專利名稱：一種治療和預(yù)防蜜蜂細(xì)菌病的中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中成藥，具體地說(shuō)是提供一種預(yù)防和治療蜜蜂細(xì)菌病的中藥組合物及其制備的工藝方法。
背景技術(shù)：
蜜蜂常見(jiàn)的細(xì)菌性疾病如歐洲幼蟲(chóng)腐臭病(European Foulbrood Disease)是由蜂房蜜蜂球菌(Melissococcus Pluton)感染引起的，它使蜂群的4日齡和5日齡幼蟲(chóng)大量死亡。我國(guó)蜜蜂病的防治在過(guò)去幾十年主要采用抗生素和化學(xué)藥物，如土霉素、氯霉素等，這些藥物對(duì)蜜蜂病的治療療效顯著，且具有使用方便、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)。但這些藥物的使用，會(huì)導(dǎo)致蜂產(chǎn)品中病原體污染，農(nóng)藥殘留特別是抗生素殘留問(wèn)題。如何解決因蜜蜂病防治過(guò)程中引起的抗生素等藥物殘留問(wèn)題，提高蜂產(chǎn)品質(zhì)量和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，成為當(dāng)前的首要任務(wù)，使用中草藥等生物制劑防治蜜蜂傳染病是解決好這個(gè)問(wèn)題的關(guān)鍵。但國(guó)內(nèi)用中草藥為主要原料的蜂藥的研制才剛剛開(kāi)始，多數(shù)停留在開(kāi)發(fā)試用階段，無(wú)大規(guī)模產(chǎn)品推廣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種能夠?qū)γ鄯浼?xì)菌病進(jìn)行預(yù)防和治療的中藥組合物及其制備的工藝方法，療效好，并能解決蜂產(chǎn)品的抗生素藥物殘留問(wèn)題。
根據(jù)中藥藥理，選擇57味具有殺菌功效的中藥進(jìn)行抗蜂房蜜蜂球菌的實(shí)驗(yàn)室篩選，發(fā)現(xiàn)黃連提取液對(duì)蜂房蜜蜂球菌有良好的抑制作用。但試驗(yàn)同時(shí)表明，單味的黃連提取液濃度較高對(duì)蜜蜂具有一定的毒性，喂養(yǎng)會(huì)造成部分蜜蜂死亡。
黃連為毛莨科植物黃連Coptis chinensis Franch、三角葉黃連Coptisdeltoidea c.Y.Cheng et Hsiao或云連Coptis teeta所有黃連的干燥根莖。
干姜為姜科植物姜Zingiber officinale Rose的干燥根莖。
根據(jù)中藥藥理理論，黃連性苦、寒，具有清熱燥濕、瀉火解毒、殺蟲(chóng)作用，現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明黃連具有抗微生物及抗原蟲(chóng)作用，但黃連味苦性寒，過(guò)量傷脾胃，久服化燥傷陰，而干姜性辛、熱，具有溫中逐寒、回陽(yáng)通脈、燥濕消痰作用，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明具有抗菌消炎作用。所以在黃連中加適量干姜具有辛開(kāi)苦降，調(diào)和藥性、降低毒副作用。
經(jīng)選擇試驗(yàn)，選用黃連的水和/或醇提取物作活性成分和藥學(xué)上可接受的附加劑組成治療和預(yù)防蜜蜂細(xì)菌病的中藥組合物。
根據(jù)藥學(xué)原理，還可選用黃連和干姜來(lái)配成治療和預(yù)防蜜蜂細(xì)菌病的中藥組合物，組合物是由下列原料的水和/或醇提取物作活性成分和藥學(xué)上可接受的附加劑組成黃連55-85重量份，干姜15-45重量份。
本發(fā)明所提供的預(yù)防和治療蜜蜂細(xì)菌病的中藥組合物的制備的生產(chǎn)工藝包括下列步驟(a)取黃連或黃連55-85重量份，干姜15-45重量份作原料；(b)加8-12倍量水浸泡l小時(shí)，水煎煮1-2小時(shí)，過(guò)濾，得濾液I；藥渣加入8-12倍量水煎煮1-2小時(shí)，過(guò)濾，得濾液II；藥渣再加入8-12倍量水煎煮1-2小時(shí)，過(guò)濾，得濾液III；將濾液I、II、III合并后濃縮；(c)濃縮液中加入95％乙醇，邊加邊攪拌，含醇量達(dá)60％-75％后，冷置8-24小時(shí)，過(guò)濾，棄雜質(zhì)沉淀物；(d)濾液經(jīng)回收乙醇后，加水至1g生藥/ml，再加入苯甲酸鈉0.4-0.5重量份，攪拌，100℃30分鐘蒸汽消毒，包裝成成品。
