專利名稱：用奧沙利鉑和egfr－抑制劑治療的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及意欲治療癌癥的組合物和制備藥物的方法。具體地，本發(fā)明涉及用于制備含有奧沙利鉑和表皮生長因子受體(EGFR)激酶抑制劑的藥物的方法。
癌癥是各種各樣的細胞惡性腫瘤的通用名，其特征為生長失控、缺少分化、和能夠侵襲局部組織并轉移的能力。這些惡性腫瘤以不同的發(fā)病率影響體內的每種組織和器官。
在過去的幾十年中已經開發(fā)了多種用于治療各種類型癌癥的治療劑。最常用的抗癌劑類型包括DNA烷化劑(例如環(huán)磷酰胺，異環(huán)磷酰胺)，抗代謝物(例如氨甲蝶呤，葉酸拮抗劑，和5-氟尿嘧啶，嘧啶拮抗劑)，微管破壞劑(例如長春新堿，長春堿，紫杉醇)，DNA插入劑(例如阿霉素，柔紅霉素，順鉑)和激素療法(例如他莫昔芬，氟他胺)。
結腸直腸癌是美國癌相關發(fā)病率和死亡率中最主要的原因之一。對該疾病的治療主要取決于腫瘤的大小、位置和階段，是否惡變已經擴展到身體其它部分(轉移)，和取決于患者的通常健康狀態(tài)。治療選擇包括對早期局部疾病進行手術移除腫瘤，化療和放療。但是，目前化療是轉移性疾病的唯一療法。5-氟尿嘧啶是當前治療晚期結腸直腸癌最為有效的單制劑，其應答率為大約10％。另外，一些新制劑已經顯示出治療方面的前景，例如拓撲異構酶I抑制劑尹立替康(CPT11)，基于鉑的細胞毒性制劑奧沙利鉑(例如EloxatinTM)，和EGFR激酶抑制劑埃洛替尼(erlotinib)([6，7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉-4-基]-(3-乙炔基苯基)胺，例如埃洛替尼HCl，TarcevaTM)。
表皮生長因子受體(EGFR)激酶或其配體TGF-α的過表達與許多癌癥時常相關，所述癌癥包括乳腺癌、肺癌、直腸結腸癌和頭頸癌(SalomonD.S.，等(1995)Crit.Rev.Oncol.Hematol.19183-232；Wells，A.(2000)Signal，14-11)，并且據(jù)信其還對這些腫瘤的惡性生長起作用。也已經發(fā)現(xiàn)在EGFR基因中的特定缺失-突變增加了細胞致瘤性(Halatsch，M-E.等(2000)J.Neurosurg.92297-305；Archer，G.E.等(1999)Clin.Cancer Res.52646-2652)。EGFR刺激的信號途徑的活化促進了多個可能促進癌癥的進程，例如增殖，血管生成，細胞遷移和侵襲，減少的細胞凋亡，和誘導藥物抗性。將直接抑制EGFR激酶活性的化合物用作抗腫瘤制劑的開發(fā)，以及將通過阻斷EGFR活化而降低EGFR激酶活性的抗體用作抗腫瘤制劑，是研究的熱點(de Bono J.S.and Rowinsky，E.K.(2002)Trends in Mol.Medicine 8S19-S26；Dancey，J.and Sausville，E.A.(2003)Nature Rev.DrugDiscovery 292-313)。一些研究已經證實或者公開當與某些其它抗癌劑或者化療劑或治療并用的時候，一些EGFR激酶抑制劑可以改善殺傷腫瘤細胞或者瘤。(例如Raben，D.等(2002)Semin.Oncol.2937-46；Herbst，R.S.等(2001)Expert Opin.Biol.Ther.1719-732；Magne，N等(2003)Clin.Can.Res.94735-4732；Magne，N.等(2002)British Journal of Cancer86819-827；Torrance，C.J.等(2000)Nature Med.61024-1028；Gupta，R.A.and DuBois，R.N.(2000)Nature Med.6974-975；Tortora，等(2003)Clin.Cancer Res.91566-1572；Solomon，B.et al(2003)Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.55713-723；Krishnan，S.等(2003)Frontiers in Bioscience 8，el-13；Huang，S等(1999)Cancer Res.591935-1940；Contessa，J.N.等(1999)Clin.Cancer Res.5405-411；Li，M.等Clin.(2002)Cancer Res.83570-3578；Ciardiello，F(xiàn).等(2003)Clin.Cancer Res.91546-1556；Ciardiello，F(xiàn).等(2000)Clin.Cancer Res.63739-3747；Grunwald，V.and Hidalgo，M.(2003)J.Nat.Cancer Inst.95851-867；Seymour L.(2003)Current Opin.Investig.Drugs 4(6)658-666；Khalil，M.Y.等(2003)Expert Rev.AnticancerTher.3367-380；Bulgaru，A.M.等(2003)Expert Rev.AnticancerTher.3269-279；Dancey，J.and Sausville，E.A.(2003)Nature Rev.DrugDiscovery 292-313；Kim，E.S.等(2001)Current Opinion Oncol.13506-513；Arteaga，C.L.and Johnson，D.H.(2001)Current Opinion Oncol.13491-498；Ciardiello，F(xiàn).等(2000)Clin.Cancer Res.62053-2063；專利公開號US2003/0108545；US 2002/0076408；和US 2003/0157104；以及國際專利公開號WO 99/60023；WO01/12227；WO 02/055106；WO 03/088971；WO01/34574；WO 01/76586；WO 02/05791；和WO 02/089842)。
抗瘤藥物應該理想地選擇性殺傷癌細胞，具有相對于其對非惡性腫瘤細胞毒性而言更為寬泛的治療指數(shù)。即使延長暴露于該藥物，其同樣保留針對惡性腫瘤細胞的效力。遺憾的是，沒有一種目前的化療具有這種理想的特性。相反，多數(shù)具有非常窄的治療指數(shù)。此外，癌細胞暴露于輕微亞致死濃度的化療劑通常會形成對該藥劑的抗性，形成對一些其它抗瘤制劑的交叉抗性也是很常見的。
因此，需要治療瘤形成和其它增生疾病的更有效的療法。用于提高目前藥物治療效力的策略涉及改變它們的給藥時間表，以及與其它抗癌劑或者生化調節(jié)劑結合使用。眾所周知的聯(lián)合治療是一種這樣的方法其可以產生相對于單獨使用每一種治療性相關劑量的制劑更好的效力和減少的副作用。在一些情況下，藥物組合的效力是加成性的(組合的效力基本上等于每種藥物單獨效力的總和)，但在其他情形中，效力是增效性的(組合的效力大于每種藥物單獨給藥效力的總和)。例如，當與5-FU和甲酰四氫葉酸(leucovorin)組合時，奧沙利鉑對結腸直腸癌的一線治療顯示出25％-40％的應答率(Raymond，E.等(1998)Semin Oncol.25(2 Suppl.5)4-12)。
然而，仍急需對結腸直腸癌和其它癌癥的改善治療。本發(fā)明提供了抗癌組合療法，其降低了效力所需的每種組分的劑量，從而降低了與每種藥劑相關的副作用，而同時保持或者增加了治療價值。在此描述的本發(fā)明提供了新的藥物組合，和使用該藥物組合來治療結腸直腸癌和其它癌癥的方法。
發(fā)明簡述本發(fā)明提供了一種用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉移的藥物的方法，其特征在于使用EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑。優(yōu)選地，意欲同時或者先后給予患者治療有效量的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑的組合，并使用或者不使用另外的藥劑或者療法，例如其它的抗癌藥物或者放射療法。
本發(fā)明還包括藥物組合物，其包括結合有藥用載體的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合。
可用于實施本發(fā)明的優(yōu)選EGFR激酶抑制劑實例是化合物鹽酸埃洛替尼(erlotinib HCl)(也稱為TarcevaTM)。


圖1腫瘤植入后，藥物治療對動物體重的影響。
圖2在裸鼠中藥物治療對LoVo人結腸異種移植物中腫瘤體積的影響。
圖3來自功效研究540的代表性被治療的腫瘤。
圖4研究540的毒性總結。
圖5研究540的功效總結。
發(fā)明詳述術語“癌”在動物中指的是存在這樣的細胞，該細胞具有致癌細胞的典型特性，例如增殖失控，永生化，轉移潛能，快速生長和增殖率，和某些形態(tài)學特性。通常，癌細胞的形式是腫瘤，但是這樣的細胞可以單獨存在于動物中，或者作為獨立的細胞在血液中循環(huán)，如白血病細胞。
除非其它指明，本發(fā)明使用的“不正常細胞生長”指的是細胞生長獨立于正常的調控機制(例如喪失接觸抑制)。其包括下列情況的不正常生長1.腫瘤細胞(腫瘤)，其通過表達突變的酪氨酸激酶或者過表達酪氨酸激酶受體而增殖；2.其它增殖疾病的良性和惡性細胞，其中發(fā)生異常的酪氨酸激酶活化；4.任何通過受體酪氨酸激酶而增殖的腫瘤；5.任何通過異常絲氨酸/蘇氨酸激酶活化而增殖的腫瘤；和6.其它增殖疾病的良性和惡性細胞，其中發(fā)生異常的絲氨酸/蘇氨酸激酶活化。
除非其它指明，本發(fā)明使用的術語“治療”表示在患者中部分或者全部逆轉、減輕、抑制進程、或者預防腫瘤生長、腫瘤轉移或者其它致癌細胞或致腫瘤細胞。本發(fā)明使用的術語“治療”，除非其它指明，指的是治療的行為。
當短語“治療方法”或其等效語應用于例如癌癥時，其指的這樣的行動的步驟或者過程，該行動經過設計以在動物中降低或者消除癌細胞的數(shù)量，或者緩解癌癥的癥狀。癌癥或者其它增殖疾病的“治療方法”不必定意味著所述的癌細胞或者其它疾病事實上會被消除了；所述細胞的數(shù)量或者疾病事實上會被降低；或者癌癥或者其它疾病的癥狀事實上會被緩解。通常，即使成功可能很小，也會進行癌癥的治療方法，然而考慮到動物的用藥史和預計的生存期，所述方法就其總體的作用過程來說對該動物是有益的。
