專(zhuān)利名稱(chēng)：20(S)-人參皂苷Rh2在制備降低阿霉素所致心臟毒性的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及20 (S)-人參皂苷Rh2和含有20 (S)-人參皂苷Rh2的提取物在制備降低阿 霉素所致心臟毒性的藥物中的應(yīng)用。 背彔技術(shù)阿霉素(adriamycin,ADR)屬于葸環(huán)類(lèi)抗生素，是一種髙效的廣譜抗腫瘤抗生素，臨床上 廣泛用于治療多種惡性腫瘤，心臟毒性是阿霉素臨床應(yīng)用的主要不良反應(yīng)之一,因出現(xiàn)劑量依 賴(lài)的不可逆轉(zhuǎn)的心肌病，充血性心力衰竭(CHF)，而使其應(yīng)用受到限制。人參本為調(diào)節(jié)機(jī)體免 疫能力增補(bǔ)元?dú)獾膫鹘y(tǒng)中藥，從人參當(dāng)中提取的20 (S)-人參皂苷他2長(zhǎng)期以來(lái)被認(rèn)為具有 增強(qiáng)癌癥患者免疫能力，同時(shí)抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。日本專(zhuān)利昭58-57399公開(kāi)了人參皂苷 Rh2具有治療腫瘤活性。小田島肅夫進(jìn)行了人參皂苷Rh2體外抗癌活性研究，證明其對(duì)肝癌、 黑色素瘤B16、宮頸癌及肉瘤S180等癌細(xì)胞的增殖有顯著的特異性的抑制作用，并提出抗癌 作用機(jī)理，認(rèn)為癌細(xì)胞在其增殖過(guò)程中，經(jīng)人參皂苷Rh2作用，使癌細(xì)胞停止在--定的增殖 期，并促使其逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞，稱(chēng)此為再分化(Reverse transformation)的誘導(dǎo)作用。本發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量的試驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)20 (S)-人參皂苷Rh2和含有20 (S)-人參皂苷 Rh2的提取物具有顯著的對(duì)阿霉素所致的心臟損傷的保護(hù)作用，是一個(gè)非常理想的降低阿霉 素化療毒性的藥物。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了 20 (S)-人參皂苷他2在降低阿霉素所致心臟毒性的藥物中的應(yīng)用。 本發(fā)明提供了含有20 (S)-人參皂苷Rh2的提取物在降低阿霉素所致心臟毒性的藥物中的應(yīng)用。
具體實(shí)施方式
制備例1:含20 (S)-人參皂苷他2的提取物的制備，以人參皂苷、西洋參皂苷、三七皂苷或上述3種植物藥的莖葉總皂苷為原料，優(yōu)選以西 洋參皂苷原料，在反應(yīng)釜中加入多元酵，多元醇可以是甘油或1， 2-丙二酵，加熱，加入上 述皂苷，在攪拌條件下加入強(qiáng)堿。油浴電加熱，當(dāng)溫度升至195 2051C時(shí)，停止加熱，保持 20 30分鐘，然后反應(yīng)物加入到5 30倍量水中，邊加邊攪拌，皂苷水解產(chǎn)物形成灰白色沉 淀析出，靜置，離心或過(guò)濾，干燥得堿降解產(chǎn)物。將堿降解產(chǎn)物用無(wú)水乙醇甲醇或含水乙酵，
也可用甲醉或含水甲醉加熱攪拌溶解，加入硅膠、氧化鋁、硅藻土、活性炭中的任何一種或 其混合物拌樣，將拌好的樣干燥，供層析分離用。將硅膠、氧化鋁、硅藻土、活性炭任何一 種固定項(xiàng)加到層析柱中，其用量為堿降解產(chǎn)物的10 40倍。拌好的樣裝在層析柱的上部，用 含C1 C5的酯類(lèi)、醇類(lèi)、鹵素類(lèi)有機(jī)溶劑或其混和溶劑洗脫，如用氯仿甲醇(9: 1)洗 脫劑洗脫，收集富含20 (S)-人參皂苷Rh2部分，回收溶劑，再經(jīng)過(guò)醇類(lèi)溶劑結(jié)晶，即得， 含20 (S)-人參皂苷Rh2部分85.6%。。 