專利名稱：治療腫瘤和轉(zhuǎn)移性疾病的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本申請(qǐng)涉及使用抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或抗α4整聯(lián)蛋白配體(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白治療患有牽涉α4整聯(lián)蛋白表達(dá)的惡性腫瘤和/或轉(zhuǎn)移性疾病的方法。還提供藥物制劑用于抑制腫瘤生長(zhǎng)和/或轉(zhuǎn)移性進(jìn)展和/或轉(zhuǎn)移灶發(fā)展的用途。
背景技術(shù)：
已知良性的和惡性的腫瘤都是以在正常細(xì)胞中未發(fā)現(xiàn)的模式表達(dá)蛋白質(zhì)。腫瘤或惡性細(xì)胞表達(dá)的蛋白質(zhì)模式可以反映疾病的進(jìn)展(即，初期階段或轉(zhuǎn)移性疾病)。隨著惡性腫瘤進(jìn)展，細(xì)胞傾向于越來(lái)越不同于它們來(lái)源的組織。隨著癌癥進(jìn)展變得更加未分化的，無(wú)論用于確定癌癥進(jìn)展的階段格式(staging schema)如何，細(xì)胞變得更可能轉(zhuǎn)移和/或更難通過(guò)常規(guī)療法控制。癌癥治療可包括以下治療的一種或多種化療、手術(shù)、放療、高熱、免疫治療、骨髓移植、激素治療、和生物治療。
整聯(lián)蛋白為涉及細(xì)胞粘合、免疫細(xì)胞遷移和活化的細(xì)胞表面糖蛋白家族。α-4整聯(lián)蛋白由除嗜中性粒細(xì)胞之外的所有循環(huán)白細(xì)胞表達(dá)，并且與β-1(β1)或β-7(β7)整聯(lián)蛋白亞單位結(jié)合形成雜二聚型受體。α-4β-1(α4β1)整聯(lián)蛋白和α-4β-7(α4β7)整聯(lián)蛋白兩者都在白細(xì)胞穿過(guò)血管內(nèi)皮的遷移(Springer等人，Cell，1994，76301-14；Butcher等人，Science，1996，27260-6)和促進(jìn)實(shí)質(zhì)內(nèi)的細(xì)胞活化和存活(Damle等人，J.Immunol.，1993，1512368-79；Koopman等人，J.Immunol.，1994，1523760-7；Leussink等人，Acta Neuropathol.，2002，103131-136)中起作用。α4β1整聯(lián)蛋白在淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、和嗜酸性粒細(xì)胞上進(jìn)行結(jié)構(gòu)表達(dá)。
α-4β-1(又名極遲抗原-4、VLA-4)結(jié)合于血管細(xì)胞粘著分子-1(VCAM-1)(Lobb等人，J.Clin.Invest.，1994，941722-8)，其由慢性炎癥的許多部位的血管內(nèi)皮表達(dá)(Bevilacqua等人，1993，Annu.Rev.Immunol.，11767-804；Postigo等人，1993，Res.Immunol.，144723-35)。α4β1整聯(lián)蛋白具有其它的配體，包括粘連蛋白和其它細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)組分。
α-4β-7整聯(lián)蛋白與粘膜地址素細(xì)胞粘著分子(MAdCAM-1)相互作用，并且介導(dǎo)淋巴細(xì)胞到內(nèi)臟的歸巢(Farstad等人，1997，Am.J.Pathol.，150187-99；Issekutz，1991，J.Immunol.1474178-84)。因此，需要抑制癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的新的藥物、組合物、和使用這些藥物和組合物的方法，其可單獨(dú)使用或與其它藥物組合使用，用于治療癌癥，特別是晚期腫瘤，其典型地涉及轉(zhuǎn)移。
發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明提供用于治療腫瘤和/或轉(zhuǎn)移性疾病和/或抑制腫瘤生長(zhǎng)的新的方法、組合物、和聯(lián)合療法。優(yōu)選所述方法、組合物和聯(lián)合療法涉及治療表達(dá)α4的癌癥如淋巴瘤、白血病、黑素瘤、前列腺癌，以及治療任何表達(dá)α4的原發(fā)腫瘤的轉(zhuǎn)移性疾病。
因此，本發(fā)明的一個(gè)方面提供抑制腫瘤生長(zhǎng)和/或轉(zhuǎn)移或轉(zhuǎn)移性擴(kuò)散的方法，所述方法包括對(duì)有需要的主體給藥抑制腫瘤生長(zhǎng)、和/或轉(zhuǎn)移灶和/或轉(zhuǎn)移性擴(kuò)散的足夠量的抗-α4免疫球蛋白或抗α4整聯(lián)蛋白配體(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白。優(yōu)選抗-α抗體結(jié)合于α4β1整聯(lián)蛋白和/或α4β7整聯(lián)蛋白，更優(yōu)選免疫球蛋白為單克隆抗體(如，那他珠他單抗(natalizumab))。
本發(fā)明的另一方面為治療的腫瘤為實(shí)體瘤或軟組織瘤?？紤]用所示方法、聯(lián)合療法、和抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或抗α4整聯(lián)蛋白配體的免疫球蛋白治療的實(shí)質(zhì)組織瘤包括但不限于黑素瘤(如，皮膚黑素瘤、轉(zhuǎn)移性黑素瘤、或眼內(nèi)黑素瘤)、前列腺癌、和其它原發(fā)腫瘤的轉(zhuǎn)移灶。
本發(fā)明的另一方面考慮了待治療的腫瘤為軟組織瘤如骨瘤、白血病(如，慢性髓性白血病、急性髓性白血病、成年急性淋巴母細(xì)胞性白血病、急性髓性白血病、成熟B細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、幼淋巴細(xì)胞性白血病、或毛細(xì)胞白血病)、或淋巴瘤(如，非何杰金氏淋巴瘤、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、或何杰金氏病)。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案考慮了對(duì)主體給藥約1mg/kg主體體重到約100mg/kg主體體重(及該范圍內(nèi)的任何整數(shù)值)的量的抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白。更優(yōu)選地，將抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白以約1mg/kg主體體重到約10mg/kg主體體重的量對(duì)主體給藥。優(yōu)選地，免疫球蛋白為那他珠他單抗。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，免疫球蛋白可以單獨(dú)給藥或在多模態(tài)形式中與其它癌癥治療模式組合使用。例如，如果腫瘤為黑素瘤，則可以在已經(jīng)通過(guò)手術(shù)除去黑素瘤之后對(duì)主體給藥那他珠他單抗。如果腫瘤為黑素瘤，則上述方法可以另外結(jié)合癌癥治療模式，如隔離肢體灌注、區(qū)域性化療輸注、系統(tǒng)性化療、或用第二抗體(如，抗-GM2神經(jīng)節(jié)苷脂抗體、抗-GD2神經(jīng)節(jié)苷脂抗體、抗-GD3神經(jīng)節(jié)苷脂抗體)、或抗血清的免疫治療?；焺┛蔀橐韵碌囊环N或多種達(dá)卡巴嗪、卡莫司汀、洛莫司汀、?；悄就　⒏Ｄ就?、司莫司汀、順鉑、卡鉑、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春地辛、紫杉醇、二溴衛(wèi)矛醇、地托比星(detorubicin)、吡曲克辛、和干擾素(如，干擾素-α2)。
本發(fā)明的另一個(gè)方面考慮了治療向腦、肺、肝、或骨轉(zhuǎn)移的方法。
本發(fā)明的又一個(gè)方面考慮了使用抗α4整聯(lián)蛋白或其配體(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白與其它淋巴瘤治療模式組合用于治療淋巴瘤的方法。
本發(fā)明的另一個(gè)方面考慮了其中將抗α4整聯(lián)蛋白或其配體(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白與本領(lǐng)域已知的其它腫瘤治療模式組合的聯(lián)合療法。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供藥物制劑在對(duì)有需要的主體給藥時(shí)抑制腫瘤生長(zhǎng)、和/或抑制轉(zhuǎn)移、和/或抑制或延緩疾病進(jìn)展的應(yīng)用，藥物制劑包括抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或抗α4整聯(lián)蛋白配體(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白。
本發(fā)明的另一個(gè)方面考慮了藥物制劑在對(duì)有需要的主體給藥時(shí)抑制腫瘤生長(zhǎng)和/或轉(zhuǎn)移性進(jìn)展和/或轉(zhuǎn)移灶發(fā)展的應(yīng)用，藥物制劑包括抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白。優(yōu)選地，主體另外用化療、免疫治療、手術(shù)、放療、高熱、或改善癌癥治療的副作用的藥物進(jìn)行治療。優(yōu)選地，腫瘤為黑素瘤、白血病、前列腺癌、或淋巴瘤。


圖1表示在形成腫瘤之后給藥對(duì)照、紫杉醇、IgG4或那他珠他單抗時(shí)，MOLT-4異種移植的原發(fā)腫瘤生長(zhǎng)圖。將SCID小鼠用鹽水(N＝20)、那他珠他單抗(N＝20)、IgG4(N＝20)、或紫杉醇(N＝20)處理。鹽水、那他珠他單抗和IgG4在第-7、-4、0、3、7、10、14、17、21、24、28、31、35、38、42、和45天給藥。在第0天將MOLT-4白血病異種移植物皮下植入。紫杉醇在第1-5天靜脈給藥。每周兩次測(cè)量腫瘤。
發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明1.定義和縮寫根據(jù)本詳細(xì)說(shuō)明，使用以下縮寫和定義。需要指出的是，如本文中使用的，除非另外說(shuō)明，單數(shù)形式“一(a)”“一個(gè)(an)”和“該(the)”包括復(fù)數(shù)。因此，例如，“抗體”包括多個(gè)這種抗體，“劑量”包括本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的一個(gè)或多個(gè)劑量及其等價(jià)物，等等。
提供的在本文所討論的公開(kāi)僅用于它們?cè)诒旧暾?qǐng)?zhí)峤蝗罩暗墓_(kāi)。不應(yīng)將本文中的任何引用看作是本發(fā)明根據(jù)在先發(fā)明而無(wú)權(quán)先于這種公開(kāi)的承認(rèn)。另外，提供的
公開(kāi)日期可能不同于實(shí)際的出版日期，其可能需要獨(dú)立確認(rèn)。
1.1定義如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“主體”或“患者”是指包括哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物可為犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、靈長(zhǎng)類動(dòng)物、牛類、綿羊類、豬類、駱駝?lì)?、山羊類、嚙齒動(dòng)物、或馬類。優(yōu)選地，哺乳動(dòng)物為人。
“那他珠他單抗”或“Tysabri”是指如美國(guó)專利5,840,299和6,033,665中所述的抗VLA-4的人源化抗體，所述專利被全文并入本文作為參考。本文還考慮了其它VLA-4特異性抗體。這種抗-VLA-4抗體和免疫球蛋白包括但不限于在美國(guó)專利6,602,503和6,551,593、公開(kāi)的美國(guó)專利申請(qǐng)20020197233(Relton等人)中所述的那些免疫球蛋白?？贵w可以通過(guò)在這些專利和申請(qǐng)中公開(kāi)的方法，通過(guò)哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)、或通過(guò)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)(如，山羊)制備。
如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“效力”是指具體治療方案的有效性。效力可以根據(jù)各特征(但不限于這些特征)如腫瘤生長(zhǎng)的抑制、腫瘤質(zhì)量的降低、通過(guò)例如放射性成像評(píng)價(jià)的轉(zhuǎn)移灶的減少、腫瘤生長(zhǎng)減慢、不存在可檢測(cè)到的腫瘤相關(guān)抗原等進(jìn)行測(cè)量。評(píng)價(jià)腫瘤進(jìn)展的另外的方法在本文中討論，并且為治療醫(yī)生和診斷醫(yī)生已知的。
