專利名稱：一種中藥注射制劑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑的質(zhì)量控制方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)的領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著人類文明的發(fā)展，人們生活水平的提高，冠心病、心絞痛等心腦血管疾病已成為人類的第二大殺手。開發(fā)心臟病類藥物已成為制藥業(yè)一項(xiàng)刻不容緩的艱巨任務(wù)。本申請人將燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬進(jìn)行組配后研制了一種注射劑，它包括直接用于注射給藥的注射液、需稀釋后用于靜脈滴注的注射用濃溶液、直接供靜脈滴注的靜脈輸液以及用冷凍干燥法或噴霧干燥法制得的注射用無菌粉末和無菌塊狀物。按照重量組分計(jì)算，它由麥冬10～1000份、人參10～1000份與燈盞細(xì)辛50～5000份經(jīng)提取精制并加適當(dāng)輔料制作而成，或是由相應(yīng)重量份藥材經(jīng)提取后得到的提取物經(jīng)精制并加適當(dāng)輔料制作而成。為了有效的控制產(chǎn)品的質(zhì)量，滿足生產(chǎn)的要求、保證生產(chǎn)的藥物安全、可靠和療效準(zhǔn)確，本申請人建立了其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。已知的燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬的化學(xué)成分有幾十種。如果用其一、二種活性成分來說明其內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更不用說無藥效性的指標(biāo)成分了，因此，不僅選取了燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬的活性成分進(jìn)行含量測定，以其含量的多少來判定質(zhì)量，更建立了指紋圖譜，對其物質(zhì)群整體予以控制，從整體上有效的表征其質(zhì)量。中藥指紋圖譜是指某種中藥材或中成藥中所共有的、具有特征性的某類或數(shù)類成分的色譜或光譜的圖譜。在現(xiàn)階段中藥的有效成分絕大多數(shù)沒有明確的情況下，對于有效控制中藥材或中成藥的質(zhì)量，具有重要的意義。日本漢方藥主要生產(chǎn)企業(yè)在20世紀(jì)80年代就已經(jīng)在企業(yè)內(nèi)部采用高效液相指紋圖譜控制質(zhì)量。德國、法國在對銀杏葉提取物聯(lián)合開發(fā)的過程中，發(fā)現(xiàn)銀杏葉提取物的醫(yī)療作用是提取物所得物質(zhì)群的整體作用結(jié)果，而對這樣一個整體的質(zhì)量控制，亦采用高效液相色譜法。美國FDA制定的職務(wù)草藥指南中已經(jīng)明確將指紋圖譜作為混合物質(zhì)群的質(zhì)量控制方法。指紋圖譜作為中草藥及其提取物質(zhì)量控制方法，目前已經(jīng)成為共識。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是通過提供一種以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑的質(zhì)量控制方法，利用本發(fā)明人提供的這種方法，能夠有效控制以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑的質(zhì)量，對藥品的生產(chǎn)進(jìn)行具體的指導(dǎo)同時(shí)提供的這種方法簡單，精密度高，重現(xiàn)性好。
本發(fā)明是這樣構(gòu)成的以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑的質(zhì)量控制方法，包括以下全部或部分內(nèi)容(1)指紋圖譜測試，包括以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜、以黨參成分特征為主的指紋圖譜、以紅參或人參和麥冬成分特征為主的指紋圖譜、以麥冬成分特征為主的指紋圖譜中的一種或幾種；(2)燈盞細(xì)辛藥材、紅參或人參或黨參藥材、麥冬藥材、野黃芩苷、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′、假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元、黨參炔苷、蒼術(shù)內(nèi)酯III中全部或部分成分的鑒別測試方法；(3)人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′、假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元、總皂苷、總黃酮、黨參炔苷、蒼術(shù)內(nèi)酯III中全部或部分成分的含量測試方法。
所述的以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜、以黨參成分特征為主的指紋圖譜、以紅參或人參和麥冬成分特征為主的指紋圖譜、以麥冬成分特征為主的指紋圖譜測試方法是a、采用液相色譜法測試燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加水或甲醇等溶劑溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量燈盞細(xì)辛藥材中的主要活性成分對照品野黃芩苷，用甲醇或乙醇溶解稀釋至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為乙腈或甲醇0.005mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH＝2.0～5.0)或0.2％～5％冰醋酸或0.2％～5％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-400nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫為20～60℃范圍內(nèi)；(4)以燈盞細(xì)辛成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；
(5)以上述方法作為待測注射劑中燈盞細(xì)辛成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.80～1.00；b、采用液相色譜法測試紅參或人參和麥冬成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量紅參或人參和麥冬藥材中的主要活性成分對照品，包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元、麥冬皂苷D′中的一種或幾種，用水或甲醇、乙醇溶解稀釋至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為20％～99％乙腈或20％～99％甲醇0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-300nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫為20～60℃范圍內(nèi)；(4)以紅參或人參和麥冬成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中紅參或人參和麥冬成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.80～1.00；c、采用液相色譜法測試黨參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量黨參藥材中的主要活性成分對照品，包括黨參炔苷、蒼術(shù)內(nèi)酯III中的一種或幾種，用水或甲醇、乙醇溶解稀釋至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為5％～99％∶95％～5％乙腈或甲醇-水或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-300nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫為20～60℃范圍內(nèi)；(4)以黨參成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中黨參成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.80～1.00；d、采用液相色譜法測試麥冬成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量麥冬藥材中的主要活性成分對照品，包括麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元、麥冬皂苷D′中的一種或幾種，用水或甲醇、乙醇溶解稀釋至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為20％～99％乙腈或20％～99％甲醇0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-300nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫為20～60℃范圍內(nèi)；(4)以麥冬成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中麥冬成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.80～1.00。
所述的以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑的質(zhì)量控制方法包括如下指紋圖譜中的一種或幾種a、采用液相色譜法測試燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為0.02moL/L磷酸二氫鈉(25％磷酸調(diào)pH＝3.5)，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至8分鐘，流動相A的比例由18％升至30％，從8分鐘至15分鐘，乙腈的比例由30％升至50％，從15分鐘至18分鐘，乙腈的比例由50％降至18％，從18分鐘至60分鐘，乙腈的比例為18％；流速為1.0ml/min，檢測波長為283±2nm，柱溫為40℃；(4)以燈盞細(xì)辛成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中燈盞細(xì)辛成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.90～1.00；b、采用液相色譜法測定以紅參或人參和麥冬成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，流動相B為乙腈-水80∶20，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至5分鐘，流動相B的比例為25％，從5分鐘至40分鐘，流動相B的比例由25％升至64％，從40分鐘至50分鐘，流動相B的比例為64％，從50分鐘至65分鐘，流動相B的比例由64％升至80％，從65分鐘至75分鐘，流動相B的比例由80％降至25％；流速為1.0ml/min，檢測波長為203±2nm，柱溫為40℃；(4)以紅參或人參和麥冬成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中紅參或人參和麥冬成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.90～1.00；c、采用液相色譜法測試黨參成分特征為主的指紋圖譜
(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量黨參藥材中的主要活性成分蒼術(shù)內(nèi)酯III，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為甲醇水67∶33，流速為1.0ml/min、蒸發(fā)光檢測器檢測，漂移管溫度30℃，載氣流量2.2L/min，柱溫為30℃；(4)以黨參成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中黨參成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.90～1.00；d、采用液相色譜法測定以麥冬成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取麥冬皂苷B適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，流動相B為乙腈-水80∶20，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至5分鐘，流動相B的比例為25％，從5分鐘至40分鐘，流動相B的比例由25％升至64％，從40分鐘至50分鐘，流動相B的比例為64％，從50分鐘至65分鐘，流動相B的比例由64％升至80％，從65分鐘至75分鐘，流動相B的比例由80％降至25％；流速為1.0ml/min，檢測波長為203±2nm，柱溫為40℃；(4)以麥冬成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中麥冬成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.90～1.00。
所述的以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑的鑒別方法是以下全部或部分內(nèi)容a、注射劑中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取野黃芩苷對照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～60∶0.2～10∶0.3～5或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.3～10％三氯化鋁乙醇或0.3～10％三氯化鋁甲醇溶液，90～130℃烘1～15分鐘，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；b、注射劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～95％∶95％～5％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.02％～2％磷酸水溶液或2％～30％∶2％～30％∶96％～40％甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.02％～2％磷酸水溶液或乙腈-0.005～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；c、注射劑中麥冬藥材的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加正丁醇或醋酸乙酯或氯仿提取，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取麥冬對照藥材，同法制成對照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以苯或甲苯或氯仿-甲醇或乙醇-冰醋酸或甲酸或水8～300∶0.5～100∶0.01～30或醋酸乙酯或甲酸乙酯-吡啶-水0.2～10∶0.1～5∶0.2～10為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈365nm或254nm下檢視或噴以10％硫酸或香草醛試劑或50％硫酸或5％香莢蘭醛試劑或茴香醛試劑，90℃～130℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾；d、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，用水提取后用正丁醇和乙醚或醋酸乙酯萃取，萃取液蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′，分別加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以醋酸乙酯或氯仿-甲醇-水3～50∶1～15∶0.1～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑，90℃～130℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；e、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的液相色譜鑒別取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，1％～99％∶99％～1％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；f、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加0.5～38％硫酸或鹽酸水解，調(diào)節(jié)pH至中性，蒸干，殘?jiān)寐确禄虼姿嵋阴ト芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元，分別加氯仿或醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以正己烷或甲醇-醋酸乙酯或氯仿或甲酸乙酯-水0.2～15∶0.2～40∶0.1～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑，90℃～130℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；g、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的液相色譜鑒別
取各制劑適量，置圓底燒瓶中，加水溶解后用0.5～38％硫酸或鹽酸水解，取出，放至室溫，調(diào)pH至中性，用氯仿或醋酸乙酯提取，提取液蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；h、注射劑中紅參或人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，用正丁醇或乙醇或甲醇提取，濾過，濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；取紅參或人參對照藥材，加氯仿回流提取，棄去氯仿液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為對照藥材溶液；另取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf對照品，分別加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～30 10℃以下放置的下層溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑或50％硫酸試劑，90℃～130℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；i.注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re的液相色譜鑒別取各制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為200～350nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫在20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；j、注射劑中黨參炔苷的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加水溶解，用正丁醇或醋酸乙酯或氯仿萃取，萃取液濃縮至干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為供試品溶液，或置C18或C8固相萃取小柱中，依次用5％～50％甲醇、甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取黨參對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取黨參炔苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板，正丁醇-冰醋酸或甲酸或乙醇或無水乙醇-水1～35∶0.1～10∶0.05～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3％～30％硫酸乙醇溶液，80～150℃加熱1～30分鐘，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾；k、注射劑中黨參炔苷的液相色譜鑒別方法取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或乙醇或流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以黨參炔苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾。
