專利名稱：一種能預(yù)防和治療禽流感的獸藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種獸藥，特別是一種能預(yù)防和治療禽流感的獸藥。
背景技術(shù)：
隨著我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，畜禽傳染病已成為困擾畜牧業(yè)的一大難題。畜禽免疫失敗、免疫力低下，常導(dǎo)致畜禽疾病復(fù)雜多變，特別是幼齡畜禽發(fā)病率和死亡率逐年增加。老病未除新病又不斷出現(xiàn)，如雞的傳染性法氏囊病和豬的圓環(huán)病毒病均可使機體的免疫系統(tǒng)遭到破壞，導(dǎo)致機體反復(fù)發(fā)病反復(fù)治療反復(fù)感染，用藥量增加，提高了養(yǎng)殖業(yè)的成本。單一感染越來越少，混合感染的疾病越來越多。畜禽消化道疾病也不斷發(fā)生，引起飼料利用率降低，生長緩慢，料耗增加，出欄時間延長。如雞的球蟲病導(dǎo)致雞的腸道損傷出血下痢，引起雞的腸炎和免疫力下降。雖然使用其他藥物能使該病得到了控制和改善，但治標(biāo)不治本，只能控制病情，復(fù)發(fā)率較高且導(dǎo)致藥物殘留，嚴(yán)重影響了肉蛋食品的質(zhì)量和衛(wèi)生。腸炎(病毒性、細(xì)菌性、霉菌性、寄生蟲性)是動物的常發(fā)病、多發(fā)病，用于治療單純性腸炎的藥物很多，也多有很好的療效，但動物的腸炎常常反復(fù)發(fā)作或混合發(fā)作，造成畜禽腸道損傷嚴(yán)重，加之反復(fù)使用抗生素也是治療效果不佳，病程冗長，甚至愈后不良，對畜牧業(yè)造成巨大損失。目前，用于腸道損傷修復(fù)的藥物很少見到，僅有一些腸道粘膜保護劑的應(yīng)用，但其療效并不明顯。因此，尋找和制備具有提高免疫功能、縮短療程、降低藥物的毒副作用和藥物殘留的獸藥產(chǎn)品十分必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種能預(yù)防和治療禽流感的獸藥，它采用既治標(biāo)又治本的方法，利用生化制劑增強機體免疫力，它具有療效高、無耐藥性、無配伍禁忌、無毒、無殘留，符合國際獸藥潮流。
本發(fā)明的技術(shù)方案是設(shè)計一種能預(yù)防和治療禽流感的獸藥，其特征是它是每1000ml含α-甘露聚糖肽500-5000mg的溶液。
所述的溶液是將優(yōu)選α-溶血性鏈球菌33#菌種進行太空搭載，經(jīng)過太空誘變精心選育的優(yōu)良菌珠作為生產(chǎn)菌種，經(jīng)一級發(fā)酵和二級發(fā)酵，生產(chǎn)甘露聚糖肽發(fā)酵液，將發(fā)酵液提純過濾后，加適量香精、矯味劑溶解配制，攪拌均勻后再過濾，灌裝封口，熱壓滅菌后的發(fā)酵原液。
所述的口服溶液每1000ml含有利巴韋林50-100g。
所述的能預(yù)防和治療禽流感的獸藥口服液的制備方法是優(yōu)選α-溶血性鏈球菌33#菌種進行太空搭載，經(jīng)過太空誘變精心選育的α-溶血性鏈球菌33#菌珠作為生產(chǎn)菌種，經(jīng)一級發(fā)酵和二級發(fā)酵，生產(chǎn)甘露聚糖肽發(fā)酵液，將發(fā)酵液提純過濾后，加適量香精、矯味劑溶解配制，攪拌均勻后再過濾，灌裝封口，熱壓滅菌105-121℃，20-30分鐘，經(jīng)燈檢，按上述量取市售獸用利巴韋林原料藥，經(jīng)γ-射線照射，制成80-100目的粉劑，做無菌檢驗，合格后包裝入庫。