術語“治療有效的藥劑”指的是這樣的組合物，其將會誘導被研究者、獸醫(yī)、醫(yī)生或者其它臨床醫(yī)師所研究的組織、系統(tǒng)、動物或者人的生物或者醫(yī)學應答。
術語“制備藥物的方法”涉及制備用于如本文所述的適應癥、特別是用于腫瘤、腫瘤轉移或通常的癌癥的藥物。該術語涉及在指定的適應癥中的所謂的“瑞士類型”的權利要求形式。
術語“治療有效量”或者“有效量”指的是將會誘導被研究者、獸醫(yī)、醫(yī)生或者其它臨床醫(yī)師所研究的組織、系統(tǒng)、動物或者人的生物或者醫(yī)學應答的受試化合物或者組合的量。
以下實施例中給出的數(shù)據(jù)證實共同給藥奧沙利鉑和EGFR激酶抑制劑對于治療晚期癌癥如結腸直腸癌有效。因此，本發(fā)明提供了一種制備用于在患者中治療腫瘤或者腫瘤轉移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合。優(yōu)選地，該組合意欲同時或者先后給藥于患者。在一個實施方案中，所述的要被治療的腫瘤或者腫瘤轉移是結腸直腸腫瘤或者腫瘤轉移。
優(yōu)選地，意欲將這些物質同時或者先后給藥于患者。因此，本發(fā)明還提供了一種用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合并且意欲將其同時或者先后給藥于患者。優(yōu)選地，此外，使用一種或者多種其它細胞毒性的、化療的或者抗癌劑，或者使用增強這些藥劑效果的化合物。
在本發(fā)明的上下文中，額外的其它細胞毒性的、化療的或者抗癌藥劑或者增強這些藥劑效果的化合物包括，例如烷化劑或者具有烷化作用的制劑如環(huán)磷酰胺(CTX；如cytoxan)，苯丁酸氮芥(CHL；如leukeran)，順鉑(Cisp；如platinol)，白消安(如myleran)，美法侖，卡莫昔汀(BCNU)，鏈脲霉素，曲他胺(TEM)，絲裂霉素C等；抗代謝物類，例如甲氨蝶呤(MTX)，依托泊苷(VP16；如vepesid)，6-巰嘌呤(6MP)，6-thiocguanine(6TG)，阿糖胞苷(Ara-C)，5-氟尿嘧啶(5-FU)，卡培他濱(如Xeloda)，達卡巴嗪(DTIC)，等等；抗生素類例如放線菌素D，多柔比星(DXR；如adriamycin)，柔紅霉素(daunomycin)，博來霉素，普卡霉素等等；生物堿類，例如長春花生物堿類例如長春新堿(VCR)，長春堿，等等；和其它抗腫瘤藥劑例如紫杉醇(如taxol)和紫杉醇衍生物，細胞增殖抑制劑(cytostatic agents)，糖皮質激素如地塞米松(DEX；如decadron)和皮質甾類例如波尼松，核苷酶抑制劑例如羥基脲，氨基酸耗竭酶(amino acid depleting enzymes)例如天冬酰胺酶，甲酰四氫葉酸(leucovorin)，亞葉酸(folinic acid)，雷替曲塞(raltitrexed)，和其它葉酸衍生物，和類似的不同的抗腫瘤劑。還可以將下列藥劑用作附加藥劑arnifostine(如ethyol)，放線菌素D，mechlorethamine(氮芥)，鏈佐星，環(huán)磷酰胺，lornustine(CCNU)，多柔比星脂(如doxil)，柔紅霉素脂(如daunoxome)，丙卡巴肼，絲裂霉素，多西他賽(如taxotere)，阿地白介素，卡鉑，克拉屈濱，喜樹堿，CPT11(伊立替康)，10-羥基7-乙基-喜樹堿(SN38)，氟尿苷，氟達拉濱，異環(huán)磷酰胺，伊達比星，美鈉，干擾素α，干擾素β，米托蒽醌，托泊替康，亮丙立德，甲地孕酮，美法侖，巰嘌呤，普卡霉素，米托坦，培門冬酶，噴司他丁，哌泊溴烷，普卡霉素，他莫昔芬，替尼泊苷，睪內酯，硫鳥嘌呤，塞替派，尿嘧啶氮芥，長春瑞濱，苯丁酸氮芥。
同樣更優(yōu)選的是一種用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合并且意欲將該組合同時或者先后給藥于患者，其中另外使用一種或者多種抗-激素劑。如本文所用，術語“抗-激素劑”包括天然的或者合成的有機或者肽化合物，其調節(jié)或者抑制激素對腫瘤的作用。
抗激素劑包括例如類固醇受體拮抗劑，抗雌激素類例如他莫昔芬，雷洛昔芬，芳香酶抑制4(5)-咪唑，其它芳香酶抑制劑，42-羥基他莫昔芬，曲沃昔芬，keoxifene，LY 117018，奧那斯酮，和托瑞米芬(如Fareston)；抗雄激素類例如氟他胺，尼魯米特，比卡魯胺，亮丙立德，和戈舍瑞林；以及上述任何制劑的藥用鹽、酸或者衍生物；糖蛋白激素的激動劑和/或拮抗劑例如促卵泡激素(FSH)，促甲狀腺激素(TSH)和促黃體激素(LH)和LHRH(促黃體激素釋放激素)；LHRH激動劑戈舍瑞林醋酸酯，可作為Zoladex(AstraZeneca)商購；LHRH拮抗劑D-丙氨酰胺N-乙?；?3-(2-萘基)-D-丙氨酰-4-氯-D-苯丙氨酰-3-(3-吡啶基)-D-丙氨酰-L-絲氨酰-N6-(3-吡啶基羰基)-L-賴氨酰-N6-(3-吡啶基羰基)-D-賴氨酰-L-亮氨酰-N6-(1-甲基乙基)-L-賴氨酰-L-脯氨酸(如Antide，Ares-Serono)；LHRH拮抗劑醋酸加尼瑞克；甾體抗雄激素類醋酸環(huán)丙孕酮(CPA)和醋酸甲地孕酮，可以作為Megace(Bristol-Myers Oncology)商購；非甾體抗雄激素氟他胺(2-甲基-N-[4，20-硝基-3-(三氟甲基)苯丙酰胺]，可以作為Eulexin(Schering Corp.)商購；非甾體抗雄激素尼魯米特，(5，5-二甲基-3-[4-硝基-3-(三氟甲基-4′-硝基苯基)-4，4-二甲基-咪唑烷-二酮]；和其它非許可受體的拮抗劑，例如RAR，RXR，TR，VDR等等的拮抗劑。
化療方案中使用上述細胞毒性和其它抗癌劑在癌癥治療領域已經被很好的表征，并且其在這里的應用也要考慮對耐藥性和效果的監(jiān)測以及考慮對給藥途徑和劑量的控制，進行一定程度的調節(jié)。例如，細胞毒性劑的實際劑量可以是變化的，這要取決于通過使用組織培養(yǎng)方法確定的患者的培養(yǎng)細胞應答。通常，相比于在沒有額外其它制劑時使用的量，所述的劑量將減少。
有效細胞毒性制劑的典型的劑量可以在制備商推薦的范圍內，并且當通過體外應答或者動物模型中的應答表明時，其可以被降低達大約一個數(shù)量級的濃度或者量。因此，實際的劑量將取決于醫(yī)師的判斷，患者的情況，和治療方法的效果，所述的治療方法基于初級培養(yǎng)的惡性腫瘤細胞或者組織培養(yǎng)的組織樣品的體外應答，或者在適當動物模型中觀察到的應答。
在本發(fā)明的上下文中，在上述的另外細胞毒性的、化療的或者抗癌劑中，優(yōu)選化合物5-氟尿嘧啶。方便地，5-氟尿嘧啶與甲酰四氫葉酸(leucovoran)的組合可以與本發(fā)明的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合一起使用。5-氟尿嘧啶，甲酰四氫葉酸和奧沙利鉑組合常常被表示為FOLFOX4。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合并且意欲將其同時或者先后給藥于患者，其中另外使用一種或者多種血管生成抑制劑。
抗血管生成制劑包括例如VEGFR抑制劑如SU-5416和SU-6668(Sugen Inc.of South San Francisco，Calif.，USA)，或者如這里所描述的例如國際申請?zhí)朩O 99/24440，WO 99/62890，WO 95/21613，WO 99/61422，WO 98/50356，WO 99/10349，WO 97/32856，WO 97/22596，WO 98/54093，WO 98/02438，WO 99/16755，和WO 98/02437，和美國專利號5,883,113，5,886,020，5,792,783，5,834,504和6,235,764；VEGF抑制劑例如IM862(Cytran Inc.of Kirkland，Wash.，USA)；angiozyme，一種來自核酶的合成的核酶(Boulder，Colo.)；和VEGF的抗體，例如貝伐單抗(如AvastinTMGenentech，South San Francisco，CA)，VEGF的重組人源化抗體；整合蛋白受體拮抗劑和整合蛋白拮抗劑，例如αvβ3，αvβ5和αvβ6整合蛋白，及其亞型，例如西侖吉肽(EMD 121974)，或者抗整合蛋白抗體例如諸如αvβ3特異的人源化抗體(如Vitaxin)；因子如IFN-α(美國專利號41530,901,4,503,035，和5,231,176)；血管抑素(angiostatin)和纖維蛋白溶酶原片段(例如kringle 1-4，kringle 5，kringle 1-3(O’Reilly，M.S.等(1994)Cell 79315-328；Cao等(1996)J.Biol.Chem.27129461-29467；Cao等(1997)J.Biol.Chem.27222924-22928)；內皮他丁(O’Reilly，M.S.等(1997)Cell 88277；和國際專利公開號.WO 97/15666)；血小板反應蛋白(TSP-1；Frazier，(1991)Curr.Opin.Cell Biol.3792)；血小板因子4(PF4)；纖維蛋白溶酶原激活劑/尿激酶抑制劑；尿激酶受體拮抗劑；肝素酶；煙曲霉素類似物如TNP-4701；蘇拉明和蘇拉明類似物；血管抑素類固醇；bFGF拮抗劑；flk-1和flt-1拮抗劑；抗血管生成劑如MMP-2(基質-金屬蛋白酶2)抑制劑和MMP-9(基質-金屬蛋白酶9)抑制劑。有用的基質金屬蛋白酶抑制劑的實例描述在國際專利公開號WO 96/33172，WO 96/27583，WO 98/07697，WO 98/03516，WO 98/34918，WO 98/34915，WO 98/33768，WO 98/30566，WO 90/05719，WO 99/52910，WO 99/52889，WO 99/29667，和WO 99/07675，歐洲專利公開號818,442，780,386，1,004,578，606,046，和931,788；英國專利公開號9912961，和美國專利號5,863,949和5,861,510中。優(yōu)選的MMP-2和MMP-9抑制劑是具有很少或者沒有MMP-1抑制活性的那些。更優(yōu)選地，是相對于其它基質-金屬蛋白酶(即MMP-1，MMP-3，MMP-4，MMP-5，MMP-6，MMP-7，MMP-8，MMP-10，MMP-11，MMP-12，和MMP-13)選擇性抑制MMP-2和/或MMP-9的那些。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合并且意欲將其同時或者先后給藥于患者，其中另外使用一種或者多種腫瘤細胞促凋亡劑或者凋亡刺激制劑。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合并且意欲將其同時或者先后給藥于患者，其中另外使用一種或者多種信號傳導抑制劑。
