專利名稱：一種注射用銀杏葉凍干粉針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種注射用銀杏葉凍干粉針劑及其制備方法背景技術(shù)銀杏(GingkobiobaL)又名白果，是我國特有的孑孓古樹種之一，屬銀杏科，是銀杏屬現(xiàn)存的唯一生存種，銀杏是我國的稀有樹種，也是世界上珍貴的藥用植物資源。尤其在最近幾年來，國內(nèi)外相繼對(duì)銀杏葉化學(xué)成分、藥理作用進(jìn)行了深入研究，大量的藥學(xué)、藥理、藥效、臨床研究表明銀杏葉提取物的主要活性成份是銀杏總黃酮醇苷類、萜內(nèi)酯類化合物，這類成分也是評(píng)判銀杏葉提取物質(zhì)量的重要指標(biāo)。
臨床及藥理研究發(fā)現(xiàn)銀杏葉提取物具有增強(qiáng)心功能、改善微循環(huán)、降低血液粘稠性、拮抗血小板活化因子(PAF)，清除體內(nèi)自由基及明顯的纖維蛋白原溶解，抑制血流再灌注后的損傷，增強(qiáng)心臟細(xì)胞對(duì)缺血的耐受能力等。在國外尤其是德國、法國已有一定量銀杏葉提取物應(yīng)用于臨床并證明了其效果，目前已發(fā)展到歐、亞、美等幾十個(gè)國家。目前國內(nèi)外利用銀杏葉提取物開發(fā)出了許多能有效治療與預(yù)防心腦血管、周邊血管、神經(jīng)系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)疾病的藥物與保健食品，銀杏葉提取物及其制劑已在臨床與人們的生活中有了一定的應(yīng)用，但應(yīng)用程度不高，銀杏制劑主要作為輔助藥物用于臨床，主要原因是銀杏葉提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中有效成分量偏低，影響了療效。如國際上通用的EGB761銀杏葉提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中以銀杏黃酮苷24％、萜內(nèi)酯6％為質(zhì)量指標(biāo)，用銀杏黃酮苷24％、萜內(nèi)酯6％作為銀杏葉提取物的有效成分限度是偏低的，不能滿足臨床的療效要求。造成銀杏葉提取物有效成分含量偏低的原因同銀杏葉提取物的生產(chǎn)工藝有很大關(guān)系。已報(bào)道的銀杏葉提取物現(xiàn)有工藝技術(shù)有樹脂吸附純化法、熱浸法、微波提取法、二氧化碳超臨界提取法等?，F(xiàn)有技術(shù)存在的主要問題提取的有效成分總量不高、工藝路線不夠合理或工業(yè)化條件不具備等。
市售銀杏葉注射制劑為舒血寧注射液，其在制備工藝中存在一定的缺陷導(dǎo)致銀杏內(nèi)酯的含量達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)，使得其成品合格率較低，臨床應(yīng)用效果不是很理想；申請(qǐng)?zhí)枮?00410069037.6和03152921的專利應(yīng)用聚酰胺和大孔吸附樹脂的方法提取純化銀杏葉，該工藝方法使用聚酰胺價(jià)格昂貴，同時(shí)工業(yè)化生產(chǎn)較困難；申請(qǐng)?zhí)枮?3150054、03114825、02113533的專利應(yīng)用大孔吸附樹脂的方法提取純化銀杏葉，該方法對(duì)樹脂洗脫液沒有進(jìn)一步純化，使一些銀杏葉雜質(zhì)保留在制劑中，臨床應(yīng)用安全性較低；申請(qǐng)?zhí)枮?2134490的專利應(yīng)用大孔樹脂和二氧化碳超臨界萃取的方法提取純化銀杏葉，該方法組合在工業(yè)化生產(chǎn)中生產(chǎn)消耗很高，造成產(chǎn)品的附加值也很高，給患者造成相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)；申請(qǐng)?zhí)枮?2113530、02113529的專利應(yīng)用大孔吸附樹脂純化銀杏葉，該申請(qǐng)主要介紹了大孔樹脂去除銀杏葉有害雜質(zhì)銀杏酸的方法，而對(duì)提高銀杏葉產(chǎn)品質(zhì)量未作介紹；申請(qǐng)?zhí)枮?5118737的專利應(yīng)用堿性水提取、D101型大孔樹脂提取純化銀杏葉，該申請(qǐng)只是應(yīng)用D101型大孔樹脂純化銀杏葉總黃酮，對(duì)銀杏葉另一重要有效成分的銀杏內(nèi)酯未作任何介紹，導(dǎo)致有效成分的流失，浪費(fèi)了大量有限資源。

