專利名稱：膠原產(chǎn)生增強劑及其制造方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到新的膠原產(chǎn)生增強劑、更詳細(xì)講涉及到作為有效成分含有L-抗壞血酸和/或其類似物(以下、只要沒有特別說明，稱為“L-抗壞血酸類”)和脂肪酸類的膠原產(chǎn)生增強劑及其制造方法和用途。
背景技術(shù)：
本申請人在特開2002-201883號公報中，公布了作為生物體中的膠原產(chǎn)生增強劑，即作為有效成分含有L-抗壞血酸類和蜂王漿類的膠原產(chǎn)生增強劑。該膠原產(chǎn)生增強劑通過蜂王漿類增強L-抗壞血酸類的膠原產(chǎn)生誘導(dǎo)能力。
然而，雖然使蜂王漿類相對于L-抗壞血酸類的混合比例增加，上述膠原產(chǎn)生增強劑起到的膠原產(chǎn)生增強作用有增大的傾向，但存在著高價的蜂王漿類用的越多，最終制品膠原產(chǎn)生增強劑價格越高的缺點。另外，上述膠原產(chǎn)生增強劑所起的膠原產(chǎn)生增強作用由于混合的蜂王漿類的來源、其制備方法不同而有顯著變化，所以還存在著其品質(zhì)管理難的缺點。
在這樣的狀況下，渴望確立能夠廉價提供工業(yè)上確實而且穩(wěn)定地增強L-抗壞血酸類的膠原產(chǎn)生增強作用的膠原產(chǎn)生增強劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是借鑒以往技術(shù)而完成的發(fā)明，目的在于提供確實而且穩(wěn)定地增強L-抗壞血酸類的膠原產(chǎn)生增強作用的新的手段及其用途。
本發(fā)明人等為了解決上述課題，以在鮮蜂王漿類中含有的特定成分增強L-抗壞血酸類的膠原產(chǎn)生誘導(dǎo)能力的前提為基礎(chǔ)，進(jìn)行了為闡明其成分究竟是何物的深入研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)鮮蜂王漿類中存在的10-羥基-2-癸烯酸(以下、稱為“10-HDA”。)是其中的一個成分。發(fā)現(xiàn)如果將該10-HDA與L-抗壞血酸按規(guī)定比例并用，L-抗壞血酸類的膠原產(chǎn)生增強作用被確實而且穩(wěn)定地增強了。另外發(fā)現(xiàn)與L-抗壞血酸同樣，在將其它的L-抗壞血酸類與10-HDA以外的其它脂肪酸類應(yīng)用于包括人在內(nèi)的動物時也起到所能期望的效果。本發(fā)明人等進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)將L-抗壞血酸類與脂肪酸類并用時，也發(fā)揮了生物體內(nèi)的TGF-β產(chǎn)生增強作用。
即，本發(fā)明者等確立作為有效成分含有L-抗壞血酸類和脂肪酸類的膠原產(chǎn)生增強劑及其制造方法和用途之后，完成了本發(fā)明。
附圖的簡要說明

圖1圖1是表示在AA2G(L-抗壞血酸2-葡糖苷)和/或10-HDA存在下或不存在下，培養(yǎng)NHDF細(xì)胞時的膠原產(chǎn)生量的圖。
圖2圖2是表示在AA2G(L-抗壞血酸2-葡糖苷)和各種濃度的10-HDA存在下，培養(yǎng)NHDF細(xì)胞時的膠原產(chǎn)生量的圖。
圖3圖3是表示在AA2G(L-抗壞血酸2-葡糖苷)和10-羥基-2-癸烯酸(10-HDA)、10-羥基癸酸(10H癸酸)、癸酸、2-癸烯酸、或癸二酸存在下培養(yǎng)NHDF細(xì)胞時的膠原產(chǎn)生量的圖。
圖4圖4是表示在L-抗壞血酸或AA2G(L-抗壞血酸2-葡糖苷)與10-HDA存在下培養(yǎng)NHDF細(xì)胞時的膠原產(chǎn)生量的圖。
具體實施例方式
本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑是作為有效成分含有L-抗壞血酸類和脂肪酸類的能夠確實而且穩(wěn)定地增強生物體的皮膚的膠原產(chǎn)生的組合物。
本發(fā)明中所說的L-抗壞血酸類指的是應(yīng)用于包括人在內(nèi)的動物時，誘導(dǎo)膠原產(chǎn)生的L-抗壞血酸以及以它的鹽類為代表的所有類似物。具體來說，作為L-抗壞血酸的鹽類，例如L-抗壞血酸的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、銨鹽、烷基銨鹽、L-抗壞血酸磷酸鹽、L-抗壞血酸硫酸鹽等L-抗壞血酸的無機(jī)鹽等。作為L-抗壞血酸的其它類似物，如L-抗壞血酸的前體、L-抗壞血酸2-葡糖苷、L-抗壞血酸2-糖苷等L-抗壞血酸的糖衍生物、L-抗壞血酸2-葡糖苷的?；苌铩-抗壞血酸2-糖苷的?；苌?、以及DL-α-生育酚2-L-抗壞血酸磷酸二酯、L-抗壞血酸2-磷酸等L-抗壞血酸的有機(jī)鹽、無機(jī)鹽以及酯等。在本發(fā)明中，可以適當(dāng)組合其中的1種或大于等于2種使用。上述的L-抗壞血酸類中L-抗壞血酸2-葡糖苷成或以L-抗壞血酸2-糖苷為代表的L-抗壞血酸的糖衍生物由于膠原產(chǎn)生誘導(dǎo)能力、安全性、穩(wěn)定性優(yōu)良，所以最適合在本發(fā)明中使用。
在將本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑應(yīng)用于具有L-抗壞血酸合成能力的動物時，作為L-抗壞血酸類，或與L-抗壞血酸類一起，可使用L-抗壞血酸的前體L-古洛糖酸-γ-內(nèi)酯。
在本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑中混合的L-抗壞血酸類的混合量可以根據(jù)該膠原產(chǎn)生增強劑的形態(tài)、給予量、給予途徑、給予頻率、給予期間而變動，通常，相對于總組合物質(zhì)量按L-抗壞血酸質(zhì)量換算，在大于等于0.01質(zhì)量％、優(yōu)選0.1至99質(zhì)量％、更優(yōu)選1至99質(zhì)量％、更優(yōu)選5至99質(zhì)量％的范圍內(nèi)使用L-抗壞血酸類。當(dāng)本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑中混合的L-抗壞血酸類的量低于上述下限時，不會獲得所期望的作用效果。而本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑中混合的L-抗壞血酸類量的上限應(yīng)當(dāng)考慮由于過量攝取導(dǎo)致對生物體不好的副作用、經(jīng)濟(jì)性等之后決定。
