專利名稱：治療人乳頭瘤病毒感染的中藥的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及治療人乳頭瘤病毒感染的中藥。
背景技術：
人乳頭瘤病毒(Human papilloma virus，簡稱HPV)屬DNA類病毒，其生物特性及其生物反應為呈正20面體，球形粒的直徑約50-55nm，人是它唯一的宿主，能引起人類的各種疣，如尋常疣、扁平疣、跖疣、甲緣疣及生殖器疣(如尖銳濕疣)等，利用核酸雜交技術可將其分為28個型，不同型別可引起同一種疣，而一種疣可由多個型別的HPV所引起。
HPV與艾滋病病毒一樣，自身沒有繁殖能力，需要嵌入人的DNA中搭車繁殖，與其它病原體不同的是，它并不引發(fā)炎癥性反應，而是促發(fā)宿主細胞的增殖，呈腫瘤性生長，并可導致惡性腫瘤的發(fā)生，如皮膚癌、舌癌等，尖銳濕疣有10％的癌變率，上個世紀末，國際上已確認宮頸上皮HPV的慢性感染是宮頸癌的病因。HPV目前組織培養(yǎng)尚未成功，也未發(fā)現(xiàn)可供實驗的模型動物。
傳染途徑HPV是通過直接接觸傳染，例如尖銳濕疣主要是通過性接觸傳染，因此它在艾滋病的傳播中起到推波助瀾的作用。尖銳濕疣是危害社會的性病中人數(shù)最多的一種。由于它在生殖器內(nèi)外呈腫瘤樣生長，給人們生活帶來極大不便與家庭的不和，它所引起的惡性腫瘤將致人于死命。
HPV在人體內(nèi)可有一個或長或短的潛伏期或帶毒狀態(tài)，在此期內(nèi)，沒有任何臨床癥狀，但卻有傳染性，成為潛在的傳染源。而宮頸的長期HPV的慢性感染，終將出現(xiàn)宮頸癌。
目前對人乳頭瘤病毒感染還沒有能夠殺死HPV的藥物，現(xiàn)有技術在治療各種疣病時只能采取破壞疣體的辦法，如激光、冷凍、微波等物理方法，或者使用鬼臼素、斑蝥素、平陽霉素等藥物腐蝕組織等。這些方法不但過程痛苦，還有創(chuàng)面形成，不易愈合，而且因不能殺滅病毒而極易復發(fā)。因此，需要有一種特效的，可殺滅病毒的藥物問世。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是開發(fā)一種以中藥為活性成分的治療人乳頭瘤病毒感染的藥物。
本發(fā)明開發(fā)的治療人乳頭瘤病毒感染的中藥復方由如下重量份的原料藥制成紅花6-60、木賊5-100。
上述原料藥的優(yōu)選配比是紅花10-60、木賊5-30；最佳配比是紅花10、木賊5。
上述復方中君藥不變，還可以加入其它藥物，組合成多種組方，發(fā)揮不同程度的功效。
如上述復方中可另加入香附10-30份。
經(jīng)實驗室和臨床研究發(fā)現(xiàn)，單用紅花一味藥或單用木賊一味藥，也有較好的藥效。
此外，研究還發(fā)現(xiàn)，當紅花與香附配伍，或者木賊與香附配伍，也都得到了較好的效果。其用藥比例為紅花∶香附＝2∶1，或者木賊∶香附＝2∶1因此，本發(fā)明所述的治療人乳頭瘤病毒感染藥物可以有如下多種配伍方式1.紅花2.木賊3.紅花+木賊4.紅花+香附5.木賊+香附6.紅花+木賊+香附從中醫(yī)理論講，紅花和木賊具有理氣活血之功；從西醫(yī)理論講，紅花和木賊具有殺滅病毒作用。
本發(fā)明藥物可以采用中藥制劑的常規(guī)方法制備成任何常規(guī)的制劑，例如將原料藥物進行粉碎后加工成片劑、丸劑，或水煎，或用醇或醇水混合物提取，然后濃縮水煎液或提取液，精制成為中藥提取物。將提取物與藥物可接受的各種載體、輔劑配伍，用本領域技術人員常規(guī)的制藥方法，制備成各種制劑。
本發(fā)明藥物的劑型可以是各種口服劑，如傳統(tǒng)的水煎劑、濃縮口服液、粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、沖劑等。也可以制成外用藥劑，包括中藥硬膏、醑劑、軟膏、乳膏劑、涂膜劑、栓劑、氣霧劑等，于感染的局部使用。
