專利名稱：顫蛋白缺乏或機能不良及其相關的方法
技術領域：
本發(fā)明一般性涉及一種治療顫蛋白(Reelin)缺乏或機能不良以及與其相關的疾病或病癥的方法，通過補充使用與腦脂質結合蛋白(BLBPs)具有高度親和力的藥物，并且尤其是ω-3和/或ω-6多不飽和脂肪酸(PUFAs)，如二十二碳六烯酸(DHA 226n-3)。本發(fā)明還涉及使用顫蛋白作為腦以及其他組織中DHA以及其他的PUFA水平的作為生物標志物的用途。
背景技術：
神經(jīng)病或神經(jīng)精神病病癥以及疾病持續(xù)面臨預測、鑒別以及診斷的挑戰(zhàn)。一些較重要的神經(jīng)退行性異常(例如，精神分裂癥、雙相性精神障礙、誦讀困難、運動障礙、注意力不集中的過度反應癥(ADHD)、癲癇、孤獨癥、帕金森病、老年癡呆、阿耳茨海默(氏)病、過氧化物酶體增殖子激活疾病(PPAR)、多發(fā)性硬化癥、糖尿病誘導的神經(jīng)疾病、黃斑變性、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、亨延頓(氏)舞蹈病、肌萎縮側索硬化(ALS)、色素性視網(wǎng)膜炎、腦性麻痹、肌肉萎縮癥、癌癥、囊性纖維化病、神經(jīng)管缺陷、抑郁癥、澤韋格綜合征、無腦回、唐氏綜合征、肌肉-眼睛-腦疾病、Walker-Warburg綜合征、Charoct-Marie-Tooth疾病、包涵體肌炎(IBM)以及Aniridia)的病因可能部分腦中的神經(jīng)元移行(neuronal migration)或神經(jīng)元定位(neuronal positioning)的機能不良。
顫蛋白，一種外源性信號傳導糖蛋白質，在神經(jīng)元移行、神經(jīng)元定位中發(fā)揮重要的作用，并且通過維持中樞以及外周神經(jīng)系統(tǒng)中的放射神經(jīng)膠質系統(tǒng)作為發(fā)育調節(jié)因子。顫蛋白還參與神經(jīng)細胞的正確迭片。在發(fā)育階段，在肝臟、腎臟、腦、脊髓以及視網(wǎng)膜中發(fā)現(xiàn)高水平的顫蛋白(D′Arcangelo等，Nature 374719-723，1995)。但是，與許多其他的發(fā)育基因不同的是，顫蛋白在整個生命過程中表達。
在發(fā)育的腦中與顫蛋白的水平有關的是腦脂質結合蛋白(BLBP)的水平，后者充當脂肪酸結合蛋白(FABP)家族成員。Hartfuss等(Development，2003；130，4597-4609)證實體外加入顫蛋白增加腦皮層中的BLBP含量。通常見于發(fā)育的中樞以及外周神經(jīng)系統(tǒng)的膠質細胞中，BLBP(或者腦-FABP)似乎在一些脂質(例如，ω-3脂肪酸)的轉運、沉積或者保護行儲藏中發(fā)揮作用以保證脂肪酸對發(fā)育的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的持續(xù)供給(Ganesaratnam K.Balendiran等，2000The Journal of Biological Chemistry，275，No.35，27045-27054)。
一種所述的基本的ω-3脂肪酸，DHA，(4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸；226n-3)，是腦中最為豐富的n-3多不飽和脂肪酸(Williard等，Journal ofLipid Research，2001，42，1368-1376)。BLBP(腦-FABP)對DHA具有高度的親和力以及特異性，并且認為BLBP可以發(fā)揮保護DHA免受自由基過氧化的作用(Ganesaratnam K.Balendiran等，2000)。
在罹患神經(jīng)病病癥的患者中發(fā)現(xiàn)了不同水平的顫蛋白。例如，根據(jù)Fatemi等的報道(Neuroreport 2001 Oct 29；12(15)3209-3215)，在罹患精神分裂癥、雙相性精神障礙以及嚴重抑郁癥的患者的腦中發(fā)現(xiàn)不同降低的水平的顫蛋白。此外，Chen等(Nuclei Acids Res.2002 Jul 130(13)2930-2939)表明罹患精神分裂癥或帶有精神癥狀的雙相性疾病的患者在腦中具有低于正常值的顫蛋白水平。Persico等(Mol Psychiatry，2001 Mar；6(2)150-159)證實具有長變體顫蛋白基因(＞11GGC重復)的孤獨癥患者在腦中具有較低的顫蛋白水平并且為孤獨癥提供了另外的治療靶標。
針對預防、減少或治愈神經(jīng)病或損傷的治療傳統(tǒng)上著眼于藥物方法。例如，持續(xù)開發(fā)出了減輕癥狀的神經(jīng)精神病或神經(jīng)退行性藥物，但是仍然不能減輕神經(jīng)病問題的固有的原因。因此，本領域還需要新的治療策略以用于治療神經(jīng)病病癥、疾病或損傷。
發(fā)明概述本發(fā)明的一個實施方案涉及一種治療顫蛋白缺乏或者機能不良的方法。所述的方法包括對診斷患有或者懷疑具有顫蛋白缺乏或者機能不良的患者給藥一定量的選自ω-3 PUFA以及ω-6 PUFA，或者其前體或者其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，以補償所述的患者中顫蛋白缺乏或者機能不良的作用。在一個方面，顫蛋白缺乏或者機能不良與患者中的脂肪酸結合蛋白(例如，腦脂質結合蛋白(BLBP))的表達或者功能的下降有關。
優(yōu)選地，對患者給藥PUFA補償所述的患者中降低的脂肪酸結合蛋白或者其功能，補償患者中降低的腦脂質結合蛋白或者其功能，改善所述的患者中脂肪酸結合蛋白的活性，改善所述的患者中腦脂質結合蛋白作用機制的至少一個參數(shù)，導致?lián)饺氲剿龅幕颊咧猩窠?jīng)膠質細胞和神經(jīng)元的磷脂膜中的功能性DHA的增加，增加所述的患者中顫蛋白的水平，和/或改善所述的患者中顫蛋白的活性。
根據(jù)本發(fā)明的方法治療的患者包括罹患與顫蛋白缺乏或者機能不良相關聯(lián)的疾病或者病癥或者處于罹患的風險中的患者，從而對患者給藥PUFA改善所述疾病或者病癥的至少一種癥狀，或者預防或者延遲所述疾病或者病癥的發(fā)作。一個方面，所述的患者具有神經(jīng)疾病或神經(jīng)精神疾病，懷疑具有神經(jīng)疾病或神經(jīng)精神疾病，或者處于發(fā)展的風險中。另一方面，所述的患者罹患癲癇發(fā)作。另一方面，所述的患者具有下述疾病，懷疑具有下述疾病，或處于發(fā)展下述疾病的風險中與神經(jīng)病機能不良有關的自體免疫疾病。在另一方面，所述的患者具有抗-磷脂疾病(anti-phospholipiddisorder)。另一方面，所述的患者具有下述疾病，懷疑具有下述疾病，或處于發(fā)展下述疾病的風險中，所述的疾病選自精神分裂癥、雙相性精神障礙、誦讀困難、運動障礙、注意力不集中的過度反應癥(ADHD)、癲癇、孤獨癥、帕金森病、老年癡呆、阿耳茨海默(氏)病、過氧化物酶體增殖子激活疾病(PPAR)、多發(fā)性硬化癥、糖尿病誘導的神經(jīng)疾病、黃斑變性、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、亨延頓(氏)舞蹈病、肌萎縮側索硬化(ALS)、色素性視網(wǎng)膜炎、腦性麻痹、肌肉萎縮癥、癌癥、囊性纖維化病、神經(jīng)管缺陷、抑郁癥、澤韋格綜合征、無腦回、唐氏綜合征、肌肉-眼睛-腦疾病、Walker-Warburg綜合征、Charoct-Marie-Tooth疾病、包涵體肌炎(IBM)以及Aniridia。在另一方面，所述的患者具有甲狀腺疾病。
在該實施方案的一個方面，在給藥步驟之前，所述的方法包括測量源自患者的生物樣品中的顫蛋白的含量或者生物活性。例如，所述的方法能夠包括比較所述的患者樣品中的顫蛋白以及同樣類型樣品中的顫蛋白的基線量，其中與基線量相比所述的患者樣品中顫蛋白量的變化表明所述的患者具有顫蛋白缺乏。測量步驟能夠利用下述方法進行，所述的方法包括但不限于mRNA轉錄分析、蛋白質印跡、免疫印跡、酶-聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫測定(RIA)、免疫沉淀反應、表面等離振子共振、化學發(fā)光、熒光偏振、磷光、免疫組織化學分析、基質-輔助激光解吸/離子時間飛行(MALDI-TOF)質譜、微細胞術、微陣列、顯微鏡、熒光激活細胞分選(FACS)、流式細胞術、以及蛋白質微芯片或微陣列。
在一個方面，所述的方法能夠包括下述步驟測定患者中不同的顫蛋白大小形式的相對的表達或活性以建立患者樣品中的顫蛋白大小形式譜，并比較所述的患者顫蛋白大小形式譜以及同樣類型的樣品中的顫蛋白大小形式基線譜，其中與基線譜中大小形式相對表達或活性相比，一或多種顫蛋白大小形式表達的變化的變化表明所述的患者具有顫蛋白缺乏或機能不良。測量步驟能夠利用但不限于選自下列的技術進行mRNA轉錄分析、蛋白質印跡、免疫印跡以及毛細管電泳。
另一方面，所述的方法能夠包括包括比較患者樣品中顫蛋白的活性以及同樣類型樣品中的顫蛋白的基線活性，其中與基線水平相比，患者樣品中顫蛋白活性水平的變化表明所述的患者具有顫蛋白機能不良。測量活性的步驟通過選自但不限于下列的技術實現(xiàn)受體-配體測定和磷酸化測定。
在另一方面，所述的方法能夠包括測量患者樣品中促甲狀腺素(TSH)的水平并且比較患者樣品中TSH的量以及同樣類型樣品中的TSH基線量，其中與基線量相比，患者樣品中TSH的量的變化表明所述的患者具有TSH缺乏。在該方面，所述的方法還包括對患者給藥甲狀腺藥物聯(lián)合PUFA。
在上述方法中，當?shù)玫缴飿悠返臅r候，所述的樣品能夠包括但不限于細胞樣品、組織樣品以及體液樣品，但是特別優(yōu)選血液樣品。
在該實施方案的一個方面，所述的方法還能夠包括在給藥步驟之后至少一次監(jiān)測給藥PUFA對患者中顫蛋白水平或生物活性的效果；或者還包括在給藥步驟之后至少一次監(jiān)測給藥PUFA對患者中顫蛋白一或多種大小形式的表達或生物活性變化的效果。在這些方面，所述的方法還能夠包括基于監(jiān)測的效果治療的結果調整后續(xù)治療中對患者給藥PUFA的步驟。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種調節(jié)組織或流體顫蛋白表達的方法。所述的方法包括對患者給藥一定量的選自ω-3 PUFA以及ω-6 PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，有效調節(jié)患者的組織或流體中的顫蛋白表達。一個方面，其中PUFA的量足以增加患者組織或流體中顫蛋白的表達。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種預防、減少或延緩視網(wǎng)膜發(fā)育缺陷或病癥的發(fā)作的方法。所述的方法包括包括對所述的患者給藥選自ω-3 PUFA以及ω-6 PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，有效預防、減少或延緩視網(wǎng)膜發(fā)育缺陷或病癥的發(fā)作并以補償患者中顫蛋白缺乏或機能不良的作用。
本發(fā)明的另一實施方案一種預防、減少或延緩與顫蛋白缺乏或機能不良有關的發(fā)育缺陷或病癥的發(fā)作的方法。所述的方法包括a)測量源自患者的生物樣品中顫蛋白的表達或生物活性；b)對所述的患者給藥選自ω-3 PUFA以及ω-6 PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，其中PUFA的給藥量基于顫蛋白樣品中表達或生物活性進行確定。一個方面，測量顫蛋白表達或活性的步驟還包括測定樣品中單個顫蛋白大小形式的相對表達或活性。一個方面，其中對所述的患者給藥PUFA的量通過下述步驟確定比較患者樣品中顫蛋白表達或生物活性的水平以及相應于推薦劑量的PUFA的顫蛋白表達或活性基線水平，并相應地調節(jié)針對所述的患者的PUFA劑量。在該方面，當患者中顫蛋白的表達或生物活性低于基線水平的時候，對所述的患者給藥的PUFA的量相對于推薦劑量的PUFA增加。在另一方面，其中對所述的患者給藥PUFA的量通過下述步驟確定比較患者樣品中不同的顫蛋白大小形式的表達或活性以及相應于推薦劑量的PUFA的顫蛋白大小形式的基線譜，并相應地調節(jié)針對所述的患者的PUFA。在這方面，針對所述的患者給藥PUFA的量相對于推薦劑量的PUFA增加，當患者樣品中一或多種顫蛋白大小形式的相對表達或活性不同于基線譜中顫蛋白大小形式的相對表達或活性的時候。源自所述的患者的生物樣品中的顫蛋白表達或生物活性的測量步驟在對患者給藥PUFA后重復一或多次。其中對所述的患者給藥PUFA的量根據(jù)患者中顫蛋白表達或生物活性的重復測量進行調節(jié)。其中源自所述的患者的生物樣品中顫蛋白表達或生物活性的測量步驟在患者的生命一部分時間或患者的整個生命過程中間歇重復，并且其中對所述的患者給藥PUFA的量相應于患者中顫蛋白表達或生物活性的每次新的測量進行調節(jié)。其中患者中顫蛋白的表達或生物活性基本正常，并且其中PUFA以增補劑進行給藥以預防或減少顫蛋白缺乏或機能不良的發(fā)展的風險。利用該方法治療的患者包括但不限于懷孕女性、泌乳女性、成人、兒童或青少年、胚胎或胎兒，并且其中通過將PUFA給藥予胚胎或胎兒的母親對胚胎或胎兒給藥PUFA。其中所述的患者具有或處于發(fā)展與顫蛋白缺乏或機能不良或脂肪酸結合蛋白缺乏有關的神經(jīng)疾病或神經(jīng)精神疾病的風險中；其中所述的患者具有或處于發(fā)展與顫蛋白缺乏或機能不良或脂肪酸結合蛋白缺乏有關的自體免疫疾病的風險中。其中所述的患者具有或處于發(fā)展與顫蛋白缺乏或機能不良或脂肪酸結合蛋白缺乏有關的發(fā)育缺陷的風險中。
本發(fā)明的另一實施方案一種監(jiān)測患者腦中DHA水平的方法。所述的方法包括測量來自所述的患者的生物樣品中的顫蛋白表達或生物活性水平并且基于顫蛋白的測量估計所述的患者腦中的DHA水平。一個方面，所述的方法還包括對所述的患者給藥一定量的相應于顫蛋白表達或生物活性的測量水平的DHA。優(yōu)選地，其中DHA的給藥量足以補償患者中腦脂質結合蛋白的降低的表達或活性或以改善患者中腦脂質結合蛋白的活性。所述的方法還能夠包括比較源自所述的患者的生物樣品中的顫蛋白表達或生物活性的水平以及顫蛋白表達或生物活性的基線水平，其中顫蛋白表達或生物活性的基線水平與研究對象腦中的DHA基線水平相關，其中基線水平通過選自如下的方法建立a)對源自患者的先前樣品的顫蛋白表達或活性的在先測量，建立顫蛋白表達或活性的基線水平，其中先前樣品為同樣的細胞類型、組織型或體液型；以及b)利用源自與患者樣品同樣的細胞類型、組織型或體液型對照樣品，建立顫蛋白表達或活性的基線水平，對照樣品從匹配的單體群獲得。與DHA的基線水平相比，所述的患者腦中的估計的低水平的DHA表明所述的患者應該給藥一定量的DHA以補償患者腦中的DHA水平。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種診斷患者中DHA缺乏的方法。所述的方法包括下述步驟a)測量源自患者的生物樣品中的顫蛋白表達或生物活性；b)比較所述的生物樣品中顫蛋白表達或生物活性以及顫蛋白的基線水平；以及c)進行患者的診斷，其中與顫蛋白表達或生物活性基線水平相比，檢測出所述的生物樣品中的顫蛋白表達或生物活性的水平差異，表明患者中DHA缺乏的陽性診斷。一個方面，其中與顫蛋白表達或生物活性基線水平相比，所述的生物樣品顫蛋白表達或生物的活性較低水平的檢測，表明患者中DHA缺乏的陽性診斷。所述的生物樣品選自細胞樣品、組織樣品以及體液樣品。并且優(yōu)選地血液樣品。步驟(a)的測量包括測量顫蛋白的mRNA轉錄，例如通過通過選自逆轉錄酶-PCR(RT-PCR)、原位雜交、Northern印跡、序列分析、微陣列分析以及報告基因的檢測的方法進行。步驟(a)的測量包括測量顫蛋白蛋白表達，例如利用選自下述的方法進行免疫印跡、酶-聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫測定(RIA)、免疫沉淀反應、表面等離振子共振、化學發(fā)光、熒光偏振、磷光、免疫組織化學分析、基質-輔助激光解吸/離子時間飛行(MALDI-TOF)質譜、微細胞術、顯微鏡、熒光激活細胞分選、流式細胞術以及蛋白質微芯片或微陣列。步驟(a)的測量包括測量顫蛋白的生物活性，利用選自受體-配體測定以及磷酸化測定的方法進行。
在該實施方案的一個方面，基線水平利用選自下述的方法建立a)建立源自患者的自體同源對照樣品中的顫蛋白表達或活性的基線水平，其中自體同源樣品為與步驟(a)樣品同樣的細胞類型、組織型或體液型；b)建立顫蛋白表達或活性的基線水平，所述的基線水平為源自患者的先前樣品中的顫蛋白表達或活性至少兩次先前測量，其中每次的先前樣品為與步驟(a)樣品同樣的細胞類型、組織型或體液型，并且其中先前測量得到陰性的診斷；以及c)利用源自與步驟(a)樣品同樣的細胞類型、組織型或體液型的對照樣品建立顫蛋白表達或活性的基線水平，對照樣品已經(jīng)從匹配的單體群中得到。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種預測HUFA摻入到患者的磷脂膜中的功效的方法。所述的方法包括下述步驟a)測量源自患者的生物樣品中顫蛋白表達或生物活性；b)比較所述的生物樣品的顫蛋白表達或生物活性以及顫蛋白的基線水平；并且c)預測所述的患者的HUFA摻入到磷脂膜中的功效，其中與顫蛋白表達或生物活性基線水平相比，所述的生物樣品中顫蛋白表達或生物活性水平的差異表明所述的患者有效地摻入HUFA到磷脂膜中的預測能力的修正。一個方面，所述的方法還包括對患者開出一定量的HUFA處方，其中所述的量基于所述的患者的有效地摻入HUFA到磷脂膜中的預測能力確定。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種對懷孕以及哺乳期的女性增補PUFAs的方法。所述的方法包括下述步驟a)測量或源自胎兒或兒童的雙親之一或二者的生物樣品中的顫蛋白表達或生物活性；b)對胎兒或兒童的母親給藥選自ω-3 PUFA以及ω-6 PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，其中PUFA的給藥量基于源自雙親的顫蛋白樣品中的表達或生物活性測量而確定，其中PUFA增補女性以及其胎兒或兒童中的PUFA。優(yōu)選地，其中PUFA的給藥量足以補償胎兒或兒童中的降低的腦脂質結合蛋白表達或活性或改善胎兒或兒童中腦脂質結合蛋白的活性。
