專利名稱：含受體配體的發(fā)酵乳或蔬菜蛋白及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本方明涉及對(duì)含有受體配體的組合物的利用，制備該受體配體的方法包括用至少一種乳酸菌對(duì)包括動(dòng)物乳或蔬菜蛋白在內(nèi)的食物材料進(jìn)行發(fā)酵，以獲得含活性成分的發(fā)酵的食物材料。發(fā)酵的食物材料能影響特異性的腎上腺素受體(adrenorecepter)和/或5-羥色胺(5-HT，serotonin)受體，可用于如降低和/或穩(wěn)定哺乳動(dòng)物的心率，以及治療和/或減輕哺乳動(dòng)物的勃起功能障礙及治療和/或減輕哺乳動(dòng)物的良性前列腺增生(BPH)。
背景技術(shù)：
低的靜止心率與改善的存活率有關(guān)已明確得到一些研究的支持。已有一些研究表明，在一般人群中，較高的靜止心率與死亡率的增加有很強(qiáng)的正關(guān)聯(lián)性。已觀察到靜止心率超過88次/分鐘(bpm)的男性的死亡率的增加是靜止心率低于65bpm的男性組的兩到三倍。心率不僅與心血管導(dǎo)致的死亡率相關(guān)，而且視乎也與其他疾病如癌癥導(dǎo)致的死亡相關(guān)。Zaza等提出了通常在低心率和期望壽命之間存在某種關(guān)系的假設(shè)(Zaza et al.，2001)。
當(dāng)今，在工業(yè)化國家中，最常見的心血管疾病是冠狀動(dòng)脈疾病(CAD)或冠狀心臟疾病(CHD)，它們均是心臟病的主要誘因。CAD和CHD是在心臟表面的動(dòng)脈發(fā)生“硬化”。這里的術(shù)語“硬化”是指導(dǎo)致動(dòng)脈變得狹窄和僵硬以致血液的自由流動(dòng)受阻的狀況。
較低的心率與較好的心臟狀況相關(guān)，特別是與降低心律不齊的危險(xiǎn)有關(guān)。較高的心率可能反映出較高的新陳代謝速率和較低的迷走神經(jīng)緊張(vagal tone)，從而增加局部缺血的危險(xiǎn)。此外，較高的心率還可能導(dǎo)致心室功能惡化(Lombardi，F(xiàn) in Zaza et al.，2001)。因此，高心率成為與CAD或CHD相關(guān)的一個(gè)重要的危險(xiǎn)因子就不足為奇了。通常CAD或CHD都是用藥物進(jìn)行治療。這些藥物落入以下不同的類別，例如1.β-阻滯劑，其通過阻滯某些化學(xué)物質(zhì)與心臟中的β-受體結(jié)合，而降低心臟的負(fù)荷。
2.硝酸鹽，其直接作用于血管，致使血管松弛從而容許更多的富氧血抵達(dá)心臟。
3.鈣通道阻滯劑，其提高通過心臟的血流量，并可通過阻滯鈣離子傳信給血管進(jìn)行收縮或緊縮，而降低心臟負(fù)荷。
4.抗血小板劑(例如阿司匹林)，其通過降低血小板(存在于血液中微粒子)凝聚形成血塊的能力，而抑制血塊的形成。
在疾病發(fā)展的早期進(jìn)行高心率的預(yù)防可作為藥物治療高心率的替代療法。大量的由食物衍生的生物活性的化合物目前被認(rèn)為對(duì)總體幸福指數(shù)或促進(jìn)健康有利。
已經(jīng)知道用乳酸菌(LAB)對(duì)乳進(jìn)行發(fā)酵可產(chǎn)生抗高血壓的效果，這得利于乳酸菌的蛋白分解活性，其使得肽從乳的酪蛋白中得以釋放。對(duì)此的說明可參見如EP821968(Calpis Food Industry)，EP1016709(CalpisFood Industry)和WO0132836(Valio Ltd.)。
Yamamoto等(1996)的文章揭露了用含瑞士乳桿菌(Lactobacillushelveticus)和釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的發(fā)酵劑發(fā)酵的乳降低了心臟的收縮壓和舒張壓，然而，在包括脈沖率在內(nèi)的其他指標(biāo)中卻未觀察到有何變化。
WO0185984(Davisco International Foods，Inc.)也指出了肽具有抗高血壓的作用(降低血壓的作用)，其中的肽來自對(duì)乳清蛋白的酶消化。另外，還對(duì)心率和血壓的變化進(jìn)行了測量。觀察到明顯的平均動(dòng)脈血壓的降低，并且，除了在75mg/kg劑量下引起心率降低之外，在30和150mg/kg的劑量下，沒有觀察到明顯的心率反應(yīng)的差別。
如在Yamamoto等(1996)的文章中所描述的，F(xiàn)uglsang，A.，等(2002)的文章也描述了發(fā)酵乳的肽具有抗高血壓的功性。然而，在第3569頁，第1欄2段的關(guān)于測試樣品的部分寫到“與未發(fā)酵的乳(即安慰劑)相比，其心率效果是不明顯的”，這意味著其對(duì)心率的影響被認(rèn)為是不明顯的。
上述提及的Yamamot等(1996)的文章和Fuglsang(2002)的文章，以及WO0185984文件中認(rèn)為盡管乳酸菌發(fā)酵的制品具有降低血壓的功性，但卻沒有理由相信其也具有降低心率的功性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的問題是提供一種可替換的組合物，以用于降低心率，和/或減輕和/或治療良性前列腺增生(BPH)和/或勃起功能障礙。
解決方案是基于本發(fā)明的發(fā)明人出乎意料的發(fā)現(xiàn)，即通過用乳酸菌(LAB)發(fā)酵食物材料，優(yōu)選發(fā)酵乳，結(jié)果所得的活性組分是若干種特異性腎上腺素-受體和5-羥色胺-受體的配體，并且對(duì)上述疾病有作用。
因此，本發(fā)明的第一方面涉及本發(fā)明的組合物在制造降低哺乳動(dòng)物心率的制品中的應(yīng)用，得到該組合物的方法包含用至少一種乳酸菌對(duì)包括動(dòng)物乳或蔬菜蛋白在內(nèi)的食物材料進(jìn)行發(fā)酵，所獲得的發(fā)酵的食物材料中包含至少一種組分是腎上腺素受體或5-羥色胺受體的配體。
接下來另一有趣的方面涉及到上述本發(fā)明第一方面在治療和/或預(yù)防良性前列腺增生(BPH)和/或勃起功能障礙中的應(yīng)用。
本發(fā)明的再一方面提供了發(fā)酵的食物材料，其具有降低心率功性、和/或用于預(yù)防和/或治療哺乳動(dòng)物中的良性前列腺增生(BPH)和/或勃起功能障礙，且是經(jīng)至少一種乳酸菌菌株對(duì)食物材料進(jìn)行發(fā)酵而獲得，其中包含至少一種組分是腎上腺素受體或5-羥色胺受體的配體。其中，用瑞士乳桿菌菌株CHCC5951(DSM 14998)和/或嗜熱鏈球菌對(duì)食物材料發(fā)酵是優(yōu)選的實(shí)施方式。
含活的細(xì)菌的食物常常被認(rèn)為對(duì)吸收特別有益(例如，益生菌)。因此，本發(fā)明的又一方面提供了含活的細(xì)菌的發(fā)酵的食物材料，其具有降低心率的功性，和/或可用于預(yù)防和/或治療哺乳動(dòng)物中良性前列腺增生(BPH)和/或勃起功能障礙。在一優(yōu)選的實(shí)施方式中，發(fā)酵的食物制品含有的活的細(xì)菌細(xì)胞是瑞士乳桿菌菌株DSM 14998和/或嗜熱鏈球菌或它們的突變體。
如劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)(例2)中所示，如果組合物是用更高濃度的降低心率的化合物制成，則有可能獲得更大的反應(yīng)。因此，本發(fā)明有趣的一方面是提供了從發(fā)酵的食物材料中分離出的活性成分。
在另一方面，本發(fā)明描述了發(fā)酵的食物材料或從中分離出的作為腎上腺素受體和/或5-羥色胺受體的α-或β-家族的配體的組分在制備治療或減輕冠狀動(dòng)脈疾病(CAD)或冠狀心臟疾病(CHD)，例如心絞痛、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、中風(fēng)、心肌梗塞、腦梗塞和血管重建術(shù)后的再狹窄、心律不齊、快速性心律失常、慢性充血性心力衰竭(CHF)、主動(dòng)脈瓣關(guān)閉不全、慢性腎功能衰竭、異常脂血癥、異常脂蛋白血癥，和/或治療和/或減輕良性前列腺增生(BPH)和/或勃起功能障礙中的應(yīng)用。
定義在對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)描述前，先給出與本發(fā)明主要方面相關(guān)的特定術(shù)語的定義。
術(shù)語“用于降低哺乳動(dòng)物的心率”是指相比于施用在此描述的組合物之前的心率的降低。優(yōu)選的是在進(jìn)行人體實(shí)驗(yàn)前，心率降低的功性應(yīng)當(dāng)已在動(dòng)物模型中得以確認(rèn)。在一種有用的動(dòng)物模型中，用強(qiáng)飼法給自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)施用發(fā)酵的制品，并在強(qiáng)飼后用遙感勘測法確定尚有意識(shí)的SHR在24小時(shí)內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的心率。安慰劑應(yīng)為相應(yīng)的未發(fā)酵的食物材料，例如未發(fā)酵的乳。要獲得更詳細(xì)的信息，請(qǐng)參見實(shí)施例1。另外，也可用實(shí)施例4中描述的基于正常血壓威斯達(dá)大鼠(Wistar rats)的模型來評(píng)估心率的降低。
在本文中，術(shù)語受體的“配體”被用來描述可結(jié)合到受體，從而可起到興奮作用(“興奮劑”)或抑制作用(“拮抗劑”)的組分。最終其可為受體競爭。
