專利名稱：苯丙氨酸衍生物的穩(wěn)定劑型的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及改良的和穩(wěn)定的苯丙氨酸衍生物的藥物制劑，和涉及其作為尿激酶抑制劑的用途，特別是用于制備治療惡性腫瘤和腫瘤轉(zhuǎn)移的用途。
背景技術(shù)：
實(shí)體瘤擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移至周圍組織中的能力與腫瘤細(xì)胞周圍中的細(xì)胞外基質(zhì)(腫瘤基質(zhì)(Tumorstroma))的降解或改變相關(guān)，或與其滲透入基底膜的能力相關(guān)。盡管仍未徹底闡明(病理)生物化學(xué)的相互關(guān)系，但尿激酶纖溶酶原激活物(uPA)和尿激酶受體(uPAR)起著關(guān)鍵作用。uPA介導(dǎo)纖溶酶原經(jīng)蛋白水解而被裂解成纖溶酶。另一方面，纖溶酶是具有廣譜作用的蛋白酶，其能夠直接分解細(xì)胞外基質(zhì)的組分例如血纖蛋白、纖連蛋白、層粘連蛋白和蛋白聚糖的蛋白骨架。此外，纖溶酶還能夠激活“潛伏的”金屬蛋白酶和uPA的無(wú)活性的酶原，pro-uPA。
腫瘤基質(zhì)的腫瘤細(xì)胞和非惡性細(xì)胞合成和分泌無(wú)酶促活性的酶原pro-uPA。蛋白酶，例如纖溶酶或組織蛋白酶B和L，通過(guò)有限蛋白水解作用切割pro-uPA，產(chǎn)生活性的絲氨酸蛋白酶HMW-uPA(HMW＝高分子量)。Pro-uPA和活性蛋白酶HMW-uPA結(jié)合細(xì)胞表面受體uPAR(CD87)。同樣地，纖溶酶(原)也結(jié)合腫瘤細(xì)胞的質(zhì)膜上的特異性受體，從而在緊靠腫瘤細(xì)胞的周質(zhì)中聚焦和放大纖溶酶原的活化。因此，侵襲性細(xì)胞能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)而不會(huì)通過(guò)蛋白水解而避開對(duì)于定向運(yùn)動(dòng)所需的支持物。
在各種細(xì)胞生物學(xué)研究中已能夠表明，在腫瘤相關(guān)的蛋白水解系統(tǒng)的級(jí)聯(lián)型反應(yīng)途徑中，細(xì)胞相關(guān)的纖溶酶原激活物系統(tǒng)具有非常重要的地位(Wilhelm等人，The Urokinase/Urokinase receptor systemA new target for cancer therapy？InSchmitt M.，Graeff H.，Kindermann G.(Hrsg)Prospects in Diagnosis and Treatment ofCancer.International Congress Series，Excerpta Medica 1050，Amsterdam，Elsevier(1994)pp145-156)。已在人結(jié)腸癌細(xì)胞的培養(yǎng)物中觀察到，其穿過(guò)細(xì)胞外基質(zhì)遷移的能力依賴于活性u(píng)PA使uPA受體飽和的程度(Hollas等人，Cancer Res.51(1991)3690-3695)。同樣，在細(xì)胞培養(yǎng)模型中，當(dāng)uPA的蛋白水解活性被PAI-1(Cajot等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87(1990)6939-6943)或PAI-2(Baker等人，Cancer Res.50(1990)4676-4684)抑制時(shí)，觀察到細(xì)胞侵襲潛力降低。在通過(guò)使用無(wú)蛋白水解活性的uPA變體阻斷受體來(lái)抑制uPA和細(xì)胞表面的結(jié)合時(shí)，獲得了相當(dāng)?shù)男Ч?Cohen等人，Blood 78(1991)479-487；Kobayashi等人，Br.J.Cancer 67(1993)537-544)。用表達(dá)針對(duì)uPAR的部分的反義轉(zhuǎn)錄物的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染表皮樣癌細(xì)胞，也可經(jīng)抑制uPAR合成而導(dǎo)致這些細(xì)胞的侵襲性降低(Kook，EMBOJ.13(1994)3983-3991)。針對(duì)uPA和PAI-1的抗體在體外減少肺癌細(xì)胞的侵襲潛力(Liu等人，Int.J.Cancer 60(1995)501-506)。
還可以在腫瘤動(dòng)物模型中證明纖溶酶原激活物系統(tǒng)對(duì)轉(zhuǎn)移過(guò)程的影響。例如，通過(guò)加入針對(duì)uPA的抗體幾乎完全抑制雞胚胎中的由人癌細(xì)胞引起的肺轉(zhuǎn)移形成(Ossowski和Reich，Cell 35(1983)611-619)。用編碼無(wú)蛋白水解活性但具有uPAR結(jié)合性的uPA突變體的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)移性人癌細(xì)胞。在小鼠模型中表明，與未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相比，在注射后，合成無(wú)活性u(píng)PA的癌細(xì)胞形成數(shù)量明顯更少的轉(zhuǎn)移(Crowley等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90(1993)5021-5025)。此外，在施用uPA-反義寡核苷酸后，在裸小鼠中觀察到人卵巢癌細(xì)胞的腹膜內(nèi)擴(kuò)散被抑制(Wilhelm等人，Clin.Exp.Metast.13(1995)296-302)。
近年來(lái)，深入研究了纖溶酶原激活物系統(tǒng)的因子(uPA、uPAR、PAI-1和PAI-2)對(duì)于患有實(shí)體惡性腫瘤的患者的預(yù)后的臨床重要意義。在這些研究中，證實(shí)在各種腫瘤(例如乳房、卵巢、胃、肺、腎等)的情況下uPA抗原含量是無(wú)復(fù)發(fā)存活和死亡的強(qiáng)預(yù)報(bào)因素(參見例如Schmitt等人，J.Obstet.Cynaecol.21(1995)151-165；Jaenicke等人，Breast Cancer Res.Treat.24(1993)195-208；Kuhn等人，Gynecol.Oncol.55(1994)401-409；Nekarda等人，Lancet343(1994)117；Pedersen等人，Cancer Res.54(1994)4671-4675)。同樣地，在肺癌組織(Pedersen等人，同上)和乳腺癌組織(Duggan等人，Int.J.Cancer 61(1995)597-600；Ronne等人，Breast Cancer Res.Treat.33(1995)199-207)中，以及在胃癌的情況下，不僅在腫瘤組織本身中(Heiss等人，J.Clin.Oncol.13(1995)2084-2093)而且在散布入骨髓的腫瘤細(xì)胞中(Heiss等人，Nature Medicine 1(1995)1035-1039)，提高的uPAR的濃度也和不良預(yù)后相關(guān)聯(lián)。