本發(fā)明中提到的脂肪酸類指的是當(dāng)與L-抗壞血酸類并用時，發(fā)揮膠原產(chǎn)生增強作用的脂肪酸及其類似化合物。具體來說，如大于等于C3的直鏈或支鏈飽和或不飽和脂肪酸和它們的類似化合物，優(yōu)選大于等于C10直鏈或支鏈飽和或不飽和脂肪酸和它們的類似化合物，更優(yōu)選C10～C18直鏈或支鏈飽和或不飽和脂肪酸和它們的類似化合物。上述脂肪酸類中，最適合本發(fā)明中使用的是10-HDA、10-羥基癸酸、癸酸、2-癸烯酸、癸二酸、以及它們的類似化合物。而這樣的脂肪酸類在L-抗壞血酸類存在下也增強成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化生長因子的產(chǎn)生(以下稱為“TGF-β”)。由于已知TGF-β產(chǎn)生是由存在于皮膚表皮內(nèi)的角化細(xì)胞產(chǎn)生的，表明脂肪酸類與角化細(xì)胞的TGF-β產(chǎn)生機(jī)制有關(guān)。
作為在本發(fā)明中使用的脂肪酸類，只要不妨礙所期望的目的實施，并不只限定于高純度品，即使是純度比較低的商品也可以。而在本發(fā)明中，希望使用從天然物提取的，或化學(xué)合成得到的脂肪酸類以外的純化至雜質(zhì)含量少、純度大于等于50％、優(yōu)選純度大于等于80％、更優(yōu)選純度大于等于90％的高純度脂肪酸類。具體來說，如作為試劑市售的脂肪酸類。另外，作為從鮮蜂王漿等天然物制備本發(fā)明中使用的脂肪酸類的方法，如將鮮蜂王漿懸濁于水等水性溶劑，對得到的懸濁液靜置或進(jìn)行離心處理分成上清和沈淀物，向沈淀物添加從氫氧化鈉、氫氧化鉀、氨、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸銨等選擇的1種或大于等于2種的堿液，進(jìn)行溶解，將得到的溶液用從鹽酸、硝酸、硫酸、乳酸以及氯化肉毒堿等中選擇的1種或大于等于2種酸劑進(jìn)行中和，以及將該溶液通過膜分離、凝膠過濾等手段采集脂肪酸類或含有它的脂肪酸類。上述一系列操作通?？稍谑覝叵聦嵤鶕?jù)需要，進(jìn)行加熱、冷卻，在0～70℃范圍實施。這樣的脂肪酸類的分離方法作為從鮮蜂王漿分離脂肪酸類的簡便而有效的分離方法非常有用。
本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑是作為有效成分含有上述的L-抗壞血酸類和脂肪酸類的組合物，脂肪酸類由于可有效增強L-抗壞血酸類的膠原產(chǎn)生誘導(dǎo)作用，通過與L-抗壞血酸類并用，可提供多種多樣的膠原產(chǎn)生增強劑，即從單獨用L-抗壞血酸類沒有看到膠原產(chǎn)生誘導(dǎo)作用程度的含有少量L-抗壞血酸類的膠原產(chǎn)生增強劑直至只靠單獨L-抗壞血酸類不能發(fā)揮的程度的發(fā)揮高水平膠原產(chǎn)生增強作用的膠原產(chǎn)生增強劑。本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑中的L-抗壞血酸類與脂肪酸類的合適混合比例通常相對于L-抗壞血酸類1質(zhì)量份(根據(jù)L-抗壞血酸質(zhì)量換算。)在大于等于0.0001質(zhì)量份、優(yōu)選0.01乃至1質(zhì)量份、更優(yōu)選0.1乃至1質(zhì)量份的范圍混合脂肪酸類。
在本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑中，如果相對于L-抗壞血酸類混合的脂肪酸類低于上述下限，不能期望獲得期待的作用效果。另外，相對于L-抗壞血酸類混合的脂肪酸類雖然沒有上限，但應(yīng)當(dāng)從過量給予產(chǎn)生的對生物體的壞影響或經(jīng)濟(jì)的觀點考慮后設(shè)定。另外、作為有效成分的L-抗壞血酸類與脂肪酸類的混合量通?？梢栽趯Ρ景l(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑形態(tài)、給予量、給予頻率、給予期間、以及給予的生物體、例如、包括人在內(nèi)的動物的性別、年齡、體重、身體狀況等調(diào)研之后通常設(shè)定為比較低。
另外、L-抗壞血酸類與脂肪酸類并用導(dǎo)致的膠原產(chǎn)生增強作用可以通過下面實驗2所示的使用人成纖維細(xì)胞的膠原產(chǎn)生量測定法進(jìn)行研究。
本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑實質(zhì)上指的是在含有作為有效成分的L-抗壞血酸類與脂肪酸類的組合物、或在這樣的組合物中根據(jù)需要混合從飲食品、健康食品、特殊用途食品、化妝品、藥品、準(zhǔn)藥品、飼料、餌料、或?qū)櫸锸称酚貌牧线x擇的1種或大于等于2種其它成分構(gòu)成的所有組合物。作為上述其它成分，可舉出抗氧化劑、增粘劑、穩(wěn)定劑、賦形劑、增量劑、pH調(diào)節(jié)劑、增粘劑、酸味劑、提取物類、糖類、糖醇類、氨基酸類、L-抗壞血酸類以外的維生素類(例如、維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素E、維生素P(包括蕓香甙、柚苷、桔皮苷等)、水、醇、淀粉質(zhì)、蛋白質(zhì)、纖維質(zhì)、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、著香料、著色料、甜味料、調(diào)味料、香辛料、防腐劑、乳化劑、以及表面活性劑、還有軟骨素、硫酸軟骨素、硫酸皮質(zhì)素、肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸角質(zhì)素、透明質(zhì)酸、以及aluronic acid的鹽類等葡糖胺聚糖等。