所述的以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑的鑒別方法是以下的一種或幾種a、注射劑中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)眉状既芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水10∶5∶1∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3％三氯化鋁乙醇溶液，105℃烘5分鐘，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；b、注射劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1％磷酸水溶液20∶80為流動相，檢測波長為335nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；c、注射劑中麥冬的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加三氯甲烷-甲醇7∶3混合溶液提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)勇确氯芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取麥冬對照藥材，同法制成對照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-甲醇-冰醋酸80∶5∶0.1為展開劑，展開，置紫外燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾；d、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，用水溶解后用正丁醇萃取，萃取液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′，分別加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲醇-水15∶5∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；e、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的液相色譜鑒別取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水90∶10為流動相，檢測波長為203nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；f、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加3％硫酸水解4小時(shí)，調(diào)節(jié)pH至中性，蒸干，殘?jiān)寐确氯芙?，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元，分別加氯仿或醋酸乙酯等溶劑制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯或-水1∶1∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，90℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；g、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的液相色譜鑒別取各制劑適量，置圓底燒瓶中，加水溶解，用3％硫酸回流4小時(shí)，取出，放至室溫，調(diào)pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水90∶10為流動相，檢測波長為203nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；h、注射劑中紅參或人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，用正丁醇提取，濾過，濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；取紅參或人參對照藥材，加氯仿回流提取，棄去氯仿液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛。崛∫杭影痹囈?，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為對照藥材溶液；另取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶1010℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；i.注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re的液相色譜鑒別取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；j、注射劑中黨參炔苷的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加甲醇25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，置C18固相萃取小柱(500mg，用甲醇、20％甲醇各10ml預(yù)洗)中，依次用20％甲醇、甲醇各5ml洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取黨參對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取黨參炔苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液6μl、對照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一高效硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水7∶1∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱5分鐘，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾；k、注射劑中黨參炔苷的液相色譜鑒別方法取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以黨參炔苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水22∶78為流動相，檢測波長為267nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾。
所述的以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑含量的測試方法應(yīng)包括以下中的一種或幾種a、注射劑中野黃芩苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～95％∶95％～5％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.02％～2％磷酸水溶液或2％～30％∶2％～30％∶96％～40％甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.02％～2％磷酸水溶液或乙腈-0.005～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于6.0mg；b、注射劑中總黃酮的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法實(shí)驗(yàn)，在335±10nm的波長處測定吸收度或取各制劑適量，置量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量，置10ml量瓶中，加50％甲醇或水至5ml，加5％亞硝酸鈉溶液0.3～1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液0.3～1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4～10ml，再加50％甲醇或水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以蘆丁或野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的照分光光度法實(shí)驗(yàn)，在500±10nm處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以蘆丁或野黃芩苷計(jì)，不得少于30.0mg；c.注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為200～350nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫在20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人參皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人參皂苷Rb1的限度不得少于1.0mg，含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的總和的限度不得少于2.5mg；d.注射劑中總皂苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，至量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.2～4ml，高氯酸0.5～5ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻0.5～10分鐘，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或人參皂苷Re或人參皂苷Rf或麥冬皂苷B或麥冬皂苷D或麥冬皂苷D′作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547±10nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或人參皂苷Re或人參皂苷Rf或麥冬皂苷B或麥冬皂苷D或麥冬皂苷D′計(jì)，不得少于18.0mg；e、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，1％～99％∶99％～1％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含麥冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麥冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麥冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的總和的限度不得少于0.11mg；f、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元含量測定取各制劑適量，置圓底燒瓶中，加水溶解后用0.5～38％硫酸或鹽酸水解，取出，放至室溫，調(diào)pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含假葉樹皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蕷皂苷元的限度不得少于0.01mg；含魯斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；含假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的總和的限度不得少于0.03mg；
g、注射劑中黨參炔苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以黨參炔苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黨參炔苷的限度不得少于0.1mg。
所述的以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑含量的測試方法是以下一種或幾種方法a、注射劑中野黃芩苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相等溶劑至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1％磷酸水溶液20∶80為流動相，檢測波長為335nm，柱溫30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于6.0mg；b、注射劑中總黃酮的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計(jì)，不得少于30.0mg；c.注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在10～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人參皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人參皂苷Rb1的限度不得少于1.0mg，含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的總和的限度不得少于2.5mg；d.注射劑中總皂苷的含量測定取各制劑適量，置10ml量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.6ml，至25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻2分鐘，精密加冰醋酸至25ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于18.0mg；e、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水90∶10為流動相，檢測波長為203nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含麥冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麥冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麥冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的總和的限度不得少于0.11mg；f、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元含量測定取各制劑適量，置圓底燒瓶中，加水溶解后用3％硫酸回流4小時(shí)，取出，放至室溫，調(diào)pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓梦⒖诪V膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水90∶10為流動相，檢測波長為203nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含假葉樹皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蕷皂苷元的限度不得少于0.01mg；含魯斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；含假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的總和的限度不得少于0.03mg；
g、注射劑中黨參炔苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以黨參炔苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水22∶78為流動相，檢測波長為267nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黨參炔苷的限度不得少于0.1mg。
所述的以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參、麥冬制成的中藥注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于按照重量百分比計(jì)算，所述注射劑中所有可測成分包括野黃芩苷、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、總皂苷、麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′、假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元、黨參炔苷、蒼術(shù)內(nèi)酯III中全部或部分的總含量不低于制劑中扣除輔料量和水分量的總固體量的25％。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明能更加完善的控制以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑產(chǎn)品的質(zhì)量。中藥成分復(fù)雜，如果只用其中一、兩種成分來說明其內(nèi)在質(zhì)量，具有一定的片面性，更無法判斷無藥效的指標(biāo)成分。因此本申請人制定了以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜以紅參或人參和麥冬成分特征為主的指紋圖譜和以黨參成分特征為主的指紋圖譜來全面控制注射劑的質(zhì)量。但是由于本發(fā)明涉及注射液中的各藥材之間所含的化學(xué)成分復(fù)雜，對指紋圖譜的制定造成干擾，導(dǎo)致各部分指紋圖譜特征不穩(wěn)定，所以必須控制流動相等色譜條件，才能得到良好的指紋圖譜。也就是說，本發(fā)明涉及制劑的指紋圖譜不是將燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬藥材或制劑的指紋圖譜簡單疊加就能得到的，由于處方中四種藥材所含成分相互之間的干擾影響，導(dǎo)致本發(fā)明涉及制劑中燈盞細(xì)辛部分、黨參部分、紅參或人參和麥冬部分的指紋圖譜特征峰發(fā)生改變，而只有采用本發(fā)明的條件，才能得到理想的指紋圖譜。
通過實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明質(zhì)量控制方法對以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制更為有效，方法精密度、穩(wěn)定性均較高。
實(shí)驗(yàn)例1 以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜的制備a、實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及樣品對照品野黃芩苷中國藥品生物制品檢定所；b、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)1.色譜柱的選擇研究過程中，選用了常規(guī)的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Diamonsil ODS(均為C18，250mm×4.6mm，5μm)三種牌號的色譜柱，結(jié)果顯示三種牌號的色譜柱均可達(dá)到較好的分離效果，其中Diamonsil ODS色譜柱分離效果最好，柱效最高，可以達(dá)到28000(以參照物野黃芩苷峰計(jì)算)。故最終選用Diamonsil ODS色譜柱(250×4.6mm，5μm)為實(shí)驗(yàn)研究柱。
2.流動相的選擇研究過程中分別考察了(1)甲醇-水(10∶90)，(2)甲醇-0.1％冰醋酸(5∶95)，(3)甲醇-0.5％冰醋酸(梯度洗脫)(4)乙腈-0.02moL/L磷酸二氫鈉(25％磷酸調(diào)pH＝3.5)(梯度洗脫體積配比為從0分鐘至8分鐘，乙腈的比例由18％升至30％，從8分鐘至15分鐘，乙腈的比例由30％升至50％，從15分鐘至18分鐘，乙腈的比例由50％降至18％，從18分鐘至60分鐘，乙腈的比例為18％)四種流動相系統(tǒng)。結(jié)果顯示流動相(1)條件下，峰形較差，分離不好；流動相(2)條件下，峰形較好，但1小時(shí)內(nèi)出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動相(3)條件下，峰形較好，出峰不完全；流動相(4)條件下，峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而最終被選用。
3.檢測波長的確定研究中在乙腈-0.02moL/L磷酸二氫鈉(25％磷酸調(diào)pH＝3.5)(梯度洗脫)流動相條件下，分別考察了在不同波段典型波長205、230、254、283、325nm下的色譜峰情況，結(jié)果顯示，在205、230、325nm下色譜峰較少，205、230nm下基線漂移嚴(yán)重，254、283nm下基線良好，其中283nm下色譜峰較多，故最終選用283nm作為檢測波長。
4.儀器、色譜柱及積分參數(shù)4.1儀器參數(shù)選用了液相色譜分析領(lǐng)域主流配置和性能良好的Agilent1100系列高效液相色譜儀，Chemstation色譜工作站。色譜柱為Diamonsil ODS(250mm×4.6mm，5μm)；柱溫40℃，流速1.0ml/min。
4.2積分參數(shù)Slope Sensitivity1，peak width0.05，最小峰面積為參照物(S)峰峰面積的5％，最小峰高為S峰峰高的5％。如此設(shè)定可以避免一些很小面積的色譜峰(單峰面積占總峰面積小于0.5％)的計(jì)算，同時(shí)保證與參照物的相關(guān)性。
5.供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，即得.