還發(fā)現(xiàn)，在2位上用苯基取代的3-脒基苯丙氨酸衍生物是在體內(nèi)具有活性的選擇性u(píng)PA抑制劑(EP 1 098 651)。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，以水溶液的形式施用這些化合物。
WO 02/074756和WO 03/103644公開了其他基于苯丙氨酸的尿激酶抑制劑的用途，以及3-胍基苯丙氨酸衍生物作為尿激酶抑制劑的用途。
在上述化合物的一期臨床試驗(yàn)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，以含水的甘露醇例如D-甘露醇的形式(不加入有機(jī)溶劑和含有丙二醇/乙醇以及食鹽的溶液)進(jìn)行施用具有缺點(diǎn)。例如，無(wú)論是在食鹽溶液中還是使用等滲劑甘露醇，都不能產(chǎn)生不易于析出和形成沉積物的穩(wěn)定且濃縮的活性物質(zhì)溶液。因此，例如在5％的甘露醇溶液中，在較長(zhǎng)時(shí)間的貯存后，形成了由加入的活性物質(zhì)構(gòu)成的沉淀物。已證明由有機(jī)溶劑組成的制劑同樣是不太合適的，因?yàn)樵谄渲械幕钚晕镔|(zhì)不具有所必需的化學(xué)穩(wěn)定性，并且具有分解的傾向。因此，在大約一個(gè)半月后，活性物質(zhì)開始通過(guò)酰胺形成而分解產(chǎn)生酯，從而使活性物質(zhì)溶液不能用了。
WO 2004/011004公開了使以所謂的脂質(zhì)體，混合的微團(tuán)(由各種磷脂組成)的形式存在的含有基于苯丙氨酸的尿激酶抑制劑的水溶液穩(wěn)定的方法。然而，這種穩(wěn)定形式對(duì)于所有應(yīng)用來(lái)說(shuō)并不足夠，特別是在用生理緩沖液重構(gòu)后，將不再能夠充分確保脂質(zhì)體制劑的化學(xué)穩(wěn)定性。
對(duì)于開發(fā)新制劑的初步研究顯示，活性物質(zhì)Nα-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid(WX-UK1)在多元醇例如二醇中以及在由多元醇/醇和水組成的混合物中具有非常良好的溶解度(表1)。
這些數(shù)據(jù)表明，由多元醇和醇例如丙二醇(PG)和乙醇(EtOH)組成的混合物是液體制劑的良好溶劑。另外，兩種溶劑都適合于活性物質(zhì)的腸胃外施用。
各種不同制劑，例如a)WX-UK1 60mg/ml，于PG/EtOH/水40/10/50中b)WX-UK1 50mg/ml，于PG/EtOH/水40/10/50中c)WX-UK1 40mg/ml，于PG/EtOH/水40/10/50中d)WX-UK1 20mg/ml，于PG/EtOH/水10/10/80中e)WX-UK1 4mg/ml，于水中(對(duì)照)f)WX-UK1 4mg/ml，于5％D-甘露醇中(對(duì)照)在2至8攝氏度(2-8℃)下的貯存已表明，在制劑(e)和(f)中，僅僅在數(shù)小時(shí)后就形成了針狀晶體沉淀物。在2至8攝氏度(2-8℃)下，在4天后，在制劑(d)中也形成了具有相似外觀的沉淀物。
在制劑(a)和(b)中，在2至8攝氏度(2-8℃)下，分別在16天和22天的貯存后沒有出現(xiàn)沉淀。
在2-8℃、25℃/60％RF(相對(duì)空氣濕度)和40℃/75％RF的條件下的穩(wěn)定性研究之中，在40℃的條件下，與研究開始時(shí)的大約0.5％的雜質(zhì)含量相比，制劑(c)在6周后就已經(jīng)顯示大約4％的雜質(zhì)含量，在8周后顯示大約23％的雜質(zhì)含量，和在12周后顯示大約38％的雜質(zhì)含量。同時(shí)，制劑的pH值在12周的時(shí)間內(nèi)從5.1上升至8.7(

圖1)。
pH值的升高可能歸因于WX-UK1的分解過(guò)程。圖2顯示了在水性介質(zhì)中活性物質(zhì)WX-UK1的可能的分解反應(yīng)第一步，WX-UK1分解成相應(yīng)的WX-UK1-酰胺，其中釋放出氨，然而其以氯化銨的形式被捕獲，因?yàn)閃X-UK1以鹽酸鹽的形式存在。在第二步分解步驟中，WX-UK1-酰胺和醇反應(yīng)而釋放出其他的氨，從而形成相應(yīng)的WX-UK1-酯。氨的釋放可能是pH值升高的原因。
基于對(duì)于分解過(guò)程的認(rèn)識(shí)，優(yōu)選地考慮無(wú)水制劑以避免由水產(chǎn)生的活性物質(zhì)的分解。然而，純有機(jī)的溶劑的相對(duì)較高的粘性給粘稠的濃縮物在日常的臨床實(shí)踐中的可操作性造成困難。此外，多元醇的強(qiáng)吸濕性質(zhì)導(dǎo)致水的吸收，從而使得活性物質(zhì)的降解過(guò)程重新開始。用有機(jī)緩沖質(zhì)例如三乙醇胺/HCl、哌嗪/HCl、丙酸/丙酸鹽(并非所有所述緩沖質(zhì)都是生理學(xué)上可接受的)進(jìn)行緩沖也會(huì)變得困難重重。
通過(guò)加入表面活性劑例如Pluronic F68或Tween 80，或者穩(wěn)定劑例如人血清白蛋白來(lái)穩(wěn)定水溶液的努力是無(wú)成效的。加入助溶劑例如聚乙二醇，以及在包含膽汁鹽甘氨膽酸鹽一水合物和磷脂卵-磷脂酰膽堿的混合微團(tuán)中配制活性物質(zhì)，同樣也不能提供足夠的穩(wěn)定性。
因此，存在開發(fā)用于具有脒基和/或胍基的活性物質(zhì)的新藥物制劑的需要，該制劑一方面在物理和化學(xué)上是穩(wěn)定的并且可以一份一份地和/或作為濃縮物被良好地操作和貯存，以在需要時(shí)配制穩(wěn)定的藥物制備物，例如具有合適的等滲劑的穩(wěn)定的生理輸注液，所述藥物制備物是相容的并且具有高有效性。

發(fā)明內(nèi)容
根據(jù)本發(fā)明，通過(guò)權(quán)利要求1的藥物制劑來(lái)實(shí)現(xiàn)這些目的，所述藥物制劑包含(i)作為活性物質(zhì)的脒基-、羥基脒基-、胍基-和/或羥基胍基-苯丙氨酸衍生物，(ii)醇或多元醇或其混合物，和(iii)包含緩沖質(zhì)的水相。
所用的活性物質(zhì)優(yōu)選地是作為絲氨酸蛋白酶抑制劑特別是尿激酶抑制劑起作用的苯丙氨酸衍生物。優(yōu)選的活性物質(zhì)是EP-A-1 098651、WO 02/074756和WO 03/103644中公開的脒基苯丙氨酸或胍基苯丙氨酸化合物。羥基脒基苯丙氨酸或羥基胍基苯丙氨酸化合物，如PCT/EP2004/005682中所公開的，同樣也是優(yōu)選的。通式I的衍生自3-脒基苯丙氨酸或3-胍基苯丙氨酸的新尿激酶抑制劑特別適合作為本發(fā)明藥物制劑的活性物質(zhì)， 其以外消旋物的形式以及以L-或D-構(gòu)型的化合物的形式存在，和其中X是脒基或胍基或者羥基脒基或羥基胍基。
