專利名稱：積雪酸在制備預(yù)防或治療心肌纖維化的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及積雪酸在制藥中的應(yīng)用，尤其涉及積雪酸在制備預(yù)防或治療心肌纖維化的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
積雪草是一種植物藥，積雪苷是從積雪草中提取的物質(zhì)，也稱為積雪甙(Asiaticoside)，結(jié)構(gòu)見式II所示 式II研究發(fā)現(xiàn)積雪苷治療皮膚粘膜損傷后，具有纖維疤痕過增生作用。該化合物作為相關(guān)用途的化妝品和藥品均有上市。在這些產(chǎn)品中積雪苷是其主要活性成份。積雪酸是積雪苷脫糖后即形成的苷元，結(jié)構(gòu)如式I所示。
式I

發(fā)明內(nèi)容
在研究積雪苷對(duì)心肌纖維化的過程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)積雪苷在體外實(shí)驗(yàn)時(shí)對(duì)培養(yǎng)的纖維母細(xì)胞的纖維蛋白的形成影響很??；而在積雪苷的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究中，發(fā)現(xiàn)口服積雪苷后積雪酸(Asiatic acid)在體內(nèi)濃度較高。當(dāng)在培養(yǎng)基中加入積雪酸后，發(fā)現(xiàn)積雪酸對(duì)培養(yǎng)的纖維母細(xì)胞的纖維蛋白的形成有一定影響。因此，積雪苷進(jìn)入人體后可能是以積雪酸的形式發(fā)生作用，因而如果積雪酸具有抗心肌纖維化作用，則可以直接應(yīng)用積雪酸作為活性成份制成藥物。在臨床應(yīng)用時(shí)，積雪酸藥物能直接發(fā)揮藥效，起到抗心肌纖維化的作用。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于通過設(shè)計(jì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法，研究積雪酸的抗心肌纖維化作用。
本發(fā)明的目的是提供積雪酸在制備預(yù)防或治療心肌纖維化的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明應(yīng)用大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，應(yīng)用市售的積雪酸為樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
本發(fā)明通過下列具體實(shí)驗(yàn)研究積雪酸的抗心肌纖維化作用。
本發(fā)明應(yīng)用自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，是按下列文獻(xiàn)(Kuijpers MH和de Jong W在Spontaneous hypertension in the fawn-hoodedrata cardiovascular disease model.J Hypertens Suppl.1986 Oct；4(3)S41-4)方法進(jìn)行的。該方法提出fawn-hooded rat能在5周齡即可出現(xiàn)自發(fā)性高血壓，隨著年齡增長(zhǎng)而增高，在1歲齡時(shí)可達(dá)180-240mmHg，并伴隨著心臟、腎臟、肝臟、脾臟等器官的重量增加，組織病理學(xué)可見心肌纖維化以及心肌梗死等改變。以后曾有很多學(xué)者把SHR應(yīng)用于高血壓導(dǎo)致心肌纖維化的研究中，如文獻(xiàn)(Barone FC，Campbell WG Jr，Nelson AH，F(xiàn)euerstein GZ Carvedilolprevents severe hypertensive cardiomyopathy and remodeling.J Hypertens.1998Jun；16(6)871-84，以及Huikeshoven M，Van Der Wal AC，Tukkie R，Beek JF.The old spontaneously hypertensive rat as a model for transmyocardial laserrevascularisation research.Lasers Med Sci.2003；18(1)12-8)。故自發(fā)行高血壓大鼠是研究高血壓導(dǎo)致心肌纖維化的一個(gè)很可靠的模型。
本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于積雪酸具有抗心肌纖維化作用，因此，積雪酸作為活性成份可用于制備抗心肌纖維化的藥物。由于積雪酸單體可以從積雪草中直接提取，而且提取率較高，價(jià)格不貴，所以積雪酸的應(yīng)用有很好的開發(fā)前景。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)敘述。
實(shí)施例1材料與方法1動(dòng)物及材料SHR大鼠，雄性，由上海高血壓研究所提供；MRB-IIIA型電腦大鼠血壓心率測(cè)定儀，由上海高血壓研究所制造2樣品名稱積雪酸 廣西昌州天然產(chǎn)物開發(fā)有限公司或上海醫(yī)藥工業(yè)研究院制造，溶于蒸餾水中卡托普利 濟(jì)南東風(fēng)制藥有限公司，溶于生理鹽水3劑量 積雪酸3g/kg、9g/kg、27g/kg三個(gè)劑量實(shí)驗(yàn)方法50只12周齡雄性SHR大鼠隨機(jī)分成5組，每組10只①大劑量積雪酸組，給予積雪酸27g/kg；②中劑量積雪酸組，給予積雪酸9g/kg；③小劑量積雪酸組，給予積雪酸3g/kg；④陽性藥組，給予卡托普利35mg/kg；⑤SHR空白對(duì)照組，給予等體積的蒸餾水。各組均通過灌胃給藥28天，實(shí)驗(yàn)結(jié)束，稱量體重及測(cè)血壓后處死。
1.血壓測(cè)量 在大鼠清醒狀態(tài)下無創(chuàng)性測(cè)定尾動(dòng)脈收縮壓及心率，每周測(cè)定1次。
2.左心室重量和體重的測(cè)定 動(dòng)物稱重(BW)，斷頭處死，取出心臟，先剪去周圍大血管，吸干血液，稱全心重(HW)，再剪去心房和右心室游離壁，稱取左心室重量(LVM)，計(jì)算全心重、左心室重與體重比(HW/BW、LVM/BW)，以確定左心室肥厚的程度。
3.心肌膠原形態(tài)學(xué)的觀察及定量分析 在心肌冠狀溝下約1mm處，取左心室心肌橫切面。用Boum’s液固定，石蠟包埋，制片，切片厚約6μm。苦味酸天狼星紅染色法使膠原特殊染色，心肌細(xì)胞呈黃色，膠原呈紅色。采用光學(xué)顯微鏡測(cè)定，每個(gè)心肌切面內(nèi)膜和外膜各取固定上下左右四個(gè)視野，用計(jì)算機(jī)圖像分析，通過灰度調(diào)節(jié)區(qū)別膠原和非膠原成分，測(cè)量心肌切片的膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF＝心肌膠原面積/所測(cè)視野面積)。心肌小動(dòng)脈為小動(dòng)脈周圍膠原和小動(dòng)脈面積之比。
結(jié)果1.積雪酸對(duì)SHR血壓的影響 治療4周后，卡托普利能明顯降低SHR大鼠收縮壓(SBP)，積雪酸對(duì)SHR大鼠收縮壓無明顯影響。
2.積雪酸對(duì)SHR左心室肥厚的影響 各組大鼠在用藥后的體重(BW)、全心重(HW)、左心室重量(LVM)、全心重/體重(HW/BW)、左心室重/體重(LVM/BW)見表1。與空白對(duì)照組比較，各用藥組體重?zé)o明顯改變(P＞0.05)；全心重(HW)、左心室重量(LVM)明顯降低(P＜0.01)，大中小劑量組間呈現(xiàn)量效關(guān)系。這說明積雪酸能在一定程度上抑制SHR左心室肥厚增加。
表1 積雪酸治療對(duì)SHR大鼠心肌肥厚參數(shù)的影響(x±s，n＝10)