6.參照物溶液的制備野黃芩苷為燈盞細(xì)辛主要活性成分之一，其積分面積在指紋圖譜中所占比例較大且較穩(wěn)定，同時(shí)兼顧中間體和藥材的研究，因此選定野黃芩苷作為參照物。
7.指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)根據(jù)10批樣品制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，將供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度均在0.90～1.00之間。
實(shí)驗(yàn)例2 以紅參或人參和麥冬成分特征為主的指紋圖譜的制備a、實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及樣品對照品人參皂苷Rg1中國藥品生物制品檢定所；b、色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)1.色譜柱的選擇研究過程中，選用了常規(guī)的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，分別試用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Diamonsil ODS(均為C18，4.6mm×200mm，5μm)三種牌號的色譜柱，結(jié)果顯示三種牌號的色譜柱均可達(dá)到較好的分離效果，其中Diamonsil ODS色譜柱分離效果最好，柱效最高，可以達(dá)到5400(以參照物人參皂苷Rg1計(jì)算)。故最終選用Diamonsil ODS色譜柱(4.6mm×200mm，5μm)為實(shí)驗(yàn)研究柱。
2.流動相的選擇研究過程中分別考察了(1)甲醇-水(20∶80)，(2)乙腈-水(10∶80)，(3)乙腈-水(梯度洗脫)(4)A為50mmol.L-1KH2PO4溶液，B為乙腈-水(80∶20)(梯度洗脫體積配比為從0分鐘至5分鐘，流動相B的比例為25％，從5分鐘至40分鐘，流動相B的比例由25％升至64％，從40分鐘至50分鐘，流動相B的比例為64％，從50分鐘至65分鐘，流動相B的比例由64％升至80％，從65分鐘至75分鐘，流動相B的比例由80％降至25％)四種流動相系統(tǒng)。結(jié)果顯示流動相(1)條件下，峰形較差，1小時(shí)內(nèi)出峰較少，仍有不少組分滯留在后出峰；流動相(2)流動相條件下，峰形較差，分離不好；(3)條件下，峰拖尾嚴(yán)重，出峰不完全；流動相(4)條件下，峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而最終被選用。
3.檢測波長的確定研究中在A為50mmol.L-1KH2PO4溶液，B為乙腈-水(80∶20)(梯度洗脫)流動相條件下，分別考察了在不同波段典型波長203、210、230、254下的色譜峰情況，結(jié)果顯示，在203nm下色譜峰較多，峰形較好，故最終選用203nm作為檢測波長。
4.儀器、色譜柱及積分參數(shù)
4.1儀器參數(shù)選用了液相色譜分析領(lǐng)域主流配置和性能良好的Agilent1100系列高效液相色譜儀，Chemstation色譜工作站。色譜柱為Diamonsil ODS(4.6mm×200mm，5μm)；柱溫40℃，流速1.0ml/min。
4.2積分參數(shù)Slope Sensitivity1，peak width0.05，最小峰面積為參照物(S)峰峰面積的5％，最小峰高為S峰峰高的5％。如此設(shè)定可以避免一些很小面積的色譜峰(單峰面積占總峰面積小于0.5％)的計(jì)算，同時(shí)保證與參照物的相關(guān)性。
5.供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加水制成每1ml含50mg的溶液，即得.
6.參照物溶液的制備人參皂苷Rg1為紅參或人參主要活性成分之一，其積分面積在指紋圖譜中所占比例較大且較穩(wěn)定，同時(shí)兼顧中間體和藥材的研究，因此選定人參皂苷Rg1作為參照物。
7.指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)根據(jù)10批樣品制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，將供試品指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜比較，相似度均在0.90～1.00之間。
實(shí)驗(yàn)例3 鑒別本發(fā)明涉及注射劑中燈盞細(xì)辛的薄層色譜鑒別方法為了突出燈盞細(xì)辛的特征，選擇了野黃芩苷作為其特征斑點(diǎn)，但是由于藥材中存在較多與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對野黃芩苷進(jìn)行了展開條件 問題醋酸乙酯-甲酸-水(15-5-1)硅膠G薄層板對照品展開至前沿醋酸乙酯-甲酸-水(15-3-1)硅膠H薄層板對照品未分開，陰性有干擾醋酸乙酯-乙酸-水(10-5-1)硅膠G薄層板對照品展開至前沿苯-醋酸乙酯-甲酸-水(10-5-1-0.5)硅膠G 對照品未分開，陰性有干擾薄層板甲苯-醋酸乙酯-乙酸-水(10-5-1-0.5)硅膠 對照品未分開，陰性有干擾G薄層板甲苯-甲酸乙酯-甲酸-水(13-3-1-0.5)硅膠 對照品未分開，陰性有干擾G薄層板確定條件甲苯-醋酸乙酯-乙酸-水分離清晰，Rf值適中陰性無干擾(10-5-1-0.5)硅膠G薄層板經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以甲苯-醋酸乙酯-乙酸-水(10-5-1-0.5)為展開劑，在此條件下，野黃芩苷的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
本發(fā)明涉及注射劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法為了突出燈盞細(xì)辛的特征，選擇了野黃芩苷作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與野黃芩苷結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動相對野黃芩苷進(jìn)行了分離條件問題甲醇-水(80∶20) 出峰時(shí)間過快十八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-水(40∶60) 陰性有干擾十八烷基硅烷鍵合硅膠甲醇-0.2％冰醋酸水溶液(30∶70)八烷基硅烷陰性有干擾鍵合硅膠甲醇-四氫呋喃-0.2％磷酸水溶液(14∶14∶72) 峰形不太對稱十八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-四氫呋喃-0.2％磷酸水溶液(14∶14∶72) 峰有分叉，二烷基硅烷鍵合硅膠甲醇-水(40∶60) 陰性有干擾八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-0.1％磷酸水溶液(20∶80)保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對稱，十八烷基硅烷鍵合硅膠陰性無干擾經(jīng)過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，乙腈-0.1％磷酸水溶液(20∶80)為流動相，在此條件下，野黃芩苷保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
本發(fā)明涉及注射劑中麥冬的薄層色譜鑒別方法為了突出麥冬的特征，選擇了麥冬對照藥材作為其特征斑點(diǎn)，但是由于藥材中存在較多結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對麥冬進(jìn)行了展開
條件 問題苯-甲醇-冰醋酸(50-10-3)硅膠GF254薄層板 對照品未分開，陰性有干擾甲苯-甲醇-冰醋酸(50-10-3)硅膠H薄層板 對照品未分開，陰性有干擾氯仿-乙醇-甲酸(50-20-5)硅膠G薄層板對照品展開至前沿氯仿-甲醇-甲酸(50-20-5)硅膠G薄層板對照品展開至前沿醋酸乙酯-吡啶-水(5-3-5)硅膠H薄層板對照品未分開，陰性有干擾苯-乙醇-甲酸(60-10-2)硅膠G薄層板 對照品未分開，陰性有干擾確定條件甲苯-甲醇-冰醋酸(80∶5∶0.1)分離清晰，Rf值適中陰性無干擾硅膠GF254薄層板經(jīng)過篩選，確定了以硅膠GF254薄層板為固定相，以甲苯-甲醇-冰醋酸(80∶5∶0.1)為展開劑，在此條件下，主斑點(diǎn)的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
本發(fā)明涉及注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的薄層色譜鑒別方法為了突出麥冬皂苷的特征，選擇了麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′作為其特征斑點(diǎn)，但是由于藥材中存在較多與麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對麥冬進(jìn)行了展開條件 問題醋酸乙酯-甲醇-水(10-10-0.5)硅膠G薄層 對照品展開至前沿板氯仿-甲醇-水(10-10-0.5)硅膠H薄層板 對照品展開至前沿醋酸乙酯-甲醇-水(10-3-0.2)硅膠G薄層板對照品未分開，陰性有干擾氯仿-甲醇-水(15-10-2)硅膠GF254薄層板對照品展開至前沿醋酸乙酯-甲醇-水(20-3-1)硅膠GF254薄層板 對照品未分開，陰性有干擾醋酸乙酯-甲醇-水(20-8-1)硅膠G薄層板 對照品未分開，陰性有干擾確定條件以醋酸乙酯-甲醇-水(15∶5∶1) 分離清晰，Rf值適中陰性無干擾硅膠G薄層板經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以醋酸乙酯-甲醇-水(15∶5∶1)為展開劑，在此條件下，麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′斑點(diǎn)的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
本發(fā)明涉及注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的液相色譜鑒別方法為了突出麥冬皂苷的特征，選擇了麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動相對麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′進(jìn)行了分離條件問題甲醇-水(99∶1) 出峰時(shí)間過快十八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-水(95∶5) 出峰時(shí)間過快十八烷基硅烷鍵合硅膠甲醇-2％冰醋酸水溶液(95∶5) 陰性有干擾八烷基硅烷鍵合硅膠甲醇-0.2％磷酸酸水溶液(95∶5) 陰性有干擾十八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-1％冰醋酸水溶液(95∶5) 峰有分叉，八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-0.5％磷酸酸水溶液(95∶5) 陰性有干擾十八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-水(90∶10) 保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾十八烷基硅烷鍵合硅膠經(jīng)過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，乙腈-水(90∶10)為流動相，在此條件下，麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
本發(fā)明涉及注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的薄層色譜鑒別方法為了突出麥冬皂苷元的特征，選擇了假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元作為其特征斑點(diǎn)，但是由于藥材中存在較多與假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對麥冬進(jìn)行了展開
條件問題甲醇-氯仿-水(5-3-2)硅膠G薄層板 對照品展開至前沿正己烷-醋酸乙酯-水(5-3-1)硅膠H薄層板對照品展開至前沿正己烷-甲酸乙酯-水(3-2-2)硅膠GF254薄層板 對照品未分開，陰性有干擾甲醇-醋酸乙酯-水(2-1-1)硅膠G薄層板 對照品未分開，陰性有干擾甲醇-甲酸乙酯-水(1-1-1)硅膠H薄層板 對照品未分開，陰性有干擾甲醇-甲酸乙酯-水(2-1.5-0.5)硅膠H薄層板 對照品未分開，陰性有干擾確定條件正己烷-醋酸乙酯-水(1∶1∶1)分離清晰，Rf值適中陰性無干擾硅膠G薄層板經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以正己烷-醋酸乙酯-水(1∶1∶1)為展開劑，在此條件下，假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
本發(fā)明涉及注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的液相色譜鑒別方法為了突出麥冬皂苷元的特征，選擇了假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動相對假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元進(jìn)行了分離條件 問題甲醇-水(99∶1)十八烷基硅烷鍵合硅膠出峰時(shí)間過快乙腈-水(95∶5)十八烷基硅烷鍵合硅膠出峰時(shí)間過快甲醇-2％冰醋酸水溶液(95∶5) 陰性有干擾八烷基硅烷鍵合硅膠甲醇-0.2％磷酸酸水溶液(95∶5) 陰性有干擾十八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-1％冰醋酸水溶液(95∶5) 峰有分叉，八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-0.5％磷酸酸水溶液(95∶5) 陰性有干擾十八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-水(90∶10) 保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對稱，十八烷基硅烷鍵合硅膠 陰性無干擾經(jīng)過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，乙腈-水(90∶10)為流動相，在此條件下，麥假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
本發(fā)明涉及注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf的薄層色譜鑒別方法為了突出紅參或人參的特征，選擇了人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf作為其特征斑點(diǎn)，但是由于藥材中存在較多與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下薄層板和展開條件對麥冬進(jìn)行了展開條件 問題氯仿-甲酸乙酯-甲醇-水(20∶60∶40∶10)10對照品展開至前沿℃以下放置的下層溶液硅膠G薄層板正丁醇-甲酸乙酯-水(10-1-5)上層溶液硅膠H對照品展開至前沿薄層板氯仿-甲酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10對照品未分開，陰性有干擾℃以下放置的下層溶液硅膠G薄層板氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(10∶40∶15∶5)10℃ 對照品未分開，陰性有干擾以下放置的下層溶液硅膠G薄層板正丁醇-甲酸乙酯-水(5-1-5)上層溶液 對照品未分開，陰性有干擾硅膠G薄層板正丁醇-甲酸乙酯-水(2-1.5-0.5)上層溶液 對照品未分開，陰性有干擾硅膠H薄層板確定條件氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶ 分離清晰，Rf值適中陰性無干22∶10)10℃以下放置的下層溶液硅膠G薄層板 擾經(jīng)過篩選，確定了以硅膠G薄層板為固定相，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，在此條件下，人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf的Rf值適中，和其它斑點(diǎn)分離清晰，陰性無干擾。
本發(fā)明涉及注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re的液相色譜鑒別方法為了突出紅參或人參的特征，選擇了人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re作為其特征成分，但是由于藥材中存在較多與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re結(jié)構(gòu)相近、極性相似的成分，普通條件難以達(dá)到質(zhì)量控制的要求，因此我們篩選了以下色譜柱和流動相對人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re進(jìn)行了分離條件問題甲醇-水(99∶5) 出峰時(shí)間過快十八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-水(95∶5) 出峰時(shí)間過快十八烷基硅烷鍵合硅膠甲醇-2％冰醋酸水溶液(80∶20)陰性有干擾八烷基硅烷鍵合硅膠甲醇-0.2％磷酸酸水溶液(80∶20) 陰性有干擾十八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-1％冰醋酸水溶液(90∶10)陰性有干擾八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-0.5％磷酸酸水溶液(85∶15) 陰性有干擾十八烷基硅烷鍵合硅膠乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為 保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％， 干擾從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％十八烷基硅烷鍵合硅膠經(jīng)過篩選，確定了以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％，在此條件下，人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re保留時(shí)間適中，峰行尖銳，對稱，陰性無干擾。
實(shí)驗(yàn)例4 含量測定項(xiàng)目方法學(xué)考察一、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的含量1.儀器與試藥(1)儀器Agilent1100高效液相色譜儀，chemstationsys工作站。TU-1800SPC紫外分光光度計(jì)。
(2)試藥人參皂苷Rg1、人參皂苷Re中國藥品生物制品檢定所；2.檢測波長的選擇精密稱取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re，分置10ml量瓶中，加甲醇稀釋制成每1ml含0.5mg的溶液，在200-400nm波長范圍掃描。人參皂苷Rg1、人參皂苷Re均在203nm處有最大吸收，因此選擇203nm作為含量測定的檢測波長。
3.色譜條件Dikma ODS(4.6mm×250mm，5um)；流動相乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％；檢測波長為203nm；流速1.0ml/min。
4.對照品溶液的制備取人參皂苷Rg1和人參皂苷Re適量，精密稱定，分別加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得每1ml含人參皂苷Rg1 0.30mg，人參皂苷Re0.24mg的溶液。
5.供試品溶液的制備取本品約0.5g，精密稱定，置5ml量瓶中，加流動相使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
在此條件下，陰性樣品不干擾樣品中人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的測定，且分離度好。
6.人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的線性關(guān)系精密稱取人參皂苷Rg110.20mg、人參皂苷Re10.72mg，共置10ml量瓶中，加流動相定至刻度，搖勻，作為對照品溶液(每1ml中含人參皂苷Rg11.02mg，人參皂苷Rb11.01mg，含人參皂苷Re1.072mg)，精密量取2.5ml，置10ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，作為對照品稀釋溶液。(每1ml中含人參皂苷Rg10.255mg，含人參皂苷Re0.268mg)精密吸取對照品溶液3μl、6μl、10μl；對照品稀釋溶液2μl、5μl、10μl；注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)，人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的量為橫坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
人參皂苷Rg1線性關(guān)系