“腎上腺素受體(adrenoreceptor)”也被稱為“腎上腺素能受體(Adrenergic Receptor)”，是去甲腎上腺素(noradrenaline)和腎上腺素(adrenalin)的受體。
在本文里，術(shù)語“5-羥色胺受體”是指在Peroutka(1979)中描述的結(jié)合到[3H]5-羥基色胺上的受體。
術(shù)語“乳酸菌”是指由革蘭氏陽性、觸酶陰性、非運(yùn)動(dòng)性、微嗜氧菌或厭氧菌組成的一組細(xì)菌，它們對(duì)糖進(jìn)行發(fā)酵，所產(chǎn)生的酸中主要產(chǎn)物為乳酸，并含有醋酸、甲酸和丙酸。乳酸菌優(yōu)選為厚壁菌門，更優(yōu)選為桿菌種，進(jìn)一步優(yōu)選為乳酸桿菌。按此順序，優(yōu)選的乳酸菌是乳酸桿菌菌群種的細(xì)菌，更優(yōu)選的是乳酸菌屬的細(xì)菌。優(yōu)選的是瑞士乳桿菌菌株。關(guān)于分類學(xué)的進(jìn)一步詳細(xì)信息可參見(Bergey’s Manual of SystematicBacteriology，Second Edition，Volume 1The Archea and the DeeplyBranching and Phototrophic Bacteria)。在工業(yè)上用的最多的乳酸菌是存在于二丁酮鏈球菌屬(Lactococcus spp.)、糞鏈球菌屬(Streptococcusspp.)乳酸桿菌屬(Lactobacillus spp.)、明串珠菌屬(Leuconostocspp.)、乳酸片球菌屬(Pediococcus spp.)、表皮短桿菌屬(Brevibacterium spp.)和初油酸菌屬(Propionibacterium spp.)中的乳酸菌。此外，屬于嚴(yán)格厭氧菌群的產(chǎn)乳酸菌的雙歧桿菌(Bifidobacteria)，即常被單獨(dú)用作食物發(fā)酵劑或與乳酸菌結(jié)合使用的培養(yǎng)菌雙歧桿菌屬(Bifidobacterium spp.)通常被包括在乳酸菌中。
本發(fā)明的實(shí)施例描述如下，但僅作為示例目的。
發(fā)明的詳細(xì)揭示食物材料食物材料應(yīng)當(dāng)含有動(dòng)物乳蛋白或蔬菜蛋白。
優(yōu)選的食物材料含有動(dòng)物乳蛋白，例如乳蛋白組分，例如全脂或脫脂動(dòng)物乳或乳酪蛋白。最優(yōu)選的乳是來自牛(黃牛，Bos taurus)的乳。
優(yōu)選的含有蔬菜蛋白的食物材料，例如玉米、玉米蛋白、小麥、小麥蛋白、大豆、脫脂大豆或大豆蛋白。
含有至少一種組分為腎上腺素受體或5-羥色胺受體的拮抗劑的制品，其中的腎上腺素受體或5-羥色胺受體可被用于降低心率，和/或治療和/或減輕良性前列腺增生(BPH)和/或勃起功能障礙。
如在實(shí)施例5和6中所描述的，使用在此描述的乳酸菌，在發(fā)酵后就直接提供了有用量的活性成分，該活性成分是特異性腎上腺素受體或5-羥色胺受體的配體。
對(duì)各種各樣的腎上腺素受體的亞型已有記述。它們被歸類為三族受體β-受體(包括β-1和β-2)，α-1受體和α-2受體。這些受體均為7次跨膜G-蛋白偶聯(lián)的受體，以不同的方式連接到腺苷酸環(huán)化酶(adenylatecyclase，AC)和磷酸肌醇酶(phosphoinosisitidase)第二信使通道上。兒茶酚胺荷爾蒙(catecholamine hormones)和神經(jīng)傳遞素(neurotransmitters)去甲腎上腺素(norepinepherine，noradrenaline)和腎上腺素腎上腺素(epinephrine，adrenaline)是腎上腺素的受體的正常生理性拮抗劑。并且，與心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)有關(guān)的許多正常的和失常的生理性反應(yīng)是通過腎上腺素的受體來介導(dǎo)。
α-腎上腺素的受體是交感神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)，特別是那些涉及心血管自體調(diào)節(jié)的重要介導(dǎo)物質(zhì)。這里的心血管自體調(diào)節(jié)例如，動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞收縮和心臟收縮，它們均可導(dǎo)致血壓和心率的增加。另外，β-腎上腺素的受體在調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)中也扮演著重要的角色。對(duì)心臟收縮性的刺激是通過如β-1腎上腺素的受體和β-2腎上腺素的受體的活化而介導(dǎo)的，而β-1腎上腺素的受體引起心率的增加。因此，這些受體的拮抗劑可被用作降低或穩(wěn)定心率。
盡管5-羥色胺受體的拮抗劑被認(rèn)為與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的許多活動(dòng)有關(guān)，它們也被認(rèn)為參與了心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。經(jīng)臨床研究發(fā)現(xiàn)，5-羥色胺受體的拮抗劑酮色林(ketaserin)是有效的抗高血壓劑。但是由于酮色林也可阻滯α-1腎上腺素受體(adreno receptor)(Borne，1994)，抗高血壓的效果可能不能完全歸功于酮色林的5-羥色胺受體的拮抗活性。
因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式是關(guān)于包含了選自含α-腎上腺素受體、β-腎上腺素受體、和5-羥色胺受體的組中的受體的拮抗劑的組合物在制備降低哺乳動(dòng)物的心率的制品中的應(yīng)用。
由實(shí)施例5和6可以看到，根據(jù)本發(fā)明，牛乳發(fā)酵后產(chǎn)生的化合物是一系列的α-和β-腎上腺素能受體，包括α1A-、α1B-、α2A(h)-、α2B(h)-、α2C(h)-、β1(h)-、β2(h)-、β3(h)-腎上腺素受體，甚或5-羥色胺受體的配體(很有可能是拮抗劑)。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式是關(guān)于包含了選自含α1A-、α1B-、α2A(h)-、α2B(h)-、α2C(h)-、β1(h)-、β2(h)-、β3(h)-腎上腺素受體，甚或5-羥色胺受體的組中的受體的拮抗劑的組合物的應(yīng)用。最為優(yōu)選的是包含了選自含α2A(h)-、α2B(h)-和β2(h)-腎上腺素受體的組中的受體的拮抗劑的組合物的應(yīng)用。
普遍認(rèn)為性健康和性功能是決定生活質(zhì)量高低的一項(xiàng)重要指標(biāo)。隨著人口的老年化，包括勃起功能障礙和女性性功能障礙在內(nèi)的失調(diào)越來越顯得突出。由于媒體對(duì)此現(xiàn)象廣為關(guān)注，各年齡段的男女均在尋求改善他們的關(guān)系和經(jīng)歷和諧的性生活的途徑。性功能障礙大多與糖尿病、高血壓、冠狀動(dòng)脈疾病、神經(jīng)疾病和抑郁癥等疾病有關(guān)。在部分病人中，性功能障礙會(huì)是這些疾病的征狀。此外，勃起功能障礙(ED)通常是由許多藥物的副作用導(dǎo)致的。令人驚訝的是，荷爾蒙缺乏比起糖尿病或血管病來說，并不是導(dǎo)致勃起功能障礙的常見因素。對(duì)于50歲以上的男性而言，近一半的ED病例是由血管病引起的。血管疾病包括動(dòng)脈粥樣硬化、外周血管病、心肌梗塞和動(dòng)脈高血壓。目前用于治療勃起功能障礙的口服藥物包括選擇性酶抑制劑例如西地那非(sildenafil)(枸櫞酸西地那非，sildenafilcitrate，Viagra)、鹽酸伐地那非(vardenafil HCl)(Levitra)、他達(dá)那非(Tadalafil)(Cialis)和育亨賓堿(Yohimbine)(Yohimbine，Yocon)。
通過酚妥拉明(phentolamine)和類似化合物對(duì)α1-腎上腺素受體的阻滯提高了血管擴(kuò)張劑在陰莖海綿體中的效果(Kim，2000)。具體的，早在100多年前，α-2腎上腺素的受體的拮抗劑就通過選擇性藥物如育亨賓堿(Yohimbine)(Morales，2000)，而用于治療勃起功能障礙。此外，對(duì)α-1腎上腺素的受體具有競爭性和相對(duì)選擇性阻滯作用的莫西賽利(Thymoxamine，moxisylyte)在海綿體內(nèi)注射后也有勃起產(chǎn)生(Brindley，1986)。這樣，α-1和α-2腎上腺素的受體的拮抗劑就都能用于勃起功能障礙(陽痿)的治療。
再有，本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式是關(guān)于包含了選自含α-腎上腺素受體的組中的受體的拮抗劑的組合物在制備治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的勃起功能障礙的制品中的應(yīng)用。
對(duì)于50歲以上的男性而言，近一半的ED病例是由血管病引起的。因此認(rèn)為除了含有α-1和α-2腎上腺素的受體的拮抗劑外，如果組合物還進(jìn)一步含有β-腎上腺素的受體的拮抗劑以及甚或含有5-羥色胺受體的拮抗劑并且還進(jìn)一步含有包括γ-丁酸(GABA)在內(nèi)的化合物，則在治療ED方面將顯示出優(yōu)勢。因此，本發(fā)明的一實(shí)施方式是關(guān)于包含了選自含α-腎上腺素受體、β-腎上腺素的受體和5-羥色胺受體的組中的受體的拮抗劑的組合物在制備治療或預(yù)防勃起功能障礙的制品中的應(yīng)用。制品還可進(jìn)一步包含GABA受體的拮抗劑，例如GABA本身。
