專利名稱：一種用于防治腦缺血再灌注損傷的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥配制品，具體地說是一種用于制備防治腦缺血再灌注損傷的藥物組合物。
背景技術(shù)：
缺血性腦血管病是發(fā)生在腦部血管，因顱內(nèi)血液循環(huán)障礙而造成腦組織損害的一種疾病。缺血性腦血管病的本質(zhì)是由于腦血管受阻，使局部組織血流下降或中止，導(dǎo)致細(xì)胞功能的障礙或(及)形態(tài)的破壞。再灌注則是指被阻的血管再通或周圍側(cè)支循環(huán)開放，使缺血組織部分或全部恢復(fù)血液供應(yīng)。而再灌注損傷則是指因缺血組織恢復(fù)血流供應(yīng)后，反而引起該組織原有病變的加重。許多研究報(bào)道認(rèn)為，不管是腦缺血多長時(shí)間后再灌注多長時(shí)間均可引起缺血的腦組織損傷加重，且這些加重幾乎與所有的相關(guān)因素有關(guān)①在生物化學(xué)方面，其可導(dǎo)致眾多的相關(guān)生化物質(zhì)改變，如神經(jīng)介質(zhì)紊亂、代謝產(chǎn)物過多、血栓素增多及血栓環(huán)素減少、各種活性神經(jīng)肽紊亂、細(xì)胞內(nèi)鈣離子升高、興奮性氨基酸增多及抑制性氨基酸減少、細(xì)胞因子的改變、炎性因子的增高等。②在分子生物學(xué)方面，其可導(dǎo)致許多相關(guān)基因的變化，如缺血區(qū)及其周圍出現(xiàn)大量的凋亡細(xì)胞，凋亡因子明顯升高，凋亡相關(guān)的各種基因上調(diào)等。③在形態(tài)學(xué)方面，其可使缺血腦組織細(xì)胞壞變加重、水腫明顯、梗死面積加大等?？梢哉f，大多數(shù)的研究論文報(bào)道均提示在缺血再灌注后，與神經(jīng)細(xì)胞損害相關(guān)的因子均增多，而具有神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的因子則降低。故目前臨床急需具有改善缺血腦組織再灌注損傷的藥物，以防治缺血再灌注引起的損傷，特別是有效防治因臨床積極治療下出現(xiàn)的醫(yī)源性腦缺血再灌注損傷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種可防治腦缺血再灌注損傷的藥物組合物。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明是由以下重量配比的原料制成的
人參3-10份，當(dāng)歸10-50份，積雪草9-30份，銀杏葉9-30份。
本發(fā)明選用的人參為五加料植物人參的干燥根莖，其性味甘微苦，入脾肺經(jīng)，具有大補(bǔ)元?dú)?、益氣生津、寧神益智的功效。?dāng)歸為傘形科當(dāng)歸屬植物，其功能為補(bǔ)血和血，潤燥滑腸，破瘀生新，止痛調(diào)經(jīng)。臨床常用于治療血虛頭痛腰痛、虛癆寒熱、大便枯結(jié)、屢痹、金瘡瘀血、痛疽腫痛及婦女血癥等病癥。積雪草為傘形科植物積雪草的干燥全草。臨床常用于清熱利濕，解毒消腫。用于濕熱黃疸，中暑腹瀉，砂淋血淋，癰腫瘡毒，跌撲損傷。銀杏葉為銀杏科植物銀杏的干燥葉。其性味甘、苦、澀，平。臨床常用于斂肺，平喘，活血化瘀，止痛?，F(xiàn)代科學(xué)研究表明，其具有一定的改善血管系統(tǒng)功能、消除缺血區(qū)大腦自由基的形成、抑制細(xì)胞過氧化反應(yīng)、保護(hù)機(jī)體組織和血管不受自由基傷害、提高和改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)、保護(hù)腦組織等作用。但其單獨(dú)使用效果較差。
本發(fā)明將上述四味中草藥伍用，產(chǎn)生了良好的協(xié)同作用，可有效改善腦缺血再灌注損傷所致神經(jīng)缺損，減少腦梗死范圍，降低腦指數(shù)和腦含水量，增加血清超氧歧化酶活性，降低MDA含量，降低血清ET、TXB2濃度，增加6-KetoPGFIa濃度。
本發(fā)明可用于制備防治腦缺血再灌注損傷的各種制劑。