回歸方程Y＝351.97X-61.521決定系數(shù)r＝0.9996人參皂苷Rg1在0.510～10.20μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
人參皂苷Re線性關(guān)系

回歸方程Y＝290.94.97X-43.21決定系數(shù)r＝0.9995人參皂苷Re在0.536～10.72μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
7.對照品精密度試驗(yàn) 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下人參皂苷Rg1和人參皂苷Re對照品稀釋溶液(每1ml中含人參皂苷Rg1 0.255mg，含人參皂苷Re0.268mg)10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣測定5次，考察對照品溶液的精密度。
人參皂苷Rg1和人參皂苷Re對照品精密度試驗(yàn)

結(jié)果表明，人參皂苷Rg1和人參皂苷Re對照品溶液精密度良好。
8.穩(wěn)定性試驗(yàn)8.1.對照品穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下人參皂苷Rg1和人參皂苷Re對照品稀釋溶液(每1ml中含人參皂苷Rg1 0.255mg，含人參皂苷Re0.268mg)10μl，注入液相色譜儀，在0、6、12、24、48小時(shí)進(jìn)樣測定。
對照品穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，人參皂苷Rg1和人參皂苷Re對照品溶液穩(wěn)定性良好。
8.2.供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品10μl，注入液相色譜儀，分別在0、6、12、24、48小時(shí)進(jìn)樣測定。
供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，供試品溶液穩(wěn)定性良好。
9.重復(fù)性試驗(yàn)取本品裝量差異項(xiàng)下粉針5瓶，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約0.5g，精密稱定，置5ml量瓶中，加流動相使溶解并定至刻度，搖勻，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
重復(fù)性試驗(yàn)

10.加樣回收率試驗(yàn)采用加樣回收法，精密稱取人參皂苷Rg110.67mg，人參皂苷Re6.02mg，共置10ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，精密量取1ml；取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，混勻，從中取約0.5g，精密稱定，共置5ml量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本發(fā)明涉及注射劑中人參皂苷Rg1含量0.1824％本發(fā)明涉及注射劑中人參皂苷Re含量0.1013％人參皂苷Rg1加樣回收率試驗(yàn)

人參皂苷Rg1平均回收率＝98.01％；RSD＝1.05％
人參皂苷Re加樣回收率試驗(yàn)

人參皂苷Re平均回收率＝97.61％；RSD＝1.77％三批中試樣品含量測定取本品樣品三批，按正文所述方法處理，進(jìn)樣測定。
三批樣品含量測定結(jié)果

二、人參總皂苷儀器、試藥儀器普析通 TU-1810SPC 紫外/可見分光光度儀SARTORIUS BP211D電子分析天平試藥香草醛 分析純 天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所甲醇 色譜純 J.T.Baker冰醋酸 分析純 上海試劑一廠高氯酸 分析純 天津市鑫源化工廠純凈水 娃哈哈方法與結(jié)果檢測波長的選擇精密稱取人參皂苷Rg1 6.11mg，置100ml量瓶中，加適量甲醇超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，在700～400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果表明，人參皂苷Rg1在547nm處有最大吸收，空白無干擾，因此選擇547nm為分光光度法測定本發(fā)明涉及注射劑中人參總皂苷的檢測波長。
線性關(guān)系的考察 精密稱取人參皂苷Rg1對照品6.85mg，置100ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V A)，在547nm的波長處測定吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo)，人參皂苷Rg1的量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
回歸方程Y＝0.0049X-0.0077；r＝0.999人參皂苷Rg1在27.4～137.0μg范圍線性良好。
人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)曲線測定數(shù)據(jù)

精密度試驗(yàn) 精密稱取人參皂Re1對照品6.85mg，置100ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，按正文測定法項(xiàng)下操作，連續(xù)測定5次。
人參總皂苷精密度實(shí)驗(yàn)

穩(wěn)定性試驗(yàn)對照品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取人參皂苷Rg1對照品7.27g，置100ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHZ)使溶解，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1.2ml，置10ml具塞試管中，水浴蒸干溶劑，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即在冰水浴中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸5ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，即得按正文測定法項(xiàng)下操作，分別在0、10、20、40、60分鐘時(shí)測定。
人參總皂苷對照品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