發(fā)明內(nèi)容
基于上述原因，我們通過實(shí)驗(yàn)研究，對(duì)銀杏葉采用乙醇提取、乙醇沉淀、殼聚糖沉淀、D101大孔吸附樹脂乙醇洗脫、水飽和乙酸乙酯萃取、水飽和正丁醇萃取的方法得到銀杏葉提取物，得到的提取物進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)銀杏總內(nèi)酯不小于10％，其中銀杏內(nèi)酯A、B、C、白果內(nèi)酯總量不低于75％，總黃酮醇苷不小于40％，總黃酮以蘆丁計(jì)不小于70％，銀杏酚酸小于5ppm；銀杏葉提取物與凍干賦形劑混合制備成凍干粉針劑，藥理試驗(yàn)表明，本申請(qǐng)凍干粉針劑與市售銀杏葉注射制劑比較具有更好的藥理作用。
本申請(qǐng)?jiān)诠に囇芯恐校瑢?duì)大孔吸附樹脂進(jìn)行優(yōu)選實(shí)驗(yàn)，通過實(shí)驗(yàn)確定D101型大孔樹脂純化得到銀杏葉提取物，提取率高，銀杏總黃酮、總內(nèi)酯含量高，復(fù)合制備注射制劑中藥新藥的要求。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
一.工藝制法(1)取干燥銀杏葉，粉碎成1-5mm，加入銀杏葉質(zhì)量7-12倍體積量的50％-70％乙醇，浸泡1-3小時(shí)，回流提取1-2小時(shí)，提取液備用，殘?jiān)尤霘堅(jiān)|(zhì)量5-6倍體積量的50％-70％乙醇回流提取2次，每次0.5-1.5小時(shí)，提取液合并，濾過，回收乙醇至盡，濃縮至70℃時(shí)相對(duì)密度1.20-1.30的溶液，攪拌加入濃縮液2倍體積的10％乙醇，靜置30分鐘，離心，上清液攪拌加入1％殼聚糖溶液，加入體積為上清液體積的1/20-1/30，靜置60分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值3-4；(2)取上述上清液上D101大孔樹脂，10％乙醇洗脫，流速1-3倍柱體積/小時(shí)，至無色，洗脫液棄去，用70％乙醇繼續(xù)洗脫，流速1-3倍柱體積/小時(shí)，洗脫液回收乙醇至盡，加入水飽和乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯液層回收溶劑，備用；水液層調(diào)節(jié)pH值至8-9，用水飽和正丁醇萃取兩次，正丁醇液層回收溶劑棄去，水層繼續(xù)濃縮，用85％乙醇溶解，調(diào)節(jié)pH值至10-10.5，靜置30分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值至5-6，回收乙醇至盡，與乙酸乙酯萃取有機(jī)相濃縮液合并，繼續(xù)濃縮，加入乙醇使乙醇達(dá)到10％，加入0.4％活性炭，煮沸，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度1.25-1.30，減壓干燥，得到銀杏葉提取提取物；(3)取上述銀杏葉提取物，加注射用水溶解完全，加入凍干賦形劑，調(diào)節(jié)PH值，0.22微米濾芯過濾，冷凍干燥，得到銀杏葉凍干粉針劑。
本申請(qǐng)使用的凍干賦形劑為甘露醇、乳糖或蔗糖中的一種。
二.檢測(cè)分析本申請(qǐng)銀杏葉提取物含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)原料本申請(qǐng)銀杏葉提取物(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)(1)銀杏總黃酮檢測(cè)分析運(yùn)用紫外分光光度法進(jìn)行檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)儀器日本島津公司紫外檢測(cè)器實(shí)驗(yàn)試劑0.4％磷酸(分析純)、甲醇(分析純)北京化工廠提供標(biāo)準(zhǔn)品蘆丁中國生物檢定所提供測(cè)定方法精密稱取本申請(qǐng)銀杏葉提取物和對(duì)照品蘆丁，置50ml容量瓶中，加入甲醇，分別精密吸取對(duì)照品溶液和樣品溶液，放入紫外檢測(cè)儀中，在265nm處檢測(cè)，經(jīng)過檢測(cè)和計(jì)算，銀杏總黃酮含量如表1所示。
(2)銀杏總內(nèi)酯的檢測(cè)分析按照《中華人民共和國藥典》(2005年版，一部)221葉銀杏葉含量測(cè)定方法進(jìn)行檢測(cè)分析，檢測(cè)結(jié)果如表1所示。