本發(fā)明所述的治療人乳頭瘤病毒感染藥物可用于下述疾病或患者尖銳濕疣、尖銳濕疣及其宻切接觸的性伴侶、家屬；各種HPV攜帶者，包括宮頸、尿道HPV攜帶者；尖銳濕疣及宮頸的早期癌變患者；各種常見的皮膚疣，如尋常疣、甲緣疣、跖疣、扁平疣及痘病毒感染的傳染性軟疣。
經(jīng)臨床療效及實驗室藥效學的研究，本發(fā)明藥物具有極強的特異性的破壞人乳頭瘤病毒(HPV)的功能，經(jīng)口服進入人體，能有效清除體內(nèi)HPV，復發(fā)率極低，臨床上應用不但方便簡單，沒有痛苦，而且有極高的治愈率與極低的復發(fā)率。
尖銳濕疣的臨床研究證明，對典型的尖銳濕疣病人89例及8例經(jīng)過FQ-PCR-HPV檢測證實為陽性的帶毒者進行了臨床療效的觀察，并在實驗室進行了藥效學的研究。結果顯示97例治愈95人，治愈率97.95％，復發(fā)2人，復發(fā)率2，1％。病毒攜帶者8人，經(jīng)治療后，HPV全部陰轉，經(jīng)過充分的長期隨訪未見復發(fā)。在實驗室，在有陽性對照的條件下，含有HPV的混懸液中，加入定量藥物后，無論HPV 6，11或HPV 16，18，24小時后均不能再檢出HPV的DNA，說明本發(fā)明的藥物在體內(nèi)可清除HPV的治療機制。由于具備能在體內(nèi)清除HPV的功能，因此不僅能治愈有臨床癥狀的病人，而且對尚未發(fā)病的性伴侶、帶毒者以及處于亞臨床狀態(tài)的患者均能有效清除體內(nèi)病毒，從而起到了預防及消除傳染源的作用，在流行病學上有重要意義。
由于HPV的慢性感染是宮頸癌的重要原因，本發(fā)明藥物在清除宮頸HPV后，還可以起到預防宮頸癌的作用。
在研究中，我們還發(fā)現(xiàn)它對HPV感染的其它皮膚病及傳染性軟疣也有很好的效果，此外對因HPV感染而致的惡性傾向性疾病，如鮑溫樣丘疹病、宮頸的CIN的治療也極具研究價值。
以下是本發(fā)明進行的藥效學研究等研究，所述“疣毒清”指本發(fā)明的中藥組合物，“AC”指尖銳濕疣。
具體實施例方式實施例1 實驗室藥效學的研究實驗藥物配方1(以下稱為“疣毒清”)，配方為(重量份)紅花6，木賊3，香附2，水煎劑。
將含有HPV的試液中加入“疣毒清”，用FQ-PCR技術定時檢測，以考察其對HPV的殺滅能力。
1材料與方法
1.1HPV來源HPV6、11取自未經(jīng)治療的AC病人的疣體，經(jīng)NS清洗后在無菌條件下研磨成組織勻漿備用。HPV 16、18取自病人皮損的清洗液。
1.2中藥樣品將“疣毒清”及對照中藥制成與臨床應用相同的水煎劑。(對照中藥成分1號當歸30克，白術15克。2號茯苓30，甘草15。)1.3主要儀器PE-5700型熒光定量PCR儀及相關電腦軟件。
1.4PCR引物及熒光探針來自經(jīng)國家批準上市的中山醫(yī)科大學達安基因診斷中心提供的HPV6、11，HPV16、18型FQ-PCR診斷試劑盒，其敏感度為25個拷貝。
2實驗方法2.1取AC組織勻漿或清洗液0.6ml，分別加入中藥試驗樣本2.4ml，對照管則加入NS 2.4ml，在4℃下，按時提取DNA，每次試驗同時設陰性及陽性對照管。
2.2FQ-PCR反應步驟采用常規(guī)堿裂解法提取DNA，每次取0.2ml加入薄壁反應管中，同時加入一定量的引物、F-probe、dNTP、DNA聚合酶及緩沖液等，放入PE-5700熒光PCR儀，93℃2min予變性后，按93℃45s、55℃120s反復循環(huán)40次，定量結果由電腦軟件自動分析，計算出其初始拷貝數(shù)。
3結果3.1第一次試驗，加入“疣毒清”24小時后即不能測出HPV6、11，而對照管及中藥對照管直至第13天仍保持原始高濃度拷貝數(shù)(表1)表1 第一次試驗結果(HPV-6，11)

表2 第2次實驗結果(HPV-6、11)

表3 第3次實驗結果(HPV-16、18)

