專利名稱：豬膽汁中鵝去氧膽酸的分離純化制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鵝去氧膽酸(3α，7α-二羥基-5β-膽烷酸)的制備方法，主要涉及從豬膽汁中提取鵝去氧膽酸的方法。
背景技術(shù)：
鵝去氧膽酸(3α，7α-二羥基-5β-膽烷酸)Chenodeoxycholic Acid(簡(jiǎn)稱CDCA)，1824年首次發(fā)現(xiàn)在鵝膽汁中，1924年，wieland和windaus在不同的膽(人和鵝)中發(fā)現(xiàn)了鵝去氧膽酸，它是一種最易溶的膽汁酸，被命名為鵝去氧膽酸。
鵝去氧膽酸具有平喘化痰鎮(zhèn)咳和抗炎的作用，其利膽作用尤為顯著，它是通過(guò)減少膽固醇吸收、合成、使膽汁內(nèi)膽固醇下降，從而阻抑膽固醇結(jié)石形成和促其溶解，并且能有效降低膽固醇飽和度。
鵝去氧膽酸還作為制取熊去氧膽酸(3α，7β-二羥基-5β-膽烷酸，簡(jiǎn)稱UDCA)的中間體。熊去氧膽酸是名貴中藥熊膽所含的主要有效成分，在臨床上用于治療各種膽疾及消化道疾病。目前，傳統(tǒng)名貴藥用動(dòng)物膽汁非常緊缺，尋找有開(kāi)發(fā)前景的藥用動(dòng)物膽汁和人工合成品成為熱門研究項(xiàng)目。進(jìn)一步發(fā)掘動(dòng)物膽汁的藥用價(jià)值，分析動(dòng)物膽汁的藥用成分并揭示其作用機(jī)理，使動(dòng)物膽汁得到綜合開(kāi)發(fā)利用。因此，制備鵝去氧膽酸對(duì)于進(jìn)一步制備熊去氧膽酸也具有重要的意義。
鵝去氧膽酸主要有家禽的膽汁或動(dòng)物膽汁中提取，傳統(tǒng)的提取制備工藝過(guò)程復(fù)雜，收率低，并且使用大量不安全的有機(jī)溶劑(醫(yī)藥工業(yè)，1987，18(9)，416；應(yīng)用技術(shù)，1998，429-10；US patent，4,331,607；USpatent 4,163,017)不能適用現(xiàn)代工業(yè)的要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種可用于較大規(guī)模制備高純度鵝去氧膽酸的方法，可克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，采用安全低毒、簡(jiǎn)單實(shí)用的方法得到純度較高的鵝取樣膽酸。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的制備方法包括以下步驟(1)總膽酸的制備；(2)脫色與脫脂；(3)成鋇鹽；(4)鈉鹽、中和、干燥；(5)色譜層析柱純化得純鵝去氧膽酸。
其中(1)總膽酸的制備取新鮮或冷凍豬膽汁，用石灰乳或石灰水去除膽紅素，在過(guò)濾后的濾液中加入其體積40％的固體氫氧化鈉，加熱煮沸24小時(shí)，降溫，攪拌下加入20％鹽酸調(diào)PH2～3，可得總膽酸。
(2)脫色與脫脂將干燥后的鵝去氧膽酸溶于乙醇溶液中，加入活性炭升溫至回流，反應(yīng)30～60分鐘，過(guò)濾后的濾液中加入石油醚進(jìn)行萃取，多次萃取合并萃取液。
(3)成鋇鹽稱取一定體積的5％NaOH-乙醇溶液，攪拌下加入到脫脂溶液中，升溫回流反應(yīng)2小時(shí)，降至室溫，用20％鹽酸調(diào)PH8～9，再加入15％的Bacl2水溶液，繼續(xù)回流2小時(shí)，活性炭二次脫色后，趁熱過(guò)濾，濾液進(jìn)行濃縮至原體積的1/2，出現(xiàn)粘稠狀黃色固體，放入冰箱中，待固體完全析出過(guò)濾，得鵝去氧膽酸鋇鹽。
(4)鈉鹽、中和、干燥稱取鵝去氧膽酸鋇鹽，加入15倍量的水，加熱使其全部溶解，加入無(wú)水碳酸鉀，升溫回流反應(yīng)2～3小時(shí)，趁熱過(guò)濾，洗滌，洗液與濾液合并，冷卻后用鹽酸調(diào)PH3～4，有白色沉淀析出，過(guò)濾后用水洗至中性，即得鵝去氧膽酸粗品。
(5)色譜層析柱純化將前述制得的初步純化得鵝去氧膽酸粗品，用少量無(wú)水乙醇溶解，上浸有石油醚的硅膠柱，流速按層析柱液體線形速度1～5cm/分控制，用石油醚∶丙酮＝2∶1，開(kāi)始洗脫，其間用薄層層析色譜檢測(cè)，待出現(xiàn)外觀純一的鵝去氧膽酸斑點(diǎn)時(shí)，開(kāi)始收集洗脫液直至無(wú)鵝去氧膽酸斑點(diǎn)，減壓蒸餾干燥后，可得純的較高的鵝去氧膽酸。
所用硅膠，呈弱酸性，經(jīng)活化方可使用。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)與效果是整個(gè)工藝具有操作簡(jiǎn)便，安全低毒，成本低，易于工業(yè)化生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