(3)銀杏總黃酮醇苷的檢測(cè)分析按照《中華人民共和國藥典》(2005年版，一部)221葉銀杏葉含量測(cè)定方法進(jìn)行檢測(cè)分析，檢測(cè)結(jié)果如表1所示。
(4)銀杏酸的檢測(cè)分析運(yùn)用反相銀化高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)分析。
高效液相色譜儀日本島津公司LC-10A液相色譜儀檢測(cè)器日本島津公司紫外檢測(cè)器試劑甲醇(分析純)、乙酸(分析純)由北京化工廠提供標(biāo)準(zhǔn)品銀杏酸對(duì)照品沈陽藥科大學(xué)天然藥化實(shí)驗(yàn)室提供。
色譜及檢測(cè)條件色譜柱為watersC18ODS(21mm×150mm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇5％乙酸水溶液(90∶10)，流速0.25ml/min，柱溫30℃。
測(cè)定法取對(duì)照品溶液及供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，用外標(biāo)計(jì)算銀杏酸的含量。經(jīng)過檢測(cè)和計(jì)算，銀杏酸如表1所示。
表1 銀杏葉提取物有效成分含量比較

實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過以上數(shù)據(jù)可以得到，本申請(qǐng)工藝得到的銀杏葉提取物中有效成分含量較高，銀杏酸含量低，因此，本申請(qǐng)工藝具有一定實(shí)際意義。
三.大孔樹脂優(yōu)選實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方案提取物1按照本申請(qǐng)的工藝得到銀杏葉提取物(使用D101大孔樹脂)；提取物2(1)按照本申請(qǐng)工藝制法(1)制備，得到上清液；(2)取上述上清液上AB-8型大孔樹脂，10％乙醇洗脫，流速2柱體積/小時(shí)，至無色，洗脫液棄去，用70％乙醇繼續(xù)洗脫，流速2柱體積/小時(shí)，洗脫液回收乙醇至盡，加入水飽和乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯液層回收溶劑，備用；水液層調(diào)節(jié)pH值至8-9，用水飽和正丁醇萃取兩次，正丁醇液層回收溶劑棄去，水層繼續(xù)濃縮，用85％乙醇溶解，調(diào)節(jié)pH值至10-10.5，靜置30分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值至5-6，回收乙醇至盡，與乙酸乙酯萃取有機(jī)相濃縮液合并，繼續(xù)濃縮，加入乙醇使乙醇達(dá)到10％，加入0.4％活性炭，煮沸，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度1.25-1.30，減壓干燥，得到銀杏葉提取提取物；提取物3(1)按照本申請(qǐng)工藝制法(1)制備，得到上清液；(2)取上述上清液上NKA型大孔樹脂，10％乙醇洗脫，流速2柱體積/小時(shí)，至無色，洗脫液棄去，用70％乙醇繼續(xù)洗脫，流速2柱體積/小時(shí)，洗脫液回收乙醇至盡，加入水飽和乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯液層回收溶劑，備用；水液層調(diào)節(jié)pH值至8-9，用水飽和正丁醇萃取兩次，正丁醇液層回收溶劑棄去，水層繼續(xù)濃縮，用85％乙醇溶解，調(diào)節(jié)pH值至10-10.5，靜置30分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值至5-6，回收乙醇至盡，與乙酸乙酯萃取有機(jī)相濃縮液合并，繼續(xù)濃縮，加入乙醇使乙醇達(dá)到10％，加入0.4％活性炭，煮沸，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度1.25-1.30，減壓干燥，得到銀杏葉提取提取物；1.提取率實(shí)驗(yàn)分別取干燥100克銀杏葉，按照上述實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行提取純化，得到銀杏葉提取物，稱重，計(jì)算提取率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2表2 不同大孔吸附樹脂提取率比較