一個方面，其中PUFA的給藥量足以降低生產(chǎn)患有顫蛋白缺乏或機能不良嬰兒尤其是男性嬰兒的風險。另一方面，PUFA的給藥量足以預防、延緩母親、兒童或胎兒孤獨癥的發(fā)作或減少癥狀；或者PUFA的給藥量足以預防、延緩母親、兒童或胎兒的神經(jīng)元移行病癥的發(fā)作或減少癥狀；或者PUFA的給藥量足以預防、延緩母親、兒童或胎兒中與顫蛋白缺乏或機能不良有關的癥狀的發(fā)作或減少癥狀。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種增補懷孕以及哺乳期女性中的PUFAs以降低生產(chǎn)具有或處于發(fā)展為顫蛋白缺乏或機能不良的嬰兒的風險的方法。所述的方法包括下述步驟a)鑒別懷孕女性懷孕的胎兒性別；b)在懷孕以及哺乳期的整個階段或者部分階段給藥選自ω-3 PUFA以及ω-6 PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)以降低出生時候帶有顫蛋白缺乏或機能不良的胎兒或出生后發(fā)展為顫蛋白缺乏或機能不良的嬰兒的風險，其中與女性胎兒為相比，對男性胎兒給藥PUFA增加。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種預防、延緩兒童中與顫蛋白缺乏或機能不良有關的癥狀或疾病的發(fā)作或減少癥狀的方法。所述的方法包括下述步驟a)測量源自兒童的生物樣品中的顫蛋白的表達或生物活性；以及b)對兒童給藥選自ω-3 PUFA以及ω-6 PUFA，或前體或其來源多不飽和脂肪酸(PUFA)，其中PUFA的給藥量基于樣品中顫蛋白表達或生物活性的測量進行確定。一個方面，PUFA以嬰兒制劑提供，增補包括DHA和ARA的脂肪酸。一個方面，PUFA的給藥量足以補償兒童中腦脂質結合蛋白降低的表達或活性或改善兒童中腦脂質結合蛋白的活性；足以預防、延緩孤獨癥的發(fā)作或減少癥狀；或者足以預防、延緩神經(jīng)元移行病癥的發(fā)作或減少癥狀。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種預防、延緩與低分子量顫蛋白表型有關的阿耳茨海默(氏)病的發(fā)作或減少癥狀的方法。所述的方法包括下述步驟a)鑒別患有顫蛋白缺乏或機能不良的患者，包括帶有低分子量顫蛋白表型的患者；以及b)對所述的(a)中的患者給藥選自ω-3 PUFA以及ω-6 PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)以足以補償患者中顫蛋白缺乏或機能不良的效果。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種上調患者中脂肪酸結合蛋白的方法。所述的方法包括包括對患者給藥選自ω-3 PUFA以及ω-6 PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)以有效上調FABP。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種上調患者中脂肪酸結合蛋白的方法，包括對所述的患者給藥選自ω-3 PUFA以及ω-6 PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)以有效上調顫蛋白表達或活性。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種改善患者中神經(jīng)元移行的方法，包括對所述的患者給藥選自ω-3 PUFA以及ω-6 PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)以有效患者中改善神經(jīng)元移行。在該方面，神經(jīng)元移行通過測量患者中顫蛋白表達或活性的水平進行測量。神經(jīng)功能利用例如成像技術以及表型評價進行。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種鑒別神經(jīng)祖細胞細胞的方法，包括檢測細胞群中的顫蛋白表達或生物活性，其中確定水平的顫蛋白表達或生物活性與神經(jīng)祖細胞細胞相關。所述的方法還能夠包括選擇檢測了顫蛋白表達或生物活性的神經(jīng)祖細胞。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種監(jiān)測神經(jīng)發(fā)育的方法。所述的方法包括下述步驟a)提供包括神經(jīng)祖細胞細胞的細胞群；b)檢測細胞群中的顫蛋白表達或活性；c)將細胞群暴露在神經(jīng)祖細胞將發(fā)展為分化的神經(jīng)細胞的條件下；并且d)監(jiān)測經(jīng)過步驟(c)之后的細胞中的顫蛋白的表達或活性，以評價神經(jīng)祖細胞向分化的神經(jīng)細胞的發(fā)育。所述的方法還能夠包括還包括在步驟(b)之前或同時將步驟(a)的細胞群與推定的發(fā)育調節(jié)化合物接觸，并測定推定的調節(jié)化合物是否影響神經(jīng)祖細胞向分化的神經(jīng)細胞的發(fā)育，通過檢測細胞群中的顫蛋白表達或活性。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種治療或預防與脂肪酸結合蛋白缺乏或機能不良有關的疾病的方法。所述的方法包括下述步驟a)鑒別帶有至少一種脂肪酸結合蛋白的表達或活性降低的患者；以及b)對所述的患者給藥多選自ω-3 PUFA以及ω-6 PUFA，或前體或其來源的不飽和脂肪酸(PUFA)，給藥量足以補償所述的脂肪酸結合蛋白的降低表達或活性的效果。一個方面，其中所述的脂肪酸結合蛋白為腦脂質結合蛋白(BLBP)。一個方面，所述的脂肪酸結合蛋白為心臟中的脂肪酸結合蛋白。
本發(fā)明的另一實施方案為一種治療或預防與降低脂肪酸結合蛋白受體的活性或機能不良有關的疾病的方法。所述的方法包括下述步驟a)鑒別帶有脂肪酸結合蛋白受體降低的活性或機能不良的患者；以及b)對所述的患者給藥選自ω-3 PUFA以及ω-6 PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，給藥量足以補償降低的脂肪酸結合蛋白受體的活性或機能不良的效果。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種藥物組合物，包括一定量的選自ω-3PUFA以及ω-6 PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，以及至少一種治療化合物以用于治療或預防與顫蛋白缺乏有關的疾病，足以補償患者中脂肪酸結合蛋白降低的表達或活性，所述的患者具有或處于發(fā)展顫蛋白缺乏的風險中。一個方面，治療化合物為甲狀腺藥物。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種診斷患者中DHA缺乏的方法。所述的方法包括下述步驟a)測量源自患者的生物樣品中的顫蛋白表達或生物活性；b)比較所述的生物樣品的顫蛋白表達或生物活性以及顫蛋白的基線水平；c)測量源自患者的生物樣品中的促甲狀腺素(TSH)表達或生物活性；d)比較所述的生物樣品的TSH表達或生物活性以及TSH的基線水平；以及e)進行患者的診斷，其中與顫蛋白表達或生物活性基線水平相比，所述的生物樣品中顫蛋白表達或生物活性的水平檢測出差異，并且其中與TSH表達或生物活性基線水平相比，檢測出所述的生物樣品中TSH表達或生物活性的水平的差異，表明患者中DHA缺乏的陽性診斷。生物樣品所述的生物樣品選自細胞樣品、組織樣品以及體液樣品。一個方面，所述的患者為懷孕的或懷疑為懷孕的。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種增補懷孕以及哺乳期女性PUFAs的方法。所述的方法包括下述步驟a)測量源自胎兒或兒童的母親生物樣品中的顫蛋白的表達以及生物活性；b)測量所述的生物樣品中的促甲狀腺素表達或生物活性；c)對胎兒或兒童的母親給藥選自ω-3 PUFA以及ω-6 PUFA，或前體或其來源多不飽和脂肪酸(PUFA)，其中PUFA的給藥量基于源自母親顫蛋白樣品中表達或生物活性的測量，其中PUFA增補女性以及其胎兒或兒童中的PUFA；以及d)對胎兒的母親或兒童給藥至少一種甲狀腺藥物，如果源自母親樣品中的顫蛋白和促甲狀腺素的測量低于顫蛋白和促甲狀腺素的基線水平。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種診斷胎兒神經(jīng)發(fā)育疾病的方法。所述的方法包括下述步驟a)測量源自胎兒的羊膜流體樣品中的顫蛋白表達或生物活性；b)比較樣品中的顫蛋白表達或生物活性以及顫蛋白的基線水平；以及c)進行胎兒的診斷，其中與顫蛋白表達或生物活性基線水平相比，檢測出樣品中顫蛋白表達或生物活性的水平的差異，表明胎兒神經(jīng)發(fā)育疾病的陽性診斷。一個方面，對(c)中的陽性診斷胎兒在子宮內給藥一定量的顫蛋白或顫蛋白基因足以治療神經(jīng)發(fā)育疾病。另一方面，其中對(c)中的陽性診斷的胎兒出生后給藥一定量的顫蛋白足以治療神經(jīng)發(fā)育疾病，例如以嬰兒制劑給藥。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種營養(yǎng)增補劑或口服藥物，包括一定量的顫蛋白足以延緩或預防顫蛋白-缺乏或機能不良或與之相關的疾病或病癥的發(fā)展。一個方面，增補劑或者藥物以嬰兒劑型的形式提供。另一方面，其中增補劑或者藥物通過嬰兒的母親產(chǎn)生的乳汁對嬰兒提供，其中嬰兒的母親在哺乳期之前或期間增補顫蛋白。
在上述的各方法中，當給藥PUFA的時候，一個方面，其中PUFA為高度不飽和脂肪酸(HUFA)。另一方面，其中PUFA選自花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)和二十二碳五烯酸(DPA)。另一方面，PUFA選自ARA、EPA和DHA。在另一方面，PUFA為DHA。另一方面，PUFA的來源選自魚油、海藻和植物油。在另一方面，當其中PUFA為DHA的時候，其中DHA的前體選自α-亞麻酸(LNA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)，以及選自LNA、EPA和DPA的前體的混合物。另一方面，其中PUFA以下述形式給藥選自包括甘油三酯形式PUFA的高度純凈的海藻油、包括PUFA的甘油三酯油、包括PUFA的磷脂、包括PUFA的蛋白質和磷脂組合、干燥的海洋微藻、包括PUFA的鞘脂類、酯、游離的脂肪酸、PUFA與其他的生物活性分子偶聯(lián)物及其組合。所述的生物活性分子選自蛋白質、氨基酸、藥物和糖。一個方面，其中PUFA經(jīng)口服給藥。另一方面，其中PUFA以包括PUFA或前體或其來源的制劑給藥，所述的制劑選自咀嚼片劑、速溶片劑、泡騰片劑、可重構粉末、酏劑、液體、溶液、混懸劑、乳劑、片劑、多層片劑、雙層片劑、膠囊、軟明膠膠囊、硬明膠膠囊、囊片(caplet)、錠劑、咀嚼錠劑、小珠(bead)、粉末、顆粒(granule)、粒(particle)、微粒(micro-particle)、可分散顆粒、扁囊劑、灌腸劑、栓劑、乳膏劑、局用劑型、吸入劑、氣霧吸入劑、貼劑、粒吸入劑、植入劑、長效植入劑、可吸收劑、注射劑、輸液劑、health bars、糖膏劑、米粉、米粉敷料、食品、營養(yǎng)食品、功能性食品及其組合。在該方面，PUFA以選自下述形式的制劑提供包括PUFA的高度純凈的海藻油、包括PUFA的甘油三酯油、包括PUFA的磷脂、蛋白質以及包括PUFA的磷脂的組合物、包括PUFA的干燥的海洋微藻，包括PUFA的鞘脂類、PUFA的酯、游離脂肪酸、PUFA與另一種生物活性分子的復合物，及其組合。其中PUFA以約0.05mg的PUFA每公斤患者體重至約200mg的PUFA每公斤患者體重的劑量進行給藥。另一方面，PUFA能夠組合一種或者多種其他的治療化合物對患者或者對象給藥用于治療與顫蛋白缺乏或者機能不良有關的病癥。
發(fā)明詳述本發(fā)明一般性地涉及一種利用脂肪酸補充的方法，并且具體地，ω-3和/或ω-6多不飽和脂肪酸(PUFA)補充(例如，DHA)以減輕或者補償顫蛋白缺乏或者機能不良的作用以及體內脂肪酸結合蛋白降低的水平，并且在一個實施方案中，為腦中。本發(fā)明的方法優(yōu)選地以預防與顫蛋白缺乏或者機能不良和/或降低的脂肪酸結合蛋白有關的各種疾病和病癥、延遲發(fā)作，或者治療，為患者提供益處。更具體地，本發(fā)明涉及用PUFAs例如DHA補充患者以減輕或者補償降低的腦脂質結合蛋白并且補償腦中由低水平引起的或者與低水平相關中不適當?shù)纳窠?jīng)移行，糖蛋白顫蛋白不適當?shù)谋磉_或者失調。不適當?shù)纳窠?jīng)元移行與多種神經(jīng)病癥相關包括誦讀困難、運動障礙、癲癇發(fā)作、癲癇以及注意力不集中的過度反應癥(ADHD)以及精神病癥如精神分裂癥、雙相性精神障礙、抑郁癥、Zellweger綜合征、無腦回病、唐氏綜合征、肌肉-眼睛-腦疾病、Walker-Warburg綜合征、Charoct-Marie-Tooth疾病，包涵體肌炎(IBM)以及Aniridia。
正確的功能性顫蛋白信號通路對發(fā)育的腦的腦皮質中的正確的神經(jīng)元移行非常重要。該通路中的偏離能夠引起放射神經(jīng)膠質細胞和星形膠質細胞中的多不飽和的脂肪酸-特異結合蛋白或者腦脂質結合蛋白(BLBP)的低表達，導致縮短的放射神經(jīng)膠質作用延伸以及由此導致的不適當?shù)纳窠?jīng)移行。不受理論束縛，本發(fā)明者認為表達BLBP以儲存并保護發(fā)育的腦中的多不飽和的脂肪酸，并且具體地DHA，免受氧化以及磷脂酶活性。在本發(fā)明中，ω-3脂肪酸補充劑對患有顫蛋白缺乏和/或失調患者提供以彌補低BLBP表達的作用，通過對腦提供正確的量的功能性DHA，后者能夠摻入到發(fā)育的神經(jīng)膠質細胞和神經(jīng)元的磷脂膜中。
因此，在一個實施方案中，本發(fā)明一般性地涉及一種測量作為生物標志物的顫蛋白的方法，以非破壞性地評估或預測在目前無法接近或難以接近的腦中以及其他部位的DHA水平，后者為中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的關鍵成分。例如，顫蛋白大小形式(顫蛋白成分)，包括顫蛋白表達和/或生物活性水平能夠定量測量推斷腦中的DHA水平的相對量。這種測量能夠用來間接地跟蹤個體整個生命過程中的腦中的DHA水平并用作。在生命周期的一些點上需要用DHA進行營養(yǎng)干預的指標。在本發(fā)明之前，在不潛在地傷害患者的條件下，難以評估腦中的DHA水平。
本發(fā)明還涉及一種預防、延緩顫蛋白缺乏或機能不良和/或與顫蛋白缺乏或機能不良有關的疾病或病癥的發(fā)作或進行治療的方法，包括對診斷具有或懷疑患有顫蛋白缺乏或機能不良的患者給藥一定量的PUFA，并且尤其是ω-3 PUFA，以及更具體地，二十二碳六烯酸(DHA)或前體或其來源，以補償患者中顫蛋白缺乏或機能不良的效果。在本發(fā)明之前，盡管已經(jīng)建議DHA用于治療一些神經(jīng)退行性病癥，但是沒有認識到存在能夠預測給藥DHA或者其他的PUFA特別有效的患有神經(jīng)退行性病癥特定的患者群。本發(fā)明通過測量患者中顫蛋白的水平可以確定這樣的患者。
本發(fā)明還涉及一種預防或減少與顫蛋白機能不良或缺乏有關的發(fā)育缺陷或病癥的方法，通過補充使用多不飽和脂肪酸(PUFAs-具有兩個或多個雙鍵的不飽和脂肪酸)，并且尤其是高度不飽和脂肪酸(HUFAs-具有三個或多個雙鍵的不飽和脂肪酸)，并且更具體地HUFA選自花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)以及二十二碳五烯酸(DPA)，以及更具體地ω-3 HUFAs，以及更具體地DHA，以達到補償患者中降低的脂肪酸結合蛋白或其功能；補償患者中降低的腦脂質結合蛋白或其功能；改善患者中脂肪酸結合蛋白的活性；增加患者中腦脂質結合蛋白(BLBPs)的表達；改善患者中腦脂質結合蛋白作用機制的至少一個參數(shù)；克服中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)結構中的DHA缺乏并且改善其導致的功能；增加功能性DHA以及其他的PUFAs向患者中膠質細胞以及神經(jīng)細胞磷脂膜中的摻入；增加顫蛋白的水平和/或改善患者中顫蛋白的活性；和/或改善與顫蛋白缺乏或機能不良有關的疾病或病癥的至少一種癥狀。
本發(fā)明的具體的實施方案包括，但不限于，在懷孕和/或哺乳期補充至少一種PUFA和/或前體或者其來源以預防與兒童中顫蛋白缺乏或者機能不良相關的病癥(例如，孤獨癥、神經(jīng)移行病癥)；對帶有低分子量顫蛋白表型的成人補充以預防多種病癥和疾病、減少發(fā)作，或者治療，包括但是不限于神經(jīng)病癥或者神經(jīng)精神病癥、癲癇發(fā)作以及與神經(jīng)機能不良相關的自體免疫病癥，或者抗-磷脂病癥。所述的病癥以及疾病更具體地包括，但不限于精神分裂癥、雙相性精神障礙、誦讀困難、運動障礙、注意力不集中的過度反應癥(ADHD)、癲癇、孤獨癥、帕金森病、老年癡呆、阿耳茨海默(氏)病、過氧化物酶體增殖子激活疾病(PPAR)、多發(fā)性硬化癥、糖尿病誘導的神經(jīng)疾病、黃斑變性、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、亨延頓(氏)舞蹈病、肌萎縮側索硬化(ALS)、色素性視網(wǎng)膜炎、腦性麻痹、肌肉萎縮癥、癌癥、囊性纖維化病、神經(jīng)管缺陷、抑郁癥、澤韋格綜合征、無腦回、唐氏綜合征、肌肉-眼晴-腦疾病、Walker-Warburg綜合征、Charoct-Marie-Tooth疾病、包涵體肌炎(IBM)以及Aniridia。
在一個本發(fā)明的實施方案中，增補懷孕以及哺乳期女性中的PUFAs以降低生產(chǎn)具有或處于發(fā)展為顫蛋白缺乏或機能不良的嬰兒的風險。一個方面，PUFA補充特別可以用于降低生產(chǎn)具有或處于發(fā)展為顫蛋白缺乏或機能不良的男性嬰兒的風險。在一個本發(fā)明的實施方案中，在對懷孕雌性補充PUFA之前，首先確定胎兒的性別。本發(fā)明者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)PUFA補充能夠減少出生患有顫蛋白缺乏或者機能不良的嬰兒的風險，并在本發(fā)明的一個方面，當胎兒為雄性的時候，這種效果特別有效。在該實施方案中，懷孕雌性在懷孕以及哺乳期的整個階段或者部分階段給藥選自ω-3 PUFA以及ω-6PUFA。與如果懷孕雌性懷有雌性胎兒相比，如果懷孕雌性懷有至少一個雄性胎兒，則PUFA補充可以增加的。
本發(fā)明還涉及一種測量顫蛋白和促甲狀腺素(TSH)的方法以非破壞性地評估或者預測患者中的DHA水平是否應該補充，并且尤其在懷孕期間。甲狀腺是大反饋過程的一部分。腦中的下丘腦釋放促甲狀腺激素釋放激素(TRH)。TRH的釋放“告訴”腦垂體釋放促甲狀腺素(TSH)。TSH，在血液中循環(huán)，然后引起甲狀腺制造甲狀腺激素并釋放進入血液中。TSH能夠增加顫蛋白的產(chǎn)生。因此，在懷孕期間低于正常TSH水平可與顫蛋白水平不足相關或者促進顫蛋白水平不足，后者對發(fā)育的胎兒具有負面的影響。盡管存在懷孕期間的婦女使用的TSH的測試(例如，Abbott Laboratories)，但是在本發(fā)明之前，還沒有記載針對TSH水平和顫蛋白水平的組合的測試。由于TSH能夠影響數(shù)種生物功能，本發(fā)明者相信的患者中TSH和顫蛋白水平的組合測試將針對患者(以及胎兒，如果是懷孕的婦女)處于不適當?shù)纳窠?jīng)發(fā)育的風險給出更準確的評估。因此，所述的雙重檢測可用于評估懷孕婦女的風險并提供PUFA補充策略，后者可能對胎兒發(fā)育具有積極的作用。顫蛋白水平能夠如這里描述的方法測量，并且同時或者之前或者之后測量促甲狀腺素水平。測量患者中TSH水平的方法是本領域中公知的并且目前已經(jīng)有多種商業(yè)提供的TSH檢測試劑盒(例如，Biosafe，Abbott Laboratories)。如果判斷顫蛋白和TSH水平低于基線對照水平，則對患者開出補充DHA或者其他的PUFA的處方，單用或者聯(lián)用甲狀腺藥物。PUFA補充已經(jīng)在別處更詳細地進行了討論。建立以及評估顫蛋白基線水平的方法在這里進行了描述(見下文)并且在本領域中是公知的(例如，參見PCT公開號WO03/063110)。人的TSH基線水平在本領域中是公知的。例如，TSH水平在約0.3-0.5以及約5.0-6.0MU升之間，或者從2003開始(由AmericanAssociation of Clinical Endocrinologists最近修改的)，在約0.3和約3.0MU/升之間，被認為個體中TSH的正常(基線)范圍。