術(shù)語(yǔ)“可藥用載體”和“可藥用賦形劑”是指用于形成制劑的一部分并且只起到作為載體的作用(即本身不具有生物活性)的任何化合物?？伤幱幂d體或賦形劑通常是安全的、無(wú)毒的，且既沒(méi)有生物學(xué)方面又沒(méi)有其它方面的不希望的作用。如本文中使用的，可藥用載體或賦形劑包括一種和一種以上的所述載體或賦形劑。
術(shù)語(yǔ)“治療(treating)”和“治療(treatment)”等在本文中通常是指得到所需的藥理學(xué)和生理學(xué)效果。更具體地，用于治療患有腫瘤和轉(zhuǎn)移性疾病的主體的本文所述的試劑通常以治療有效量提供，以實(shí)現(xiàn)以下的一項(xiàng)或多項(xiàng)效果腫瘤生長(zhǎng)抑制、腫瘤質(zhì)量降低、轉(zhuǎn)移灶消失、治療開(kāi)始后新的轉(zhuǎn)移灶的發(fā)展得到抑制、或腫瘤減少，從而沒(méi)有可檢測(cè)到的疾病(通過(guò)如放射性成像、生物流體分析、細(xì)胞遺傳學(xué)、熒光原位雜交、免疫細(xì)胞化學(xué)、集落試驗(yàn)、多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)、或聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)評(píng)價(jià))。如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“治療”包括對(duì)哺乳動(dòng)物特別是人的疾病的任何治療。
“治療有效量”是指當(dāng)對(duì)哺乳動(dòng)物給藥時(shí)足以有效對(duì)抗腫瘤的本文公開(kāi)的藥物、試劑、化合物、組合物、或試劑組合的量。
術(shù)語(yǔ)“腫瘤”包括良性和惡性生長(zhǎng)或癌癥。因此，除非另外說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)“癌癥”可以包括良性和惡性生長(zhǎng)。優(yōu)選地，腫瘤為惡性的。腫瘤可為實(shí)體組織瘤如黑素瘤，或軟組織瘤如淋巴瘤、白血病、或骨癌。
術(shù)語(yǔ)“原發(fā)腫瘤”是指原發(fā)贅生物而不是位于患者體內(nèi)其它組織或器官中的轉(zhuǎn)移灶。術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)移性疾病”、“轉(zhuǎn)移灶”、和“轉(zhuǎn)移性灶”是指已經(jīng)遷移到相對(duì)于原發(fā)腫瘤較遠(yuǎn)位置的一組細(xì)胞。
1.2縮寫以下縮寫通常用于相關(guān)術(shù)語(yǔ)，并且是本領(lǐng)域中已知的。
α4β1α-4β-1α4β7α-4β-7Ab抗體ABDIC 多柔比星、博來(lái)霉素、達(dá)卡巴嗪、洛莫司汀、和潑尼松ALL 急性淋巴細(xì)胞性白血病
AML 急性髓性白血病BMT 骨髓移植CAF 環(huán)磷酰胺、阿霉素、和5-氟尿嘧啶CAMP 洛莫司汀、米托蒽醌、阿糖胞苷、和潑尼松CAVP 洛莫司汀、美法侖、依托泊苷、和潑尼松CBVD 洛莫司汀、博來(lái)霉素、長(zhǎng)春堿、地塞米松CCNU 洛莫司汀CEFF(B) 環(huán)磷酰胺、依托泊苷、丙卡巴肼、潑尼松、和博來(lái)霉素CEM 洛莫司汀、依托泊苷、和甲氨蝶呤CEP 洛莫司汀、依托泊苷、和潑尼莫司汀CEVD 洛莫司汀、依托泊苷、長(zhǎng)春地辛、和地塞米松CHOP 環(huán)磷酰胺、多柔比星、長(zhǎng)春新堿、和潑尼松CLL 慢性淋巴細(xì)胞性白血病CMF 環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、和5-氟尿嘧啶CML 慢性髓性白血病CNS 中樞神經(jīng)系統(tǒng)CTCL 皮膚T細(xì)胞淋巴瘤DHAP 地塞米松、高劑量阿糖胞苷、和順鉑ECM 細(xì)胞外基質(zhì)EPOCH依托泊苷、長(zhǎng)春新堿、多柔比星、環(huán)磷酰胺、和潑尼松ESHAP依托泊苷、甲潑尼龍、高劑量(HD)阿糖胞苷、和順鉑EVA 依托泊苷、長(zhǎng)春堿、和多柔比星EVAP 依托泊苷、長(zhǎng)春堿、阿糖胞苷、和順鉑GAP-BOP 環(huán)磷酰胺、多柔比星、丙卡巴肼、博來(lái)霉素、長(zhǎng)春新堿、和潑尼松HD 高劑量3H-FUDR 3H-氟尿苷IFN 干擾素IFN-α2 干擾素-α2IFNβ-1a 干擾素β-1aIHC 免疫組織化學(xué)
i.m. 肌內(nèi)IMVP-16 異環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷i.p. 腹膜內(nèi)i.v. 血管內(nèi)m-BACOD 甲氨蝶呤、博來(lái)霉素、多柔比星、環(huán)磷酰胺、長(zhǎng)春新堿、地塞米松、和亞葉酸MAb 單克隆抗體MACOP-B 甲氨蝶呤、多柔比星、環(huán)磷酰胺、長(zhǎng)春新堿、潑尼松、博來(lái)霉素、和亞葉酸MadCAM-1 粘膜地址素細(xì)胞粘著分子1(又名CD106)MeCCNU司莫司汀或甲基CCNUMF蕈樣真菌病MIME 甲基-gag、異環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷MINE 米托胍腙(mitoquazone)、異環(huán)磷酰胺、長(zhǎng)春瑞濱、和依托泊苷MOPLACE 環(huán)磷酰胺、依托泊苷、潑尼松、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、和長(zhǎng)春新堿MOPP 氮芥、長(zhǎng)春新堿、丙卡巴肼、和潑尼松MS多發(fā)性硬化MTX 甲氨蝶呤MTX-CHOP 甲氨蝶呤和CHOPNAT 那他珠他單抗(Tysabri)PBMC 周圍血液?jiǎn)魏思?xì)胞PCVP 長(zhǎng)春堿、丙卡巴肼、環(huán)磷酰胺、和潑尼松p.o. 口服給藥(經(jīng)口)ProMACE-MOPP 具有標(biāo)準(zhǔn)MOPP的潑尼松、甲氨蝶呤、多柔比星、環(huán)磷酰胺、依托泊苷、亞葉酸s.c. 皮下SDS-PAGE 十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳SCID 重度聯(lián)合免疫缺損TNM 腫瘤、結(jié)點(diǎn)、和轉(zhuǎn)移灶為American Joint Commission onCancer的階段分類
VABCD 長(zhǎng)春堿、多柔比星、達(dá)卡巴嗪、洛莫司汀、和博來(lái)霉素VCAM-1 血管細(xì)胞粘著分子1(又名CD106和INCAM-110)VLA-4 極遲抗原4(又名α-4β-1、α4β1整聯(lián)蛋白、VLA-4a、和CD49d)2.疾病在本發(fā)明的一個(gè)方面中，本文公開(kāi)的方法和組合物可用于抑制或延緩惡性腫瘤的進(jìn)展。這些惡性腫瘤可為實(shí)體組織瘤或軟組織瘤。軟組織瘤包括骨癌、淋巴瘤、和白血病。本發(fā)明的另一個(gè)方面為所述方法和組合物抑制或預(yù)防轉(zhuǎn)移灶或轉(zhuǎn)移性進(jìn)展的應(yīng)用。
因此，本發(fā)明的一方面為用免疫球蛋白治療腫瘤或轉(zhuǎn)移性疾病。這種免疫球蛋白可以靶向α4并優(yōu)選α4β1整聯(lián)蛋白和/或α4β7整聯(lián)蛋白?；蛘撸庖咔虻鞍卓梢园邢颚?的配體(如VCAM-1、MadCAM-1)。這些免疫球蛋白可單獨(dú)使用、彼此組合使用、與其它癌癥治療模式組合使用，其它癌癥治療模式例如但不限于化療、手術(shù)、放療、高熱、免疫治療、激素治療、生物學(xué)治療(如，引起細(xì)胞破壞的免疫效應(yīng)物機(jī)理、細(xì)胞因子、免疫治療、干擾素、白細(xì)胞介素-2、癌癥疫苗療法、和過(guò)繼療法)、和用于改善這種癌癥治療模式的不良副作用的藥物。
2.1癌癥治療術(shù)語(yǔ)癌癥包含由許多亞類組成的各個(gè)器官的各種癌癥的惡性腫瘤的集合。典型地，在癌癥診斷時(shí)，“癌癥”實(shí)際上包括具有不同的遺傳學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)、和生物學(xué)特征的細(xì)胞的多個(gè)亞群體。
通過(guò)本發(fā)明的組合物和方法治療的癌癥類型為表達(dá)α4整聯(lián)蛋白(即，α4β1和/或α4β7)或其配體(如，VCAM-1和/或MadCAM-1)的那些。優(yōu)選的癌癥包括但不限于黑素瘤(如，皮膚黑素瘤、轉(zhuǎn)移性黑素瘤、和眼內(nèi)黑素瘤)、前列腺癌、淋巴瘤(如，皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、蕈樣真菌病、何杰金氏淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤、和原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤)、白血病(如，前B細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞性白血病、慢性和急性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性和急性髓性白血病、成年急性淋巴母細(xì)胞性白血病、成熟B細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞性白血病、幼淋巴細(xì)胞白血病、毛細(xì)胞白血病、和T細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞性白血病)、和在細(xì)胞表面上表達(dá)這些蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移性瘤。需要指出的是，雖然蕈樣真菌病(MF)、Sézary綜合癥、皮膚的網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤和幾種其它的皮膚淋巴細(xì)胞性惡液質(zhì)曾經(jīng)被認(rèn)為是單獨(dú)的病況，但是它們現(xiàn)在被認(rèn)為是皮膚T細(xì)胞淋巴瘤(CTCL)的不同臨床表現(xiàn)，因此包括在該術(shù)語(yǔ)中。參見(jiàn)Lynn D.Wilson等人，″Cutaneous T-CellLymphomas，″在CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2220-2232(Vincent T.DeVita，Jr.等人，編者，第5版，1997)；Bank等人，1999，J.Cutan.Pathol.，26(2)65-71。
2.2轉(zhuǎn)移性疾病一旦患者被診斷為患有腫瘤，第一個(gè)問(wèn)題是腫瘤是否進(jìn)展并擴(kuò)散到區(qū)域性淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處器官。最后，大多數(shù)癌癥死亡源于對(duì)常規(guī)的癌癥療法具有耐受性的轉(zhuǎn)移灶。轉(zhuǎn)移灶可以位于不同的器官內(nèi)和同一器官的不同區(qū)域內(nèi)，使得通過(guò)手術(shù)、輻射、藥物、和/或生物治療幾乎不可能完全根除。
還考慮了使用本文的方法、聯(lián)合療法、和組合物的治療用于轉(zhuǎn)移性癌癥的治療。癌癥通常只在原發(fā)組織的一個(gè)位置中開(kāi)始生長(zhǎng)。隨著癌癥進(jìn)展，癌癥可轉(zhuǎn)移到患者體內(nèi)的遠(yuǎn)處位置。例如，在前列腺中開(kāi)始的癌癥可能轉(zhuǎn)移到肺。轉(zhuǎn)移性疾病常見(jiàn)的和本文考慮的其它位置包括轉(zhuǎn)移性癌癥移向腦、肺、肝、和骨。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，幾種整聯(lián)蛋白亞單位(即，α2、α4、和β3)在轉(zhuǎn)移灶中比在正常的前列腺組織和正常的黑素細(xì)胞中的表達(dá)增加。Hartstein等人，1997，Ophthal.Plast.Reconstr.Surg.，13(4)227-38。
在所有腫瘤中轉(zhuǎn)移灶的形成有必需的步驟。這些步驟包括以下(1)在腫瘤性轉(zhuǎn)化之后，由腫瘤所處的器官/組織環(huán)境支持的腫瘤性細(xì)胞的進(jìn)行性增生。
(2)腫瘤的新血管生成(Neovascularization)或血管生成，以進(jìn)一步生長(zhǎng)使直徑超過(guò)1到2mm。
(3)粘著分子的表達(dá)的負(fù)調(diào)節(jié)，其中細(xì)胞具有增加的運(yùn)動(dòng)性或從原發(fā)性病灶脫離的能力。
(4)單一腫瘤細(xì)胞或細(xì)胞聚集物的分離和栓化(embolization)，這些細(xì)胞的大多數(shù)被迅速地破壞。