信號傳導抑制劑包括如erbB2受體抑制劑，例如有機分子，或者結合到erbB2受體的抗體如曲妥單抗(如Herceptin)；其它蛋白酪氨酸激酶抑制劑如imitinib(如Gleevec)；ras抑制劑；raf抑制劑；MEK抑制劑；mTOR抑制劑；周期素依賴性蛋白激酶抑制劑；蛋白激酶C抑制劑；和PDK-1抑制劑(見Dancey，J.和Sausville，E.A.(2003)Nature Rev.DrugDiscovery 292-313，描述了這些抑制劑的一些實例，和它們在治療癌癥的臨床試驗中的應用)。
ErbB2受體抑制劑包括例如ErbB2受體抑制劑諸如GW-282974(Glaxo Wellcome plc)，單克隆抗體例如AR-209(Aronex PharmaceuticalsInc.of The Woodlands，Tex.，USA)，和描述在以下國際公開號中的erbB2抑制劑WO 98/02434，WO 99/35146，WO 99/35132，WO 98/02437，WO97/13760，和WO 95/19970，以及美國專利號5,587,458，5,877,305，6,465,449和6,541,481。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合并且意欲將其同時或者先后給藥于患者，其中另外使用抗HER2抗體或者其免疫治療活性片段。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉移的藥物的方法，其特在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合并且意欲將其同時或者先后給藥于患者，其中另外使用一種或者多種額外的抗增殖劑。
額外的抗增殖劑包括例如酶法呢基(farnesyl)蛋白轉移酶的抑制劑和受體酪氨酸激酶PDGFR的抑制劑，包括在美國專利號6,080,769，6,194,438，6,258,824，6,586,447，6,071,935，6,495,564，6,150,377，6,596,735和6,479,513，以及國際專利公開WO01/40217中公開和要求保護的那些。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合并且意欲將其同時或者先后給藥于患者，其中另外使用COX II(環(huán)加氧酶II)抑制劑。有用的COX-II抑制劑的實例包括alecoxib(如CelebrexTM)，伐地考昔，和羅非考昔。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合并且意欲將其同時或者先后給藥于患者，其中另外使用放射性藥物。或者另外地，不是增加放射性藥物，而是進行輻射治療。
輻射源對被治療患者來說可以是外部或者內部的。當輻射源對患者是外部的時候，該治療被稱為外部光束放射療法(EBRT)。當輻射源對患者是內部時，該治療被稱為近距放射治療法(BT)。在本發(fā)明上下文中使用的放射性原子可以選自包含但不僅限于下列物質的組鐳，銫-137，銥-192，镅-241，金-198，鈷-57，銅-67，锝-99，碘-123，碘-131，和銦-111。當本發(fā)明的EGFR激酶抑制劑為抗體時，用這樣的放射性同位素標記該抗體也是可能的。
放射療法是用于控制無法切除或者不宜手術的腫瘤和/或腫瘤轉移的標準治療。當將放療與化療聯(lián)合時已經觀察到了改善的結果。放療基于這樣的原理將高劑量的放射遞送到靶區(qū)域會導致腫瘤和正常組織中繁殖細胞的死亡。放射劑量方案通常以放射吸收劑量(Gy)、時間和分級來定義，并且必須由腫瘤學家仔細定義?；颊呓邮艿姆派淞咳Q于不同的考慮，但是最重要的兩個考慮是腫瘤相對于其它身體重要結構和器官的位置，和腫瘤擴展的程度。患者所要經歷的放射治療的典型療程為在1周-6周時間的治療計劃，給予的患者全部劑量為10-80Gy，每一天為約1.8-2.0Gy的單一部分，一周5天。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，當用本發(fā)明的治療與放射治療聯(lián)合治療人類患者的腫瘤的時候，會產生協(xié)同效果。換句話說，當聯(lián)合放射療法，任選另外聯(lián)合化學或抗癌劑，通過含有本發(fā)明組合的藥劑增強了對腫瘤生長的抑制。輔助放射治療的參數(shù)在，例如，國際專利公開WO99/60023中。
同樣更優(yōu)選的是用于制備治療腫瘤或者腫瘤轉移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合并且意欲將其同時或者先后給藥于患者，其中另外使用一種或者多種能夠增強抗腫瘤免疫應答的藥劑。
能夠增強抗腫瘤免疫應答的藥劑包括例如CTLA4(細胞毒性淋巴細胞抗原4)抗體(如MDX-CTLA4)，和其它能夠阻斷CTLA4的藥劑。具體能應用于本發(fā)明的CTLA4抗體包括美國專利號6,682,736中描述的那些。
同樣更優(yōu)選的是制備用于降低由治療腫瘤或者腫瘤轉移所引起的副作用的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合并且意欲將其以這樣的劑量同時或者先后給藥于患者，所述劑量有效產生加成的、或者超加成的或協(xié)同抗腫瘤效果，并有效抑制腫瘤生長。
本發(fā)明還提供了一種治療癌癥的方法，包括給予需要這種治療的患者以i.第一個有效量的EGFR激酶抑制劑，或其藥用鹽；和ii.第二個有效量的奧沙利鉑。
本發(fā)明還提供了一種治療癌癥的方法，包括給予需要這種治療的患者以i.第一個低于治療量(sub-therapeutic first amount)的EGFR激酶抑制劑埃洛替尼，或其藥用鹽；和ii.第二個低于治療量(sub-therapeutic secondamount)的奧沙利鉑。
另外，本發(fā)明提供了藥用載體中的含有EGFR抑制劑和奧沙利鉑的藥物組合物。
本發(fā)明還提供了特別用于癌癥的藥物組合物，其包含i.第一個有效量的EGFR激酶抑制劑，或其藥用鹽；和ii.第二個有效量的奧沙利鉑。該組合物任選地含有藥用載體和/或賦形劑。
本發(fā)明還提供了特別用于癌癥的藥物組合物，其包含i.第一個低于治療量的EGFR激酶抑制劑埃洛替尼，或其藥用鹽；和ii.第二個低于治療量的奧沙利鉑。該組合物任選地含有藥用載體和/或賦形劑。
本發(fā)明使用的術語“患者”優(yōu)選指的是因任何目的需要EGFR激酶抑制劑治療的人，更優(yōu)選需要該治療來治療癌癥、或者癌前狀態(tài)或者損害的人。但是，該術語“患者”也可以指非人動物，其中，優(yōu)選哺乳動物如狗，貓，馬，牛，豬，綿羊，以及非人靈長類動物，這些動物需要EGFR激酶抑制劑治療。
在一個優(yōu)選的實施方案中，患者是需要治療癌癥，或者前癌病癥或損傷的人。
所述的癌癥優(yōu)選是任何可通過給予EGFR激酶抑制劑部分或者全部治療的癌癥。所述的癌癥可以是例如肺癌，非小細胞肺(NSCL)癌，支氣管細胞肺癌(bronchioloalviolar cell lung cancer)，骨癌，胰腺癌，皮膚癌，頭或頸癌，皮膚或者眼球內黑素瘤，子宮癌，卵巢癌，直腸癌，肛門區(qū)癌，胃癌，腸癌，結腸癌，乳腺癌，子宮癌，輸卵管癌，子宮內膜癌，宮頸癌，陰道癌，外陰癌，霍奇金病，食道癌，小腸癌，內分泌系統(tǒng)癌，甲狀腺癌，甲狀旁腺癌，腎上腺癌，軟組織癌，尿道癌，陰莖癌，前列腺癌，膀胱癌，腎或輸尿管癌，腎細胞癌，腎盂癌，間皮瘤，肝細胞癌，膽管癌(biliary cancer)，慢性或者急性白血病，淋巴細胞淋巴瘤，中樞神經系統(tǒng)(CNS)瘤，脊椎瘤，腦干膠質瘤，多形性成神經膠質細胞瘤，星形細胞瘤，schwanomas，室管膜細胞瘤，成神經管細胞瘤，腦脊膜瘤，鱗狀細胞癌，垂體腺瘤，包括任何上述癌癥的頑疾，或一種或者多種上述癌癥的組合。癌前病癥或者損傷包括例如由下列組成的組口腔白斑，光化性角化病(日光性角化病)，結腸或者直腸的癌前息肉，胃上皮發(fā)育不良，腺瘤發(fā)育不良，遺傳性息肉結腸癌綜合征(HNPCC)，巴雷特食管，膀胱發(fā)育不良，和前癌頸病(precancerous cervical conditions)。優(yōu)選地，所述的癌癥是結腸癌，并且最優(yōu)選為結腸直腸癌。還優(yōu)選地，所述癌癥是肺癌，最優(yōu)選非小細胞肺癌(NSCL)。
在本發(fā)明中“共給藥”和“共給予”奧沙利鉑和EGFR激酶抑制劑(此后將這兩種組分稱為兩種活性劑)指的是當將所述兩種活性劑作為被設計以獲得組合治療療效的合適劑量方案的一部分，上述兩種活性劑分開或者一起地任一種地給予。因此，可以將這兩種活性劑或者作為相同藥物組合物的部分或者作為分開的藥物組合物給予。奧沙利鉑可以先于、同時或者后于EGFR激酶抑制劑的給予，或者以其某種組合給予。當以重復的間隔將EGFR激酶抑制劑給予患者時，例如在一個標準療程中，可以將奧沙利鉑先于、同時、或者后于EGFR激酶抑制劑的每次給予，或者以其某種組合，或者以相對于EGFR激酶抑制劑治療的不同間隔，或者以單一劑量先于、在期間的任何時間、或者后于EGFR激酶抑制劑療程給予。
通常將EGFR激酶抑制劑以這樣的劑量方案給予患者，該方案提供了對待治療患者最有效的癌癥的治療(同時從效力和安全角度考慮)，如本領域已知的和例如國際專利公開號WO01/34574所公開。在進行本發(fā)明治療方法的時候，EGFR激酶抑制劑可以以任何本領域已知的有效方式進行給予，例如經口，局部，靜脈內，腹膜內，肌肉內，關節(jié)內，皮下，鼻內，眼內，陰道，直腸或者真皮內途徑，這取決于所要治療癌癥的種類，所使用EGFR激酶抑制劑的類型(例如小分子，抗體，RNAi，或者反義構建體)，處方醫(yī)生的醫(yī)學判斷依據(jù)，如基于，例如，已經公開的臨床研究結果。