R1(a)是OH或OR4，其中R4是任選地被例如羥基、羧基、磺?；⑾趸?、氰基、氧代基(Oxo)和/或鹵素取代的、分枝或不分枝的C1-C8烷基、C3-C8環(huán)烷基或芳烷基，例如苯甲基或苯乙基，(b)是下式的基團(tuán) 其中R5和R6是任何與總體結(jié)構(gòu)相容的殘基，其中特別地(i)R5和R6是H，(ii)R5是H，R6是任選地被例如羥基、羧基、磺?；?、硝基、氰基、氧代基和/或鹵素取代的、分枝或不分枝的C1-C8烷基、芳烷基例如苯甲基或苯乙基、或C5-C8環(huán)烷基，(iii)R5和R6各自獨(dú)立地是任選地被例如羥基和/或鹵素取代的、不分枝或分枝的C1-C4烷基，或(iv)R5是H，R6是-NH2或特別地被芳基或雜芳基取代的氨基，(v)R5是H或任選地被例如羥基和/或鹵素取代的、不分枝或分枝的C1-C4烷基，R6是氨基酸例如α-、β-或ω-氨基羧酸或氨基磺酸的殘基、或者長(zhǎng)度例如為至多50個(gè)氨基酸的肽或長(zhǎng)度例如為大于50個(gè)氨基酸至1,000個(gè)氨基酸的多肽的殘基，(c)是下式的基團(tuán) 其中m表示數(shù)字1或2，和其中一個(gè)或多個(gè)亞甲基任選地被例如羥基、羧基、C1-C4烷基或芳烷基例如苯甲基或苯乙基取代，其中基團(tuán)(c)是外消旋的或者是D-或L-構(gòu)型，R7具有(a)、(b)和(f)中的R1的含義，(d)是下式的基團(tuán) 其中p＝r＝1，p＝1并且r＝2，或p＝2并且r＝1，和其中一個(gè)或多個(gè)亞甲基任選地被例如羥基、羧基、C1-C4烷基或芳烷基例如苯甲基或苯乙基取代，R7具有(a)、(b)和(f)中的R1的含義，(e)是哌啶基，其任選地在位置2、3和4中的一個(gè)位置上被例如C1-C4烷基、C1-C3烷氧基或羥基取代，其中任選地在式(c)、(d)、(e)的雜環(huán)脂族環(huán)上，其他芳香族或環(huán)脂族環(huán)，優(yōu)選苯基或環(huán)己基，在相對(duì)于雜原子的2，3-位和3，4-位處稠合，(f)是下式的基團(tuán)
其中R8表示(i)任選地被例如C1-C6烷基、C1-C3烷氧基、羥基、羧基、磺?；?、硝基、氰基、氧代基和/或鹵素取代的C1-C6烷基，例如乙氧基羰基或芳基，如苯基、對(duì)鹵代苯基、萘基，(ii)飽和或不飽和的、分枝或不分枝的C1-C6烷氧基，或(iii)任選地被例如C1-C6烷基、C1-C3烷氧基、羥基、羧基、磺?；?、硝基、氰基、氧代基和/或鹵素取代的苯氧基羰基或芐氧基羰基，(g)是式-COX的?；渲蠿表示(i)H，任選地被例如羥基、羧基、磺?；?、硝基、氰基、氧代基和/或鹵素取代的、不分枝或分枝的烷基，優(yōu)選C1-C6烷基，特別是甲基，(ii)任選地被例如C1-C6烷基、C1-C3烷氧基、羥基、羧基、磺?；?、硝基、氰基、氧代基和/或鹵素取代的芳基或雜芳基，例如苯基、對(duì)鹵代苯基、噻吩基，或(iii)任選地被例如羥基、羧基、磺?；?、硝基、氰基、氧代基和/或鹵素取代的環(huán)烷基，優(yōu)選C3-C10環(huán)烷基，(h)是芳烷基，例如苯甲基或苯乙基，其中芳香族殘基任選地被例如鹵素原子、C1-C6烷基、C1-C3烷氧基、羥基、氰基、羧基、磺?；蛳趸〈?，(i)是式-CONR′R″的羧酸酰胺殘基、式-CSNR′R″的硫代羧酸酰胺殘基或式-CH2-CONR′R″的乙酸酰胺殘基，其中(i)R′和R″是H，(ii)R′和R″各自獨(dú)立地是C1-C4烷基，(iii)R′是H，R″是C1-C4烷基，(iv)R′是H，R″是芳基，例如苯基，或(v)R′和R″與氮原子一起形成具有5-7個(gè)環(huán)成員的雜環(huán)脂族環(huán)，其可以具有其他雜原子例如N、O和/或S，(j)是SO2-Y殘基，其中Y表示(i)任選地被例如羥基、羧基、磺?；⑾趸⑶杌?、氧代基和/或鹵素取代的C1-C8烷基，優(yōu)選甲基、三氟甲基、三氯甲基，(ii)任選地被例如C1-C6烷基、C1-C3烷氧基、羥基、羧基、磺酰基、硝基、氰基、氧代基和/或鹵素取代的芳基或雜芳基，例如苯基、4-甲基苯基、2，4，6-三甲基苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基、2，2-二甲基-6-甲氧基-色滿基、2，2，5，7，8-五甲基色滿基、蒽醌基、萘基或喹啉基、或者O-芳基優(yōu)選O-苯基或O-雜芳基，或(iii)-NR′R″，其中R′和R″各自獨(dú)立地表示H或C1-C3烷基，(k)是具有5至8個(gè)碳原子的環(huán)脂族環(huán)，其任選地被例如C1-C6烷基、C1-C3烷氧基、鹵素、羥基和/或氧代基取代，(1)是任選地被例如C1-C6烷基、C1-C3烷氧基、羥基、羧基、磺酰基、硝基、氰基、氧代基和/或鹵素取代的雜芳基，例如吡啶基或嘧啶基、或者雜環(huán)脂族殘基例如N-甲基哌啶基，(m)是式-(CH2)n-X的官能化的烷基，其中所述烷基鏈?zhǔn)遣环种Φ幕蚍种Φ?，n＝1-8，官能性殘基X表示(i)羥基，其氫原子任選地被C1-C4烷基、芳烷基例如苯甲基或苯乙基、芳基例如苯基、C1-C4羥基烷基或?；?、CO-烷基(C1-C6)取代，(ii)鹵素原子，(iii)式-N(烷基)2的叔氨基，其中所述烷基具有1至3個(gè)碳原子并優(yōu)選地具有相同的含義，所述氮原子任選地屬于具有5-7個(gè)環(huán)成員的雜環(huán)脂族環(huán)，其可以具有其他雜原子，例如N、O和/或S，R2是任選地被例如C1-C6烷基、C1-C3烷氧基、羥基、羧基、磺?；⑾趸?、氰基、氧代基和/或鹵素取代的苯基，例如苯基、4-甲基苯基、2，4，6-三甲基苯基、2，4，6-三異丙基苯基、4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基，R3是H或者分枝或不分枝的C1-C4烷基，n表示0或1，Z是N或CR9，其中R9是H或者分枝或不分枝的C1-C4烷基。
所述化合物也可以以鹽的形式存在，優(yōu)選生理學(xué)上可接受的酸鹽，例如無(wú)機(jī)酸的鹽，特別優(yōu)選鹽酸鹽、硫酸氫鹽、硫酸鹽，或者合適的有機(jī)酸的鹽。
在上位權(quán)利要求中所定義的化合物之中，特別重要的化合物是這樣的化合物，在該化合物中，R1對(duì)應(yīng)于式(b)、(d)和(f)的基團(tuán)，R2表示被烷基單、二或三取代的苯基，特別是2，4，6-取代的苯基，例如2，4，6-三異丙基苯基，n＝0。進(jìn)一步優(yōu)選的化合物是其中Z是CH或N的化合物。
式(I)的化合物特別優(yōu)選地為Nα-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-脒基-(D，L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid、Nα-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-胍基-(D，L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid或其L-對(duì)映體，或者這些化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。
