專利名稱：淋巴毒素在制備增加化療藥物敏感性的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及淋巴毒素的新用途，具體涉及淋巴毒素在制備增加化療藥物敏感性的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
淋巴毒素a(LTα)，也被稱為TNFβ，是TNF超家族成員之一，是一類重要的細胞因子。LTα由有活性的淋巴細胞產(chǎn)生，是25KD的分泌型糖蛋白，LT前體含有205個氨基酸殘基，其中34個氨基酸殘基編碼信號肽，成熟的LT有171個氨基酸殘基(18kD)(SEQ ID NO3)，沒有二硫鍵，第62位為N-連接的糖基化位點(糖基化對其細胞毒活性是非必要的)。LT的N端1-27氨基酸序列為柔性結(jié)構(gòu)，此區(qū)域缺失不影響LT與受體的結(jié)合以及引發(fā)的細胞毒活性。
LTα的結(jié)構(gòu)和功能與TNF相似，具有相同的受體TNFRI、TNFRII。與TNF相似，LT也顯示出明確的抗腫瘤作用。LT體內(nèi)、體外的抗腫瘤活性與TNF不相上下，但毒性更小，半衰期更長。
美國專利US5474023，報道了LT與鹽酸阿霉素、5-FU聯(lián)合使用，可以改進療效，減輕化療藥物引起的毒副作用。但對其他的化療藥物和LT是否具有協(xié)同作用，以及特定的化療藥物和LT聯(lián)合使用對何種腫瘤最為有效并沒有說明。
化療是目前腫瘤治療領(lǐng)域主要的治療方法之一。多種化療藥物廣泛使用于臨床，對控制病情發(fā)展，延長患者壽命起到積極作用。但多數(shù)化療藥物的毒副作用較大，容易產(chǎn)生耐藥性，而且只對部分瘤種有效，成為臨床使用的限制因素。因此，目前迫切需要能夠降低化療藥物的毒副作用，擴大抑瘤譜，克服耐藥性的產(chǎn)生的藥物和治療手段。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是公開一種淋巴毒素在制備增加化療藥物敏感性的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的構(gòu)思是這樣的將目前廣泛使用的化療藥物和淋巴毒素聯(lián)合使用，用來殺傷多種腫瘤細胞株；與單獨使用化療藥物比較，篩選和淋巴毒素具有協(xié)同作用的化療藥物，同時，篩選對該聯(lián)合治療最敏感的腫瘤種類。
本發(fā)明的目的是提供一種淋巴毒素的用途，用于腫瘤化療的增敏劑，以解決目前化療中毒副作用大、病人耐受性差等不足。
本發(fā)明篩選的化療藥物包括卡鉑、順鉑、奧沙利鉑、阿霉素、表阿霉素、5-FU、絲裂霉素、環(huán)磷酰胺、長春新堿、長春瑞濱共10種。篩選的腫瘤細胞株包括BGC-823(胃腺癌)、NCI-H157(非小細胞肺腺癌)、SW480(結(jié)腸癌)、SK-BR-3(轉(zhuǎn)移性乳腺腺癌)、A375(黑色素瘤)、Hep2(喉癌)、HeLa(宮頸癌)共7種上皮來源的腫瘤；Raji(非霍奇金淋巴瘤)、Ramos(非霍奇金淋巴瘤)共2種骨髓來源的腫瘤。結(jié)果見下表淋巴毒素聯(lián)合化療藥物殺傷腫瘤細胞匯總表 “+”表示協(xié)同作用；“＝”表示疊加作用；“-”表示拮抗作用經(jīng)過廣泛深入地研究，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，淋巴毒素與10種化療藥物聯(lián)合使用，在2種骨髓來源的腫瘤上均沒有協(xié)同作用，在某些腫瘤上甚至呈現(xiàn)拮抗作用；然而對于7種上皮來源的腫瘤，淋巴毒素與多種化療藥物呈現(xiàn)明顯的協(xié)同作用。
發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，淋巴毒素與鉑類化療藥物(順鉑、卡鉑、奧沙利鉑)、蒽環(huán)類藥物(阿霉素、表阿霉素)、5-FU、絲裂霉素在治療上皮來源的腫瘤上具有協(xié)同作用，其中與鉑類藥物的協(xié)同作用最為顯著。
本發(fā)明公開了一種淋巴毒素的用途，淋巴毒素作為化療藥物的增敏劑，用于治療上皮來源的腫瘤。
所說的淋巴毒素包括來源于人、鼠、豬、馬或牛的淋巴毒素，較佳的，選擇來源于人的淋巴毒素，更佳的，選擇淋巴毒素LT1-171、LT24-171、LT28-171。
所說的上皮來源的腫瘤包括非小細胞肺癌、乳腺癌、喉癌、結(jié)直腸癌、子宮頸癌、黑色素瘤或胃癌。