(5)一旦腫瘤細(xì)胞經(jīng)受住分離和栓化步驟而存活，它們必須在血管內(nèi)腔內(nèi)繼續(xù)增殖。然后細(xì)胞繼續(xù)通過(guò)類似于在侵入過(guò)程中起作用的機(jī)制溢出進(jìn)入器官實(shí)質(zhì)中。
(6)具有適當(dāng)?shù)募?xì)胞表面受體的腫瘤細(xì)胞可以對(duì)旁分泌生長(zhǎng)因子作出反應(yīng)，從而在器官實(shí)質(zhì)中增殖。
(7)腫瘤細(xì)胞逃避宿主的防御(特異性免疫反應(yīng)和非特異性免疫反應(yīng))。
(8)為了使轉(zhuǎn)移灶增殖超過(guò)直徑1到2mm，轉(zhuǎn)移灶必須形成血管網(wǎng)絡(luò)。
因此，如果原發(fā)腫瘤有充分的時(shí)間進(jìn)行這些步驟，其可在原發(fā)腫瘤位置或遠(yuǎn)離原發(fā)腫瘤的位置形成轉(zhuǎn)移灶。本文公開(kāi)的試劑、方法、和聯(lián)合療法抑制或預(yù)防上述轉(zhuǎn)移性過(guò)程中的一個(gè)或多個(gè)步驟。對(duì)于腫瘤轉(zhuǎn)移的機(jī)理和病理學(xué)的附加細(xì)節(jié)，參見(jiàn)Isaiah J.Fidler，″MolecularBiology of CancerInvasion and Metastasis，″，CANCERPRINCIPLES& PRACTICE OF ONCOLOGY 135-152(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。
因此，本發(fā)明的一個(gè)方面提供使用抗α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或者靶向α4配體(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白的方法和包括抗α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或者靶向α4配體(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白的組合物。優(yōu)選的抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白為抗-VLA-4抗體如那他珠他單抗。這些免疫球蛋白可單獨(dú)使用或與預(yù)防轉(zhuǎn)移灶或抑制轉(zhuǎn)移灶進(jìn)展的其它藥物或癌癥治療模式組合使用。因此，所述組合物和方法可用于治療表達(dá)α4整聯(lián)蛋白或α4整聯(lián)蛋白的配體的任何原發(fā)腫瘤的任何轉(zhuǎn)移灶。
3.免疫球蛋白療法考慮了用于治療上述癌癥的免疫球蛋白包括抑制α4β1和/或α4β7結(jié)合于其同源配體如VCAM-1或MAdCAM-1的抗-α4整聯(lián)蛋白抗體。還考慮了對(duì)抗該配體的免疫球蛋白。這些免疫球蛋白可為抗體(即，單克隆抗體、靈長(zhǎng)動(dòng)物化(primatized)抗體、人源化抗體、或人抗體、以及嵌合抗體、和雙特異性抗體)。免疫球蛋白也可為抗體的免疫原片段(如，F(xiàn)ab、scFv、Fab′、F(ab′)2、Fab″、Fabc、或重組合成的片段)或重組產(chǎn)生的免疫球蛋白。優(yōu)選的抗-α4抗體為那他珠他單抗。然而，還考慮了其它抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白，包括可以區(qū)分α4β1和α4β7的免疫球蛋白。如果患者為人，則優(yōu)選的免疫球蛋白為單克隆抗體，更優(yōu)選的免疫球蛋白為人源化或靈長(zhǎng)動(dòng)物化抗體。
這些抗體可單獨(dú)使用或與其它抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或?qū)功?整聯(lián)蛋白配體的免疫球蛋白組合使用。本發(fā)明的另一個(gè)方面考慮了抗-α4抗體以聯(lián)合療法的形式與其它常規(guī)的癌癥治療模式組合的應(yīng)用。
4.聯(lián)合療法對(duì)于癌癥，現(xiàn)有許多治療。用于治療癌癥的具體的癌癥治療或療法組合在很大程度上取決于癌癥的類型、其階段、患者(如，體重、性別、年齡、健康狀態(tài)、先前的癌癥等)、和患者所處的治療時(shí)期(如，首次治療、暴發(fā)危象(in blast crisis)、對(duì)首次治療的反射(refractiveto initial treatments)、癌癥復(fù)發(fā)、或可能由數(shù)月或數(shù)年以前治療第一癌癥誘導(dǎo)的第二癌癥)。因此，醫(yī)生經(jīng)常必須將最適于患者抵御該疾病和患者自我決定生活質(zhì)量的需要的各種治療模式組合。治療模式包括但不限于手術(shù)、放療、化療、生物學(xué)治療(如，細(xì)胞因子、免疫治療、和干擾素)、激素治療、和高熱。
常規(guī)的化療可以進(jìn)一步分為激素治療(如，抗雌激素藥、芳香酶抑制劑、促性腺激素釋放激素類似物、和抗雄性激素)、抗腫瘤烷化劑(如，氮芥、亞硝基脲、四嗪、和氮丙啶)、順鉑及其類似物、抗代謝物(如，甲氨蝶呤、抗葉酸物、5-氟嘧啶、阿糖胞苷、阿扎胞苷、吉西他濱、6-巰基嘌呤、和羥基脲)、拓?fù)洚悩?gòu)酶相互作用藥、抗微管藥物(如，長(zhǎng)春花生物堿、紫杉烷(taxanes)、和雌莫司汀)、分化藥物(如，類維生素A、維生素D3、極性-非極性化合物、丁酸酯和苯乙酸酯、細(xì)胞毒類藥物、細(xì)胞因子、及其組合)、和其它化療劑如氟達(dá)拉濱、2-氯脫氧腺苷、2′-脫氧助間型霉素、高三尖杉酯堿(HHT)、蘇拉明、博來(lái)霉素、和L-天冬酰胺酶。
4.1治療淋巴瘤的聯(lián)合療法本發(fā)明的一個(gè)方面考慮了抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或結(jié)合于α4整聯(lián)蛋白配體(如，MadCAM-1和VCAM-1)的免疫球蛋白在治療淋巴瘤中的應(yīng)用?？紤]了使用本文公開(kāi)的聯(lián)合療法治療表達(dá)α4整聯(lián)蛋白或α4整聯(lián)蛋白配體的任何淋巴瘤細(xì)胞。
考慮了通過(guò)這些聯(lián)合療法治療的淋巴瘤包括T細(xì)胞淋巴瘤，例如但不限于皮膚T細(xì)胞淋巴瘤(CTCL)、T細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤、外周T細(xì)胞淋巴瘤、間變性大細(xì)胞淋巴瘤、抗免疫母細(xì)胞淋巴瘤、和前體T-LBL。淋巴瘤的治療也取決于治療的主體、疾病的類型及其階段。用于白血病和淋巴瘤的現(xiàn)有治療模式的一般描述參見(jiàn)CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。還考慮了治療B細(xì)胞淋巴瘤(如，濾泡性淋巴瘤、彌散性大B細(xì)胞淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、B-CLL/SLL、免疫細(xì)胞瘤/Waldenstrom′s、和MALT型/單核細(xì)胞樣B細(xì)胞淋巴瘤)。還考慮治療兒科淋巴瘤如伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)、彌散性大B細(xì)胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、前體B-LBL、前體T-LBL、間變性大細(xì)胞淋巴瘤、和外周T細(xì)胞淋巴瘤。
用于治療淋巴瘤的常見(jiàn)的藥物組合包括但不限于CHOP(即，環(huán)磷酰胺、多柔比星、長(zhǎng)春新堿、和潑尼松)、GAP-BOP(即，環(huán)磷酰胺、多柔比星、丙卡巴肼、博來(lái)霉素、長(zhǎng)春新堿、和潑尼松)、m-BACOD(即，甲氨蝶呤、博來(lái)霉素、多柔比星、環(huán)磷酰胺、長(zhǎng)春新堿、地塞米松、和亞葉酸)、ProMACE-MOPP(即，與標(biāo)準(zhǔn)MOPP組合的潑尼松、甲氨蝶呤、多柔比星、環(huán)磷酰胺、依托泊苷、亞葉酸)、ProMACE-CytaBOM(潑尼松、多柔比星、環(huán)磷酰胺、依托泊苷、阿糖胞苷、博來(lái)霉素、長(zhǎng)春新堿、甲氨蝶呤、和亞葉酸)、和MACOP-B(甲氨蝶呤、多柔比星、環(huán)磷酰胺、長(zhǎng)春新堿、潑尼松、博來(lái)霉素、和亞葉酸)。對(duì)于復(fù)發(fā)的攻擊性非何杰金氏淋巴瘤，可將以下化療藥物組合與本文所述的抗體和藥物組合使用IMVP-16(即，異環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷)、MIME(即，甲基-gag、異環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷)、DHAP(即，地塞米松、高劑量阿糖胞苷、和順鉑)、ESHAP(即，依托泊苷、甲基潑尼松、高劑量阿糖胞苷、和順鉑)、CEFF(B)(即，環(huán)磷酰胺、依托泊苷、丙卡巴肼、潑尼松、和博來(lái)霉素)、和CAMP(即，洛莫司汀、米托蒽醌、阿糖胞苷、和潑尼松)。參見(jiàn)Margaret A.Shipp，等人，″Non-Hodgkin′sLymphomas，″，CANCERPRINCIPLES & PRACTICEOFONCOLOGY 2165-2220(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997) 。
用于某些淋巴瘤如復(fù)發(fā)的抗藥性何杰金氏病的搶救性化療治療包括但不限于VABCD(即，長(zhǎng)春堿、多柔比星、達(dá)卡巴嗪、洛莫司汀、和博來(lái)霉素)、ABDIC(即，多柔比星、博來(lái)霉素、達(dá)卡巴嗪、洛莫司汀、和潑尼松)、CBVD(即，洛莫司汀、博來(lái)霉素、長(zhǎng)春堿、地塞米松)、PCVP(即，長(zhǎng)春堿、丙卡巴肼、環(huán)磷酰胺、和潑尼松)、CEP(即，洛莫司汀、依托泊苷和潑尼莫司汀)、EVA(即，依托泊苷、長(zhǎng)春堿、和多柔比星)、MOPLACE(即，環(huán)磷酰胺、依托泊苷、潑尼松、甲氨蝶呤、cytaravine、和長(zhǎng)春新堿)、MIME(即，甲基-gag、異環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤、和依托泊苷)、MINE(即，mitoquazone、異環(huán)磷酰胺、長(zhǎng)春瑞濱、和依托泊苷)、MTX-CHOP(即，甲氨蝶呤和CHOP)、CEM(即，洛莫司汀、依托泊苷、和甲氨蝶呤)、CEVD(即，洛莫司汀、依托泊苷、長(zhǎng)春地辛、和地塞米松)、CAVP(即，洛莫司汀、美法侖、依托泊苷、和潑尼松)、EVAP(即，依托泊苷、長(zhǎng)春堿、阿糖胞苷、和順鉑)、和EPOCH(即，依托泊苷、長(zhǎng)春新堿、多柔比星、環(huán)磷酰胺、和潑尼松)。參見(jiàn)例如Vincent T.DeVita等人，″Hodgkin′s Disease，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICEOFONCOLOGY 2242-2283(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。
對(duì)于CTCL，常規(guī)療法取決于患者的評(píng)價(jià)。因此，根據(jù)TNM進(jìn)展，患者可進(jìn)行區(qū)域性化療、補(bǔ)骨脂素紫外線治療、局部外束放療、體外光化療、干擾素(IFN)、用核苷酸衍生物的系統(tǒng)性化療、或光子輻射與本文公開(kāi)的方法和組合物的組合進(jìn)行治療。另外的治療模式為本領(lǐng)域中已知的。一般參見(jiàn)，CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OFONCOLOGY(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。
因此，本發(fā)明的一個(gè)方面考慮了抗-α4免疫球蛋白或者對(duì)抗α4、α4β1和α4β7的配體的免疫球蛋白在抑制主體中的淋巴瘤進(jìn)展和/或淋巴瘤的轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用。試劑可單獨(dú)使用，或與本文中討論的其它淋巴瘤治療組合使用。