本發(fā)明還涉及一種調節(jié)組織中顫蛋白表達的方法以促進干細胞的生長，通過使用至少一種ω-3和/或ω-6 PUFA和/或前體或者其源。
本發(fā)明還涉及一種監(jiān)測患者腦中的DHA的水平的方法，包括測量源自患者的生物樣品中的顫蛋白表達和/或生物活性的水平，并基于顫蛋白的測量估計患者腦中的DHA水平。
本發(fā)明者還已經(jīng)證實(參見實施例部分)可以利用源自患者的生物樣品中的顫蛋白濃度的檢測來預測，其他的組織包括CNS以及生殖組織中的DHA含量。例如，可以按照本文別處的描述測量、得到或者確定患者樣品中顫蛋白表達和/或生物活性。顫蛋白水平能夠與基線對照進行比較，還按照本文別處的描述。由于本發(fā)明者已經(jīng)證明顫蛋白缺乏或者機能不良預示有效摻入功能性HUFA到體內的能力降低。就能夠開出一定的量補充性HUFA(例如，作為營養(yǎng)性或者治療性組合物給藥)，可以解決患者摻入功能性HUFA到身體組織以及細胞中的預測能力。例如，與不具有顫蛋白缺乏或者機能不良的患者相比，顯示顫蛋白缺乏或者機能不良的患者可以開出更高劑量的HUFA，并且類似地，患者需要服用的HUFA量能夠隨時間進行調節(jié)或者修正，根據(jù)患者中顫蛋白表達和/或生物活性新的評估。因此，本發(fā)明的另一實施方案涉及一種預測HUFA摻入到患者的磷脂膜中的功效的方法，包括a)測量源自患者的生物樣品中顫蛋白表達或生物活性；b)比較所述的生物樣品的顫蛋白表達或生物活性以及顫蛋白的基線水平；并且c)預測所述的患者的HUFA摻入到磷脂膜中的功效，其中與顫蛋白表達或生物活性基線水平相比，所述的生物樣品中顫蛋白表達或生物活性水平的差異表明所述的患者有效地摻入HUFA到磷脂膜中的預測能力的修正。一個方面，所述的方法還包括對患者開出一定量的HUFA處方的步驟，其中所述的量基于所述的患者的有效地摻入HUFA到磷脂膜中的預測能力確定。
本發(fā)明還涉及一種改善患者的神經(jīng)移行和/或神經(jīng)功能方法，包括對患者給藥一定量的至少一種ω-3和/或ω-6 PUFA和/或前體或者其來源以改善所述的患者中神經(jīng)移行和/或神經(jīng)功能的至少一個參數(shù)。
本發(fā)明還涉及一種鑒別神經(jīng)祖細胞細胞的方法，包括檢測細胞群中的顫蛋白表達或生物活性，其中確定水平的顫蛋白表達或生物活性與神經(jīng)祖細胞細胞相關。
本發(fā)明還涉及一種監(jiān)測神經(jīng)發(fā)育的方法，a)提供包括神經(jīng)祖細胞細胞的細胞群；b)檢測細胞群中的顫蛋白表達或活性；c)將細胞群暴露在神經(jīng)祖細胞將發(fā)展為分化的神經(jīng)細胞的條件下；并且d)監(jiān)測經(jīng)過步驟(c)之后的細胞中的顫蛋白的表達或活性，以評價神經(jīng)祖細胞向分化的神經(jīng)細胞的發(fā)育。
本發(fā)明還涉及在上述任一方法中利用DHA聯(lián)用其他的多不飽和脂肪酸(PUFAs)(例如，EPA、ARA、DPA)。
本發(fā)明還涉及治療性組合物，包括一定量的至少一種ω-3和/或ω-6PUFA和/或前體或者其源，足以補償具有顫蛋白缺乏或者處于發(fā)展為顫蛋白缺乏的風險中的患者中的降低的脂肪酸結合蛋白表達和/或活性。
本發(fā)明還涉及治療性組合物，包括一定量的至少一種ω-3和/或ω-6PUFA和/或前體或者其源，足以補償具有顫蛋白缺乏或者處于發(fā)展為顫蛋白缺乏的風險中的患者中的降低的脂肪酸結合蛋白表達和/或活性，以及至少一種用于治療或者預防與顫蛋白缺乏相關的病癥的治療化合物。
本發(fā)明還涉及利用PUFA補充，包括DHA，位于除CNS以外的部位(例如，與相關心臟和/或免疫/淋巴系統(tǒng))以預防這些部位中的脂肪酸脂質結合蛋白的缺乏、延遲發(fā)作，或者治療。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種診斷胎兒神經(jīng)發(fā)育疾病的方法，包括a)測量源自胎兒的羊膜流體樣品中的顫蛋白表達或生物活性；b)比較樣品中的顫蛋白表達或生物活性以及顫蛋白的基線水平；以及c)進行胎兒的診斷，其中與顫蛋白表達或生物活性基線水平相比，檢測出樣品中顫蛋白表達或生物活性的水平的差異，表明胎兒神經(jīng)發(fā)育疾病的陽性診斷。測量顫蛋白表達和活性的方法在本文中的別處討論。一個方面，對(c)中的陽性診斷胎兒在子宮內給藥一定量的顫蛋白或顫蛋白基因足以治療神經(jīng)發(fā)育疾病。另一實施方案，對(c)中的陽性診斷的胎兒出生后給藥一定量的顫蛋白足以治療神經(jīng)發(fā)育疾病。例如，顫蛋白以嬰兒制劑給藥。對患者給藥顫蛋白的量，包括從約1μg每天至約10,000μg每天或者更多，包括在0.1μg每天增量之間的任何增量(例如，1μg每天，1.1μg每天，1.2μg每天，等)。
本發(fā)明的另一實施方案涉及一種營養(yǎng)增補劑或口服藥物，包括一定量的顫蛋白，足以延緩或預防顫蛋白-缺乏或機能不良或與之相關的疾病或病癥的發(fā)展。所述的補充能夠以嬰兒制劑或者其他的食品產(chǎn)品的形式提供。并在一個方面，通過嬰兒的母親產(chǎn)生的乳汁對嬰兒提供，其中嬰兒的母親在哺乳期之前或期間增補顫蛋白。
本發(fā)明的各方面在下面將進行更詳細的說明。
顫蛋白為細胞外信號糖蛋白(＞400kDa)，由Cajal-Retzius細胞分泌到腦的新皮質的邊緣區(qū)，盡管有證據(jù)表明顫蛋白結合鈣粘蛋白-相關的神經(jīng)受體以及B1-類整聯(lián)蛋白，顫蛋白主要結合低密度脂蛋白受體家族的兩個成員，VLDLR和ApoER2，具有對受體ApoER2具有更高的親和力。顫蛋白對VLDLR或者ApoER2的細胞外的結構域的結合引起或者誘導例如Dab1的酪氨酸的磷酸化，信號通路cdk5/p35中的一種細胞質銜接子蛋白，絲氨酸/蘇氨酸激酶。
顫蛋白分子還聚集形成大的蛋白復合物，但是還具有自催化性質，裂解顫蛋白復合物成小的實體。在哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中，顫蛋白以及，更具體地，一些其特定大小變體特異(這里還稱為顫蛋白大小形式或者顫蛋白成分)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)控制正確的神經(jīng)移行以及定位，通過誘導對VLDLR和ApoER2的Dab1的磷酸化。這種神經(jīng)移行對腦中的正常皮質的發(fā)育是必須的。
顫蛋白信號中的Dab1酪氨酸磷酸化的重要性是意義深遠的。它可能，激活，例如，磷酸肌醇-3-激酶(PI3K，Akt和Src家族激酶(SFKs)(Ballif等，Molecular Brain Research，2003，117，pp 152-159)。由于這些激酶的激活或者信號級聯(lián)中下游其他的蛋白上調(Notch、NckB、erbB2、erbB4、神經(jīng)調節(jié)蛋白，包括可溶的神經(jīng)調節(jié)蛋白，GGF等)，星形膠質細胞將在形態(tài)上延伸轉化為放射神經(jīng)膠質細胞并上調其他的神經(jīng)受體以及腦脂質結合蛋白(BLBPs)的表達(Brody，T.，The Interactive FlyGene networks，development，1996)。
編碼顫蛋白的核苷酸序列已經(jīng)在人以及小鼠中克隆，并且顫蛋白的cDNA以及編碼的氨基酸序列，能夠在公開的數(shù)據(jù)庫中找到，如NationalCenter for Biotechnology Information(NCBI)數(shù)據(jù)庫。例如，人或者小鼠顫蛋白的核苷酸以及氨基酸序列能夠在NCBI數(shù)據(jù)庫中分別以主索取號U24703和U79716找到(這些數(shù)據(jù)庫中的索取號這里以其整體引入作為參考)。小鼠和人的氨基酸序列具有94％的一致性，暗示小鼠和人顫蛋白多肽在結構上以及功能上具有高度類似性。正如PCT公開號WO03/063110中所討論的，該公開這里以其整體引入作為參考，在其N-端，顫蛋白具有可以裂解的信號肽，接著為類似于F-spondin的片段。顫蛋白還具有350-390氨基酸的8個中間重復，各自包含上皮生長因子-樣基序，側面為兩個相關的片段。中間重復系列前面為鏈結構域，并且接著為高度堿性的33氨基酸C-端結構域。
發(fā)現(xiàn)顫蛋白天然存在一或者多個不同的″大小形式″(顫蛋白蛋白具有不同的分子量)，這里還稱為顫蛋白成分″。全長的顫蛋白分子量為約410kD，并且天然的蛋白水解的產(chǎn)物存在，例如，約330kD和180kD的分子量。在個體中能夠檢測到的任何其他的顫蛋白大小形式也包括在本發(fā)明中。這些大小形式能夠利用本領域的方法輕易地檢測，包括，但是不限于，免疫印跡技術。
本發(fā)明的一些實施方案包括對患者給藥一定量的一種或者多種多不飽和脂肪酸(PUFAs)的步驟，并且更優(yōu)選地，高度不飽和的脂肪酸(HUFAs)，并且更優(yōu)選地，DHA，或者前體或者其他的其源。多不飽和脂肪酸(PUFAs)為多數(shù)真核細胞地膜脂質中的關鍵成分(Lauritzen等，Prog.Lipid Res.401(2001)；McConn等，Plant J.15，521(1998))，以及一些激素以及信號分子的前體(Heller等，Drugs 55，487(1998)；Creelman等，Annu.Rev.PlantPhysiol.Plant Mol.Biol.48，355(1997))。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的PUFA為長鏈的PUFA，為具有18個碳原子或者更長的PUFA。
任何PUFA來源能夠用于本發(fā)明的組合物和方法中，包括，例如，動物、植物以及微生物源。優(yōu)選的多不飽和脂肪酸(PUFA)源能夠為適合用于本發(fā)明的任何PUFAs來源。優(yōu)選的多不飽和脂肪酸源包括生物來源，如動物、植物和/或微生物源。這里使用的術語″脂質″包括磷脂；游離的脂肪酸；脂肪酸酯；三?；视停欢；视王?；單?；视王?；溶血脂質；皂類；磷脂；甾醇以及甾醇酯；類胡羅卜素；葉黃素(例如，氧合類胡蘿卜素)；烴；以及本領域的普通技術人員公知的其他的脂質。動物源的實例包括水生動物(例如，魚、海洋哺乳動物、甲殼類、輪蟲等)以及提取自動物組織(例如，腦、肝臟、眼睛等)的脂質。植物源的實例包括巨藻類、亞麻籽、油菜籽、玉米、夜來香、大豆以及琉璃苣。微生物的實例包括海藻、原生生物、細菌以及真菌(包括酵母)。利用微生物源，如海藻能夠提供影響器官優(yōu)勢，即，源自微生物源的脂肪酸可能不具有魚腥味道并且聞到魚源的脂肪酸。更優(yōu)選地，長鏈脂肪酸源包括海藻。
優(yōu)選地，當微生物為長鏈脂肪酸源的時候，微生物在發(fā)酵罐中在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)?；蛘?，微生物能夠在光生物反應器或者池中進行光合成培養(yǎng)。優(yōu)選地，微生物為富含脂質的微生物，更優(yōu)選地，微生物選自海藻、細菌、真菌以及原生生物。更優(yōu)選地，微生物選自金藻、綠藻、甲藻、酵母、被孢霉屬和Stramenopiles屬的真菌。優(yōu)選地，微生物包括屬Crypthecodinium以及破囊壺菌目以及被孢霉屬絲狀(真)菌的微生物，并且更優(yōu)選地，微生物選自破囊壺菌屬、Schizochytrium或者其混合物，并且更優(yōu)選地，微生物選自下述微生物，具有ATCC號20888、ATCC號20889、ATCC號20890、ATCC號20891以及ATCC號20892的識別特性、被孢霉屬schmuckeri株以及被孢霉屬alpina、Crypthecodinium cohnii株衍生自前述的突變株及其混合物。
根據(jù)本發(fā)明，術語″Thraustochytrid″、″破囊壺菌屬微生物″以及″破囊壺菌目微生物″能夠互換使用并且指破囊壺菌目的任何成員，其包括破囊壺菌科以及科網(wǎng)粘菌科。術語″Labyrinthulid″和″網(wǎng)粘菌科″這里用來具體地指科網(wǎng)粘菌科的成員。為了具體地指Thraustochytrids為破囊壺菌科的成員，這里使用術語″破囊壺菌科″。因此，對于本發(fā)明，Labyrinthulids的成員被認為包括在Thraustochytrids中。
發(fā)展導致Thraustochytrids的分類法經(jīng)常改變。分類法理論家一般性地將Thraustochytrids與藻類或者類藻類原生生物放在一起。但是，由于分類不明確，最好的方法是對于本發(fā)明認為本發(fā)明中描述為Thraustochytrids株包括下述生物體目破囊壺菌屬；科破囊壺菌科(屬破囊壺菌屬，Schizochytrium″Japonochytrium，Aplanochytrium，或者Elina)或者網(wǎng)粘菌科(網(wǎng)粘菌屬，Labyrinthuloides，或者Labyrinthomyxa)。此外，下述屬有時候包括在破囊壺菌科或者網(wǎng)粘菌科中Althornia，Corallochytrium，Diplophyrys以及Pyrrhosorus)，并且對于本發(fā)明包括在Thraustochytrid或者破囊壺菌目的成員中。公認的是在本發(fā)明有時候，Thraustochytrids分類的修改屬Labyrinthuloides放在科網(wǎng)粘菌科中并證實了將破囊壺菌科和網(wǎng)粘菌科放在Stramenopile世系的范圍之內。應該注意的是網(wǎng)粘菌科有時候稱為labyrinthulids或者網(wǎng)粘菌屬，或者labyrinthuloides并且破囊壺菌科一般稱為thraustochytrids，盡管，如上討論，為了清楚本發(fā)明的目的，Thraustochytrids包括破囊壺菌目的任何成員和/或包括破囊壺菌科以及網(wǎng)粘菌科的任何成員。最近的分類變化總結在下面。
這里公開的一些單細胞微生物株為破囊壺菌目的成員。Thraustochytrids為海洋真核細胞，具有進化的分類學歷史。有關Thraustochytrids的分類學位置的問題已經(jīng)由Moss(in″The Biology of Marine Fungi″，CambridgeUniversity Press p.105(1986))，Bahnweb以及Jackle(ibid.p.131)以及Chamberlain和Moss(BioSystems 21341(1988))評述。
為了方便的目的，Thraustochytrids首先由分類學家與其他的無色的動孢子真核細胞放在藻菌(類藻類真菌)下。名稱藻菌，但是，最終從分類學中剔除，并且Thraustochytrids保留在卵菌(雙鞭毛動孢子真菌)中。最初認為卵菌與異鞭毛藻類相關的，以及最終地廣泛的超結構以及生物化學研究，由Barr總結(Barr.Biosystems 14359(1981))，支持了該假定。卵菌實際上被Leedale(Leedale.Taxon 23261(1974))以及其他的藻類學專家作為異鞭毛藻類部分。但是，由于源自異養(yǎng)的特性的便利，卵菌以及Thraustochytrids主要由真菌學者(研究真菌的科學家)研究，而不是由藻類學專家(研究藻類的科學家)研究。
從另一種分類學來看，進化生物學者發(fā)展了兩派關于真核細胞進化的思想。一種理論認為膜-結合的細胞器通過一系列的內共生的外生起源(Margulis，1970，Origin of Eukaryotic Cell.Yale University Press，New Haven)；例如，線粒體源自細菌的endosymbionts，葉綠體源自藍藻類，并且鞭毛源自螺旋菌。其他的理論認為膜-結合的細胞器通過漸進的進化從非-膜-結合體系的原核祖先而來，通過自生過程(Cavalier-Smith，1975，Nature(Lond.)256462-468)。但是兩組進化生物學者將卵菌和Thraustochytrids從真菌種去除并將其放置在或者與色質體藻類放在界色質體下(Cavalier-SmithBioSystems 14461(1981))(該界最近已經(jīng)擴展到包括其他的原生生物并且該界成員現(xiàn)在稱為Stramenopiles)或者與所有的藻類放在界Protoctista下(Margulis和Sagen.Biosystems 18141(1985))。
隨著電子顯微鏡的發(fā)展，對兩個屬Thraustochytrids、破囊壺菌屬的游動孢子以及Schizochytrium的超結構的研究(Perkins，1976，pp.279-312 in″Recent Advances in Aquatic Mycology″(ed.E.B.G.Jones)，John Wiley & Sons，New York；Kazama.Can.J.Bot.582434(1980)；Barr，1981，Biosystems 14359-370)已經(jīng)提供了足夠的證據(jù)表明破囊壺菌科只與卵菌有較遠的關系。此外，5-S核糖體RNA序列的遺傳數(shù)據(jù)提供了相應的分析(多變量統(tǒng)計學形式)表明破囊壺菌屬清楚地為獨特的一組真核細胞，完全與真菌區(qū)分開，并且與紅以及褐藻類最相關，并且為卵菌的成員(Mannella等Mol.Evol.24228(1987))。最近分類學者已經(jīng)同意將Thraustochytrids從卵菌移出(Bartnicki-Garcia.p.389in″Evolutionary Biology of the Fungi″(eds.Rayner，A.D.M.，Brasier，C.M.& Moore，D.)，Cambridge University Press，Cambridge)。
總之，利用Cavalier-Smith的分類學系統(tǒng)(Cavalier-Smith.BioSystems 14461(1981)；Cavalier-Smith.Microbiol Rev.57953(1993))，Thraustochytrids與色質體藻類一起歸類于界Chromophyta(Stramenopiles)。該分類學布置最近由Cavalier-Smith等再次肯定，利用不等鞭毛(藻)門的18srRNA信號證實Thraustochytrids為chromists而不是真菌(Cavalier-Smith等Phil.Tran.Roy.Soc.London Series BioSciences 346387(1994))。這種放置將Thraustochytrids與真菌放在完全不同的界，真菌都放在界Eufungi中。
目前，有71組完全不同的真核生物體(Patterson.Am.Nat.154S96(1999))并且在這些組種，基于下述原因分為四個主要的世系(1)Alveolates，(2)Stramenopiles，(3)a Land Plant-green藻類-Rhodophyte-Glaucophyte(″plant″)進化枝以及(4)Opisthokont進化枝(真菌以及動物)。以前這四個主要的世系會被標上界但是使用″界″概念不再被一些研究者認為有用。