本發(fā)明的特點是由于本發(fā)明在α-溶血鏈球菌生長規(guī)律的基礎(chǔ)上，選定較合適生長時期的菌種，采用平皿生長的菌落、浸入其它物質(zhì)中的菌懸液、帶菌的砂土等方法，于2002年3月25日搭載“神舟三號”宇宙飛船。在太空軌道(近地點高度200公里、遠(yuǎn)地點高度350公里)進行了6天零18小時的在軌飛行。太空的特殊條件主要體現(xiàn)為微重力、高真空、高輻射、交變磁場等特殊環(huán)境。在外層空間飛行的菌種被置于一個與地球上的生態(tài)環(huán)境完全不同的環(huán)境中，主要包括來自磁場俘獲的電子、質(zhì)子及低能重粒子；來自銀河系的宇宙射線如質(zhì)子、粒子及更重的高能重粒子；來自太陽磁暴的質(zhì)子及重粒子等。這些粒子作用于微生物細(xì)胞核中的DNA雙鏈結(jié)構(gòu)，可導(dǎo)致雙鏈斷裂。微重力、高真空環(huán)境可使DNA的堿基序列發(fā)生重組，即基因組的重組和變異。變異后產(chǎn)生的新菌株，其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化反應(yīng)、代謝產(chǎn)物、遺傳性狀及蛋白表達(dá)、中試生產(chǎn)指標(biāo)等均會發(fā)生不同程度的變化。在宇宙飛船返回地面后，經(jīng)過進一步篩選，僅優(yōu)選出其中0.2％的正變異且遺傳特性穩(wěn)定的菌株，經(jīng)培育制成生產(chǎn)菌種。這種經(jīng)航天搭載誘變后選育出的菌種已經(jīng)在在2003年12月29日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，編號為CGMCCNo.1082。(見附頁)特別是α-溶血鏈球菌D33菌株經(jīng)太空搭載誘變，地面上的篩選、分離和純化后，選育出發(fā)酵單位更高、所分泌的甘露聚糖肽含量更高的高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)菌株T33株。實驗及中試生產(chǎn)結(jié)果表明，經(jīng)空間誘變后的新型太空菌種在遺傳特性上穩(wěn)定，有較強的生產(chǎn)適應(yīng)性，由其發(fā)酵產(chǎn)生的甘露聚糖肽含量提高，發(fā)酵含量比對照組產(chǎn)物含量平均高出三倍以上，發(fā)酵周期大大縮短。該菌株經(jīng)培養(yǎng)、發(fā)酵、提純及精制等高科技手段制備而成的口服液對治療畜禽的消化道疾病有顯著療效。
藥理及作用機理α-甘露聚糖肽進入腸道以后被水解為兩部分，即甘露聚糖(低聚甘露糖)和堿性多肽。因為低聚甘露糖難以被胃腸吸收并且可以促進腸道內(nèi)有益菌(雙歧桿菌和乳酸菌)的生長繁殖，所以水解后生成的低聚甘露糖會直接進入大腸被有益菌利用。α-甘露聚糖肽即通過這兩種水解產(chǎn)物發(fā)生作用。
調(diào)節(jié)免疫機能甘露聚糖分子中含有磷酸成分。研究表明甘露聚糖中的磷酸含量較高時，對結(jié)合病原菌是不利的，但對免疫調(diào)節(jié)功能則是重要的。試驗證明低聚甘露糖對巨嗜細(xì)胞和單核細(xì)胞有積極影響，增強其吞噬作用；提高血清中溶菌酶水平；刺激腫瘤壞死因子數(shù)(TNF)、白細(xì)胞介素(IL)、干擾素(IFN)和NO水平升高。TNF能抑制腫瘤細(xì)胞；IL和IFN是具有免疫活性的內(nèi)源性肽，兩者都可以激活或調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答中心；NO由巨嗜細(xì)胞產(chǎn)生，而NO具有直接殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。
堿性多肽的功能肽不僅是機體蛋白質(zhì)代謝的底物，而且還具有其他重要的生物學(xué)作用。α-甘露聚糖肽水解產(chǎn)生的堿性多肽能作用于革蘭氏陽性菌細(xì)胞成分-肽聚糖，切斷連接N-乙肽葡胺和N-乙肽胞壁酸的聚糖鏈，喪失其堅韌性，細(xì)菌發(fā)生低滲透型的裂解，從而殺傷細(xì)菌。肽還有促進巨嗜細(xì)胞的吞噬作用，促進淋巴細(xì)胞和脾細(xì)胞的增殖作用，從而增強機體免疫力。
本發(fā)明對雞禽流感預(yù)防和治療試驗1.試驗雞及分組AA肉仔雞，健雛400只，共4棟雞舍，每棟雞舍作為一個試驗組。