良性前列腺增生(BPH)是老年男性的常見疾病。其表現(xiàn)為前列腺的大小、組成和功能的改變，并導(dǎo)致對(duì)中年和老年男子的膀胱和尿道的妨礙。主要由α-1腎上腺素的受體介導(dǎo)的前列腺平滑肌的正常伸縮性在BPH的臨床表現(xiàn)中為一關(guān)鍵因子。因此，α-1腎上腺素的受體的拮抗劑將BPH的治療劑從外科處理轉(zhuǎn)化為藥理上外來干預(yù)(Altwein，1995；Barry andRoehrborn，1997)。另外，α-2腎上腺素的受體的拮抗劑也表現(xiàn)出對(duì)BPH有有益的影響。
由實(shí)施例6可看到，在按照本發(fā)明對(duì)食物材料進(jìn)行發(fā)酵時(shí)，產(chǎn)生了一系列的α-1和α-2腎上腺素的受體的拮抗劑，它們包括α1A-、α1B-、α2A(h)-、α2B(h)-、α2C(h)-腎上腺素受體。因此，本發(fā)明的一個(gè)重要實(shí)施方式是由發(fā)酵的食物材料中獲得的組合物在制備治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的良性前列腺增生(BPH)的制品中的應(yīng)用，該發(fā)酵的食物材料中包含一種或多種選自含有α-腎上腺素受體和β-腎上腺素受體的組中的受體的拮抗劑。
本發(fā)明的特別重要的一實(shí)施方式是由發(fā)酵的食物材料中獲得的組合物的應(yīng)用，該發(fā)酵的食物材料中包含一種或多種選自含有α1A-、α1B-、α2A(h)-、α2B(h)-、α2C(h)-、β1(h)-、β2(h)-和β3(h)-腎上腺素受體和5-羥色胺受體的組中的受體的拮抗劑。特別的優(yōu)選的是含有α2A(h)-、α2B(h)-或β2(h)-腎上腺素受體的拮抗劑的制品。
如果由發(fā)酵的食物材料得到的組合物中含有更多的各種相關(guān)受體的拮抗劑，例如，如果發(fā)酵的食物材料含有至少一種組分為腎上腺素的受體的配體和至少一種組分為5-羥色胺受體的配體，或如果發(fā)酵的食物材料含有至少一種組分為α-腎上腺素受體和β-腎上腺素受體的配體，則可預(yù)期獲得更高的效率。可以預(yù)見的是，最為相關(guān)的配體類型是具有作為相應(yīng)受體的拮抗劑特征的配體。
由實(shí)施例2～5，特別是由實(shí)施例6可看出，即使存在一定的劑量依賴關(guān)系，非濃縮的發(fā)酵物中仍含有一定量的拮抗劑以產(chǎn)生對(duì)特異性受體的特異性抑制，從而可被用于預(yù)防、減輕和/或治療哺乳動(dòng)物的BPH和/或勃起功能障礙，以及降低心率。因此，根據(jù)本發(fā)明，沒有必要對(duì)發(fā)酵的食物材料作配體的進(jìn)一步的純化或濃縮即可獲得效果。故在一實(shí)施方式中，發(fā)酵的食物材料可以直接包裝，并作為食物制品而進(jìn)入市場，優(yōu)選是作為功能性食物制品，或食物添加劑，例如以凍干的形式供應(yīng)。
本發(fā)明的乳制品可以是任何已知的或未知的發(fā)酵乳制品，例如乳酪、酸乳酪和飲用型酸乳酪。
應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的制品可含有活的微生物以產(chǎn)生對(duì)總體健康有益的效果。因此，這些制品可被描述為益生素制品而進(jìn)行銷售。
這在實(shí)施例1中得以證明。簡言之，實(shí)施例1的結(jié)果表明，未經(jīng)任何進(jìn)一步處理的發(fā)酵乳其自身就具有很好的心率降低效果。進(jìn)一步凍干的發(fā)酵乳可被懸浮于中性乳中，從而得到具有本發(fā)明的效果的適合的食物制品。凍干的發(fā)酵乳可被視作為適合的食物添加劑制品。
從實(shí)施例5中可看出，存在于發(fā)酵乳制品中以及存在于乳清部分中的活性成分結(jié)合到α-腎上腺素受體上。因此，可以預(yù)期本發(fā)明的制品可用于預(yù)防、減輕和/或治療涉及該特異性受體的疾病和癥狀。這樣的疾病和癥狀包括但不限于心臟疾病、BPH和勃起功能障礙。
另外，基于本發(fā)明的活性成分是多種α-腎上腺素受體、β-腎上腺素受體，甚或5-羥色胺受體的配體(拮抗劑)的事實(shí)，可將本發(fā)明的制品用于與通過其他作用機(jī)理而產(chǎn)生類似效果的藥物、化合物配體等進(jìn)行聯(lián)合給藥。在進(jìn)一步降低心率的化合物中，這樣的化合物包括γ-丁酸，簡稱為GABA。GABA是由谷氨酸鹽(Glu)經(jīng)谷氨酸鹽脫羧酶(GAD；EC 4.1.1.15)的脫羧作用得到，并以吡哆醛磷酸鹽(pyridoxal phosphate)作為輔助因素。據(jù)報(bào)道，微生物，特別是乳酸菌，例如乳酸乳桿菌屬(Lactobacillussp.)、乳酸乳球菌屬(Lactococcus sp.)、雙歧桿菌屬(Bifidobacteriumsp.)和鏈球菌屬(Streptococcus sp.)，具有谷氨酸脫羧酶活性，并從谷氨酸產(chǎn)生GABA。
多年來GABA就以其有益于健康而引起人們的興趣。這種分子含有中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一個(gè)主要抑制性神經(jīng)傳遞素。其存在于哺乳動(dòng)物的腦和脊柱中，并廣為分布到皮層的神經(jīng)元中，其與運(yùn)動(dòng)神經(jīng)控制、視覺和其他許多皮層的功能密切相關(guān)。其促進(jìn)腦部血液流動(dòng)，以增加氧氣的供給，從而加強(qiáng)腦的新陳代謝。此外，GABA抑制后葉加壓素(vasopressin，抑制尿分泌的荷爾蒙)的分泌，通過其血管擴(kuò)張作用來降低血壓，并通過作用于脊柱的血管舒縮中心來降低血壓。
GABA通過受體GABA-A和GABA-B作用。
因此，可以預(yù)期，GABA-A和/或GABA-B受體(即GABA自身)的拮抗劑或其他的提高人體中GABA釋放的潛在組分可含于制品，即本發(fā)明的發(fā)酵乳制品中。
在一優(yōu)選的實(shí)施方式中，通過在其他的用于進(jìn)行發(fā)酵的微生物中加入產(chǎn)生GABA的微生物，而確保在發(fā)酵食品或飼料制品中存在GABA組分。在一特別優(yōu)選的實(shí)施方式中，加入了產(chǎn)生GABA的嗜熱鏈球菌。
術(shù)語“功能性食物”在這里所指的食物制品是消費(fèi)者以某種方式獲知該制品具有與在此描述的疾病和/或病癥相關(guān)的有益功能。當(dāng)使用術(shù)語“食物”時(shí)，其也包括“飼料”之意。但優(yōu)選的還是指食物制品。
因此，本發(fā)明的一實(shí)施方式涉及在此所述的應(yīng)用，其中的組合物是含有如上所述性能的活性組分的食物制品，其通過以下步驟獲得(i)按照制備具有在此所述性能的活性組分的方法準(zhǔn)備發(fā)酵的食物材料，(ii)干燥發(fā)酵的食物材料，和(iii)以適當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行包裝，以得到食物制品或食物制品添加劑。
步驟(ii)優(yōu)選采用凍干。
應(yīng)當(dāng)對(duì)術(shù)語“包裝”的含義進(jìn)行較寬的理解。其是指一旦食物材料經(jīng)發(fā)酵并獲得發(fā)酵的食物材料，該發(fā)酵的食物材料就被進(jìn)行包裝而可提供給消費(fèi)者。其可以包裝在瓶子或覆塑膜盒等中。優(yōu)選的在包裝盒或相應(yīng)的銷售材料上注明該制品具有降低心率的性能。這適用于這里所述的制品的任何一方面或其實(shí)施方式。
如實(shí)施例1中所示，食物制品中的乳酸菌可以是以細(xì)菌細(xì)胞的形式提供。熱處理的發(fā)酵食物材料也具有降低心率的效果，因此，可以預(yù)期使用乳酸菌細(xì)胞可獲得上述效果。
在優(yōu)選的實(shí)施方式中，發(fā)酵的食物制品中所含的活的細(xì)菌細(xì)胞對(duì)哺乳動(dòng)物寄主的健康有益。這樣的微生物通常被稱為“益生素”。
通常，益生素包括被定義為一群活的微生物有機(jī)體的有機(jī)物，它們對(duì)動(dòng)物或人類寄主有有益的影響。乳酸菌通常被視為與益生素或益生活性有機(jī)物，特別是與在乳酸乳桿菌、鏈球菌和雙歧桿菌屬中發(fā)現(xiàn)的乳酸菌同樣有用。
具有如上所述性能的制品的應(yīng)用如實(shí)施例1中所示，心率降低性能可通過用強(qiáng)飼法給自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)施用制品，并在強(qiáng)飼后用遙感勘測法確定尚有意識(shí)的SHR在24小時(shí)內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的心率而確定。然而，其他的動(dòng)物模型也可用于評(píng)價(jià)發(fā)酵制品對(duì)心率的效率。其中一個(gè)例子是在實(shí)施例4中描述的正常血壓威斯達(dá)(Wistar)大鼠模型。
制品可用于治療冠狀動(dòng)脈疾病(CAD)或冠狀心臟疾病(CHD)，例如心絞痛、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、中風(fēng)、心肌梗塞、腦梗塞和血管重建術(shù)后的再狹窄、心律不齊、快速性心律失常、慢性充血性心力衰竭(CHF)、主動(dòng)脈瓣關(guān)閉不全、慢性腎功能衰竭、異常脂血癥、異常脂蛋白血癥。在這種情況下，制品優(yōu)選是藥物。疾病優(yōu)選是心絞痛、高血壓和動(dòng)脈粥。