在一個優(yōu)選的方案中，淋巴毒素可作為鉑類藥物、蒽環(huán)類藥物、5-FU、絲裂霉素的增敏劑，用于治療上皮來源的腫瘤。較佳的，淋巴毒素可作為鉑類藥物的增敏劑，更佳的，淋巴毒素可作為為卡鉑、順鉑、奧沙利鉑的增敏劑。
所說的增加上皮來源的腫瘤對化療藥物敏感性的藥物指在對患有上皮來源腫瘤患者在化療前、同時或化療后給與，以提高患者對化療藥物耐受性或增加化療藥物療效的藥物。
本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在對于上皮來源的腫瘤，包括非小細胞肺癌、胃癌、乳腺癌、宮頸癌等惡性高發(fā)腫瘤，通過聯(lián)合使用一線化療藥物和淋巴毒素，可以提高療效或者在保證療效的前提下降低化療藥物的劑量，從而減輕化療藥物帶來的毒副作用，改善病人生活質(zhì)量。


圖1、rhLT對NCI-H157(非小細胞肺腺癌)細胞的化療增敏作用圖1.ACDDP(ug/ml)0.625，1.25，2.5，5；細胞存活率87.33％，70.29％，45.29％，16.82％100ng/LT+CDDP(ug/ml)0.625，1.25，2.5，5；細胞存活率62.44％，39.24％，9.53％，9.14％圖1.B
CBDCA(ug/ml)12.5，25，50，100細胞存活率86.00％，78.73％，57.98％，36.66％；100ng/LT+CBDCA(ug/ml)12.5，25，50，100細胞存活率68.82％，66.97％，50.20％，24.44％；圖1.CL-OHP(ug/ml)0.625，1.25，2.5，5細胞存活率92.75％，77.17％，63.51％，55.36％；100ng/LT+L-OHP(ug/ml)0.625，1.25，2.5，5細胞存活率71.48％，63.39％，49.97％，45.18％；圖1.DADM(ug/ml)0.01171875，0.046875，0.1875，0.75，3細胞存活率80.57％，75.95％，48.64％，15.43％，3.55％；100ng/LT+DM(ug/ml)0.01171875，0.046875，0.1875，0.75，3細胞存活率63.53％，60.86％，39.53％，12.17％，2.48％；圖1.EEpi-ADM(ug/ml)0.0032，0.016，0.08，0.4，2細胞存活率94.17％，81.70％，68.27％，31.29％，7.38％；100ng/LT+Epi-ADM(ug/ml)0.0032，0.016，0.08，0.4，2細胞存活率90.34％，70.00％，54.65％，22.80％，5.27％；圖1.F5-FU(ug/ml)0.00390625，0.015625，0.0625，0.25，1細胞存活率71.97％，70.67％，66.76％，60.57％，44.11％；100ng/LT+5-FU(ug/ml)0.00390625，0.015625，0.0625，0.25，1細胞存活率66.60％，65.90％，61.20％，51.57％，30.82％；圖1.GMMC(ug/ml)0.078125，0.3125，1.25，5，20細胞存活率76.78％，73.08％，55.85％，34.05％，9.08％；100ng/LT+MMC(ug/ml)0.078125，0.3125，1.25，5，20細胞存活率95.68％，66.22％，51.50％，28.90％，19.43％；圖1.H
CTX(ug/ml)3.90625，15.625，62.5，250，1000細胞存活率70.43％，71.06％，69.43％，65.54％，49.14％；100ng/LT+CTX(ug/ml)3.90625，15.625，62.5，250，1000細胞存活率61.87％，62.09％，56.82％，52.68％，43.71％；圖1.IVCR(ug/ml)0.00391，0.01563，0.0625，0.25，1細胞存活率81.26％，35.34％，22.50％，20.80％，19.43％；100ng/LT+VCR(ug/ml)0.00391，0.01563，0.0625，0.25，1細胞存活率77.82％，27.07％，13.10％，12.36％，12.30％；圖1.JVNR(ug/ml)0.0001，0.001，0.01，0.1細胞存活率98.13％，97.74％，80.45％，23.42％100ng/LT+VNR(ug/ml)0.0001，0.001，0.01，0.1細胞存活率91.73％，91.42％，52.55％，12.56％；圖2、rhLT對SK-BR-3(轉(zhuǎn)移性乳腺腺癌)細胞的化療增敏作用圖2.ACDDP(ug/ml)0.25，0.5，1.0，2；細胞存活率94.53％，88.33％，79.31％，61.53％；100ng/LT+CDDP(ug/ml)0.25，0.5，1.0，2；細胞存活率69.63％，59.77％，46.38％，34.16％；圖2.BCBDCA(ug/ml)2.5，5.0，10，20；細胞存活率98.86％，96.50％，72.35％，60.12％；100ng/LT+CBDCA(ug/ml)2.5，5.0，10，20；細胞存活率50.69％，48.93％，34.29％，21.93％；圖2.CL-OHP(ug/ml)0.625，1.25，2.5，5細胞存活率63.88％，61.78％，52.49％，48.35％；100ng/LT+L-OHP(ug/ml)0.625，1.25，2.5，5細胞存活率49.66％，35.61％，34.44％，29.00％；
圖2.DADM(ug/ml)0.25，0.5，1.0，2；細胞存活率36.07％，23.58％，20.81％，16.26％；100ng/LT+DM(ug/ml)0.25，0.5，1.0，2；細胞存活率31.19％，22.31％，13.65％，11.38％；圖2.EEpi-ADM(ug/ml)0.015625，0.0625，0.25，1.0細胞存活率95.05％，58.56％，44.43％，10.50％；100ng/LT+Epi-ADM(ug/ml)0.015625，0.0625，0.25，1.0細胞存活率69.39％，36.06％，31.51％，5.92％；圖2.F5-FU(ug/ml)6.25，12.5，25，50；細胞存活率57.27％，50.42％，49.26％，45.16％100ng/LT+5-FU(ug/ml)6.25，12.5，25，50；細胞存活率51.89％，45.29％，40.62％，31.90％；圖2.GMMC(ug/ml)0.03125，0.125，0.5，2；細胞存活率101.78％，81.83％，43.05％，20.13％；100ng/LT+MMC(ug/ml)0.03125，0.125，0.5，2；細胞存活率89.73％，53.83％，31.60％，10.33％；圖2.HCTX(ug/ml)3.90625，15.625，62.5，250，1000細胞存活率84.96％，83.67％，82.99％，75.24％，49.31％；100ng/LT+CTX(ug/ml)3.90625，15.625，62.5，250，1000細胞存活率82.48％，77.49％，75.43％，63.64％，45.19％；圖2.IVCR(ug/ml)0.0001，0.001，0.01，0.1細胞存活率99.22％，98.86％，29.75％，24.63％；100ng/LT+VCR(ug/ml)0.0001，0.001，0.01，0.1細胞存活率84.94％，78.13％，27.02％，21.25％；
圖2.JVNR(ug/ml)0.0001，0.001，0.01，0.1細胞存活率99.37％，97.05％，32.94％，26.50％；100ng/LT+VNR(ug/ml)0.0001，0.001，0.01，0.1細胞存活率88.47％，87.24％，28.69％，24.29％；圖3、rhLT對Raji(非霍奇金淋巴瘤)細胞的化療增敏作用圖3.ACDDP(ug/ml)0.01953，0.07813，0.3125，1.25，5；細胞存活率94.39％，97.21％，85.48％，59.61％，42.30％；100ng/LT+CDDP(ug/ml)0.01953，0.07813，0.3125，1.25，5；細胞存活率95.73％，93.23％，86.30％，66.92％，43.59％；圖3.BCBDCA(ug/ml)6.25，12.5，25，50；細胞存活率98.20％，98.46％，89.13％，66.24％，37.87％；100ng/LT+CBDCA(ug/ml)6.25，12.5，25，50；細胞存活率102.10％，101.97％，97.22％，70.65％，43.09％；圖3.CL-OHP(ug/ml)0.007813，0.03125，0.125，0.5，2；細胞存活率98.64％，96.80％，96.52％，91.29％，51.08％；100ng/LT+L-OHP(ug/ml)0.007813，0.03125，0.125，0.5，2；細胞存活率117.03％，112.19％，108.67％，106.67％，59.83％；圖3.DADM(ug/ml)0.01953，0.07813，0.3125，1.25，5；細胞存活率92.36％，49.44％，37.19％，16.85％，20.85％；100ng/LT+DM(ug/ml)0.01953，0.07813，0.3125，1.25，5；細胞存活率102.05％，68.07％，47.32％，28.93％，24.57％；圖3.EEpi-ADM(ug/ml)0.0032，0.016，0.08，0.4，2；細胞存活率22.10％，14.52％，11.18％，81.71％，53.98％；100ng/LT+Epi-ADM(ug/ml)0.0032，0.016，0.08，0.4，2；