取新鮮或冷凍的豬膽汁，加入石灰乳(石灰∶水＝1∶12)或石灰水(石灰∶水＝1∶30)去除膽紅素，過(guò)濾后的母液中加入其體積40％的固體氫氧化鈉，加熱煮沸24小時(shí)，皂化結(jié)束后，用鹽酸(20％)調(diào)PH2～3，過(guò)濾后水洗至中性，可得總膽酸。
將總膽酸溶于3倍量無(wú)水乙醇中，加入0.5～1％活性炭，升溫回流30分鐘，趁熱過(guò)濾，濾液中用石油醚多次萃取，合并萃取液。
加入于萃取液等體積的5％NaOH-乙醇溶液，攪拌下加入到脫脂后的溶液中，升溫回流反應(yīng)2小時(shí)，降至室溫，用鹽酸(20％)調(diào)PH8～8.5，再加入15％等體積的Bacl2水溶液，繼續(xù)回流2小時(shí)，加入0.5～1％活性炭二次脫色，趁熱過(guò)濾，濾液進(jìn)行濃縮至原體積的1/2，出現(xiàn)粘稠狀黃色固體，放入冰箱中，待固體完全析出過(guò)濾，得鵝去氧膽酸鋇鹽。加入15倍量的水，加熱使其全部溶解，加入無(wú)水碳酸鉀，升溫回流反應(yīng)2～3小時(shí)，趁熱過(guò)濾，洗滌，洗液與濾液合并，冷卻后用鹽酸調(diào)PH3～4，有白色沉淀析出，過(guò)濾后用水洗至中性，即得鵝去氧膽酸粗品。
將前述制得的初步純化得鵝去氧膽酸粗品，用少量無(wú)水乙醇溶解，上浸有石油醚的硅膠柱(所用硅膠，呈弱酸性，經(jīng)活化方可使用)，流速按層析柱液體線形速度1～5cm/分控制，用石油醚∶丙酮＝2∶1，開(kāi)始洗脫，其間用薄層層析色譜檢測(cè)，待出現(xiàn)外觀純一的鵝去氧膽酸斑點(diǎn)時(shí)，開(kāi)始收集洗脫液直至無(wú)鵝去氧膽酸斑點(diǎn)，減壓蒸餾干燥后，可得純的較高的鵝去氧膽酸。
權(quán)利要求
1.豬膽汁中鵝去氧膽酸的分離純化制備方法，其特征在于該制備方法包括以下步驟(1)總膽酸的制備；(2)脫色與脫脂；(3)成鋇鹽；(4)鈉鹽、中和、干燥；(5)色譜層析柱純化得純鵝去氧膽酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬膽汁中鵝去氧膽酸的分離純化制備方法，其特征在于(1)總膽酸的制備取新鮮或冷凍豬膽汁，用石灰乳或石灰水去除膽紅素，在過(guò)濾后的濾液中加入其體積40％的固體氫氧化鈉，加熱煮沸24小時(shí)，降溫，攪拌下加入20％鹽酸調(diào)PH2～3，可得總膽酸；(2)脫色與脫脂將干燥后的鵝去氧膽酸溶于乙醇溶液中，加入活性炭升溫至回流，反應(yīng)30～60分鐘，過(guò)濾后的濾液中加入石油醚進(jìn)行萃取，多次萃取合并萃取液；(3)成鋇鹽取5％NaOH-乙醇溶液，攪拌下加入到脫脂溶液中，升溫回流反應(yīng)2小時(shí)，降至室溫，用20％鹽酸調(diào)PH8～9，再加入15％的Bacl2水溶液，繼續(xù)回流2小時(shí)，活性炭二次脫色后，趁熱過(guò)濾，濾液進(jìn)行濃縮至積的1/2，出現(xiàn)粘稠狀黃色固體，放入冰箱中，待固體完全析出過(guò)濾，得鵝去氧膽酸鋇鹽；(4)鈉鹽、中和、干燥稱取鵝去氧膽酸鋇鹽，加入15倍量的水，加熱使其全部溶解，加入無(wú)水碳酸鉀，升溫回流反應(yīng)2～3小時(shí)，趁熱過(guò)濾，洗滌，洗液與濾液合并，冷卻后用鹽酸調(diào)PH3～4，有白色沉淀析出，過(guò)濾后用水洗至中性，即得鵝去氧膽酸粗品；(5)色譜層析柱純化將前述制得的初步純化得鵝去氧膽酸粗品，用少量無(wú)水乙醇溶解，上浸有石油醚的硅膠柱，流速按層析柱液體線形速度1～5cm/分控制，用石油醚∶丙酮＝2∶1，開(kāi)始洗脫，其間用薄層層析色譜檢測(cè)，待出現(xiàn)外觀純一的鵝去氧膽酸斑點(diǎn)時(shí)，開(kāi)始收集洗脫液直至無(wú)鵝去氧膽酸斑點(diǎn)，減壓蒸餾干燥后，可得純鵝去氧膽酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬膽汁中鵝去氧膽酸的分離純化制備方法，其特征在于所用硅膠，呈弱酸性，經(jīng)活化方可使用。
全文摘要
豬膽汁中鵝去氧膽酸的分離純化制備方法，本發(fā)明涉及從豬膽汁中提取純化鵝去氧膽酸的工業(yè)化制備方法。其過(guò)程包括以豬膽汁提取膽紅素后的母液為原料制成總膽酸，皂化調(diào)酸得鵝去氧膽酸粗品，脫色、脫脂后制備鵝去氧膽酸鋇鹽沉淀，碳酸鉀脫鋇調(diào)酸及硅膠柱純化等步驟。整個(gè)工藝具有操作簡(jiǎn)便，安全低毒，成本低，易于工業(yè)化生產(chǎn)的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K35/413GK1869044SQ20061004685
公開(kāi)日2006年11月29日 申請(qǐng)日期2006年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月9日
發(fā)明者孟艷秋, 張力 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)化工學(xué)院