2.飼養(yǎng)管理各組均按統(tǒng)一供應(yīng)的飼料，按標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)管理。
3.常規(guī)應(yīng)激因子飼養(yǎng)管理中不可避免的應(yīng)激因素，如消毒、換料、氣候突變等(各組均同)。
4.實驗方案(1)本發(fā)明的使用前三組為實驗組，第1組雞1日齡時飲用α-甘露聚糖肽，每天25ml，連續(xù)飲用7天，間隔7天再按同一劑量飲用7天；第2組雞1日齡時飲用α-甘露聚糖肽+利巴韋林，每天25ml，連續(xù)飲用7天，間隔7天再按同一劑量飲用7天；第3組雞1日齡時飲用利巴韋林，每天25ml，連續(xù)飲用7天，間隔7天再按同一劑量飲用7天。第4組，為對照組不使用本發(fā)明。第15天用禽流感強毒攻擊。觀察各組成活率和精神狀態(tài)。
(2)實驗結(jié)果見表1。
表1 攻毒實驗結(jié)果

由上表可以看出單獨使用α-甘露聚糖肽試驗組雞在攻毒后的總存活率為75.2％，高于利巴韋林飲用組的65.3％，α-甘露聚糖肽+利巴韋林飲用組在三個實驗組中雞的總存活率為79.8％，為最高；不使用本發(fā)明的對照組總存活率僅為13.7％。各實驗組存活率與對照組經(jīng)生物學(xué)統(tǒng)計，差異極顯著(P＜0.01)。
在攻毒后的各觀察階段，對照組雞的采食、精神、糞便和呼吸癥狀均較明顯的病理性變化，在攻毒后的12小時后即發(fā)生大量死亡，而各實驗組雖有上述病理變化，但病理過程較慢。
5.結(jié)論(1)通過試驗，說明本發(fā)明有顯著的預(yù)防和治療禽流感的作用，并可以緩解癥狀，提高受感染雞群的存活率。
(2)本發(fā)明可以在禽流感受威脅區(qū)和發(fā)病地區(qū)商品肉雞上大力推廣經(jīng)大量的實驗表明，經(jīng)太空搭載菌種生產(chǎn)出的口服液具有如下特點1.顯著的免疫增效作用本發(fā)明可有效激活畜禽免疫系統(tǒng)的機能及其對抗原的反應(yīng)能力，提高畜禽機體的抗體水平和免疫力。
2.極強的腸道損傷修復(fù)功能本發(fā)明既可提高腸道粘膜組織SIgA、IgM等物質(zhì)，又可增加大量細(xì)胞生長因子，促進腸道粘膜損傷的主動修復(fù)。
3.速清除畜禽腸道內(nèi)的致病微生物，促進有益微生物的大量繁殖本發(fā)明分子與腸道粘膜細(xì)胞上的特異性糖類受體結(jié)構(gòu)相近似，并且與致病微生物的親和力極強，它可以直接與腸道內(nèi)的致病微生物直接結(jié)合，也可將已與腸粘膜細(xì)胞結(jié)合的致病微生物截取下來而排出體外。
4.良好的防病和促生長效果經(jīng)常使用本發(fā)明的畜禽，發(fā)病率(特別是免疫抑制性疾病MD、IBD等)大幅度降低，還可刺激畜禽機體產(chǎn)生各類促生長因子，從而促進畜禽機體生長發(fā)育，提高飼料轉(zhuǎn)化率。
適用動物蛋雞、肉雞、鴨、肉鴿、魚及水產(chǎn)類、豬、牛、羊、狗、貓等。
應(yīng)用范圍1.本發(fā)明作為幼齡畜禽的預(yù)防用藥，可顯著降低發(fā)病率、提高成活率和促進生長發(fā)育，提高大群發(fā)育整齊度。
2.配合畜禽免疫，可顯著提高抗體水平，增強畜禽的抵抗力。
3.配合治療畜禽病毒性疾病，如雞新城疫、傳支、鴨瘟、豬傳染性胃腸炎等，用本發(fā)明配合治療，可明顯縮短療程。
本發(fā)明對動物的作用1.增強動物免疫功能，提高畜禽對傳染病的抵抗力。
2.抗病毒、抗感染。
具體實施例方式
優(yōu)選α-溶血性鏈球菌33#菌種進行太空搭載，經(jīng)過太空誘變得α-溶血性鏈球菌33#菌珠作為生產(chǎn)菌種，經(jīng)一級發(fā)酵和二級發(fā)酵，生產(chǎn)甘露聚糖肽發(fā)酵液，將發(fā)酵液提純過濾后，加適量香精、矯味劑溶解配制，攪拌均勻后再過濾，灌裝封口，熱壓滅菌105-121℃，20-30分鐘，經(jīng)燈檢合格后包裝入庫，檢驗合格后最終生產(chǎn)出太空誘變菌種生產(chǎn)的本發(fā)明(α-甘露聚糖肽)。