如上所述，脒基-和胍基-苯丙氨酸衍生物的對(duì)應(yīng)的羥基化合物也適合用作活性物質(zhì)，例如在PCT/EP2004/005682中公開的化合物，特別是通式II和/或III的化合物
其中E表示選自下列的基團(tuán) B表示-SO2-或-CO-，X表示-NR1或-CHR1，Z表示-R4，-OR4或-NH-R4，Y表示-OR2或-NHR2，R1各自獨(dú)立地表示-H、-C1-C6烷基、-C2-C6鏈烯基或-C2-C6炔基，其為未取代或取代的，R2表示-H、-OR1、-COR1、-COOR1或-CON(R1)2，R3表示-H、-C1-C6烷基、-C2-C6鏈烯基或-C2-C6炔基，其為未取代或取代的，或-COR6或-COOR6，或具有例如2-50個(gè)-C2-C4烯氧基例如乙烯氧基的寡聚或多聚烯氧基殘基，R4表示-H、-C1-C6烷基、-C2-C6鏈烯基或-C2-C6炔基，其為未取代或取代的，或環(huán)狀殘基，R5表示-OR6、-N(R6)2、-C1-C6烷基、-C2-C6鏈烯基或-C2-C6炔基，其為未取代或取代的，和R6表示-H、-C1-C6烷基、-C2-C6鏈烯基或-C2-C6炔基，其為未取代或取代的，或環(huán)狀殘基，其中各個(gè)環(huán)狀殘基可以具有一個(gè)或多個(gè)例如選自-C1-C3烷基、-OR6(例如-OH或-C1-C3烷氧基)、鹵素、＝O、-NO2、-CN、-COOR6、-N(R6)2、-NR6COR6、-NR6CON(R6)2和-OCOR6的取代基，和其中各個(gè)烷基、鏈烯基和炔基可以是直鏈的或分枝的，并可以具有一個(gè)或多個(gè)例如選自鹵素(F、Cl、Br、I)、-OR6、-OCOR6，-N(R6)2、-NR6COR6、COOR6、-NR6COR6或環(huán)狀殘基的取代基，或者這些化合物的鹽以及任選地藥學(xué)上常規(guī)的載體、稀釋劑和/或助劑。
優(yōu)選的化合物是通式IV的化合物 其中X、R1、R3、R4和R6如上所定義，或其鹽。
基團(tuán)E在化合物I和II中優(yōu)選地位于苯環(huán)的對(duì)位。特別優(yōu)選的化合物是其中E為Am的通式I的化合物。
本發(fā)明的化合物具有經(jīng)修飾的脒基或胍基官能團(tuán)E，優(yōu)選羥基胍基或羥基脒基官能團(tuán)。已知這樣的修飾物在制備胍基或脒基類型的尿激酶抑制劑中僅作為合成中間產(chǎn)物。迄今未推測(cè)過(guò)藥物有效性。
所述化合物可以以鹽的形式存在，優(yōu)選生理學(xué)上可接受的酸鹽，例如無(wú)機(jī)酸的鹽，特別優(yōu)選鹽酸鹽或硫酸氫鹽，或者合適的有機(jī)酸的鹽，例如有機(jī)羧酸或磺酸的鹽，如酒石酸鹽、甲磺酸鹽或苯磺酸鹽。硫酸氫鹽是特別優(yōu)選的。所述化合物可以以光學(xué)純的化合物形式或以對(duì)映體和/或非對(duì)映體的混合物形式存在。
環(huán)狀殘基可以包含一個(gè)或多個(gè)飽和的、不飽和的或芳香族的環(huán)。環(huán)狀殘基的優(yōu)選實(shí)例是環(huán)烷基、芳基、雜芳基和二環(huán)殘基。單環(huán)或二環(huán)殘基是特別優(yōu)選的。環(huán)狀殘基優(yōu)選地包含4至30個(gè)，特別是5至10個(gè)碳原子和雜原子作為環(huán)原子，以及任選地一個(gè)或多個(gè)前述取代基。雜環(huán)系統(tǒng)優(yōu)選地包含一個(gè)或多個(gè)O、S和/或N原子。優(yōu)選的二環(huán)環(huán)系統(tǒng)是具有-CO-殘基的那些。
烷基、鏈烯基和炔基優(yōu)選地包含至多4個(gè)碳原子。R1優(yōu)選地是H或任選地經(jīng)取代的C1-C4烷基，例如-CH3或C1-C6烷基芳基，從而-CO-X-NR1可以表示例如甘氨酰基、丙氨?；⒈奖滨；蚋弑奖滨；?。R2特別優(yōu)選地是H或C1-C3烷基，從而Y可以表示例如OH或O-C1-C3烷基。R3特別優(yōu)選地是H。在化合物I中，R5優(yōu)選地表示-NHR6，特別優(yōu)選-NH(C1-C5)烷基，其是未取代或取代的，例如-NHC2H5，或者-OR6，特別優(yōu)選-O(C1-C3)烷基，其是未取代或取代的，例如乙氧基或芐氧基，或者-O-芳基，例如苯氧基。在化合物II和III中，R6優(yōu)選地是-H或C1-C3烷基。
優(yōu)選的化合物是這樣的化合物，在該化合物中，結(jié)構(gòu)元件Z表示R4，其中R4表示具有環(huán)狀取代基的烷基，所述環(huán)狀取代基例如為任選地經(jīng)取代的苯基或二環(huán)殘基，例如 特別優(yōu)選的化合物是這樣的化合物，在該化合物中，R4表示取代或未取代的C1-C3烷基芳基，例如芐基，其任選地在間位或?qū)ξ簧峡杀畸u素和/或-NO2取代，其中鹵素選自F、Cl、Br和I，特別優(yōu)選Cl和Br。
最優(yōu)選的化合物是
N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid(WX-671)，N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基脒基-(D)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid，N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-羥基脒基-(D，L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid，N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-羥基胍基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid(WX-683)，N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-羥基胍基-(D)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid，N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基胍基-(D，L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid，N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基胍基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氨基羰基piperazid(WX-685)，N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-羥基胍基-(D)-苯丙氨酸-4-乙氨基羰基piperazid，N-α-(2，4，6-三異丙基苯基磺酰基)-3-羥基胍基-(D，L)-苯丙氨酸-4-乙氨基羰基piperazid，芐基磺?；?(D)-Ser-Gly-(4-羥基胍基芐基)酰胺(WX-678)，4-氯芐基磺酰基-(D)-Ser-N-Me-Ala-(4-羥基胍基芐基)酰胺，4-氯芐基磺酰基-(D)-Ser-Gly-(4-羥基胍基芐基)酰胺，芐基磺酰基-(D)-Ser-N-Me-Gly-(4-羥基胍基芐基)酰胺，4-氯芐基磺酰基-(D)-Ser-Ala-(4-羥基胍基芐基)酰胺及其鹽，例如硫酸氫鹽，例如WX-671·HSO4。