如Armstrong所注意到的，Stramenopile指三股-分開的管狀絨毛，并且絕大多數(shù)該世系的成員具有帶有這些絨毛的鞭毛。Stramenopiles的能動細胞(單細胞生物體、精子、游動孢子)是不對稱的具有兩個側部附著的鞭毛，一個長，帶有三股-分開的管狀絨毛，其反轉鞭毛的推進，并且一個短并且光滑。以前，當該組范圍較窄的時候，Stramenopiles稱為界Chromista或者heterokont(＝不同的鞭毛)藻類，由于這些組包括褐藻類或者Phaeophytes以及黃-綠藻類、金-褐藻類、Eustigmatophytes以及Diatoms。隨后，一些異養(yǎng)的、真菌樣的生物體、水霉以及l(fā)abyrinthulids(slime net amoebas)，發(fā)現(xiàn)具有類似的運動細胞，稱為光合顏料或者藻類的名稱就不合適。目前，Stramenopile世系中的兩個科為網(wǎng)粘菌科和破囊壺菌科。歷史上，對這些獨特的微生物存在許多分類策略并且它們通常歸類在相同的目(即，破囊壺菌屬)下。該組成員中的關系仍然在發(fā)展。Porter以及Leander發(fā)展了基于18S小亞基核糖體DNA的數(shù)據(jù)，表明thraustochytrid-labyrinthulid進化枝是單源的。但是，進化枝被兩個分支支持；第一個包括破囊壺菌屬和Ulkeniaprofunda中的3個物種，并且第二支包括網(wǎng)粘菌屬中的3個物種，Labyrinthuloides和Schizochytrium aggregatum中的兩個物種。
用于本發(fā)明的Thraustochytrids分類學放置因此總結如下界色質界(Stramenopiles)門不等鞭毛(藻)門目破囊壺菌屬(Thraustochytrids)科破囊壺菌科或者網(wǎng)粘菌科屬破囊壺菌屬，Schizochytrium，Japonochytrium，Aplanochytrium，Elina，網(wǎng)粘菌屬、Labyrinthuloides，或者Labyrinthulomyxa一些早期的分類學者將破囊壺菌屬中的數(shù)種最初成員(具有似變形蟲生命階段的那些)分到另外一個稱為Ulkenia的屬中。但是現(xiàn)在已經(jīng)直到，盡管不是所有也是大多數(shù)Thraustochytrids(包括破囊壺菌屬以及Schizochytrium)，顯示似變形蟲階段并因此，一些學者并不認為Ulkenia是有效的屬。這里使用的破囊壺菌屬包括Ulkenia。
盡管在門和界的高級分類中分類學位置不確定，Thraustochytrids保持了特色以及特征性質分組，其成員仍然可以分類到破囊壺菌目中。有關所述的微生物及其培養(yǎng)微生物的方法參見U.S.5,407,957；5,130,242和5,340,594，這里以其整體引入作為參考。
被本發(fā)明覆蓋的脂質包括脂質包括多不飽和脂肪酸，更具體地，長鏈多不飽和脂肪酸，并且甚至更具體地，多不飽和脂肪酸在所述的脂質具有至少18、20或者22個碳鏈長度的。所述的多不飽和脂肪酸能夠具有至少3或者至少4雙鍵。更具體地，多不飽和脂肪酸能夠包括二十二碳六烯酸(至少10、20、30或者35重量百分比)，二十二碳五烯酸(至少5、10、15，或者20重量百分比)，和/或花生四烯酸(至少20、30、40或者50重量百分比)。多不飽和的脂肪酸包括游離的脂肪酸以及包括PUFA殘基的化合物，包括磷脂；脂肪酸酯；三酰基甘油；二?；视王ィ粏熙；视王?；溶血磷脂；磷脂；等。
磷脂的來源包括家禽蛋、強化家禽蛋、藻、魚、魚籽以及基因工程(GE)植物籽或者藻。具體地優(yōu)選的PUFAs源，包括DHA包括，但不限于，魚油、海洋藻以及植物油。
優(yōu)選的PUFA，DHA的前體，包括，但不限于，a-亞麻酸(LNA)；二十碳五烯酸(EPA)；二十二碳五烯酸(DPA)；LNA、EPA，和/或DPA的混合物。
在本發(fā)明的一個實施方案中，脂肪酸并且具體地，ω-3脂肪酸和ω-6脂肪酸的混合物能夠用于本發(fā)明的方法中。
優(yōu)選的PUFAs包括ω-3和ω-6多不飽和脂肪酸具有3個或者多個雙鍵。ω-3 PUFAs為多乙烯類型的脂肪酸其中最后的乙烯鍵為3碳形式并包括脂肪酸的末端甲基并包括，例如，二十二碳六烯酸C226(n-3)(DHA)以及ω-3二十二碳五烯酸C225(n-3)(DPAn-3)。ω-6 PUFAs為多乙烯型脂肪酸，其中作后的乙烯鍵為6碳形式并脂肪酸的末端甲基并包括，例如，花生四烯酸C204(n-6)(ARA)，C224(n-6)，ω-6二十二碳五烯酸C225(n-6)(DPAn-6)以及二高γ亞麻酸C203(n-6)(二高GLA)。
根據(jù)本發(fā)明，可用于這里描述的補充劑以及治療性組合物中的長鏈的脂肪酸為多種形式。例如，所述的形式包括，但不限于包括PUFA的高度純化的海藻油，包括PUFA的甘油三酸酯油，包括PUFA的磷脂，包括PUFA的蛋白和磷脂的組合，包括PUFA的干燥的海洋微藻，包括PUFA的鞘類磷脂，PUFA的酯類、游離脂肪酸、PUFA與另一中生物活性分子的偶聯(lián)物及其組合。生物活性分子能夠包括任何合適的包括，但是不限于，蛋白、氨基酸(例如天然存在的氨基酸如DHA-氨基乙酸、DHA-賴氨酸，或者氨基酸類似物)、藥物以及糖。
這里列出的形式容許食品制劑在具有高度的感覺性質、飲食補充以及藥物方面具有靈活性。例如，目前已有的微海藻油包含約40％DHA。這些油能夠轉化為酯的形式并且然后利用技術如分子蒸餾的技術純化使DHA含量達到70％以及更高，提供濃縮的產(chǎn)品，能夠用于大小受限的產(chǎn)品，即，小的服務大小如具有受限的可行的口服大小的嬰兒食品或者飲食補充劑。油以及磷脂組合的使用有助于提高氧化穩(wěn)定性并且因此微海藻油的感覺以及以及營養(yǎng)性品質。氧化裂解損害了營養(yǎng)性甘油三酸酯形式的PUFAs的感覺品質。通過利用磷脂形式，需要的PUFAs更為穩(wěn)定并且脂肪酸更加生物可利用，當為甘油三酸酯形式的時候。盡管微生物油比通常的魚油更穩(wěn)定，二者都易氧化降解。氧化降解降低了這些脂肪酸的營養(yǎng)價值。此外氧化的脂肪酸據(jù)信對健康有害。利用磷脂DHA/DPA/ARA/二高-GLA，一種更穩(wěn)定的脂肪酸體系，提高了這些補充劑的健康以及營養(yǎng)價值。與甘油三酸酯油相比，磷脂還更易于混合到水體系中。利用蛋白以及磷脂組合可以形成更營養(yǎng)的復合食品制劑，由于蛋白和脂肪酸二者都提供。利用干燥的海洋微藻在其中提供高溫穩(wěn)定的油，并且對在高溫焙烤食品的制劑是游離的。
在本發(fā)明的一個實施方案中，需要的磷脂源包括源自蛋、植物油以及動物器官的純化的磷脂，利用Friolex方法制備以及磷脂萃取過程(PEP)(或相關的方法)用于制備富含DHA，DPA，ARA和/或二高-GLA的營養(yǎng)性補充劑。Friolex和PEP以及相關的方法更詳細地記載在下述專利文獻中PCT專利PCT/IB01/00841，標題″Method for the Fractionation ofOil and Polar Lipid-Containing Native Raw Material″，2001年4月12日提交，以WO01/76715在2001年10月18日出版；PCT/IB01/00963，標題″Method for theFractionation of Oil and Polar Lipid-Containing Native Raw Material UsingAlcohol and Centrifugation″，2001年4月12日提交，以WO01/76385在2001年10月10日出版；以及PCT/DE95/01065標題″Process For ExtractingNative Product Which Are Not Water-Soluble From Native Substance MixturesBy Centrifugal Force″，1995年8月12日提交，以WO 96/05278在1996年2月22日出版；每篇專利這里以其全文引入作為參考。
優(yōu)選地，高度純化的海藻油包括需要的甘油三酸酯形式的PUFA、甘油三酸酯油組合磷脂、單獨磷脂、蛋白和磷脂組合，或者干燥的海洋微藻，包括選自由DHA和/或DPA(n-3)和/或DPA(n-6)和/或ARA和/或二高-GLA制成的脂肪酸殘基。更優(yōu)選地，高度純化的海藻油包括甘油三酸酯形式的需要的PUFA、甘油三酸酯油組合磷脂、單獨磷脂、蛋白和磷脂組合，或者干燥的海洋微藻，包括選自由DHA、ARA或者DPA(n-6)制成的脂肪酸殘基。更優(yōu)選地，高度純化的海藻油包括甘油三酸酯形式的需要的PUFA、甘油三酸酯油組合磷脂、單獨磷脂、蛋白和磷脂組合，或者干燥的海洋微藻，包括選自由DHA和DPA(n-6)制成的脂肪酸殘基。在最優(yōu)選的實施方案中，高度純化的海藻油包括甘油三酸酯形式的需要的PUFA、甘油三酸酯油組合磷脂、單獨磷脂、蛋白和磷脂組合，或者干燥的海洋微藻，包括DHA的脂肪酸殘基。
盡管脂肪酸如DHA能夠局部給藥或者以注射劑型給藥，最優(yōu)選的給藥途徑是口服給藥。優(yōu)選地，脂肪酸(例如，PUFAs)以營養(yǎng)性補充劑和/或食品和/或藥用制劑和/或飲料的形式對患者給藥，更優(yōu)選地食品、飲料，和/或營養(yǎng)性補充劑，更優(yōu)選地，食品和飲料，更優(yōu)選地食品。
對于嬰兒，脂肪酸以嬰兒制劑、斷奶食品、罐裝嬰兒食品以及嬰兒米粉的形式對嬰兒給藥。
任何生物可以接受的劑型及其組合，都包括在本發(fā)明的主題之中。所述劑型的實例包括，不限于，咀嚼片劑、速溶片劑、泡騰片劑、可重構粉末、酏劑、液體、溶液、混懸劑、乳劑、片劑、多層片劑，雙層片劑、膠囊、軟明膠膠囊、硬明膠膠囊、囊片、錠劑、咀嚼錠劑、小珠、粉末、顆粒、粒、微粒、可分散顆粒、扁囊劑、灌腸劑、栓劑、乳膏劑、局用劑型、吸入劑、氣霧吸入劑、貼劑、粒吸入劑、植入劑、長效植入劑、可吸收劑、注射劑、輸液劑、health bars、糖膏劑、米粉、米粉敷料、食品、營養(yǎng)食品、功能性食品及其組合。上述制劑形式的配制對本領域的普通技術人員而言是公知的。優(yōu)選地，用需要的PUFA強化的食品選自包括，但是不限于焙烤物品及其混合物；口香糖；早餐米粉食物；干酪產(chǎn)品；堅果以及基于堅果的產(chǎn)品；白明膠、布丁以及餅餡；冰冷奶制品；牛奶產(chǎn)品；牛奶產(chǎn)品類似物；軟糖；湯以及湯混合物；快餐食品；加工的果汁；加工的蔬菜汁；脂肪以及油類；魚產(chǎn)品；植物蛋白產(chǎn)品；家禽產(chǎn)品；以及肉類產(chǎn)品。
對患者給藥PUFA的量能夠為適合提供下述結果的任何量補償所述的患者中降低的脂肪酸結合蛋白或者其功能；補償所述的患者中降低的腦脂質結合蛋白或者其功能；改善所述的患者中脂肪酸結合蛋白的活性；增加所述的患者中腦脂質結合蛋白(BLBPs)的表達；改善所述的患者中腦脂質結合蛋白作用機制中至少一個參數(shù)；克服中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)結構及其功能中脂肪酸如DHA的缺乏；增加功能性脂肪酸如DHA向患者中神經(jīng)膠質細胞和神經(jīng)元磷脂膜中摻入；增加所述的患者中顫蛋白的水平和/或改善顫蛋白的活性；和/或改善與顫蛋白缺乏或者機能不良相關疾病或者病癥的至少一種癥狀。在一個實施方案中，脂肪酸(PUFA)以從約0.05mg的PUFA每公斤患者體重至約200mg的PUFA每公斤患者體重或者更高的劑量給藥，包括在其之間0.01mg增量的任何增量，(例如，0.06mg，0.07mg等)，或者劑量范圍在約50mg和約20,000mg每個對象每天之間，通過口服、注射、乳劑或者總腸胃外營養(yǎng)、局部、腹膜內、胎盤、透皮或者顱內給藥。典型的膠囊DHA補充劑例如，可以制備成為100mg至200mg劑量每膠囊，盡管本發(fā)明不限于膠囊形式或者包含這些量的DHA或者另一種PUFA的膠囊。在本發(fā)明的一個實施方案中，對患者給藥PUFA補充劑組合一種或者多種治療化合物用于治療與顫蛋白缺乏或者機能不良相關病癥。針對特定的治療的疾病或者病癥而言，所述的治療化合物對本領域的普通技術人員而言是公知的。
如上討論，對選擇的患者給藥PUFA補充劑如DHA優(yōu)選地一或者多種下述結果補償所述的患者中降低的脂肪酸結合蛋白或者其功能；補償所述的患者中降低的腦脂質結合蛋白或者其功能；改善患者中脂肪酸結合蛋白的活性；改善患者中腦脂質結合蛋白作用機制的至少一個參數(shù)；導致功能性DHA摻入到所述的患者中神經(jīng)膠質細胞和神經(jīng)元的磷脂膜中的增加；顫蛋白水平的增加和/或患者中顫蛋白活性的改善。在一個實施方案中，患者罹患與顫蛋白缺乏或者機能不良相關聯(lián)的疾病或者病癥，并且對患者給藥PUFA改善所述疾病或者病癥的至少一種癥狀。
接受治療的患者能夠為處于發(fā)展任何與顫蛋白缺乏或者機能不良相關聯(lián)的疾病或者病癥的風險中或者可能已經(jīng)罹患任何與顫蛋白缺乏或者機能不良相關聯(lián)的疾病或者病癥。所述的疾病和病癥，包括，但不限于神經(jīng)病癥或者神經(jīng)精神病癥、癲癇發(fā)作、與神經(jīng)機能不良相關的自體免疫病癥，以及抗-磷脂病癥。更具體地，所述的疾病或者病癥包括，但不限于精神分裂癥、雙相性精神障礙、誦讀困難、運動障礙、注意力不集中的過度反應癥(ADHD)、癲癇、孤獨癥、帕金森病、老年癡呆、阿耳茨海默(氏)病、過氧化物酶體增殖子激活疾病(PPAR)、多發(fā)性硬化癥、糖尿病誘導的神經(jīng)疾病、黃斑變性、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、亨延頓(氏)舞蹈病、肌萎縮側索硬化(ALS)、色素性視網(wǎng)膜炎、腦性麻痹、肌肉萎縮癥、癌癥、囊性纖維化病、神經(jīng)管缺陷、抑郁癥、澤韋格綜合征、無腦回、唐氏綜合征、肌肉-眼睛-腦疾病、Walker-Warburg綜合征、Charoct-Marie-Tooth疾病、包涵體肌炎(IBM)以及Aniridia。
優(yōu)選地，對患者給藥PUFA如DHA預防與顫蛋白缺乏或者機能不良相關的疾病或者病癥的至少一種癥狀、延遲發(fā)作，或者減少嚴重程度或者持續(xù)。在優(yōu)選的實施方案中，患者不再罹患不適和/或改變的功能，源自不合適的顫蛋白水平或者與不合適的顫蛋白水平相關或者為本發(fā)明的方法的結果。
同樣地，治療性益處并不必要地治愈具體的疾病或者病癥，而是，優(yōu)選地包含下述結果最通常包括減輕所述疾病或者病癥、消去所述疾病或者病癥、減少與疾病或者病癥相關聯(lián)的癥狀、補償或者恢復至正常的細胞或者細胞內機制，預防或者減輕源自原發(fā)的疾病或者病癥的繼發(fā)的疾病或者病癥、和/或預防所述疾病或者病癥。這里使用的，術語″預防疾病″指減輕所述疾病的癥狀；減少所述疾病的發(fā)生，和/或降低疾病的嚴重程度。保護患者能夠指本發(fā)明的組合物，當對患者給藥后，預防疾病發(fā)生和/或治愈或者減輕疾病癥狀、征候或者病因的能力。同樣地，保護患者以免患疾病包括預防疾病發(fā)生(預防性治療)以及治療患有疾病的患者(治療性治療)。有益的作用能夠輕易地由本領域的普通技術人員和/或由治療患者的接受過訓練的臨床醫(yī)生評估。術語，″疾病″指哺乳動物的正常健康的任何偏離并包括下述狀態(tài)，其中存在疾病癥狀，以及其中偏離(例如，感染、基因突變、遺傳缺陷等)已經(jīng)發(fā)生但是癥狀還沒有顯示出來的情形。根據(jù)本發(fā)明，″患者″不是必要地具有疾病、病癥或者顫蛋白缺乏或者機能不良或者不是必要地處于發(fā)展疾病、病癥或者顫蛋白缺乏或者機能不良的風險中，但是，該術語能夠與″對象″、″個體″互換，并且最一般性地指個體動物(例如，人對象或者馴養(yǎng)地動物)，其接受本發(fā)明的方法或者組合物進行評價、診斷、治療或者其他的作用。
許多上述本發(fā)明方法的一個步驟包括檢測、測量或者評價患者生物樣品中的顫蛋白表達或者生物活性。樣品能夠為細胞樣品、組織樣品和/或體液樣品。根據(jù)本發(fā)明，術語″細胞樣品″可以用來一般性地指任何類型的樣品，其包含利用本發(fā)明進行評價的細胞，包括但是不限于，分離的細胞樣品、組織樣品和/或體液樣品。根據(jù)本發(fā)明，分離的細胞樣品為細胞樣本，通常為懸浮狀態(tài)或者從結締組織分離得到，在體內的組織中連接細胞，其從器官、組織或者流體收集得到，利用任何合適的方法以收集合適數(shù)目的細胞以用于利用本發(fā)明的方法進行評價。細胞樣品中的細胞并不必須地為同樣類型，盡管純化方法能夠用來富集優(yōu)選地進行評價的同樣類型的細胞。細胞能夠利用下述方法得到，例如，通過刮組織，處理組織樣品以釋放單個細胞，或者從體液中分離得到。組織樣品，盡管與分離的細胞樣品類似，這里定義為身體器官或者組織的部分，通常包括數(shù)種細胞類型和/或細胞骨架結構，后者支持細胞在一起。本領域的普通技術人員將意識到術語″組織樣品″在某些情形下與″細胞樣品″互換使用，盡管其優(yōu)選地用來表明比細胞樣品更復雜的結構。組織樣品能夠通過活組織檢查得到，例如，包括通過切、切(片)，或者刺的方式。體液樣品，與組織樣品一樣，可以包含細胞并且為利用適于進行取樣的具體體液的任何方法獲得的液體。適合取樣的體液包括，但不限于，血液、黏液、精液、唾液、乳汁、膽汁以及尿。在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，生物樣品為血液樣品，包括任何血液組分(例如，全血液、血漿、血清)。
通常，樣品類型(即，細胞、組織或者體液)基于樣品的易得到以及所述的方法的目的進行選擇。通常，能夠利用最少侵入的方法得到的生物樣品是優(yōu)選的(例如，血液)，盡管在一些實施方案中，得到細胞或者組織樣品用于評價有用或者必須。一旦從患者獲得樣品，樣品用于評價檢測樣品細胞中的顫蛋白表達或者生物活性。術語″顫蛋白表達″能夠一般性地指顫蛋白mRNA轉錄或者顫蛋白蛋白翻譯(例如，檢測樣品中顫蛋白的蛋白量)。優(yōu)選地，所述的檢測患者中顫蛋白表達或者生物活性的方法與下述方法相同或者性質上等價用于檢測樣品中顫蛋白表達或者生物活性以建立顫蛋白基線或者對照水平的方法。
適于檢測顫蛋白轉錄的方法包括用于檢測和/或測量流體、細胞或者細胞提取物中mRNA水平的任何合適的方法。所述的方法包括，但不限于聚合酶鏈式反應、逆轉錄酶-PCR(RT-PCR)、原位雜交、Northern印跡、序列分析、微陣列分析以及報告基因的檢測。用于檢測轉錄水平的方法在本領域中是公知的，并且許多這樣的方法已經(jīng)描述，例如，在Sambrook等，Molecular CloningA Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Labs Press，1989和/或在Glick等，Molecular BiotechnologyPrinciples and Applicationsof Reconbinant DNA，ASM Press，1998；Sambrook等，ibid.and Glick等，ibid.中，這里以其整體引入作為參考。當樣品為細胞或者組織樣品的時候，顫蛋白轉錄的測量主要合適的；因此，當樣品是包含細胞或者細胞提取物的體液樣品的時候，細胞通常從體液中分離出來以進行表達測定。
顫蛋白表達還能夠通過檢測顫蛋白翻譯進行確定(即，檢測樣品中的顫蛋白蛋白)。適于檢測顫蛋白蛋白的方法包括用于檢測和/或測量蛋白流體、細胞或者細胞提取物中的任何適合方法。所述的方法包括，但不限于，蛋白質印跡、免疫印跡、酶-聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫測定(RIA)、免疫沉淀反應、表面等離振子共振、化學發(fā)光、熒光偏振、磷光、免疫組織化學分析、基質-輔助激光解吸/離子時間飛行(MALDI-TOF)質譜、微細胞術、微陣列、顯微鏡、熒光激活細胞分選(FACS)、流式細胞術、以及蛋白質微芯片或微陣列。所述的方法在本領域中是公知的?？诡澋鞍椎目贵w已經(jīng)制備出來并記載在現(xiàn)有技術中(例如，參見，Ogawa等，1995，Neuron，14890-912；DeBergeyck等，1998，J；Neurosci.15 Meth.，8217-24)并且能夠用于測定檢測顫蛋白蛋白。在PCT公開號WO03/063110中，例如，免疫印跡技術用來檢測患有各種神經(jīng)/心理病癥患者的血液樣品中的顫蛋白大小形式并與基線對照群中的顫蛋白水平進行比較。所述的方法可以用于檢測生物樣品中的顫蛋白，盡管對本領域的普通技術人員而言，多種顫蛋白檢測和測量技術能夠用來評價個體中的顫蛋白狀況。