①太空菌種制備以經(jīng)過空間誘變得α-溶血鏈球菌作為生產(chǎn)菌種。
A.斜面種子培養(yǎng)基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化鈉0.2-0.6％，瓊脂1-5％，綿羊血5-10％；pH 7.2-7.4；斜面種子培養(yǎng)基滅菌溫度105-125℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.13Mpa；啟封菌種冷凍管，用無菌肉湯培養(yǎng)基稀釋，在無菌條件下接入血斜面，接種后置30℃恒溫培養(yǎng)24-30小時；B.肉湯種子培養(yǎng)基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化鈉0.2-0.6％；pH 7.0-7.4；肉湯種子培養(yǎng)基滅菌溫度105-125℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.13Mpa；將培養(yǎng)好的斜面菌種在無菌條件下按1-9％接種量接入肉湯種子培養(yǎng)基內(nèi)，25-40℃恒溫培養(yǎng)10-30小時。
②發(fā)酵過程所述發(fā)酵過程用發(fā)酵培養(yǎng)基；牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.9％，氯化鈉0.2-0.6％；發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌溫度105-125℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.13Mpa；A.一級發(fā)酵罐將優(yōu)良的肉湯菌種在無菌條件下按1-10％接種量接入一級種子罐，在25-40℃恒溫培養(yǎng)10-50小時，罐壓不超過0.02Mpa，通氣量以能翻動培養(yǎng)液為宜；B.二級發(fā)酵罐將一級發(fā)酵培養(yǎng)液在無菌條件下按2-20％接種量接入發(fā)酵罐，在25-40℃恒溫培養(yǎng)50-100小時，罐壓不超過0.02Mpa，滅活采用加溫使發(fā)酵液溫度達(dá)到70-120℃，保溫20-60分鐘，冷卻靜置。
③提純過程發(fā)酵液進行濃縮，使?jié)饪s液體積與發(fā)酵液體積比控制在1∶15-1∶35，控制pH 7.0-7.4，加珍珠巖1-2.0％及活性炭2-4％，攪拌10-20分鐘，過濾和抽濾提純。
④配制經(jīng)提純后的甘露聚糖肽發(fā)酵液加0.01-0.015％香精(桔子香精、檸檬香精)、0.01-0.08％矯味劑(糖精鈉、蛋白糖)溶解攪勻，加純化水配制成含量為≥0.5mg/ml，pH 4.0-6.0的配制液。
⑤灌裝封口、滅菌
將配制液按100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包裝規(guī)格進行灌裝，封口，熱壓滅菌105-121℃，20-30分鐘后，用亮蘭色液抽真空檢漏，真空壓力-0.078-0.08Mpa。
⑥燈檢、包裝對滅菌后的α-甘露聚糖肽進行燈檢，檢查每瓶內(nèi)不得有異物并挑凈蘭瓶。貼標(biāo)簽、裝箱入庫。
⑦檢驗按α-甘露聚糖肽的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進行檢驗，合格后投入市場。
實施例1取太空誘變菌種生產(chǎn)的含甘露聚糖肽的重量比為0.5mg/ml，pH 4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，加入活性炭0.25g，攪勻，過濾，加入糖精鈉0.1g，加入香精0.1ml、攪勻，灌裝封口制成分別為100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包裝規(guī)格的α-甘露聚糖肽，經(jīng)流通蒸汽滅菌121℃，30分鐘，燈檢，包裝，檢驗合格后投入市場，具體操做如上所述。