給予的EGFR激酶抑制劑和給予EGFR激酶抑制劑的時機取決于被治療患者的類型(種類，性別，年齡，重量，等等)和狀態(tài)，被治療疾病或者病癥的嚴重度，和給藥途徑。例如，可以以劑量范圍0.001-100mg/kg體重每天或者每周以單獨或者分開的劑量，或者通過連續(xù)輸液將小分子EGFR激酶抑制劑給予患者(見例如國際專利公開號WO01/34574)。特別是，可以以5-200mg每天或者100-1600mg每周的單獨或者分開的劑量范圍，或者通過連續(xù)輸液將鹽酸埃洛替尼給予患者。優(yōu)選劑量是150mg/天?？梢砸?.1-100mg/kg體重每天/或者每周的單獨或者分開的劑量范圍，或者通過連續(xù)輸液將基于抗體EGFR激酶抑制劑，或者反義、RNAi或者核酶構建體給予患者。在一些情況下，低于前述劑量范圍下限的劑量水平可以是足夠的，而在另一些情況下，可以使用更大的劑量而不引起任何有害的副作用，條件是這些更大的劑量在全天給予前首先被分成幾個小劑量。
EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑可以分別或者同時以相同或者不同的路徑、以廣泛種類的各種劑型給予。例如EGFR激酶抑制劑優(yōu)選口服或者腸胃外給予，而奧沙利鉑優(yōu)選腸胃外給予。當EGFR激酶抑制劑是鹽酸埃洛替尼(TarcevaTM)的時候，優(yōu)選口服給予。
EGFR激酶抑制劑可以與多種藥用惰性載體以下列形式給予片劑、膠囊、糖錠、錠劑、硬糖、粉末、噴霧劑、乳膏劑、油膏、栓劑、膠凍、凝膠、糊劑、洗劑、軟膏、酏劑、糖漿等等。這些劑型的給予可以以單一或多個劑量進行。載體包括固體稀釋劑或者填充劑，無菌水性介質和各種非毒性有機溶劑等等?？诜幬锝M合物可以是適當甜化和/或者增香化的。
EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑可以連同各種藥用惰性載體以下列各種形式結合噴霧劑、乳膏劑、油膏、栓劑、膠凍、凝膠、糊劑、洗劑、軟膏等等。這樣的劑型可以以單個或者多個劑量給予。載體包括固體稀釋劑或者填充劑，無菌水性介質和各種非毒性有機溶劑等等。
應該對所有含有蛋白EGFR激酶抑制劑的制劑進行選擇以避免所述抑制劑變性和/或降解和喪失生物活性。
制備包含EGFR激酶抑制劑的藥物組合物的方法在本領域是已知的，并描述在例如國際專利公開號WO01/34574。制備包含奧沙利鉑的藥物組合物的方法在本領域也是已知的。鑒于本發(fā)明的教導，從上述引用的出版物和從其他已知的參考文獻的教導，如Remington’s PharmaceuticalSciences，Mack Publishing Company，Easton，Pa.，第18版(1990)，制備包含EGRF激酶抑制劑和奧沙利鉑的藥物組合物的方法是明顯的。
對于口服給予EGFR激酶抑制劑，含有一種或者全部所述活性劑的片劑與各種賦形劑結合，賦形劑例如微晶纖維素，檸檬酸鈉，碳酸鈣，磷酸氫鈣和甘氨酸，以及各種崩解劑例如淀粉(并且優(yōu)選玉米、馬鈴薯或者木薯淀粉)，藻酸和某些復合硅酸鹽，以及粒化粘合劑例如聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖，明膠和阿拉伯膠。另外，潤滑劑例如硬脂酸鎂，月桂硫酸鈉，和滑石通常對于片劑化目的是有用的。類似類型的固體組合物還可以被用作明膠膠囊的填充劑；在這一點，優(yōu)選的材料還包括半乳糖或者乳糖以及高分子量的聚乙二醇。當口服給予需要水性懸液和/或酏劑的時候，EGFR激酶抑制劑可以與多種甜化或者增香化制劑，著色物質或者染料結合使用，如果需要，也有乳化和/或懸浮劑，連同稀釋劑如水、乙醇、丙二醇、甘油和其各種可能的組合。
對于腸胃外給予任何一種或者全部所述的活性劑，可以使用芝麻油或者花生油中的溶液，或者使用水性丙二醇中的溶液，以及含有所述活性劑或其相應的水溶性鹽的無菌水性溶液。該無菌水性溶液被優(yōu)選適當?shù)鼐彌_并還優(yōu)選賦予等滲，例如，用充足的鹽水或者葡萄糖。這些特別的水性溶液特別適于靜脈內、肌肉內、皮下和腹膜內注射用。油性溶液適用于關節(jié)內、肌肉內和皮下注射用。所有這些溶液在無菌條件下的制備通過本領域技術人員熟知的標準制藥技術可以很容易地實現(xiàn)。應該對任何給予蛋白EGFR激酶抑制劑的腸胃外制劑進行選擇以避免所述抑制劑變性和喪失生物活性。
另外，依照標準制藥實踐，可以通過以下方式局部給予一種或者全部所述的活性劑例如乳膏劑、洗劑、膠凍、凝膠、糊劑、油膏、軟膏等等。例如，可以制備含有大約0.1％(w/v)-大約5％(w/v)濃度的EGFR激酶抑制劑或者奧沙利鉑的局部制劑。
為獸醫(yī)用途，可以將所述的活性劑以上述任何形式和任何途徑分別或者一起給予動物。在一個優(yōu)選的實施方案中，以膠囊、丸劑、片劑，浸液的形式通過注射或者作為植入物給予EGFR激酶抑制劑。作為備選，可以將EGFR激酶抑制劑與動物飼料一起給予，為此目的，可以制備濃縮的飼料添加劑或者預混和物以用于正常動物飼養(yǎng)。奧沙利鉑優(yōu)選通過注射或者作為植入物以浸液(liquid drench)形式給予。依照標準的獸醫(yī)實踐，以常規(guī)方法制備這樣的制劑。
本發(fā)明還提供了含有單一容器的試劑盒，所述容器包含EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑兩者。本發(fā)明還提供了這樣的試劑盒，其含有第一容器和第二容器，所述第一容器包含EGFR激酶抑制劑，所述第二容器含有奧沙利鉑。在優(yōu)選的實施方案中，所述的試劑盒容器還可以進一步包括藥用載體。該試劑盒還可以包含無菌稀釋劑，其被優(yōu)選儲存在一個單獨的附加容器中。所述試劑盒還可以包括一個包裝說明書，其包含打印的說明書，用于指導將組合治療用作治療癌癥的方法。
本發(fā)明使用的術語“EGFR激酶抑制劑”指的是任何目前在本領域熟知的或者將來會被鑒定的EGFR激酶抑制劑，并且包括任何在給藥于患者時導致患者中與EGF受體活化相關的生物活性抑制的化學個體，其包括任何另外產生自其天然配體結合EGFR的下游生物學效應。這樣的EGFR激酶抑制劑包括任何可以阻斷EGFR活化的試劑或者任何與在患者中治療癌癥相關的EGFR活化的下游生物學效應。這樣的抑制劑可以通過直接結合到受體的細胞內結構域和抑制其激酶活性而發(fā)揮作用。或者，這樣的抑制劑可以通過占據(jù)EGFR受體的配體結合位點或者部分、從而使得受體難以接近其天然配體從而阻止或者降低了其正常生物學活性而發(fā)揮作用。或者，該抑制劑可以通過調節(jié)EGFR多肽的二聚化、EGFR多肽與其它蛋白質的相互作用、或者增強EGFR的泛化作用和細胞內降解而起作用。EGFR激酶抑制劑包括但不限于低分子量抑制劑、抗體或者抗體片段、反義構建體、小抑制性RNAs(即dsRNA的RNA干擾；RNAi)，和核酶。在一個優(yōu)選的實施方案中，EGFR激酶抑制劑是特異結合到人EGFR的小的有機分子或者抗體。
EGFR激酶抑制劑包括例如喹唑啉EGFR激酶抑制劑，吡啶并-嘧啶EGFR激酶抑制劑，嘧啶并-嘧啶EGFR激酶抑制劑，吡咯并-嘧啶EGFR激酶抑制劑，吡唑并-嘧啶EGFR激酶抑制劑，苯基氨基-嘧啶EGFR激酶抑制劑，羥吲哚EGFR激酶抑制劑，吲哚并咔唑EGFR激酶抑制劑，酞嗪EGFR激酶抑制劑，異黃酮EGFR激酶抑制劑，quinalone EGFR激酶抑制劑和tyrphostin EGFR激酶抑制劑，如描述在下述專利出版物中的那些，和它們的所有藥用鹽和溶劑化物國際專利公開號WO 96/33980，WO96/30347，WO 97/30034，WO 97/30044，WO 97/38994，WO 97/49688，WO 98/02434，WO 97/38983，WO 95/19774，WO 95/19970，WO 97/13771，WO 98/02437，WO 98/02438，WO 97/32881，WO 98/33798，WO 97/32880，WO 97/3288，WO 97/02266，WO 97/27199，WO 98/07726，WO 97/34895，WO 96/31510，WO 98/14449，WO 98/14450，WO 98/14451，WO 95/09847，WO 97/19065，WO 98/17662，WO 99/35146，WO 99/35132，WO 99/07701，和WO 92/20642；歐洲專利申請?zhí)朎P 520722，EP 566226，EP 787772，EP 837063，和EP 682027；美國專利號5,747,498，5,789,427，5,650,415，和5,656,643；以及德國專利申請?zhí)朌E 19629652。其它低分子量EGFR激酶抑制劑的非限制性實例包括Traxler，P.，1998，Exp.Opin.Ther.Patents8(12)1599-1625中描述的那些。
具體優(yōu)選的、可以依照本發(fā)明使用的低分子量EGFR激酶抑制劑的實例包括[6，7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉-4-基]-(3-乙炔基苯基)胺(也叫做OSI-774，埃洛替尼，或者TarcevaTM(鹽酸埃洛替尼)；OSIPharmaceuticals/Genentech/Roche)(美國專利號5,747,498；國際專利公開號WO 01/34574，和Moyer，J.D.等(1997)Cancer Res.574838-4848)；CI-1033(先前已知為PD183805；Pfizer)(Sherwood等，1999，Proc.Am.Assoc.Cancer Res.40723)；PD-158780(Pfizer)；AG-1478(University ofCalifornia)；CGP-59326(Novartis)；PKI-166(Novartis)；EKB-569(Wyeth)；GW-2016(也叫作GW-572016或者lapatinib ditosylate；GSK)；和gefitinib(也叫作ZD1839或者IressaTM；Astrazeneca)(Woodburn等，1997，Proc.Am.Assoc.Cancer Res.38633)?？梢砸勒毡景l(fā)明使用的特別優(yōu)選的低分子量EGFR激酶抑制劑是[6，7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉-4-基]-(3-乙炔基苯基)胺(即埃洛替尼)，其鹽酸鹽(即鹽酸埃洛替尼，TarcevaTM)，或者其它鹽形式(例如甲磺酸埃洛替尼)。