供試品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取本品裝量差異項(xiàng)下粉針5瓶，取內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取118.47mg，置10ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.2ml，按正文測定法項(xiàng)下進(jìn)行操作，分別在0、10、20、40、60分鐘時(shí)測定。
人參總皂苷供試品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

重復(fù)性試驗(yàn) 取本品裝量差異項(xiàng)下粉針5瓶，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約100mg，置10ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.2ml，按正文測定法項(xiàng)下進(jìn)行操作。
人參總皂苷重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取裝量差異項(xiàng)下本品，取內(nèi)容物，研細(xì)，從中取約50mg，精密稱定；另取人參皂苷Re1對照品約2mg，精密稱定，共置10ml量瓶中，加水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.2ml，置10ml具塞試管中，按正文測定法項(xiàng)下進(jìn)行操作，以隨行溶劑為空白，依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中人參皂苷Rg1的含量，計(jì)算，即得。
本發(fā)明涉及注射劑中總皂苷的含量4.52％人參總皂苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)

平均回收率＝97.70％ RSD＝0.88％
三批中試樣品含量測定取本品樣品三批，按正文所述方法處理，進(jìn)樣測定。
三批樣品含量測定結(jié)果

三、總黃酮1 儀器與試藥(1)主要儀器紫外分光光度計(jì) TU-1810SPC 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司電子分析天平BP211D SARTORIUS超聲波清洗機(jī)KQ250DB 昆山市超聲儀器有限公司(2)試藥蘆丁中國藥品生物制品檢定所(批號0080-9705)乙醇分析純阿托茲精細(xì)化工有限公司硝酸鋁 分析純天津市化學(xué)試劑三廠亞硝酸鈉分析純天津市化學(xué)試劑三廠氫氧化鈉分析純天津市北方化玻購銷中心2 檢測波長的選擇 取蘆丁對照品，按正文對照品溶液的制備方法進(jìn)行操作，獲得對照品溶液。取本發(fā)明涉及注射劑，按正文測定法中供試品溶液的制備方法進(jìn)行操作，獲得供試品溶液。吸取蘆丁對照品溶液，供試品溶液，按正文總黃酮測定項(xiàng)下擬定的方法，在400～800nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果表明，對照品溶液與供試品溶液均在510nm有最大吸收，溶劑無干擾，因此選擇510nm作為分光光度法測定本發(fā)明涉及注射劑中總黃酮含量的檢測波長。
3 對照品溶液的制備 精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品20mg，置100ml量瓶中，加60％乙醇溶液適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加60％乙醇溶液至刻度，搖勻，精密量取25ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無水蘆丁0.1mg)。
4 供試品溶液的制備 取本品粉末約50mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加60％乙醇溶液適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，加60％乙醇溶液至刻度，搖勻，即得。
5 測定法 精密量取對照品溶液3.0ml，供試品溶液1.0ml，分置10ml量瓶中，各加30％乙醇溶液使成5.0ml，精密加亞硝酸鈉溶液(1→20)0.3ml搖勻，放置6分鐘，再加硝酸鋁溶液(1→10)0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4.0ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V B)，在510nm的波長處分別測定吸收度，計(jì)算，即得。
6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取蘆丁對照品溶液(C＝0.1064mg/ml)0.0ml，1.0ml，2.0ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml，分置10ml量瓶中，分別加30％乙醇溶液使成5.0ml，精密加亞硝酸鈉溶液(1→20)0.3ml，搖勻，放置6分鐘，再加硝酸鋁溶液(1→10)0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4.0ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以隨行溶劑為空白，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V B)，在510nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果

回歸方程Y＝10.818x-0.0005；相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999；結(jié)果表明蘆丁在0.0110～0.0530mg/ml范圍內(nèi)線性良好。
經(jīng)計(jì)算，蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線過原點(diǎn)，因此選用外標(biāo)一點(diǎn)法測定總黃酮的含量。
7 精密度試驗(yàn) 精密吸取蘆丁對照品溶液(濃度0.1064mg/ml)3.0ml，置10ml量瓶中，按正文測定法項(xiàng)下的方法，自“加30％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作，在510nm的波長處測定吸收度，測定5次。
精密度試驗(yàn)

結(jié)果表明，對照品溶液精密度良好。
8 穩(wěn)定性試驗(yàn)8.1 對照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取蘆丁對照品溶液(濃度0.1064mg/ml)3.0ml，置10ml量瓶中，按正文測定法項(xiàng)下的方法，自“加30％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作，在510nm的波長處測定吸收度，分別在0、5、10、15、30分鐘重復(fù)測定一次。
對照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明，對照品溶液穩(wěn)定性良好。
8.2 供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液1.0ml，置10ml量瓶中，按正文測定法項(xiàng)下的方法，自“加30％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作，在510nm的波長處測定吸收度，分別在0、5、10、15、30min測定吸收度。
供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明，供試品溶液在30min內(nèi)穩(wěn)定性良好。
9 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品粉末約50mg(共5份)，精密稱定，按正文供試品溶液的制備和測定法項(xiàng)下進(jìn)行操作。
重復(fù)性試驗(yàn)

結(jié)果表明，重復(fù)性良好。
10 加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取本品粉末約25mg(共6份)，精密稱定，分置50ml量瓶中，精密稱取經(jīng)120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對照品10.18mg，置10ml量瓶中，加60％乙醇適量超聲處理使溶解，取出，放至室溫，用60％乙醇定至刻度，搖勻，分別從中精密量取0.7ml、0.85ml、1.0ml(各2份)，分置上述50ml量瓶中，加60％乙醇溶液適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)使溶解，取出，放至室溫，用60％乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1.0ml，分置10ml量瓶中，照正文測定法項(xiàng)下的方法，自“加30％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作，在510nm的波長處測定吸收度，計(jì)算，即得。
本發(fā)明涉及注射劑中總黃酮的含量為3.418％。
加樣回收率試驗(yàn)

平均回收率＝98.39％，RSD＝0.79％。
11 樣品的含量測定 取本品三批樣品，按照正文供試品溶液的制備和測定法項(xiàng)下的操作，測定樣品含量。
總黃酮的含量測定

四、野黃芩苷1 儀器與試藥1.1 主要儀器高效液相色譜儀 LC-2010AHTSHIMADZU紫外/可見分光光度儀 TU-1810SPC北京普析通用儀器有限公司電子分析天平 BP211DSARTORIUS超聲波清洗機(jī) KQ250DB 昆山市超聲儀器有限公司1.2 試藥野黃芩苷中國藥品生物制品檢定所甲醇分析純北京化工廠乙腈色譜純迪馬公司磷酸分析純北京化學(xué)試劑公司2 野黃芩苷 由中國藥品生物制品檢定所提供野黃芩苷，經(jīng)高效液相色譜法(歸一化法)測定純度為96.40％，符合含量測定用對照品要求(在測定中，按照96.40％的純度進(jìn)行折算)。
3 檢測波長的選擇 取野黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.0463mg的溶液，在190～400nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，野黃芩苷在284nm及335nm處有最大吸收，根據(jù)《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》相關(guān)品種并結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，選擇335nm作為野黃芩苷含量測定的檢測波長。
4 色譜條件色譜儀 SHIMADZU LC-2010AHT；色譜柱 Diamonsil ODS 250mm×4.6mm 5μm；流動相 乙腈-0.1％磷酸(20∶80)；流速1.0ml/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量 10μl；檢測波長335nm。
對照品溶液的制備 精密稱取野黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品粉末約40mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇定至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
根據(jù)上述色譜條件得到野黃芩苷對照品、供試品色譜圖，其理論板數(shù)n均大于5000，野黃芩苷色譜峰與相近峰分離清晰完全，分離度均大于1.5，溶劑無干擾。
5 提取時(shí)間的選擇 取本品粉末約40mg(共6份)，精密稱定，分置25ml量瓶中，加甲醇適量，分別超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5、10、20min，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
提取時(shí)間考察

結(jié)果表明，超聲處理5min即可提取完全。
6 線性關(guān)系考察 精密量取野黃芩苷對照品溶液(C＝0.978mg/ml)0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別從中精密吸取10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定。以峰面積為縱坐標(biāo)，野黃芩苷的量(μg)為橫坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
野黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果

回歸方程Y＝3259091.50x-1830.06相關(guān)系數(shù)γ＝0.9999結(jié)果表明野黃芩苷在0.1886μg～0.9428μg范圍內(nèi)線性良好。
經(jīng)計(jì)算，野黃芩苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線過原點(diǎn)，因此選用外標(biāo)一點(diǎn)法測定野黃芩苷的含量。
7 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取野黃芩苷對照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，測定5次，考察對照品溶液精密度，測定結(jié)果見表33。
精密度試驗(yàn)

結(jié)果表明，對照品溶液精密度良好。
8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)8.1 對照品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取野黃芩苷對照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，注入液相色譜儀，分別在0、2、4、8、24小時(shí)進(jìn)樣測定。
對照品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明，對照品溶液24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
8.2 供試品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取供試品溶液(1.4013mg/ml)10μl，注入液相色譜儀，分別在0、2、4、8、24小時(shí)進(jìn)樣測定。
供試品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

結(jié)果表明，供試品溶液24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。
9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取本品，按正文供試品溶液的制備和測定法項(xiàng)下進(jìn)行操作。
重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

10 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 采用加樣回收法，取本品粉末約100mg(共6份)，精密稱定，分置25ml量瓶中，分別精密加入野黃芩苷對照品溶液(C＝1.092mg/ml)0.6ml、0.8ml和1.0ml(各兩份)，加甲醇適量超聲處理(功率250W，頻率33KHz)5min，取出，放至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，精密吸取續(xù)濾液10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本發(fā)明涉及注射劑中野黃芩苷的含量為0.81％。
加樣回收率實(shí)驗(yàn)