細胞存活率22.02％，23.20％，18.08％，94.58％，62.79％；圖3.F5-FU(ug/ml)11.71875，46.875，187.5，750，3000；細胞存活率82.16％，71.06％，50.58％，52.42％，53.74％；100ng/LT+5-FU(ug/ml)11.71875，46.875，187.5，750，3000；細胞存活率85.57％，74.56％，62.01％，55.60％，59.45％；圖3.GMMC(ug/ml)0.390625，1.5625，6.25，25，100；細胞存活率74.69％，53.10％，37.66％，24.69％，16.45％；100ng/LT+MMC(ug/ml)0.390625，1.5625，6.25，25，100；細胞存活率81.22％，62.14％，37.66％，29.53％，21.56％；圖3.HCTX(ug/ml)62.5，125，250，500，1000；細胞存活率92.08％，86.67％，86.00％，78.04％，63.30％；100ng/LT+CTX(ug/ml)62.5，125，250，500，1000；細胞存活率98.43％，95.56％，88.01％，78.04％，70.13％；圖3.IVCR(ug/ml)0.0001，0.001，0.01，0.1細胞存活率93.62％，90.76％，88.83％，84.17％；100ng/LT+VCR(ug/ml)0.0001，0.001，0.01，0.1細胞存活率95.65％，94.32％，90.88％，87.38％；圖3.JVNR(ug/ml)0.008，0.04，0.2，1，5；細胞存活率30.63％，47.09％，25.70％，27.88％，32.55％；100ng/LT+VNR(ug/ml)0.008，0.04，0.2，1，5；細胞存活率32.04％，41.07％，29.54％，46.57％，38.32％；圖4、rhLT對Romos(非霍奇金淋巴瘤)細胞的化療增敏作用圖4.ACDDP(ug/ml)0.375，0.75，1.5，3.0；細胞存活率95.03％，89.50％，108.42％，142.55％；
100ng/LT+CDDP(ug/ml)0.375，0.75，1.5，3.0；細胞存活率156.51％，150.22％，162.85％，195.16％；圖4.BCBDCA(ug/ml)6.25，12.5，25，50；細胞存活率92.51％，93.32％，100.17％，112.30％；100ng/LT+CBDCA(ug/ml)6.25，12.5，25，50；細胞存活率145.10％，133.02％，129.95％，141.67％；圖4.CL-OHP(ug/ml)0.625，1.25，2.5，5細胞存活率113.62％，119.38％，129.78％，169.93％；100ng/LT+L-OHP(ug/ml)0.625，1.25，2.5，5細胞存活率144.98％，145.33％，158.70％，155.17％；圖4.DADM(ug/ml)0.00390625，0.015625，0.0625，0.25，1；細胞存活率95.22％，91.96％，87.19％，55.10％，39.92％；100ng/LT+DM(ug/ml)0.00390625，0.015625，0.0625，0.25，1；細胞存活率193.94％，186.10％，171.62％，68.05％，43.69％；圖4.EEpi-ADM(ug/ml)0.0032，0.016，0.08，0.4，2；細胞存活率87.88％，86.68％，73.79％，73.21％，71.15％；100ng/LT+Epi-ADM(ug/ml)0.0032，0.016，0.08，0.4，2；細胞存活率89.59％，79.64％，77.97％，75.52％，75.30％；圖4.F5-FU(ug/ml)0.00390625，0.015625，0.0625，0.25，1；細胞存活率62.41％，69.78％，90.32％，98.82％，87.23％；100ng/LT+5-FU(ug/ml)0.00390625，0.015625，0.0625，0.25，1；細胞存活率146.08％，144.77％，131.53％，128.77％，119.55％；圖4.GMMC(ug/ml)0.0001，0.001，0.01，0.1；細胞存活率77.50％，76.87％，79.51％，88.98％；