或者，可以利用本領域中公知的技術輕易地制備抗顫蛋白的抗體。選擇性結合樣品中的顫蛋白抗體能夠利用本領域已知的顫蛋白蛋白信息產(chǎn)生。更具體地，術語″選擇性結合″指一種蛋白與另一種蛋白(例如，對應抗原的抗體、其片段，或者結合伴侶)的特異性結合，其中結合水平，可以利用標準的測定測量(例如，免疫測定)，統(tǒng)計學上顯著地高于用于測定的背景對照。例如，當進行免疫測定的時候，對照通常包括單獨包含抗體或者抗原結合片段(即，不存在抗原)反應孔/管，其中在不存在抗原的情形下，抗體或者其抗原結合片段的反應量(例如，對孔的非特異結合)被認為是背景。結合能夠利用本領域中的多種標準方法進行測量，包括酶免疫測定(例如，ELISA)，免疫印跡測定等)。用于測定試劑盒以及本發(fā)明的方法中的抗體能夠包括多克隆和單克隆抗體、二價以及單價抗體、二-或多-特異抗體、包含所述抗體的血清、已經(jīng)純化至一定程度的抗體以及全抗體的任何功能性等價物。本發(fā)明的分離的抗體能夠包括包含所述抗體的血清，或者已經(jīng)純化至一定程度的抗體。本發(fā)明的全抗體能夠為多克隆或者單克隆?；蛘?，全抗體功能性等當物，如抗原結合片段其中一或者多個抗體結構域被截短或者不存在(例如，F(xiàn)v、Fab、Fab′，或者F(ab)2片段)，以及基因工程抗體或者其抗原結合片段，包括單鏈抗體或者能夠結合多于一個表位的抗體(例如，二-特異抗體)，或者能夠結合一個或者多個不同的抗原的抗體(例如，二-或多-特異抗體)，也可以用于本發(fā)明。
基因工程抗體包括利用標準的重組DNA技術產(chǎn)生的那些，涉及編碼抗體可變和/或不變區(qū)域的DNA的操作以及再表達。具體的實例包括，嵌合型抗體，其中抗體的VH和/或VL結構域以及抗體的其他部分來自不同的來源，以及CDR嫁接抗體(以及其抗原結合片段)，其中至少一個CDR序列以及任選地至少一個可變區(qū)域骨架的氨基酸來自一個來源并且一個源并且可變以及不變區(qū)域(適當?shù)?的剩余部分來自不同的來源。嵌合以及CDR-嫁接抗體地構建記載在例如歐洲專利申請EP-A 0194276、EP-A 0239400、EP-A0451216和EP-A 0460617中。
一般性地，在產(chǎn)生抗體的時候，合適的實驗動物，如，例如，但是不限于，兔、羊、倉鼠、豚鼠、小鼠、大鼠或者雞，暴露于需要產(chǎn)生抗體的抗原。通常，動物用有效量的抗原進行免疫，注射到動物中。有效量的抗原指誘導動物產(chǎn)生抗體的需要量。動物的免疫系統(tǒng)然后反應預定的一段時間。免疫過程能夠重復直到免疫系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生針對抗原的抗體。為了得到抗原特異的多克隆抗體，從包含需要的抗體的動物收集血清(或在雞的情形下，抗體能夠從蛋收集得到)。所述的血清可以用作試劑。多克隆抗體能夠可以從血清(或者蛋)純化，利用，例如，將血清用硫酸銨處理。
單克隆抗體可根據(jù)Kohler和Milstein的方法制備(Nature 256495-497，1975)。例如，從免疫的動物的脾臟(或者任何合適的組織)收集B淋巴細胞并且然后與骨髓瘤細胞融合以得到雜交瘤細胞群，后者能夠在合適的培養(yǎng)基中生長。通過檢測雜交瘤產(chǎn)生的抗體與需要的抗原的結合選擇產(chǎn)生需要抗體的雜交瘤。
如上討論，發(fā)現(xiàn)顫蛋白在患者中存在一或者多種不同的″大小形式″(具有不同的分子量的顫蛋白蛋白)。這些″顫蛋白成分″或者″大小形式″還可以進行檢測并將一種與另外一種進行比較，或者具體大小形式的顫蛋白(顫蛋白成分)能夠與基線或者對照樣品中的同樣的顫蛋白成分(同樣分子量的顫蛋白成分)進行比較。此外，可以檢測患者生物樣品中的不同的顫蛋白大小形式比率，或者譜，并將所述的譜與基線對照進行比較。需要檢測的特別有用的顫蛋白大小形式(成分)包括具有表觀分子量約410kD(全長顫蛋白)以及天然存在的蛋白酶解約330kD以及180kD的產(chǎn)品。利用許多上述檢測顫蛋白蛋白的方法，能夠檢測顫蛋白大小形式并將一種與另一種進行區(qū)分。檢測樣品中顫蛋白蛋白水平的方法，包括顫蛋白大小形式，還詳細地記載在PCT公開WO 03/063110中，這里以其整體引入作為參考。例如，在該公開中，測定了患重度抑郁癥、精神分裂癥、雙相性精神障礙病癥地患者中的顫蛋白大小形式的比率以及數(shù)量與正常(未受累)對照的顫蛋白大小形式水平在統(tǒng)計學上顯著地不同。類似的結果也在孤獨癥患者及其家族成員中，與家族中沒有孤獨癥的對照對象相比。因此，測試對象生物樣品中的顫蛋白大小形式相對水平以及顫蛋白中的總體水平的變化的檢測，能夠輕易地與對照或者基線水平進行比較以評價給定測試對象中的顫蛋白狀況并因此確定顫蛋白缺乏或者機能不良，包括顫蛋白異常。
術語″顫蛋白生物活性″指顫蛋白蛋白任何生物作用，包括，但是不限于，結合顫蛋白受體(例如，鈣粘蛋白-相關的神經(jīng)受體，B1-類整聯(lián)蛋白、低密度脂蛋白受體，以及具體地，VLDLR和ApoER2)，顫蛋白受體的激活、顫蛋白細胞信號轉導通路的激活(例如，cdk5/p35對Dab1的酪氨酸磷酸化)；以及由于顫蛋白結合結合受體的下游的生物事件(例如，磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)，Akt和Src家族激酶(SFKs)的激活；蛋白如Notch、NckB、erbB2、erbB4、神經(jīng)調節(jié)蛋白的上調；星形膠質細胞形態(tài)轉化為放射神經(jīng)膠質細胞；神經(jīng)受體表達上調；腦脂質結合蛋白(BLBPs)上調等)。檢測顫蛋白生物活性的方法是本領域中公知的并包括，但不限于，受體-配體測定以及磷酸化測定。
本發(fā)明的診斷和監(jiān)測方法具有不同的用途。首先，所述的方法能夠用來診斷以及監(jiān)測具有給定病癥(例如，神經(jīng)病癥)大量患者中的具有顫蛋白缺乏或者機能不良患者亞組，其最可能受益于本發(fā)明的方法(例如，利用PUFAs補充)。所述的方法還能夠用來診斷并監(jiān)測患者，通過確定具有DHA或者其他的PUFA缺乏，或者脂肪酸結合蛋白(FABP)缺乏或者機能不良的患者，或者確定具有DHA或者其他的PUFA缺乏或者FABP缺乏或者機能不良可能性的患者。所述的患者能夠為懷疑具有DHA或者其他的PUFA缺乏或者FABP缺乏或者機能不良的個體，或者認為為健康的個體，但是接受DHA或者其他的PUFA缺乏或者FABP缺乏或者機能不良的常規(guī)檢測。患者還能夠以前診斷患有DHA或者其他的PUFA缺乏或者FABP缺乏或者機能不良并接受治療的個體，并且接受關于再發(fā)DHA或者其他的PUFA缺乏或者aFABP缺乏或者機能不良常規(guī)的監(jiān)督。
術語″診斷″、″診斷″、″接受診斷″及其變體指在征候以及癥狀的基礎上確定疾病或者病癥。這里使用的，″陽性診斷″表明已經(jīng)確定所述疾病或者病癥，或者發(fā)展所述疾病或者病癥的可能，或者需要PUFA補充等。與此不同的是，″陰性診斷″表明沒有確定疾病或者病癥，或者發(fā)展疾病或者病癥的可能，或者PUFA補充的需要。因此，在本發(fā)明中，陽性診斷(即，陽性評估)DHA或者其他的PUFA缺乏或者FABP缺乏或者機能不良，或者其可能性，指根據(jù)本發(fā)明的DHA或者其他的PUFA缺乏或者FABP缺乏或者機能不良(例如，顫蛋白缺乏或者機能不良)的標志(例如，征候、癥狀)已經(jīng)在患者樣品識別出來。然后所述的患者能夠接受治療以減少或者消除DHA或者其他的PUFA缺乏或者FABP缺乏或者機能不良。類似地，陰性診斷(即，陰性評估)DHA或者其他的PUFA缺乏或者FABP缺乏或者機能不良，或者其可能性指，DHA或者其他的PUFA缺乏或者FABP缺乏或者機能不良，或者發(fā)展如這里描述的DHA或者其他的PUFA缺乏或者FABP缺乏或者機能不良的可能性(例如，顫蛋白缺乏或者機能不良)的標志(例如，征候、癥狀)沒有在患者樣品識別出來。在這種情形下，患者通常不接受任何治療，或者接受低水平DHA或者其他的PUFA補充，但是在將來的時間再評價一次或者多次以評估DHA或者其他的PUFA缺乏或者FABP缺乏或者機能不良。針對評估本發(fā)明的方法的該具體實施方案的基線水平通?；趤碜酝瑯由眢w源作為測試樣品的″正?！寤蛘摺褰】怠鍢悠?即，同樣的組織、細胞或者體液)，詳細討論如下。
在本發(fā)明的該方法的一個實施方案中，所述的方法用來監(jiān)測治療患者中顫蛋白缺乏或者機能不良、PUFA缺乏、脂肪酸結合蛋白缺乏或者機能不良，或者與其相關的病癥或者疾病的治療成功或者失敗，所述的患者已經(jīng)診斷出具有一種病癥。在該實施方案中，顫蛋白表達或者生物活性的基線水平通常包括源自待監(jiān)測患者樣品種檢測的顫蛋白表達或者生物活性的在先水平，因此，新顫蛋白表達或者生物活性的水平能夠進行比較以判斷顫蛋白、PUFA和/或脂肪酸結合蛋白表達或者功能是降低、增加，或者基本上沒有變化，與以前或者第一個樣品相比。此外，或者，已建立的顫蛋白表達或者生物活性的″正?！寤蛘摺褰】怠寤€水平能夠用于該實施方案。該實施方案容許醫(yī)護人員監(jiān)測患者治療(例如，PUFA補充)的成功，或者失敗，所述的患者患有指定的病癥(例如神經(jīng)病癥)，并且能夠幫助醫(yī)護人員判斷治療是否應該調整(例如，PUFA補充是否應該增加、降低的，或者保持完全一樣)。在一個本發(fā)明的實施方案中，所述的方法包括調整針對患者的PUFA補充治療的另外的步驟，基于通過評價所述的患者中的顫蛋白表達和/或生物活性判斷PUFA缺乏是增加或者降低。
因此，本發(fā)明的診斷和監(jiān)測方法包括比較患者樣品中檢測的顫蛋白表達或者生物活性的水平以及顫蛋白表達或者生物活性的基線水平的步驟。根據(jù)本發(fā)明，″基線水平″是對照水平，并且在一些實施方案中，顫蛋白表達或者活性的正常水平以及顫蛋白表達或者生物活性的測試水平(即，患者樣品中)能夠進行比較。因此基于顫蛋白表達或者生物活性的對照或者基線水平，能夠判斷，評價的樣品中顫蛋白表達或者生物活性是否具有可測量的增加、降低或者基本上沒有變化，與相比基線水平。與這里討論，基線水平能夠為所述的患者中脂肪酸結合蛋白的水平和/或功能中的指標，并且具體地，患者中PUFA水平(例如，DHA)，并且能夠用來建立所述的患者中DHA和/或其他的PUFA補充的方案。例如，顫蛋白基線水平能夠為正常(即，健康或者陰性對照)患者的腦或者其他的組織中預期的DHA水平或者其他的PUFA水平。因此，用來指顫蛋白表達或者生物活性基線水平的術語″陰性對照″指利用源自患者的或者個體群樣品已建立的基線水平，對于顫蛋白表達和/或功能而言是正常的。在另一實施方案中，基線能夠為DHA缺乏或者脂肪酸結合蛋白缺乏或者機能不良的陽性診斷的指標。所述的基線水平，還這里還稱為″陽性對照″基線，指源自患者、另一患者，或者個體群樣品已建立的顫蛋白表達或者生物活性水平，其中樣品中的顫蛋白水平或者功能據(jù)信相應于DHA或者其他的PUFA或者脂肪酸結合蛋白缺乏或者相應于與顫蛋白缺乏或者機能不良相關的疾病或者病癥。在另一實施方案，基線水平能夠基于源自已經(jīng)測試的患者的在先樣品建立，因此患者的顫蛋白狀況和PUFA狀況能夠隨之間監(jiān)測。檢測顫蛋白表達或者生物活性的方法已經(jīng)在上面詳細描述。
建立顫蛋白表達或者活性基線水平的方法基于樣品類型、獲得樣品的組織或者器官、評價患者的狀況，并且，如上討論，測定的焦點或者目標(例如，初始診斷、監(jiān)測)。優(yōu)選地，所述的方法與用于評價患者樣品的方法相同。
在一個實施方案中，顫蛋白表達或者生物活性基線水平已經(jīng)利用源自患者的自體同源的對照樣品建立。自體同源對照樣品能夠為分離的細胞、組織樣品或者體液樣品，并優(yōu)選地體液樣品。根據(jù)本發(fā)明，以及如本領域中所使用的，術語″自體同源″指樣品與待評價的樣品來自同樣的患者。優(yōu)選地，與待評價的樣品一樣，對照樣品來自同樣的流體、器官或者組織，這樣對照樣品為待評價的樣品充當最可能基線。該實施方案常常用于當源自患者樣品的水平已建立作為顫蛋白缺乏或者機能不良或者DHA缺乏的陽性或者陰性診斷。然后該基線能夠用來監(jiān)測患者的進展，發(fā)展或者偏離疾病或者病癥，或者用來監(jiān)測治療(例如，PUFA補充)的成功。在該實施方案中，定期評價樣品(例如，以年為單位體檢)，以及在各點確定通過脂肪酸補充的預防或者治療性治療。對于首次評價，能夠使用其他對照，如下所述，如果需要的話，或者可以進行其他的測試以證實初始的顫蛋白缺乏或者機能不良陰性或者陽性診斷，并且患者樣品的顫蛋白表達或者生物活性數(shù)值能夠用作以后的基線。這種類型的基線對照通常用在其他的臨床診斷步驟中，其中″正?！逅娇赡茈S病人不同而異和/或其中在診斷的時候得到自體同源對照樣品不可能、不實際或者不有利。
另一種建立顫蛋白表達或者生物活性基線水平的方法是建立對照樣品的顫蛋白表達或者生物活性的基線水平，并且優(yōu)選地對照樣品來自匹配的個體群。優(yōu)選地對照樣品為同樣地樣品類型，與用于顫蛋白表達或者生物活性樣品類型相比。根據(jù)本發(fā)明，術語″匹配的個體″指對照個體的匹配，基于對要評價的細胞或者腫瘤生長的參數(shù)類型適合的一種或者多種特性。例如，對照個體能夠與待評價的患者在下述方面匹配性別、年齡、種族或者任何相關的生物或者可能影響對照個體以及患者基線(例如，在先存在的病癥、消費的特定的物質、其他的生物或者生理因素水平)社會學因素。例如，正常個體血液中的顫蛋白表達水平在給定類型的個體較高(例如，老年人與年輕人，婦女與男人)。為了建立對照或者顫蛋白表達或者生物活性的基線水平，從匹配的個體得到許多樣品并評價顫蛋白表達或者生物活性。樣品類型優(yōu)選地為同樣的樣品類型并得自相同的器官、組織或者體液，與測試患者待測的樣品類型相比。建立合適對照水平需要的匹配的個體的數(shù)目(例如，群)能夠由本領域的普通技術人員確定，但是應該在統(tǒng)計學上適于建立合適的基線以用于與待評價的患者(即，測試患者)進行比較。從對照樣品獲得的數(shù)值進行統(tǒng)計學上處理以建立合適的基線水平，利用本領域建立所述值的標準方法。
如上描述的基線，能夠為陰性對照基線，如從明顯正常對照個體群建立的基線。或者，如上討論，所述的基線能夠利用已經(jīng)陽性診斷為具有顫蛋白缺乏或者機能不良的個體群建立，這樣能夠建立一或者多個基線水平用于評價患者。然后將所述的患者樣品中顫蛋白表達或者生物活性的水平與每一種基線水平進行比較以確定哪種類型基線(陽性或者陰性)與患者的顫蛋白水平統(tǒng)計學上最接近。應該意識到給定患者樣品可能落在基線水平之間，這樣最佳的診斷是患者可能開始顯示顫蛋白缺乏或者機能不良需要至少一些脂肪酸補充的指標，并且可能在向更高階段發(fā)展的過程中。本發(fā)明的目標在于逆轉、糾正，或者補償所述的發(fā)展的疾病。
本領域的普通技術人員應該意識到基線不需要針對每個測定建立的，基線能夠參照關對于指定的對照樣品在先確定的顫蛋白表達基線水平儲存信息的形式建立，如利用任何上述方法建立的基線水平。所述的儲存信息的形式能夠包括，例如，但不限于，關于″正?！?陰性對照)或者陽性顫蛋白表達的參考表、列表或者電子文件群或者個體數(shù)據(jù)；源自在先評價記錄患者數(shù)據(jù)的醫(yī)學表格；或者可以用于患者診斷的關于基線顫蛋白表達的任何其他的數(shù)據(jù)來源。
待評價樣品中的顫蛋白表達或者生物活性的水平檢測后，所述的水平與已建立的顫蛋白表達或者生物活性基線水平相比，后者利用如上描述的方法建立。并且此外，如上描述，優(yōu)選地，所述用于待測樣品的檢測方法與用于建立基線水平的方法相同或者質量上和/或定量相當，以使測試樣品以及基線的水平能夠直接進行比較。在比較測試樣品以及基線對照的時候，判斷測試樣品在顫蛋白表達或者生物活性方面是否具有可以測量的降低或者增加，相對于基線水平，或者在測試和基線水平之間是否存在統(tǒng)計學上顯著差異。在比較樣品中的顫蛋白表達或者生物活性水平之后，最終的步驟是作出診斷、監(jiān)測，或者確定患者能夠進行的治療。
與基線水平相比，待測的樣品(即，測試樣品)中檢測出降低水平的顫蛋白表達或者生物活性(或至少一些大小形式的顫蛋白)，一般性地表明，與基線樣品相比，患者將具有降低的FABP水平以及降低的DHA或者其他的PUFA摻入到腦組織中。更具體地，如果基線為正?；蛘哧幮詫φ諛悠罚c對照樣品相比，測試樣品中檢測出降低的顫蛋白表達或者生物活性表明具有患者降低的以及可能不適當?shù)腄HA或者其他的PUFA水平(DHA或者其他的PUFA缺乏)。如果基線樣品是源自患者的在先樣品(或者群對照)并且為患者中顫蛋白缺乏或者機能不良陽性診斷的代表，與基線相比，樣品檢測出降低的顫蛋白表達或者生物活性表明患者病癥正在惡化、而不是改善并且治療應該重新評估或者調整。
與基線水平相比，在待測的樣品(即測試樣品)中檢測出增加水平的顫蛋白表達或者生物活性(或者至少一些顫蛋白大小形式)表明，與基線樣品相比，患者正經(jīng)歷更少的FABP表達或者功能，以及更少的DHA或者其他的PUFA缺乏。更具體地，如果基線為正?；蛘哧幮詫φ?，與對照樣品相比，測試樣品中檢測出增加的顫蛋白表達或者生物活性表明測試樣品可能還正常并且可能患者比正常患者產(chǎn)生和/或消耗更多的DHA或者其他的PUFAs。如果基線樣品是源自患者(或源自群對照)的在先樣品并且為患者顫蛋白缺乏或者機能不良的陽性診斷(即，陽性對照)，與基線相比，樣品中檢測出增加的顫蛋白表達或者生物活性表明測試樣品預測具有改善FABP的水平或者功能以及預計患者腦中具有增加的DHA或者其他的PUFAs。
最終，檢測的顫蛋白表達與基線樣品的顫蛋白表達或者生物活性統(tǒng)計學上不存在顯著地不同，表明與基線樣品相比，測試樣品中的FABP狀況或者DHA(或者其他的PUFA)狀況沒有顯示差別。更具體地，如果基線為正?；蛘哧幮詫φ?，測試樣品中檢測出顫蛋白表達或者生物活性與基線樣品中不存在統(tǒng)計學上顯著地不同的，表明測試樣品基本上正常并且目前不表現(xiàn)為FABP或者DHA或者其他的PUFA缺乏或者與顫蛋白缺乏或者機能不良相關的疾病或者病癥。如果基線樣品為源自患者(或者來自群對照)的在先樣品，并且為患者顫蛋白缺乏或者機能不良陽性診斷的標志(即，陽性對照)，測試樣品中檢測出顫蛋白表達或者生物活性與基線樣品中不存在統(tǒng)計學上顯著地不同的，表明患者具有充分地類似的顫蛋白缺乏或者機能不良并且應該治療。因此，所述的診斷可能提示醫(yī)生目前進行的治療，例如，對控制該病癥沒有效果。
為了建立與基線水平相比顫蛋白表達或者活性變化的診斷，與已建立的基線相比，顫蛋白表達或者活性的水平的變化量統(tǒng)計學上顯著(即，至少95％置信水平，或者p＜0.05)。優(yōu)選地，與基線水平相比，樣品中顫蛋白表達或者生物活性檢測至少約5％變化，并且更優(yōu)選地，至少約10％變化，并且更優(yōu)選地，至少約20％變化，并且更優(yōu)選地，至少約30％變化，并且更優(yōu)選地，至少約40％變化，并且更優(yōu)選地，至少約50％變化，產(chǎn)生在測試樣品和基線樣品之間不同的診斷。在一個實施方案中，與基線水平相比，樣品中顫蛋白表達或者生物活性的1.5倍變化，并且更優(yōu)選地，檢測至少約3倍變化，并且更優(yōu)選地至少約6倍變化，并且更優(yōu)選地，至少約12倍變化，并且更優(yōu)選地，至少約24倍變化的顫蛋白表達或者生物活性與相比基線水平，得到與基線樣品相比，顫蛋白表達或者活性顯著變化診斷。