本發(fā)明的制劑單獨(dú)地或者以其混合物或組合的形式包含治療有效量的基于苯丙氨酸衍生物的活性物質(zhì)、生理學(xué)可接受量的醇和/或多元醇、具有緩沖質(zhì)成分的水相以及任選地等滲劑和其他助劑。
本發(fā)明的制劑所含有的活性物質(zhì)的重量份額有利地為0.5-10％，優(yōu)選1-9％，特別優(yōu)選2-5％，相對(duì)于制劑的總重量。
活性物質(zhì)優(yōu)選地以至多100mg/ml、優(yōu)選地至多80mg/ml、優(yōu)選地至多60mg/ml、優(yōu)選地至多50mg/ml、更優(yōu)選地至多40mg/ml、更加優(yōu)選地大約30mg/ml、更加優(yōu)選地大約20mg/ml、更加優(yōu)選地大約10mg/ml、更加優(yōu)選地大約4mg/ml、更加優(yōu)選地至多大約1mg/ml、優(yōu)選地至多大約0.1mg/ml的濃度存在。使用前，任選地可進(jìn)一步對(duì)制劑進(jìn)行稀釋。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)使用的醇或多元醇包括生理學(xué)上可接受的一和多羥基醇。此處所用的多元醇是指多羥基醇。特別地，其可以是二羥基醇(二元醇)或三羥基醇(三元醇)，或者也可以是多羥基醇。
例如，作為一羥基醇，乙醇是優(yōu)選的。然而，也可使用其他生理學(xué)上可接受的醇。
作為多元醇，可特別考慮生理學(xué)上可接受的二元醇和三元醇，作為三元醇優(yōu)選的是例如丙三醇。根據(jù)本發(fā)明，二醇也是合適的。二醇的實(shí)例是乙二醇、丙二醇、聚乙二醇。
醇和/或多元醇優(yōu)選地以這樣的量存在于本發(fā)明的藥物制劑中，即這些組分，相對(duì)于整個(gè)制劑的體積，構(gòu)成大約20-60％、優(yōu)選地40-60％、更優(yōu)選地45-55％、最優(yōu)選地大約50％。
多元醇和醇的混合物是特別優(yōu)選的。在此，多元醇∶醇的比例優(yōu)選地是2∶1至10∶1，更優(yōu)選地3∶1至8∶1，更加優(yōu)選地4∶1至6∶1和最優(yōu)選地4∶1。
所述混合物優(yōu)選地為二醇和乙醇的混合物。丙二醇和乙醇的混合物以及聚乙二醇和乙醇的混合物是特別優(yōu)選的。
包含緩沖質(zhì)的水相優(yōu)選地選自生理學(xué)上可接受的緩沖液，特別是醋酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液等。緩沖質(zhì)組分優(yōu)選地為醋酸鈉緩沖質(zhì)。然而，其他醋酸鹽緩沖質(zhì)也是合適的，例如醋酸鉀緩沖質(zhì)、醋酸鈣緩沖質(zhì)。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠從生理學(xué)上可接受的緩沖質(zhì)特別是醋酸鹽緩沖質(zhì)中選擇合適的緩沖質(zhì)。
相對(duì)于整個(gè)制劑的體積，水相優(yōu)選地以至多70％、優(yōu)選地至多60％、更優(yōu)選地至多大約50％的量存在。不言而喻，如果需要，可在使用前對(duì)藥物制劑進(jìn)行稀釋。優(yōu)選地，在即將使用前對(duì)制劑進(jìn)行稀釋，優(yōu)選地用等滲劑或等滲液體進(jìn)行稀釋，從而優(yōu)選地產(chǎn)生適合于輸注或注射的等滲溶液。
緩沖質(zhì)優(yōu)選地以至多1000mM、優(yōu)選地至多500mM、更優(yōu)選地至多250mM、更優(yōu)選地至多200mM、更加優(yōu)選地大約100mM的濃度存在。
本發(fā)明的制劑還可以包含本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的等滲劑和/或其他助劑。
等滲劑優(yōu)選地是糖，或優(yōu)選地選自，例如，葡萄糖、核糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、乳糖、右旋糖、海藻糖、甘油及其混合物。等滲劑優(yōu)選地以溶液的形式存在。作為等滲劑，優(yōu)選地使用大約1-10％、優(yōu)選地2-7％、特別優(yōu)選地5％的溶液。葡萄糖溶液是特別優(yōu)選的。
本發(fā)明的制劑還可進(jìn)一步包含本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地確定的助劑。
此外，優(yōu)選的是，本發(fā)明的制劑(至少其水性組分)具有在3.5至9.0范圍內(nèi)的pH值、優(yōu)選地在4至7范圍內(nèi)的pH值、和特別優(yōu)選地在4.5至5.5范圍內(nèi)的pH值。
本發(fā)明的制劑可用于各種施用途徑，例如作為液體制劑，可用于腸胃外施用，作為輸注液，可用于肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下施用等。優(yōu)選地通過(guò)靜脈內(nèi)或肌內(nèi)途徑施用制劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地確定適合于此的助劑。
任選地可將本發(fā)明的制劑與其他活性物質(zhì)組合使用，所述活性物質(zhì)例如為細(xì)胞抑制性或細(xì)胞毒性試劑，例如多柔比星、順鉑、5-氟尿嘧啶或抗體和肽。
本發(fā)明的制劑可用于腸胃外施用，例如用于靜脈內(nèi)或肌內(nèi)注射和/或用于輸注。優(yōu)選地，各自相對(duì)于70kg的平均體重，日劑量在皮下或肌內(nèi)施用的情況下為5-250mg，特別優(yōu)選地20-120mg，和在靜脈內(nèi)施用的情況下為10-500mg，特別優(yōu)選地50-250mg。優(yōu)選地，每天一次至每周一次地進(jìn)行施用。
本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)涉及由本發(fā)明的制劑組成的濃縮物，其中活性物質(zhì)以至多100mg/ml、優(yōu)選地至多80mg/ml、更優(yōu)選地至多50mg/ml、更加優(yōu)選地大約40mg/ml的濃度存在。緩沖質(zhì)優(yōu)選地以至多1000mM、優(yōu)選地至多500mM、更優(yōu)選地至多250mM、更加優(yōu)選地大約100mM的濃度存在。
其中活性物質(zhì)的濃度為40mg/ml，緩沖質(zhì)的濃度為100mM的濃縮物是特別優(yōu)選的。
可較長(zhǎng)時(shí)間貯存本發(fā)明的濃縮物和制劑而無(wú)純度和活性物質(zhì)的大量損失，一般在2至8(2-8)℃下但也可在升高的溫度下例如在40℃下進(jìn)行貯藏。