4.2黑素瘤的聯(lián)合治療本發(fā)明的另一方面考慮了抑制黑素瘤生長(zhǎng)和/或抑制黑素瘤轉(zhuǎn)移灶的生長(zhǎng)或擴(kuò)散。抗-α4整聯(lián)蛋白(即，α4β1和α4β7)免疫球蛋白或識(shí)別α4整聯(lián)蛋白的配體的免疫球蛋白可單獨(dú)使用或與其它癌癥治療模式組合使用，用于治療黑素瘤?？紤]了所述方法和組合物用于但不限于治療皮膚黑素瘤、轉(zhuǎn)移性黑素瘤和眼內(nèi)黑素瘤。治療這些黑素瘤的常規(guī)療法為本領(lǐng)域中已知的。參見(jiàn)例如Anthony P.Albino等人，″Molecular Biology ofCutaneous Malignant Melanoma，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OFONCOLOGY 1935-1947(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)；CharlesM.Balch等人，″CutaneousMelanoma，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICEOFONCOLOGY，1947-1994；和Jose A.Sahel等人，″IntraocularMelanoma，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OFONCOLOGY，1995-2012。
例如，對(duì)于轉(zhuǎn)移性黑素瘤的治療，手術(shù)、隔離肢體灌注、區(qū)域性化療輸注(用例如，decarbazine或順鉑)、放療、免疫治療(如，用抗GD2和GD3神經(jīng)節(jié)苷脂的抗體治療)、病灶內(nèi)免疫治療、系統(tǒng)性化療、高熱、系統(tǒng)免疫治療、腫瘤疫苗、或其組合的應(yīng)用可另外與抗-α4免疫球蛋白或?qū)功?、α4β1、和α4β7的配體的免疫球蛋白組合。
4.3治療白血病的聯(lián)合療法本發(fā)明的另一個(gè)方面提供使用抗α4免疫球蛋白或?qū)功?配體(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白與用于在治療白血病的常規(guī)療法模式組合來(lái)治療某些白血病。
用于急性髓性白血病(AML)的常規(guī)療法包括但不限于基于小紅莓類(anthracycline)/阿糖胞苷的誘導(dǎo)方案、癥狀緩解后的加強(qiáng)療法諸如骨髓移植(BMT)或高劑量(HD)阿糖胞苷。
用于急性早幼粒細(xì)胞性白血病的常規(guī)療法包括但不限于視黃酸和基于小紅莓類/阿糖胞苷的治療。也可對(duì)患者給藥冷凝蛋白質(zhì)或新鮮冷凍血漿，以維持纖維蛋白原水平大于100mg/dL。輸入血小板也可能必要，以維持人體中＞50,000/μL的每日血小板計(jì)數(shù)。
用于急性淋巴母細(xì)胞性白血病(ALL)的常規(guī)治療模式包括使用小紅莓類、環(huán)磷酰胺、天冬酰胺酶或加上長(zhǎng)春新堿和潑尼松的組合的四或五種藥物誘導(dǎo)方案?；蛘?，醫(yī)生可選擇使用基于阿糖胞苷與小紅莓類、epidophillotoxins的組合；或抗代謝物與本文所述的免疫球蛋白組合物的組合的加強(qiáng)鞏固療法。又一個(gè)方面可為使用口服甲氨蝶呤與巰嘌呤的組合和本發(fā)明的免疫球蛋白用于延長(zhǎng)的維持治療的應(yīng)用。另一個(gè)方案考慮了用于CNS預(yù)防的預(yù)防性鞘內(nèi)化療(有或者沒(méi)有顱側(cè)放療)與本發(fā)明的免疫球蛋白組合的應(yīng)用。對(duì)于可用于與本發(fā)明組合的治療白血病的治療模式的另外的信息，參見(jiàn)Issa Khouri等人，″Molecular Biology of Leukemias，″in CANCERPRINCIPLES &PRACTICE OF ONCOLOGY 2285-2293(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)；David A.Scheinberg等人，″Acute Leukemias，″in CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2293-2321；和Albert B.Deisseroth等人，″Chronic Leukemias，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICEOF ONCOLOGY 2321-2343。
4.4用于治療轉(zhuǎn)移性疾病的聯(lián)合療法轉(zhuǎn)移灶的治療取決于轉(zhuǎn)移灶的位置和產(chǎn)生轉(zhuǎn)移灶的原發(fā)腫瘤的位置可使用單獨(dú)的本文中所述的組合物、聯(lián)合療法、和方法，或其與其它癌癥治療模式的組合進(jìn)行。腫瘤轉(zhuǎn)移的最常見(jiàn)位置為腦、肺、肝、骨、惡性胸膜和心包腔積液、和惡性腹水。
4.4.1腦轉(zhuǎn)移灶當(dāng)起源于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)之外的組織的腫瘤細(xì)胞繼發(fā)性地?cái)U(kuò)散以直接牽涉腦時(shí)形成腦轉(zhuǎn)移灶。顱內(nèi)轉(zhuǎn)移灶可牽涉腦實(shí)質(zhì)、腦神經(jīng)、血管(包括硬模竇)、硬膜、柔腦膜、和頭骨的內(nèi)板。對(duì)于顱內(nèi)轉(zhuǎn)移灶，最常見(jiàn)的是實(shí)質(zhì)內(nèi)(intraparenchymal)轉(zhuǎn)移灶。由原發(fā)腫瘤形成腦轉(zhuǎn)移灶的頻率為肺腫瘤(48％)、乳房腫瘤(15％)、黑素瘤(9％)、結(jié)腸腫瘤(5％)、其它已知的原發(fā)腫瘤(13％)、和其它未知的原發(fā)腫瘤(11％)。參見(jiàn)Jay S.Loeffler，等人，″Metastatic Brain Cancer，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2523-2536(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。與腦轉(zhuǎn)移灶有關(guān)的癥狀包括精神狀態(tài)改變、輕偏癱、半部知覺(jué)(hemisensory)喪失、視神經(jīng)乳頭水腫、和步態(tài)共濟(jì)失調(diào)。因此，經(jīng)常對(duì)新診斷為患有腦轉(zhuǎn)移灶的患者采取長(zhǎng)期的抗驚厥藥預(yù)防和皮質(zhì)類固醇。這種藥物包括苯妥英鈉和苯巴比妥。
如果腦轉(zhuǎn)移灶容易觸及，它們可以通過(guò)手術(shù)切除轉(zhuǎn)移灶而進(jìn)行治療。通過(guò)事先成像和定位技術(shù)，與手術(shù)除去腦轉(zhuǎn)移灶有關(guān)的致病率已經(jīng)降低。然而，仍然存在危險(xiǎn)。因此，放療為治療腦轉(zhuǎn)移灶患者的主要依賴性療法。放療可作為手術(shù)的輔佐療法與手術(shù)組合?；蛘?，可使用放射外科學(xué)。放射外科學(xué)為使用多會(huì)聚性電子束對(duì)小體積遞送高的單劑量輻射的外部輻射技術(shù)。放療可與其它化療劑如甲基-CCNU或ACNU組合給藥，或放療、甲基-CCNU、ACNU、和替加氟(口服給藥的5-氟尿嘧啶)組合。
化療也可用于腦轉(zhuǎn)移灶。取決于原發(fā)腫瘤，可對(duì)患者給藥以下藥物的任一種或其組合環(huán)磷酰胺、5-氟尿嘧啶、長(zhǎng)春新堿、甲氨蝶呤、多柔比星、潑尼松、和阿霉素(如，CAF或CMF的組合)。
可將本文中公開(kāi)的抗體組合物和抗體用法與本文所述的或本領(lǐng)域已知的任何常規(guī)治療模式組合(參見(jiàn)例如Jay S.Loeffler等人，1997)用于腦轉(zhuǎn)移灶。
4.4.2肺轉(zhuǎn)移灶肺為轉(zhuǎn)移性疾病的第二常見(jiàn)部位。在解剖學(xué)上，肺是富含血管的位置并且是循環(huán)腫瘤細(xì)胞在它們離開(kāi)其原發(fā)腫瘤的靜脈引流系統(tǒng)后遇到的第一個(gè)毛細(xì)血管床。因此，肺起到最初的過(guò)濾位置的作用，其中擴(kuò)散的腫瘤細(xì)胞被機(jī)械地捕獲。然而，被捕獲在其中并且繼續(xù)增殖和形成轉(zhuǎn)移灶的細(xì)胞主要取決于它們所由來(lái)的最初的原發(fā)腫瘤。肺轉(zhuǎn)移灶的這種血原性過(guò)程是最常見(jiàn)的方式，但是肺轉(zhuǎn)移灶又可以通過(guò)淋巴系統(tǒng)發(fā)生。參見(jiàn)Harvey I.Pass等人，″Metastatic Cancer to the Lung，″CANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY 2536-2551(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。
發(fā)展為肺轉(zhuǎn)移灶的最常見(jiàn)的原發(fā)腫瘤包括軟組織肉瘤、結(jié)腸癌、生殖細(xì)胞瘤、骨肉瘤、某些兒科腫瘤(如，橫紋肌肉瘤、尤因氏肉瘤、腎母細(xì)胞瘤、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、蜂窩狀肉瘤、滑膜肉瘤、纖維肉瘤、神經(jīng)原性肉瘤、和上皮肉瘤)、黑素瘤、腎細(xì)胞癌、和乳癌。大部分源于這些原發(fā)腫瘤的轉(zhuǎn)移灶通過(guò)手術(shù)治療。然而，一些人推薦與化療組合的手術(shù)。例如，轉(zhuǎn)移到肺的生殖細(xì)胞瘤通過(guò)手術(shù)切除術(shù)，隨后進(jìn)行基于治療性順鉑的組合化療。
肺轉(zhuǎn)移灶的治療經(jīng)常涉及轉(zhuǎn)移灶切除術(shù)(即，肺轉(zhuǎn)移灶的手術(shù)去除)。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面考慮了公開(kāi)的抗體與本文所討論的或本領(lǐng)域已知的常規(guī)療法組合用于治療肺轉(zhuǎn)移灶的應(yīng)用。對(duì)于另外的治療模式，參見(jiàn)例如Harvey I.Pass等人，1997。
因此，本發(fā)明的一方面考慮了將抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或識(shí)別并且結(jié)合于α4配體(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白與用于治療肺轉(zhuǎn)移灶的任何可用的治療模式組合及其用法。
4.4.3肝轉(zhuǎn)移灶肝的轉(zhuǎn)移性疾病可以從許多原發(fā)腫瘤部位發(fā)生。由于解剖學(xué)的靜脈引流，胃腸道腫瘤優(yōu)先擴(kuò)散到肝，使得許多患者最初診斷為在肝中具有癌癥。對(duì)于轉(zhuǎn)移到肝的大多數(shù)胃腸道腫瘤，確診后的存活率極低。但是，結(jié)腸直腸到肝的轉(zhuǎn)移灶可以在切除療法之后進(jìn)行治療。
系統(tǒng)性化療是肝轉(zhuǎn)移灶最常使用的治療模式。對(duì)系統(tǒng)性化療的響應(yīng)根據(jù)原發(fā)腫瘤而定。另一種選擇的治療模式為肝動(dòng)脈化療。肝轉(zhuǎn)移灶幾乎只由肝動(dòng)脈灌注，而正常肝細(xì)胞從門靜脈和肝動(dòng)脈得到它們的血液。因此，肝動(dòng)脈化療，其中將3H-氟尿苷(3H-FUDR)(或其它一種或多種化療劑)注入到肝動(dòng)脈中，引起轉(zhuǎn)移灶中藥物濃度比正常肝組織顯著增加(15倍)。通過(guò)肝動(dòng)脈給藥的另外的藥物包括但不限于氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶-2-脫氧尿苷、雙氯乙基亞硝基脲、絲裂霉素C、順鉑、和多柔比星。
對(duì)于肝轉(zhuǎn)移灶，治療模式可以包括系統(tǒng)性化療(使用例如3H-氟尿苷)、肝內(nèi)治療、肝動(dòng)脈結(jié)扎或栓塞、化學(xué)栓塞(chemoembolization)、放療、醇注射、和冷凍手術(shù)。對(duì)于化學(xué)栓塞，可使用以下藥物方案(1)DSM和絲裂霉素C；(2)膠原蛋白、順鉑、多柔比星、和絲裂霉素C；(3)氟尿嘧啶、絲裂霉素C、乙碘油、和明膠；(4)血管抑素(或抑制新血管生成或血管生成的其它藥物)、順鉑、多柔比星、和絲裂霉素C；(5)碘化油(cipiodol)和多柔比星；(6)凝膠泡沫、多柔比星、絲裂霉素C、和順鉑；(7)多柔比星、絲裂霉素C、和碘化油；和(8)聚乙烯、醇、氟尿嘧啶、和干擾素。對(duì)于另外的治療和細(xì)節(jié)，參見(jiàn)John M.Daly等人，″Metastatic Cancer to the Liver，″inCANCERPRINCIPLES & PRACTICE OF ONCOLOGY，2551-2569(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。
對(duì)于肝轉(zhuǎn)移灶，可將任何可用的治療模式與包括本發(fā)明的免疫球蛋白的方法和組合物組合使用。