本發(fā)明藥物可采用中藥制劑的常規(guī)制備方法制備成任何常規(guī)內(nèi)服制劑。但所有這些劑型的選擇，不能用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明藥物的活性組分可以加入制備不同劑型時(shí)所需的各種常規(guī)輔料，如崩解劑、潤滑劑、粘合劑等等，以常規(guī)的中藥制劑方法制成任何一種口服劑型，如丸劑、散劑、膠囊劑、口服液。
本發(fā)明藥物的臨床用量，可遵醫(yī)囑。
通常情況下，用于預(yù)防腦缺血再灌注損傷如服用膠囊(0.55g/粒)，每次2粒，每日2次。用于治療腦缺血再灌注損傷，如服用膠囊(0.55g/粒)，每次2--5粒，每日3次。
本發(fā)明的優(yōu)選配方為
人參3-6份，當(dāng)歸10-30份，積雪草12-18份，銀杏葉12-18份。
本發(fā)明制備成膠囊劑的優(yōu)選方法為按配比量稱取人參、當(dāng)歸、銀杏葉、積雪草。
將人參加入8倍量45％乙醇，浸泡提取3次，每次3小時(shí)，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.10，加入55％乙醇，進(jìn)行醇沉，回收乙醇，濃縮成清膏。
將積雪草、當(dāng)歸、銀杏葉加入10倍量60％乙醇，醇提三次，每次1小時(shí)，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.10，加入75％乙醇進(jìn)行醇沉，回收乙醇，加入4倍量水沉，離心分離，濃縮為相對(duì)密度1.20的清膏。將上述清膏混勻后，干燥、粉碎裝入膠囊。
本發(fā)明藥物(以下簡稱HLD)所具有的作用，通過下述試驗(yàn)得到了證實(shí)。
HLD對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用材料與方法1儀器全自動(dòng)生化分析儀(TBA-120FR，日本)，液閃計(jì)數(shù)器(Wallac，發(fā)瑪西亞)。
2試劑與藥物內(nèi)皮素(ET)、血栓素B2(TxB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-KetoPGF1α)放免藥盒購于北京福瑞生物工程公司，紅四氮唑購于天津聯(lián)星生物技術(shù)公司。超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)試劑盒購于南京建成生物試劑公司。
HLD神威藥業(yè)有限公司提供，0.55g/粒。
銀杏葉片深圳市海王生物工程股份有限公司批號(hào)0412105，每片含銀杏葉提取物40mg。
給藥量A組口服HLD膠囊0.594g/kg/日B組口服HLD膠囊0.297g/kg/日銀杏葉組口服銀杏葉片21.6mg/kg/日3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，購于北京維通利華公司，SPF級(jí)，雄性，體重240-260g。合格證號(hào)SCX(京)2002-0003。
4實(shí)驗(yàn)分組
HLD(A)、(B)劑量組，銀杏葉組，模型組，假手術(shù)組和正常組。每組20只。
5大鼠腦缺血再灌注模型的復(fù)制參照文獻(xiàn)方法復(fù)制大腦缺血再灌注模型[1]，大鼠10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉，仰臥固定在手術(shù)臺(tái)上，頸部正中切口，分出左側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)及頸外動(dòng)脈(ECA)，電凝切斷ECA的上甲狀腺動(dòng)脈和枕動(dòng)脈分支，用6-0絲線結(jié)扎ECA遠(yuǎn)心端，然后用微血管夾夾閉ECA的起始處，再用6-0絲線穿過ECA松松地打半結(jié)，靠近遠(yuǎn)端結(jié)扎處剪斷ECA。取一根長5-6cm的4-0的單絲尼龍線.，直徑0.23mm，絲線外涂多聚賴氨酸，并在栓線插入端5mm處涂敷石蠟，涂蠟端直徑0.3mm。將絲線置入ECA，扎緊ECA上的絲線避免出血，去掉血管夾，將絲線由ECA導(dǎo)入頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)，將絲線插進(jìn)顱腔，感到阻力時(shí)，從ICA起始處算起，一般插入長度為19～20mm。MCA起始處即被阻斷，結(jié)扎ECA殘端，縫合切口，引出尼龍線于皮膚切口外，以便拔出恢復(fù)血流時(shí)使用。1.5h后，重新打開切口，拔出絲線，完成了血流再灌注，結(jié)扎ECA殘端，縫合切口。缺血模型動(dòng)物清醒后具備同側(cè)Horner氏征，提尾時(shí)左前肢屈曲內(nèi)收者方列為研究對(duì)象，排除有蛛網(wǎng)膜下腔出血者。
