1份、蒸餾水9份；漂白時間為，5-8周標(biāo)本為12小時；9-12周標(biāo)本為1-4天；13-16周標(biāo)本為2-4天；17-24周標(biāo)本為2-7天；25-38周標(biāo)本為3-10天。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的胎兒透明標(biāo)本的制作方法，其特征是所述步驟(5)中，染色時染液濃度及染色時間為，5-8周胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，在由1份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色24小時；9-12周胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，在由2份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色48小時；13-16周胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，在由4份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色3-4天；17-24周胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，在由4份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色3-4天；25-38周胚胎標(biāo)本染液濃度及染色時間為按重量份計，在由4份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液中染色4-5天。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的胎兒透明標(biāo)本的制作方法，其特征是所述步驟(5)中，對大于16周的標(biāo)本可先放入濃度為6％的氫氧化鉀水溶液中2小時加速透明，在胎兒臍帶透明后再將其放入按重量份計，由4份氫氧化鉀與0.0003份茜素紅、100份水形成的水溶液進(jìn)行骨染色。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的胎兒透明標(biāo)本的制作方法，其特征是所述步驟(5)中，在染色中，對過度染色的標(biāo)本進(jìn)行分色，其方法是將標(biāo)本放入按重量份計，由濃度為1％的氫氧化鉀5份與甘油1份組成的溶液中透明又分色，時間為2-15天。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胎兒透明標(biāo)本的制作方法，其特征是所述步驟(6)中，水與甘油的比例按重量份計，分別為2∶1；1∶1；1∶2；最后為純甘油；標(biāo)本在各不同濃度的甘油液中透明時間依胎兒長度不同為3-25天。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的胎兒透明標(biāo)本的制作方法，其特征是所述步驟(6)中，在甘油脫水透明時，將裝有標(biāo)本的容器放在陽光充足處照射。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種胎兒透明標(biāo)本的制作方法。它解決了目前胎兒標(biāo)本透明化效果不好，影響其應(yīng)用等問題，具有方法簡便，制作時間短，透明化效果好，能很好的滿足醫(yī)學(xué)等需要的優(yōu)點(diǎn)，其方法為一種胎兒透明標(biāo)本的制作方法，它的方法為，(1)收集新鮮胚胎標(biāo)本；(2)標(biāo)本固定；(3)漂白；(4)脫水；(5)染色；(6)甘油脫水透明，完成標(biāo)本的透明制作。
文檔編號A61B19/00GK1961816SQ20061007019
公開日2007年5月16日 申請日期2006年11月24日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月24日
發(fā)明者張維建 申請人:山東建筑大學(xué)