除了如上剛提及的疾病外，心率波動(dòng)的問題也引起人們的興趣。在實(shí)施例1、2和3中證明了發(fā)酵的制品除了有效地降低心率外，還出乎意料地降低了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物活躍期間心率的波動(dòng)。特別是，在觀察到嚴(yán)重的心率波動(dòng)的壓力存在的情況下，對(duì)心率波動(dòng)的抑制可能為一重要的特征，這是由于心率的改變與實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭械乃劳雎氏嚓P(guān)(Zaza et al 2001)。
由于冠狀動(dòng)脈疾病一般是經(jīng)長時(shí)間發(fā)展而成的，因此人們有機(jī)會(huì)去預(yù)防和控制它。如果盡早開始作好預(yù)防工作，則可以降低動(dòng)脈硬化癥的發(fā)展速度。因此，本發(fā)明制品的另一優(yōu)選的應(yīng)用是用作預(yù)防。在這種情況下，制品可優(yōu)選為食物制品或食物添加劑，可供人們?nèi)粘＿B續(xù)使用。
優(yōu)選的是制品具有至少高于安慰劑10％的心率降低效果，其中的安慰劑如上定義為相應(yīng)的未經(jīng)發(fā)酵的食物材料。使用該定義，更優(yōu)選的是制品具有至少高于安慰劑15％的心率降低效果，進(jìn)一步優(yōu)選的是制品具有至少高于安慰劑20％的心率降低效果，最優(yōu)選的是制品具有至少高于安慰劑25％的心率降低效果。
對(duì)發(fā)酵的食物材料中的受體-配體組分的后續(xù)純化如上所述，使用乳酸菌可在發(fā)酵后直接提供有用量的活性組分，其具有非常好的心率降低性能以及具有預(yù)期的對(duì)如上所述的其他疾病和病癥有效的效果。
然而，在一些情況下，最好對(duì)發(fā)酵的食物材料進(jìn)行后續(xù)的純化或濃縮。例如，當(dāng)活性組分用于藥物，如藥片或其他要求高濃度活性組分的制劑形式時(shí)，需要進(jìn)行后續(xù)的純化或濃縮。因此，在本發(fā)明的一實(shí)施方式中，制品是藥物。
另外，實(shí)施例1顯示出心率降低效果與制品的濃度因子成正比。
因此，本發(fā)明的一實(shí)施方式是關(guān)于使用在此所述的應(yīng)用，其中，對(duì)發(fā)酵的食物材料進(jìn)行后續(xù)處理，經(jīng)過純化或濃縮其活性組分的方法來獲得作為α-腎上腺素受體、β-腎上腺素受體，或5-羥色胺受體的配體，該方法包含以下步驟(i)按照制備具有在此所述性能的活性組分的方法準(zhǔn)備發(fā)酵的食物材料，(ii)步驟(i)的發(fā)酵的食物材料被進(jìn)一步加工，以純化或濃縮具有心率降低性能的活性組分，(iii)以適當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行包裝，以得到制品。
該方法適用于需要在制品中有相對(duì)高濃度的具有預(yù)期性能的活性組分的情況。
如果制品為食物制品，該方法可進(jìn)一步包括步驟(iv)，其中(ii)中經(jīng)濃縮的活性組分被加入到食物制品中。
用于以上步驟(ii)的濃縮的優(yōu)選的實(shí)施方式是將含活性組分的食物材料進(jìn)行離心分離，并回收含活性組分的上清液。如果食物材料是乳，則該制品可能為乳清。如實(shí)施例1中所示，乳清是一種具有優(yōu)良的心率降低性能的制品。因此，在一實(shí)施方式中，制品為乳清，但發(fā)酵食品或飼料材料的其他的部分也可被考慮在內(nèi)。
離心優(yōu)選在2,000到20,000rpm下進(jìn)行1到20分鐘。離心也可在離心機(jī)中進(jìn)行。
所得的上清液也可用逆相樹脂做進(jìn)一步的純化處理，從而獲得活性組分含量增加的樣品。用逆相樹脂進(jìn)行的純化處理可通過吸收和洗脫進(jìn)行，可通過逆相樹脂和/或逆相色譜進(jìn)行，從個(gè)人提高活性組分的純度。
關(guān)于逆相樹脂協(xié)議的詳細(xì)技術(shù)說明請(qǐng)參見EP821968。
可選擇的，對(duì)發(fā)酵的食物材料進(jìn)行進(jìn)一步加工，其中，采用納米過濾發(fā)酵的食物材料以期除去其中的乳酸或單價(jià)離子。
關(guān)于該納米過濾協(xié)議的詳細(xì)技術(shù)說明請(qǐng)參見WO01/32905。
實(shí)施例2中所描述的，在濃縮到濃度因子達(dá)到21倍的情況下，都明顯存在著乳清制品對(duì)的心率的劑量依賴效果。在實(shí)驗(yàn)中沒有跡象表明有達(dá)到固定的或漸近線水平。這意味著含有大量活性組分的組合物可在藥物中發(fā)揮很重要的作用。
發(fā)酵在本發(fā)明的方法中，食物材料是在一定的操作條件下經(jīng)乳酸菌發(fā)酵的。這里的操作條件根據(jù)食物材料的類型和/或乳酸菌的組合而有所不同。優(yōu)選的，如果食物材料不是存在于水溶液中，則先將其溶解到適合的水溶液中，然后再與乳酸菌混合并通過發(fā)酵培養(yǎng)。
用乳酸菌進(jìn)行的培養(yǎng)可通過向食物材料介質(zhì)中加入預(yù)培養(yǎng)的乳酸菌發(fā)酵劑培養(yǎng)物，其可以經(jīng)預(yù)先加熱滅菌并冷卻到培養(yǎng)預(yù)設(shè)溫度。乳酸菌發(fā)酵劑的接種量優(yōu)選為105到107個(gè)乳酸菌細(xì)胞/ml培養(yǎng)基，然而，依據(jù)特定的發(fā)酵劑培養(yǎng)物，其他量的發(fā)酵劑培養(yǎng)物也可以考慮。培養(yǎng)溫度通常是20到50℃，優(yōu)選為30到45℃。培養(yǎng)時(shí)間通常為3到48小時(shí)，優(yōu)選為6到24小時(shí)。特別的，優(yōu)選在具有pH在3.5到7范圍的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，更優(yōu)選為在pH在5到6的介質(zhì)中，以有效地進(jìn)行乳酸菌的培養(yǎng)。再有，優(yōu)選地進(jìn)行所謂的將pH維持在4到7的范圍內(nèi)的“恒pH”培養(yǎng)法。當(dāng)乳酸菌超過108細(xì)胞/ml時(shí)，可不受限制地隨時(shí)停止培養(yǎng)。
一優(yōu)選的實(shí)施方式涉及在此描述的方法，其中，在食物材料的發(fā)酵條件下，每100ml的食物材料產(chǎn)生0.5到25mg的活性組分，更優(yōu)選的是每100ml的食物材料產(chǎn)生1到5mg的活性組分。
哺乳動(dòng)物哺乳動(dòng)物包括如馴養(yǎng)的動(dòng)物(例如，貓和狗)、豬、牛、羊在內(nèi)的動(dòng)物。在一優(yōu)選的實(shí)施方式中，哺乳動(dòng)物為人。
乳酸菌如上所述，術(shù)語“乳酸菌”指由革蘭氏陽性、觸酶陰性、非運(yùn)動(dòng)性、微嗜氧菌或厭氧菌組成的一組細(xì)菌，它們對(duì)糖進(jìn)行發(fā)酵，所產(chǎn)生的酸中主要產(chǎn)物為乳酸，并含有醋酸、甲酸和丙酸。
其中，包括屬于乳酸乳桿菌(Lactobacillus)屬的乳酸菌，例如瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)、德氏乳桿菌亞種(Lactobacillusdelbruekii subsp.)、保加利亞乳桿菌(Lactobacillus bulgaricus)等；屬于乳酸乳球菌(Lactococcus)屬的乳酸菌，例如乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)；屬于鏈球菌(Streptococcus)屬的乳酸菌，例如嗜熱唾液鏈球菌亞種(Streptococcus salivarius subsp.)、嗜熱鏈球菌(thermophilus)；屬于明串珠菌屬(Leuconostoc)的乳酸菌，例如乳明串珠菌(Leuconostoc lactis)；屬于雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)的乳酸菌，例如長雙岐桿菌(Bifidobacterium longum)或短雙岐桿菌(Bifidobacterium breve)；以及屬于乳酸片球菌屬(Pediococcus)的乳酸菌。
乳酸菌可被用于含有其他微生物如酵母的混合物。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可通過公眾途徑獲得各式各樣的乳酸菌，并且可以預(yù)計(jì)特別有用的混合物包括瑞士乳桿菌和嗜熱鏈球菌的結(jié)合。例如，可從Deutsche Sammlung vonMikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ)獲??；以及由NCBl的網(wǎng)頁獲取[http://www.ncbi.nlm.nih.gov/在申請(qǐng)日即可獲得]。
一種特別有效的樣品，瑞士乳桿菌菌株CHCC5951被寄存于DSMZ(Deutsche Sammlung yon Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH)，其登記號(hào)為DSM14998，寄存日為2002年5月15日。寄存是在國際承認(rèn)用于專利程序的微生物保存布達(dá)佩斯條約規(guī)定的條件下進(jìn)行的。