2.提取物質(zhì)量分析分別取干燥銀杏葉100克，按照上述實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行提取，得到銀杏葉提取物，按照本申請(qǐng)檢測(cè)分析方法進(jìn)行分析，得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3
表3 不同大孔吸附樹脂得到的提取物質(zhì)量分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過上述實(shí)驗(yàn)，我們確定應(yīng)用D101型大孔吸附樹脂對(duì)銀杏葉提取純化得到的銀杏葉提取物質(zhì)量最好，因此，我們?cè)诒旧暾?qǐng)工藝組合中確定D101型大孔吸附樹脂。
四.藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)1對(duì)犬急性心肌梗死的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)藥物本申請(qǐng)銀杏葉凍干粉針劑(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)；市售舒血寧注射液(北京雙鶴現(xiàn)代高科制藥有限公司)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雜種犬，雌雄不限，體重(13.8±5)kg。
實(shí)驗(yàn)方法取雜種犬隨機(jī)分為梗死對(duì)照組，舒血寧注射液組、本申請(qǐng)銀杏葉凍干粉針劑組，給藥劑量為2mg/kg，戊巴比妥鈉30mg/kg、iv麻醉，氣管插管，開胸后連人工呼吸機(jī)維持正常通氣。左頸總動(dòng)脈插管，經(jīng)壓力換能器接AP-621G載波放大器，記錄頸總動(dòng)脈血壓。左第4肋間開胸，打開心包膜做懸床，暴露心臟。分離冠狀動(dòng)脈左旋支根部，放置適宜流量計(jì)探頭，接MF-27型電磁流量計(jì)記錄冠脈血流量。按預(yù)定缺血區(qū)約相當(dāng)左室游離壁前表面1/2的原則，分離LAD主干或包括第1至第4分支，于其下穿一絲線備結(jié)扎用。術(shù)后穩(wěn)定20minn，結(jié)扎LAD，于結(jié)扎后5min用恒速輸液泵從右股靜脈點(diǎn)滴給藥或生理鹽水。6h后從股靜脈取血，分離血清，以自動(dòng)生化分析儀測(cè)定肌酸磷酸激酶及乳酸脫氫酶總活性；按一次提取比色法測(cè)定游離脂肪酸含量；同時(shí)取心臟，生理鹽水沖洗，將左室肌橫切厚約3～4mm薄片，進(jìn)行氯化硝基四氮唑藍(lán)染色，計(jì)算梗死心肌占左室濕重百分率，即梗死面積(％)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4表4 對(duì)犬急性心肌梗死的保護(hù)作用

注與生理鹽水組比較，**P＜0.01；與陽性對(duì)照組比較#P＜0.05實(shí)驗(yàn)2對(duì)鼠心異位移植后心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)藥物本申請(qǐng)銀杏葉凍干粉針劑(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)；市售舒血寧注射液(北京雙鶴現(xiàn)代高科制藥有限公司)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物wistar大鼠，雌雄不限，體重250±45g。
實(shí)驗(yàn)方法取大鼠，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，舒血寧注射液組、本申請(qǐng)銀杏葉凍干粉針劑組，給藥量為6mg/kg，給藥30分鐘后，乙醚開放吸入麻醉，血液肝素化，剪開胸腔，立即向胸腔內(nèi)加入少許碎冰屑進(jìn)行供心表面降溫，剪開心包，近無名動(dòng)脈處剪斷升主動(dòng)脈，近肺動(dòng)脈分叉處剪斷主肺動(dòng)脈，然后提起心臟，結(jié)扎上、下腔靜脈及肺動(dòng)脈，并在其遠(yuǎn)端切斷，迅速將心臟置于冷停搏液(4℃)中，用同樣的停搏液自剪斷的升主動(dòng)脈斷端恒壓灌洗(壓力3.99-5.32kpa)至心跳停止，心肌顏色變白為止，灌注停搏液后停跳的離體心臟仍保存在原停搏液中。