上述其它成分中，抗氧化劑是為了抑制本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑含有的有效成分的氧化分解的目的混合的。具體例子如類黃酮類、多酚等。在本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑中混合的抗氧化劑的混合量沒有特別限制，對于該膠原產(chǎn)生增強劑為口服攝取方式的制劑時，這些抗氧化劑可按照食品領(lǐng)域中通常使用的混合比例使用，優(yōu)選以比該比例低的量使用。
另外，上述其它成分中，作為糖類可舉出葡萄糖、果糖、乳糖、海藻糖、麥芽糖、蔗糖、乳蔗糖、糖稀水飴等糖類、α-、β-以及γ-環(huán)糊精、具有環(huán){→6)-α-D-吡喃葡糖基-(1→3)-α-D-吡喃葡糖基-(1→6)-α-D-吡喃葡糖基-(1→3)-α-D-吡喃葡糖基-(1→}結(jié)構(gòu)的環(huán)狀四糖等糖類、赤蘚糖醇、甘露醇、山梨糖醇、木糖醇、麥芽糖醇、還原水飴等糖醇類、阿斯巴甜、甜葉菊提取物、三氯蔗糖(Sucralose)、乙酰氨基磺酸鉀(acesulfame K)、糖精等高甜味度甜味料、芽霉多糖(pullulan)、痂囊腔菌聚糖(elsinan)、角叉菜膠、呫噸膠、愈瘡膠、結(jié)冷膠(gellan gum)、羅望子膠等多糖類和天然膠類、羧甲基纖維素等合成增粘劑等。這些糖類在目的是賦予本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑甜味、味道改善、固狀化、穩(wěn)定化等可有利利用。
另外，上述其它成分中、提取物類，例如來自特開平10-203952號公報公布的山毛櫸科(the family Faguceae)山毛櫸屬的樹的芽的提取物等、包括具有膠原產(chǎn)生增強作用成分的銀杏提取物、松樹提取物、矮竹提取物、梅子提取物、paffia提取物、紫蘇提取物、蓼籃提取物(indigo extract)、牡蠣提取物等提取物類。
作為這樣得到的本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑的形態(tài)，可例舉液狀、糖漿狀、糊狀、片狀、粉末狀、顆粒狀、固態(tài)狀、球粒狀、膠囊狀等形態(tài)。
將本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑以口服、非口服(例如、透皮)方式應(yīng)用于包括人在內(nèi)的動物時，有效成分被生物體吸收，增強存在于真皮、臟器等的成纖維細(xì)胞的膠原產(chǎn)生。通過將本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑連日或隔日應(yīng)用于生物體，使生物體中膠原持續(xù)產(chǎn)生，不用說對于維持健康的皮膚狀態(tài)是有效的，而且可以提高伴隨年齡增加的皮膚老化以及受到紫外線等其它外在要因引起的損傷的皮膚組織的膠原產(chǎn)生能力，使皮膚恢復(fù)到正常的狀態(tài)。結(jié)果表明可賦予肌(皮膚)彈性與潤滑，改善或消除小皺紋等褶皺。另外對于小皺紋等褶皺的預(yù)防也有用。
將本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑口服應(yīng)用時，雖然因作為對象的包括人在內(nèi)的動物(包括寵物、家畜、家禽、魚類)的種類、健康狀態(tài)、年齡、性別/雌雄有差異，但作為該膠原產(chǎn)生增強劑中含有的L-抗壞血酸類的給予量(根據(jù)L-抗壞血酸質(zhì)量換算)，每公斤體重，通常定為0.1至500mg、優(yōu)選1至500mg、更優(yōu)選1至250mg的范圍。另外，作為本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑中含有的脂肪酸類的給予量，按質(zhì)量計，相對于L-抗壞血酸類1質(zhì)量份(根據(jù)L-抗壞血酸質(zhì)量換算)，在大于等于0.0001質(zhì)量份、優(yōu)選0.01至1質(zhì)量份、更優(yōu)選0.1至1質(zhì)量份的范圍內(nèi)混合脂肪酸類。本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑的給予頻率按照1至數(shù)次/日的比例，根據(jù)作用效果的程度、生物體狀態(tài)可連日或設(shè)置大于等于1日的間隔使用。
另外，雖然通過非口服方式給予本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑時，可以根據(jù)作為對象的包括人在內(nèi)的動物(包括寵物、家畜、家禽、魚類)的種類、健康狀態(tài)、年齡、性別/雌雄而有所差異，但作為該膠原產(chǎn)生增強劑中含有的L-抗壞血酸類給予量(按L-抗壞血酸質(zhì)量換算)，每公斤體重，通常為0.1至500mg、優(yōu)選1至500mg、更優(yōu)選1至250mg范圍。而作為本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑中的脂肪酸類給予量，按質(zhì)量，相對于1質(zhì)量份L-抗壞血酸類(按L-抗壞血酸質(zhì)量換算)，在大于等于0.0001質(zhì)量份、優(yōu)選0.01至1質(zhì)量份、更優(yōu)選0.1至1質(zhì)量份范圍內(nèi)混合脂肪酸類。本發(fā)明膠原產(chǎn)生增強劑的給予頻率按照1至數(shù)次/日的比例，可以根據(jù)作用效果的程度、生物體的狀態(tài)連日或大于等于隔1日使用。
為了制造含有本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑的組合物，可以根據(jù)目標(biāo)膠原產(chǎn)生增強劑的用途，混合L-抗壞血酸類以及脂肪酸類，以及根據(jù)需要，適量混合上述提到的飲食品、健康食品、特殊用途食品、化妝品、藥品、準(zhǔn)藥品、飼料、餌料、或?qū)櫸锸称酚貌牧系?種或大于等于2種的成分，通過常規(guī)方法加工成所希望的形式之后做成各種形式的組合物。只要是能夠按規(guī)定比例混合L-抗壞血酸類和脂肪酸類，混合其它成分的順序、時期沒有限制。作為本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑，為了得到固態(tài)形態(tài)的制劑，可以將在本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑中混合的有效成分和其它適宜成分混合后運用減壓干燥、真空干燥、溫風(fēng)干燥等通常干燥方法。作為干燥方法，例如當(dāng)使用本申請人在特開平6-170221號公報中公布的無水α，α-海藻糖時，不經(jīng)過采用加熱的干燥工序就可以很容易得到固態(tài)膠原產(chǎn)生增強劑。具體來說，可例舉添加與L-抗壞血酸類和脂肪酸類的合計質(zhì)量大于等于等量的無水α，α-海藻糖等無水糖類，混合后，通常于小于等于常溫進(jìn)行靜置或攪拌，做成固態(tài)物的方法。對于采用該方法的場合，由于不需要加熱，所以具有可以避免對熱不穩(wěn)定的L-抗壞血酸類熱失活的優(yōu)點。作為無水糖類，除了上述無水α，α-海藻糖之外，也可以適當(dāng)組合使用1種或大于等于2種無水α，β-海藻糖、無水葡萄糖、以及無水麥芽糖等后使用。