3次試驗的結果均一致，說明試驗的可重復性及可信性。實驗也證明疣毒清在試管內(nèi)對HPV-6、11及HPV-16、18均有相同的殺滅效果，具有廣譜的殺滅HPV的能力。下述實驗證明了在疣毒清試管內(nèi)對HPV-DNA與一般化學性滅菌劑無選擇性地破壞不同，而是與抗生素等藥物一樣具有選擇性滅菌作用，我們選擇了HBV作為對照進性了考察。

試驗證明‘疣毒清’在體外對HBV的DNA沒有破壞作用，而對HPV-DNA卻有明顯的破壞作用，因此它的殺滅HPV的作用是特異性的，與抗生素的作用相同。
實施例2 AC及帶毒者97例的臨床研究1臨床資料1.1AC 97例，男65人，女32人。療前曾接受過其它治療復發(fā)而入選者共計31人，占全部AC的32.29％。
1.2發(fā)病部位以部位統(tǒng)計包皮20例龜頭12例冠狀溝23例陰莖7例尿道口內(nèi)外8例肛周10例陰道19例陰道外14例宮頸2例1.3疣體數(shù)量計數(shù)標準
＜3個十＞3-10個卄＞10個或皮疹融合卅巨大型卌除8名帶毒者外，89名尖銳濕疣病人疣體＞卅以上者共30人，占有疣體病人的31.25％1.4無臨床癥狀，但FQ-PCR-HPV檢測陽性者8人，男3人，女5人，其原始拷貝數(shù)HPV6，114.53×108 2.61×106 4.96×106 6.72×104 1.6×102 3.77×102HPV16，185.16×104 6.72×1042服藥方法每日口服“疣毒清”一付，分二次服用，服藥前后禁飲茶。
3入選條件所有參加治療者均不能接受其它類型治療，否則不列入觀察之中。治療時間以滿6個月為標準，堅持6個月治療而未愈者，判為無效。
4禁忌癥妊娠或有出血性疾病者禁忌。
5療效判斷標準痊愈全部疣體脫落或FQ-PCR-HPV為0拷貝。
無效少數(shù)疣體脫落或FQ-PCR-HPV陽性。
6結果6.1治療效果97人中治愈95人治愈率97.93％無效2人，占2.06％31名經(jīng)其它治療復發(fā)的病人全部治愈。
6.2治愈時間分析，95名治愈者中≤1個月治愈者24人，占25.26％≤2個月治愈者累計47人，占49.47％≤3個月治愈者累計61人，占64.21‰≤4個月治愈者累計81人，占85.26％＜6個月治愈者91人，占95.79％＞7個月治愈者4人，占4.21％平均治愈時間為2.74個月6.38名帶毒者，其中3人于1個月內(nèi)FQ-PCR-HPV陰轉，2人于2個月內(nèi)陰轉，3人于4個月內(nèi)陰轉。
6.4治愈的95人中，37人治療后進行了FQ-PCR-HPV檢測，占治愈者的38.94％，他們不但達到臨床治愈而且FQ-PCRHPV也全部陰轉。其中24人作了療前后HPV的對比檢測，占全部治愈者的25.26％6.5隨訪及復發(fā)6.5.195名治愈者中除3人正進入隨訪期，不足3個月外，其馀患者隨訪期均在3個月以上，占96.84％；91人隨訪期超過6個月，占96.8％，83人隨訪超過1年，占88.29％，超過3個月的常規(guī)隨訪期。
6.5.2復發(fā)復發(fā)2人，復發(fā)率2.1％。
7討論7.1在體外藥效學實驗中，含有HPV的試管中，加入“疣毒清”，24小時后即不再能擴增出HPV拷貝，說明“疣毒清”是一種能有選擇性的破壞HPV生命基礎DNA的藥物。這種破壞作用與加熱或化學殺菌劑不同，它是有特異性的，以HBS代替HPV，疣毒清并不能破壞它的DNA。臨床37名治愈者療后FQ-PCR-HPV的陰轉，也說明它的治療機制是通過口服吸收后在體內(nèi)殺滅病毒而取得療效，這也可以解釋它能取得高治愈率與低復發(fā)率的原因。
7.2一般隨訪期為3個月。本組患者隨訪期超過6個月者占96.8％，因此其復發(fā)率是可靠的。
7.3臨床研究表明?！梆喽厩濉本哂袠O高的治愈率(97.91％)，以2個月為一個療程計算，一個療程的治愈率為44.21％，二個療程的治愈率為85.26％。