另外，一瑞士乳桿菌菌株CHCC4080樣品被寄存于DSMZ(DeutscheSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH)，其登記號(hào)為DSM14997，寄存日為2002年5月15日。寄存是在際承認(rèn)用于專利程序的微生物保存布達(dá)佩斯條約規(guī)定的條件下進(jìn)行的。


圖1用濃度3(乳清組合物，含固體乳清組分，濃度因子為14.3倍)或安慰劑治療的動(dòng)物中心率的測量。每一數(shù)據(jù)點(diǎn)代表8只動(dòng)物的平均值。注意動(dòng)物的活躍期間與無光線的期間一致，即由黑色方條表示的期間。
圖2在動(dòng)物接受乳清組合物12～15小時(shí)后的心率的降低，其中乳清組合物含濃縮到乳發(fā)酵后獲得的固體乳清含量的2、6、14.3和21倍的固體乳清成分。用強(qiáng)飼法，即用胃管給動(dòng)物服用乳清制品。
(○)代表安慰劑。動(dòng)物的心率按實(shí)施例1中所描述的進(jìn)行測定，并與未治療的動(dòng)物的心率進(jìn)行比較。
實(shí)施例實(shí)施例1心率降低性能的體內(nèi)測試材料和方法菌株和培養(yǎng)在MRS瓊脂上將菌株進(jìn)行種菌劃線，且在無氧下于37℃培養(yǎng)48小時(shí)。挑取單個(gè)菌落，接種到MRS培養(yǎng)液中并于37℃下生長過夜。從該過夜培養(yǎng)物中制備母培養(yǎng)液，并儲(chǔ)存在-80℃下的20％的甘油中。將菌株在乳中預(yù)先培養(yǎng)過夜，并將1％(v/v)的接種到乳中用于發(fā)酵。
樣品的制備乳清樣品1用單培養(yǎng)菌株對(duì)乳(含9.5％的蛋白)進(jìn)行發(fā)酵16小時(shí)，接種水平為1％(v/v)。發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)離心，舍棄顆粒狀物，用0.45mm過濾器過濾乳清，并凍干。在與該第一批發(fā)酵相同的條件下，進(jìn)行第二批發(fā)酵，發(fā)酵物經(jīng)離心，獲得乳清部分。舍棄顆粒狀物，用0.45mm過濾器過濾乳清，并冷凍。乳清被用于溶解凍干的乳清粉末，使之濃縮到濃縮因子為21，然后用于喂養(yǎng)鼠。溶解于乳清中的凍干的發(fā)酵乳樣品2用單培養(yǎng)菌株對(duì)乳(含9.5％的蛋白)進(jìn)行發(fā)酵16小時(shí)，接種水平為1％(v/v)。將所有產(chǎn)物進(jìn)行凍干。在與該第一批發(fā)酵相同的條件下，進(jìn)行第二批發(fā)酵，并離心。舍棄顆粒狀物，用0.45mm過濾器過濾乳清，并冷凍。乳清被用于溶解凍干的乳清粉末，使之濃縮到濃縮因子為5，然后用于喂養(yǎng)鼠。
溶解于乳中的凍干的發(fā)酵乳樣品3用單培養(yǎng)菌株對(duì)乳(含9.5％的蛋白)進(jìn)行發(fā)酵16小時(shí)，接種水平為1％(v/v)。將所有產(chǎn)物進(jìn)行凍干。
乳(含9.5％的蛋白)被用于溶解凍干的粉末，使之濃縮到濃縮因子為5，然后用于喂養(yǎng)鼠。
過夜乳發(fā)酵制品樣品4用單培養(yǎng)菌株對(duì)乳(含9.5％的蛋白)進(jìn)行發(fā)酵16小時(shí)，接種水平為1％(v/v)。
過夜乳發(fā)酵制品，經(jīng)熱處理樣品5用單培養(yǎng)菌株對(duì)乳(含9.5％的蛋白)進(jìn)行發(fā)酵16小時(shí)，接種水平為1％(v/v)。
自發(fā)性高血壓大鼠自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)由IFFA CREDO(a Charles River company)，Lyon，F(xiàn)rance獲得。
在9.15h和9:30h之間通過強(qiáng)飼法進(jìn)行施藥，每只動(dòng)物接受的總體積為2.5ml/每只動(dòng)物。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)形成三組第1組(n＝16)接受治療1(乳；n＝16)
第2組(n＝12)接受連續(xù)治療，每次施藥間隔3天清洗期分組1)安慰劑(乳)2.樣品1(懸浮于乳清中的凍干的乳清，濃縮到濃縮因子為21后施用)2)樣品2(懸浮于乳清中的凍干的發(fā)酵乳，濃縮到濃縮因子為5后施用)3)樣品3(懸浮于中性pH乳中的凍干的發(fā)酵乳，濃縮到濃縮因子為5后施用)4)樣品4(僅為發(fā)酵的乳制品)5)樣品5(發(fā)酵后經(jīng)熱處理的發(fā)酵乳)6)樣品6(未經(jīng)發(fā)酵但含有活的細(xì)菌的乳)在實(shí)驗(yàn)前，所有的SHR均經(jīng)過為期9周的對(duì)動(dòng)物研究室的環(huán)境的適應(yīng)期。另外，所有的動(dòng)物均習(xí)慣于強(qiáng)飼法，并在進(jìn)行第一次強(qiáng)飼前的3天測定心臟收縮壓。
研究參數(shù)強(qiáng)飼后用遙感勘測器(Data Sciences Int)測定尚有意識(shí)的SHR在24小時(shí)內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的心臟收縮壓和心率。
簡言之，在施藥前24小時(shí)和試藥后48小時(shí)內(nèi)，每隔15分鐘記錄一次平均(每1分鐘)的心臟收縮壓和心臟舒張壓以及心率。
由這些記錄可計(jì)算出每組的24小時(shí)的平均心臟收縮壓和心臟舒張壓以及心率。
另外，相對(duì)于未治療情況下的值，計(jì)算出在強(qiáng)飼后24小時(shí)內(nèi)、在3～6、12～15和21～24小時(shí)期間，由各物質(zhì)引起的心臟收縮壓和心臟舒張壓的變化。
統(tǒng)計(jì)學(xué)所有的結(jié)果均表達(dá)為平均值±均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差的形式。未經(jīng)治療的值和強(qiáng)飼各物質(zhì)后的值之間的差別通過成對(duì)樣本T檢定進(jìn)行評(píng)估，其中用SISTAT 8.0程序進(jìn)行計(jì)算。
結(jié)果表1示出了測定的心率的變化。
表1表1.強(qiáng)飼后心率(次/分鐘)

*p＜0.05與未治療的比較未治療的1和未治療的2分別是研究1和研究2的對(duì)照。未治療的1是樣品1的安慰劑，未治療的2是所有其他樣品的安慰劑。由于本研究是在兩個(gè)不同的體內(nèi)研究中獨(dú)立進(jìn)行，故采用兩個(gè)安慰劑。
結(jié)果表明濃縮到濃縮因子為21的乳清制品(樣品1)具有最強(qiáng)的心率降低性能。
結(jié)果還表明沒有必要對(duì)已具有明顯心率降低效果的發(fā)酵的乳制品進(jìn)行進(jìn)一步濃縮。樣品4和5是發(fā)酵過夜的乳制品，就已具有降低心率的效果。然而，心率降低的效果與制品的濃縮因子成正比。
顯然的，含有肽或其他的活性成分制品的乳清部分在降低心率效果上起著決定作用。已觀察到了制品的劑量-心率降低效果。
樣品3是懸浮于中性pH乳中的凍干的發(fā)酵乳。其顯著降低了心率。這表明在此描述的發(fā)酵制品由于可融解在不同的液體中以獲得適當(dāng)?shù)淖罱K用途，因此具有廣泛的用途。不同的特性參數(shù)如pH值并不影響制品的心率降低能力。
在發(fā)酵后進(jìn)行熱處理的樣品5也能降低心率。在該樣品中，基本上所有的細(xì)菌均被殺死。這說明了在最終制品中無需存有活的細(xì)菌。
樣品6沒有發(fā)酵，當(dāng)包含有活的細(xì)菌。其沒有產(chǎn)生心率降低。這表明發(fā)酵步驟是必須的。
實(shí)施例2劑量依賴實(shí)驗(yàn)為了進(jìn)一步證實(shí)實(shí)施例1的結(jié)果，進(jìn)行劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)是通過給自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)施用將不同含量的由發(fā)酵乳得到的凍干的乳清懸浮于由發(fā)酵乳得到的乳清中的組合物。
通常，材料、方法及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)均如實(shí)施例1中所述。
簡言之，用瑞士乳桿菌菌株CHCC5951(DSM 14998)對(duì)乳進(jìn)行發(fā)酵16小時(shí)，接種水平為1％(v/v)。發(fā)酵乳經(jīng)離心，舍棄顆粒狀物，凍干乳清。在與該第一批發(fā)酵相同的條件下，進(jìn)行第二批發(fā)酵，發(fā)酵物經(jīng)離心。舍棄顆粒狀物，將乳清放置在4℃下保存。乳清被用于溶解凍干的乳清粉末，得到含固體乳清成分濃縮到為第二批發(fā)酵物中乳清濃度的2，6和14.3倍的組合物。在完成最后一步溶解后立即將組合物喂給鼠。
如實(shí)施例1，使用未經(jīng)發(fā)酵的乳作為安慰劑。
劑量實(shí)驗(yàn)是對(duì)相同的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在3個(gè)分開的實(shí)驗(yàn)期間從最低劑量開始進(jìn)行。每個(gè)實(shí)驗(yàn)期間間隔三天的“清洗”期，在“清洗”期內(nèi)，動(dòng)物不接受發(fā)酵的乳清制品，以消除前次劑量的影響。
結(jié)果示于表2中。
表2.強(qiáng)飼后心率(次/分鐘)

注未治療的鼠沒有接受乳或乳清制品。安慰劑是非發(fā)酵的乳。濃縮物1，2和3分別是含固體乳清組分濃縮到2，6和14.3倍的乳清組合物。注意動(dòng)物的活躍期間與無光線的期間一致，即9～21的期間。