實施例2與實施例1基本相同，所不同是甘露聚糖肽溶液中含甘露聚糖肽的重量比是3mg/ml或5mg/ml。
實施例3取太空誘變菌種生產(chǎn)的含量為3mg/ml，pH 4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，加入活性炭0.25g，攪勻，過濾，加入蛋白糖0.5g，加入香精0.1ml、攪勻，灌裝封口制成分別為100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包裝規(guī)格的α-甘露聚糖肽，經(jīng)流通蒸汽滅菌121℃，30分鐘，按上述量取市售獸用利巴韋林原料藥，按每1000ml加入50g，還可以是100g經(jīng)γ-射線照射，制成80-100目的粉劑，做無菌檢驗，燈檢，包裝，檢驗合格后投入市場。
實施例4與實施例3基本相同，所不同是按上述量取市售獸用利巴韋林原料藥，按每1000ml加入70g或100g。
權(quán)利要求
1.一種能預(yù)防和治療禽流感的獸藥，其特征是它是每1000ml含α-甘露聚糖肽500-5000mg的溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種能預(yù)防和治療禽流感的獸藥，其特征是所述的溶液是將優(yōu)選α-溶血性鏈球菌33#菌種進行太空搭載，經(jīng)過太空誘變得菌珠作為生產(chǎn)菌種，經(jīng)一級發(fā)酵和二級發(fā)酵，生產(chǎn)甘露聚糖肽發(fā)酵液，將發(fā)酵液提純過濾后，加適量香精、矯味劑溶解配制，攪拌均勻后再過濾，灌裝封口，熱壓滅菌后的發(fā)酵原液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種能預(yù)防和治療禽流感的獸藥，其特征是所述的口服溶液每1000ml含有利巴韋林50-100g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種能預(yù)防和治療禽流感的獸藥，其特征是所述的能預(yù)防和治療禽流感的獸藥口服液的制備方法是優(yōu)選α-溶血性鏈球菌33#菌種進行太空搭載，經(jīng)過太空誘變得α-溶血性鏈球菌33#菌珠作為生產(chǎn)菌種，經(jīng)一級發(fā)酵和二級發(fā)酵，生產(chǎn)甘露聚糖肽發(fā)酵液，將發(fā)酵液提純過濾后，加香精、矯味劑溶解配制，攪拌均勻后再過濾，灌裝封口，熱壓滅菌105-121℃，20-30分鐘，按上述量取市售獸用利巴韋林原料藥，經(jīng)γ-射線照射，制成80-100目的粉劑，做無菌檢驗，經(jīng)燈檢，合格后包裝入庫。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種獸藥，特別是一種能預(yù)防和治療禽流感的獸藥，其特征是它是每1000ml含α－甘露聚糖肽500－5000mg的溶液；所述的溶液是將優(yōu)選α－溶血性鏈球菌33#菌種進行太空搭載，經(jīng)過太空誘變得菌珠作為生產(chǎn)菌種，經(jīng)一級發(fā)酵和二級發(fā)酵，生產(chǎn)甘露聚糖肽發(fā)酵液，將發(fā)酵液提純過濾后，加適量香精、矯味劑溶解配制，攪拌均勻后再過濾，灌裝封口，熱壓滅菌后的發(fā)酵原液。它采用既治標(biāo)又治本的方法，利用生化制劑增強機體免疫力，它具有療效高、無耐藥性、無配伍禁忌、無毒、無殘留，符合國際獸藥潮流。
文檔編號A61P31/16GK101062405SQ200610042748
公開日2007年10月31日 申請日期2006年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月28日
發(fā)明者趙恒 申請人:趙恒