制備例2:含加(S)-人參皂苷Rh2提取物的制備稱(chēng)取甘油50kg，加到反應(yīng)釜中，開(kāi)攪拌，稱(chēng)取西洋參莖葉總皂苷5kg，氣氧化鈉5.5kg, 依次加入反應(yīng)釜中，升溫速度控制約10 15"/10min,當(dāng)溫度升至195 2051C時(shí)，停止加熱， 保持20 30分鐘，然后反應(yīng)物加入到15倍量水中，邊加邊攪拌，皂苷水解產(chǎn)物形成灰白色 沉淀析出，靜置，離心，用去離子水洗至濾液不顯堿性，測(cè)提取物pH值在6.5，取出，干燥， 得堿降解產(chǎn)物3. 35kg。取堿降解產(chǎn)物0.50kg,用無(wú)水乙醇加熱溶解，加入硅膠粉，混合拌樣， 將拌好的樣干燥，粉碎，過(guò)篩，供層析分離用。稱(chēng)取200 300行層析硅膠12kg,加到層析 柱中，拌好的樣裝在層析柱的上部，用氯仿甲醇(9: 1)洗脫劑洗脫，收集富含20 (S)-人參皂苷Rh2部分，回收溶劑，獲得物質(zhì)A。高效液相色譜測(cè)定物質(zhì)A中20 (S)-人參皂苷 Rh2含量為51.2*。制備例3:含20 (S)-人參皂苷助2提取物的制備將制備例2中的物質(zhì)A用乙醇結(jié)晶，獲得物質(zhì)B。髙效液相色譜測(cè)定物質(zhì)B中20 (S)-人參皂苷Rh2含量81.3%。 制備例4:加(S)-人參皂苷11112單體的制備將制備例3中的物質(zhì)B用乙醉重結(jié)晶，獲得物質(zhì)C。髙效液相色譜測(cè)定物質(zhì)C中20(S) -人參皂苷Rh2含量97.5%,試驗(yàn)例一、20 (S)-人參皂苷Rh2拮抗鹽酸多柔比星所致荷癍小鼠心臟毒性的實(shí)驗(yàn)1.藥物及試劑20 (S)-人參皂苷1 12原料粉末，按制備例4制備。臨用前以0.5%的羧甲 基纖維素鈉配成相應(yīng)濃度的混懸液。注射用鹽酸多柔比星，浙江海正藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品，規(guī)格10mg/支，批號(hào)050905。 天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒批號(hào)020241 超氧化物歧化酶試劑盒批號(hào)20060418 血清肌酸激嗨試劑盒 批號(hào)20060421脂質(zhì)過(guò)氧化物試劑盒 批號(hào)20060419
考馬斯亮蘭蛋白測(cè)定試劑盒批號(hào)20050401 以上試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。2. 動(dòng)物昆明種小鼠，雌性，體重18 22g,山東省天然藥物工程技術(shù)研究中心動(dòng)物中心提 供，許可證號(hào)SYXK (魯)20030020。3. 瘤株小鼠U14宮頸癌瘤株，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京藥物研究所藥理室引進(jìn)。4. 儀器酶標(biāo)儀(Synergy HT, BIO-TEK,美國(guó))。FX-2111單道心電圖機(jī)(北京福田電子醫(yī) 療儀器有限公司)。試驗(yàn)方法小鼠50只，接種U14宮頸癌細(xì)胞后次日隨機(jī)分組給藥，分別為模型組、鹽酸多柔比星組、 20 (S)-人參皂苷Rh2高、中、低劑量與鹽酸多柔比星合用組，每組10只。除模型組外，分 組后各組腹腔注射給予鹽酸多柔比星2 mg/kg，每?jī)扇战o予一次，共給藥4次。20 (S)-人 參皂苷Rh2各組于荷瘤后次日始每日灌胃給予20 (S)-人參皂苷Rh2混懸液，連續(xù)給藥7天。 末次給藥24小時(shí)，于安靜環(huán)境下描記各組小鼠心電圖(II導(dǎo)聯(lián))，計(jì)算小鼠心率及QRS復(fù)合 波和Q"T間期。隨后各組小鼠摘眼球取血，所取血樣離心分離血清，測(cè)定血清肌酸激酶(CK) 和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)活性。