這樣得到的固態(tài)狀的本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑根據(jù)需要，再進(jìn)行粉碎、造粒、壓片，可以隨意做成粉劑、顆粒劑、片劑、丸(粒)劑。
作為混合了本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑的飲食品、健康食品、特殊用途食品，例如、冰淇淋、冰點、cho icecream、雪糕(sherbet)等冰果，冰蜜等糖漿，加糖奶油漿、乳蛋糕乳脂、花醬、花生醬、果醬等糊和醬，巧克力、果子凍、木斯、糖果、uiro(asweet rice jelly)、焦糖、口香糖、果凍、約克夏布丁、奶油泡夫、松糕、蛋糕等洋點心，果子醬、橘子果醬、糖漿、糖果等加工果實或加工野菜、豆沙包、面條、餡、羊羹、水羊羹、蛋糕、糖球、米果(包括焼き菓子)等日本點心，醬油、粉末醬油、醬、粉末醬、蛋黃醬、調(diào)料、食用醋、三杯醋、餐用糖、咖啡用糖等調(diào)味料，合成酒、釀造酒、發(fā)泡酒、燒酒、果酒、洋酒等酒類，橙汁、礦物質(zhì)飲料、碳酸飲料、乳酸飲料、乳酸菌飲料、運動飲料、飲(drinking)劑、綠茶·紅茶·烏龍茶等茶飲料、咖啡、可可等清涼飲料、以及維生素類、礦物質(zhì)類、蛋白質(zhì)、藥用人參、梅肉提取物、松提取物、竹子提取物、銀杏提取物、蘑菇提取物、蜂王漿、蜂膠(propolis)、藥草、低熱量食品、低鹽食品、低脂肪食品、自然食品、有機(jī)食品、海洋深層水等。
作為混合了本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑的化妝品或準(zhǔn)藥品，例如、皮膚外用洗液(lotion)、雪花膏、果子凍、木斯、除臭劑、乳液、固體劑、粉末劑、牙膏、口臭抑制劑、口清洗劑、肥皂、洗手皂、沐浴劑、浴液、洗發(fā)劑、洗劑(rinse)、pack、面膜(face mask)、眼膜以及香水等基礎(chǔ)化妝品、洗滌用化妝品、入浴用化妝品、pack、口腔化妝品、防曬化妝品、止汗劑、上妝化妝品、頭發(fā)化妝品(發(fā)毛劑、育毛劑、養(yǎng)毛劑、整發(fā)劑等)等。
另外作為混合了本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑的醫(yī)藥品，可例舉、液體劑、粉劑、顆粒劑、片劑、軟膏、丸(粒)劑、片狀劑、外敷膏劑、敷布劑(wet pack)等皮膚外用劑、內(nèi)服用劑等。
另外，作為混合了本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑的飼料、餌料、寵物食品，可舉出與眾所周知的飼料、餌料、寵物食品用材料適當(dāng)混合后得到的飼料、餌料、嬌養(yǎng)動物食品等。
另外，本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑也可以通過含浸、涂布、噴霧、附著等加到廚房用洗劑、海綿刷、發(fā)帶、袖口絆帶等雜貨類、衛(wèi)生巾等生理用品、以及褲子、裙子、帽子、短襪、長襪、手帕、毛巾、浴巾、手袋、包帶、緊腰衣、鞋子、拖鞋等后使用。
為了制造上述各種組合物，在這些組合物制成之前的適當(dāng)時期內(nèi)可以混合本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑。通常、為了防止L-抗壞血酸類的熱失活，經(jīng)由加熱工序的場合，希望在該加熱工序后添加。
上述各種組合物中的本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑的混合量，每單位制品質(zhì)量通常定為大于等于0.001質(zhì)量％，優(yōu)選0.01至99質(zhì)量％，更優(yōu)選0.05至50質(zhì)量％。
如果將本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑或混合了該增強劑的各種組合物應(yīng)用于生物體，作為有效成分的L-抗壞血酸類與脂肪酸類作用于生物體內(nèi)皮膚中存在的成纖維細(xì)胞，可增強膠原產(chǎn)生。該結(jié)果可以強化皮膚、增強皮膚的生物體防御能力、防止伴隨年齡增長的皮膚老化、使受到以紫外線為代表的因子導(dǎo)致的損傷的皮膚達(dá)到正?；Ａ硗?、如果將本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑應(yīng)用于生物體，預(yù)期還有強化內(nèi)臟和血管組織的效果。
另外、本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑如上述那樣，由于可帶來對皮膚有用的作用效果，所以具有發(fā)毛·育毛·養(yǎng)毛作用。因此，如果將本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑適用于帶有體毛·羽毛的狗、貓、馬、羊、鳥類等寵物、家畜、家禽，預(yù)期有活化這些動物的肌膚或表皮組織，增進(jìn)體毛、羽毛的發(fā)育，改善毛色的效果。另外、將本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑應(yīng)用于人的頭皮等皮膚時，預(yù)期有發(fā)毛、育毛、養(yǎng)毛作用。另外，將本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑和/或含有該增強劑的組合物通過皮膚直接導(dǎo)入生物體時，例如、通過使用同一申請人提出的國際公開第WO 01/60388號公報公布的離子導(dǎo)入工具，可以有效地向皮膚導(dǎo)入該有效成分。