6指標(biāo)檢測6.1神經(jīng)功能缺失征象的評(píng)定于復(fù)制模型后二次給藥后1h，進(jìn)行神經(jīng)功能缺失征象的評(píng)定[2]采用臨床神經(jīng)功能評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)觀察藥物對(duì)缺血大鼠神經(jīng)功能缺失征象的影響。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)無神經(jīng)功能缺損，肢體活動(dòng)正常；1級(jí)神經(jīng)功能輕度局灶性損傷，不能伸展左前肢；2級(jí)神經(jīng)功能中度局灶性損傷，向左側(cè)劃圈；3級(jí)神經(jīng)功能重度局灶性損傷，向左側(cè)傾倒；4級(jí)神經(jīng)功能極重度局灶性損傷，無自主行走及意識(shí)障礙。
6.2腦梗死范圍于復(fù)制模型四次給藥后1h，各實(shí)驗(yàn)組部分大鼠(n＝10)迅速斷頭取腦，切去額極后，稱重，間隔2mm連續(xù)作6個(gè)腦冠狀切片，立即置切塊于37℃ 1％TTC磷酸鹽緩沖液中避光恒溫孵育5-10min，可見正常組織染色呈紅色，壞死組織呈白色。小心分離白色區(qū)，稱重，為梗死區(qū)重量，計(jì)算梗死區(qū)占左腦及全腦的百分比。
6.3腦指數(shù)及腦含水量于復(fù)制模型四次給藥后1h，各實(shí)驗(yàn)組部分大鼠(n＝10)迅速斷頭取腦，切去額極后，稱重，然后放置烤箱(110℃)中烤干后再稱重。最后計(jì)算出腦指數(shù)和腦含水量。腦指數(shù)＝腦濕重×100/體重，腦組織含水量＝(腦濕重-腦干重)×100％。
6.4血清生化指標(biāo)檢測于復(fù)制模型四次給藥后1h，各實(shí)驗(yàn)組大鼠球后靜脈叢取血，全自動(dòng)生化分析儀參照試劑盒說明書檢測血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量；液閃計(jì)數(shù)器參照試劑盒說明書檢測內(nèi)皮素(ET)、血栓素B2(TxB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-KetoPGF1α)。
7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，進(jìn)行方差分析，F(xiàn)檢驗(yàn)，組間比較，q檢驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果1 HLD對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能缺失征象的影響假手術(shù)組大鼠肢體活動(dòng)自如，無神經(jīng)功能缺失。單純?nèi)毖M缺血90min再灌24h組中，5只鼠行走時(shí)向左側(cè)劃圈；4只行走時(shí)向左側(cè)傾倒；1只出現(xiàn)意識(shí)障礙。HLD(A)劑量組于相同時(shí)間點(diǎn)只有3只鼠不能伸展左前肢，其余大鼠無明顯神經(jīng)功能缺損。HLD(B)劑量組于相同時(shí)間點(diǎn)1只行走時(shí)向左側(cè)劃圈，3只鼠不能伸展左前肢，其余大鼠無明顯神經(jīng)功能缺損。表明HLD能明顯減輕腦缺血再灌注損傷所致的神經(jīng)功能缺損，具有腦保護(hù)作用。
銀杏葉組于相同時(shí)間點(diǎn)2只行走時(shí)向左側(cè)劃圈，4只鼠不能伸展左前肢，其余大鼠無明顯神經(jīng)功能缺損。
2 HLD對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠腦梗死范圍的影響表1HLD對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠腦梗死范圍的影響