平均回收率＝97.39％，RSD＝1.21％11 樣品含量測定 取本品三批樣品，按照正文供試品溶液的制備和測定法項(xiàng)下的操作。
野黃芩苷含量測定

具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1指紋圖譜a、采用液相色譜法測試燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加水或甲醇等溶劑溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量燈盞細(xì)辛藥材中的主要活性成分對照品野黃芩苷，用甲醇或乙醇溶解稀釋至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為乙腈或甲醇0.005mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH＝2.0～5.0)或0.2％～5％冰醋酸或0.2％～5％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-400nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫為20～60℃范圍內(nèi)；(4)以燈盞細(xì)辛成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中燈盞細(xì)辛成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.80～1.00；b、采用液相色譜法測試紅參或人參和麥冬成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量紅參或人參和麥冬藥材中的主要活性成分對照品，包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元、麥冬皂苷D′中的一種或幾種，用水或甲醇、乙醇溶解稀釋至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為20％～99％乙腈或20％～99％甲醇0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-300nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫為20～60℃范圍內(nèi)；(4)以紅參或人參和麥冬成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中紅參或人參和麥冬成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.80～1.00；c、采用液相色譜法測試黨參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量黨參藥材中的主要活性成分對照品，包括黨參炔苷、蒼術(shù)內(nèi)酯III中的一種或幾種，用水或甲醇、乙醇溶解稀釋至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為5％～99％∶95％～5％乙腈或甲醇-水或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-300nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫為20～60℃范圍內(nèi)；(4)以黨參成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中黨參成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.80～1.00；d、采用液相色譜法測試麥冬成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量麥冬藥材中的主要活性成分對照品，包括麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元、麥冬皂苷D′中的一種或幾種，用水或甲醇、乙醇溶解稀釋至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為20％～99％乙腈或20％～99％甲醇0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-300nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫為20～60℃范圍內(nèi)；(4)以麥冬成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中麥冬成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.80～1.00。
實(shí)施例2指紋圖譜a、采用液相色譜法測試燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為0.02moL/L磷酸二氫鈉(25％磷酸調(diào)pH＝3.5)，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至8分鐘，流動相A的比例由18％升至30％，從8分鐘至15分鐘，乙腈的比例由30％升至50％，從15分鐘至18分鐘，乙腈的比例由50％降至18％，從18分鐘至60分鐘，乙腈的比例為18％；流速為1.0ml/min，檢測波長為283±2nm，柱溫為40℃；(4)以燈盞細(xì)辛成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中燈盞細(xì)辛成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.90～1.00；b、采用液相色譜法測定以紅參或人參和麥冬成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；
(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，流動相B為乙腈-水80∶20，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至5分鐘，流動相B的比例為25％，從5分鐘至40分鐘，流動相B的比例由25％升至64％，從40分鐘至50分鐘，流動相B的比例為64％，從50分鐘至65分鐘，流動相B的比例由64％升至80％，從65分鐘至75分鐘，流動相B的比例由80％降至25％；流速為1.0ml/min，檢測波長為203±2nm，柱溫為40℃；(4)以紅參或人參和麥冬成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中紅參或人參和麥冬成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.90～1.00；c、采用液相色譜法測試黨參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量黨參藥材中的主要活性成分蒼術(shù)內(nèi)酯III，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料流動相為甲醇水67∶33，流速為1.0ml/min、蒸發(fā)光檢測器檢測，漂移管溫度30℃，載氣流量2.2L/min，柱溫為30℃；(4)以黨參成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中黨參成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.90～1.00；d、采用液相色譜法測定以麥冬成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取麥冬皂苷B適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，流動相B為乙腈-水80∶20，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至5分鐘，流動相B的比例為25％，從5分鐘至40分鐘，流動相B的比例由25％升至64％，從40分鐘至50分鐘，流動相B的比例為64％，從50分鐘至65分鐘，流動相B的比例由64％升至80％，從65分鐘至75分鐘，流動相B的比例由80％降至25％；流速為1.0ml/min，檢測波長為203±2nm，柱溫為40℃；(4)以麥冬成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中麥冬成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.90～1.00。
實(shí)施例3鑒別a、注射劑中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取野黃芩苷對照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～60∶0.2～10∶0.3～5或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.3～10％三氯化鋁乙醇或0.3～10％三氯化鋁甲醇溶液，90～130℃烘1～15分鐘，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；b、注射劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～95％∶95％～5％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.02％～2％磷酸水溶液或2％～30％∶2％～30％∶96％～40％甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.02％～2％磷酸水溶液或乙腈-0.005～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；c、注射劑中麥冬藥材的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加正丁醇或醋酸乙酯或氯仿提取，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取麥冬對照藥材，同法制成對照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以苯或甲苯或氯仿-甲醇或乙醇-冰醋酸或甲酸或水8～300∶0.5～100∶0.01～30或醋酸乙酯或甲酸乙酯-吡啶-水0.2～10∶0.1～5∶0.2～10為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈365nm或254nm下檢視或噴以10％硫酸或香草醛試劑或50％硫酸或5％香莢蘭醛試劑或茴香醛試劑，90℃～130℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾；d、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，用水提取后用正丁醇和乙醚或醋酸乙酯萃取，萃取液蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′，分別加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以醋酸乙酯或氯仿-甲醇-水3～50∶1～15∶0.1～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑，90℃～130℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；e、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的液相色譜鑒別取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，1％～99％∶99％～1％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；f、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加0.5～38％硫酸或鹽酸水解，調(diào)節(jié)pH至中性，蒸干，殘?jiān)寐确禄虼姿嵋阴ト芙?，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元，分別加氯仿或醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以正己烷或甲醇-醋酸乙酯或氯仿或甲酸乙酯-水0.2～15∶0.2～40∶0.1～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑，90℃～130℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；g、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的液相色譜鑒別取各制劑適量，置圓底燒瓶中，加水溶解后用0.5～38％硫酸或鹽酸水解，取出，放至室溫，調(diào)pH至中性，用氯仿或醋酸乙酯提取，提取液蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；h、注射劑中紅參或人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，用正丁醇或乙醇或甲醇提取，濾過，濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；取紅參或人參對照藥材，加氯仿回流提取，棄去氯仿液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為對照藥材溶液；另取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf對照品，分別加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以氯仿一醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～30 10℃以下放置的下層溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑或50％硫酸試劑，90℃～130℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；i.注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re的液相色譜鑒別取各制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為200～350nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫在20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；j、注射劑中黨參炔苷的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加水溶解，用正丁醇或醋酸乙酯或氯仿萃取，萃取液濃縮至干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為供試品溶液，或置C18或C8固相萃取小柱中，依次用5％～50％甲醇、甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取黨參對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取黨參炔苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板，正丁醇-冰醋酸或甲酸或乙醇或無水乙醇-水1～35∶0.1～10∶0.05～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3％～30％硫酸乙醇溶液，80～150℃加熱1～30分鐘，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾；k、注射劑中黨參炔苷的液相色譜鑒別方法取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或乙醇或流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以黨參炔苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾。
實(shí)施例4鑒別a、注射劑中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)眉状既芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水10∶5∶1∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3％三氯化鋁乙醇溶液，105℃烘5分鐘，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；b、注射劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1％磷酸水溶液20∶80為流動相，檢測波長為335nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；c、注射劑中麥冬的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加三氯甲烷-甲醇7∶3混合溶液提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)勇确氯芙?，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取麥冬對照藥材，同法制成對照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-甲醇-冰醋酸80∶5∶0.1為展開劑，展開，置紫外燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾；d、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，用水溶解后用正丁醇萃取，萃取液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′，分別加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲醇-水15∶5∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；e、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的液相色譜鑒別取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水90∶10為流動相，檢測波長為203nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；f、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加3％硫酸水解4小時(shí)，調(diào)節(jié)pH至中性，蒸干，殘?jiān)寐确氯芙?，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元，分別加氯仿或醋酸乙酯等溶劑制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯或-水1∶1∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，90℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；g、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的液相色譜鑒別取各制劑適量，置圓底燒瓶中，加水溶解，用3％硫酸回流4小時(shí)，取出，放至室溫，調(diào)pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水90∶10為流動相，檢測波長為203nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；h、注射劑中紅參或人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，用正丁醇提取，濾過，濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；取紅參或人參對照藥材，加氯仿回流提取，棄去氯仿液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為對照藥材溶液；另取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶1010℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；i.注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re的液相色譜鑒別取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；j、注射劑中黨參炔苷的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加甲醇25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，置C18固相萃取小柱(500mg，用甲醇、20％甲醇各10ml預(yù)洗)中，依次用20％甲醇、甲醇各5ml洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取黨參對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取黨參炔苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液6μl、對照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一高效硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水7∶1∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱5分鐘，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾；k、注射劑中黨參炔苷的液相色譜鑒別方法取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以黨參炔苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水22∶78為流動相，檢測波長為267nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾。