從正中線剪開腹腔，游離出腹主動(dòng)脈和下腔靜脈，在雙側(cè)腎動(dòng)脈以下、髂動(dòng)脈分叉以上，阻斷通向背側(cè)的中、小交通支，同時(shí)將供心套入冷循環(huán)牽引兩用袋內(nèi)，在同一平面縱行剪開腹主動(dòng)脈、下腔靜脈前壁約3cm，將供心升主動(dòng)脈與受體鼠的腹主動(dòng)脈切口做全層連續(xù)縫合，將供心主肺動(dòng)脈與受體鼠的下腔靜脈切口做連續(xù)縫合，自供體心取出，灌注心臟停搏液后40min，恢復(fù)移植心臟供血，30min內(nèi)移植心臟復(fù)跳，將腸管按原位送回腹腔，關(guān)腹，正常飼養(yǎng)，通過腹壁觸診移植心臟搏動(dòng)情況，判斷移植心臟是否存活。24h實(shí)驗(yàn)組和空白組分別采血1ml，離心出血清，用日立公司生產(chǎn)的全自動(dòng)生化分析儀7150測(cè)定CK、CK-MB活力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5表5 對(duì)鼠心異位移植后心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

注與生理鹽水組比較，**P＜0.01；與陽性對(duì)照組比較#P＜0.05實(shí)驗(yàn)3對(duì)大白鼠血栓形成的影響。
實(shí)驗(yàn)藥物本申請(qǐng)銀杏葉凍干粉針劑(廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室提供)；市售舒血寧注射液(北京雙鶴現(xiàn)代高科制藥有限公司)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重300-400克的大白鼠30只，雌雄不分。分成三組，每組10只。
實(shí)驗(yàn)方法將大白鼠分為空白對(duì)照組、市售舒血寧注射液組、本申請(qǐng)銀杏葉凍干粉針劑組，給藥30分鐘后，麻醉(戊巴比妥鈉30-40mg/kg，ip)，仰臥位固定，分離氣管，插入一塑料套管，并分離右頸總動(dòng)脈及左頸外靜脈，在聚乙烯管的中段放入一根長6厘米的絲線，以肝素生理鹽水溶液，充滿聚乙烯管，當(dāng)聚乙烯管的一端插入左頸外靜脈后，由聚乙烯管準(zhǔn)確的注入肝素抗凝，然后再將聚乙烯管的另一端插入右頸總動(dòng)脈，打開動(dòng)脈夾，血液從右頸總動(dòng)脈流至聚乙烯管，返回左頸外靜脈，開放血流15分鐘后斷血流，迅速取出絲線稱重，總重量減去絲線重量即得血栓重量。將空白組和另外兩組給藥組的動(dòng)物血栓濕重進(jìn)行記錄，進(jìn)行計(jì)算，如表6所示表6 各給藥組的血栓重量

注與生理鹽水組比較，**P＜0.01；與陽性對(duì)照組比較#P＜0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過上述藥理實(shí)驗(yàn)表明，本申請(qǐng)銀杏葉凍干粉針劑比市售銀杏葉注射制劑具有更好的藥理作用。
四.制備實(shí)施例實(shí)施例1(1)取干燥銀杏葉1000克，粉碎成1mm，加入銀杏葉質(zhì)量7倍體積量的50％乙醇，浸泡1小時(shí)，回流提取1小時(shí)，提取液備用，殘?jiān)尤霘堅(jiān)|(zhì)量5倍體積量的50％乙醇回流提取2次，每次0.5小時(shí)，提取液合并，濾過，回收乙醇至盡，濃縮至70℃時(shí)相對(duì)密度1.20的溶液，攪拌加入濃縮液2倍體積的10％乙醇，靜置30分鐘，離心，上清液攪拌加入1％殼聚糖溶液，加入體積為上清液體積的1/20，靜置60分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值3；(2)取上述上清液上D101大孔樹脂，10％乙醇洗脫，流速1倍柱體積/小時(shí)，至無色，洗脫液棄去，用70％乙醇繼續(xù)洗脫，流速1倍柱體積/小時(shí)，洗脫液回收乙醇至盡，加入水飽和乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯液層回收溶劑，備用；水液層調(diào)節(jié)pH值至8，用水飽和正丁醇萃取兩次，正丁醇液層回收溶劑棄去，水層繼續(xù)濃縮，用85％乙醇溶解，調(diào)節(jié)pH值至10，靜置30分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值至5，回收乙醇至盡，與乙酸乙酯萃取有機(jī)相濃縮液合并，繼續(xù)濃縮，加入乙醇使乙醇達(dá)到10％，加入0.4％活性炭，煮沸，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度1.25，減壓干燥，得到銀杏葉提取提取物40克；(3)取上述銀杏葉提取物40克，加注射用水溶解完全，加入凍干賦形劑甘露醇60克，調(diào)節(jié)PH值，0.22微米濾芯過濾，冷凍干燥，得到銀杏葉凍干粉針劑1000瓶。