基于抗體的EGFR激酶抑制劑包括任何能夠部分或者全部阻斷EGFR被其天然配體活化的抗EGFR抗體或者抗體片段。基于抗體的EGFR激酶抑制劑的非限制性實例包括在Modjtahedi，H.，等，1993，Br.J.Cancer 67247-253；Teramoto，T.，等，1996，Cancer 77639-645；Goldstein等，1995，Clin.Cancer Res.11311-1318；Huang，S.M.，等，1999，Cancer Res.1559(8)1935-40；和Yang，X.，等，1999，Cancer Res.591236-1243.中描述的那些。因此EGFR激酶抑制劑可以是單克隆抗體Mab E7.6.3(Yang，X.D.等(1999)Cancer Res.591236-43)，或者Mab C225(ATCC登記號HB-8508)，或者其具有結合特異性的抗體或者抗體片段。合適的單克隆抗體EGFR激酶抑制劑包括但不限于，IMC-C225(也叫作cetuximab或者ErbituxTM；Imclone Systems)，ABX-EGF(Abgenix)，EMD 72000(Merck KgaA，Darmstadt)，RH3(York Medical Bioscience Inc.)，和MDX-447(Medarex/Merck KgaA)。
額外的基于抗體的EGFR激酶抑制劑可以通過將適當抗原或者表位給予宿主動物而根據(jù)已知的方法而產生，所述的宿主動物選自例如豬，牛，馬，兔，山羊，綿羊，和小鼠及其他。各種本領域已知的佐劑可以被用于提高抗體生產。
盡管實踐本發(fā)明的有用抗體可以是多克隆的，優(yōu)選單克隆抗體。針對EGFR的單克隆抗體可以使用任何技術制備和分離，所述的技術通過連續(xù)細胞系培養(yǎng)提供抗體分子制備。用于制備和分離的技術包括但不限于最初由Kohler和Milstein(Nature，1975，256495-497)描述的雜交瘤技術；人B-細胞雜交瘤技術(Kosbor等，1983，Immunology Today 472；Cote等，1983，Proc.Nati.Acad.Sci.USA 802026-2030)；和EBV雜交瘤技術(Cole et al，1985，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，Inc.，pp.77-96)。
或者，描述單鏈抗體生產的技術(見例如美國專利號4,946,778)可以被修改來生產抗EGFR單鏈抗體。在實踐本發(fā)明中有用的基于抗體的EGFR激酶抑制劑還包括抗EGFR抗體片段，包括但不限于F(ab′)2片段，其是由胃蛋白酶消化完整的抗體分子產生的，和Fab片段，其是通過還原F(ab′)2片段的二硫橋而產生的?；蛘呖梢詷嫿‵ab和/或scFv表達文庫(見例如，Huse等，1989，Science 2461275-1281)以容許快速鑒定對EGFR具有所需特異性的片段。
用于制備和分離單克隆抗體和抗體片段的技術在本領域為人熟知，并且描述在Harlow和Lane，1988，AntibodiesA Laboratory Manual，ColdSpring Harbor Laboratory，和在J.W.Goding，1986，Monoclonal AntibodiesPrinciples and Practice，Academic Press，London.中。人源化抗EGFR抗體和抗體片段也可以通過已知的技術制備，所述技術如那些描述在Vaughn，T.J.等，1998，Nature Biotech.16535-539及其引用的文獻中的那些，并且這些抗體或其片段在本發(fā)明實踐中同樣有用。
本發(fā)明使用的EGFR激酶抑制劑可備選地基于反義寡核苷酸構建體。包括反義RNA分子和反義DNA分子的反義寡核苷酸可以通過結合其上來直接阻斷EGFR mRNA的翻譯，并從而防止蛋白翻譯或者增加mRNA降解，因而減少了EGFR激酶蛋白質水平，和因此減少其在細胞內的活性。例如可以通過如傳統(tǒng)的磷酸二酯鍵技術合成至少約15個堿基的反義寡核苷酸，其互補于編碼EGFR的mRNA轉錄序列的獨特區(qū)域，通過例如靜脈內注射或者輸液給藥。使用反義技術用來特異抑制其序列已知的基因的基因表達的技術為本領域熟知。(例如見美國專利號6,566,135；6,566,131；6,365,354；6,410,323；6,107,091；6,046,321；和5,981,732)。
小抑制性RNAs(siRNAs)也可以作為EGFR激酶抑制劑用于本發(fā)明。EGFR基因表達可以通過用小雙鏈RNA(dsRNA)、或者引起小雙鏈RNA產生的載體或構建體來接觸腫瘤、受試者或者細胞而降低，從而EGFR的表達被特別地抑制(即RNA干擾或者RNAi)。對于序列已知的基因，選擇合適dsRNA或者dsRNA-編碼載體的方法在本領域為人熟知。(例如見Tuschi，T.，等(1999)Genes Dev.13(24)3191-3197；Elbashir，S.M.等(2001)Nature 411494-498；Hannon，G.J.(2002)Nature 418244-251；McManus，M.T.and Sharp，P.A.(2002)Nature Reviews Genetics 3737-747；Bremmelkamp，T.R.等(2002)Science 296550-553；美國專利號6,573,099和6,506,559；和國際專利公開號WO 01/36646，WO 99/32619，和WO01/68836)。
核酶也可以作為EGFR激酶抑制劑用于本發(fā)明。核酶是能夠催化RNA特異切割的酶RNA分子。核酶作用的機理涉及核酶分子與互補靶RNA的序列特異性雜交，而后被核酸內解切割。特異并有效地催化EGFRmRNA序列的核酸內解切割的工程化的錘頭基序核酶分子因此在本發(fā)明的范圍內有用。任何可能RNA靶中的特殊核酶切割位點通過掃描靶分子找尋核酶切割位點而被最初鑒定，其通常包括下列序列GUA，GUU，和GUC。一旦鑒定出來后，可以評價相應于含有切割位點的靶基因區(qū)域的大約15-20個核糖核苷酸的短RNA序列的預測結構特征，例如二級結構，這可以導致寡核苷酸序列不合適。也可以通過測試其與互補寡核苷酸的雜交可接近性來評價候選靶的合適性，例如使用核酶保護測試。
可以通過已知的方法來制備用作EGFR激酶抑制劑的反義寡核苷酸和核酶。這些包括用于化學合成的技術例如諸如固相phosphoramatide化學合成?；蛘?，可以通過體外或者體內轉錄編碼RNA分子的DNA序列來產生反義RNA分子。這樣的DNA序列可以被整合到各種各樣的載體內，所述載體整合合適RNA聚合酶啟動子如T7或者SP6聚合酶啟動子。作為一種增加細胞內穩(wěn)定性和半衰期的手段，可以引入對本發(fā)明寡核苷酸的多種修飾?？赡艿男揎棸ǖ幌抻趯⒑颂呛塑账峄蛘呙撗鹾颂呛塑账岬膫纫硇蛄屑拥剿龇肿拥?’和/或3’末端，或者在寡核苷酸骨架中使用硫代磷酸酯(phosphorothioate)或者2′-O-甲基而不是磷酸二酯酶鍵。
本發(fā)明還包含藥物組合物，其含有結合有藥用載體的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合。
優(yōu)選的所述組合物含有藥用載體和非毒性的治療有效量的EGFR激酶抑制劑化合物和奧沙利鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)。
此外，在該優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明包括用于治療疾病的藥物組合物，該組合物的使用產生對瘤細胞生長、良性或者惡性腫瘤，或者轉移的抑制，其包含藥用載體和非毒性的治療有效量的EGFR激酶抑制劑化合物和奧沙利鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)。
術語“藥用鹽”指的是從藥用非毒性的堿或者酸制備出的鹽。當本發(fā)明的化合物是酸性的時候，其相應的鹽可以從藥用非毒性堿中方便地制備，包括無機堿和有機堿。從這樣的無機堿衍生的鹽包括鋁、銨、鈣、銅(銅和亞銅)、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳(錳和亞錳)，鉀、鈉、鋅等鹽。特別優(yōu)選的是銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。衍生自藥用有機非毒性堿的鹽包括伯胺、仲胺和叔胺的鹽，以及環(huán)胺和取代的胺如天然存在的和合成取代的胺的鹽。其它可以形成鹽的藥用有機非毒性堿包括離子交換樹例如諸如精氨酸，甜菜堿，咖啡堿，膽堿，N′，N′-二芐乙二胺，二乙胺，2-二乙氨基乙醇，2-二甲氨基乙醇，乙醇胺，二乙胺，N-乙基嗎啉，N-乙基哌啶，葡糖胺，氨基葡糖，組氨酸，哈胺(hydrabamine)，異丙胺，賴氨酸，甲基葡糖胺，嗎啉，哌嗪，哌啶，聚胺樹脂，普魯卡因，嘌呤，可可堿，triethylameine，三甲胺，三丙胺，氨基丁三醇(tromethamine)等等。
當本發(fā)明的化合物是堿性時，其相應的鹽可以很方便地從藥用非毒性酸來制備，所述酸包括無機和有機酸。這樣的酸包括例如乙酸，苯磺酸，安息香酸，樟腦磺酸，檸檬酸，乙磺酸，富馬酸，，葡糖酸，谷氨酸，氫溴酸，氫氯酸，羥乙磺酸，乳酸，馬來酸，蘋果酸，扁桃酸，甲磺酸，粘酸，硝酸，pamoic，泛酸，磷酸，琥珀酸，硫酸，酒石酸，p-甲苯磺酸等等。特別優(yōu)選的是檸檬酸，氫溴酸，氫氯酸，馬來酸，磷酸，硫酸和酒石酸。
本發(fā)明的藥物組合物含有作為活性成分的EGFR激酶抑制劑化合物和奧沙利鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)，藥用載體，和任選的其它治療組分或者助劑。其它的治療劑可以包括如上列出的那些細胞毒性的、化療的或者抗癌劑，或者提高這些藥劑的效果的試劑。所述的組合物包括適用于口服、直腸、局部和腸胃外給藥(包括皮下、肌肉內和靜脈內)的組合物，盡管任何給定情況中最合適的途徑將取決于特定的宿主，以及活性成分將被給藥針對的疾病的性質和嚴重程度。所述的藥物組合物可以以單位劑型方便地給出，并且以制藥領域所熟知的任何方法制備。
在實踐中，依照常規(guī)藥物組合技術，可以將本發(fā)明的由EGFR激酶抑制劑化合物和奧沙利鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)代表的化合物作為活性組分與藥物載體緊密摻合。該載體可以采取廣泛種類的形式，這取決于需要給藥的制劑的類型，例如經口或者腸胃外(包括靜脈內)。因此，本發(fā)明的藥物組合物可以呈現(xiàn)為適于口服的離散單位如膠囊，扁囊劑或者片劑，每種都含有預定量的活性成分。此外，所述的組合物可以呈現(xiàn)為粉末、顆粒、溶液、水性液體中的懸液、非水性液體，水包油乳劑，或者油包水液體乳劑。除了上面舉出的常規(guī)劑型外，EGFR激酶抑制劑化合物和奧沙利鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)還可以通過緩釋方式和/或者遞送裝置給藥?？梢酝ㄟ^任何一種藥學方法制備組合組合物。通常，這樣的方法包括將活性成分與組成一種或者多種必需組分的載體相關聯(lián)的步驟。通常，通過均勻化和緊密摻合活性組分與液體載體或細碎的固體載體或兩者來制備所述的組合物。隨后可以將產品方便地定型成所需的形式。