與模型組相比，*P＜0.05 **P＜0.01與銀杏葉組相比ΔP＜0.05由表1可見，HLD(A)、(B)劑量組能夠明顯減小實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠腦梗死范圍，與模型組和銀杏葉組相比，有顯著性差異(P＜0.05)。
3 HLD對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠指數(shù)及腦含水量的影響表2HLD對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠腦指數(shù)及腦含水量的影響

與模型組相比，*P＜0.05 **P＜0.01與銀杏葉組相比ΔP＜0.05由表2可見，HLD(A)、(B)劑量組能夠明顯降低實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠腦指數(shù)和腦含水量，與模型組相和銀杏葉組比，有顯著性差異(P＜0.05)。
腦組織水含量測定為反映腦水腫的主要指標(biāo)，腦含水量的高低直接反應(yīng)腦水腫的嚴(yán)重程度，同時(shí)也反映腦細(xì)胞的損傷程度。本實(shí)驗(yàn)中觀察到，大鼠在阻斷其血流后，由于腦組織嚴(yán)重的缺血缺氧，微循環(huán)障礙，最終導(dǎo)致腦組織的嚴(yán)重缺血性水腫，模型組表現(xiàn)為腦含水量的增加，而HLD組能減少缺血再灌注后造成的腦水腫，與假手術(shù)組比較，模型組出現(xiàn)嚴(yán)重的神經(jīng)元壞死，細(xì)胞間質(zhì)水腫，HLD組一定程度上減輕了腦水腫及神經(jīng)元壞死，而銀杏葉組只有輕度的改善。
4 HLD對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠氧化損傷的影響表3HLD對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠SOD、MDA的影響

與模型組相比，*P＜0.05 **P＜0.01與銀杏葉組相比ΔP＜0.05近年研究證實(shí)自由基連鎖反應(yīng)是腦梗塞的核心病理環(huán)節(jié)，缺血后血液再灌流可使自由基連鎖反應(yīng)激化，缺血損傷加重，造成嚴(yán)重的遲發(fā)性神經(jīng)功能損害。
SOD是一種金屬酶，是體內(nèi)主要的自由基清除劑，在機(jī)體內(nèi)有CuZnSOD和MnSOD，F(xiàn)eSOD三種形式。此酶可催化超氧自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，生成過氧化氫和氧，超氧自由基的產(chǎn)生是其他自由基產(chǎn)生和增殖的關(guān)鍵。SOD能夠清除氧自由基，保護(hù)生物體免受自由基的攻擊傷害。各種氧自由基能攻擊生物膜中的多價(jià)不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，并因此形成脂質(zhì)過氧化物。MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物。故組織MDA水平間接反映了組織受自由基損傷程度。
由表3可見，HLD(A)、(B)劑量組能夠明顯增加實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠血清SOD活性，降低MDA含量。
本實(shí)驗(yàn)顯示，HLD對(duì)缺血再灌注大鼠有明顯的抗脂質(zhì)過氧化損傷，降低MDA含量，提高腦組織SOD的活性的作用，與模型組相比，有顯著性差異(P＜0.05-0.01)。
5 HLD對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響表4HLD對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦缺血再灌注大鼠ET、TxB2、6-KetoPGF1α的影響

與模型組相比，*P＜0.05 **P＜0.01與銀杏葉組相比ΔP＜0.05由表4可見，HLD(A)、(B)劑量組能夠明顯降低血清ET、TxB2濃度，增加6-KetoPGF1α濃度(P＜0.05-0.01)。