所述活性物質(zhì)化合物適合用于防治與uPA和/或尿激酶-纖溶酶原激活物受體(uPAR)的病理學(xué)過(guò)量表達(dá)相關(guān)的疾病。其例如能夠高效地抑制惡性腫瘤的生長(zhǎng)和/或擴(kuò)散以及抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。在此，任選地可將uPA抑制劑與其他腫瘤劑或與其他治療方式例如輻射或外科手術(shù)一起使用。此外，所述抑制劑對(duì)于其他uPA相關(guān)性和/或uPAR相關(guān)性疾病也是有效的。
這些化合物能夠高效地抑制惡性腫瘤的生長(zhǎng)和/或擴(kuò)散，例如胰腺癌中的腫瘤擴(kuò)散、乳腺癌的腫瘤生長(zhǎng)，以及抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。
此外，本發(fā)明的抑制劑對(duì)于其他uPA相關(guān)疾病也是有效的，例如用于防治疾病例如關(guān)節(jié)炎、炎癥、骨質(zhì)疏松癥、視網(wǎng)膜病例如年齡相關(guān)性黃斑變性，在皮膚病尋常天皰瘡中防止水皰形成。
施用優(yōu)選地與外科手術(shù)、輻射療法和/或化學(xué)療法聯(lián)合進(jìn)行，例如在治療前和/或治療后以及與治療同時(shí)進(jìn)行。
本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)涉及本發(fā)明的濃縮物的用途，即用于通過(guò)在合適的等滲劑中進(jìn)行稀釋來(lái)制備適合于注射或輸注的活性物質(zhì)溶液，其中優(yōu)選地使用5％的葡萄糖溶液，和活性物質(zhì)的濃度優(yōu)選地為至多1mg/ml。
使用本發(fā)明的制劑用于防治尿激酶相關(guān)疾病，特別是用于腫瘤防治，例如用于防治乳腺癌和胰腺癌和/或轉(zhuǎn)移形成。
本發(fā)明的另一個(gè)目標(biāo)是通過(guò)加入合適量的多元醇或醇或其混合物和包含緩沖質(zhì)的水相來(lái)穩(wěn)定藥物制劑的方法，所述藥物制劑包含具有脒基、羥基脒基、胍基和/或羥基胍基的化合物，優(yōu)選脒基-和/或胍基-苯丙氨酸衍生物或其羥基化合物。優(yōu)選地，額外地加入等滲劑。
醇、多元醇、緩沖質(zhì)和等滲劑如上所述。
作為活性物質(zhì)，優(yōu)選地使用如上所述的作為尿激酶抑制劑起作用的脒基-和/或胍基-苯丙氨酸衍生物。
此外，下文中將示例性地但絕對(duì)不是限制性地對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的解釋。
附圖描述表1顯示W(wǎng)X-UK1在各種溶劑和溶劑混合物中的最大溶解度。
圖1顯示在40℃下，在PG/EtOH/水(4/1/5)中，WX-UK1的純度和pH值的變化過(guò)程。
圖2顯示W(wǎng)X-UK1在水溶液中的可能分解機(jī)制。
圖3顯示在48小時(shí)內(nèi)觀察到的在60℃下WX-UK1分解的pH依賴性。
圖4顯示在60℃下，單種WX-UK1制劑的穩(wěn)定性。
圖5顯示與未緩沖的溶液相比，緩沖的WX-UK1制劑的穩(wěn)定性。
圖6顯示在5個(gè)月內(nèi)在40℃下，WX-UK1制劑的純度和含量。
實(shí)施例實(shí)施例1活性物質(zhì)分解的pH依賴性為了在60℃下加熱處理的情況下，在三個(gè)不同的pH值上研究活性物質(zhì)(WX-UK1)分解的pH依賴性，將2.5mg WX-UK1溶解在1ml乙醇/水(1∶1 v/v)中，。將該溶液等分至三個(gè)容器中。通過(guò)加入20μl 1N鹽酸將一個(gè)等分試樣調(diào)節(jié)至pH 2，通過(guò)加入20μl 2N氫氧化鈉溶液將第二個(gè)等分試樣調(diào)節(jié)至pH 11，和將第三個(gè)等分試樣保持在中性pH。溫育后，通過(guò)指示穩(wěn)定性的HPLC法在指定的時(shí)間點(diǎn)(0、5、12和48小時(shí))上分析溶液。顯示出，在所研究的時(shí)間內(nèi)，WX-UK1在酸性pH下保持穩(wěn)定。然而，在中性或堿性pH下，觀察到WX-UK1的中速至快速的分解(圖3)。
實(shí)施例2多元醇/乙醇制劑中的活性物質(zhì)的穩(wěn)定性將0.4ml丙二醇(PG)和0.1ml乙醇相繼加至40mg WX-UK1。該溶液用0.3ml水補(bǔ)足并攪拌，直至WX-UK1在溶液中消散和溶液呈現(xiàn)淡淡的乳白色光。然后加入剩余的水(大約0.2ml)。然后將溶液在40℃下貯存，各在2、4、6、8和12周后分析溶液的pH值或純度。為此，將250μ1 WX-UK1溶液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，并用水/乙腈(50∶50v/v)補(bǔ)足直至滿刻度線(濃度大約0.1mg/ml的WX-UK1)。然后通過(guò)指示穩(wěn)定性的HPLC法分析20μl的該稀釋液(參見附件)。在20-25℃下，通過(guò)電勢(shì)滴定法進(jìn)行WX-UK1溶液的pH值分析。顯示出(圖1)，溶液的pH值越高，WX-UK1分解得越快。
實(shí)施例3可選擇的經(jīng)緩沖的WX-UK1制劑制備下列溶液(a)至(e)各5ml。然后在60℃下貯存所述溶液，在0、12、24、48小時(shí)的時(shí)間后，分析各溶液的pH值和純度。為此，將250μl WX-UK1溶液轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，并用水/乙腈(50∶50 v/v)補(bǔ)足直至滿刻度線(濃度為大約0.1mg/ml的WX-UK1)。然后通過(guò)指示穩(wěn)定性的HPLC法分析20μl的該WX-UK1溶液稀釋液(參見附件)。
a)1mg/ml的在水中的WX-UK1(測(cè)量pH值)；b)40mg/ml的在PG/乙醇/水(4∶1∶5)中的WX-UK1(測(cè)量pH值)；c)40mg/ml的在無(wú)水1，2-丙二醇/乙醇中的WX-UK1；d)40mg/ml的在PG/乙醇/40mM檸檬酸鈉(4∶1∶5)中的WX-UK1(調(diào)節(jié)pH值至溶液(b)的pH值)；e)40mg/ml的在PG/乙醇/40mM醋酸鈉緩沖液(4∶1∶5)中的WX-UK1(調(diào)節(jié)pH值至溶液(b)的pH值)。
為了制備80mM(上述pH值)檸檬酸鈉緩沖液，將1.68g檸檬酸一水合物溶解在8ml 1N氫氧化鈉中，用水補(bǔ)足至100ml。用80nM的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值。通過(guò)1/80的稀釋和隨后的pH調(diào)節(jié)而獲得1mM的緩沖液。