脫頸椎處死小鼠，摘取心臟，用濾紙吸千，稱(chēng)其濕重并于 冰浴的條件下，按l: 10 (W:V)加入預(yù)冷的注射用生理鹽水，勻漿，10000 gX30min離心， 取上清液測(cè)定膜脂質(zhì)過(guò)氧化損傷產(chǎn)物丙二酵(MDA)含量和總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性。 試驗(yàn)結(jié)果本試驗(yàn)中鹽酸多柔比星導(dǎo)致荷瘤小鼠QRS復(fù)合波變寬，Q-T間期延長(zhǎng)，心率變緩；20 (S) -人參皂苷Rh2可劑量依賴(lài)性改善多柔比星所致的心臟功能損傷表現(xiàn)(表1)。荷瘤小鼠給予 鹽酸多柔比星可致血清中肌酸激酶(CK)以及天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的水平明顯升髙，同 時(shí)心肌氧化損傷產(chǎn)物丙二醛(MDA)水平也明顯升高。20 (S)-人參皂苷他2可以有效降低鹽 酸多柔比星所致的荷瘤小鼠血液中肌酸激酶(CK)以及天冬氣酸氛基轉(zhuǎn)移酶(AST)的活性，降 低MDA的水平，更明顯地增加心肌組織內(nèi)T-SOD活性(表2)。表l 20 (S)-人參皂苷1*2對(duì)鹽酸多柔比星致荷瘤小鼠心電圖變化的影響(S±j, n=10)組別劑量(mg/kg)心率 次.min—1QRS復(fù)合波 (ms)Q-T間期 (ms)模型672±6213. 8± 1.0619.0±0.87鹽酸多柔比星2534±106**19.2 ±2.05"23.2士1.4T20+2664±45"14.3士1.81"19.2 ±0.87*"20 (S) -人參皂10+2642 ±37""14.6± 1.66"19.3士1.24據(jù)苷Rh25+2572 ±7517.2 ±1.34'21.7±1.70與模型組比較 一尸<0.01。與鹽酸多柔比星組比較'尸<0.05, "AO.Ol。表2 20(S)-人參皂苷Rh2對(duì)鹽酸多柔比星致荷瘤小鼠心臟氧化性損傷的影響(n=10)組別劑量(mg/kg)CK (U./邁l)AST 艦 T-SOD(U/ml) (咖ol/mg蛋白) (U/ml)模型 鹽酸多柔比星20.205± 0.08 224.4 ±77.0 0.69±0.26 109.4±46.5 0.532±0. l廣288.8±104.1 1.12土0.36一 252.4土39.0"20+2 0.211土0.08" 140.4土49.8" 0.61±0.15" 356.3土126.0'20 (S)-人參阜苷Rh2+鹽酸多10+2 0.293土0.1(T 172.4土59.4" 0.64士0.22"" 326.5土52.8"" 柔比星5+2 0.451±0.09 192.5土51.7' 0.95±0.17 232.8±72.3與模型組比較"戶(hù)<0.01。與鹽酸多柔比星組比較'尸<0.05， "TM).Ol。結(jié)論，20 (S)-人參皂苷Rh2在20mg/kg—5mg/kg給藥量條件下，與鹽酸多柔比星(阿 霉素)聯(lián)合用藥時(shí)對(duì)于鹽酸多柔比星造成的小鼠的心臟損傷具有一定的保護(hù)作用。
權(quán)利要求
1. 20 (S)-人參皂苷他2在制備降低阿霉素所致心臟毒性的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了20(S)-人參皂苷Rh2在制備降低阿霉素所致心臟毒性的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P9/00GK101120965SQ20061006984
公開(kāi)日2008年2月13日 申請(qǐng)日期2006年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月11日
發(fā)明者杰 何, 傅風(fēng)華, 彭維兵, 朱海波, 茍海濤, 董秋菊 申請(qǐng)人:山東綠葉天然藥物研究開(kāi)發(fā)有限公司