因此，本發(fā)明的藥物組合物可以含有藥用載體和EGFR激酶抑制劑化合物和奧沙利鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)。EGFR激酶抑制劑化合物和奧沙利鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)也可以與一種或者多種其它治療活性化合物被包含在藥物組合物中。其它的治療活性化合物可以包括如上面列出的那些細胞毒性的、化療的或者抗癌劑，或者增強這些藥劑效果的制劑。
因此本發(fā)明的一個實施方案中，藥物組合物可以含有組合以抗癌劑的EGFR激酶抑制劑化合物和奧沙利鉑，其中所述的抗癌劑是一種選自由下列各項組成的組的成員烷基化劑，抗代謝物，微管抑制劑，鬼臼毒素，抗生素，亞硝基脲，激素治療，激酶抑制劑，腫瘤細胞凋亡活化劑，和抗血管生成劑。
使用的藥物載體可以是例如固體、液體、或者氣體。固體的實例包括乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂、和硬脂酸。液體載體的實例是糖漿、花生油、橄欖油和水。氣體載體的實例包括二氧化碳和氮氣。
在制備用于口服劑型的組合物中，可以使用任何方便的藥物介質。例如水，二元醇，油，醇類，增香劑，防腐劑，著色劑等等可以被用于形成口服液體制劑例如懸液，酏劑和溶液，而載體例如淀粉，糖，微晶纖維素，稀釋劑，?；瘎?，潤滑劑，粘合劑，崩解劑等可以被用于形成口服固體制劑例如粉末、膠囊和片劑。因為其容易給藥，片劑和膠囊是優(yōu)選的口服劑型，從而使用固體藥物載體。任選地，片劑可以用標準的水性或者非水性技術包衣。
含有本發(fā)明組合物的片劑可以任選地與一種或者多種附屬組分或者助劑通過壓制或者成型來制備。壓縮片劑可以通過用合適的機器通過壓縮制備，其活性組分為自由流動形式如粉末或顆粒，任選地與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、表面活性成分或者分散劑混和。成型片劑可以通過在合適的機器中成型，粉化化合物的混合物用惰性液體稀釋劑濕潤。每種片劑優(yōu)選含有大約0.05mg到大約5g的活性組分，并且每個扁囊劑或者膠囊優(yōu)選含有大約0.05mg到大約5g的活性組分。
例如，用于口服給藥于人的制劑可以含有大約0.5mg到5g的活性劑，與合適的和便捷量的、可能從大約5％-大約95％全部組合物變化的載體物質混合。單位劑型通常含有從大約1mg到大約2g的活性組分，通常為25mg，50mg，100mg，200mg，300mg，400mg，500mg，600mg，800mg，或者1000mg。
本發(fā)明適用于腸胃外給藥的藥物組合物可以被制備為在水中的活性化合物的溶液或者懸液?？梢园ê线m的表面活性劑例如諸如羥丙基纖維素。分散體也可以在甘油、液體聚乙二醇、及其在油中的混和物中來制備。另外，防腐劑可以被加入其中以防止微生物的有害生長。
本發(fā)明的適合注射用的藥物組合物包括無菌的水性溶液或者分散體。此外，所述的組合物可以以無菌粉末的形式用于臨時制備這樣的無菌可注射溶液或者分散體。在所有情況下，最終的可注射形式必須是無菌的并且必須是有效的流體以方便注射。所述的藥物組合物必須在制備和儲存條件下是穩(wěn)定的；因此，其優(yōu)選應該以防止微生物如細菌和真菌的污染作用的方式保存。所述的載體可以是溶劑或者分散介質，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油，丙二醇和液體聚乙二醇)，植物油及其適當?shù)幕旌衔铩?br> 本發(fā)明的藥物組合物可以以適用于局部使用的方式存在，例如諸如氣溶膠，乳膏劑，油膏，洗劑，撒粉，等。此外，所述的組合物可以是適用于經皮裝置的形式。這些制劑可以利用本發(fā)明的EGFR激酶抑制劑化合物和奧沙利鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)，經由傳統(tǒng)方法制備。作為實例，通過混和親水物質和水，以及大約5重量％到大約10重量％的所述化合物來制備乳膏劑或者油膏，以制備具有所需稠度的乳膏劑或者油膏。
本發(fā)明的藥物組合物可以是適于直腸給藥的形式，其中的載體是固體。優(yōu)選混和物形成單位劑量栓劑。合適的載體包括可可脂和其它本領域常用的物質。所述的栓劑可以通過首先將所述組合物與軟化的或者融化的載體混和并在模具中冷卻和成型來方便地形成。
除了上述的載體組分外，上面描述的藥物制劑，如果合適，可以包含一種或者多種另外的載體組分例如稀釋劑、緩沖劑，增香劑，粘合劑，表面活性劑，增稠劑，潤滑劑，防腐劑(包括抗氧化物)等等。另外，可以包括其它的助劑來使得所述制劑與目的受體的血液等滲。含有EGFR激酶抑制劑化合物和奧沙利鉑組合(包括其每種組分的藥用鹽)的組合物也可以制備成粉末或者液體濃縮形式。
本發(fā)明組合的化合物劑量水平可以近似地如本文所述，也可以如本領域對這些化合物的描述那樣。但是應該理解的是，對于任何具體患者的特定劑量水平將取決于許多因素，包括年齡、體重、綜合健康、性別、飲食、給藥時間、給藥路徑、排泄率、藥物組合以及受治療的具體疾病的嚴重性。
經過以下的實驗細節(jié)將會更好的理解本發(fā)明。但是，本領域的技術人員應該清楚的理解所討論的具體的方法和結果僅僅是為了闡述本發(fā)明，而后附的權利要求會更完全地概括本發(fā)明，這些實驗細節(jié)不能被認為以任何方式限制了本發(fā)明。
實驗細節(jié)總結和討論埃洛替尼(TarcevaTM，OSI-774)是一種有效的、可口服利用的EGFR(HER1，erbB1)酪氨酸激酶(TK)的小分子抑制劑。埃洛替尼抑制EGFR酪氨酸激酶結構域的磷酸化作用，從而阻斷來自該受體下游的主要信號傳導分子。埃洛替尼正在NSCLC中進行III期臨床試驗，并且被在其他類型的實體瘤中測試。奧沙利鉑被用于處理晚期結腸直腸癌患者。在我們的研究中，在無胸腺小鼠中的兩個人結腸直腸癌異體移植模型(LoVo和HCT116)中評價了埃洛替尼的抗腫瘤活性。兩種細胞類型均在體內和體外表達EGFR并且具有類似的倍增時間。埃洛替尼被作為單治療或者與奧沙利鉑結合給予具有建立的LoVo或者HCT116腫瘤的小鼠。藥物以其各自的最大治療劑量或者亞最適劑量結合。
在LoVo模型中，用100mg/kg的埃洛替尼治療小鼠得到了極高的腫瘤生長抑制(TGI＞100％，p＜0.001)，6/10的小鼠表現(xiàn)出部分消退(partialregressions(PR))。用25mg/kg的埃洛替尼進行的治療得到了明顯的腫瘤生長抑制(TGI＝79％，p＜0.001)。以10mg/kg或者5mg/kg給予奧沙利鉑在LoVo模型中得到了臨界的(marginal)抗腫瘤活性(TGI＝39％，p＝0.056；TGI＝33％，p＝0.06)。用埃洛替尼和奧沙利鉑以其最大治療劑量聯(lián)合治療導致在大多數(shù)被治療的小鼠中增加的抗腫瘤活性(TGI＞100％，p＜0.001)。該增強的活性優(yōu)于單一藥劑的活性。與單一療法活性相比，以亞最適劑量共給予埃洛替尼/奧沙利鉑得到了增加的抗腫瘤活性(TGI＝75％)。
以10mg/kg或者5mg/kg給予奧沙利鉑在HCT116模型中得到了臨界的抗腫瘤活性(分別為TGI＝26％，p＝0.307；TGI＝21％，p＝0.273，數(shù)據(jù)未顯示)。這類似于我們在LoVo模型中的發(fā)現(xiàn)并且使我們懷疑來自該文獻的劑量和方案是否是最佳的。以其各自最大治療劑量或者亞最適劑量結合的埃洛替尼和奧沙利鉑沒有在治療小鼠中增加指向HCT116腫瘤模型的抗腫瘤活性(數(shù)據(jù)未顯示)。因此，基于特定結腸直腸癌腫瘤系或者腫瘤的分子生物學差異，用于結合奧沙利鉑和TarcevaTM的組合數(shù)據(jù)可以變化。
綜合起來，這些數(shù)據(jù)支持這樣的結論埃洛替尼，特別是在亞最適劑量的時候，可以在人結腸直腸腫瘤異種移植物模型中提高奧沙利鉑的抗腫瘤活性，而不提高毒性。這些數(shù)據(jù)支持在人結腸直腸癌中臨床評估埃洛替尼。
縮寫詞匯表Bwl體重減輕CMC羧甲基纖維素EGFR 表皮生長因子受體EGFRi 表皮生長因子受體抑制劑ip 腹膜內iv 靜脈內MTD最大耐受劑量NSCLC 非小細胞肺癌q3d每3天一給藥q4d每4天一給藥q6d每6天一給藥q7d每7天一給藥qd 每天一次(給藥)po 口服PBS磷酸鹽緩沖液SEM均值的標準誤差TGI腫瘤生長抑制材料和方法本研究的目的是評價小分子表皮生長因子受體抑制劑(EGFRi)TarcevaTM與奧沙利鉑結合對在雌性無胸腺nu/nu小鼠中生長的LoVo結腸直腸人異種移植物腫瘤的抗腫瘤效力。奧沙利鉑是目前臨床上取決于疾病階段而單獨或者與其它化療劑和/或放射聯(lián)合使用的用于治療結腸直腸癌的藥劑。在該研究中，藥物以其各自最大耐受劑量(MTD)結合和也以亞最適(suboptimal)劑量結合。所有在這些結合組中包括的劑量也作為單一治療分支包括在研究中。該嘗試是為了取得最大效力/消退而不增加毒性。
動物雌性裸鼠(10/組)，來自Charles River Laboratories(Wilmington，MA)，年齡約為4-6周，使用時年齡約10-12周并且重量為約23-25克。每天通過大略觀察試驗動物和通過分析標記動物的血樣來確定所有動物的健康情況，將動物置于共同的格架中。在實驗操作前，容許所有動物一周的時間從任何運輸相關的緊張中適應和緩解。隨意提供高壓滅菌水和輻射處理的食物(5058-ms Pico chow(小鼠)Purina，Richmond，IN)，而且將動物保持在12小時的白天夜間循環(huán)中?；\子、草墊和水瓶使用前高壓滅菌并每周更換。10-12只小鼠住在備有合格BetaChip草墊(Northeastern Products，Warrensburg，NY)的一個聚碳酸酯的籠子(17.5×9×6英寸)中。所有體內實驗依照Roche Animal Care and Use Committee(RACUC)認可的方案實施。羅氏動物保護機構被美國實驗動物保護認可協(xié)會(American Association for the Accreditation of Lab Animal Care)(AAALAC)完全接受。