實(shí)施例2(1)取干燥銀杏葉1000克，粉碎成5mm，加入銀杏葉質(zhì)量12倍體積量的70％乙醇，浸泡3小時(shí)，回流提取2小時(shí)，提取液備用，殘?jiān)尤霘堅(jiān)|(zhì)量6倍體積量的70％乙醇回流提取2次，每次1.5小時(shí)，提取液合并，濾過，回收乙醇至盡，濃縮至70℃時(shí)相對(duì)密度1.30的溶液，攪拌加入濃縮液2倍體積的10％乙醇，靜置30分鐘，離心，上清液攪拌加入1％殼聚糖溶液，加入體積為上清液體積的1/30，靜置60分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值4；(2)取上述上清液上D101大孔樹脂，10％乙醇洗脫，流速3倍柱體積/小時(shí)，至無色，洗脫液棄去，用70％乙醇繼續(xù)洗脫，流速3倍柱體積/小時(shí)，洗脫液回收乙醇至盡，加入水飽和乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯液層回收溶劑，備用；水液層調(diào)節(jié)pH值至9，用水飽和正丁醇萃取兩次，正丁醇液層回收溶劑棄去，水層繼續(xù)濃縮，用85％乙醇溶解，調(diào)節(jié)pH值至10.5，靜置30分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值至6，回收乙醇至盡，與乙酸乙酯萃取有機(jī)相濃縮液合并，繼續(xù)濃縮，加入乙醇使乙醇達(dá)到10％，加入0.4％活性炭，煮沸，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度1.30，減壓干燥，得到銀杏葉提取提取物60克；(3)取上述銀杏葉提取物60克，加注射用水溶解完全，加入凍干賦形劑蔗糖40克，調(diào)節(jié)PH值，0.22微米濾芯過濾，冷凍干燥，得到銀杏葉凍干粉針劑1000瓶。
實(shí)施例3(1)取干燥銀杏葉1000克，粉碎成3mm，加入銀杏葉質(zhì)量9倍體積量的60％乙醇，浸泡2小時(shí)，回流提取1.5小時(shí)，提取液備用，殘?jiān)尤霘堅(jiān)|(zhì)量5.5倍體積量的60％乙醇回流提取2次，每次1小時(shí)，提取液合并，濾過，回收乙醇至盡，濃縮至70℃時(shí)相對(duì)密度1.25的溶液，攪拌加入濃縮液2倍體積的10％乙醇，靜置30分鐘，離心，上清液攪拌加入1％殼聚糖溶液，加入體積為上清液體積的1/25，靜置60分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值3.5；(2)取上述上清液上D101大孔樹脂，10％乙醇洗脫，流速2倍柱體積/小時(shí)，至無色，洗脫液棄去，用70％乙醇繼續(xù)洗脫，流速2倍柱體積/小時(shí)，洗脫液回收乙醇至盡，加入水飽和乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯液層回收溶劑，備用；水液層調(diào)節(jié)pH值至8.5，用水飽和正丁醇萃取兩次，正丁醇液層回收溶劑棄去，水層繼續(xù)濃縮，用85％乙醇溶解，調(diào)節(jié)pH值至10-10.5，靜置30分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值至5-6，回收乙醇至盡，與乙酸乙酯萃取有機(jī)相濃縮液合并，繼續(xù)濃縮，加入乙醇使乙醇達(dá)到10％，加入0.4％活性炭，煮沸，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度1.25-1.30，減壓干燥，得到銀杏葉提取提取物50克；(3)取上述銀杏葉提取物50克，加注射用水溶解完全，加入凍干賦形劑甘露醇50克，調(diào)節(jié)PH值，0.22微米濾芯過濾，冷凍干燥，得到銀杏葉凍干粉針劑1000瓶。