應該理解為在一些病癥中，單個大小形式的顫蛋白的水平在血液中可能實際上增加并且為例如腦中顫蛋白缺乏或者機能不良的治療。在這些實施方案中，所述的方法相應地進行調整。此外，對于更敏感的診斷或者監(jiān)測測定，檢測單個的大小形式的顫蛋白并與基線對照進行比較。在這種方式中，顫蛋白大小形式的整個譜能夠相對于相應的基線譜進行評價。在該實施方案中，樣品中一些形式的顫蛋白與基線相比可能增加，而其他的形式可能同時降低或者保持基本相同。在該實施方案中，比較顫蛋白表達或者活性的變化并且以及該變化是否表明患者中FABP或者DHA或者其他的PUFA缺乏的判斷的作出，是通過與基線比較至少一個大小形式或者通過比較整個譜進行的。評價患者中的顫蛋白形式譜詳細地記載在PCT公開號WO 03/063110中，這里以其整體引入作為參考。
一旦利用本發(fā)明的方法作出了顫蛋白缺乏或者機能不良的陽性診斷，需要的時候，診斷能夠利用任何合適的替代檢測DHA(或者其他的PUFA)或者FABP缺乏或者機能不良的方法進行確證。
診斷有顫蛋白缺乏或者機能不良的患者的治療通過給藥PUFA補充進行提供，并且在一個實施方案中，優(yōu)選地DHA補充。本發(fā)明記載了顫蛋白表達以及活性用來預測患者腦或者其他的組織DHA的水平的用途，然后用來提供適當劑量的DHA和/或其他的PUFA以補償患者中顫蛋白缺乏或者機能不良的作用。對患者提供的PUFA量記載在上文中，并且能夠基于將患者樣品與已建立的對照樣品進行比較而確定，其中對照樣品與腦或者其他的組織中的DHA水平相關，并且PUFA的需要量對患者提供益處。優(yōu)選的PUFA的劑量如上討論。一個實施方案中，對患者提供最少量的PUFA補充并且一段時間后對患者進行再評價(例如，數(shù)天、周或者月)以評價PUFA補充對顫蛋白表達或者活性的作用，或者對與顫蛋白缺乏相關的癥狀或者疾病或者病癥作用。如果患者中沒有顯著變化或者改善，臨床醫(yī)護人員上調PUFA補充并且在后續(xù)的時間點評價患者中的顫蛋白表達或者活性。除了評價PUFA的補充量以外，對患者給藥的PUFAs比率以及類型可以周期性地進行調整。
在本發(fā)明的一個實施方案中，提供了一種鑒別神經(jīng)祖細胞細胞的方法。所述的方法包括檢測細胞群中的顫蛋白表達或生物活性，其中確定水平的顫蛋白表達或生物活性與神經(jīng)祖細胞細胞相關。在一個實施方案中，所述的方法還包括選擇檢測了顫蛋白表達或生物活性的神經(jīng)祖細胞。
在另一實施方案中，本發(fā)明提供了一種監(jiān)測神經(jīng)發(fā)育的方法，包括a)提供包括神經(jīng)祖細胞細胞的細胞群；b)檢測細胞群中的顫蛋白表達或活性；c)將細胞群暴露在神經(jīng)祖細胞將發(fā)展為分化的神經(jīng)細胞的條件下；并且d)監(jiān)測經(jīng)過步驟(c)之后的細胞中的顫蛋白的表達或活性，以評價神經(jīng)祖細胞向分化的神經(jīng)細胞的發(fā)育。在此實施方案中，所述的方法能夠包括在步驟(b)之前或同時將步驟(a)的細胞群與推定的發(fā)育調節(jié)化合物接觸，并測定推定的調節(jié)化合物是否影響神經(jīng)祖細胞向分化的神經(jīng)細胞的發(fā)育，通過檢測細胞群中的顫蛋白表達或活性。
檢測細胞中的顫蛋白表達或者活性能夠按照前述討論的方法進行。這里使用的，術語″推定的調節(jié)化合物″指在具體的過程中具有未知或者以前未被認識到的調節(jié)活性的化合物。上述用于識別本發(fā)明化合物的方法包括將測試細胞與測試的化合物接觸的步驟，以測試其調節(jié)神經(jīng)祖細胞發(fā)育的能力，利用顫蛋白表達作為追蹤神經(jīng)細胞分化以及發(fā)育的標志物。例如，測試細胞能夠在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)或者在固體培養(yǎng)基中生長，其中液體培養(yǎng)基或者固體培養(yǎng)基包含測試的化合物。此外，液體培養(yǎng)基或者固體培養(yǎng)基包含細胞生長必要的成分，如能被吸收的碳、氮以及微量營養(yǎng)素。
上述方法，一個方面，涉及將細胞與測試的化合物接觸足夠的時間以使推定的調節(jié)化合物與影響細胞發(fā)育的成分相互作用。這里使用的術語″接觸時期″指在細胞與測試的化合物接觸的時期。術語″孵育時期″指在評價前使細胞生長的整個時間，并且能夠包括接觸時期。因此，孵育時期包括全部的接觸時期并且還可以包括測試的化合物還不存在但是在評分之前繼續(xù)生長的時期。本發(fā)明的細胞與推定的調節(jié)化合物接觸的條件，如混合，是任何合適的培養(yǎng)或者測定條件并包括有效的培養(yǎng)基，在其中細胞能夠培養(yǎng)或者其中細胞能夠在存在或者不存在推定的調節(jié)化合物條件下倍評價。本發(fā)明的細胞能夠在多種容器中培養(yǎng)，包括，但是不限于，組織培養(yǎng)瓶，測試管，微量滴定器皿以及皮氏培養(yǎng)皿。培養(yǎng)在適合細胞的一定的溫度、pH以及二氧化碳含量下進行。所述的培養(yǎng)條件在本領域中是公知的。細胞與推定的調節(jié)化合物接觸的時候考慮每個接觸的容器細胞中的細胞的數(shù)目、與細胞接觸的推定的調節(jié)化合物濃度、推定的調節(jié)化合物與細胞的孵育時間以及接觸細胞的化合物的濃度。本領域的普通技術人員能夠基于下述變量確定有效的方案，如容器的大小、容器中液體的溶積、已知的針對測定中使用的具體的細胞類型的培養(yǎng)條件，以及測試的推定的調節(jié)化合物(即，大小、電荷等)的化學組成。推定的調節(jié)化合物優(yōu)選的量包括在約1nM～約10mM的推定的調節(jié)化合物/96孔板的孔。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的方法適于用于患者為脊椎動物、哺乳動物，包括，不限于靈長類、牲畜以及家庭寵物(例如，伴侶動物)。最通常，患者為人患者。
提供下述下述實施例用于說明本發(fā)明而不在于用來限制本發(fā)明的范圍。
實施例實施例1嬰兒患者樣品中顫蛋白水平的定量測定以確定神經(jīng)機能不良的性質以及接受治療下述實施例證實了如何診斷孤獨癥以及因此進行的DHA治療可以通過測試患者樣品中顫蛋白的濃度進行判斷。
患者樣品患者血液樣品通過在1月齡到18月齡的嬰兒進行靜脈穿刺或者抽取。樣品收集在包含抗凝血劑(EDTA或者肝素)的試管中，并且旋轉以將血漿與細胞沉淀分離。得到的血漿在-80℃冷凍直至需要。
對照樣品血液樣品抽自合適的、疾病-陰性的對照對象，以如測試對象同樣的方式。類似地，得到的血漿在-80℃冷凍直至需要。
利用定量蛋白印跡定量測定顫蛋白水平5微升的每位患者血漿稀釋到SDS-PAGE樣品緩沖液中并在95℃加熱10分鐘以完全變性樣品。適當量的各樣品上樣到固定濃度的分離膠頂部的固定濃度的堆積膠的單道中。樣品與稀釋成多個已知濃度的血漿對照樣品以及適當?shù)姆肿恿繕酥痉肿右黄鹕蠘?。在標準的條件下進行電泳，將分開的蛋白電印跡道纖維素膜上。將形成的點在包含1％BSA和0.1％Tween-20的PBS中在室溫封閉2小時。去除緩沖液并將斑點與包含5-10μg/mL of兔抗-顫蛋白IgG抗體的封閉緩沖液孵育過夜。第二天洗滌斑點并用包含5-10μg/mL偶聯(lián)至辣根過氧化酶的羊抗-兔IgG的緩沖液在室溫孵育1小時。再次洗滌斑點并用化學發(fā)光底板曝光膜檢測。利用抗-顫蛋白抗體，在患者以及對照樣品中檢測到對應不同大小顫蛋白變體的不同分子量帶。密度計量學測量用于測量所述的患者中測試樣品以及已知的對照樣品中的顫蛋白反應帶。然后測定患者樣品中的顫蛋白定量水平，通過將這些樣品的密度計量學結果與利用由包含多個已知濃度的顫蛋白的樣品得到的曲線進行比較。
分析通過將所述的患者樣品中各個不同大小形式的顫蛋白(顫蛋白成分)與疾病-陰性對照樣品中那些的水平進行比較，作出孤獨癥的診斷。所述的患者樣品中一或者多種顫蛋白形式的水平相對于對照樣品的增加或者降低是患者中孤獨癥的指示。
治療和監(jiān)測基于如上測定的顫蛋白水平，設計針對患者的治療方案。給藥補充比正常嬰兒制劑更高水平的DHA和ARA的嬰兒制劑進行預防性干預，直到嬰兒達到12月齡(例如，以約0.2g/天～約1g/天的劑量)。然后補充改變?yōu)榧s1g的DHA/天，以單用扯掉膠囊的形式提供，直到嬰兒達到3歲。
每3個月評估顫蛋白水平，如果顫蛋白水平?jīng)]有增加平均基線水平85％的范圍之內，劑量進行相應調整。
實施例2定量測定患者中的顫蛋白水平用于診斷精神分裂癥下述實施例證實如何診斷精神分裂癥以及因此的用DHA的治療療程能夠通過定量測量外周血液樣品中的顫蛋白水平而推動。
患者樣品血液樣品通過對患者進行靜脈穿刺抽取并將樣品收集在包含抗凝血劑(EDTA或者肝素)的管中。將樣品離心以聰全細胞中取出血漿并將得到的血漿在-80℃冷凍直至需要。
對照樣品血液樣品抽自合適的、疾病-陰性對照對象，以如測試對象同樣的方式。得到的血漿類似地在-80℃冷凍直至需要。
通過熒光微量板免疫測定定量測定顫蛋白水平50微升的每位患者的血漿在等體積的測定緩沖液中稀釋兩倍，測定緩沖液由PBS以及0.5％BSA和0.05％Tween-20組成。包含已知濃度的顫蛋白的對照樣品也在測定緩沖液中進行連續(xù)稀釋以構建已知的標準曲線。稀釋的樣品和對照加入到黑色的聚苯乙烯微量板的每孔中，聚苯乙烯已經(jīng)用兔抗-顫蛋白N-端IgG抗體包被，并且然后由PBS和1％BSA和0.1％Tween-20的封閉緩沖液封閉。使用的抗-顫蛋白包被抗體對在測定中測量的所有3種大小形式的顫蛋白都特異的。稀釋的樣品在微量板孔中在37℃孵育2小時，然后從孔中吸出來，并將孔用由PBS和0.1％Tween-20組成的洗滌緩沖液洗滌4次。將孔中的吸水紙吸水干燥并加入100μL三種不同的兔抗-顫蛋白IgG抗體的混合物加入至板的各孔中，每種抗體偶聯(lián)不同的熒光探針并且稀釋的1-10μg/ml的測定緩沖液溶液。各個不同的抗-顫蛋白檢測抗體對測量的三種不同的大小形式顫蛋白中的每一種都是特異的。將孔在37℃孵育1小時，并且然后用洗滌緩沖液洗滌4次。將孔中的吸水紙吸水干燥，并向各孔中加入100μL的PBS。然后將微量板在熒光微量板讀數(shù)器中讀數(shù)，讀數(shù)器設置成測量即時的熒光，利用針對每種抗體-熒光探針偶聯(lián)物的合適的激發(fā)以及發(fā)射濾波器組。測量各種熒光探針的發(fā)射強度，并將其與在已知的標準中得到的測量進行比較，能夠確定每個患者或者對照樣品中的每種大小形式的顫蛋白的濃度。
分析通過比較所述的患者樣品中每種不同的大小形式的顫蛋白(顫蛋白成分)水平以及疾病-陰性對照樣品中不同大小形式的水平，作出精神分裂癥診斷。所述的患者樣品中一或者多種顫蛋白形式的水平相對于對照樣品的增加或者降低是患者中精神分裂癥的指示。
治療以及監(jiān)測基于如上測定顫蛋白的水平，設計針對患者的治療方案。通過以約0.2g/天～約1g/天的劑量給藥膠囊形式的DHA，實現(xiàn)治療性干預。然后通過每2個月監(jiān)測循環(huán)的顫蛋白水平，并與臨床癥狀關聯(lián)。如果在6～8月內，顫蛋白水平不增加顯著地或者臨床癥狀不改善或者減輕，能夠增加DHA的劑量并且還補其他的脂肪酸化合物，包括其他的n-3脂肪酸前體。
實施例3定量測定患者中的顫蛋白水平用于診斷雙相性精神障礙病癥。
下述實施例證實如何診斷雙相性精神障礙以及因此的用DHA的治療療程能夠通過定量測量外周血液樣品中的顫蛋白水平而推動。
患者樣品血液樣品通過對患者進行靜脈穿刺抽取并將樣品收集在包含抗凝血劑(EDTA或者肝素)的管中。將樣品離心以聰全細胞中取出血漿并將得到的血漿在-80℃冷凍直至需要。
對照樣品血液樣品抽自合適的、疾病-陰性對照對象，以如測試對象同樣的方式。得到的血漿類似地在-80℃冷凍直至需要。
用多孔熒光蛋白微芯片免疫測定定量測定顫蛋白水平利25微升的每位患者的血漿在75mL的測定緩沖液中稀釋4倍，測定緩沖液由PBS以及0.5％BSA和0.05％Tween-20組成。包含已知濃度的顫蛋白的對照樣品也在測定緩沖液中進行連續(xù)稀釋以構建已知的標準曲線。稀釋的樣品以及對照加入到載玻片上的各孔中，在其上不同的兔抗-顫蛋白IgG捕獲抗體保持距離斑點的形式已經(jīng)印在上面。各孔包含多個斑點，每個點相應于針對測量的不同的大小形式的顫蛋白的三種捕獲抗體特異中的一種，以二維的形式排列。除了固定個體捕獲抗體以外，載玻片的各孔還用PBS和1％BSA和0.1％Tween-20進行封閉。載玻片上的各孔中的稀釋的樣品和對照在37℃在濕度室中孵育2小時。孵育后，吸干各孔并將孔用由PBS和0.1％Tween-20組成的洗滌緩沖液洗滌4次。將孔吸水紙干燥后，向各孔中加入100mL測定緩沖液，緩沖液包含0.5-5mg/ml的對所有三種測量的大小形式顫蛋白廣泛特異的生物素標記的兔抗-顫蛋白IgG抗體。然后將載玻片在37℃在濕度室中孵育1小時。孵育后，吸干各孔并將孔用洗滌緩沖液洗滌4次，將孔吸水紙干燥后。此時，向各孔中加入100mL的測定緩沖液，緩沖液包含10-20mg/ml偶聯(lián)熒光探針的鏈親和素。然后將載玻片在室溫在濕度室中孵育1小時，吸干各孔并將孔用洗滌緩沖液洗滌4次，從載玻片上小心地撤去各孔并將整個載玻片在去離子水中清洗并在氮氣氣流下干燥。一旦干燥，將載玻片在激光共聚焦掃描儀中掃描，發(fā)射濾波器對測定中使用的。鏈親和素-熒光探針偶聯(lián)物合適。得到載玻片的數(shù)字、雙位圖像，并且利用微陣列圖像分析軟件測定所有點的強度。通過比較所述的患者樣品孔中各種個體顫蛋白斑點的強度以及已知的標準曲線孔中的相應點的強度。就能夠確定在各個患者或者對照樣品中的各種大小形式的顫蛋白的濃度。
分柝通過比較所述的患者樣品中每種不同的大小形式的顫蛋白(顫蛋白成分)水平以及疾病-陰性對照樣品中不同大小形式的水平，作出雙相性精神障礙病癥診斷。所述的患者樣品中一或者多種顫蛋白形式的水平相對于對照樣品的增加或者降低是患者中雙相性精神障礙病癥的指示。
治療和監(jiān)測基于如上測定顫蛋白的水平，設計針對患者的治療方案。通過以約0.2g/天～約1g/天劑量補充乳劑形式的DHA形式的食品，能夠對患者實現(xiàn)治療性干預。監(jiān)測患者的心理或者行為變化，并且每3個月獲取血液樣品以測定循環(huán)的顫蛋白水平。根據(jù)患者持續(xù)的心理或者行為情形，以及其顫蛋白水平，可以調節(jié)治療以提供不同的劑量的DHA或者不同的DHA制劑以及其他的脂質。
實施例4該實施例證實了與野生型和雜合的動物或者雌性動物相比，雄性、純合的突變的reeler小鼠的顳葉中具有顯著地升高的DHA含量，并且與野生型和雜合的動物相比，純合的突變的reeler動物具有顯著地升高的顳葉ARA。
″Reeler小鼠″(rein1n)為對表達細胞外信號糖蛋白顫蛋白的基因純合的隱性小鼠，并且表現(xiàn)″突變的reeler表型″，并且由于顫蛋白水平的不足顯示出發(fā)育以及明顯的運動的缺陷。顫蛋白在身體的各種組織中表達，包括腦、肝臟、腎臟以及視網(wǎng)膜以及脊髓。由于顫蛋白是腦以及其他的組織中的DHA水平的生物標志物，顫蛋白缺乏還能夠通過治療性使用DHA進行糾正。
如源自Jackson Laboratories，Bar Harbor，Maine中的材料所述，純合的reeler小鼠在約2周齡的時候顯示共濟失調步態(tài)、張力障礙的體態(tài)以及戰(zhàn)栗。這些突變體不能保持其后腿及臀部直立并且通常在運動中跌倒。生存能力以及生殖力極大地降低。雜合子從視覺上不能與野生型對照區(qū)別并因此必須進行基因型評估以證實存在reeler基因。行為表型是由于嚴重地小腦發(fā)育不全所導致。
本發(fā)明者進行的下述研究判斷顫蛋白是否能夠充當中樞神經(jīng)系統(tǒng)中長鏈多不飽和脂肪酸(LC-PUFA)缺乏的基于血清生物標志物。
具體目標為了評價正?；蛘弋惓ｎ澋鞍妆磉_小鼠的腦組織中的長鏈多不飽和脂肪酸狀況差異是否明顯。
材料和方法36只在6以及12周齡之間的動物用于該實驗。該組包含帶有兩個拷貝的顫蛋白基因突變的小鼠(純合的，n＝12)；帶有一個拷貝的顫蛋白基因突變的小鼠(雜合的；n＝12)，以及在顫蛋白基因中無突變的小鼠(野生型；n＝12，對照)。在各基因型組中，雄性和雌性的數(shù)量大約相等。通過表型確定純合的reeler突變的小鼠。雜合的reeler突變的小鼠和正常野生型對照進行基因分型以確定。在研究過程中，小鼠喂食正常嚙齒動物食物。
小鼠腦組織脂肪酸分析小鼠腦組織直接分析脂肪酸含量。樣品中的總脂質進行皂化并轉化成脂肪酸甲基酯然后分析。簡言之，小鼠顳葉在-80℃凍存直至分析。分析前凍干樣品。凍干樣品直接稱量到螺帽測試管中，玻璃棒研磨成粉。包含內標(十九酸甲酯的1.0mL甲苯加入到樣品中，同時加入1.0mL的0.5N NaOH。將管充入氮氣，密封，并在加熱塊中在約100℃加熱約5分鐘。移出管并使之冷卻。向管中加入2mL的14％BF3的甲醇溶液，向管中充入氮氣并密封。將管在加熱塊中在約100℃加熱約30分鐘。30分鐘之后，移出管并使之冷卻。向管中加入一毫升的飽和的氯化鈉水溶液并將管渦旋。分層并將有機層取出用于分析。在配備有焰離子化檢測器的Agilent Technologies氣相色譜(型號5890)上，通過帶有火焰離子化檢測(GLC-FID)的氣-液色譜分析脂肪酸甲基酯。脂肪酸甲基酯在30米FAMEWAX毛細管柱(Restek，Bellefonte，PA；0.25mm直徑，0.25μm涂層厚度)中進行分離，利用氦流速為2.0mL/分，裂分率為15∶1。色譜運行參數(shù)包括加熱室起始溫度130℃，以5℃/分鐘的速率增加至225℃，保持20分鐘，然后以15℃/分鐘增加至250℃，最終保持5分鐘。注射器以及檢測器分別恒定在220℃以及230℃。通過與源自NuCheck Prep(Elysian，MN，U.S.A.)的脂肪酸甲基酯標準混合物的保留時間進行比較確定各峰。單個的脂肪酸表述為總脂肪酸的百分比(重量百分比)。
數(shù)據(jù)利用2-way全面線性模型ANOVA進行分析，p＜0.05。當存在相互作用的時候，利用t-檢測評估平均值之間的顯著差異。
結果顳葉中的二十二碳六烯酸含量主要結果顳葉中的DHA含量的顯示在表1中。在不同的顫蛋白表達水平的小鼠的顳葉中的DHA脂肪酸組成方面差異不顯著(P＝0.406)。雄性或者雌性小鼠顳葉中的DHA脂肪酸組成沒有差異(P＝0.267)。但是，不同的組以及性別相互作用是明顯的(P＝0.019)，使各基因型-性別亞組可以進行具體的統(tǒng)計學比較。這種比較表明最高水平的顳葉DHA在純合的雄性reelers中是很明顯的，并且最低水平的DHA存在純合的雌性reelers中(P＝0.006)。
與雜合的雄性相比，純合的雄性reeler小鼠具有顯著地更高的顳葉DHA含量，但是與野生型雄性相比并非如此。純合的雌性動物中的顳葉DHA含量沒有顯著地隨基因型而呈現(xiàn)出差異。
表1顳葉DHA含量(wt％，總脂肪酸)
注意平均值±sem表明不同的上標在p＜0.05的水平是顯著地不同的；在為雄性動物的情形下，野生型動物顳葉中的DHA含量低于純合的動物，但是沒有達到本研究規(guī)定的顯著的水平(p＝0.055)。純合的雌性與純合的雄性不同，p＜0.05。
結論在顳葉中，雄性、純合的突變的reeler小鼠具有顯著地升高的DHA含量。
結果顳葉中的花生四烯酸含量主要結果在不同的基因型的小鼠之間，顳葉DHA含量顯著差異是明顯的(P＝0.004)。純合的reeler動物具有更顯著地顳葉ARA，與野生型動物相比(P＜0.001)，但是與雜合的動物相比具有類似的顳葉ARA。雜合的小鼠的顳葉ARA含量高于野生型動物，但是沒有達到統(tǒng)計學顯著的標準(P＝0.061)。在雄性和雌性動物之間的顳葉ARA含量沒有顯著差異。
相互作用結果在基因型和性別之間沒有顯著的相互作用。