圖1中顯示出一個(gè)完整周期的濃度3(×14.3倍濃縮)。
此外，由凍干的乳清粉末得到了含固體乳清組分濃度為第二批發(fā)酵物中的乳清濃度的21倍的組合物。圖2中示出了給動(dòng)物喂養(yǎng)2，6，14.3及21倍濃縮的乳清制品的結(jié)果。
結(jié)果清楚地顯示出最高濃縮到21倍的乳清制品對(duì)心率影響的劑量依賴效果。乳清制品的劑量越高，心率降低的程度越大。實(shí)驗(yàn)中沒有跡象表明有達(dá)到固定的或漸近線水平，這意味著含有大量活性組分的組合物有望在降低心率上產(chǎn)生很高的效力。
實(shí)施例3在高度活躍期心率波動(dòng)的降低在動(dòng)物的活躍期，心率會(huì)增加。動(dòng)物的活躍期間與無光線的期間一致，即由黑色方條表示的期間(見圖1)。然而，由圖1中所觀察到的可看出，除了心率外，在未治療的動(dòng)物中的心率的波動(dòng)比用14.3倍濃縮的發(fā)酵的乳清制品治療的動(dòng)物的心率波動(dòng)大。
為了量化心率波動(dòng)，對(duì)在12和15小時(shí)之間觀察到的心率值的變化進(jìn)行評(píng)價(jià)。采用如實(shí)施例1中描述的SISTAT 8.0程序?qū)?jīng)治療的和未經(jīng)治療的動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行估計(jì)，并計(jì)算出差異(標(biāo)準(zhǔn)偏差)2＝方差。
經(jīng)治療的動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)偏差約為5.9，相應(yīng)的方差為(5.9)2＝34.8。
未治療的動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)偏差約為10.4，相應(yīng)的方差為(10.4)2＝108.2。
假定以方差為34.8分布的原始數(shù)據(jù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)的95％的置信水平上，則以方差為108.2分布的原始數(shù)據(jù)有顯著性的不同。
因此，可以認(rèn)為在未治療的動(dòng)物中，其活躍期間的心率波動(dòng)(以方差表示)明顯比以14.3倍濃縮的發(fā)酵乳清制品治療的動(dòng)物大。
總之，由瑞士乳桿菌菌株CHCC5951(DSM 14998)發(fā)酵的乳清制品穩(wěn)定了心率的波動(dòng)。這可能是該制品的一項(xiàng)重要特征，這是由于已觀察到心率的改變與實(shí)驗(yàn)兔子模型中的死亡率相關(guān)(Zaza et al 2001)，并且特別在有壓力的情況下，通常能觀察到明顯的心率波動(dòng)。
實(shí)施例4由瑞士乳桿菌菌株CHCC5951發(fā)酵的乳制品與類似的用不同菌株發(fā)酵的商業(yè)制品的比較。
本實(shí)施例的目的是比較宣稱具有降血壓作用的用商業(yè)乳酸菌發(fā)酵的乳制品與由瑞士乳桿菌菌株CHCC5951(DSM 14998)發(fā)酵的制品。
通過向威斯達(dá)大鼠施用兩種組合物，并測量尚未麻痹的動(dòng)物的心臟收縮壓、心臟舒張壓和心率，來評(píng)價(jià)兩制品對(duì)血壓和心率的影響。
如無特別說明，材料和方法如實(shí)施例1中所述相同。
簡言之，用瑞士乳桿菌菌株CHCC5951(DSM 14998)對(duì)乳發(fā)酵16小時(shí)，接種水平為1％(v/v)，將所得產(chǎn)物凍干以獲得凍干的粉末乳。在與該第一批發(fā)酵相同的條件下，進(jìn)行第二批發(fā)酵，并離心。舍棄顆粒狀物，乳清用0.45μm的過濾器過濾并冷凍。在乳清中溶解凍干的粉末乳后，立即將其喂給鼠。溶解的粉末的量與從發(fā)酵乳中獲得的量相當(dāng)，發(fā)酵乳的體積是溶解用的乳清體積的5倍(例如，4.28克粉末溶于30ml乳清中)。在該實(shí)施例中，我們稱該組合物為×5倍濃度。在09:15h和09:30h之間，用強(qiáng)飼法將該組合物喂給過夜禁食的威斯達(dá)大鼠(300-320克)，劑量為7.5ml/kg的×5倍組合物。組合物的效果在14:30h和16:30h之間評(píng)價(jià)，即口服5-7小時(shí)后測量未麻痹的動(dòng)物的動(dòng)脈血壓和心率值。
結(jié)果示于表3中。
表3兩種不同發(fā)酵制品對(duì)血壓和心率的影響

心臟收縮壓、舒張壓、平均血壓和心率的值(平均值±SEM)是在三組不同組中經(jīng)強(qiáng)飼5～7小時(shí)后測定的值。
*表示在p＜0.05水平時(shí)，接受治療的鼠與未接受治療的鼠之間存在著顯著差異。在進(jìn)行多重比較的Tukey檢驗(yàn)后，使用ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
實(shí)施例5發(fā)酵制品對(duì)腎上腺素α受體的結(jié)合本實(shí)驗(yàn)的目的是通過體外受體結(jié)合分析而研究，用瑞士乳桿菌菌株CHCC5951(DSM 14998)發(fā)酵的發(fā)酵乳可表現(xiàn)出對(duì)何種(如果有的話)特異性受體的結(jié)合。
簡言之，用瑞士乳桿菌菌株CHCC5951(DSM 14998)對(duì)乳發(fā)酵16小時(shí)，接種水平為1％(v/v)。離心發(fā)酵物，舍棄顆粒狀物，將乳清分為兩部分。將一部分的乳清進(jìn)行凍干，另一部分的乳清保存在+4℃待用。該部分被稱為濃度1倍(1×)。
凍干的組合物保存在-50℃直到在合適的稀釋液中重建。將凍干粉末溶解在一定體積的水中，得到相對(duì)于未凍干的乳清組合物其乳清蛋白濃度為200倍(200×)的母液，由此制備200倍(200×)的母液。
競爭性體外結(jié)合分析在如以下表4中描述的一系列受體上準(zhǔn)備。
表4體外結(jié)合分析的競爭

競爭性體外結(jié)合分析的結(jié)果示于以下表5中。
表5競爭性體外結(jié)合分析的結(jié)果

在為腎上腺素α1受體的情況下，IC50值(導(dǎo)致對(duì)照特異性結(jié)合的半數(shù)最大抑制的濃度)和希爾系數(shù)(Hill coefficients)(nH)用非線性回歸分析法對(duì)由希爾方程曲線擬合得到的競爭曲線進(jìn)行分析而確定。抑制常數(shù)(Ki)是由Cheng Prusoff方程(Ki＝IC50/(1+(L/KD))計(jì)算得到，其中，L＝分析中放射配體的濃度，KD＝放射配體對(duì)受體的親和性)。其結(jié)果是IC50＝1.2 10-9M，Ki＝3.1 10-10M，nH＝0.7。
由數(shù)據(jù)可以得出，用瑞士乳桿菌菌株CHCC5951(DSM 14998)發(fā)酵的食物材料含有表現(xiàn)出劑量依賴性、特異性地結(jié)合到分離自鼠大腦皮層的腎上腺素α1受體上的組分。
實(shí)施例6發(fā)酵制品對(duì)特異性腎上腺素受體和毒蕈堿受體(Muscarinicreceptor)的結(jié)合本實(shí)驗(yàn)的目的是通過體外受體結(jié)合分析而研究，用瑞士乳桿菌菌株CHCC5951(DSM 14998)發(fā)酵的發(fā)酵乳制品可表現(xiàn)出對(duì)腎上腺素受體和毒蕈堿受體中的何種特異性受體的結(jié)合。
材料和方法簡言之，用瑞士乳桿菌菌株CHCC5951(DSM 14998)對(duì)乳發(fā)酵16小時(shí)，接種水平為1％(v/v)。離心發(fā)酵物，舍棄顆粒狀物，將乳清保存在+4℃待用。該部分被稱為濃度1倍(1×)。
基本上按照表6及表7中文獻(xiàn)所述進(jìn)行受體結(jié)合分析。受體結(jié)合分析的結(jié)果示于表8中。
表6受體結(jié)合分析


表7競爭性體外結(jié)合分析


表8競爭性體外結(jié)合分析的結(jié)果


從這些數(shù)據(jù)可以看出，用瑞士乳桿菌菌株CHCC5951(DSM 14998)發(fā)酵的食物材料中含有表現(xiàn)出劑量依賴性、特異性地結(jié)合到腎上腺素受體和5-羥色胺受體上的組分。
由于不止一種受體被抑制，這就使得上清夜的組成復(fù)雜化。各種不同的效果最有可能是受到具有不同靶外形的肽所影響。
總而言之，存在于發(fā)酵物的乳清中的化合物對(duì)β2(h)和5-HTns表現(xiàn)出最高的抑制活性，兩者的平均值均為93％，其次是α2B(h)(平均為68％)＞α2A(h)(平均為64％)＞α2C(h)(平均為50％)＞α1B(h)(平均為47％)。在更低的抑制水平上，這些化合物對(duì)受體β1(h)的抑制活性平均為39％，對(duì)α1A(h)的抑制活性平均為34％。
這些化合物對(duì)受體β3(h)沒有活性。
參考文獻(xiàn)EP821968(Calpis Food Industry)EP1016709(Calpis Food Industry)WO0132836(Valio Ltd.).
WO0185984(Davisco International Foods，Inc.)Altwein(1995)The changing therapy of benign prostatic hyperplasia.
Scand J Urol Nephrol Suppl.；1681-6Barry and Roehrborn(1997)，Management of benign prostatichyperplasia.Annu Rev Med，48177-89).