100ng/LT+MMC(ug/ml)0.0001，0.001，0.01，0.1；細胞存活率87.96％，82.41％，79.94％，80.22％；圖4.HCTX(ug/ml)62.5，125，250，500，1000；細胞存活率90.22％，70.81％，66.64％，65.50％，37.23％；100ng/LT+CTX(ug/ml)62.5，125，250，500，1000；細胞存活率195.38％，173.46％，151.25％，104.55％，51.71％；圖4.IVCR(ug/ml)0.0001，0.001，0.01，0.1細胞存活率91.39％，92.29％，96.42％，99.35；100ng/LT+VCR(ug/ml)0.0001，0.001，0.01，0.1細胞存活率80.31％，79.80％，77.75％，74.99％；圖4.JVNR(ug/ml)0.008，0.04，0.2，1，5；細胞存活率76.09％，74.49％，72.38％，69.15％，67.55％；100ng/LT+VNR(ug/ml)0.008，0.04，0.2，1，5；細胞存活率85.62％，84.32％，82.45％，78.59％，77.41％；具體實施方式
如本文所用，術(shù)語“淋巴毒素”、“LT”、“LTα”、“TNFβ”可互換使用，意指淋巴毒素LTα，包括來源于人、鼠、豬、馬或牛的淋巴毒素。較佳地，是人淋巴毒素。此外，淋巴毒素可以是具有天然野生型序列的LT，也可以是具有突變序列(相對野生型序列而言)的衍生型或重組的LT。
本發(fā)明的LT突變體和藥物組合物的給藥方式?jīng)]有特別限制，可以通過口服、局部、非腸道給藥，例如肌肉、靜脈、或皮下注射，或吸入噴霧等方式給藥。優(yōu)選方式是靜脈注射給藥。
當(dāng)本發(fā)明中的LT突變體以片劑或膠囊形式口服時，劑量對于平均體重60-70公斤的成人而言在約1ug到1000ug范圍內(nèi)，或以注射劑方式非腸道給藥，劑量約為1ug到500ug，可以每天一次或分幾次給藥。藥物組合物的單元劑量通常包括范圍為1ug-500ug的活性成分，典型地是1ug、5ug、10ug、25ug、50ug、100ug、200ug、300ug、400ug、500ug。
用本發(fā)明組合物治療具體病癥時所用的治療活性成分的數(shù)量和給藥方案，取決于多種因素，包括體重、年齡、性別、必然的醫(yī)學(xué)癥狀、疾病輕重、給藥途徑及頻率。這可以由醫(yī)務(wù)人員確定。
本發(fā)明中采用的細胞株，包括BGC-823(胃腺癌)、NCI-H157(非小細胞肺腺癌)、SW480(結(jié)腸癌)、SK-BR-3(轉(zhuǎn)移性乳腺腺癌)、A375(黑色素瘤)、Hep2(喉癌)、HeLa(宮頸癌)7種上皮來源的腫瘤細胞，Raji(非霍奇金淋巴瘤)、Ramos(非霍奇金淋巴瘤)2種骨髓來源的腫瘤細胞購于中國科學(xué)院細胞庫。
本發(fā)明中采用的化療藥物，包括卡鉑(CBDCA)、順鉑(CDDP)、奧沙利鉑(L-OHP)、阿霉素(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、長春新堿(VCR)、絲裂霉素(MMC)、環(huán)磷酰胺(CTX)、長春瑞濱(VNR)購于Sigma公司，表阿霉素(epi-ADM)購于Calbiochem公司。細胞培養(yǎng)基RPMI-1640培養(yǎng)基為Invitrogen公司產(chǎn)品，其他試劑為國產(chǎn)分析純試劑。
本發(fā)明采用的重組人淋巴毒素為LT28-171，是野生型淋巴毒素氨基末端截去27個氨基酸的產(chǎn)物，其置備方法參見的中國專利CN00111884.6記載的方法制備。
制備的淋巴毒素可用水、生理鹽水、細胞培養(yǎng)液等溶解和稀釋，這可以由實驗人員確定。
下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克隆實驗室手冊(New YorkCold Spring HarborLaboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