表2顳葉花生四烯酸含量(wt％，總脂肪酸)
數(shù)據(jù)為平均值±sem。與野生型或者雜合的基團相比，純合的突變的reeler動物具有顯著地升高的顳葉ARA。在雄性和雌性動物之間顳葉的ARA含量不存在顯著差異。
結論純合的突變的reeler動物具有顯著地升高的顳葉ARA。
實施例5下述實施例證實了在顫蛋白和紅細胞HUFA狀況之間的相互關系。具體地，本發(fā)明者確定了具有不同的水平顫蛋白表達的動物是否在紅細胞中表現(xiàn)出不同的DHA和ARA含量。
材料和方法(與上述實施例4相同)。
結果
表3性別/紅細胞脂肪酸含量(wt％，總脂肪酸)
各欄中具有不同上標的平均值差異顯著(P＜0.05)總結RBC DHA主要結果在具有不同基因型的動物之間的RBC DHA含量沒有觀察到統(tǒng)計學上顯著差異。與雌性動物相比，雄性動物具有顯著地更高的RBCDHA含量(6.06±0.76 vs 4.57±1.29％)。
相互作用結果對于RBC DHA，在不同的基因型和性別之間沒有檢測到顯著的相互作用。
結論不同的顫蛋白狀況的小鼠中RBC DHA含量沒有呈現(xiàn)出差異。雄性的RBC DHA含量高于雌性RBC DHA的含量。
RBC ARA主要結果對于RBC ARA含量，在具有不同的基因型以及性別的動物之間觀察到統(tǒng)計學上顯著差異，分別為(P＜0.01)以及(P＜0.005)。具有2個拷貝的突變的顫蛋白基因的小鼠具有顯著地更低水平的RBC ARA，與具有1個拷貝的突變的顫蛋白基因的小鼠相比。與具有一個或者2個拷貝的突變的顫蛋白基因的小鼠相比，野生型對照的RBC ARA含量差異不顯著。與雌性動物相比，雄性動物具有顯著地更高的RBC ARA。
相互作用結果對于RBC ARA，在不同的基因型和性別之間沒有檢測到顯著的相互作用。
結論小鼠的RBC ARA含量被顫蛋白狀況所限制。具有低顫蛋白狀況的小鼠傾向于具有低RBC ARA水平。與雌性相比，雄性動物傾向于顯著地更高的RBC ARA。
實施例6下述實施例證實了對具有異常reeler基因表達的小鼠提供DHA能夠減少帶有reeler顯型癥狀的雄性后代的數(shù)目。在下述實驗中，本發(fā)明者測試了對缺乏一個或者多個正常顫蛋白基因的小鼠，LC-PUFA飲食富集(DHA)是否糾正在顫蛋白-缺乏小鼠觀察到的顫蛋白組織病理學/癥狀以及是否能正?；舅嶙V。具體地，本發(fā)明者評價了富集長鏈多不飽和脂肪酸(DHA)的飲食是否能夠糾正或者調節(jié)顫蛋白-缺乏小鼠中的顫蛋白組織病理學/癥狀。
材料和方法顫蛋白給食研究由Martek Biosciences Corporation發(fā)起并由Jackson Labs，Bar Harbor，Maine(Stock used300235 B6C3Fe a/a-Reln<rl>/J)啟動。雜合的雌性與雜合的雄性配對并接受下述兩種實驗飲食中的一種DHA缺乏飲食(0％DHA重量；0.14％α亞麻酸重量)，或者DHA足量飲食(0.462％DHA重量，含有0.115％α亞麻酸重量)。雌性在懷孕和哺乳期繼續(xù)接受特定的飲食。懷孕雌性生產(chǎn)的純合的、雜合的和野生型幼仔放置在同樣的特定的母性飲食中使之斷奶。記錄在各飲食組中的reeler小鼠數(shù)。對沒有顯現(xiàn)reeler表型的幼仔進行基因分型以確定其reeler基因狀況。對在8和14周齡之間的幼仔處死并收集組織用于脂肪酸分析。
結果DHA足量飲食出生的94只幼仔中，14只小鼠(10F，4M)觀察具有reeler表型(14.8％)。40只雄性中的4只(10％)表現(xiàn)reeler表型。54只雌性中的10只(18.5％)表現(xiàn)出reeler表型。
DHA缺乏飲食出生的89只幼仔中19只小鼠(8F，11M)觀察具有reeler表型(或者21.3％。40只雄性中的11只(27.5％)表現(xiàn)reeler表型，而48只雌性中的8只(16.6％)表現(xiàn)出reeler表型。
秩和分析表明與DHA缺乏飲食組相比，顯著地在DHA足量飲食組中出生的reeler小鼠更少。此外，秩和分析檢測雄性reeler小鼠的出生率表明在懷孕以及哺乳期間提供DHA以及在斷奶之后對幼仔提供DHA以幾乎3-倍的方式降低雄性reeler動物出生率(P＝0.04)。DHA缺乏飲食組中，40只雄性中的11只雄性，或者27.5％的雄性顯示reeler表型，而DHA足量飲食組中，40只雄性中只有4只，或者10％的雄性顯示reeler表型。
表4DHA足量和DHA缺乏飲食vs％Reeler表型
結論在懷孕期間對顫蛋白-缺乏小鼠補充DHA能夠充分地減少帶有reeler表型的雄性后代的數(shù)目。
實施例7飲食DHA對紅細胞脂肪酸含量的調節(jié)下述實施例顯示了處于顫蛋白狀況以及飲食DHA暴露下的小鼠的紅細胞DHA和ARA中的變化。具體地，發(fā)明者確定了飲食含量是否能夠糾正不同的顫蛋白狀況小鼠中的RBC的脂肪酸組合物的差異。由于發(fā)明者上面顯示了帶有突變的顫蛋白基因表達的雄性小鼠傾向于具有異常高RBCARA含量，確定了DHA補充是否能夠調節(jié)帶有突變的顫蛋白基因的雄性小鼠RBCs中的ARA表達。
材料和方法顫蛋白給食研究由Martek Biosciences Corp.發(fā)起并在Jackson Labs，Bar Harbor，Maine(Stock used300235 B6C3Fea/a-Reln<rl>/J)啟動。雜合的雌性與雜合的雄性配對并接受下述兩種實驗飲食中的一種DHA缺乏飲食(0％DHA重量；0.14％α亞麻酸重量)，或者DHA足量飲食(0.462％DHA重量，含有0.115％α亞麻酸重量)。雌性在懷孕和哺乳期繼續(xù)接受特定的飲食。懷孕雌性生產(chǎn)的純合的、雜合的和野生型幼仔放置在同樣的特定的母性飲食中使之斷奶。在6和12周齡之間的36只動物用于本實驗。所述的組包含帶有2個拷貝的顫蛋白基因突變的小鼠(純合的，n＝12)；一個拷貝顫蛋白基因突變的小鼠(雜合的；n＝12)，以及在顫蛋白基因中沒有突變的小鼠(野生型；n＝12，對照)。在各基因型組中，雄性和雌性的數(shù)量大約相等。記錄在各飲食組中的reeler小鼠數(shù)。對沒有顯現(xiàn)reeler表型的幼仔進行基因分型以確定其reeler基因狀況。對在8和14周齡之間的幼仔處死并收集組織用于脂肪酸分析。
小鼠紅細胞的脂肪酸分析提取小鼠紅細胞(RBCs)并分析脂肪酸含量。樣品中的總脂質進行皂化并轉化成脂肪酸甲基酯然后分析。簡言之，RBCs在-80℃凍存直至分析。包含內標(二十三酸甲酯)的50微升的氯仿加入到帶螺帽的測試管中。在氮氣氣流下蒸發(fā)氯仿。將約300微升樣品加入到內標中，同時加入1.5mL的1∶2氯仿∶甲醇。將管密封并渦旋約30秒。將管放置在冰中超聲約20分鐘。20分鐘后，取出管并向管中加入一毫升的氯仿和一毫升水。將管渦旋約30秒并在約2000rpm離心約10分鐘。將下層轉移至另一螺帽測試管中，并在氮氣氣氛下蒸發(fā)。向樣品中加入1毫升甲苯，同時加入1.0mL的0.5N NaOH。將管充入氮氣、密封并在加熱塊中在約100℃加熱約5分鐘。移出管并使之冷卻。向管中加入2mL的14％BF3的甲醇溶液，向管中充入氮氣并密封。將管在加熱塊中在約100℃加熱30分鐘。30分鐘之后，移出管并使之冷卻。向管中加入一毫升的飽和的氯化鈉水溶液并將管渦旋。分層并將有機層取出用于分析。在配備有焰離子化檢測器的Agilent Technologies氣相色譜(型號5890)上，通過帶有火焰離子化檢測(GLC-FID)的氣-液色譜分析脂肪酸甲基酯。脂肪酸甲基酯在30米FAMEWAX毛細管柱(Restek，Bellefonte，PA；0.25mm直徑，0.25μm涂層厚度)中進行分離，利用氦流速為2.0mL/分，裂分率為15∶1。色譜運行參數(shù)包括加熱室起始溫度130℃，以5℃/分鐘的速率增加至225℃，保持20分鐘，然后以15℃/分鐘增加至250℃，最終保持5分鐘。注射器以及檢測器分別恒定在220℃以及230℃。通過與源自NuCheck Prep(Elysian，MN，U.S.A.)的脂肪酸甲基酯標準混合物的保留時間進行比較確定各峰。單個的脂肪酸表述為總脂肪酸的百分比(重量百分比)。
結果
DHA與喂食包含0.5％重量DHA的預制的飲食的動物相比，喂食預制的DHA缺乏的飲食的動物顯著地具有低水平的RBC DHA。純合子以及雄性雜合子更易于出現(xiàn)飲食DHA缺乏的作用，由于這些動物具有顯著地更低水平的RBC DHA，與喂食DHA缺乏飲食的野生型對照雄性和雌性以及雜合的雌性動物相比。將DHA加入到飲食中顯著地增加所有組中的RBC DHA水平。但是，在帶有突變的顫蛋白基因的雌性動物上，DHA補充飲食沒有完全將RBC DHA的水平恢復到在野生型對照動物中觀察到的水平。具體地，喂食DHA補充飲食的純合的雌性具有顯著地更低的RBC DHA，與喂食DHA足量飲食的所有其他的基因型/性別小組相比。喂食DHA補充飲食的雜合的雌性具有顯著地更低的RBC DHA，與野生型對照雌性相比。雄性雜合的以及純合的動物中，DHA補充飲食恢復RBC DHA水平至在野生型雄性中觀察的類似的水平。
表5紅細胞/DHA含量(wt％，總脂肪酸)
結論帶有1或者2拷貝顫蛋白基因的雌性動物的紅細胞DHA含量通過給食包含0.5％DHA重量的飲食不能完全正?；?。當喂食包含0.5％DHA重量的飲食的時候，帶有1或者2拷貝的顫蛋白基因的雄性動物的RBCDHA含量以類似于野生型對照動物中的方式被調節(jié)。
ARA喂食未預制的DHA的飲食動物的紅細胞ARA水平顯著地高于喂食包含0.5％DHA重量飲食動物的RBC ARA水平。在喂食預制的DHA缺乏飲食的動物中，野生型對照和雜合的reeler小鼠的RBC ARA水平顯著地高于在純合的reeler小鼠中檢測的水平。給食包含0.5％DHA的飲食抑制RBCARA水平約2-倍并且消除了在基因型小組之間的RBC ARA水平的差異。當動物喂食0.5％DHA重量的時候，RBC ARA水平在雄性和雌性動物之間沒有檢測到顯著差異，或者在基因型之間也沒有檢測到差異。
表6紅細胞/ARA含量(wt％總脂肪酸)RBC ARA(wt％)
結論接受無預制DHA的飲食的動物傾向于具有高水平的RBC ARA。低顫蛋白表達與低RBC DHA含量相關。飲食DHA抑制ARA摻入到RBC膜中并補償了野生型對照以及具有低顫蛋白表達的動物(即，雜合子和純合子)中的RBC ARA含量。
各篇參考文獻以及公開這里以其整體引入作為參考。U.S.臨時申請?zhí)?0/537,600，2004年1月19日提交，以及U.S.臨時申請?zhí)?0/605,219，27，2004年8月27日提交，這里以其整體引入作為參考。
盡管本發(fā)明的各種實施方案已經(jīng)進行了詳細的描述，這些實施方案的修改以及改寫對本領域的普通技術人員而言是顯而易見的。應該清楚地理解為，這些修改以及改寫都在如后續(xù)的權利要求闡釋的本發(fā)明的范圍之內。
權利要求
1.一種治療顫蛋白缺乏或機能不良的方法，包括向診斷具有或懷疑患有顫蛋白缺乏或機能不良的患者給藥一定量的選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，以補償患者中顫蛋白缺乏或機能不良的作用。
2.權利要求1的方法，其中顫蛋白缺乏或機能不良與患者中脂肪酸結合蛋白的表達或功能的降低相關。
3.權利要求2的方法，其中所述的脂肪酸結合蛋白為腦脂質結合蛋白(BLBP)。
4.權利要求1的方法，其中對患者給藥PUFA補償患者中降低的脂肪酸結合蛋白或其功能。
5.權利要求1的方法，其中對患者給藥PUFA補償患者中降低的腦脂質結合蛋白或其功能。
6.權利要求1的方法，其中對患者給藥PUFA改善患者中脂肪酸結合蛋白的活性。
7.權利要求1的方法，其中對患者給藥PUFA改善患者中腦脂質結合蛋白作用機制的至少一個參數(shù)。
8.權利要求1的方法，其中對患者給藥PUFA導致功能性DHA向患者中膠質細胞和神經(jīng)細胞的磷脂膜中的摻入的增加。
9.權利要求1的方法，其中對患者給藥PUFA增加患者中顫蛋白的水平或改善顫蛋白的活性。
10.權利要求1的方法，其中所述的患者罹患與顫蛋白缺乏或機能不良與有關的疾病或病癥，并且其中對患者給藥PUFA改善所述的疾病或病癥的至少一種癥狀。
11.權利要求1的方法，其中所述的患者處于發(fā)展為與顫蛋白缺乏或機能不良與有關的疾病或病癥的風險中，并且其中對患者給藥PUFA預防或延緩所述的疾病或病癥的發(fā)作。
12.權利要求1的方法，其中，在給藥步驟之前，所述的方法包括測量源自患者的生物樣品中的顫蛋白的含量或生物活性。
13.權利要求12的方法，還包括比較患者樣品中顫蛋白的量以及同樣類型的樣品中顫蛋白的基線量，其中患者樣品中顫蛋白的量與基線量相比的變化表明所述的患者具有顫蛋白缺乏。
14.權利要求12的方法，其中測量的步驟利用選自下列的方法進行mRNA轉錄分析、蛋白質印跡、免疫印跡、酶-聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫測定(RIA)、免疫沉淀反應、表面等離振子共振、化學發(fā)光、熒光偏振、磷光、免疫組織化學分析、基質-輔助激光解吸/離子時間飛行(MALDI-TOF)質譜、微細胞術、微陣列、顯微鏡、熒光激活細胞分選(FACS)、流式細胞術、以及蛋白質微芯片或微陣列。
15.權利要求12的方法，還包括測定患者中不同的顫蛋白大小形式的相對的表達或活性以建立患者樣品中的顫蛋白大小形式譜，并比較所述的患者顫蛋白大小形式譜以及同樣類型的樣品中的顫蛋白大小形式基線譜，其中與基線譜中大小形式相對表達或活性相比，一或多種顫蛋白大小形式表達的變化的變化表明所述的患者具有顫蛋白缺乏或機能不良。
16.權利要求15的方法，其中測量的步驟利用選自下列的技術進行mRNA轉錄分析、蛋白質印跡、免疫印跡以及毛細管電泳。
17.權利要求12的方法，還包括比較患者樣品中顫蛋白的活性以及同樣類型樣品中的顫蛋白的基線活性，其中與基線水平相比，患者樣品中顫蛋白活性水平的變化表明所述的患者具有顫蛋白機能不良。
18.權利要求17的方法，其中測量活性的步驟通過選自下列的技術實現(xiàn)受體-配體測定和磷酸化測定。
19.權利要求12的方法，還包括測量患者樣品中促甲狀腺素(TSH)的水平并且比較患者樣品中TSH的量以及同樣類型樣品中的TSH基線量，其中與基線量相比，患者樣品中TSH的量的變化表明所述的患者具有TSH缺乏。
20.權利要求19的方法，還包括對患者給藥甲狀腺藥物聯(lián)合PUFA。
21.權利要求12-20中任一項的方法，其中所述的生物樣品選自細胞樣品、組織樣品以及體液樣品。
22.權利要求21的方法，其中所述的生物樣品為血液樣品。
23.權利要求1的方法，還包括在給藥步驟之后至少一次監(jiān)測給藥PUFA對患者中顫蛋白水平或生物活性的效果。
24.權利要求1的方法，還包括在給藥步驟之后至少一次監(jiān)測給藥PUFA對患者中顫蛋白一或多種大小形式的表達或生物活性變化的效果。
25.權利要求23或24的方法，還包括基于監(jiān)測的效果治療的結果調整后續(xù)治療中對患者給藥PUFA。
26.權利要求1的方法，其中所述的患者具有下述疾病，懷疑具有下述疾病，或處于發(fā)展下述疾病的風險中神經(jīng)疾病或神經(jīng)精神疾病。
27.權利要求1的方法，其中所述的患者罹患癲癇發(fā)作。
28.權利要求1的方法，其中所述的患者具有下述疾病，懷疑具有下述疾病，或處于發(fā)展下述疾病的風險中與神經(jīng)病機能不良有關的自體免疫疾病。
29.權利要求1的方法，其中所述的患者具有抗-磷脂疾病。
30.權利要求1的方法，其中所述的患者具有下述疾病，懷疑具有下述疾病，或處于發(fā)展下述疾病的風險中，所述的疾病選自精神分裂癥、雙相性精神障礙、誦讀困難、運動障礙、注意力不集中的過度反應癥(ADHD)、癲癇、孤獨癥、帕金森病、老年癡呆、阿耳茨海默(氏)病、過氧化物酶體增殖子激活疾病(PPAR)、多發(fā)性硬化癥、糖尿病誘導的神經(jīng)疾病、黃斑變性、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、亨延頓(氏)舞蹈病、肌萎縮側索硬化(ALS)、色素性視網(wǎng)膜炎、腦性麻痹、肌肉萎縮癥、癌癥、囊性纖維化病、神經(jīng)管缺陷、抑郁癥、澤韋格綜合征、無腦回、唐氏綜合征、肌肉-眼睛-腦疾病、Walker-Warburg綜合征、Charoct-Marie-Tooth疾病、包涵體肌炎(IBM)以及Aniridia。
31.權利要求1的方法，其中所述的患者具有甲狀腺疾病。
32.權利要求1的方法，其中PUFA對所述的患者給藥的同時聯(lián)用一或多種用于治療與顫蛋白缺乏或機能不良有關的疾病的其他治療化合物。
33.一種調節(jié)組織或流體顫蛋白表達的方法，包括對患者給藥一定量的選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，有效調節(jié)患者的組織或流體中的顫蛋白表達。
34.權利要求33的方法，其中PUFA的量足以增加患者組織或流體中顫蛋白的表達。
35.一種預防、減少或延緩視網(wǎng)膜發(fā)育缺陷或病癥的發(fā)作的方法，包括對所述的患者給藥選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，以有效預防、減少或延緩視網(wǎng)膜發(fā)育缺陷或病癥的發(fā)作并補償患者中顫蛋白缺乏或機能不良的作用。
36.一種預防、減少或延緩與顫蛋白缺乏或機能不良有關的發(fā)育缺陷或病癥的發(fā)作的方法，包括a)測量源自患者的生物樣品中顫蛋白的表達或生物活性；b)對所述的患者給藥選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，其中PUFA的給藥量基于顫蛋白樣品中表達或生物活性進行確定。
37.權利要求36的方法，其中測量顫蛋白表達或活性的步驟還包括測定樣品中單個顫蛋白大小形式的相對表達或活性。
38.權利要求36的方法，其中對所述的患者給藥PUFA的量通過下述步驟確定比較患者樣品中顫蛋白表達或生物活性的水平以及相應于推薦劑量的PUFA的顫蛋白表達或活性基線水平，并相應地調節(jié)針對所述的患者的PUFA劑量。
39.權利要求38的方法，其中當患者中顫蛋白的表達或生物活性低于基線水平的時候，對所述的患者給藥的PUFA的量相對于推薦劑量的PUFA增加。
40.權利要求36的方法，其中對所述的患者給藥PUFA的量通過下述步驟確定比較患者樣品中不同的顫蛋白大小形式的表達或活性以及相應于推薦劑量的PUFA的顫蛋白大小形式的基線譜，并相應地調節(jié)針對所述的患者的PUFA。
41.權利要求40的方法，其中當患者樣品中一或多種顫蛋白大小形式的相對表達或活性不同于基線譜中顫蛋白大小形式的相對表達或活性的時候，針對所述的患者給藥PUFA的量相對于推薦劑量的PUFA增加。
42.權利要求36的方法，其中源自所述的患者的生物樣品中的顫蛋白表達或生物活性的測量步驟在對患者給藥PUFA后重復一或多次。
43.權利要求42的方法，其中對所述的患者給藥PUFA的量根據(jù)患者中顫蛋白表達或生物活性的重復測量進行調節(jié)。
44.權利要求36的方法，其中源自所述的患者的生物樣品中顫蛋白表達或生物活性的測量步驟在患者的生命一部分時間或患者的整個生命過程中間歇重復，并且其中對所述的患者給藥PUFA的量相應于患者中顫蛋白表達或生物活性的每次新的測量進行調節(jié)。
45.權利要求36的方法，其中患者中顫蛋白的表達或生物活性基本正常，并且其中PUFA以增補劑進行給藥以預防或減少顫蛋白缺乏或機能不良的發(fā)展的風險。
46.權利要求36的方法，其中所述的患者為懷孕女性。
47.權利要求36的方法，其中所述的患者為泌乳女性。
48.權利要求36的方法，其中所述的患者為成人。
49.權利要求36的方法，其中所述的患者為兒童或青少年。