選擇pH 5的醋酸鈉和檸檬酸鈉作為用于緩沖WX-UK1制劑的腸胃外可接受的系統(tǒng)，相對(duì)于未緩沖的制劑和無(wú)水制劑，檢測(cè)化學(xué)和物理穩(wěn)定性。不采用磷酸鹽緩沖，因?yàn)楦鶕?jù)早期的研究已知，在WX-UK1溶液中通過(guò)加入磷酸鹽緩沖液而形成了沉淀物。在60℃下進(jìn)行穩(wěn)定性研究以獲得更快速的WX-UK1的分解。在經(jīng)檸檬酸鹽緩沖的WX-UK1溶液中非?？焖俚禺a(chǎn)生沉淀物，與溶液的上清液一樣，就WX-UK1的純度對(duì)其進(jìn)行檢驗(yàn)。由于經(jīng)檸檬酸鈉緩沖的溶液缺乏物理穩(wěn)定性和被研究的制劑缺乏化學(xué)穩(wěn)定性，在4天后中斷這些制劑的穩(wěn)定性研究。經(jīng)醋酸鈉緩沖的WX-UK1制劑展示了最高的物理和化學(xué)穩(wěn)定性。利用通過(guò)指示穩(wěn)定性的HPLC法確定的WX-UK1峰面積百分?jǐn)?shù)用于分析(圖4)。
實(shí)施例4經(jīng)醋酸鈉緩沖的溶液的穩(wěn)定性基于這些結(jié)果，選擇pH為5的各種摩爾濃度的醋酸鈉作為用于緩沖WX-UK1制劑的腸胃外可接受的系統(tǒng)，另外檢測(cè)相對(duì)于未緩沖的制劑的化學(xué)穩(wěn)定性。在60℃下進(jìn)行穩(wěn)定性研究以獲得加速的WX-UK1的分解(圖5)。利用通過(guò)指示穩(wěn)定性的HPLC法確定的WX-UK1峰面積百分?jǐn)?shù)用于分析。
結(jié)果通過(guò)對(duì)制劑進(jìn)行緩沖可顯著延緩WX-UK1的分解。
實(shí)施例5使用經(jīng)醋酸鈉緩沖的制劑的持續(xù)幾個(gè)月的穩(wěn)定性研究200mM醋酸鈉緩沖液的配制將821mg醋酸鈉溶解在50ml水中并用濃醋酸將pH調(diào)節(jié)至pH 5，將制得的緩沖溶液通過(guò)Millipore，Millex GV 0.22μm這種注射器過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾。
經(jīng)100mM醋酸鈉緩沖的WX-UK1制劑的配制稱取960mg WX-UK1放入容器中，加入9.6ml丙二醇，然后加入2.4ml乙醇。用7ml 200mM醋酸鈉緩沖液將該溶液補(bǔ)足并攪拌直至WX-UK1消散在溶液中和溶液顯現(xiàn)淡淡的乳白色光。然后加入剩余的醋酸鈉緩沖液(5ml)。將溶液分成1ml的等分試樣，然后在40℃下貯存。各在2、4、6、8和12周的時(shí)間后分析溶液的純度和WX-UK1的含量。為此，將250μl WX-UK1溶液轉(zhuǎn)移入100ml量瓶中，并用水/乙腈(50∶50 v/v)補(bǔ)足直至滿刻度線(濃度大約0.1mg/ml的WX-UK1)。然后通過(guò)指示穩(wěn)定性的HPLC法分析20μl的該WX-UK1溶液稀釋液(參見附件)。
相對(duì)于兩種WX-UK1標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用下列公式計(jì)算WX-UK1的含量 面積PL＝測(cè)試溶液的面積(WX-UK1峰) [mAU*s]面積St1＝標(biāo)準(zhǔn)I的面積(WX-UK1峰) [mAU*s]面積St2＝標(biāo)準(zhǔn)II的面積(WX-UK1峰)[mAU*s]WSt1＝標(biāo)準(zhǔn)I的重量 [mg]WSt2＝標(biāo)準(zhǔn)II的重量 [mg]CSt＝標(biāo)準(zhǔn)的含量[％]VPL＝所使用的注射液的體積 [ml]圖6顯示了隨著時(shí)間的流逝，制劑的純度和WX-UK1含量的變化。很明顯，與未緩沖的制劑相反，經(jīng)緩沖的WX-UK1制劑的純度和含量均保持非常穩(wěn)定(圖6)。
實(shí)施例6使用下列方案制備WX-UK1制劑(40mg/ml)WX-UK1 40mg丙二醇 0.4ml
無(wú)水乙醇 0.1ml水加至1ml稱取WX-UK1放入容器中，加入丙二醇，然后加入乙醇。用0.3ml水將該溶液補(bǔ)足并攪拌直至WX-UK1消散在溶液中或溶液顯現(xiàn)淡淡的乳白色光。然后加入剩余的水。
實(shí)施例7使用下列方案制備經(jīng)醋酸鈉緩沖的WX-UK1制劑(40mg/ml)WX-UK140mg丙二醇0.4ml無(wú)水乙醇 0.1ml醋酸鈉緩沖液(200mM) 加至1ml稱取WX-UK1放入容器中，加入丙二醇，然后加入乙醇。用0.3ml200mM醋酸鈉將該溶液補(bǔ)足并同時(shí)進(jìn)行攪拌直至WX-UK1完全消散在溶液中或溶液顯現(xiàn)淡淡的乳白色光。然后加入剩余的醋酸鹽緩沖液。
實(shí)施例8用于驗(yàn)證WX-UK1制劑的穩(wěn)定性的指示穩(wěn)定性的HPLC法儀器HPLC設(shè)備Agilent 1100和 柱類型 LUNA C8(2)5μm，250mm，條件4.6mm ID或Kromasil 100 C18 5μm，250mm，4mm ID檢測(cè)波長(zhǎng) UV 205nm樣品注射器溫度 4℃柱溫度 40℃注射體積 20μl系統(tǒng)類型 梯度系統(tǒng)流速1ml/分鐘進(jìn)行時(shí)間 44分鐘流動(dòng)相A緩沖液pH＝5.00±0.05(25mM磷酸鈉)B乙腈梯度

end使用 用于色譜法的水(梯度級(jí))的 用于色譜法的乙腈材料 正磷酸，85％超純(Suprapur)磷酸氫二鈉，分析級(jí)(＞99.99％)25mM磷酸鈉緩沖液，pH＝5.00±0.05(向3.55g Na2HPO4中加水至1000ml。用H3PO4調(diào)節(jié)pH至PH＝5.00±0.05)樣品制備WX-UK1測(cè)試溶液用975μl水/乙腈(50∶50 v/v)稀釋25μl WX-UK1(40mg/ml)濃縮物。用900μl水/乙腈(50∶50 v/v)稀釋100μl該稀釋液(濃度為大約0.1mg/ml WX-UK1)。
實(shí)施例9用于鑒定WX-UK1制劑的分解產(chǎn)物的HPLC-MS法儀器HPLC設(shè)備 Water Alliance和 2695分離組件；條件 2487UV-VIS檢測(cè)器MS檢測(cè)器 Micromass ZQ
單個(gè)四極MS檢測(cè)器柱類型Symmetry C18 3.5μm；2.1×100mm檢測(cè)波長(zhǎng) UV 215nm樣品注射器溫度4℃柱溫度 35℃注射體積 20μl系統(tǒng)類型梯度系統(tǒng)流速0.5ml/分鐘進(jìn)行時(shí)間 16分鐘流動(dòng)相ANH4Ac緩沖液/ACN72/25(v/v)BNH4Ac緩沖液/ACN30/70(v/v)C甲醇梯度

end使用用于色譜法的水(梯度級(jí))的 用于色譜法的乙腈(梯度級(jí))材料 甲醇(HPLC梯度級(jí))冰醋酸(超純)醋酸銨(HPLC級(jí))50mM NH4Ac向3.85g NH4Ac中加水至1000ml。用冰醋酸將pH調(diào)節(jié)至5。
權(quán)利要求
1.一種藥物制劑，其包含(i)作為活性物質(zhì)的脒基-、羥基脒基-、胍基-和/或羥基胍基-苯丙氨酸衍生物，(ii)醇或多元醇或其混合物，和(iii)包含緩沖質(zhì)的水相。