以下根據(jù)實驗以及實施例對本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)說明。
實驗1<來自蜂王漿的膠原產(chǎn)生增強成分的分離與鑒定>
在室溫下將巴西產(chǎn)鮮蜂王漿1g懸濁于精制水10mL中，通過3,000rpm、10分鐘離心處理，分為上清級分和沈淀級分。向上述沈淀級分中添加1N-NaOH水溶液1mL，使固態(tài)物溶解，然后，用1N-HCl水溶液進(jìn)行中和后，用精制水將全量配到10mL，使用分級分子量5,000道爾頓的UF膜分級為高分子級分和低分子級分。對于各級分運用下面的膠原分析法(以下、稱為“膠原分析法”)，研究有無膠原產(chǎn)生增強作用。結(jié)果表明沈淀級分中的低分子級分(以下、稱為“級分A”)的膠原產(chǎn)生增強作用最高。因此，嘗試對存在于級分A中的膠原產(chǎn)生增強成分進(jìn)行分離與鑒定。即、使用C18反相高效液相色譜(以下稱為“HPLC”)(柱子尺寸內(nèi)徑4.6×長250mm、充填劑硅膠上鍵合了十八碳烷基的凝膠(Biotech公司制))將級分A分為多個級分，通過膠原分析法特定膠原產(chǎn)生增強活性級分，進(jìn)行回收。在洗脫時，洗脫速度為0.5mL/分鐘，按照0.05％(w/v)三氟乙酸水溶液15分鐘、含有乙腈20％(w/v)的0.05％(w/v)三氟乙酸水溶液5分鐘洗脫柱子，再用乙腈濃度從20％(w/v)至80％(w/v)直線上升的0.05％(w/v)三氟乙酸水溶液洗脫柱子60分鐘，同時于波長210nm處監(jiān)測洗脫級分的吸收峰，回收這些吸收峰高的級分(級分B)。在波長210nm進(jìn)行監(jiān)測的理由是根據(jù)預(yù)備實驗，是級分A中含有的具有膠原產(chǎn)生增強作用成分的吸收波長。再次將級分B于上述條件下通過C18反相HPLC進(jìn)行層析，表現(xiàn)出膠原產(chǎn)生增強作用的成分(以下、稱為“成分X”)在43～44分鐘的位置洗脫下來。研究這個成分X的最大吸收波長，結(jié)果為215nm。
本發(fā)明人等在鑒定成分X時，通過HPLC分析方法，著眼于級分A中含有很多脂肪酸，這些脂肪酸中的70％是10-羥基-2-癸烯酸(10-HDA)，作為成分X的候補舉出10-HDA。從結(jié)論看，這一推定是正確的。即，本發(fā)明人等為了闡明成分X與10-HDA的異同，將市售的高純度試劑10-HDA(アス·ウエル公司制)在與上述同樣的條件下進(jìn)行C18逆相HPLC，結(jié)果10-HDA在43.8分鐘的位置洗脫下來。該洗脫位置與成分X的位置一致。另外，10-HDA在215nm有最大吸收，與成分X的一致。再將成分X和10-HDA進(jìn)行薄層硅膠層析(5×15cm)，對它們的比移值進(jìn)行比較研究，結(jié)果兩者完全一致。另外，為了研究成分X與10-HDA的異同，對于它們的膠原產(chǎn)生增強作用通過膠原分析法進(jìn)行研究，結(jié)果單獨10-HDA沒有膠原產(chǎn)生誘導(dǎo)作用，在L-抗壞血酸存在下、表現(xiàn)出增強L-抗壞血酸的膠原產(chǎn)生的作用。其結(jié)果與成分X的結(jié)果一致。
另外，通過質(zhì)量分析法(MS)測定成分X與10-HDA質(zhì)譜，進(jìn)行比較研究，結(jié)果兩者的分子離子峰(m/z)是185[M-H]-，完全一致。
由以上結(jié)果鑒定從鮮蜂王漿純化分離的成分X是10-HDA。
<膠原分析法>
將人成纖維細(xì)胞NHDF細(xì)胞(倉敷紡績株式會社銷售)按照細(xì)胞濃度達(dá)到2.5×104個/孔那樣接種到含有添加了10％(v/v)胎牛血清與適量的盤尼西林的Dulbecco改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基(株式會社日水銷售、以下、稱為“DMEM培養(yǎng)基”)(pH 7.1～7.4)的96孔微型板(BectonDickinson社銷售)，在5％(v/v)CO2條件下、于37℃下培養(yǎng)24小時。然后，將培養(yǎng)上清用添加了規(guī)定濃度樣品和/或50μM的L-抗壞血酸2-葡糖苷(商品名“AA2G”、純度大于等于98.0％、株式會社林原生物化學(xué)研究所制)的DMEM培養(yǎng)基200μL進(jìn)行交換，培養(yǎng)5日。然后，對上述微型板中的各孔的細(xì)胞的膠原產(chǎn)生量用サ-コル·膠原·分析試劑盒(ハ·イオカラ-社制)進(jìn)行定量。
實驗2<10-HDA的膠原產(chǎn)生增強作用>
通過實驗1中所示膠原分析法，就10-HDA的膠原產(chǎn)生增強作用進(jìn)行研究。即，在膠原分析法中，使用作為樣品的150μg/mL的10-HDA和/或與實驗1使用的同樣的含有AA2G50μM的DMEM培養(yǎng)基，研究由10-HDA引起的膠原產(chǎn)生增強作用。對照為使用不含有樣品的含有或不含有AA2G50μM的DMEM培養(yǎng)基的2個系統(tǒng)。結(jié)果如圖1所示。
就像圖1表明的那樣，10-HDA在沒有AA2G存在下，不表現(xiàn)出膠原產(chǎn)生增強作用。由該結(jié)果可判斷在10-HDA自身沒有膠原產(chǎn)生增強作用。另一方面，10-HDA在AA2G存在下表現(xiàn)出顯著的膠原產(chǎn)生增強作用。由該結(jié)果得出10-HDA與AA2G并用時可發(fā)揮膠原產(chǎn)生增強作用。
另外，對于10-HDA濃度與膠原產(chǎn)生增強作用的關(guān)系也進(jìn)行了研究。即，在膠原分析法中，作為樣品，使用0至300μg/mL的10-HDA以及含有AA2G50μM的DMEM培養(yǎng)基，研究10-HDA引起的膠原產(chǎn)生增強作用。作為對照為使用不含有樣品的含有AA2G50μM的DMEM培養(yǎng)基的系統(tǒng)。結(jié)果如圖2所示。
就像圖2表明的那樣，在AA2G存在下，10-HDA表現(xiàn)出濃度依賴性的膠原產(chǎn)生增強作用。