實(shí)施例5含量測定a、注射劑中野黃芩苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～95％∶95％～5％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.02％～2％磷酸水溶液或2％～30％∶2％～30％∶96％～40％甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.02％～2％磷酸水溶液或乙腈-0.005～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于6.0mg；b、注射劑中總黃酮的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法實(shí)驗(yàn)，在335±10nm的波長處測定吸收度或取各制劑適量，置量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量，置10ml量瓶中，加50％甲醇或水至5ml，加5％亞硝酸鈉溶液0.3～1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液0.3～1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4～10ml，再加50％甲醇或水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以蘆丁或野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的照分光光度法實(shí)驗(yàn)，在500±10nm處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以蘆丁或野黃芩苷計(jì)，不得少于30.0mg；c.注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為200～350nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫在20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人參皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人參皂苷Rb1的限度不得少于1.0mg，含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的總和的限度不得少于2.5mg；d.注射劑中總皂苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，至量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.2～4ml，高氯酸0.5～5ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻0.5～10分鐘，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或人參皂苷Re或人參皂苷Rf或麥冬皂苷B或麥冬皂苷D或麥冬皂苷D′作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547±10nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或人參皂苷Re或人參皂苷Rf或麥冬皂苷B或麥冬皂苷D或麥冬皂苷D′計(jì)，不得少于18.0mg；e、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，1％～99％∶99％～1％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含麥冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麥冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麥冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的總和的限度不得少于0.11mg；f、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元含量測定
取各制劑適量，置圓底燒瓶中，加水溶解后用0.5～38％硫酸或鹽酸水解，取出，放至室溫，調(diào)pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含假葉樹皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蕷皂苷元的限度不得少于0.01mg；含魯斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；含假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的總和的限度不得少于0.03mg；g、注射劑中黨參炔苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以黨參炔苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黨參炔苷的限度不得少于0.1mg。
實(shí)施例6含量測定a、注射劑中野黃芩苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相等溶劑至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1％磷酸水溶液20∶80為流動相，檢測波長為335nm，柱溫30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于6.0mg；b、注射劑中總黃酮的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計(jì)，不得少于30.0mg；c.注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至4O％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在10～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人參皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人參皂苷Rb1的限度不得少于1.0mg，含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的總和的限度不得少于2.5mg；d.注射劑中總皂苷的含量測定取各制劑適量，置10ml量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.6ml，至25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻2分鐘，精密加冰醋酸至25ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于18.0mg；e、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水90∶10為流動相，檢測波長為203nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含麥冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麥冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麥冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的總和的限度不得少于0.11mg；
f、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元含量測定取各制劑適量，置圓底燒瓶中，加水溶解后用3％硫酸回流4小時(shí)，取出，放至室溫，調(diào)pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水90∶10為流動相，檢測波長為203nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含假葉樹皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蕷皂苷元的限度不得少于0.01mg；含魯斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；含假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的總和的限度不得少于0.03mg；g、注射劑中黨參炔苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以黨參炔苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水22∶78為流動相，檢測波長為267nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黨參炔苷的限度不得少于0.1mg。
權(quán)利要求
1.一種以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參、麥冬制成的中藥注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括以下全部或部分內(nèi)容(1)指紋圖譜測試，包括以燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜、以黨參成分特征為主的指紋圖譜、以紅參或人參和麥冬成分特征為主的指紋圖譜、以麥冬成分特征為主的指紋圖譜中的一種或幾種；(2)燈盞細(xì)辛藥材、紅參或人參或黨參藥材、麥冬藥材、野黃芩苷、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′、假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元、黨參炔苷、蒼術(shù)內(nèi)酯III中全部或部分成分的鑒別測試方法；(3)人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′、假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元、總皂苷、總黃酮、黨參炔苷、蒼術(shù)內(nèi)酯III中全部或部分成分的含量測試方法。
2.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下指紋圖譜中的一種或幾種a、采用液相色譜法測試燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加水或甲醇等溶劑溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量燈盞細(xì)辛藥材中的主要活性成分對照品野黃芩苷，用甲醇或乙醇溶解稀釋至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料∶流動相為乙腈或甲醇∶0.005mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉溶液(磷酸調(diào)節(jié)pH＝2.0～5.0)或0.2％～5％冰醋酸或0.2％～5％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-400nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫為20～60℃范圍內(nèi)；(4)以燈盞細(xì)辛成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中燈盞細(xì)辛成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.80～1.00；b、采用液相色譜法測試紅參或人參和麥冬成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量紅參或人參和麥冬藥材中的主要活性成分對照品，包括人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf、麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元、麥冬皂苷D′中的一種或幾種，用水或甲醇、乙醇溶解稀釋至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料∶流動相為20％～99％乙腈或20％～99％甲醇∶0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-300nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫為20～60℃范圍內(nèi)；(4)以紅參或人參和麥冬成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中紅參或人參和麥冬成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.80～1.00；c、采用液相色譜法測試黨參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量黨參藥材中的主要活性成分對照品，包括黨參炔苷、蒼術(shù)內(nèi)酯III中的一種或幾種，用水或甲醇、乙醇溶解稀釋至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料∶流動相為5％～99％∶95％～5％乙腈或甲醇-水或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-300nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫為20～60℃范圍內(nèi)；(4)以黨參成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中黨參成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.80～1.00；d、采用液相色譜法測試麥冬成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加水或甲醇或乙醇溶解或稀釋，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量麥冬藥材中的主要活性成分對照品，包括麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元、麥冬皂苷D′中的一種或幾種，用水或甲醇、乙醇溶解稀釋至合適濃度，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料∶流動相為20％～99％乙腈或20％～99％甲醇∶0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鈉溶液或0.01mol/L～2mol/L磷酸二氫鉀溶液或0.2％～3％冰醋酸或0.2％～3％甲酸或0.2％～3％磷酸溶液，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min、檢測波長為190-300nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫為20～60℃范圍內(nèi)；(4)以麥冬成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中麥冬成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.80～1.00。
3.按照權(quán)利要求2所述的以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑的質(zhì)量控制方法，，其特征在于該方法包括如下指紋圖譜中的一種或幾種a、采用液相色譜法測試燈盞細(xì)辛成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取野黃芩苷適量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相B為0.02moL/L磷酸二氫鈉(25％磷酸調(diào)pH＝3.5)，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至8分鐘，流動相A的比例由18％升至30％，從8分鐘至15分鐘，乙腈的比例由30％升至50％，從15分鐘至18分鐘，乙腈的比例由50％降至18％，從18分鐘至60分鐘，乙腈的比例為18％；流速為1.0ml/min，檢測波長為283±2nm，柱溫為40℃；(4)以燈盞細(xì)辛成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中燈盞細(xì)辛成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.90～1.00；b、采用液相色譜法測定以紅參或人參和麥冬成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，流動相B為乙腈-水80∶20，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至5分鐘，流動相B的比例為25％，從5分鐘至40分鐘，流動相B的比例由25％升至64％，從40分鐘至50分鐘，流動相B的比例為64％，從50分鐘至65分鐘，流動相B的比例由64％升至80％，從65分鐘至75分鐘，流動相B的比例由80％降至25％；流速為1.0ml/min，檢測波長為203±2nm，柱溫為40℃；(4)以紅參或人參和麥冬成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中紅參或人參和麥冬成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.90～1.00；c、采用液相色譜法測試黨參成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備取燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備取適量黨參藥材中的主要活性成分蒼術(shù)內(nèi)酯III，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料∶流動相為甲醇水67∶33，流速為1.0ml/min、蒸發(fā)光檢測器檢測，漂移管溫度30℃，載氣流量2.2L/min，柱溫為30℃；(4)以黨參成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定精密吸取供試品溶液及參照物溶液適量，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中黨參成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑的指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.90～1.00；d、采用液相色譜法測定以麥冬成分特征為主的指紋圖譜(1)供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加甲醇制成每1ml含50mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；(2)參照物溶液的制備精密稱取麥冬皂苷B適量，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為參照物溶液；(3)色譜條件色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，流動相B為乙腈-水80∶20，梯度洗脫，溶劑比例從0分鐘至5分鐘，流動相B的比例為25％，從5分鐘至40分鐘，流動相B的比例由25％升至64％，從40分鐘至50分鐘，流動相B的比例為64％，從50分鐘至65分鐘，流動相B的比例由64％升至80％，從65分鐘至75分鐘，流動相B的比例由80％降至25％；流速為1.0ml/min，檢測波長為203±2nm，柱溫為40℃；(4)以麥冬成分特征為主的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，依據(jù)所測得的圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(5)以上述方法作為待測注射劑中麥冬成分指紋圖譜的測試手段；(6)將待測注射劑指紋圖譜與上述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜對比，計(jì)算相似度，應(yīng)為0.90～1.00。
4.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參和麥冬制成的中藥注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射劑的鑒別方法是以下全部或部分內(nèi)容a、注射劑中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取野黃芩苷對照品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～60∶0.2～10∶0.3～5或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.3～10％三氯化鋁乙醇或0.3～10％三氯化鋁甲醇溶液，90～130℃烘1～15分鐘，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色斑點(diǎn)；b、注射劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～95％∶95％～5％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.02％～2％磷酸水溶液或2％～30％∶2％～30％∶96％～40％甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.02％～2％磷酸水溶液或乙腈-0.005～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；c、注射劑中麥冬藥材的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加正丁醇或醋酸乙酯或氯仿提取，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取麥冬對照藥材，同法制成對照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以苯或甲苯或氯仿-甲醇或乙醇-冰醋酸或甲酸或水8～300∶0.5～100∶0.01～30或醋酸乙酯或甲酸乙酯-吡啶-水0.2～10∶0.1～5∶0.2～10為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈365nm或254nm下檢視或噴以10％硫酸或香草醛試劑或50％硫酸或5％香莢蘭醛試劑或茴香醛試劑，90℃～130℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾；d、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，用水提取后用正丁醇和乙醚或醋酸乙酯萃取，萃取液蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′，分別加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以醋酸乙酯或氯仿-甲醇-水3～50∶1～15∶0.1～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑，90℃～130℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；e、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的液相色譜鑒別取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，1％～99％∶99％～1％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；f、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加0.5～38％硫酸或鹽酸水解，調(diào)節(jié)pH至中性，蒸干，殘?jiān)寐确禄虼姿嵋阴ト芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元，分別加氯仿或醋酸乙酯制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以正己烷或甲醇-醋酸乙酯或氯仿或甲酸乙酯-水0.2～15∶0.2～40∶0.1～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑，90℃～130℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；g、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的液相色譜鑒別取各制劑適量，置圓底燒瓶中，加水溶解后用0.5～38％硫酸或鹽酸水解，取出，放至室溫，調(diào)pH至中性，用氯仿或醋酸乙酯提取，提取液蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；h、注射劑中紅參或人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，用正丁醇或乙醇或甲醇提取，濾過，濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；取紅參或人參對照藥材，加氯仿回流提取，棄去氯仿液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙?，作為對照藥材溶液；另取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf對照品，分別加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～30 10℃以下放置的下層溶液或正丁醇-醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5～50％硫酸乙醇試劑或50％硫酸試劑，90℃～130℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；i.注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re的液相色譜鑒別取各制劑適量，置量瓶中，加水或甲醇或流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為200～350nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫在20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；j、注射劑中黨參炔苷的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加水溶解，用正丁醇或醋酸乙酯或氯仿萃取，萃取液濃縮至干，殘?jiān)眉状蓟蛞掖既芙猓鳛楣┰嚻啡芤?，或置C18或C8固相萃取小柱中，依次用5％～50％甲醇、甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取黨參對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取黨參炔苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各1～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板，正丁醇-冰醋酸或甲酸或乙醇或無水乙醇-水1～35∶0.1～10∶0.05～5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3％～30％硫酸乙醇溶液，80～150℃加熱1～30分鐘，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾；k、注射劑中黨參炔苷的液相色譜鑒別方法取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或乙醇或流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以黨參炔苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或兒個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；供試品色譜中，應(yīng)具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾。