所述的濃縮液在30℃下相對(duì)密度為1.02-1.20g/ml。
本發(fā)明中藥組合物在預(yù)防和治療蜜蜂細(xì)菌病中的應(yīng)用，抑菌使用濃度為7.8mg-1g生藥/ml；殺菌使用濃度為15.6mg-1g生藥/ml。
在本發(fā)明制備的中藥組合物，在多種中草藥中選取黃連的提取液用于治療和預(yù)防蜜蜂細(xì)菌病，以水煎醇沉的方法進(jìn)行提取，除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，既提高抗菌效果又降低毒性。同時(shí)可通過(guò)一定的配比將黃連和干姜進(jìn)行復(fù)方處理，調(diào)和藥性，降低毒副作用。本發(fā)明的中藥組合物為天然藥物制劑，低濃度使用時(shí)對(duì)蜂房蜜蜂球菌具有抑制效果，高濃度使用時(shí)具有良好的殺菌效果，使用后蜂產(chǎn)品中無(wú)殘留，提高了蜂產(chǎn)品質(zhì)量。


圖1為本發(fā)明的制備工藝流程圖；圖2為本發(fā)明中藥組合物的藥效試驗(yàn)殺菌效果-時(shí)間曲線圖。
具體實(shí)施例方式
一、配方篩選(一)受試藥物大黃、大蒜、大青葉、蛇床子、烏梅、千里光、金銀花、白頭翁、山豆根、蒲公英、丹皮、萊服子、荊芥、地錦草、桑葉、連翹、秦皮、虎杖、茵陳、鹿銜草、黃連、柴胡、麻黃、黃柏、厚樸、莪術(shù)、菊花、黃精、半夏、魚(yú)腥草、側(cè)柏葉、龍膽、龍葵、金錢(qián)草、苦參、雞矢藤、夏枯草、貫眾、細(xì)辛、黃芪、干姜、桂枝、防風(fēng)、幸夷、薄荷、葛根、升麻、蟬蛻、天花粉、苦參、板藍(lán)根、地骨皮、水牛角、牛黃、滿山香、知母、四季青共57味中藥材，其中56味中藥各取50g分別水煎二次(30分/次)，煎液合并濃縮成1g生藥/ml濃度，15磅20分鐘蒸汽消毒，備用，大蒜取新鮮榨汁。
(二)菌種蜂房蜜蜂球菌(Melissococcus Pluton)，由浙大農(nóng)學(xué)院提供，實(shí)驗(yàn)室診斷為革蘭氏陽(yáng)性球菌。
(三)培養(yǎng)基采用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(由馬鈴薯2g，氯化鈉0.5g、肉膏1g、蛋白胨1g、瓊脂6g、加蒸餾水250ml配成)，自制。
(四)儀器CO2培養(yǎng)箱和凈化工作臺(tái)。
(五)紙片擴(kuò)散法1、瓊脂平板制備馬鈴薯瓊脂熔化后傾注平皿(直徑15cm)制備平板，待其凝固，從培養(yǎng)于瓊脂平板上24小時(shí)的細(xì)菌(Melissococcus Pluton)菌落中挑選4個(gè)相似菌落，用無(wú)菌生理鹽水稀釋，再用無(wú)菌棉木式浸菌液均勻接種于瓊脂平板上，待其干燥數(shù)分鐘后再用。
2、藥液稀釋將1g生藥/ml的無(wú)菌中藥煎液，在無(wú)菌試管中作原液、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64倍比稀釋備用。
3、藥敏試驗(yàn)用無(wú)菌鑷子鑷紙片(直徑5.5mm)浸泡稀釋的藥液，放置在已接種細(xì)菌(Melissococcus Pluton)的瓊脂平板上，輕壓紙片使其與瓊脂適當(dāng)接觸，每一平皿接種8片紙片，其中7片為一味中藥的7種不同稀釋度藥片，1片為無(wú)菌生理鹽水浸片。
將平皿在34℃10％CO2孵育24小時(shí)后，用塑料尺從平皿背面測(cè)量每個(gè)抑菌圈的直徑。結(jié)果見(jiàn)表1。
表157種中藥對(duì)蜂房蜜蜂球菌的抑制作用

注1、0表示直徑5.5mm。
2、0.4％苯甲酸鈉對(duì)照抑菌環(huán)直徑為0。
由表1可見(jiàn)，57種中藥提取液中，大蒜和黃連具有抑菌作用，并呈良好的量效關(guān)系，將大蒜試驗(yàn)皿和黃連試驗(yàn)皿繼續(xù)在34℃10％CO2中培養(yǎng)48h，測(cè)量抑制圈，結(jié)果大蒜原有抑菌圈內(nèi)均長(zhǎng)滿細(xì)菌(Mellissococcus Pluton)，而黃連原抑制圈無(wú)改變，測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表2。