實(shí)施例4(1)取干燥銀杏葉1000克，粉碎成2mm，加入銀杏葉質(zhì)量8倍體積量的55％乙醇，浸泡1.5小時(shí)，回流提取1小時(shí)，提取液備用，殘?jiān)尤霘堅(jiān)|(zhì)量5倍體積量的55％乙醇回流提取2次，每次0.8小時(shí)，提取液合并，濾過，回收乙醇至盡，濃縮至70℃時(shí)相對(duì)密度1.20的溶液，攪拌加入濃縮液2倍體積的10％乙醇，靜置30分鐘，離心，上清液攪拌加入1％殼聚糖溶液，加入體積為上清液體積的1/22，靜置60分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值3-4；(2)取上述上清液上D101大孔樹脂，10％乙醇洗脫，流速1.5倍柱體積/小時(shí)，至無色，洗脫液棄去，用70％乙醇繼續(xù)洗脫，流速1.5倍柱體積/小時(shí)，洗脫液回收乙醇至盡，加入水飽和乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯液層回收溶劑，備用；水液層調(diào)節(jié)pH值至8-9，用水飽和正丁醇萃取兩次，正丁醇液層回收溶劑棄去，水層繼續(xù)濃縮，用85％乙醇溶解，調(diào)節(jié)pH值至10-10.5，靜置30分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值至5-6，回收乙醇至盡，與乙酸乙酯萃取有機(jī)相濃縮液合并，繼續(xù)濃縮，加入乙醇使乙醇達(dá)到10％，加入0.4％活性炭，煮沸，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度1.26，減壓干燥，得到銀杏葉提取提取物45克；(3)取上述銀杏葉提取物45克，加注射用水溶解完全，加入凍干賦形劑蔗糖55克，調(diào)節(jié)PH值，0.22微米濾芯過濾，冷凍干燥，得到銀杏葉凍干粉針劑1000瓶。
實(shí)施例5(1)取干燥銀杏葉1000克，粉碎成4mm，加入銀杏葉質(zhì)量11倍體積量的65％乙醇，浸泡2.5小時(shí)，回流提取1.8小時(shí)，提取液備用，殘?jiān)尤霘堅(jiān)|(zhì)量6倍體積量的65％乙醇回流提取2次，每次1.3小時(shí)，提取液合并，濾過，回收乙醇至盡，濃縮至70℃時(shí)相對(duì)密度1.28的溶液，攪拌加入濃縮液2倍體積的10％乙醇，靜置30分鐘，離心，上清液攪拌加入1％殼聚糖溶液，加入體積為上清液體積的1/28，靜置60分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值3-4；(2)取上述上清液上D101大孔樹脂，10％乙醇洗脫，流速2.5倍柱體積/小時(shí)，至無色，洗脫液棄去，用70％乙醇繼續(xù)洗脫，流速2.5倍柱體積/小時(shí)，洗脫液回收乙醇至盡，加入水飽和乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯液層回收溶劑，備用；水液層調(diào)節(jié)pH值至8-9，用水飽和正丁醇萃取兩次，正丁醇液層回收溶劑棄去，水層繼續(xù)濃縮，用85％乙醇溶解，調(diào)節(jié)pH值至10-10.5，靜置30分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值至5-6，回收乙醇至盡，與乙酸乙酯萃取有機(jī)相濃縮液合并，繼續(xù)濃縮，加入乙醇使乙醇達(dá)到10％，加入0.4％活性炭，煮沸，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度1.29，減壓干燥，得到銀杏葉提取提取物55克；(3)取上述銀杏葉提取物55克，加注射用水溶解完全，加入凍干賦形劑乳糖45克，調(diào)節(jié)PH值，0.22微米濾芯過濾，冷凍干燥，得到銀杏葉凍干粉針劑1000瓶。