Brindley GS(1986)Pilot experiments on the actions of drugsinjected into the human carpus cavernosum penis.Br J Pharmacol 87495-500.
Curran，P.K.and Fishman，P.H.(1996)Endogenous β3-but not β1-adrenergic receptors are resis tant to agonist-mediated regulationin human SK-N-MC neurotumor cells.Cell Signal，8355-364.
Devedjan，J.C.，Esclapez，F(xiàn).，Denis-Ploxviel，C.，and Paris，H.，(1994)Further characterization of human α2-adrenoreceptorsubtypes[3H]RX82102 binding and definition of additionalselective drugs.Eur.J.Pharmacol.，25243-49.
Fuglsang，A.；et al.(2002)Applied and Environmental Microbiology，3566-3569.
Fuller R.(1989)Probiotics in man and animals.J Appl Bacterial66365-78.
Greengrass，P.and Bremner，R.(1979)Binding characteristics of[3H]-prazosin to rat brain alpha-adrenergic receptors.Eur.J.Pharmacol.，55323-326.
Kenny，B.et al.(1995)AlphaI-Adrenoreceptor Antagonists AsTreatments For Benign Prostatic Hyperplasia，Exp.Opin.Invest.Drugs，(1995)，4(10)，915-23Kim NN et al.(2000)Alpha-adrenergic receptor blockade byphentolamine increases the efficacy of vasodilators in penilecorpus cavernosum.Int J lmpot Res.12Suppl 1S26-36.
Lang in，D.，Lafontan，M.，Stilling，M.R.，and Paris，H.(1989)[3H]RX82102a new tool for theidentification of α2-adrenoreceptors.Eur.J.Pharmacol.，16795-104.
Levin，M.C.，Marullo，S.，Muntaner，O.，Anderson，B.and Magnusson，Y.(2002).The myocardium-protective Gly-49 variant of the beta I-adrenergic receptor exhibits constitutive activity and increaseddesensitization and down regulat ion.J.Biol.Chem.27730429-30435Michel，A.D.，Loury，D.N.and Whit ing，R.L.(1989)Identificationof a single α1-adrenoreceptor corresponding to the α1A-subtype in ratsubmaxillary gland.Brit.J.Pharmacol.，98883-889.
Morales(2000)Yohimbine in erectile dysfunctionthe facts.IntJ lmpot Res.12(Suppl 1)S70-S74.
Peroutka，S.J.and Snyder，S.H.(1979)Multiple serotonin receptorsdifferential binding of[3H]5-hydroxytryptamine，[3H]lysergic aciddiethylamide and[3H]spiroperidol.Mol.Pharmacol.，16687-699.
Ronald F.Borne(1994)SerotoninThe Neurotransmitter for the′90s.Drug Topics，October 10，1994，p.108(http://web.tampabay.rr.com/lymecfs/seroton.htm).Smith，C.and Teitler，M.(1999)Beta-blocker selectivity at clonedhuman beta1-and beta2-adrenergic receptors.Cardiovasc.DrugsTher.，13123-126.
Uhlen，S.and Wikberg，J.E.(1991)Rat spinal chord α2-adrenoceptors are of the α2A-subtypecomparison with α2A-and α2B-adrenoceptors in rat spleen，cerebral cortex and kidney using3H-RX821002 ligand binding.Pharmacol.Toxicol.，69341-350.
Yamamoto et al.(1996)Am.J.Clin.Nurt.，64767-71.Zaza，A.，T.Opthof，J.Camm，F(xiàn).Lombardi and S.Hohnloser(2001)″Heart rate reductionoptimism with some caveats″.nEwSCast Reportpresented to the XX111′th Congress of the European Society ofCardiology，Stockholm 2001(http://ftp.escardio.org/newscast/archivesstock.htm).
關(guān)于寄存的微生物[專家方案]下述內(nèi)容適用于在本專利申請(qǐng)中提及的所有寄存的微生物體。
歐洲就尋求歐洲專利保護(hù)的指定國家和地區(qū)而言，在提及授予歐洲專利的文書公開或在該申請(qǐng)被拒絕或撤回或視為撤回日之前，僅向要求獲得樣品的人指定的專家提供寄存的微生物樣品，且視情況而言需通過i)申請(qǐng)人和/或ii)歐洲專利局同意。(EPC Rule 28(4)and 28(5))。
加拿大申請(qǐng)人請(qǐng)求，在專利申請(qǐng)被授予加拿大專利或該申請(qǐng)被拒絕、放棄和放棄恢復(fù)或撤回之前，專利局局長只能授權(quán)將專利申請(qǐng)中涉及的寄存的生物材料樣品供給由局長指定的獨(dú)立的專家，申請(qǐng)人必須在申請(qǐng)的國際公開的技術(shù)準(zhǔn)備完成前，以書面方式通知國際局。
挪威申請(qǐng)人在此請(qǐng)求，在專利申請(qǐng)被挪威專利局公開供公眾檢查，或由挪威專利局作出不公開供公眾檢查的最終決定之前，只能授權(quán)本領(lǐng)域?qū)＜耀@得樣品。為此，申請(qǐng)人必須向挪威專利局提交請(qǐng)求，請(qǐng)求時(shí)間不遲于根據(jù)挪威專利法第22和33(3)規(guī)定的公眾可獲得專利申請(qǐng)的時(shí)間。如果申請(qǐng)人已提交了該項(xiàng)請(qǐng)求，則由第三方提出的獲取樣品的請(qǐng)求必須指明“將由專家取樣”。該專家可以是在挪威專利局認(rèn)可的專家名單上的任何人，也可以是由申請(qǐng)人在個(gè)案中認(rèn)可的任何人。
澳大利亞申請(qǐng)人在此宣布，在授予專利前、或在終止、拒絕或撤回專利申請(qǐng)前，微生物樣品只能由與本發(fā)明沒有厲害關(guān)系得本領(lǐng)域技術(shù)人員獲取(Regulation 3.25(3)of the Australian Patents Regulations)。
芬蘭申請(qǐng)人在此請(qǐng)求，在專利申請(qǐng)被National Board of Patents andRegulations公開供公眾檢查，或由National Board of Patents andRegulations作出不公開供公眾檢查的最終決定之前，只能授權(quán)本領(lǐng)域?qū)＜耀@得樣品。
英國申請(qǐng)人在此請(qǐng)求，只能由本領(lǐng)域?qū)＜耀@得微生物樣品。申請(qǐng)人必須在申請(qǐng)的國際公開的技術(shù)準(zhǔn)備完成前，向國際局通知該請(qǐng)求。
丹麥申請(qǐng)人在此請(qǐng)求，在專利申請(qǐng)被丹麥專利局公開供公眾檢查，或由丹麥專利局作出不公開供公眾檢查的最終決定之前，只能授權(quán)本領(lǐng)域?qū)＜耀@得樣品。為此，申請(qǐng)人必須向丹麥專利局提交請(qǐng)求，請(qǐng)求時(shí)間不遲于根據(jù)丹麥專利法第22和33(3)規(guī)定的公眾可獲得專利申請(qǐng)的時(shí)間。如果申請(qǐng)人已提交了該項(xiàng)請(qǐng)求，則由第三方提出的獲取樣品的請(qǐng)求必須指明“將由專家取樣”。該專家可以是在丹麥專利局認(rèn)可的專家名單上的任何人，也可以是由申請(qǐng)人在個(gè)案中認(rèn)可的任何人。
瑞典申請(qǐng)人在此請(qǐng)求，在專利申請(qǐng)被瑞典專利局公開供公眾檢查，或由瑞典專利局作出不公開供公眾檢查的最終決定之前，只能授權(quán)本領(lǐng)域?qū)＜耀@得樣品。為此，申請(qǐng)人必須向國際局提交請(qǐng)求，請(qǐng)求時(shí)間應(yīng)早于自優(yōu)先權(quán)日起的16個(gè)月的期滿日(請(qǐng)求最好是以PCT/RO/134表的形式提出，該表被復(fù)制在PCT申請(qǐng)人指南第I卷的附錄Z中)。如果申請(qǐng)人已提交了該項(xiàng)請(qǐng)求，則由第三方提出的獲取樣品的請(qǐng)求必須指明“將由專家取樣”。該專家可以是在瑞典專利局認(rèn)可的專家名單上的任何人，也可以是由申請(qǐng)人在個(gè)案中認(rèn)可的任何人。
荷蘭申請(qǐng)人在此請(qǐng)求，在專利申請(qǐng)被授予荷蘭專利或該申請(qǐng)被拒絕、放棄和終止之前，依據(jù)Patent Rules第3 IF(1)，只能將微生物提供給專家。申請(qǐng)人必須在Patents Act of the Kingdom of the Netherlands第22C或25節(jié)中規(guī)定的公眾可獲得申請(qǐng)的兩者中較早的日期之前，提出該請(qǐng)求。
權(quán)利要求
1.通過含發(fā)酵食物材料的方法獲得的組合物在制備降低哺乳動(dòng)物的心率或治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的良性前列腺增生(BPH)和/或勃起功能障礙的制品中的應(yīng)用，所述含發(fā)酵食物材料的方法采用至少一種乳酸菌菌株對(duì)包括動(dòng)物乳或蔬菜蛋白在內(nèi)的食物材料進(jìn)行發(fā)酵，以獲得含至少一種組分為腎上腺素或5-羥色胺受體的配體的經(jīng)發(fā)酵的食物或飼料材料。