50.權利要求36的方法，其中所述的患者為胚胎或胎兒，并且其中通過將PUFA給藥予胚胎或胎兒的母親對胚胎或胎兒給藥PUFA。
51.權利要求36的方法，其中所述的患者具有或處于發(fā)展與顫蛋白缺乏或機能不良或脂肪酸結合蛋白缺乏有關的神經(jīng)疾病或神經(jīng)精神疾病的風險中。
52.權利要求36的方法，其中所述的患者具有或處于發(fā)展與顫蛋白缺乏或機能不良或脂肪酸結合蛋白缺乏有關的自體免疫疾病的風險中。
53.權利要求36的方法，其中所述的患者具有或處于發(fā)展與顫蛋白缺乏或機能不良或脂肪酸結合蛋白缺乏有關的發(fā)育缺陷的風險中。
54.一種監(jiān)測患者腦中DHA水平的方法，包括測量來自所述的患者的生物樣品中的顫蛋白表達或生物活性水平并且基于顫蛋白的測量估計所述的患者腦中的DHA水平。
55.權利要求54的方法，還包括對所述的患者給藥一定量的相應于顫蛋白表達或生物活性的測量水平的DHA。
56.權利要求55的方法，其中DHA的給藥量足以補償患者中腦脂質結合蛋白的降低的表達或活性或以改善患者中腦脂質結合蛋白的活性。
57.權利要求54的方法，還包括比較源自所述的患者的生物樣品中的顫蛋白表達或生物活性的水平以及顫蛋白表達或生物活性的基線水平，其中顫蛋白表達或生物活性的基線水平與研究對象腦中的DHA基線水平相關，其中基線水平通過選自如下的方法建立a)對源自患者的先前樣品的顫蛋白表達或活性的在先測量，建立顫蛋白表達或活性的基線水平，其中先前樣品為同樣的細胞類型、組織型或體液型；以及b)利用源自與患者樣品同樣的細胞類型、組織型或體液型對照樣品，建立顫蛋白表達或活性的基線水平，對照樣品從匹配的單體群獲得。
58.權利要求57的方法，其中與DHA的基線水平相比，所述的患者腦中的估計的低水平的DHA表明所述的患者應該給藥一定量的DHA以補償患者腦中的DHA水平。
59.一種預測HUFA摻入到患者的磷脂膜中的功效的方法，包括a)測量源自患者的生物樣品中顫蛋白表達或生物活性；b)比較所述的生物樣品的顫蛋白表達或生物活性以及顫蛋白的基線水平；并且c)預測所述的患者的HUFA摻入到磷脂膜中的功效，其中與顫蛋白表達或生物活性基線水平相比，所述的生物樣品中顫蛋白表達或生物活性水平的差異表明所述的患者有效地摻入HUFA到磷脂膜中的預測能力的修正。
60.權利要求59的方法，還包括對患者開出一定量的HUFA處方，其中所述的量基于所述的患者的有效地摻入HUFA到磷脂膜中的預測能力確定。
61.一種診斷患者中DHA缺乏的方法，包括a)測量源自患者的生物樣品中的顫蛋白表達或生物活性；b)比較所述的生物樣品中顫蛋白表達或生物活性以及顫蛋白的基線水平；以及c)對患者進行診斷，其中與顫蛋白表達或生物活性基線水平相比，檢測出所述的生物樣品中的顫蛋白表達或生物活性的水平差異，表明患者中DHA缺乏的陽性診斷。
62.權利要求61的方法，其中與顫蛋白表達或生物活性基線水平相比，所述的生物樣品顫蛋白表達或生物的活性較低水平的檢測，表明患者中DHA缺乏的陽性診斷。
63.權利要求61的方法，其中所述的生物樣品選自細胞樣品、組織樣品以及體液樣品。
64.權利要求63的方法，其中所述的生物樣品為血液樣品。
65.權利要求61的方法，其中步驟(a)的測量包括測量顫蛋白的mRNA轉錄。
66.權利要求65的方法，其中步驟(a)的測量通過選自逆轉錄酶-PCR(RT-PCR)、原位雜交、Northern印跡、序列分析、微陣列分析以及報告基因的檢測的方法進行。
67.權利要求61的方法，其中步驟(a)的測量包括測量顫蛋白蛋白質表達。
68.權利要求67的方法，其中步驟(a)的測量利用選自下述的方法進行免疫印跡、酶-聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射免疫測定(RIA)、免疫沉淀反應、表面等離振子共振、化學發(fā)光、熒光偏振、磷光、免疫組織化學分析、基質-輔助激光解吸/離子時間飛行(MALDI-TOF)質譜、微細胞術、顯微鏡、熒光激活細胞分選、流式細胞術以及蛋白質微芯片或微陣列。
69.權利要求61的方法，其中步驟(a)的測量包括測量顫蛋白的生物活性。
70.權利要求69的方法，其中步驟(a)的測量利用選自受體-配體測定以及磷酸化測定的方法進行。
71.權利要求61的方法，其中基線水平利用選自下述的方法建立a)建立源自患者的自體同源對照樣品中的顫蛋白表達或活性的基線水平，其中自體同源樣品為與步驟(a)樣品同樣的細胞類型、組織型或體液型；b)建立顫蛋白表達或活性的基線水平，所述的基線水平為源自患者的先前樣品中的顫蛋白表達或活性至少兩次先前測量，其中每次的先前樣品為與步驟(a)樣品同樣的細胞類型、組織型或體液型，并且其中先前測量得到陰性的診斷；以及c)利用源自與步驟(a)樣品同樣的細胞類型、組織型或體液型的對照樣品建立顫蛋白表達或活性的基線水平，對照樣品從匹配的單體群中得到。
72.一種對懷孕以及哺乳期的女性增補PUFAs的方法，包括a)測量或源自胎兒或兒童的雙親之一或二者的生物樣品中的顫蛋白表達或生物活性；b)對胎兒或兒童的母親給藥選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，其中PUFA的給藥量基于源自雙親的顫蛋白樣品中的表達或生物活性測量而確定，其中PUFA增補女性以及其胎兒或兒童中的PUFA。
73.權利要求72的方法，其中PUFA的給藥量足以補償胎兒或兒童中的降低的腦脂質結合蛋白表達或活性或改善胎兒或兒童中腦脂質結合蛋白的活性。
74.權利要求72的方法，其中PUFA的給藥量足以降低生產(chǎn)患有顫蛋白缺乏或機能不良嬰兒的風險。
75.權利要求72的方法，其中PUFA的給藥量足以降低生產(chǎn)患有顫蛋白缺乏或機能不良男性嬰兒的風險。
76.權利要求72的方法，其中PUFA的給藥量足以預防、延緩母親、兒童或胎兒孤獨癥的發(fā)作或減少癥狀。
77.權利要求72的方法，其中PUFA的給藥量足以預防、延緩母親、兒童或胎兒的神經(jīng)元移行病癥的發(fā)作或減少癥狀。
78.權利要求72的方法，其中PUFA的給藥量足以預防、延緩母親、兒童或胎兒中與顫蛋白缺乏或機能不良有關的癥狀的發(fā)作或減少癥狀。
79.一種增補懷孕以及哺乳期女性中的PUFAs以降低生產(chǎn)具有或處于發(fā)展為顫蛋白缺乏或機能不良的嬰兒的風險的方法，包括a)鑒別懷孕女性懷孕的胎兒性別；b)在懷孕以及哺乳期的整個階段或者部分階段給藥選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)以降低出生時候帶有顫蛋白缺乏或機能不良的胎兒或出生后發(fā)展為顫蛋白缺乏或機能不良的嬰兒的風險，其中與女性胎兒為相比，對男性胎兒給藥PUFA增加。
80.一種預防、延緩兒童中與顫蛋白缺乏或機能不良有關的癥狀或疾病的發(fā)作或減少癥狀的方法，包括a)測量源自兒童的生物樣品中的顫蛋白的表達或生物活性；以及b)對兒童給藥選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源多不飽和脂肪酸(PUFA)，其中PUFA的給藥量基于樣品中顫蛋白表達或生物活性的測量進行確定。
81.權利要求80的方法，其中PUFA以嬰兒制劑提供，增補包括DHA和ARA的脂肪酸。
82.權利要求80的方法，其中PUFA的給藥量足以補償兒童中腦脂質結合蛋白降低的表達或活性或改善兒童中腦脂質結合蛋白的活性。
83.權利要求80的方法，其中給藥PUFA足以預防、延緩孤獨癥的發(fā)作或減少癥狀。
84.權利要求80的方法，其中給藥PUFA足以預防、延緩神經(jīng)元移行病癥的發(fā)作或減少癥狀。
85.一種預防、延緩與低分子量顫蛋白表型有關的阿耳茨海默(氏)病的發(fā)作或減少癥狀的方法，包括a)鑒別患有顫蛋白缺乏或機能不良的患者，包括帶有低分子量顫蛋白表型的患者；以及b)對所述的(a)中的患者給藥選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，足以補償患者中顫蛋白缺乏或機能不良的效果。
86.一種上調患者中脂肪酸結合蛋白的方法，包括對患者給藥選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)以有效上調FABP。
87.一種上調患者中顫蛋白表達或活性的方法，包括對所述的患者給藥選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)以有效上調顫蛋白表達或活性。
88.一種改善患者中神經(jīng)元移行的方法，包括對所述的患者給藥選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)以有效患者中改善神經(jīng)元移行。
89.權利要求88的方法，其中神經(jīng)元移行通過測量患者中顫蛋白表達或活性的水平進行測量。
90.權利要求88的方法，其中神經(jīng)功能利用成像技術以及表型評價進行。
91.一種鑒別神經(jīng)祖細胞細胞的方法，包括檢測細胞群中的顫蛋白表達或生物活性，其中確定水平的顫蛋白表達或生物活性與神經(jīng)祖細胞細胞相關。
92.權利要求91的方法，還包括選擇檢測了顫蛋白表達或生物活性的神經(jīng)祖細胞。
93.一種監(jiān)測神經(jīng)發(fā)育的方法，包括a)提供包括神經(jīng)祖細胞細胞的細胞群；b)檢測細胞群中的顫蛋白表達或活性；c)將細胞群暴露在神經(jīng)祖細胞將發(fā)展為分化的神經(jīng)細胞的條件下；并且d)監(jiān)測經(jīng)過步驟(c)之后的細胞中的顫蛋白的表達或活性，以評價神經(jīng)祖細胞向分化的神經(jīng)細胞的發(fā)育。
94.權利要求93的方法，還包括在步驟(b)之前或同時將步驟(a)的細胞群與推定的發(fā)育調節(jié)化合物接觸，并測定推定的調節(jié)化合物是否影響神經(jīng)祖細胞向分化的神經(jīng)細胞的發(fā)育，通過檢測細胞群中的顫蛋白表達或活性。
95.一種治療或預防與脂肪酸結合蛋白缺乏或機能不良有關的疾病的方法，包括a)鑒別帶有至少一種脂肪酸結合蛋白的表達或活性降低的患者；以及b)對所述的患者給藥多選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源的不飽和脂肪酸(PUFA)，給藥量足以補償所述的脂肪酸結合蛋白的降低表達或活性的效果。
96.權利要求95的方法，其中所述的脂肪酸結合蛋白為腦脂質結合蛋白(BLBP)。
97.權利要求95的方法，其中所述的脂肪酸結合蛋白為心臟中的脂肪酸結合蛋白。
98.一種治療或預防與降低脂肪酸結合蛋白受體的活性或機能不良有關的疾病的方法，包括a)鑒別帶有脂肪酸結合蛋白受體降低的活性或機能不良的患者；以及b)對所述的患者給藥選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，給藥量足以補償降低的脂肪酸結合蛋白受體的活性或機能不良的效果。
99.一種藥物組合物，包括一定量的選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源的多不飽和脂肪酸(PUFA)，以及至少一種治療化合物以用于治療或預防與顫蛋白缺乏有關的疾病，足以補償患者中脂肪酸結合蛋白降低的表達或活性，所述的患者具有或處于發(fā)展顫蛋白缺乏的風險中。
100.權利要求99的藥物組合物，其中治療化合物為甲狀腺藥物。
101.一種診斷患者中DHA缺乏的方法，包括a)測量源自患者的生物樣品中的顫蛋白表達或生物活性；b)比較所述的生物樣品的顫蛋白表達或生物活性以及顫蛋白的基線水平；c)測量源自患者的生物樣品中的促甲狀腺素(TSH)表達或生物活性；d)比較所述的生物樣品的TSH表達或生物活性以及TSH的基線水平；以及e)進行患者的診斷，其中與顫蛋白表達或生物活性基線水平相比，所述的生物樣品中顫蛋白表達或生物活性的水平檢測出差異，并且其中與TSH表達或生物活性基線水平相比，檢測出所述的生物樣品中TSH表達或生物活性的水平的差異，表明患者中DHA缺乏的陽性診斷。
102.權利要求102的方法，其中所述的生物樣品選自細胞樣品、組織樣品以及體液樣品。
103.權利要求102的方法，其中所述的患者為懷孕的或懷疑為懷孕的。
104.一種增補懷孕以及哺乳期女性PUFAs的方法，包括a)測量源自胎兒或兒童的母親生物樣品中的顫蛋白的表達以及生物活性；b)測量所述的生物樣品中的促甲狀腺素表達或生物活性；c)對胎兒或兒童的母親給藥選自ω-3PUFA以及ω-6PUFA，或前體或其來源多不飽和脂肪酸(PUFA)，其中PUFA的給藥量基于源自母親顫蛋白樣品中表達或生物活性的測量，其中PUFA增補女性以及其胎兒或兒童中的PUFA；以及d)如果源自母親樣品中的顫蛋白和促甲狀腺素的測量低于顫蛋白和促甲狀腺素的基線水平，對胎兒的母親或兒童給藥至少一種甲狀腺藥物。
105.一種診斷胎兒神經(jīng)發(fā)育疾病的方法，包括a)測量源自胎兒的羊膜流體樣品中的顫蛋白表達或生物活性；b)比較樣品中的顫蛋白表達或生物活性以及顫蛋白的基線水平；以及c)進行胎兒的診斷，其中與顫蛋白表達或生物活性基線水平相比，檢測出樣品中顫蛋白表達或生物活性的水平的差異，表明胎兒神經(jīng)發(fā)育疾病的陽性診斷。
106.權利要求105的方法，其中對(c)中的陽性診斷胎兒在子宮內給藥一定量的顫蛋白或顫蛋白基因足以治療神經(jīng)發(fā)育疾病。
107.權利要求105的方法，其中對(c)中的陽性診斷的胎兒出生后給藥一定量的顫蛋白足以治療神經(jīng)發(fā)育疾病。
108.權利要求107的方法，其中顫蛋白以嬰兒制劑給藥。
109.一種營養(yǎng)增補劑或口服藥物，包括足以延緩或預防顫蛋白-缺乏或機能不良或與之相關的疾病或病癥的發(fā)展量的顫蛋白。
110.權利要求109的營養(yǎng)增補劑或口服藥物，其中增補劑以嬰兒劑型的形式提供。
111.權利要求109的營養(yǎng)增補劑或口服藥物，其中增補劑通過嬰兒的母親產(chǎn)生的乳汁對嬰兒提供，其中嬰兒的母親在哺乳期之前或期間增補顫蛋白。
112.權利要求1、33、35、36、60、72、79、80、81、85、86、87、88、95、98、99，或104，其中PUFA為高度不飽和脂肪酸(HUFA)。
113.權利要求1、33、35、36、60、72、79、80、81、85、86、87、88、95、98、99，或104，其中PUFA選自花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)和二十二碳五烯酸(DPA)。
114權利要求1、33、35、36、60、72、79、80、81、85、86、87、88、95、98、99或者104中任一項的方法，其中PUFA選自ARA、EPA和DHA。
115權利要求1、33、35、36、60、72、79、80、81、85、86、87、88、95、98、99，或104中任一項的方法，其中PUFA為DHA。
116權利要求1、33、35、36、60、72、79、80、81、85、86、87、88、95、98、99，或104中任一項的方法，其中PUFA的來源選自魚油、海藻和植物油。
117權利要求1、33、35、36、60、72、79、80、81、85、86、87、88、95、98、99，或104中任一項的方法，其中PUFA為DHA并且其中DHA的前體選自α-亞麻酸(LNA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)，以及選自LNA、EPA和DPA的前體的混合物。
118.權利要求1、33、35、36、60、72、79、80、81、85、86、87、88、95、98、99，或104中任一項的方法，其中PUFA以下述形式給藥選自包括甘油三酯形式PUFA的高度純凈的海藻油、包括PUFA的甘油三酯油、包括PUFA的磷脂、包括PUFA的蛋白質和磷脂組合、干燥的海洋微藻、包括PUFA的鞘脂類、酯、游離的脂肪酸、PUFA與其他的生物活性分子偶聯(lián)物及其組合。
119.權利要求118的方法，其中所述的生物活性分子選自蛋白質、氨基酸、藥物和糖。
120.權利要求1、33、35、36、60、72、79、80、81、85、86、87、88、95、98、99，或104中任一項的方法，其中PUFA經(jīng)口服給藥。
121.權利要求1、33、35、36、60、72、79、80、81、85、86、87、88、95、98、99，或104中任一項的方法，其中PUFA以包括PUFA或前體或其來源的制劑給藥，所述的制劑選自咀嚼片劑、速溶片劑、泡騰片劑、可重構粉末、酏劑、液體、溶液、混懸劑、乳劑、片劑、多層片劑，雙層片劑、膠囊、軟明膠膠囊、硬明膠膠囊、囊片、錠劑、咀嚼錠劑、小珠、粉末、顆粒、粒、微粒、可分散顆粒、扁囊劑、灌腸劑、栓劑、乳膏劑、局用劑型、吸入劑、氣霧吸入劑、貼劑、粒吸入劑、植入劑、長效植入劑、可吸收劑、注射劑、輸液劑、health bars、糖膏劑、米粉、米粉敷料、食品、營養(yǎng)食品、功能性食品及其組合。
122.權利要求121的方法，其中PUFA以選自下述形式的制劑提供包括PUFA的高度純凈的海藻油、包括PUFA的甘油三酯油、包括PUFA的磷脂、蛋白質以及包括PUFA的磷脂的組合物、包括PUFA的干燥的海洋微藻，包括PUFA的鞘脂類、PUFA的酯、游離脂肪酸、PUFA與另一種生物活性分子的復合物，及其組合。
123.權利要求1、33、35、36、60、72、79、80、81、85、86、87、88、95、98、99，或104中任一項的方法，其中PUFA以約0.05mg的PUFA每公斤患者體重至約200mg的PUFA每公斤患者體重的劑量進行給藥。
全文摘要
記載了一種測量作為生物標志物的顫蛋白的方法，以非破壞性地評估或預測在目前無法接近或難以接近的腦中以及其他部位的DHA水平，后者為中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的關鍵成分。還記載了一種預防、延緩顫蛋白缺乏或機能不良和/或與顫蛋白缺乏或機能不良有關的疾病或病癥的發(fā)作或進行治療的方法，包括對診斷具有或懷疑患有顫蛋白缺乏或機能不良的患者給藥一定量的PUFA，并且尤其是ω－3 PUFA，以及更具體地，二十二碳六烯酸(DHA)或前體或其來源，以補償患者中顫蛋白缺乏或機能不良的效果。還記載了一種預防或減少與顫蛋白機能不良或缺乏有關的發(fā)育缺陷或病癥的方法，通過補充使用多不飽和脂肪酸(PUFAs－具有兩個或多個雙鍵的不飽和脂肪酸)，并且尤其是高度不飽和脂肪酸(HUFAs－具有三個或多個雙鍵的不飽和脂肪酸)，并且更具體地HUFA選自花生四烯酸(ARA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)以及二十二碳五烯酸(DPA)，以及更具體地ω－3HUFAs，以及更具體地DHA，以達到補償患者中降低的脂肪酸結合蛋白或其功能；補償患者中降低的腦脂質結合蛋白或其功能；改善患者中脂肪酸結合蛋白的活性；增加患者中腦脂質結合蛋白(BLBPs)的表達；改善患者中腦脂質結合蛋白作用機制的至少一個參數(shù)；克服中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)結構中的DHA缺乏并且改善其導致的功能；增加功能性DHA以及其他的PUFAs向患者中膠質細胞以及神經(jīng)細胞磷脂膜中的摻入；增加顫蛋白的水平和/或改善患者中顫蛋白的活性；和/或改善與顫蛋白缺乏或機能不良有關的疾病或病癥的至少一種癥狀。
文檔編號A61K31/20GK1933828SQ200580008876
公開日2007年3月21日 申請日期2005年1月19日 優(yōu)先權日2004年1月19日
發(fā)明者約翰·P·莫斯曼, 馬克·W·莫斯, 洛里·A·埃利斯 申請人:馬泰克生物科學公司