另外，作為脂肪酸類除了代替10-HDA使用10-羥基癸酸(10H癸酸)、癸酸、2-癸烯酸以及癸二酸以外，其它與上述同樣，研究它們的膠原產(chǎn)生增強作用。即，使用作為樣品含有0.02、0.06、0.17、0.5或1.5mM上述脂肪酸類任一種的含有AA2G50μM的DMEM培養(yǎng)基，研究它們的膠原產(chǎn)生增強作用。結(jié)果如圖3所示。
就像圖3表明的那樣，試驗的任一種脂肪酸類與L-抗壞血酸并用時都發(fā)揮顯著的膠原產(chǎn)生增強作用。在試驗的脂肪酸類中，10-HDA的膠原產(chǎn)生增強作用明顯高，尤其濃度為大于等于0.17mM時，其作用最大。另外判明膠原產(chǎn)生增強作用首先是10-HDA，然后依10-羥基癸酸、2-癸烯酸、癸酸、癸二酸順序，它們的作用也基本為濃度依賴性。
實驗3<10-HDA對L-抗壞血酸或AA2G存在下的膠原產(chǎn)生增強作用的影響>
為了研究10-HDA對L-抗壞血酸或AA2G的膠原產(chǎn)生增強作用的影響，進(jìn)行了下述實驗。即，在實驗1中所示的膠原分析法中，使用作為樣品含有0、0.1、0.2或0.5mg/mL的10-HDA，作為L-抗壞血酸類，含有L-抗壞血酸或按照L-抗壞血酸換算含有AA2G 50μM的DMEM培養(yǎng)基、以及作為樣品含有0、0.1、0.2或0.5mg/mL的10-HDA的不含有L-抗壞血酸類的DMEM培養(yǎng)基，對培養(yǎng)細(xì)胞中的膠原產(chǎn)生量進(jìn)行比較研究。結(jié)果如圖4所示。
就像圖4結(jié)果表明的那樣，在L-抗壞血酸或AA2G存在下，10-HDA表現(xiàn)出濃度依賴性的膠原產(chǎn)生增強作用。另外，由10-HDA引起的膠原產(chǎn)生增強作用，作為L-抗壞血酸類使用AA2G時與使用L-抗壞血酸時進(jìn)行比較，高約2倍，判明10-HDA與AA2G并用是有用的。
另外，雖然沒有給出具體的數(shù)據(jù)，但與作為L-抗壞血酸類的L-抗壞血酸的鹽類、酯類、醚類等L-抗壞血酸衍生物比較，L-抗壞血酸的糖衍生物與以10-HDA為代表的其它脂肪酸類并用時，有發(fā)揮更高的膠原產(chǎn)生增強作用的傾向。另外，L-抗壞血酸的糖衍生物中的AA2G與脂肪酸類并用時，發(fā)揮更顯著的膠原產(chǎn)生增強作用。
實驗4<脂肪酸類對人成纖維細(xì)胞中TGF-β產(chǎn)生的影響>
使用補充了10％(v/v)胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，將人成纖維細(xì)胞NHDF細(xì)胞(倉敷紡績株式會社銷售)按照細(xì)胞濃度2.5×104個/孔接種在多個96孔微型板(Becton Dickinson公司銷售)，在5％(v/v)CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。然后，除去培養(yǎng)上清后、將含有0、0.5或1.5mM的10-HDA以及含有AA2G 0.2μg/mL的新鮮DMEM培養(yǎng)基分別加到各個不同的微型板中，培養(yǎng)24小時。然后，通過“TGF-β1E酶放大免疫測定系統(tǒng)(MAX IMMUNO ASSAY SYSTEM)”(Promega公司銷售)對各微型板各孔中培養(yǎng)上清中的TGF-β量進(jìn)行定量統(tǒng)計處理。結(jié)果如表所示。
表1


注“*”、“**”和“***”分別表示p＜0.05、p＜0.05及p＜0.01。
由表1結(jié)果判明在AA2G存在下，10-HDA濃度依賴性地增強人成纖維細(xì)胞中的TGF-β產(chǎn)生。
雖然沒有給出具體的數(shù)據(jù)，但10-HDA以外的10-羥基癸酸、癸酸、2-癸烯酸以及癸二酸等脂肪酸類也與10-HDA同樣增強TGF-β產(chǎn)生。
以下，根據(jù)實施例對本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)說明。
實施例1<膠原產(chǎn)生增強劑>
將以下所示各成分按照規(guī)定混合比例均勻混合，利用常規(guī)方法壓片，制備每一片含300mg的本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑。本品適于用作包括人在內(nèi)的動物的膠原產(chǎn)生增強劑。另外，本品也具有作為TGF-β產(chǎn)生增強劑的功能。
<成分>
L-抗壞血酸2-葡糖苷20質(zhì)量份(商品名“AA2G”、株式會社林原生物化學(xué)研究所銷售)10-HDA0.1質(zhì)量份芽霉多糖 5質(zhì)量份精制水5質(zhì)量份實施例2<膠原產(chǎn)生增強劑>
將以下所示各成分按照規(guī)定混合比例均勻混合，流延到塑料制板上，于45℃下干燥過夜，裁成每邊2cm的正方形，制得厚0.5mm的薄膜狀膠原產(chǎn)生增強劑。本品日常通過口服攝取，或放置在預(yù)先涂了水或化妝水等的皮膚部位后使用的方法使用，可以有效增強皮膚的膠原產(chǎn)生，預(yù)防、改善小皺紋，賦予肌膚彈性和潤滑。
<成分>
L-抗壞血酸2-葡糖苷1質(zhì)量份(商品名“AA2G”、株式會社林原生物化學(xué)研究所銷售)10-HDA0.01質(zhì)量份無水結(jié)晶麥芽糖1質(zhì)量份(商品名“フアイソト-ス”(注冊商標(biāo))、株式會社林原商事銷售)三氯蔗糖 0.01質(zhì)量份芽霉多糖 10質(zhì)量份精制水20質(zhì)量份實施例3<膠原產(chǎn)生增強劑>
將以下所示各成分按照規(guī)定混合比例均勻混合，進(jìn)行膜過濾，填充到200mL容量活塞式噴霧容器中，得到本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑。本品通過將它適量噴霧到人或動物的皮膚使用，使在包括人在內(nèi)的動物的皮膚中膠原產(chǎn)生增強，對生毛、育毛、毛色的改善發(fā)揮顯著效果。另外，本品還具有作為TGF-β產(chǎn)生增強劑的功能。
<成分>
L-抗壞血酸2-葡糖苷20質(zhì)量份(商品名“AA2G”、株式會社林原生物化學(xué)研究所銷售)10-HDA10質(zhì)量份精制水100質(zhì)量份防腐劑1質(zhì)量份實施例4<健康食品>