腫瘤將LoVo細胞在F-12K+20％FBS(沒有熱滅活)上生長并收獲。在07/12/2002，將PBS(磷酸鹽緩沖液)中5×106細胞/0.2ml/小鼠皮下植入其右側用于功效研究525。
將HCT-116細胞在McCoy′s 5A改良的培養(yǎng)基+10％FBS上生長并收獲。在08/16/02，將PBS(磷酸鹽緩沖液)中3×106細胞/0.2ml/小鼠皮下植入其右側用于功效研究540。
測試制劑用于研究540的TarcevaTM被制備成無菌水中羧甲基纖維素鈉(CMC)-7L2(3mg/ml)和吐溫80(1mg/ml)的懸液(12.5或者3.125mg/ml)用于注射。將配制的化合物制成一個批次，用于全部的3周研究。
以臨床形式提供奧沙利鉑。依照標記說明書(label instructions)用5％葡萄糖將其配制在預先包裝好的瓶中，使溶液含有5mg/ml活性化合物。取貯存藥瓶溶液的等份試樣用于每個劑量組并用無菌鹽水進一步稀釋以提供對每個個體動物0.2ml劑量體積的溶液，所述的等份試樣代表用于全部研究持續(xù)時間所述組所需的藥物。
隨機化對于研究540，在腫瘤移植后17天將動物按照腫瘤體積隨機化分組，從而使所有的組具有類似的100-150mm3的起始平均腫瘤體積。
研究設計研究的設計顯示在表12中。
表1用TarcevaTM和奧沙利鉑進行LoVo功效540研究的劑量組


治療對于功效研究540，治療起始于9/5/02(腫瘤移植后18天)。使用1cc注射器和18規(guī)格管飼針給予TarcevaTM(0.2ml/動物)。使用1cc注射器和26規(guī)格針ip給予奧沙利鉑(0.2ml/動物)。所有組都q7d處理3周(總共3次注射)。對于所有動物治療止于09/23/02(腫瘤移植后39天)。在該研究中，沒有進行研究末藥物暴露分析。
病理學/尸檢從所有的剩余組中對5只小鼠/治療進行完全尸檢。還收集全血用于血液學和臨床化學分析。移除腫瘤并在鋅福爾馬林中固定，并隨后包埋入石蠟。對這些切片進行免疫組織化學分析來評價經由TUNEL的凋亡和經由Ki67的增殖指數(shù)。也可以對H&E染色的切片評價壞死。
監(jiān)測對LoVo的腫瘤測量和小鼠稱重每周進行2-3次。對所有動物在整個實驗中均單獨進行監(jiān)測。
計算和統(tǒng)計分析使用下面的公式，將重量減輕圖解表示為平均組體重的百分變化((W-W0)/W0)×100其中‘W’代表在特定一天被治療組的平均體重，‘W0’代表在治療初始時相同治療組的平均體重。最大重量減輕也可以使用上面的公式表示，并且表明對于特定的組在整個實驗過程中的任何時間觀察到最大百分比體重減輕。
將功效數(shù)據(jù)圖解表示為平均腫瘤體積+平均值的標準偏差(SEM)。使用下面的公式，將治療組的腫瘤體積表示為對照組腫瘤體積的百分比(％T/C)100×((T-T0)/(C-C0))其中T代表在實驗期間的特定一天被治療組的平均腫瘤體積，T0代表在治療第一天時相同治療組的平均腫瘤體積；C代表實驗的特定一天的對照組的平均腫瘤體積，C0表示在治療第一天時相同治療組的平均腫瘤體積。
使用橢球公式(ellipsoid formula)計算腫瘤體積(mm3)(D×(d2))/2其中‘D’代表腫瘤的大直徑，‘d’代表小直徑。
在一些情況下，使用下面的公式計算腫瘤消退和/或腫瘤體積的百分變化((T-T0)/T0)×100其中‘T’代表在特定一天被治療組的平均腫瘤體積，‘T0’代表在治療初始時相同被治療組的平均腫瘤體積。
通過秩和檢驗和單向anova和post-hoc Bonferroni t-檢驗(SigmaStat，version 2.0，Jandel Scientific，San Francisco，CA)來進行統(tǒng)計學分析。當概率值(p)＜0.05時認為各組間的差異為顯著。
結果和討論結果毒性計劃外死亡TarcevaTM和奧沙利鉑-實驗540在腫瘤植入后28天，發(fā)現(xiàn)來自TarcevaTM100mg/kg，奧沙利鉑的小鼠#4和7死亡。兩者的體重均減輕大約20％(圖1和4)。尸檢沒有明顯的發(fā)現(xiàn)。
體重改變和臨床指征TarcevaTM和奧沙利鉑實驗540在對TarcevaTM100mg/kg，奧沙利鉑10mg/kg組合(組6)的研究中，毒性明顯，確定的毒性在研究早期非常明顯，平均體重減輕為大約15％，5-7天的治療后皮膚嚴重變紅(腫瘤植入后22-30天)(圖1和4)。腫瘤植入25天后，該組的平均體重減輕為15％。2只動物在腫瘤植入后26天死亡。在余下的研究中隨后對動物的劑量進行調節(jié)。
用100mg/kg TarcevaTM(組2)處理的小鼠呈現(xiàn)經典的皮膚變紅現(xiàn)象，如同在過去的幾項研究中見到的那樣。如通過測量體重的變化和總體觀察每只動物所評價，在任何其它劑量組中沒有注意到毒性的其它指征(圖1和4)。
功效TarcevaTM和奧沙利鉑實驗540(圖2和5)在研究終止(腫瘤移植后39天，治療第19天)，在TarcevaTM單一療法100mg/kg qd(98％，％T/C＝2％，P＝＜0.001)中再次發(fā)現(xiàn)指向LoVo結腸直腸異種移植物的明顯腫瘤效力，4個部分消退(16％和7％)。25mg/kg qd TarcevaTM的亞最適單一藥劑低劑量也得到了與過去研究類似的活性，顯示53％(％T/C＝47％)的腫瘤生長抑制。
在該研究中用兩種奧沙利鉑的單一療法劑量進行測試。對10mg/kgq7d ip奧沙利鉑沒有觀察到顯著的腫瘤生長抑制(39％，％T/C＝61％，P＝0.056)。在亞最適劑量5mg/kg q7d ip，只觀察到33％的腫瘤生長抑制(％T/C＝67％)。
在LoVo結腸直腸異種移植物中評價奧沙利鉑和TarcevaTM組合來觀察是否會出現(xiàn)對抗、加成或者協(xié)同活性。分別以最高劑量10mg/kg q7d ip和100mg/kg qd po結合奧沙利鉑和TarcevaTM，盡管毒性在研究開始后的早達3天出現(xiàn)，兩只小鼠死亡，但是通過調節(jié)劑量，該組中的絕大多數(shù)小鼠存活。在該組合組中觀察到顯著的腫瘤生長抑制(＞100％，％T/C＝-12％，P＝＜0.001)，80％的腫瘤部分消退，其中沒有發(fā)現(xiàn)完全消退的。這種腫瘤生長抑制可以被分類為協(xié)同，其顯著優(yōu)于兩種高劑量的奧沙利鉑(P＜0.001)和TarcevaTM(P＝0.002)。也結合5mg/kg q7d ip奧沙利鉑和25mg/kg qd po TarcevaTM的亞最適劑量，所有小鼠都對該組合充分耐受，僅有輕度的重量減輕，其隨后恢復。觀察到優(yōu)于賦形劑對照的顯著的腫瘤生長抑制(75％，％T/C＝25％，P＜＝0.001)。該腫瘤生長抑制可以被歸類為協(xié)同，其顯著優(yōu)于亞最適的奧沙利鉑(P＜0.01)和亞最適的TarcevaTM(P＜0.01)。來自被治療小鼠的代表腫瘤見圖3。
討論近來，EGFR漸漸成為抗癌癥治療的一種重要的靶目標。TarcevaTM是口服活性的、選擇性表皮生長因子受體抑制劑，其阻斷癌細胞增殖和生存相關的信號傳導路徑，目前其正處于臨床III期試驗。在本研究中，我們通過使用LoVo人結腸直腸異體移植物模型評價了聯(lián)合使用TarcevaTM和經典化療藥物。Lovo腫瘤模型代表表達EGFR并因此可能應答表皮生長因子受體抑制劑的結腸直腸癌(Magne N，等(2002)Br.J.Cancer 86(9)1518-1523)。
人結腸直腸癌代表最普遍的人癌癥之一。手術切除是其唯一有療效的治療。由于多數(shù)患者在晚期疾病時存在轉移傳播，單獨的手術治療并不是足夠好的臨床手段。正在尋找更新的治療方法來更好的控制這種疾病。理想的治療將以新的單一藥劑實體方式出現(xiàn)。但是，這些新藥劑的趨勢是僅為癌細胞固有的靶目標。認為具有這樣的精確靶點會帶來比傳統(tǒng)細胞毒性劑更好的毒性分布。
最初的體內研究證實了對癌癥模型的廣譜的明顯抗腫瘤效果，包括非小細胞肺癌(NSCLC)，結腸直腸癌，乳腺癌，及其他。在目前的研究中，新的EGFR抑制劑TarcevaTM以雙模式與臨床相關的化療劑結合用于LoVo異種移植物模型中。這些藥劑以其MTD’s被結合以代表最有效的臨床方案。還評價代表1/4MTD TarcevaTM的亞最適劑量和化療的組合以尋找加強的效力或者可能的拮抗作用。
許多傳統(tǒng)的細胞毒性劑對結腸直腸癌具有單一藥劑的活性，所述細胞毒性劑包括CPT-11，紫杉醇，5-氟尿嘧啶和奧沙利鉑。奧沙利鉑是近來被批準在歐洲用于臨床，因此在我們的此處研究中包括該試劑。由于使用單一治療方案只觀察到了適度的目的應答，組合方式被認為是較好的方式。理想的方案是兩種具有不同機制的藥劑，其能夠因此有效地獲得協(xié)同或者加成效力，而具有降低的或者類似于單一治療的毒性。當與傳統(tǒng)化療法結合的時候，表皮生長因子受體抑制劑似乎具有實現(xiàn)這一目標的有希望的前景。
幾種EGFR抑制劑正處于臨床研究的后期階段。已經研制出指向EGFR的兩種抗體。競爭性抑制EGFR活化作用的嵌合抗體Cetuximab(C225，Erbitux)，和全人源化的EGFR抗體ABX-EGF，其被推測在內化作用后逃避降解并因此得到回收。已經看到用Cetuximab得到的給人印象深刻的臨床結果，ABX-EGF的II期結果尚在懸而未決中。幾種小分子也尚在研制中。其中特別感興趣的是IressaTM(ZD1839)，CI-1033和TarcevaTM(OSI-774)。作為被最早研制，CI-1033是所有EGFR家族成員非特異性無法逆轉的抑制劑。使用該化合物的來自后期實驗的資料尚在懸而未決中。在2003年5月，IressaTM作為NSCLC的第三線治療受到了FDA認可。
對未曾被做過實驗的雌性裸鼠進行初步研究，以確定TarcevaTM的最大耐受劑量(MTD)。MTD被定義為這樣的劑量在14天的研究中使體重減輕小于20％并且沒有死亡。在MTD研究中，CMC/吐溫制劑中的TarcevaTM是100mg/kg qd，200mg/kg qd顯示出毒性。但是，我們以前的效力研究還顯示一天一次給予CMC/吐溫中的150mg/kg的TarcevaTM能夠很好的耐受三周?；谖墨I，在本研究中采用10mg/kg劑量的奧沙利鉑，每周一次腹膜內給予(Cividalli A，等(2002)Int.J Radiat.Onclo.Biol.Phys 52(4)1092-1098)。