4.4.4骨轉(zhuǎn)移灶骨轉(zhuǎn)移灶的治療最好使用多模態(tài)方法學(xué)進(jìn)行。骨的一個(gè)問(wèn)題是骨折的發(fā)生和骨愈合。骨腫瘤的腫塊可以通過(guò)手術(shù)進(jìn)行并且可以包括截肢。除手術(shù)治療之外，輻射可用于骨骼轉(zhuǎn)移灶?？梢钥紤]局部外輻射、hemibody輻射、或系統(tǒng)放射性核治療用于廣泛擴(kuò)散的骨病。提倡使用親骨同位素如89Sr，因?yàn)樗鼈儽雀吣芰客凰?2P-正磷酸鹽更易耐受。對(duì)于治療骨轉(zhuǎn)移灶的另外的治療模式和細(xì)節(jié)，參見(jiàn)例如John H.Healy，″Metastatic Cancer to the Bone，″CANCERPRINCIPLES &PRACTICE OFONCOLOGY 2570-2586(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。
對(duì)于骨轉(zhuǎn)移灶，可將任何可用的治療模式與使用抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或?qū)菇Y(jié)合于α4整聯(lián)蛋白的配體(如，VCAM-1和MadCAM-1)的抗體的方法和組合物組合使用。
4.5用于改善與癌癥治療有關(guān)的狀況的聯(lián)合療法通常，使用輻射或化療的初始癌癥治療模式背后的想法是使比正常細(xì)胞增殖更快的癌細(xì)胞中毒，使得它們更易受化療和輻射的影響。然而，用輻射和化療乃至一些更新的癌癥治療模式治療患者對(duì)被治療的患者有不良副作用。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面考慮了改善由治療患者所使用的治療模式的組合產(chǎn)生的消極作用的化合物和組合物的應(yīng)用。例如，可將藥物與可能治療各副作用如但不限于惡心、嘔吐、粘膜炎和其它口腔并發(fā)癥、膀胱炎、肺毒性、心臟毒性、脫發(fā)、和性腺生成障礙的抗癌療法協(xié)同對(duì)患者給藥。雖然這些試劑中的一些可表現(xiàn)為純粹的表面作用(如，抑制脫發(fā))，研究已經(jīng)表明，對(duì)癌癥治療保持積極的態(tài)度和預(yù)防抑郁癥可有助于被治療患者的全面的治療響應(yīng)。因此，本文中討論的試劑和組合治療可以進(jìn)一步與改善這些副作用的藥物療法組合，以及與任何常規(guī)的癌癥治療模式組合。對(duì)于與改善癌癥療法副作用的方法有關(guān)的細(xì)節(jié)，通常參見(jiàn)CANCERPRINCIPLES &PRACTICE OF ONCOLOGY(Vincent T.DeVita等人，編者，第5版，1997)。
5.免疫球蛋白制劑和給藥方法本發(fā)明的一個(gè)方面考慮了抗-α4免疫球蛋白或結(jié)合于α4配體(如，VCAM-1和MadCAM-1)的免疫球蛋白的應(yīng)用。這種免疫球蛋白可為完整的抗體、抗體片段、或識(shí)別并且結(jié)合于這些多肽的重組產(chǎn)生的免疫球蛋白。
優(yōu)選上述討論的感興趣的抗體或免疫球蛋白在生理學(xué)可接受的載體中對(duì)主體給藥?？贵w可通過(guò)多種方法給藥，包括但不限于腸胃外給藥，包括皮下(s.c.)、硬膜下、靜脈內(nèi)(i.v.)、肌內(nèi)(i.m.)、鞘內(nèi)、腹膜內(nèi)(i.p.)、腦內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、或病灶內(nèi)(intralesional)的給藥途徑、局部給藥(如，手術(shù)施加或外科栓劑)、和經(jīng)肺給藥(如，氣霧劑、吸入、或粉末)和如以下進(jìn)一步描述的。優(yōu)選地，抗-α4免疫球蛋白或抗α4的配體的免疫球蛋白進(jìn)行靜脈內(nèi)或皮下給藥。
取決于引入的方式，免疫球蛋白可以多種方式配制。制劑(即，在給藥時(shí)對(duì)主體為治療有效的制劑)中治療活性的免疫球蛋白的濃度可為約0.01mg/mL到1g/mL優(yōu)選地，在對(duì)有需要的主體給藥時(shí)，免疫球蛋白組合物在給藥主體的血液中達(dá)到約10μg/mL或更高的濃度。
優(yōu)選地，免疫球蛋白配制為在適當(dāng)?shù)亩栊暂d體如無(wú)菌生理鹽水中，用于腸胃外給藥。例如，載體溶液中免疫球蛋白的濃度典型地為約1-150mg/mL。給藥劑量由給藥途徑?jīng)Q定。優(yōu)選的給藥途徑包括腸胃外、皮下、或靜脈內(nèi)給藥。
對(duì)于腸胃外給藥，本發(fā)明的免疫球蛋白可以與可藥用載體作為在生理學(xué)可接受的稀釋劑中的溶液或懸浮液的可注射劑型給藥，生理學(xué)可接受的稀釋劑可為加入或未加入表面活性劑的無(wú)菌液體如水和油類。其它可接受的稀釋劑包括動(dòng)物油、植物油、或合成來(lái)源油，例如花生油、豆油、和礦物油。通常，二醇如丙二醇或聚乙二醇(PEG)為優(yōu)選的液體載體，特別用于可注射溶液。本發(fā)明的抗體和免疫球蛋白可作為可以配制為使得允許活性成分持續(xù)釋放的儲(chǔ)庫(kù)型注射劑或植入制劑的形式給藥。優(yōu)選的組合物包括在包含50mM L-組氨酸、150mM NaCl(用HCl調(diào)節(jié)到pH 6.0)的含水緩沖液中配制的20mg/mL的單克隆抗體。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，識(shí)別并且結(jié)合于α4、α4二聚體、或與α4(或其二聚體)結(jié)合的配體的免疫球蛋白可單獨(dú)給藥，或與以上討論的用于治療和/改善腫瘤的其它藥物組合給藥。這些試劑也可在用于治療患者的醫(yī)藥制劑中使用。其它癌癥治療劑的給藥可以在給藥免疫球蛋白之前、同時(shí)、或之后進(jìn)行。本發(fā)明的免疫球蛋白的給藥可以在外科治療、放療、激素治療、免疫治療、高熱、或其它癌癥治療模式之前、過(guò)程中、或之后進(jìn)行。本發(fā)明的免疫球蛋白的給藥可以根據(jù)需要每天、每周、或每月進(jìn)行。優(yōu)選地，免疫球蛋白每周給藥，持續(xù)進(jìn)行一周或多周。
將免疫球蛋白的治療用制劑制備為凍干餅或水溶液的形式用于儲(chǔ)存，通過(guò)將具有所需純度的免疫球蛋白與非必要的生理學(xué)可接受的載體、賦形劑、防腐劑、或穩(wěn)定劑混合(REMINGTON′SPHARMACEUTICAL SCIENCES，第16版，A.Osol，Ed.，1980和最近的版本)?？山邮艿拿庖咔虻鞍纵d體、賦形劑或穩(wěn)定劑為在采用的劑量和濃度下對(duì)接受者無(wú)毒的、無(wú)治療作用和/或無(wú)免疫原性的，其包括緩沖劑如磷酸鹽、檸檬酸鹽、和其它有機(jī)酸；抗氧化劑包括抗壞血酸；低分子量(小于約10個(gè)殘基)的多肽；蛋白質(zhì)如血清白蛋白、明膠、或免疫球蛋白；親水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸、或賴氨酸；單糖、二糖、和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合劑如乙二胺四乙酸鹽(EDTA)；糖醇如甘露醇或山梨醇；成鹽的平衡離子如鈉；和/或非離子型表面活性劑如吐溫、Pluronics、或聚乙二醇(PEG)。載體分子的具體例子包括但不限于糖胺聚糖(如，硫酸肝素)、透明質(zhì)酸、硫酸角質(zhì)素、軟骨素4-硫酸鹽、軟骨素6-硫酸鹽、硫酸乙酰肝素、硫酸dermatin、基底膜聚糖、和pentopolysulfate。
如果需要，包括免疫球蛋白的藥物組合物還可以包括可藥用的、無(wú)毒的載體或稀釋劑，其為通常用于配制動(dòng)物或人給藥用藥物組合物的介質(zhì)。選擇稀釋劑使得其不影響所述組合的生物活性。其例子包括但不限于蒸餾水、生理學(xué)磷酸緩沖鹽溶液、林格溶液、葡萄糖溶液、Hank′s溶液。
本發(fā)明的藥物可以配制為注射用制劑，通過(guò)將它們?cè)谒曰蚍撬軇┲腥芙?、懸浮、或乳化制劑，非水溶劑如植物油或其它類似的油類、合成的脂肪酸甘油酯、高?jí)脂肪酸的酯或丙二醇。制劑也可包含常規(guī)的添加劑，如增溶劑、等滲劑、助懸劑、乳化劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。
免疫球蛋白也以氣霧劑形式使用，以通過(guò)吸入或經(jīng)肺遞送給藥。本發(fā)明的藥物可以配制在加壓的可接受的推進(jìn)劑如二氯二氟甲烷、丙烷、氮?dú)獾戎小?br> 免疫球蛋白也可通過(guò)例如凝聚技術(shù)或通過(guò)界面聚合(如，羥甲基纖維素或明膠微膠囊和聚甲基丙烯酸甲酯微膠囊))包封在微膠囊中、在膠態(tài)給藥系統(tǒng)(如，脂質(zhì)體、白蛋白微球、微乳劑、納米粒子和毫微囊劑)、或在粗乳劑(macroemulsion)中。這種技術(shù)在REMINGTON′SPHARMACEUTICAL SCIENCES(同上)中公開(kāi)。
用于體內(nèi)給藥的免疫球蛋白必須是無(wú)菌的。這通過(guò)在冷凍干燥和重構(gòu)之前或之后經(jīng)無(wú)菌過(guò)濾膜過(guò)濾容易地實(shí)現(xiàn)。免疫球蛋白通常以凍干形式保存或保存在溶液中。
通常將治療用免疫球蛋白組合物置于具有無(wú)菌入口的容器如靜脈內(nèi)溶液袋中、或具有可由皮下注射針頭或類似的銳利工具刺穿的塞子的小瓶中。
持續(xù)釋放制劑的適當(dāng)?shù)睦影ò鞍踪|(zhì)的固體疏水性聚合物的半滲透性基質(zhì)，該基質(zhì)為成形制品如薄膜或微膠囊的形式。持續(xù)釋放基質(zhì)的例子包括聚酯；水凝膠(如，聚(甲基丙烯酸-2-羥乙酯))，如Langer等人，J.Biomed.Mater.Res.15167-277(1981)和Langer，Chem.Tech.1298-105(1982)描述的；或聚(乙烯醇))；聚交酯(美國(guó)專利3,773,919)；L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物(Sidman等人，Biopolymers，22547-556，1983)不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯(Langer等人，同上)；可降解的乳酸-羥基乙酸共聚物如LUPRONDEPOTTM(即，由乳酸-羥基乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射微球)；和聚-D-(-)-3-羥基丁酸(EP 133,988)。
雖然聚合物如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-羥基乙酸能夠在100天內(nèi)釋放分子，某些水凝膠在較短時(shí)間內(nèi)釋放蛋白質(zhì)。當(dāng)包封的抗體長(zhǎng)時(shí)間保留在體內(nèi)時(shí)，它們可能由于在37℃暴露于潮氣下而變性或聚集，引起生物活性損失和可能的免疫原性改變?？梢愿鶕?jù)涉及的機(jī)制設(shè)計(jì)合理的策略使免疫球蛋白穩(wěn)定。例如，如果發(fā)現(xiàn)聚集機(jī)制為通過(guò)巰基-二硫化物互換的分子間S-S鍵形成，則可以通過(guò)修飾巰基殘基、從酸性溶液凍干、控制含水量、使用適當(dāng)?shù)奶砑觿?、形成具體的聚合物基質(zhì)組合物等而實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定化。
持續(xù)釋放免疫球蛋白組合物還包括脂質(zhì)體包封的免疫球蛋白。包含免疫球蛋白的脂質(zhì)體通過(guò)本身已知的方法制備。參見(jiàn)例如，Epstein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 823688-92(1985)；Hwang等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 774030-4(1980)；美國(guó)專利4,485,045；4,544,545；6,139,869；和6,027,726。通常，脂質(zhì)體為其中脂質(zhì)含量大于約30摩爾％(mol％)膽固醇的小型(約200到約800埃)的單層類型；調(diào)節(jié)選擇比用于免疫球蛋白治療。
本發(fā)明的免疫球蛋白可以持續(xù)釋放形式給藥，如可以配制為允許活性成分持續(xù)釋放的儲(chǔ)庫(kù)型注射劑、植入制劑、或滲透泵形式。用于釋放制劑的植入物為本領(lǐng)域公知的。植入物配制為具有生物可降解型或生物不可降解型聚合物的微球、小片等。例如，乳酸和/或羥基乙酸的聚合物形成宿主耐受性良好的可侵蝕型聚合物。將植入物置于例如實(shí)體瘤的附近，使得在該位置的活性劑的局部濃度相對(duì)于身體的其余位置增加。
典型的免疫球蛋白的日劑量為約1μg/kg主體體重到最多約200mg/kg主體體重，更優(yōu)選約0.01mg/kg主體體重到約150mg/kg主體體重，更優(yōu)選約0.1mg/kg主體體重到約100mg/kg主體體重，更優(yōu)選約1mg/kg主體體重到約75mg/kg主體體重(和這些數(shù)值之間的每個(gè)整數(shù)值)，取決于本文中提及的各因素。典型地，臨床醫(yī)生可給藥免疫球蛋白，直到達(dá)到獲得預(yù)期效果的劑量。這種治療的進(jìn)展可以容易地通過(guò)常規(guī)試驗(yàn)進(jìn)行監(jiān)控。