實(shí)施例6(1)取干燥銀杏葉10000克，粉碎成3mm，加入銀杏葉質(zhì)量10倍體積量的60％乙醇，浸泡2小時(shí)，回流提取1.5小時(shí)，提取液備用，殘?jiān)尤霘堅(jiān)|(zhì)量5.5倍體積量的60％乙醇回流提取2次，每次1小時(shí)，提取液合并，濾過，回收乙醇至盡，濃縮至70℃時(shí)相對(duì)密度1.25的溶液，攪拌加入濃縮液2倍體積的10％乙醇，靜置30分鐘，離心，上清液攪拌加入1％殼聚糖溶液，加入體積為上清液體積的1/25，靜置60分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值3-4；(2)取上述上清液上D101大孔樹脂，10％乙醇洗脫，流速2倍柱體積/小時(shí)，至無色，洗脫液棄去，用70％乙醇繼續(xù)洗脫，流速2倍柱體積/小時(shí)，洗脫液回收乙醇至盡，加入水飽和乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯液層回收溶劑，備用；水液層調(diào)節(jié)pH值至8-9，用水飽和正丁醇萃取兩次，正丁醇液層回收溶劑棄去，水層繼續(xù)濃縮，用85％乙醇溶解，調(diào)節(jié)pH值至10-10.5，靜置30分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值至5-6，回收乙醇至盡，與乙酸乙酯萃取有機(jī)相濃縮液合并，繼續(xù)濃縮，加入乙醇使乙醇達(dá)到10％，加入0.4％活性炭，煮沸，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度1.25-1.30，減壓干燥，得到銀杏葉提取提取物503克；(3)取上述銀杏葉提取物503克，加注射用水溶解完全，加入凍干賦形劑乳糖497克，調(diào)節(jié)PH值，0.22微米濾芯過濾，冷凍干燥，得到銀杏葉凍干粉針劑10000瓶。
權(quán)利要求
1.一種注射用銀杏葉凍干粉針劑，其特征在于它是由下述方法制備而成(1)取干燥銀杏葉，粉碎成1-5mm，加入銀杏葉質(zhì)量7-12倍體積量的50％-70％乙醇，浸泡1-3小時(shí)，回流提取1-2小時(shí)，提取液備用，殘?jiān)尤霘堅(jiān)|(zhì)量5-6倍體積量的50％-70％乙醇回流提取2次，每次0.5-1.5小時(shí)，提取液合并，濾過，回收乙醇至盡，濃縮至70℃時(shí)相對(duì)密度1.20-1.30的溶液，攪拌加入濃縮液2倍體積的10％乙醇，靜置30分鐘，離心，上清液攪拌加入1％殼聚糖溶液，加入體積為上清液體積的1/20-1/30，靜置60分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值3-4；(2)取上述上清液上D101大孔樹脂，10％乙醇洗脫，流速1-3倍柱體積/小時(shí)，至無色，洗脫液棄去，用70％乙醇繼續(xù)洗脫，流速1-3倍柱體積/小時(shí)，洗脫液回收乙醇至盡，加入水飽和乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯液層回收溶劑，備用；水液層調(diào)節(jié)pH值至8-9，用水飽和正丁醇萃取兩次，正丁醇液層回收溶劑棄去，水層繼續(xù)濃縮，用85％乙醇溶解，調(diào)節(jié)pH值至10-10.5，靜置30分鐘，離心，上清液調(diào)節(jié)pH值至5-6，回收乙醇至盡，與乙酸乙酯萃取有機(jī)相濃縮液合并，繼續(xù)濃縮，加入乙醇使乙醇達(dá)到10％，加入0.4％活性炭，煮沸，濾過，濾液濃縮至相對(duì)密度1.25-1.30，減壓干燥，得到銀杏葉提取提取物；(3)取上述銀杏葉提取物40-60重量份，加注射用水溶解完全，加入凍干賦形劑40-60重量份，調(diào)節(jié)PH值，0.22微米濾芯過濾，冷凍干燥，得到銀杏葉凍干粉針劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種注射用銀杏葉凍干粉針劑，其中凍干賦形劑為甘露醇、蔗糖或乳糖中的一種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種注射用銀杏葉凍干粉針劑及其制備方法，其特征在于該粉針劑是由中藥銀杏葉經(jīng)乙醇提取、乙醇沉淀、殼聚糖沉淀、D101大孔吸附樹脂乙醇洗脫、水飽和乙酸乙酯萃取、水飽和正丁醇萃取得到的銀杏葉提取物和凍干賦形劑制備而成；本申請(qǐng)的銀杏葉凍干粉針劑與市售制劑進(jìn)行比較，本發(fā)明銀杏葉凍干粉針劑具有更好的藥理作用。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1772012SQ200510114818
公開日2006年5月17日 申請(qǐng)日期2005年11月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月14日
發(fā)明者張正生, 周志煒 申請(qǐng)人:張正生