5.按照權(quán)利要求4所述的以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參、麥冬制成的中藥注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射劑的鑒別方法是以下的一種或幾種a、注射劑中野黃芩苷的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加醋酸乙酯提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)眉状既芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取燈盞細(xì)辛對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取野黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水10∶5∶1∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3％三氯化鋁乙醇溶液，105℃烘5分鐘，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；b、注射劑中野黃芩苷的液相色譜鑒別方法取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1％磷酸水溶液20∶80為流動相，檢測波長為335nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；c、注射劑中麥冬的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加三氯甲烷-甲醇7∶3混合溶液提取，濾過，濾液揮干，殘?jiān)勇确氯芙?，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取麥冬對照藥材，同法制成對照藥材溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-甲醇-冰醋酸80∶5∶0.1為展開劑，展開，置紫外燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾；d、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，用水溶解后用正丁醇萃取，萃取液蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′，分別加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲醇-水15∶5∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；e、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的液相色譜鑒別取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水90∶10為流動相，檢測波長為203nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；f、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加3％硫酸水解4小時(shí)，調(diào)節(jié)pH至中性，蒸干，殘?jiān)寐确氯芙?，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元，分別加氯仿或醋酸乙酯等溶劑制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯或-水1∶1∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，90℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；g、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的液相色譜鑒別取各制劑適量，置圓底燒瓶中，加水溶解，用3％硫酸回流4小時(shí)，取出，放至室溫，調(diào)pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水90∶10為流動相，檢測波長為203nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；h、注射劑中紅參或人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，用正丁醇提取，濾過，濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；取紅參或人參對照藥材，加氯仿回流提取，棄去氯仿液，殘?jiān)铀柡驼〈继崛?，提取液加氨試液，分取上層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，作為對照藥材溶液；另取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、人參皂苷Rf對照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板或硅膠H薄層板或硅膠GF254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶1010℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試劑，105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置日光及紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾；i.注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re的液相色譜鑒別取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾；j、注射劑中黨參炔苷的薄層色譜鑒別方法取各制劑適量，加甲醇25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，置C18固相萃取小柱(500mg，用甲醇、20％甲醇各10ml預(yù)洗)中，依次用20％甲醇、甲醇各5ml洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；另取黨參對照藥材，同法制成對照藥材溶液；再取黨參炔苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含1mg溶液，作為對照品溶液；采用中國藥典附錄公開的薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液6μl、對照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一高效硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水7∶1∶0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱5分鐘，置紫外光燈365nm下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾；k、注射劑中黨參炔苷的液相色譜鑒別方法取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以黨參炔苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水22∶78為流動相，檢測波長為267nm，柱溫30℃；供試品色譜中，具與對照品色譜有保留時(shí)間一致的色譜峰，陰性無干擾。
6.按照權(quán)利要求1所述的以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參、麥冬制成的中藥注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射劑含量的測試方法應(yīng)包括以下中的一種或幾種a、注射劑中野黃芩苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇或乙醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～95％∶95％～5％甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰醋酸水溶液或0.02％～2％磷酸水溶液或2％～30％∶2％～30％∶96％～40％甲醇或乙腈-四氫呋喃-0.02％～2％磷酸水溶液或乙腈-0.005～0.3moL/L磷酸二氫鈉(1～99％磷酸調(diào)pH＝2.0～5.0)梯度洗脫系統(tǒng)為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于6.0mg；b、注射劑中總黃酮的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法實(shí)驗(yàn)，在335±10nm的波長處測定吸收度或取各制劑適量，置量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取適量，置10ml量瓶中，加50％甲醇或水至5ml，加5％亞硝酸鈉溶液0.3～1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液0.3～1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液4～10ml，再加50％甲醇或水至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以蘆丁或野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的照分光光度法實(shí)驗(yàn)，在500±10nm處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以蘆丁或野黃芩苷計(jì)，不得少于30.0mg；c.注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相或乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液或0.5％～5％甲酸溶液為流動相，梯度洗脫，流速為0.5～2.0ml/min，檢測波長為200～350nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫在20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人參皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人參皂苷Rb1的限度不得少于1.0mg，含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的總和的限度不得少于2.5mg；d.注射劑中總皂苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取適量，至量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液0.2～4ml，高氯酸0.5～5ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻0.5～10分鐘，精密加冰醋酸至刻度，搖勻，作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或人參皂苷Re或人參皂苷Rf或麥冬皂苷B或麥冬皂苷D或麥冬皂苷D′作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547±10nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1或人參皂苷Rb1或人參皂苷Re或人參皂苷Rf或麥冬皂苷B或麥冬皂苷D或麥冬皂苷D′計(jì)，不得少于18.0mg；e、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，1％～99％∶99％～1％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含麥冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麥冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麥冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的總和的限度不得少于0.11mg；f、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元含量測定取各制劑適量，置圓底燒瓶中，加水溶解后用0.5～38％硫酸或鹽酸水解，取出，放至室溫，調(diào)pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個或蒸發(fā)光檢測器檢測，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含假葉樹皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蕷皂苷元的限度不得少于0.01mg；含魯斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；含假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的總和的限度不得少于0.03mg；g、注射劑中黨參炔苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以黨參炔苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠或八烷基硅烷鍵合硅膠或二烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，5％～80％∶95％～20％甲醇或乙腈-水或0.05％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～0.5％磷酸水溶液為流動相，檢測波長為200～410nm范圍內(nèi)的一個或幾個，柱溫20～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黨參炔苷的限度不得少于0.1mg。
7.按照權(quán)利要求6所述的以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參、麥冬制成的中藥注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述注射劑含量的測試方法是以下一種或幾種方法a、注射劑中野黃芩苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇或流動相等溶劑至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以野黃芩苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1％磷酸水溶液20∶80為流動相，檢測波長為335nm，柱溫30℃；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含野黃芩苷的限度不得少于6.0mg；b、注射劑中總黃酮的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取1ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以野黃芩苷作為對照品，同法制得對照品溶液。以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在335nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總黃酮的限度以野黃芩苷計(jì)，不得少于30.0mg；c.注射劑中人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，溶劑比例為從0分鐘至35分鐘，乙腈的比例為19％，從35分鐘至55分鐘，乙腈的比例由19％上升至29％，從55分鐘至70分鐘，乙腈的比例為29％，從70分鐘至100分鐘，乙腈的比例由29％升至40％；流速為1.0ml/min，檢測波長203nm，柱溫在10～50℃范圍內(nèi)；以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含人參皂苷Rg1的限度不得少于1.0mg，含人參皂苷Re的限度不得少于0.5mg，含人參皂苷Rb1的限度不得少于1.0mg，含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的總和的限度不得少于2.5mg；d.注射劑中總皂苷的含量測定取各制劑適量，置10ml量瓶中，加蒸餾水適量使溶解并定至刻度，搖勻，精密量取0.6ml，至25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛冰醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，搖勻，60℃水浴上加熱15分鐘，取出，立即以冰水浴冷卻2分鐘，精密加冰醋酸至25ml，搖勻，以隨行溶劑為空白，采用中國藥典附錄公開的分光光度法，在547nm的波長處測定吸收度，以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含總皂苷以人參皂苷Rg1計(jì)，不得少于18.0mg；e、注射劑中麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水90∶10為流動相，檢測波長為203nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含麥冬皂苷B的限度不得少于0.05mg，含麥冬皂苷D的限度不得少于0.05mg；含麥冬皂苷D′的限度不得少于0.01mg；含麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的總和的限度不得少于0.11mg；f、注射劑中假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元含量測定取各制劑適量，置圓底燒瓶中，加水溶解后用3％硫酸回流4小時(shí)，取出，放至室溫，調(diào)pH至中性，用氯仿提取，提取液蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水90∶10為流動相，檢測波長為203nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含假葉樹皂苷元的限度不得少于0.01mg，含薯蕷皂苷元的限度不得少于0.01mg；含魯斯可皂苷元的限度不得少于0.01mg；含假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元的總和的限度不得少于0.03mg；g、注射劑中黨參炔苷的含量測定取各制劑適量，置量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；按處方比例稱取其它藥味及輔料，同法制成陰性對照溶液；以黨參炔苷對照品的甲醇溶液為對照，采用液相色譜法，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-水22∶78為流動相，檢測波長為267nm，柱溫30℃；以外標(biāo)一點(diǎn)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，各制劑以相當(dāng)于每日用成品量為單位量，每單位量含黨參炔苷的限度不得少于0.1mg。
8.按照權(quán)利要求6或7所述的以燈盞細(xì)辛、紅參或人參或黨參、麥冬制成的中藥注射劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于按照重量百分比計(jì)算，所述注射劑中所有可測成分包括野黃芩苷、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Re、總皂苷、麥冬皂苷B、麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′、假葉樹皂苷元、薯蕷皂苷元、魯斯可皂苷元、黨參炔苷、蒼術(shù)內(nèi)酯III中的全部或部分的總含量占制劑中扣除輔料量和水分量的總固體量不低于25％。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種由燈盞細(xì)辛、人參(或紅參、黨參)和麥冬制成的中藥注射制劑的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量控制方法包括該中藥注射制劑中燈盞細(xì)辛、人參(或紅參、黨參)和麥冬的指紋圖譜測試方法和/或鑒別測試方法和/或含量測定方法，本發(fā)明為該注射制劑的質(zhì)量控制提供了一種可靠、穩(wěn)定、全新的方法，使該制劑的質(zhì)量更加穩(wěn)定，檢測更為科學(xué)。
文檔編號A61P9/00GK1919308SQ200510092858
公開日2007年2月28日 申請日期2005年8月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月22日
發(fā)明者于文風(fēng) 申請人:北京奇源益德藥物研究所