將以下所示各成分按照規(guī)定混合比例均勻混合，通過常規(guī)方法于常溫下減壓干燥過夜后，用粉碎機(jī)破碎，得到作為本發(fā)明粉末狀膠原產(chǎn)生增強劑發(fā)揮功能的健康食品。本品適合用作包括人在內(nèi)的動物的膠原產(chǎn)生增強劑。另外，本品還具有作為TGF-β產(chǎn)生增強劑的功能。
<成分>
L-抗壞血酸2-葡糖苷1質(zhì)量份(商品名“AA2G”、株式會社林原生物化學(xué)研究所銷售)實驗1中精制得到的成分X(10-HDA)0.05質(zhì)量份2含水結(jié)晶海藻糖 2質(zhì)量份(商品名“トレハ”(登錄商標(biāo))、株式會社林原商事銷售)本品作為具有柔和甜味和適度酸味，長期保存穩(wěn)定性優(yōu)越、具有膠原產(chǎn)生增強作用的健康食品有用。本品由于可以直接，或通過與適量的水等溶劑一起，或使它們?nèi)芙饣蚍稚⒂谶@些溶劑來容易地攝取，所以可作為人以及寵物或家畜等動物的口服攝取或經(jīng)管給予用組合物，對于魚、兔、蝦、蟹等養(yǎng)殖魚貝類可以直接或混合在餌料等中使用。
實施例5<健康食品>
將以下所示各成分按照規(guī)定混合比例均勻混合，進(jìn)行減壓干燥，得到作為含水量5％的口服用粉末膠原產(chǎn)生增強劑發(fā)揮功能的健康食品。本品可有效用作人以及家畜、家禽、寵物(也包括昆蟲)、觀賞魚用的膠原產(chǎn)生增強劑。另外、本品還具有作為TGF-β產(chǎn)生增強劑的功能。
<成分>
L-抗壞血酸鈉 1.5質(zhì)量份L-抗壞血酸2-葡糖苷 1.0質(zhì)量份(商品名“AA2G”、株式會社林原生物化學(xué)研究所銷售)10-HDA 0.25質(zhì)量份糖轉(zhuǎn)移蕓香甙(saccharide-transferred rutin) 1.0質(zhì)量份(商品名“αGルチソ”、株式會社林原商事銷售)
無水結(jié)晶麥芽糖醇1.5質(zhì)量份海藻糖 0.2質(zhì)量份精制水 10.0質(zhì)量份實施例6<冰淇淋>
將鮮奶油(油脂含量約46質(zhì)量％)15質(zhì)量份、脫脂奶粉3質(zhì)量份、全脂奶45質(zhì)量份、海藻糖10質(zhì)量份、芽霉多糖1質(zhì)量份的混合物加熱溶解，于65℃下保持30分鐘殺菌后，通過勻漿機(jī)乳化分散，然后急冷至4℃，向其中加實施例1中得到的膠原產(chǎn)生增強劑0.5質(zhì)量份，混合后，100g一份填充到適當(dāng)容器，在-20℃冷凍，得到冰淇淋。
本品是具有膠原產(chǎn)生增強作用的適度甜味和優(yōu)質(zhì)風(fēng)味的冰淇淋，日常吃可賦予皮膚潤滑，防止皮膚老化。
實施例7<果凍(fruit jelly)>
將以下所示成分中的蔗糖、海藻糖、明膠以及水加入到適當(dāng)容器中，于95℃下加熱溶解后，加蜜柑汁后混合，在80℃下進(jìn)行30分加熱殺菌，再加L-抗壞血酸2-葡糖苷(商品名“AA2G”、株式會社林原生物化學(xué)研究所銷售)和加熱處理的蜂王漿后進(jìn)行冷卻，制造果凍。
<成分>
蔗糖10.0質(zhì)量份含水結(jié)晶海藻糖 2.0質(zhì)量份明膠2.5質(zhì)量份蜜柑汁(L-抗壞血酸含量3％) 32.0質(zhì)量份精制水 45.0質(zhì)量份L-抗壞血酸2-葡糖苷 1.0質(zhì)量份(商品名“AA2G”、株式會社林原生物化學(xué)研究所銷售)10-羥基癸酸 0.01質(zhì)量份
10-HDA 0.01質(zhì)量份本品是具有膠原產(chǎn)生增強作用、有適度甜味和可柔軟組織、保持肌膚健康狀態(tài)，防止肌膚老化，保持、增進(jìn)美容和健康的果凍。
實施例8<健康飲料>
將以下所示成分按規(guī)定比例在適當(dāng)容器中均勻混合，使得到的混合物25質(zhì)量份分散、溶解于精制水150質(zhì)量份，按一份200g裝入褐色玻璃瓶中，于65℃下進(jìn)行30分鐘加熱殺菌后得到健康飲料。
<成分>
無水結(jié)晶麥芽糖500質(zhì)量份L-抗壞血酸2-葡糖苷30質(zhì)量份(商品名“AA2G”、株式會社林原生物化學(xué)研究所銷售)L-抗壞血酸鈉 6質(zhì)量份10-HDA2質(zhì)量份10-羥基癸烯酸 1質(zhì)量份蛋黃粉末 190質(zhì)量份脫脂奶粉 200質(zhì)量份氯化鈉4.4質(zhì)量份氯化鉀1.85質(zhì)量份硫酸鎂4質(zhì)量份硫胺素0.01質(zhì)量份維生素E醋酸酯 0.6質(zhì)量份尼克酰胺 0.04質(zhì)量份糖轉(zhuǎn)移桔皮苷 0.02質(zhì)量份(“αG桔皮苷PS”、東洋精糖株式會社銷售)本品作為具有膠原產(chǎn)生增強作用的用于美容、健康的飲料，以及作為經(jīng)管給予用組合物可有利使用。
實施例9<皮膚外用雪花膏>
向由規(guī)定混合量構(gòu)成的如下所示成分1中添加成分2，于60℃下邊加熱攪拌邊進(jìn)行混合，冷卻至室溫后，加由規(guī)定混合量構(gòu)成的成分3后，用氫氧化鉀調(diào)到pH 6.5后，用勻漿機(jī)乳化、分散，制造具有膠原產(chǎn)生增強作用的皮膚外用雪花膏。
<成分1>
單硬脂酸聚氧化乙烯甘油酯2.0質(zhì)量份自乳化型單硬脂酸甘油酯 5.0質(zhì)量份山崳酸二十烷酯 1.0質(zhì)量份液體石蠟1.9質(zhì)量份三辛酸三烴甲基丙烷 10.0質(zhì)量份<成分2>
1，3-丁二醇 5.0質(zhì)量份乳酸鈉液10.0質(zhì)量份高麗人參提取物 1.5質(zhì)量份對羥基苯甲酸甲酯0.1質(zhì)量份透明質(zhì)酸鈉 0.1質(zhì)量份硫酸軟骨素 0.1質(zhì)量份甘草提取物 0.5質(zhì)量份精制水 62.4質(zhì)量份<成分3>
L-抗壞血酸2-葡糖苷 2質(zhì)量份(商品名“AA2G”、株式會社林原生物化學(xué)研究所銷售)10-HDA 0.01質(zhì)量份癸二酸 0.01質(zhì)量份本品通過來自于成纖維細(xì)胞的TGF-β產(chǎn)生誘導(dǎo)，增強皮膚中膠原產(chǎn)生，保持皮膚水嫩、賦予肌膚彈性和潤滑，防止肌膚僵硬的效果、對肌膚的保濕作用效果也好，所以作為基礎(chǔ)化妝品也有用。