在目前的研究中，新EGFR抑制劑TarcevaTM與臨床相關的化療劑奧沙利鉑結合用于LoVo結腸直腸異種移植物模型中。奧沙利鉑以最大的治療劑量結合代表最有效的臨床方案。還評價亞最適劑量的TarcevaTM+奧沙利鉑組合以尋找加強的效力或者可能的拮抗作用。
該數(shù)據(jù)清楚地顯示了每種藥劑在以其各自的最大治療劑量(TarcevaTM100mg/kg＞100％TGI，p≤0.001，98％，TGI，p≤0.001(實驗525和540，分別地))在LoVo結腸直腸人腫瘤異種移植物中令人印象深刻的單一藥劑活性，40-60％的腫瘤部分消退。亞最適單一藥劑低劑量的TarcevaTM(25mg/kg qd)顯示大約53-79％的腫瘤生長抑制。
在LoVo結腸直腸異種移植物中還評價奧沙利鉑和TarcevaTM組合來觀察是否會出現(xiàn)對抗、加成或者協(xié)同活性。分別以高劑量10mg/kg q7d ip和100mg/kg qd po以及低劑量5mg/kg q7d ip奧沙利鉑和25mg/kgTarcevaTM將奧沙利鉑和TarcevaTM結合。盡管毒性在研究開始后的早達5天出現(xiàn)，兩只小鼠死亡，但是通過調節(jié)劑量，該組中的絕大多數(shù)小鼠存活。在高劑量結合組，觀察到顯著的腫瘤生長抑制(＞100％，％T/C＝-12％，P＝＜0.001)，80％的腫瘤部分消退。該腫瘤生長抑制可以被歸類為協(xié)同，其顯著優(yōu)于單一藥劑高劑量奧沙利鉑(P＜0.001)和TarcevaTM(P＜0.001)。也結合5mg/kg q7d iv奧沙利鉑和25mg/kg qd po TarcevaTM的亞最適劑量。所有小鼠都對該組合充分耐受，僅有輕度的重量減輕或者總毒性指征。觀察到優(yōu)于賦形劑對照的顯著的腫瘤生長抑制(75％，％T/C＝25％，P＜＝0.001)...。該腫瘤生長抑制可以被歸類為協(xié)同，其顯著優(yōu)于亞最適的奧沙利鉑(P＝0.009)和亞最適的TarcevaTM(P＜0.001)。
結論埃洛替尼(TarcevaTM，OSI-774)是一種有效的、可口服生物利用的、EGFR(HER1，erbB1)酪氨酸激酶(TK)的小分子抑制劑。埃洛替尼抑制EGFR酪氨酸激酶結構域的磷酸化作用，從而阻斷來自該受體下游的主要信號傳導分子。埃洛替尼正在完成NSCLC中的III期臨床試驗，并且被在其他類型的實體腫瘤中測試。奧沙利鉑被用于處理晚期結腸直腸癌患者。在我們的研究中，在無胸腺小鼠中的兩種人結腸直腸癌異體移植物模型(LoVo和HCT116)中評價了埃洛替尼的抗腫瘤活性。兩種細胞類型均在體內和體外表達EGFR并且具有類似的倍增時間。埃洛替尼被作為單一療法或者與奧沙利鉑結合給予具有建立的LoVo或者HCT116腫瘤的小鼠。藥物以其各自的最大治療劑量或者亞最適劑量結合。在LoVo模型中，用100mg/kg的埃洛替尼進行的治療得到了極高的腫瘤生長抑制(TGI＞100％，p＜0.001)，6/10的小鼠表現(xiàn)出部分恢復(PR)。用25mg/kg的埃洛替尼進行的治療得到了明顯的腫瘤生長抑制(TGI＝79％，p＜0.001)。以10mg/kg或者5mg/kg給予奧沙利鉑在LoVo模型中得到了臨界的抗腫瘤活性(TGI＝39％，p＝0.056；TGI＝33％，p＝0.06)。用埃洛替尼和奧沙利鉑以其最大治療劑量聯(lián)合治療在大多數(shù)治療的小鼠中得到了增強的抗腫瘤活性(TGI＞100％，p＜0.001)。該增強的活性優(yōu)于單一藥劑的活性。與單一療法活性相比，以亞最適劑量共給予埃洛替尼和奧沙利鉑得到了增加的抗腫瘤活性(TGI＝75％)。
以10mg/kg或者5mg/kg給予奧沙利鉑在HCT116模型中得到了臨界的抗腫瘤活性(分別為TGI＝26％，p＝0.307；TGI＝21％，p＝0.273，數(shù)據(jù)未顯示)。這類似于我們在LoVo模型中的發(fā)現(xiàn)并且使我們懷疑來自該文獻的劑量和方案是否是最佳的。以其各自最大治療劑量或者亞最適劑量結合的埃洛替尼和奧沙利鉑沒有在治療小鼠中增加指向HCT116腫瘤明顯的抗腫瘤活性(數(shù)據(jù)未顯示)。但是，基于特定結腸直腸癌腫瘤系的分子生物學差異，用于結合奧沙利鉑和TarcevaTM的組合數(shù)據(jù)可以變化。
綜合起來，這些數(shù)據(jù)支持這樣的結論埃洛替尼，特別是在亞最適劑量的時候，可以在人結腸直腸瘤異種移植物模型中提高奧沙利鉑抗腫瘤活性，而不提高毒性。這些數(shù)據(jù)支持在人結腸直腸癌中埃洛替尼的評價。
通過參考結合所有的專利、公開的專利申請和本文公開的其它文獻都通過參考特別結合于此。
等價物本領域的技術人員使用不過是常規(guī)的實驗就會認識到或者能夠確定許多于此處具體描述的本發(fā)明的具體實施方案的等價物。下面的權利要求的范圍意欲將這些等價物包含其中。
權利要求
1.藥物組合物，特別用于癌癥，其在藥用載體中包含EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑。
2.權利要求1的藥物組合物，其中EGFR激酶抑制劑是埃洛替尼。
3.權利要求2的藥物組合物，其中埃洛替尼在組合物中以鹽酸鹽的形式存在。
4.權利要求1-3任一項的藥物組合物，其另外包含一種或多種其它抗癌劑。
5.一種制備治療腫瘤或腫瘤轉移的藥物的方法，其特征在于使用EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑。
6.權利要求5的方法，其中所述藥物用于癌癥。
7.權利要求5或6的方法，其中EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑被包含在相同制劑中。
8.權利要求5或6的方法，其中EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑被包含在不同制劑中。
9.權利要求5-8任一項的方法，其中EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑是通過相同的途徑被給藥于患者。
10.權利要求5-9任一項的方法，其中EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑是通過不同的途徑被給藥于患者。
11.權利要求5-10任一項的方法，其中使用EGFR激酶抑制劑埃洛替尼。
12.權利要求5-11任一項的方法，其中埃洛替尼是通過胃腸外或口服給藥的方式被給藥于患者。
13.權利要求5-12任一項的方法，其中奧沙利鉑是通過胃腸外給藥的方式被給藥于患者。
14.權利要求5-13任一項的方法，其另外包含一種或多種其它抗癌劑。
15.權利要求5-14任一項的方法，其中所述其它抗癌劑選自烷化劑，環(huán)磷酰胺，苯丁酸氮芥，順鉑，白消安，美法侖，卡莫昔汀，鏈脲霉素，曲他胺，絲裂霉素C，抗代謝物，甲氨蝶呤，依托泊苷，6-巰嘌呤，6-thiocguanine，阿糖胞苷，5-氟尿嘧啶，卡培他濱，達卡巴嗪，抗生素類，放線菌素D，多柔比星，柔紅霉素，博來霉素，普卡霉素，生物堿，長春堿，紫杉醇，糖皮質激素，地塞米松，皮質甾類，波尼松，核苷酶抑制劑，羥基脲，氨基酸耗竭酶，天冬酰胺酶，甲酰四氫葉酸和葉酸衍生物。
16.一種制備用于治療患者腫瘤或腫瘤轉移的藥物組合物的方法，其包含將奧沙利鉑和EGFR激酶抑制劑結合。
17.依照權利要求16的方法，其中EGFR激酶抑制劑是埃洛替尼。
18.權利要求17的方法，其還包含將藥用載體與奧沙利鉑和埃洛替尼結合。
19.一種試劑盒，其包含容器，所述容器包含奧沙利鉑和EGFR激酶抑制劑。
20.權利要求19的試劑盒，還包含無菌稀釋劑。
21.權利要求19的試劑盒，其中EGFR激酶抑制劑是埃洛替尼。
22.權利要求19-21任一項的試劑盒，其還包含包裝說明書，所述包裝說明書包含打印的說明書，其指導將奧沙利鉑和埃洛替尼的聯(lián)合治療應用于患者以作為治療患者的腫瘤、腫瘤轉移或其它癌癥的方法。
23.依照權利要求1的組合物，其另外包含一種或多種其它抗癌劑。
24.依照權利要求23的組合物，其中所述其它抗癌劑是選自由下述各項組成的組的成員烷基化藥物，抗代謝物，微管抑制劑，鬼臼毒素，抗生素，亞硝基脲，激素治療，激酶抑制劑，腫瘤細胞凋亡活化劑，和抗血管生成劑。
25.一種治療癌癥的方法，其包含對需要這種治療的受試者給予(i)第一個有效量的EGFR激酶抑制劑，或其藥用鹽；和(ii)第二個有效量的奧沙利鉑。
26.一種治療癌癥的方法，其包含對需要這種治療的受試者給予(i)第一個低于治療量的EGFR激酶抑制劑，或其藥用鹽；和(ii)第二個低于治療量的奧沙利鉑。
27.依照權利要求25或26的治療癌癥的方法，其中EGFR激酶抑制劑是埃洛替尼。
28.權利要求5的方法，其中待治療的腫瘤或腫瘤轉移是結腸直腸腫瘤或腫瘤轉移。
29.一種藥物組合物，特別用于癌癥，其包含(i)第一個有效量的EGFR激酶抑制劑，或其藥用鹽；和(ii)第二個有效量的奧沙利鉑。
30.一種藥物組合物，特別用于癌癥，其包含(i)第一個低于治療量的EGFR激酶抑制劑，或其藥用鹽；和(ii)第二個低于治療量的奧沙利鉑。
31.依照權利要求29或30的藥物組合物，其中EGFR激酶抑制劑是埃洛替尼。
32.EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑，用作藥物，特別用于癌癥。
33.埃洛替尼和奧沙利鉑，用作藥物，特別用于癌癥。
34.EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑在制備治療腫瘤或腫瘤轉移的藥物中的應用。
35.依照權利要求34的應用，其中EGFR激酶抑制劑是埃洛替尼。
36.如此處所描述的新化合物、工藝、藥物組合物，方法和用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于制備治療腫瘤或腫瘤轉移的藥物的方法，其特征在于使用治療有效量的EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑，同時使用或不使用另外的藥劑或治療，如其它抗癌藥或放射療法。本發(fā)明還涵蓋藥物組合物，其包含EGFR激酶抑制劑和奧沙利鉑組合，結合以藥用載體。可用于實施本發(fā)明的優(yōu)選的EGFR激酶抑制劑實例是化合物鹽酸埃洛替尼(也已知為Tarceva
文檔編號A61K31/498GK1960737SQ200580017970
公開日2007年5月9日 申請日期2005年5月25日 優(yōu)先權日2004年6月3日
發(fā)明者陳建平, B·希金斯, K·科林斯基 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司