綜上所述本發(fā)明能明顯減輕腦缺血再灌注損傷所致的神經(jīng)功能缺損，減小腦梗死范圍，降低腦指數(shù)和腦含水量，增加血清SOD活性，降低MDA含量，降低血清ET、TxB2濃度，增加6-KetoPGF1α濃度。對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷具有明顯的保護(hù)作用。
實(shí)施例實(shí)施例1本發(fā)明藥物的膠囊制劑稱取人參3kg、當(dāng)歸10kg、銀杏葉30kg、積雪草30kg。
將人參加入8倍量45％乙醇，浸泡提取3次，每次3小時(shí)，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.10，加入55％乙醇，進(jìn)行醇沉，回收乙醇，濃縮成清膏。
將積雪草、當(dāng)歸、銀杏葉加入10倍量60％乙醇，醇提三次，每次1小時(shí)，回收乙醇，濃縮至清膏相對(duì)密度為1.10，加入75％乙醇進(jìn)行醇沉，回收乙醇，加入4倍量水沉，離心分離，濃縮至清膏相對(duì)密度為1.20。將上述清膏混勻后，干燥、粉碎裝入膠囊。每粒含生藥2.1g。
實(shí)施例2本發(fā)明藥物的片劑制劑稱取人參5kg、當(dāng)歸50kg、銀杏葉20kg、積雪草30kg。
將人參加入8倍量45％乙醇，浸泡提取3次，每次3小時(shí)，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.10，加入55％乙醇，進(jìn)行醇沉，回收乙醇，濃縮成清膏。
將積雪草、當(dāng)歸、銀杏葉加入10倍量60％乙醇，醇提三次，每次1小時(shí)，回收乙醇，濃縮至清膏相對(duì)密度為1.10，加入75％乙醇進(jìn)行醇沉，回收乙醇，加入4倍量水沉，離心分離，濃縮至清膏相對(duì)密度為1.20。
將所制清膏加入輔料、混勻制粒，壓成片劑。每片含生藥2.1g。
實(shí)施例3本發(fā)明藥物的口服液制劑稱取人參10kg、當(dāng)歸30kg、銀杏葉30kg、積雪草30kg。
將人參加入8倍量45％乙醇，浸泡提取3次，每次3小時(shí)，回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.10，加入75％乙醇，進(jìn)行醇沉，回收乙醇，濃縮成清膏。
將積雪草、當(dāng)歸、銀杏葉加入10倍量60％乙醇，醇提三次，每次1小時(shí)，回收乙醇，濃縮至清膏相對(duì)密度為1.10，加入75％乙醇進(jìn)行醇沉，回收乙醇，加入4倍量水沉，離心分離，濃縮至清膏相對(duì)密度為1.20。
將所制清膏加蒸餾水溶解，過濾，灌裝。每100ml含生藥42g。
實(shí)施例4-6 上述實(shí)施例只是藥物組分的用量配比有所不同，其可按照常規(guī)制劑方法制成各種劑型，且其均具有本發(fā)明所述效果。
權(quán)利要求
1.一種用于腦缺血再灌注損傷的藥物組合物，其特征在于它是由以下重量配比的原料制成的人參3-10份，當(dāng)歸10-50份，積雪草9-30份，銀杏葉9-30份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于腦缺血再灌注損傷的藥物組合物，其特征在于它是由以下重量配比的原料制成的人參3-6份，當(dāng)歸10-30份，積雪草12-18份，銀杏葉12-18份。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種可防治腦缺血再灌注損傷的藥物組合物。它由以下重量配比的原料制成的人參3－10份，當(dāng)歸10－50份，積雪草9－30份，銀杏葉9－30份。本發(fā)明將上述四味中草藥伍用，產(chǎn)生了良好的協(xié)同作用，可有效改善腦缺血再灌注損傷所致神經(jīng)缺損，減少腦梗死范圍，降低腦指數(shù)和腦含水量，增加血清超氧歧化酶活性，降低MDA含量，降低血清ET、T
文檔編號(hào)A61P9/10GK1799566SQ20051001292
公開日2006年7月12日 申請(qǐng)日期2005年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月20日
發(fā)明者李振江, 張瑞國, 黃懷鵬, 朱迎奎, 趙成安 申請(qǐng)人:神威藥業(yè)有限公司