“穩(wěn)定的”免疫球蛋白、抗體、或抗體片段制劑為其中在儲(chǔ)存時(shí)其中的蛋白質(zhì)基本上保持其物理穩(wěn)定性和/或化學(xué)穩(wěn)定性和/或生物活性的制劑。本領(lǐng)域中有用于測(cè)量蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的多種分析技術(shù)并在例如Peptide and Protein Drug Delivery，247-301(Vincent Lee Ed.，MarcelDekker，Inc.，New York，N.Y.，Pubs.1991)和A.Jones，Adv.DrugDelivery Rev.1029-90(1993)中綜述。穩(wěn)定性可以在選定溫度下在選定的時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行測(cè)量。優(yōu)選地，制劑在室溫(約30℃)或40℃下在至少1個(gè)月內(nèi)是穩(wěn)定的，和/或在約-2-8℃下在至少2年內(nèi)是穩(wěn)定的。此外，制劑可在制劑的冷凍(到例如-70℃)和解凍時(shí)是穩(wěn)定的。
例如，如果根據(jù)抗原-結(jié)合試驗(yàn)確定的在給定時(shí)間內(nèi)免疫球蛋白的生物活性在藥用制劑制備時(shí)表現(xiàn)出來(lái)的生物活性的約10％(在的誤差內(nèi))內(nèi)，則藥用制劑中的免疫球蛋白“保持其生物活性”。
雖然已經(jīng)參考以下實(shí)施例詳細(xì)描述了本發(fā)明，但是應(yīng)該理解，可進(jìn)行多種修飾而不脫離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)，并且為本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地已知的。
實(shí)施例實(shí)施例1那他珠他單抗在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響為了評(píng)價(jià)那他珠他單抗誘導(dǎo)或抑制可能引起腫瘤形成的轉(zhuǎn)化細(xì)胞和克隆擴(kuò)張的潛力，進(jìn)行各實(shí)驗(yàn)以測(cè)定那他珠他單抗在體外刺激表達(dá)受體的惡性細(xì)胞生長(zhǎng)的能力，并且各研究在動(dòng)物腫瘤模型中進(jìn)行。
使用3H-胸苷結(jié)合試驗(yàn)評(píng)價(jià)對(duì)腫瘤細(xì)胞系增殖的陽(yáng)性或陰性結(jié)果。使用腫瘤異種移植體裸鼠/SCID小鼠模型評(píng)價(jià)人腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和/或轉(zhuǎn)移的抑制或促進(jìn)。篩選三十二個(gè)腫瘤細(xì)胞系。在三十二個(gè)腫瘤細(xì)胞系中，十二個(gè)為結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸腺癌、結(jié)腸腺癌、或結(jié)腸癌細(xì)胞系；七個(gè)是黑素瘤或無(wú)黑色素性黑素瘤；六個(gè)是膀胱轉(zhuǎn)移細(xì)胞癌或膀胱癌；三個(gè)是白血?。粌蓚€(gè)是淋巴瘤；兩個(gè)是前列腺癌。
進(jìn)行免疫組織化學(xué)法(IHC)和熒光活化細(xì)胞分選法(FACS)以測(cè)試α4表達(dá)。通過(guò)IHC評(píng)價(jià)二十六個(gè)細(xì)胞系中的五個(gè)呈陽(yáng)性。通過(guò)免疫組織化學(xué)法(IHC)認(rèn)為是陰性的或可疑的二十一個(gè)細(xì)胞系中的四個(gè)通過(guò)FACS分析呈強(qiáng)陽(yáng)性(＞85％)。由IHC分析為陰性的或可疑的兩個(gè)細(xì)胞系通過(guò)FACS分析呈弱到中等陽(yáng)性(22.5和77.6％)。六個(gè)細(xì)胞系沒(méi)有通過(guò)IHC評(píng)價(jià)。只有一個(gè)細(xì)胞系通過(guò)FACS分析(68.4％)呈中等陽(yáng)性。
還進(jìn)行了VCAM-1結(jié)合的粘合試驗(yàn)。評(píng)價(jià)的十一個(gè)細(xì)胞系中有七個(gè)呈陽(yáng)性。在初步細(xì)胞增殖試驗(yàn)中，評(píng)價(jià)的九個(gè)細(xì)胞系全部都沒(méi)有細(xì)胞毒或增生作用。將AS283、HT-29、MOLT-4、和UM-UC-3細(xì)胞系用Tysabri(那他珠他單抗)治療。測(cè)量氚化胸腺嘧啶攝取。在暴露于八個(gè)不同濃度(0.001-100mg/mL)下的第1、2、3、4和5天，沒(méi)有觀察到細(xì)胞毒或增生作用的證據(jù)。
實(shí)施例2那他珠他單抗對(duì)SCID小鼠皮下植入的人MOLT-4異種移植物的作用該研究的目的是測(cè)定用那他珠他單抗治療在雌性SCID小鼠皮下植入的人MOLT-4急性淋巴母細(xì)胞性白血病異種移植物的生長(zhǎng)的作用。
材料和方法活體(In-life)實(shí)驗(yàn)工作從第0天開(kāi)始，并且在第80天終止。從Taconic Farms，Inc.(Germantown，NY)購(gòu)得五到六周大的雌性SCID小鼠并且在實(shí)驗(yàn)之前在實(shí)驗(yàn)室中適應(yīng)一周。將動(dòng)物圈養(yǎng)在micro-isolator籠中沒(méi)有病原體的屏蔽設(shè)施中，每籠五只動(dòng)物，處在12-小時(shí)照明/黑暗循環(huán)下。動(dòng)物接受經(jīng)過(guò)濾的伯明翰城市用水和無(wú)菌的嚙齒動(dòng)物食品。對(duì)小鼠喂食可滅菌的嚙齒動(dòng)物餐(Harlan-Teklad TD8656)。鼠籠每周更換兩次。每天觀察動(dòng)物并且記錄臨床征象。
使用12號(hào)套管針針頭將MOLT-4人白血病的三十到四十毫克片段植入在小鼠的接近右腹側(cè)區(qū)域(right auxillary area)內(nèi)并允許其生長(zhǎng)。腫瘤片段植入的當(dāng)天標(biāo)為實(shí)驗(yàn)的第0天。允許腫瘤達(dá)到75-114mg重量(75-144mm3大小)，然后開(kāi)始治療。為足夠數(shù)目的小鼠植入，使得在開(kāi)始治療時(shí)(腫瘤植入之后的第14天)選擇盡可能窄的重量范圍用于試驗(yàn)。將選擇的具有適當(dāng)尺寸范圍的動(dòng)物隨機(jī)分為試驗(yàn)組。治療第一天的平均腫瘤重量為84或96mg；在第14天的中值腫瘤重量為75或88mg。
在腫瘤片段植入的當(dāng)天收獲一個(gè)供體腫瘤并將其切成兩半。將腫瘤的一半在O.C.T.化合物中冷凍，腫瘤的另一半在10％經(jīng)緩沖的福爾馬林中固定。冷凍的和用福爾馬林固定的半份腫瘤都運(yùn)送到BiogenIdec Inc.進(jìn)行分析。將用于小鼠植入的每個(gè)供體腫瘤的一個(gè)片段置于具有乙醇酸鹽培養(yǎng)基的試管中并在+37℃培養(yǎng)24小時(shí)。
從Biogen Idec Inc.得到那他珠他單抗(20mg/mL溶液，GensiaSicor Pharmaceuticals Inc.，批號(hào)F23014和G23004)和稀釋液(Placebofor Tysabri，Gensia Sicor Pharmaceuticals Inc.，批號(hào)F85002)并在收到時(shí)在+2-8℃儲(chǔ)存。具有0.97mg/mL人免疫球蛋白(IgG4)溶液的小瓶由Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，批號(hào)122K9159)提供，并且在收到時(shí)在-84℃儲(chǔ)存。購(gòu)買Taxol(紫杉醇(placlitael))的臨床制劑(6.0mg/mL，在50％cremophor-EL/50％乙醇中，Bristol-MyersSquibb Company，Princeton，NJ；批號(hào)2L57296)并在收到時(shí)冷藏。鹽水(0.9％鹽水溶液，只用于動(dòng)物)購(gòu)自Phoenix Pharmaceutical，Inc.(St.Joseph，MO，批號(hào)262053F、206205F、208281F)并在室溫下儲(chǔ)存。一瓶新的鹽水只用于每一天的制劑。
在第14天，將20mg/mL的那他珠他單抗溶液用Tysabri用安慰劑稀釋到1.0mg/mL。在隨后的注射日，通過(guò)用Tysabri用安慰劑稀釋20mg/mL原液配制0.5mg/mL的那他珠他單抗溶液。注意不要搖動(dòng)裝有那他珠他單抗的小瓶，將小瓶反轉(zhuǎn)進(jìn)行混合。每天的制劑使用新的那他珠他單抗和Tysabri用安慰劑的小瓶。在第14天，將提供的0.97mg/mL的IgG4原液解凍并注射到小鼠中。在隨后的注射日，通過(guò)用0.9％鹽水溶液稀釋0.97mg/mL原液配制0.5mg/mL的IgG4溶液。每天的制劑使用新的IgG4小瓶。在每個(gè)注射日，用0.9％鹽水溶液稀釋市售的配制好的Taxol在50％ cremophor-EL/50％乙醇中的6mg/mL溶液等分試樣以制備在12.5％cremophor-EL/12.5％乙醇/75％鹽水中的1.5mg/mL溶液。所有的給用溶液在配制的2到3小時(shí)內(nèi)注射。
在第14、17、24、31、38、和45天，在制劑配制完之后，立即從給用瓶抽出第1組(鹽水)和第2組(那他珠他單抗)的給用溶液的兩個(gè)1mL等分試樣。將那他珠他單抗和鹽水的每個(gè)1mL等分試樣分配在標(biāo)有研究名稱、組號(hào)、化合物名稱、劑量、給藥途徑、注射量、研究日、和單詞“Prep.Lab.”的小瓶中，并將小瓶立即冷藏。在每個(gè)組開(kāi)始注射之前，將鹽水和那他珠他單抗的相同劑量溶液的另外兩個(gè)1mL等分試樣抽取到每組兩個(gè)注射器中(1mL/注射器)，并使注射器在對(duì)組中所有二十只動(dòng)物劑量給藥過(guò)程中處在室溫下。在處理完成之后，將每個(gè)注射器的內(nèi)容物分配在標(biāo)有研究編號(hào)、組號(hào)、化合物名稱、劑量、給藥途徑、注射量、研究日、和單詞“Animal Lab”的小瓶中，并將小瓶立即冷藏。在實(shí)驗(yàn)完成之后，將這些等分試樣運(yùn)輸?shù)紺ovanceLaboratories，Inc.進(jìn)行分析。
藥物治療將動(dòng)物隨機(jī)地分成六個(gè)組(每組20只動(dòng)物)，和一個(gè)組(30只動(dòng)物)。將兩個(gè)組(第1和5組)用0.9％鹽水溶液(鹽水)處理。第2、6、和7組的動(dòng)物用那他珠他單抗處理。第3組的動(dòng)物用IgG4處理(同型對(duì)照)。第4組的動(dòng)物用Taxol處理(陽(yáng)性對(duì)照)。用鹽水、那他珠他單抗、和IgG4處理(第1、2、3、5、和6組)在第14、17、21、24、28、31、35、38、42、和45天(Q3D×2，進(jìn)行五周，星期五-星期一時(shí)間表)IP給藥。在第7組(30只小鼠的組)用那他珠他單抗處理在第14、17、21、24、28、31、35、和38天給藥(Q3D×2，四周)。在第14天，那他珠他單抗以10mg/kg的劑量給藥，隨后進(jìn)一步用5mg/kg/劑量的劑量處理。在第14天，IgG4以9.7mg/kg的劑量給藥，隨后進(jìn)一步用5mg/kg/劑量的劑量處理。Taxol從第14天開(kāi)始以15mg/kg/劑量的劑量靜脈內(nèi)(IV)給藥，一天一次，連續(xù)進(jìn)行5天(Q1D×5)。所有的試驗(yàn)化合物根據(jù)確切的個(gè)體動(dòng)物體重在處理日以0.1mL/10g體重的介質(zhì)量給藥。
在第14天開(kāi)始的給藥處理的每天都將動(dòng)物稱重并且測(cè)量皮下的(SC)腫瘤，除了有兩次測(cè)量是在注射的一天之前(第24和41天)進(jìn)行之外。在處理完成之后，每周兩次收集腫瘤和體重?cái)?shù)據(jù)。通過(guò)卡尺測(cè)量(mm)和橢球球體公式L×W2/2＝mm3測(cè)定腫瘤體積，其中L和W是指在每次測(cè)量時(shí)收集的較大和較小的垂直尺寸。這個(gè)公式還用于計(jì)算腫瘤重量，假定單位密度(1mm3＝1mg)。
在處理過(guò)程中收集第7組動(dòng)物的血液。動(dòng)物編號(hào)1-5在第14天注射之后的8小時(shí)采血。五只動(dòng)物在第21天(動(dòng)物編號(hào)6-10)、第28天(動(dòng)物編號(hào)11-15)、第35天(動(dòng)物編號(hào)16-20)、和第38天(動(dòng)物編號(hào)21-25)的注射之前采血。動(dòng)物編號(hào)26-30在第38天的注射8小時(shí)之后采血。在CO2/O2麻醉下通過(guò)眼窩后穿刺收集血液。使用無(wú)涂層的毛細(xì)管對(duì)動(dòng)物采血血液的最大量(末端流血)并允許血液在室溫下凝結(jié)30分鐘，從每個(gè)采血時(shí)間點(diǎn)的最后一只動(dòng)物開(kāi)始。然后將血樣在+4℃下以10,000rpm離心10分鐘，分離血清并在干冰上冷凍。所有的血清樣品儲(chǔ)存在-84℃，直至運(yùn)輸?shù)紹iogen Idec進(jìn)行分析。