通用方法BGC-823(胃腺癌)、NCI-H157(非小細胞肺腺癌)、SW480(結(jié)腸癌)、SK-BR-3(轉(zhuǎn)移性乳腺腺癌)、A375(黑色素瘤)、Hep2(喉癌)、HeLa(宮頸癌)7種上皮來源的腫瘤細胞，Raji(非霍奇金淋巴瘤)、Ramos(非霍奇金淋巴瘤)2種骨髓來源的腫瘤細胞，分別以1.0×104細胞/孔接種96孔板，用RPMI-1640培養(yǎng)基，在37℃、5％CO2培養(yǎng)24h后加入藥物。
藥物處理實驗分為以下4組(a)化療藥物組卡鉑(CBDCA)、順鉑(CDDP)、奧沙利鉑(L-OHP)、阿霉素(ADM)、表阿霉素(epi-ADM)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、絲裂霉素(MMC)、環(huán)磷酰胺(CTX)、長春新堿(VCR)、長春瑞濱(VNR)共10種化療藥物，各自稀釋成系列濃度，根據(jù)每種藥物的特性和所施加的細胞系的特點，通過預(yù)試驗確定加藥濃度，具體見實施例；(b)淋巴毒素組單加100ng/ml的淋巴毒素；(c)淋巴毒素+化療藥物組100ng/ml的LT與化療藥物按(a)項確定的濃度聯(lián)合加藥；(d)空白對照組加等量培養(yǎng)液。
繼續(xù)培養(yǎng)48h后用MTS染色法檢測細胞存活情況。獲得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，協(xié)同作用、疊加作用確定按Basic toxicology(2nd Ed.1991，69-70)公開的以下公式計算Definitions of drug combination effects

SFsurviving fraction；a，bdrugs；(a+b)drugs incombinationSynergistic意為協(xié)同，additive意為疊加，subadditive意為亞疊加，antagonistic意為拮抗。
第一部分rhLT對上皮來源的腫瘤的化療增敏作用實施例1.rhLT對BGC-823(胃癌)細胞的化療增敏作用實驗結(jié)果見表1?？ㄣK(CBDCA)、順鉑(CDDP)、奧沙利鉑(L-OHP)、阿霉素(ADM)在3個劑量組都呈現(xiàn)協(xié)同作用；5-FU在高劑量組、中間劑量組呈現(xiàn)協(xié)同作用；絲裂霉素(MMC)僅在高劑量組呈現(xiàn)協(xié)同作用；其他藥物組為疊加或亞疊加作用。
表1 rhLT對BGC-823(胃癌)細胞的化療增敏作用







實施例2.rhLT對NCI-H157(非小細胞肺腺癌)細胞的化療增敏作用實驗結(jié)果見圖1及表2?？ㄣK(CBDCA)、順鉑(CDDP)、奧沙利鉑(L-OHP)在3個劑量組都呈現(xiàn)協(xié)同作用；阿霉素(ADM)在高劑量組、中間劑量組呈現(xiàn)協(xié)同作用；其他藥物組為疊加或亞疊加作用。
表2、rhLT對NCI-H157(非小細胞肺腺癌)細胞的化療增敏作用







實施例3.rhLT對SW480(結(jié)腸癌)細胞的化療增敏作用實驗結(jié)果見表3?？ㄣK(CBDCA)、順鉑(CDDP)在3個劑量組都呈現(xiàn)協(xié)同作用；奧沙利鉑(L-OHP)高劑量組、中間劑量組呈現(xiàn)協(xié)同作用；阿霉素(ADM)在高劑量組、低劑量組呈現(xiàn)協(xié)同作用；其他藥物組為疊加作用。
表3、rhLT對SW480(結(jié)腸癌)細胞的化療增敏作用





實施例4.rhLT對SK-BR-3(轉(zhuǎn)移性乳腺腺癌)細胞的化療增敏作用實驗結(jié)果見圖2及表4。卡鉑(CBDCA)、順鉑(CDDP)、奧沙利鉑(L-OHP)、表阿霉素(epi-ADM)在3個劑量組都呈現(xiàn)協(xié)同作用；阿霉素(ADM)僅在在高劑量組呈現(xiàn)協(xié)同作用；絲裂霉素(MMC)在高劑量組、低劑量組呈現(xiàn)協(xié)同作用；其他藥物組為疊加或亞疊加作用。
表4、rhLT對SK-BR-3(轉(zhuǎn)移性乳腺腺癌)細胞的化療增敏作用






實施例5.rhLT對A375(黑色素瘤)細胞的化療增敏作用實驗結(jié)果見表5。L-OHP3個劑量組、CDDP中間劑量組和低劑量組、CBDCA高劑量組呈現(xiàn)協(xié)同作用；MMC中間劑量組和低劑量組呈現(xiàn)協(xié)同作用；其他藥物組為疊加或亞疊加作用。