當(dāng)本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑以口服或非口服方式應(yīng)用于包括人在內(nèi)的動物時，確實、且穩(wěn)定地增強這些生物體皮膚中的膠原產(chǎn)生。即，通過將本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑應(yīng)用于包括人在內(nèi)的動物，可以發(fā)揮防止皮膚老化，促進(jìn)、保持體毛、羽毛的成長，在美容與健康的保持、增進(jìn)中有用的優(yōu)越作用效果。
本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑作為有效成分的L-抗壞血酸類以及脂肪酸類任一種是可以無副作用、安全地混合在食品、化妝品或藥品等的成分。另外、應(yīng)用本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑，由于正確混合這些有效成分的期待量，所以工業(yè)化制造時，其品質(zhì)管理很容易。另外，本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑由于并不混合高價的蜂王漿類，所以與以往的由L-抗壞血酸類和蜂王漿類構(gòu)成的膠原產(chǎn)生增強劑比較，還具有可廉價制造的優(yōu)點。
因此，本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑，除了本身可作為膠原產(chǎn)生增強劑利用的同時，也可以與從食品、健康食品、特殊用途食品、化妝品、藥品、準(zhǔn)藥品、以及飼料、餌料、寵物食品用材料選擇的1種或大于等于2種材料混合，做成各種食品、健康食品、特殊用途食品、化妝品、藥品、準(zhǔn)藥品、以及飼料、餌料、寵物食品等各種形式的組合物利用。
另外，根據(jù)本申請說明書公布的從鮮蜂王漿分離脂肪酸類的方法，在本發(fā)明的膠原產(chǎn)生增強劑中，工業(yè)上可以容易、而且價廉地制造可作為有效成分使用的脂肪酸類。
本發(fā)明是起到如此顯著作用效果的發(fā)明，是對本領(lǐng)域的確具有很大意義的發(fā)明。
權(quán)利要求
1.膠原產(chǎn)生增強劑，其中，作為有效成分含有L-抗壞血酸和/或其類似物和脂肪酸類。
2.權(quán)利要求1所述的膠原產(chǎn)生增強劑，其特征是相對于總組合物質(zhì)量，按L-抗壞血酸質(zhì)量換算，含有大于等于0.01質(zhì)量％的L-抗壞血酸和/或其類似物。
3.權(quán)利要求1或2所述的膠原產(chǎn)生增強劑，其中相對于根據(jù)L-抗壞血酸質(zhì)量換算的L-抗壞血酸和/或其類似物1質(zhì)量份，含有大于等于0.0001質(zhì)量份的脂肪酸類。
4.權(quán)利要求1、2或3所述的膠原產(chǎn)生增強劑，其中脂肪酸類來自蜂王漿。
5.權(quán)利要求1至4任一項所述的膠原產(chǎn)生增強劑，其中脂肪酸類是從10-羥基-2-癸烯酸、10-羥基癸酸、癸酸、2-癸烯酸和癸二酸中選擇的1種或大于等于2種。
6.權(quán)利要求1至5任一項所述的膠原產(chǎn)生增強劑，其中還含有從飲食品、特殊用途食品、化妝品、藥品、準(zhǔn)藥品、飼料、餌料以及寵物食品用材料中選擇的1種或大于等于2種的其它成分。
7.權(quán)利要求6所述的膠原產(chǎn)生增強劑，其中其它成分是從抗氧化劑、增粘劑、穩(wěn)定劑、賦形劑、增量劑、pH調(diào)節(jié)劑、增粘劑、酸味劑、提取物類、糖類、葡糖胺聚糖、糖醇類、氨基酸類、L-抗壞血酸以及其類似物以外的維生素類、水、醇、淀粉質(zhì)、蛋白質(zhì)、纖維質(zhì)、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、著香料、著色料、甜味料、調(diào)味料、香辛料、防腐劑、乳化劑以及表面活性劑中選擇的1種或大于等于2種的成分。
8.權(quán)利要求1至7任一項所述的膠原產(chǎn)生增強劑，其中L-抗壞血酸的類似物是從L-抗壞血酸的鹽類、L-抗壞血酸2-糖苷以及L-抗壞血酸2-葡糖苷中選擇的1種或大于等于2種的物質(zhì)。
9.權(quán)利要求8所述的膠原產(chǎn)生增強劑，其特征是L-抗壞血酸2-糖苷至少含有L-抗壞血酸2-葡糖苷。
10.權(quán)利要求7所述的膠原產(chǎn)生增強劑，其中葡糖胺聚糖是從軟骨素、硫酸軟骨素、硫酸皮質(zhì)素、肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸角質(zhì)素、透明質(zhì)酸以及aluronic acid的鹽類中選擇的1種或大于等于2種。
11.含有權(quán)利要求1至10任一項所述的膠原產(chǎn)生增強劑的飲食品、健康食品或特殊用途食品。
12.含有權(quán)利要求1至10任一項所述的膠原產(chǎn)生增強劑的化妝品。
13.含有權(quán)利要求1至10任一項所述的膠原產(chǎn)生增強劑的藥品或準(zhǔn)藥品。
14.含有權(quán)利要求1至10任一項所述的膠原產(chǎn)生增強劑的飼料、餌料或?qū)櫸锸称贰?br> 15.一種權(quán)利要求1至10任一項所述的膠原產(chǎn)生增強劑的制造方法，其特征是經(jīng)過混合L-抗壞血酸和/或其類似物和脂肪酸類的工序。
16.從鮮蜂王漿分離脂肪酸類的方法，包括將鮮蜂王漿懸濁于溶劑的工序；將得到的懸濁液進(jìn)行離心分離和/或過濾，分為上清級分和沈淀級分的工序；將得到的沈淀級分用堿劑溶解的工序；將得到的溶液用酸劑進(jìn)行中和的工序；以及將中和后得到的溶液進(jìn)行膜分離，收集脂肪酸類的工序。
全文摘要
以提供膠原產(chǎn)生增強劑及其用途作為課題，確定了作為有效成分含有L－抗壞血酸類和脂肪酸類的膠原產(chǎn)生增強劑及其用途，解決了上述課題。
文檔編號A61K31/19GK1863526SQ20048002943
公開日2006年11月15日 申請日期2004年10月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月7日
發(fā)明者宮田聰美, 岡本巖夫, 牛尾慎平, 栗本雅司 申請人:株式會社 林原生物化學(xué)研究所