在第28天(第5組的中值腫瘤重量達(dá)到466mg一天后)將第5和6組的動(dòng)物的原發(fā)腫瘤通過(guò)手術(shù)切除。麻醉劑的給藥和手術(shù)/術(shù)后恢復(fù)過(guò)程根據(jù)批準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室方法進(jìn)行。簡(jiǎn)要地，將每只動(dòng)物麻醉并用抗菌溶液準(zhǔn)備切口位置。產(chǎn)生沿腫瘤一側(cè)外周的切口(至多比腫瘤直徑長(zhǎng)3-4mm)，將皮膚翻過(guò)來(lái)并將腫瘤通過(guò)切口翻轉(zhuǎn)。將腫瘤從皮膚和肌肉剖開(kāi)。用4.0mm創(chuàng)緣夾將切口關(guān)閉。將每個(gè)切除的腫瘤切成兩半，一半腫瘤在O.C.T.化合物中冷凍，另一半腫瘤保存在10％緩沖的福爾馬林中。每周兩次對(duì)切除位置監(jiān)控腫瘤再生長(zhǎng)，并且在形成新的實(shí)體瘤時(shí)記錄其尺寸。
第1-4組的動(dòng)物編號(hào)1-10在腫瘤植入之后的第47天(2003年5月16日)無(wú)痛處死；第1-4組的動(dòng)物編號(hào)11-20在腫瘤植入之后的第48天(2003年5月17日)無(wú)痛處死。第5和6組的所有生存動(dòng)物(除了第5組的動(dòng)物編號(hào)12和第6組的動(dòng)物編號(hào)8之外，參見(jiàn)以下說(shuō)明)在腫瘤植入之后的第80天(2003年5月19日)無(wú)痛處死。第5組的動(dòng)物編號(hào)12由于過(guò)大的腫瘤重量(＞4,000mg)而在第73天處死。第6組的動(dòng)物編號(hào)8由于腫瘤潰瘍而在第73天處死。第7組的五只動(dòng)物在第14、21、28、35天無(wú)痛處死，十只動(dòng)物在第38天無(wú)痛處死。將在第47、48、和80天存活的所有動(dòng)物的尸體提交到the Safety AssessmentDepartment of Southern Research Institute進(jìn)行尸檢，隨后進(jìn)行全面的組織病理學(xué)評(píng)價(jià)。第7組的動(dòng)物沒(méi)有進(jìn)行尸檢和全面的組織病理學(xué)評(píng)價(jià)。對(duì)于第1-6組的動(dòng)物，在第0天進(jìn)行腫瘤植入(皮下)。在第14天開(kāi)始處理，并在第45天停止處理。在第5和6組中，在植入后的第28天進(jìn)行原發(fā)腫瘤切除。動(dòng)物在第80天處死。未切除組的動(dòng)物在第47-48天處死。
表1

對(duì)于第7-10組的動(dòng)物，在第0天進(jìn)行腫瘤植入(皮下)。在第-7天開(kāi)始處理，并在第45天停止處理。動(dòng)物在第46-47天處死。
表2

對(duì)于第11組的動(dòng)物，腫瘤植入(皮下)在第0天進(jìn)行。在第14天開(kāi)始處理，并在第45天停止處理。在第1、7、14、21、24、24天處死每組五只動(dòng)物。這個(gè)組用于檢驗(yàn)?zāi)撬樗麊慰沟难逅健?br> 表2

在規(guī)定的研究日開(kāi)始以10mg/kg的負(fù)荷劑量進(jìn)行那他珠他單抗給藥。隨后的劑量每周兩次給藥(即，每3-4天)。根據(jù)單一劑量之后的藥代動(dòng)力學(xué)模型、和驗(yàn)證性多劑量藥代動(dòng)力學(xué)研究中的谷血清濃度選擇劑量水平。選擇劑量水平用于在多劑量給藥時(shí)提供20ml/mL的最低血清濃度。
在建立MOLT-4腫瘤之后的那他珠他單抗處理在切除組中引起腫瘤生長(zhǎng)緩慢，并且切除組中的一些動(dòng)物在處理后沒(méi)再有腫瘤。在MOLT-4腫瘤植入之前開(kāi)始的那他珠他單抗處理引起腫瘤生長(zhǎng)的顯著減少。那他珠他單抗處理不會(huì)不利地影響動(dòng)物的健康狀態(tài)，如在處理過(guò)程中體重增加所證明的。
測(cè)定非特異性死亡的數(shù)目、部分和全面腫瘤退化的數(shù)目、沒(méi)再有腫瘤的幸存者數(shù)目、和個(gè)體動(dòng)物達(dá)到評(píng)價(jià)尺寸的時(shí)間(達(dá)到四個(gè)腫瘤塊加倍的時(shí)間)。個(gè)體動(dòng)物達(dá)到四個(gè)腫瘤塊加倍的時(shí)間用于計(jì)算中值腫瘤生長(zhǎng)的總時(shí)延(T-C)。在所有的計(jì)算中，第1組(鹽水處理的動(dòng)物)用作對(duì)照組(C)。在數(shù)據(jù)收集的每天從每個(gè)組計(jì)算中值腫瘤重量、平均腫瘤重量和標(biāo)準(zhǔn)偏差、和試驗(yàn)組(T)的中值和平均腫瘤重量與對(duì)照組(C)的中值和平均腫瘤重量的比較(分別為，MEDIAN T/C＝中值T/中值C×100％，平均T/C＝平均T/平均C×100％)(數(shù)值在表8-2到8-8中表示)。在數(shù)據(jù)收集的每天從每個(gè)組計(jì)算平均體重和標(biāo)準(zhǔn)偏差(數(shù)值在表8-9到8-15中表示)。
在第47天收獲第1、2、3、和4組的動(dòng)物編號(hào)1-10的腫瘤。在第48天收獲第1、2、3、和4組的動(dòng)物編號(hào)11-20的腫瘤。第5和6組的動(dòng)物編號(hào)1-20的原發(fā)腫瘤在第28天通過(guò)手術(shù)切除。在第80天收獲第5和6組中所有生存的動(dòng)物的繼發(fā)瘤(在原發(fā)腫瘤的位置再生長(zhǎng)的)。第6組的動(dòng)物編號(hào)1和15在第80天的尸檢時(shí)沒(méi)有繼發(fā)瘤。(第5組的動(dòng)物編號(hào)4和第6組的動(dòng)物編號(hào)3在手術(shù)后恢復(fù)過(guò)程中在第28天死亡，因此沒(méi)有繼發(fā)瘤。在第47天發(fā)現(xiàn)死亡的第5組的動(dòng)物編號(hào)19進(jìn)行死后尸檢。第5組的動(dòng)物編號(hào)12由于過(guò)大的腫瘤重量(4224mg)而被從實(shí)驗(yàn)中排除。第6組的動(dòng)物編號(hào)8由于腫瘤潰瘍而被從實(shí)驗(yàn)排除。第5組的動(dòng)物編號(hào)10、17、和20在第73天發(fā)現(xiàn)死亡，由于顯著的自溶而沒(méi)有進(jìn)行尸檢。)將稱重超過(guò)100mg的每個(gè)腫瘤切成兩半，每個(gè)腫瘤的一半使用干冰/乙醇冰凌在O.C.T.化合物中冷凍并且儲(chǔ)存在-84℃下。稱重小于100mg的腫瘤(第4組中動(dòng)物編號(hào)1、3、7、9、11、12、14-18、和20的腫瘤)全部在O.C.T.中冷凍。稱重小于100mg的第4組的動(dòng)物編號(hào)2、4、5、6、8、13、和19的腫瘤全部保存在10％緩沖的福爾馬林中。在實(shí)驗(yàn)完成之后，將在O.C.T.化合物中冷凍的所有腫瘤樣品(總共145個(gè)腫瘤)運(yùn)輸?shù)絊ierra Biomedical，Division of Charles RiverLaboratories，通過(guò)免疫組織化學(xué)檢查以驗(yàn)證MOLT-4在體內(nèi)表達(dá)VLA-4，因此是用于這項(xiàng)研究的有效的腫瘤模型。
使用市售的抗-CD49d抗體和得自各個(gè)試驗(yàn)組的動(dòng)物子集的MOLT-4腫瘤的冷凍部分進(jìn)行免疫組織化學(xué)。將每個(gè)腫瘤的第二半，如果存在，在10％緩沖的福爾馬林中固定并送交Safety AssessmentDepartment Southern Research Institute進(jìn)行組織病理學(xué)評(píng)價(jià)。
數(shù)據(jù)分析收集個(gè)體的腫瘤測(cè)量和體重并使用Southern Research Institute開(kāi)發(fā)的軟件ADAS(Automated Data Acquisition System)進(jìn)行處理。然后將數(shù)據(jù)輸出到MS Excel中用于報(bào)告。使用SigmaPlotTM圖解表示原始數(shù)據(jù)。使用終止前最后一次測(cè)量當(dāng)天(第1-4組為第47天，第5和6組為第80天)的個(gè)體動(dòng)物的腫瘤重量作為端點(diǎn)，以便統(tǒng)計(jì)學(xué)比較組間的生長(zhǎng)數(shù)據(jù)。
使用SigmaStatTM軟件進(jìn)行學(xué)生t檢驗(yàn)。當(dāng)數(shù)據(jù)集沒(méi)有通過(guò)常態(tài)或等方差檢驗(yàn)(equal variance test)時(shí)，使用Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)代替t檢驗(yàn)。為這個(gè)報(bào)告附上統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果的復(fù)本。
劑量溶液分析兩個(gè)劑量溶液(MP-21520和MP-21522)或多或少地超過(guò)目標(biāo)濃度±15％，分別為+16％和+19％偏差。這些差別歸于存在于鹽水劑量溶液和稀釋液中0.01-0.04單位的280nm吸光度。這種吸光度歸于鹽水可在樣品容器塞子中萃取。
SC MOLT-4白血病異種移植的生長(zhǎng)在其中在腫瘤片段植入日放置腫瘤片段并且在+37℃培養(yǎng)24小時(shí)的具有硫基乙酸鹽培養(yǎng)基的任何試管中都沒(méi)有觀察到生長(zhǎng)。在對(duì)照、鹽水處理組(第1組)中有95％腫瘤異種移植獲得比例，在二十個(gè)中只有一個(gè)異種移植沒(méi)能生長(zhǎng)(未獲得)。沒(méi)有獲得腫瘤的第1組的動(dòng)物編號(hào)20被從所有的計(jì)算排除。腫瘤生長(zhǎng)和鹽水的給藥得到耐受，沒(méi)有體重?fù)p失。中值腫瘤重量在第47天達(dá)到1764mg并且在30.2天實(shí)現(xiàn)四個(gè)腫瘤塊加倍。
第5組中所有的二十只用鹽水處理的動(dòng)物的腫瘤在植入之后逐漸生長(zhǎng)。在第28天通過(guò)手術(shù)切除腫瘤。在手術(shù)后恢復(fù)過(guò)程中有一只動(dòng)物死亡(動(dòng)物編號(hào)4)。在手術(shù)之后動(dòng)物體重立即減輕(最大的平均體重?fù)p失為2g[10％])但是后來(lái)體重再增加并且繼續(xù)生長(zhǎng)。觀察到的體重可以歸于麻醉劑的給藥以及切除的腫瘤的重量的凈損失。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中有四只動(dòng)物死亡動(dòng)物編號(hào)19在第47天死亡；動(dòng)物編號(hào)10、17、和20在第73天死亡。在切除之后，所有動(dòng)物的腫瘤在原發(fā)腫瘤的位置再生長(zhǎng)。中值腫瘤重量在第80天達(dá)到2363mg，中值腫瘤在第60.9天達(dá)到四個(gè)腫瘤塊加倍。
那他珠他單抗的作用那他珠他單抗的給藥(第2組)得到很好的耐受，沒(méi)有死亡，在處理的第一周過(guò)程中產(chǎn)生1g(5％)的體重波動(dòng)。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所有的二十個(gè)腫瘤都生長(zhǎng)。中值腫瘤重量在第47天達(dá)到1240mg，中值腫瘤在第33.5天達(dá)到四個(gè)腫瘤塊加倍。對(duì)在第47天的對(duì)照、鹽水處理組(第1組)和那他珠他單抗處理組(第2組)的個(gè)體腫瘤重量的比較顯示，與鹽水處理組的腫瘤重量相比較，那他珠他單抗處理組的腫瘤重量沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＝0.1032，Mann-Whitney秩和檢驗(yàn))，表明兩個(gè)組的腫瘤以類似的速率生長(zhǎng)。
第6組中所有的二十只用那他珠他單抗處理的動(dòng)物的腫瘤在植入之后逐漸生長(zhǎng)。在第28天通過(guò)手術(shù)切除腫瘤。在手術(shù)后恢復(fù)過(guò)程中有一只動(dòng)物死亡(動(dòng)物編號(hào)3)。動(dòng)物在腫瘤切除手術(shù)之后立即經(jīng)歷最小的體重?fù)p失(最大平均體重?fù)p失1g[5％])，但是隨后繼續(xù)增加體重。在切除之后，十九只動(dòng)物中有十七只的腫瘤在原發(fā)腫瘤的位置再生長(zhǎng)，兩只動(dòng)物在研究終止的當(dāng)天(第80天)保持沒(méi)有再發(fā)生腫瘤。在第80天，中值腫瘤重量達(dá)到1006mg，中值腫瘤沒(méi)有達(dá)到四個(gè)腫瘤塊加倍(＞66.0天)。對(duì)鹽水處理組(第5組)和那他珠他單抗處理組(第6組)的個(gè)體動(dòng)物體重的比較顯示，那他珠他單抗處理組的腫瘤生長(zhǎng)統(tǒng)計(jì)上不同于鹽水處理組中的腫瘤生長(zhǎng)(P＝0.0189，t檢驗(yàn))，表明那他珠他單抗處理的腫瘤的再成長(zhǎng)速率比鹽水處理組的腫瘤更慢。在第7組中所有的三十只那他珠他單抗處理的動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)。由于定期從研究除去動(dòng)物用于終端血液收集，沒(méi)有評(píng)價(jià)腫瘤的生長(zhǎng)。