與空白組比較，bP＜0.05，cP＜0.01；與大劑量組比較，eP＜0.05，fP＜0.013.積雪酸對(duì)SHR大鼠心肌纖維化的作用 各組大鼠在用藥后的心內(nèi)、外膜以及小動(dòng)脈心肌膠原容積分?jǐn)?shù)見表2。與空白對(duì)照組比較，各用藥組心室內(nèi)、外膜及心肌小動(dòng)脈周圍的膠原均有減少(P＜0.05)，大中小劑量組間呈現(xiàn)量效關(guān)系，表明積雪酸治療對(duì)SHR大鼠的心肌纖維均有顯著的抑制作用。
表2 積雪酸對(duì)SHR心內(nèi)、外膜以及小動(dòng)脈心肌膠原容積分?jǐn)?shù)的影響(x±s，n＝10)

與空白組比較，bP＜0.05，cP＜0.01；與大劑量組比較，eP＜0.05，fP＜0.01結(jié)論根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)表明積雪酸作為積雪酸在體內(nèi)的活性成分，具有抗心肌纖維化的作用。而本實(shí)驗(yàn)利用積雪酸直接給予自發(fā)性高血壓誘發(fā)心肌纖維化的大鼠模型實(shí)驗(yàn)，證明積雪酸確有抗心肌纖維化的效果。
權(quán)利要求
1.積雪酸在制備預(yù)防或治療心肌纖維化的藥物中的應(yīng)用，其中該積雪酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)如式I所示 式I。
全文摘要
本發(fā)明公開了積雪酸在制備預(yù)防或治療心肌纖維化的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過用積雪酸對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)心肌纖維化的影響，證實(shí)了積雪酸具有抗心肌纖維化的作用。因而，積雪酸可作為活性成份用于制備抗心肌纖維化的藥物。
文檔編號(hào)A61P9/00GK101032495SQ200610024409
公開日2007年9月12日 申請(qǐng)日期2006年3月6日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月6日
發(fā)明者徐智儒, 顧性初, 劉全海, 趙帥, 劉珉宇 申請(qǐng)人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院