表5、rhLT對A375(黑色素瘤)細胞的化療增敏作用





實施例6.rhLT對Hep2(喉癌)細胞的化療增敏作用實驗結(jié)果見表5。ADM、5-FU3個劑量組呈現(xiàn)協(xié)同作用；CBDCA、L-OHP的高劑量組和中間劑量組以及CDDP、epi-ADM的高劑量組呈現(xiàn)協(xié)同作用。其他藥物組為疊加作用。
表6、rhLT對Hep2(喉癌)細胞的化療增敏作用







實施例7.rhLT對HeLa(宮頸癌)細胞的化療增敏作用CDDP高劑量組、CBDCA 3個劑量組、L-OHP高劑量組和中間劑量組呈現(xiàn)協(xié)同作用；5-FU 3個劑量組呈現(xiàn)協(xié)同作用，其他藥物組為疊加作用。
表7、rhLT對HeLa(宮頸癌)細胞的化療增敏作用







第二部分rhLT對骨髓來源腫瘤細胞的化療增敏作用實施例8.rhLT對Raji(非霍奇金淋巴瘤)細胞的化療增敏作用實驗結(jié)果見圖3及表8。所用藥物均未表現(xiàn)協(xié)同作用。CBDCA和5-FU的高劑量組、ADM的3個劑量組呈現(xiàn)拮抗作用，其他藥物組為疊加作用。
表8、rhLT對Raji(非霍奇金淋巴瘤)細胞的化療增敏作用





實施例9.rhLT對Romos(非霍奇金淋巴瘤)細胞的化療增敏作用實驗結(jié)果見圖4及表9。所用藥物均未表現(xiàn)協(xié)同作用。CDDP低劑量組、VNR高劑量組、ADM高劑量組和低劑量組以及CTX、MMC的高劑量組和中間劑量組，以及5-FU的3個劑量組呈現(xiàn)拮抗作用，其他藥物組為疊加作用。
表9、rhLT對Romos(非霍奇金淋巴瘤)細胞的化療增敏作用






權(quán)利要求
1.淋巴毒素在制備增加上皮來源的腫瘤對化療藥物敏感性的藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，其中所說的淋巴毒素包括來源于人、鼠、豬、馬或牛的淋巴毒素。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，其中所說的淋巴毒素為來源于人的淋巴毒素及其衍生物。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，其中所說的淋巴毒素包括LT1-171、LT24-171、LT28-171。
5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，其中所說的上皮來源的腫瘤包括非小細胞肺癌、乳腺癌、喉癌、結(jié)直腸癌、子宮頸癌、黑色素瘤或胃癌。
6.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，其中所說的化療藥物包括鉑類藥物、蒽環(huán)類藥物、5-FU或絲裂霉素。
7.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，其中所說的化療藥物為鉑類抗腫瘤藥物。
8.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，其中所說的化療藥物為卡鉑、順鉑或奧沙利鉑。
9.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，其中所說的增加上皮來源的腫瘤對化療藥物敏感性的藥物指在對患有上皮來源腫瘤患者在化療前、同時或化療后給與，以提高患者對化療藥物耐受性或增加化療藥物療效的藥物。
全文摘要
本發(fā)明屬蛋白質(zhì)工程和制藥領(lǐng)域，具體涉及淋巴毒素在腫瘤治療領(lǐng)域的應(yīng)用。本發(fā)明公開了一種淋巴毒素的用途，淋巴毒素作為化療藥物的增敏劑，用于治療上皮來源的腫瘤。淋巴毒素與化療藥物聯(lián)合使用，對于上皮來源的腫瘤細胞的殺傷效果具有明顯的協(xié)同作用，其中與鉑類藥物的協(xié)同作用最為顯著。通過聯(lián)合使用一線化療藥物和淋巴毒素，可以提高療效或者在保證療效的前提下降低化療藥物的劑量，從而減輕化療藥物帶來的毒副作用，改善病人生活質(zhì)量。
文檔編號A61K45/00GK101073665SQ200610026628
公開日2007年11月21日 申請日期2006年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月17日
發(fā)明者劉彥君, 沈毅君, 楊彤, 王婧, 吳勁松, 王征, 許燕, 王羅春 申請人:上海復(fù)旦張江生物醫(yī)藥股份有限公司