IgG4的作用IgG4的給藥(第3組)得到良好的耐受，沒(méi)有死亡或體重?fù)p失。在實(shí)驗(yàn)的結(jié)束時(shí)所有的二十只動(dòng)物都有腫瘤。中值腫瘤重量在第47天達(dá)到1731mg，中值腫瘤在第31.7天達(dá)到四個(gè)腫瘤塊加倍。對(duì)在第47天的對(duì)照、鹽水處理組和IgG4處理組的個(gè)體腫瘤重量的比較顯示，與對(duì)照組的腫瘤重量相比較，IgG4處理組的腫瘤重量沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＝0.8004，Mann-Whitney秩和檢驗(yàn))，表明兩個(gè)組的腫瘤以類似的速率生長(zhǎng)。
Taxol的作用Taxol的給藥(第4組)得到良好的耐受，沒(méi)有死亡或持續(xù)的體重?fù)p失。在處理結(jié)束之后(第17和21天)觀察到5％(1g)的平均最大體重?fù)p失，這是預(yù)期的，因?yàn)門axol作為胞毒劑以接近最大允許劑量給藥。Taxol處理非常有效地抑制MOLT-4腫瘤異種移植生長(zhǎng)。二十只動(dòng)物中的十二只在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)沒(méi)有可測(cè)量的腫瘤，在八只具有可測(cè)量腫瘤的動(dòng)物中只有三只在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中腫瘤加倍一次。Taxol處理的腫瘤的生長(zhǎng)統(tǒng)計(jì)上不同于介質(zhì)處理的、對(duì)照組中的腫瘤生長(zhǎng)(p＜0.0001，Mann-Whitney秩和檢驗(yàn))，表明Taxol處理抑制腫瘤生長(zhǎng)。
對(duì)組織病理學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果的總結(jié)總起來(lái)說(shuō)，在不同的處理組中隨機(jī)地觀察到涉及子宮、卵巢、淋巴結(jié)、肺、肝、和脾增大的肉眼損害，但是沒(méi)有一個(gè)研究結(jié)果被認(rèn)為是處理相關(guān)的。在來(lái)自不同試驗(yàn)組的小鼠隨機(jī)地發(fā)生的微觀的病灶包括脾和肝中的骨髓外造血、肝中的局灶性壞死和炎癥、腸系膜中的炎癥、和心的心外膜的礦化。所這些改變被認(rèn)為是偶然的或自發(fā)的，與所有試驗(yàn)制品的給藥無(wú)關(guān)。異種移植生長(zhǎng)的增強(qiáng)在任何試驗(yàn)組中都不明顯。在來(lái)自第5和6組的四只小鼠的腹部(腹股溝)皮膚中發(fā)現(xiàn)異種移植生長(zhǎng)的擴(kuò)散。在第5組的小鼠的區(qū)域淋巴結(jié)(腋窩、腹股溝、髂骨、下頜骨、和縱隔)中和第6組小鼠的腹股溝淋巴結(jié)中觀察到異種移植的轉(zhuǎn)移或擴(kuò)散。在第5和6組中各觀察到一只小鼠的胸腺轉(zhuǎn)移灶。沒(méi)有證據(jù)表明繼發(fā)性人急性淋巴母細(xì)胞性白血病的生長(zhǎng)或轉(zhuǎn)移的惡化是由于用那他珠他單抗處理的結(jié)果。
對(duì)腫瘤的免疫組織學(xué)分析的總結(jié)通過(guò)免疫組織化學(xué)檢查腫瘤部分以驗(yàn)證MOLT-4在體內(nèi)表達(dá)VLA-4，并且因此是用于這項(xiàng)研究的有效的腫瘤模型。使用市售的抗-CD49d抗體和得自各個(gè)試驗(yàn)組的動(dòng)物子集的MOLT-4腫瘤的冷凍部分進(jìn)行免疫組織化學(xué)。MOLT-4細(xì)胞的CD49d-特異性免疫正性的特征在于穩(wěn)固的、顆粒狀到小束狀、擴(kuò)散細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞表面染色。擴(kuò)散細(xì)胞質(zhì)染色顯示，胞質(zhì)內(nèi)的、以及細(xì)胞表面CD49d結(jié)合于抗-CD49d抗體。得自鹽水對(duì)照組和IgG4對(duì)照組的動(dòng)物的腫瘤部分具有穩(wěn)固的染色，并且被給予3到4的免疫組織化學(xué)染色評(píng)分(分別為“集束的細(xì)胞、密集的分布(Clustered，closely spaced)”到“稠密地堆積的細(xì)胞(Denselypacked cells)”)。在尸檢之前經(jīng)過(guò)延長(zhǎng)的未處理時(shí)間的得自那他珠他單抗處理組的動(dòng)物(第6組)的腫瘤部分還具有穩(wěn)固的染色并且被給予3到4的免疫組織化學(xué)染色評(píng)分。在用那他珠他單抗處理并且在處理結(jié)束時(shí)處死的動(dòng)物中，CD49d的免疫組織化學(xué)染色大大減少為不存在的并且腫瘤部分被給予0到2的免疫組織化學(xué)評(píng)分(分別為“沒(méi)標(biāo)記的細(xì)胞(No labeled cells)”到“散布的單獨(dú)的細(xì)胞，密集的分布(Scattered individual cells，closely spaced)”)。用腫瘤溶解藥物Taxol處理的小鼠經(jīng)常在處理之后沒(méi)有充分的參與腫瘤塊用于評(píng)價(jià)免疫組織化學(xué)染色。這些數(shù)據(jù)證實(shí)，MOLT-4人白血病細(xì)胞系在這些研究的實(shí)驗(yàn)條件下確實(shí)在體內(nèi)表達(dá)CD49d。
結(jié)論
SC植入的MOLT-4人急性淋巴母細(xì)胞性白血病異種移植的生長(zhǎng)沒(méi)有被給藥那他珠他單抗抑制。然而，實(shí)體瘤在原發(fā)腫瘤切除位置的再生長(zhǎng)受到給藥那他珠他單抗的抑制。給藥IgG4對(duì)于異種移植的生長(zhǎng)沒(méi)有影響。用Taxol處理抑制原發(fā)腫瘤生長(zhǎng)，產(chǎn)生在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)在二十只動(dòng)物中有十二只沒(méi)有可測(cè)量的腫瘤。動(dòng)物的組織病理學(xué)評(píng)價(jià)顯示，沒(méi)有證據(jù)表明人急性淋巴母細(xì)胞性白血病的生長(zhǎng)或轉(zhuǎn)移的惡化是由于用那他珠他單抗或IgG4處理的結(jié)果。在所有的試驗(yàn)組只發(fā)生隨機(jī)分布模式的多種肉眼可見(jiàn)的和微觀的病灶。然而，所有的病灶結(jié)果被認(rèn)為是自發(fā)的或偶然的，與用鹽水、那他珠他單抗、IgG4或Taxol處理無(wú)關(guān)。
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權(quán)利要求
1.抑制腫瘤生長(zhǎng)和/或轉(zhuǎn)移性進(jìn)展和/或轉(zhuǎn)移灶發(fā)展的方法，所述方法包括對(duì)有需要的主體給藥足以抑制腫瘤生長(zhǎng)和/或轉(zhuǎn)移的量的抗-α4免疫球蛋白。
2.權(quán)利要求1的方法，其中抗-α4抗體結(jié)合于α4β1整聯(lián)蛋白和/或α4β7整聯(lián)蛋白。
3.權(quán)利要求1的方法，其中抗-α4免疫球蛋白為那他珠他單抗。
4.權(quán)利要求1的方法，其中腫瘤為黑素瘤、前列腺癌、白血病、或淋巴瘤。
5.權(quán)利要求4的方法，其中黑素瘤為皮膚黑素瘤、轉(zhuǎn)移性黑素瘤、或眼內(nèi)黑素瘤。
6.權(quán)利要求4的方法，其中淋巴瘤為非何杰金氏淋巴瘤、皮膚T細(xì)胞淋巴瘤、或何杰金氏病。
7.權(quán)利要求4的方法，其中白血病為慢性髓性白血病、急性髓性白血病、成年急性淋巴母細(xì)胞性白血病、成熟B細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、幼淋巴細(xì)胞白血病、或毛細(xì)胞白血病。
8.權(quán)利要求3的方法，其中對(duì)主體給藥約1mg/kg主體體重到約100mg/kg主體體重的量的那他珠他單抗。
9.權(quán)利要求8的方法，其中對(duì)主體給藥約1mg/kg主體體重到約10mg/kg主體體重的量的那他珠他單抗。
10.權(quán)利要求8的方法，其中那他珠他單抗以約1mg/kg主體體重到約20mg/kg主體體重的量給藥。
11.權(quán)利要求4的方法，其中腫瘤為黑素瘤，并且主體在手術(shù)切除黑素瘤之后給藥那他珠他單抗。
12.權(quán)利要求4的方法，其中腫瘤為黑素瘤并且主體另外經(jīng)歷手術(shù)、隔離肢體灌注、區(qū)域性化療輸注、系統(tǒng)性化療、或使用第二抗體或抗血清的免疫治療從而治療黑素瘤。
13.權(quán)利要求12的方法，其中第二抗體為抗-GM2神經(jīng)節(jié)苷脂抗體、抗-GD2神經(jīng)節(jié)苷脂抗體、或抗-GD3神經(jīng)節(jié)苷脂抗體。
14.權(quán)利要求12的方法，其中區(qū)域性化療輸注或系統(tǒng)性化療包括選自以下的至少一種化療劑達(dá)卡巴嗪、卡莫司汀、洛莫司汀、牛磺莫司汀、福莫司汀、司莫司汀、順鉑、卡鉑、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春地辛、紫杉醇、二溴衛(wèi)矛醇、地托比星、吡曲克辛、和干擾素。
15.權(quán)利要求14的方法，其中干擾素為干擾素-α2。
16.權(quán)利要求1的方法，其中轉(zhuǎn)移灶為轉(zhuǎn)移到腦、肺、肝、或骨骼的轉(zhuǎn)移灶。
17.權(quán)利要求16的方法，其中轉(zhuǎn)移灶為轉(zhuǎn)移到肺的轉(zhuǎn)移灶，并且腫瘤為黑素瘤。
18.權(quán)利要求1的方法，其中腫瘤為淋巴瘤并且主體另外用一種或多種化療劑和/或放療進(jìn)行治療。
19.用于抑制腫瘤生長(zhǎng)和/或轉(zhuǎn)移性進(jìn)展和/或轉(zhuǎn)移灶發(fā)展的聯(lián)合療法，包括給予抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或抗α4整聯(lián)蛋白配體的免疫球蛋白，和化療、免疫治療、和/或放療。
20.權(quán)利要求19的聯(lián)合療法，其中抗-α4免疫球蛋白為抗-α4β1整聯(lián)蛋白抗體或抗-α4β7整聯(lián)蛋白抗體。
21.權(quán)利要求20的聯(lián)合療法，其中抗-α4免疫球蛋白為那他珠他單抗。
22.權(quán)利要求20的聯(lián)合療法，其中抗-α4免疫球蛋白通過(guò)靜脈內(nèi)、鞘內(nèi)、或皮下對(duì)有需要的主體給藥。
23.權(quán)利要求20的聯(lián)合療法，其中抗-α4免疫球蛋白為那他珠他單抗，并且以約1mg/kg主體體重到約100mg/kg主體體重的量給藥。
24.權(quán)利要求23的聯(lián)合療法，其中那他珠他單抗以約10mg/kg主體體重到約30mg/kg主體體重的量給藥。
25.權(quán)利要求20的聯(lián)合療法，其中抗-α4免疫球蛋白每天、每周、或每月給藥。
26.權(quán)利要求25的聯(lián)合療法，其中抗-α4免疫球蛋白每周給藥。
27.包括抗-α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白的藥物制劑在對(duì)有需要的主體給藥時(shí)用于抑制腫瘤生長(zhǎng)和/或轉(zhuǎn)移性進(jìn)展和/或轉(zhuǎn)移灶發(fā)展的應(yīng)用。
28.權(quán)利要求27的應(yīng)用，其中主體另外用化療、免疫治療、手術(shù)、放療、高熱、或改善癌癥治療的副作用的藥物進(jìn)行治療。
29.權(quán)利要求27的應(yīng)用，其中腫瘤為黑素瘤、白血病、前列腺癌、或淋巴瘤。
全文摘要
提供了用于治療淋巴瘤、白血病、黑素瘤、前列腺癌和轉(zhuǎn)移性疾病的組合物、方法、和組合治療。具體地，公開(kāi)了包括抗α4整聯(lián)蛋白免疫球蛋白或結(jié)合于α4整聯(lián)蛋白配體(如，MadCAM－1和VCAM－1)的免疫球蛋白的組合物，用于抑制腫瘤的生長(zhǎng)和進(jìn)展、和抑制轉(zhuǎn)移灶。用于治療腫瘤和轉(zhuǎn)移灶優(yōu)選的免疫球蛋白為那他珠他單抗。使用這些免疫球蛋白的組合物和方法可單獨(dú)使用或與其它試劑和癌癥治療模式組合使用。
文檔編號(hào)A61K39/395GK1946407SQ200580012148
公開(kāi)日2007年4月11日 申請(qǐng)日期2005年2月3日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月6日
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