2.權(quán)利要求1的組合物的應(yīng)用，其中所述受體選自包含α-腎上腺素受體、β-腎上腺素受體和5-羥色胺受體的受體組。
3.權(quán)利要求2的組合物的應(yīng)用，其中所述受體選自包含α1A-、α1B-、α2A(h)-、α2B(h)-、α2C(h)-、β1(h)-、β2(h)-和β3(h)-腎上腺素受體，以及5-羥色胺受體的受體組。
4.權(quán)利要求3的組合物的應(yīng)用，其中所述受體選自包含α2A(h)-、α2B(h)-和β2(h)-腎上腺素受體的受體組。
5.權(quán)利要求1～3中任意一項(xiàng)的組合物的應(yīng)用，其中所述發(fā)酵的食物含有至少一種組分是腎上腺素受體的配體，以及至少一種組分是5-羥色胺受體的的配體。
6.權(quán)利要求1～4中任意一項(xiàng)的組合物的應(yīng)用，其中所述發(fā)酵的食物含有至少一種組分是腎上腺素α受體的配體，以及至少一種組分是腎上腺素β受體的配體。
7.前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述受體的配體具有為受體的拮抗劑的特性。
8.前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述制品是食物或飼料制品。
9.前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的組合物在制備降低哺乳動(dòng)物心率制品中的應(yīng)用。
10.前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的組合物的應(yīng)用，進(jìn)一步包括一組分為GABA受體的配體，以用于制備降低哺乳動(dòng)物心率的制品。
11.權(quán)利要求10的應(yīng)用，其中至少一組分為GABA受體的配體是通過含發(fā)酵食物或飼料材料的方法獲得，該方法采用至少一種乳酸菌菌株對(duì)包括動(dòng)物乳或蔬菜蛋白在內(nèi)的食物或飼料材料進(jìn)行發(fā)酵以獲得發(fā)酵的食物材料。
12.前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的組合物在制備降低心率制品中的應(yīng)用。
13.前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的應(yīng)用，其中心率的降低是為了治療或減輕冠狀動(dòng)脈疾病(CAD)或冠狀心臟疾病(CHD)，例如心絞痛、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、中風(fēng)、心肌梗塞、腦梗塞和血管重建術(shù)后的再狹窄、心律不齊、快速性心律失常、慢性充血性心力衰竭(CHF)、主動(dòng)脈瓣關(guān)閉不全、慢性腎功能衰竭、異常脂血癥、異常脂蛋白血癥。
14.前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的應(yīng)用，其中治療導(dǎo)致了心率波動(dòng)的減小。
15.權(quán)利要求1～11中任意一項(xiàng)的組合物在制備治療或預(yù)防良性前列腺增生(BPH)和/或勃起功能障礙的制品中的應(yīng)用。
16.權(quán)利要求15的組合物的應(yīng)用，進(jìn)一步包含至少一種組分，其選自由一氧化氮或抑制磷酸二酯酶-5或5-α還原酶的成分組成的組，以用于制備治療或預(yù)防良性前列腺增生(BPH)和/或勃起功能障礙的制品中的應(yīng)用。
17.前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的應(yīng)用，其中發(fā)酵的食物材料經(jīng)進(jìn)一步處理，以純化或濃縮具有降低心率性質(zhì)的活性組分，該活性組分可通過含以下步驟的方法得到(i)按照前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)制備具有降低心率性質(zhì)的活性組分的方法準(zhǔn)備發(fā)酵的食物材料，(ii)步驟(i)的發(fā)酵的食物材料被進(jìn)一步加工，以純化或濃縮具有心率降低性能的活性組分，(iii)以適當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行包裝，以得到制品。
18.權(quán)利要求17的應(yīng)用，其中根據(jù)步驟(ii)的濃縮是通過離心進(jìn)行，回收含活性組分的所得上清液。
19.權(quán)利要求17或18的應(yīng)用，其中食物材料是乳，制品是乳清。
20.前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述乳酸菌是選自由乳酸乳桿菌屬、乳酸乳球菌屬、鏈球菌屬、明串珠菌屬、雙歧桿菌屬和乳酸片球菌屬組成的組中的乳酸菌。
21.權(quán)利要求20的應(yīng)用，其中乳酸乳桿菌屬的乳酸菌是瑞士乳桿菌。
22.權(quán)利要求20的應(yīng)用，其中鏈球菌屬的乳酸菌是嗜熱鏈球菌。
23.前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的應(yīng)用，其中食物或飼料材料是使用至少兩種乳酸菌的組合進(jìn)行發(fā)酵的。
24.權(quán)利要求23的應(yīng)用，其中食物或飼料材料是使用瑞士乳桿菌屬的乳酸菌和嗜熱鏈球菌屬的乳酸菌發(fā)酵的。
25.前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的應(yīng)用，其中乳酸菌是登記號(hào)為DSM 14998的瑞士乳桿菌或其變異體。
26.前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)的應(yīng)用，其中發(fā)酵的食物或飼料材料含有活的細(xì)菌細(xì)胞。
27.具有降低哺乳動(dòng)物心率性能的發(fā)酵的食物材料，其通過用至少一種乳酸菌發(fā)酵食物材料制得，所述食物材料包含至少一活性組分為腎上腺素受體或5-羥色胺受體的配體。
28.用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的良性前列腺增生(BPH)和/或勃起功能障礙的發(fā)酵的食物材料，其通過用至少一種乳酸菌發(fā)酵食物材料制得，所述食物材料包含至少一活性組分為腎上腺素受體的配體。
29.權(quán)利要求27或28的發(fā)酵的食物材料，其中所述配體是α-腎上腺素受體或β-腎上腺素受體的配體。
30.權(quán)利要求27～29的發(fā)酵的食物材料，其中所述配體是選自包含α1A-、α1B-、α2A(h)-、α2B(h)-、α2C(h)-、β1(h)-、β2(h)-和β3(h)-腎上腺素受體的受體組的受體的配體。
31.權(quán)利要求27～30的發(fā)酵的食物材料，其中所述配體是選自包含α2A(h)-、α2B(h)-和β2(h)-腎上腺素受體的受體組的受體的配體。
32.權(quán)利要求27～31的發(fā)酵的食物材料，其中所述配體具有為受體的拮抗劑的特性。
33.權(quán)利要求27～32的發(fā)酵的食物材料，其中所述乳酸菌是一種或多種選自由乳酸乳桿菌屬、乳酸乳球菌屬、鏈球菌屬、明串珠菌屬、雙歧桿菌屬和乳酸片球菌屬組成的組中的乳酸菌。
34.權(quán)利要求27～33的發(fā)酵的食物材料，其中至少一種乳酸菌是瑞士乳桿菌。
35.權(quán)利要求27～34的發(fā)酵的食物材料，其中至少一種乳酸菌是嗜熱鏈球菌。
36.權(quán)利要求27～35的發(fā)酵的食物材料，其中至少一種乳酸菌是登記號(hào)為DSM 14998的瑞士乳桿菌或其變異體。
37.權(quán)利要求27～36的發(fā)酵的食物材料，其含有活的細(xì)菌細(xì)胞。
38.權(quán)利要求27～37的發(fā)酵的食物材料，其含有登記號(hào)為DSM 14998的瑞士乳桿菌或其變異體活的的細(xì)菌細(xì)胞。
39.權(quán)利要求27～38的發(fā)酵的食物材料，其具有降低哺乳動(dòng)物心率的性能，含有登記號(hào)為DSM 14998的瑞士乳桿菌或其變異體活的的細(xì)菌細(xì)胞。
40.由前述權(quán)利要求的發(fā)酵的食物材料中分離出的分離的降低心率組分。
41.由前述權(quán)利要求的發(fā)酵的食物材料中分離出的分離的組分，其可用于治療和/或預(yù)防哺乳動(dòng)物的良性前列腺增生(BPH)和/或勃起功能障礙。
42.權(quán)利要求27～39中任意一項(xiàng)的發(fā)酵的食物材料在制備治療或減輕冠狀動(dòng)脈疾病(CAD)或冠狀心臟疾病(CHD)，例如心絞痛、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、中風(fēng)、心肌梗塞、腦梗塞和血管重建術(shù)后的再狹窄、心律不齊、快速性心律失常、慢性充血性心力衰竭(CHF)、主動(dòng)脈瓣關(guān)閉不全、慢性腎功能衰竭、異常脂血癥、異常脂蛋白血癥的藥物中的應(yīng)用。
43.權(quán)利要求27～39中任意一項(xiàng)的發(fā)酵的食物材料在制備治療和/或減輕良性前列腺增生和/或勃起功能障礙的藥物中的應(yīng)用。
44.權(quán)利要求40的由發(fā)酵的食物材料中分離出的分離的降低心率活性組分在制備治療或減輕冠狀動(dòng)脈疾病(CAD)或冠狀心臟疾病(CHD)，例如心絞痛、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、中風(fēng)、心肌梗塞、腦梗塞和血管重建術(shù)后的再狹窄、心律不齊、快速性心律失常、慢性充血性心力衰竭(CHF)、主動(dòng)脈瓣關(guān)閉不全、慢性腎功能衰竭、異常脂血癥、異常脂蛋白血癥的藥物中的應(yīng)用。
45.權(quán)利要求41的由發(fā)酵的食物材料中分離出的分離的降低心率活性組分在制備治療和/或減輕良性前列腺增生和/或勃起功能障礙的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本方明涉及對(duì)含有受體配體的組合物的利用，該受體配體可經(jīng)過乳酸菌對(duì)包括動(dòng)物乳或蔬菜蛋白在內(nèi)的食物進(jìn)行發(fā)酵，以獲得含腎上腺素受體和/或5－羥色胺受體的特異性配體的經(jīng)發(fā)酵的食物或飼料原料而獲得。經(jīng)發(fā)酵的食物或飼料原料可用于降低和/或穩(wěn)定哺乳動(dòng)物的心率，以及還可能被進(jìn)一步用于治療和/或減輕哺乳動(dòng)物的勃起功能障礙，以及治療和/或減輕哺乳動(dòng)物的前列腺增生(BPH)。
文檔編號(hào)A61K35/74GK101035433SQ200580029621
公開日2007年9月12日 申請(qǐng)日期2005年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月3日
發(fā)明者班奈迪特·佛林巴爾德 申請(qǐng)人:科·漢森有限公司