研究發(fā)現(xiàn)，超過6個月未達到治愈的病人，繼續(xù)堅持治療仍可以獲得治愈。
7.4雖然復發(fā)性尖銳濕疣病人在臨床上顯示它對常規(guī)治療上的頑固與抵抗，但疣毒清對它們?nèi)员３趾芎玫男Ч?0名入選的復發(fā)病人的各個療程治愈率與初發(fā)病人沒有差別，本組有一例龜頭及冠狀溝宻布許多尖銳濕疣，曾作過12次冷凍，每次均于術后1周復發(fā)，然而服用疣毒清2月即愈，不再復發(fā)，并未顯示有任何治療障礙。
7.5治愈的95名患者中有2例復發(fā)，2例的病情均不重，疣體的數(shù)量在1-3個，均非復發(fā)病人，經(jīng)治后疣體脫落時間亦不長，1例為1個月，另例為4.5個月，2例的共同之處為疣體脫落后沒有進行充分的鞏固治療，沒有檢測體內(nèi)病毒是否存在，因此均于2個月后有新疣體出現(xiàn)，這實際上屬于沒有治愈即停藥所致。
7.6引起AC的病毒絕大多數(shù)為HPV 6，11及HPV 16，18，實驗及臨床均證明“疣毒清”對兩者均有相同的殺滅與治療能力。
7.7臨床證明，沒有癥狀的帶毒者及亞臨床患者，“疣毒清”能清除其體內(nèi)的HPV，不但終止了疾病的發(fā)生，而且也消除了傳染源，在流行病學上有重要意義，同時也對接觸密切的性伴侶提供了治療的可能性。
7.8腫瘤及婦科專家已經(jīng)確認HPV16的宮頸慢性隱性感染是引發(fā)宮頸癌的原因，因此“疣毒清”可以考慮作為宮頸帶毒者清除HPV以預防宮頸癌的用藥。
7.9感染HPV 16可以導致上皮細胞的間變，鮑溫樣丘疹病就是因為感染HPV 16出現(xiàn)的具有細胞惡變的尖銳濕疣。我們曾經(jīng)用“疣毒清”治愈一名這樣的病人，在臨床癥狀及HPV消失的同時，病理上惡變的上皮細胞也恢復了正常。說明“疣毒清”可以使因HPV而發(fā)生惡變的細胞逆轉為正常細胞。宮頸癌的早期改變，其惡性度病理上分為CIN1-3度，它的病理改變與鮑溫樣丘疹病相似，因此對有HPV 16感染的CIN也可試用“疣毒清”以觀察其效果。
實施例31.實驗藥物用下列各配方制成水煎劑

2.實驗方法大體同實施例1，包括體外藥效學實驗及臨床考察3.實驗結果實驗室及臨床的結果與配方1基本相接近，但以配方1效果最理想。
權利要求
1.治療人乳頭瘤病毒感染的中藥，由如下重量份的原料藥制成紅花6-60、木賊5-100。
2.權利要求1所述的治療人乳頭瘤病毒感染的中藥，由如下重量份的原料藥制成紅花10-60、木賊5-30。
3.權利要求1所述的治療人乳頭瘤病毒感染的中藥，由如下重量份的原料藥制成紅花10、木賊5。
4.權利要求1所述的治療人乳頭瘤病毒感染的中藥，還包括10-30重量份的香附。
5.權利要求4所述的治療人乳頭瘤病毒感染的中藥，由如下重量份的原料藥制成紅花6、木賊3，香附2。
6.治療人乳頭瘤病毒感染的中藥，由紅花制成。
7.權利要求6所述的治療人乳頭瘤病毒感染的中藥，其原料還包括香附，重量份配比為紅花∶香附＝2∶1。
8.治療人乳頭瘤病毒感染的中藥，由木賊制成。
9.權利要求8所述的治療人乳頭瘤病毒感染的中藥，其原料還包括香附，重量份配比為木賊∶香附＝2∶1。
10.權利要求1～9中任一項所述的治療人乳頭瘤病毒感染的中藥，劑型為口服劑或外用藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及治療人乳頭瘤病毒感染的中藥，所述中藥由紅花、木賊等原料藥制成。經(jīng)臨床療效及實驗室藥效學的研究，本發(fā)明藥物具有極強的特異性的破壞人乳頭瘤病毒的功能，能有效清除體內(nèi)人乳頭瘤病毒。
文檔編號A61P31/20GK1861105SQ200510068289
公開日2006年11月15日 申請日期2005年5月9日 優(yōu)先權日2005年5月9日
發(fā)明者蔡有齡 申請人:蔡有齡