2.權(quán)利要求1的藥物制劑，其中所述緩沖質(zhì)是醋酸鹽緩沖質(zhì)。
3.權(quán)利要求2的藥物制劑，其中所述緩沖質(zhì)是醋酸鈉緩沖質(zhì)。
4.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物制劑，其中所述緩沖質(zhì)以至多1000mM的濃度存在。
5.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物制劑，其中所述醇是乙醇。
6.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物制劑，其中所述多元醇選自甘油、丙二醇和聚乙二醇。
7.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物制劑，其中所述醇和/或多元醇以相對(duì)于整個(gè)制劑大約20-60％的量存在。
8.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物制劑，其中組分(ii)包含由多元醇/醇以2∶1至10∶1的混合比例組成的混合物。
9.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物制劑，其還包含等滲劑和/或其他助劑或其組合。
10.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物制劑，其中所述等滲劑選自葡萄糖、核糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、右旋糖、海藻糖、甘油、甘露醇和其混合物。
11.權(quán)利要求10的藥物制劑，其中所述等滲劑是1％至10％，特別是5％的溶液。
12.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物制劑，其中所述制劑在室溫下具有大約3.5至大約9.0的pH值，優(yōu)選地大約4.5至大約5.5的pH值。
13.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物制劑，其中所述活性物質(zhì)選自Nα-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-脒基-(D，L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid、Nα-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-胍基-(D，L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid、其L-對(duì)映體和其藥學(xué)上可接受的鹽。
14.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物制劑，其包含作為活性物質(zhì)的Nα-(2，4，6-三異丙基苯基磺?；?-3-脒基-(L)-苯丙氨酸-4-乙氧基羰基piperazid、其氯化物、硫酸氫鹽和/或硫酸鹽。
15.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物制劑的濃縮物，其中所述活性物質(zhì)以至多100mg/ml的濃度存在，緩沖質(zhì)以至多1000mM的濃度存在。
16.權(quán)利要求12的濃縮物，其中所述活性物質(zhì)以至多40mg/ml的濃度存在，緩沖質(zhì)以至多100mM的濃度存在。
17.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的制劑或濃縮物，其用于防治尿激酶相關(guān)疾病。
18.前述權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)的制劑或濃縮物，其用于腫瘤防治、腫瘤預(yù)防以及防治和/或預(yù)防轉(zhuǎn)移形成。
19.前述權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)的制劑或濃縮物，其用于防治和/或預(yù)防乳腺癌、胰腺癌和/或轉(zhuǎn)移形成。
20.前述權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)的制劑或濃縮物，其用于防治和/或預(yù)防關(guān)節(jié)炎、炎癥、骨質(zhì)疏松癥、視網(wǎng)膜病例如年齡相關(guān)性黃斑變性、在皮膚病尋常天皰瘡中防止水皰形成。
21.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的藥物制劑或濃縮物的用途，用于通過(guò)將所述藥物制劑或濃縮物稀釋在合適的等滲劑中來(lái)制備適合通過(guò)注射或輸注進(jìn)行施用的溶液，其中活性物質(zhì)的最大濃度為至多1mg/ml。
22.權(quán)利要求21的用途，其中所述等滲劑是1％至10％的葡萄糖溶液，特別是5％的葡萄糖溶液。
23.權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)的藥物制劑或濃縮物用于治療和/或預(yù)防腫瘤疾病的用途。
24.權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)的藥物制劑或濃縮物用于治療和/或預(yù)防轉(zhuǎn)移形成的用途。
25.權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)的藥物制劑或濃縮物與細(xì)胞抑制性和/或細(xì)胞毒性試劑組合的用途。
26.通過(guò)加入合適量的多元醇或醇或其混合物和合適量的包含緩沖質(zhì)的水相來(lái)穩(wěn)定藥物制劑的方法，所述藥物制劑包含作為活性物質(zhì)的具有脒基、羥基脒基、胍基和/或羥基胍基的化合物。
27.權(quán)利要求26的方法，其中使用醋酸鹽緩沖質(zhì)作為緩沖質(zhì)。
28.權(quán)利要求26或27的方法，其中另外加入等滲劑。
29.權(quán)利要求26至28中任一項(xiàng)的方法，其中使用脒基-、羥基脒基-、胍基-和/或羥基胍基-苯丙氨酸衍生物作為活性物質(zhì)。
30.可通過(guò)權(quán)利要求26至29中任一項(xiàng)的方法獲得的穩(wěn)定的藥物制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及改良的和穩(wěn)定的苯丙氨酸衍生物的藥物制劑和其作為尿激酶抑制劑的用途，特別是用于治療惡性腫瘤和腫瘤轉(zhuǎn)移的用途。
文檔編號(hào)A61K31/18GK1993144SQ200580025625
公開日2007年7月4日 申請(qǐng)日期2005年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月21日
發(fā)明者W·斯克瑪麗克斯, M·布戈?duì)? K·克什 申請(qǐng)人:威麗克斯股份公司