表2大蒜、黃連對(duì)蜂房蜜蜂球菌的抑制周期

注0表示直徑5.5mm。
由上可見(jiàn)，對(duì)57種中藥篩選結(jié)果，大蒜和黃連對(duì)蜜蜂蜂房球菌有較好的抑制作用。表2進(jìn)一步抑菌周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大蒜的抑菌效果持續(xù)時(shí)間較短，作用72小時(shí)后細(xì)菌填滿抑菌圈，而黃連的抑菌效果持續(xù)穩(wěn)定，至第7天抑菌效果仍未減弱。
二、黃連制劑的抑菌作用
(一)黃連水煎劑的制備黃連生藥1000g，6000ml水浸泡1h，煮沸60min，過(guò)濾。藥渣加5倍量水繼續(xù)煎煮，煮沸60min，過(guò)濾。合并兩次濾液，于80℃水上濃縮成1000ml，加苯甲酸鈉4g，溶液冷卻后4000rpm 20分鐘離心，棄沉渣，上清液分裝成100ml/瓶，蒸汽100℃，30分鐘滅菌。最后樣品為1g生藥/ml溶液，臨用時(shí)用冷開(kāi)水30倍稀釋。
(二)上述水煎液進(jìn)行紙片擴(kuò)散法抑菌試驗(yàn)，結(jié)果與前相同。
(三)將水煎液制劑進(jìn)行毒性試驗(yàn)，以每蜂箱放一飼喂器30倍稀釋的黃連水煎制劑300ml，觀察24h，結(jié)果有蜜蜂死亡。表明單純水提取液在濃度高時(shí)使用對(duì)蜜蜂有毒性。
(四)根據(jù)藥學(xué)理論通過(guò)乙醇沉淀黃連水煎劑，除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，以提高抗菌效果又降低毒性。同時(shí)黃連味苦性寒，過(guò)量傷脾胃，久服化燥傷陰，可以加適量干姜辛開(kāi)苦降，調(diào)和藥性，降低毒副作用。因此可以將黃連與干姜以一定配比進(jìn)行配制，組成復(fù)合物，制備工藝改之為水煎醇沉。
三、配方實(shí)施例實(shí)施例1取黃連加10倍量水浸泡1小時(shí)，水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，得濾液I。藥渣再加入10倍量水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，得濾液II。藥渣再加10倍量水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，得濾液III。合并濾液I、II、III濃縮至相對(duì)密度為1.13(30℃測(cè))液體，加95％乙醇，使藥液終含醇量達(dá)75％，冷置24小時(shí)，過(guò)濾，棄雜質(zhì)沉淀物，濾液回收乙醇，加苯甲酸鈉(終量為0.4％)，攪拌，水加至1g生藥/ml，灌裝，100℃30分鐘蒸汽消毒，包裝、即得成品，臨用時(shí)用水稀釋30倍。
實(shí)施例2-5按下列比例取黃連、干姜加10倍量水浸泡1小時(shí)，水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，得濾液I。藥渣再加入10倍量水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，得濾液II。藥渣再加10倍量水煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，得濾液III。合并濾液I、II、III濃縮至相對(duì)密度為1.13(30℃測(cè))液體，加95％乙醇，使藥液終含醇量達(dá)75％，冷置24小時(shí)，過(guò)濾，棄雜質(zhì)沉淀物，濾液回收乙醇，加苯甲酸鈉(終量為0.4％)，攪拌，水加至1g生藥/ml，灌裝，100℃30分鐘蒸汽消毒，包裝、即得成品，臨用時(shí)用水稀釋30倍。
分別選擇不同的配比，按上述工藝分別配成1g生藥/ml濃度消毒備用。將四種制劑分別用無(wú)菌水30倍稀釋，進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，抑菌效果見(jiàn)表3表3黃連和干姜不同比例時(shí)的抑菌效果(mm)

四、制備工藝實(shí)施例取黃連100g、干姜60g進(jìn)行不同工藝參數(shù)的實(shí)驗(yàn)1.水提正交試驗(yàn)以加水量(A)、煎煮時(shí)間(B)、煎煮次數(shù)(C)為主要影響因素，每個(gè)因素選3個(gè)水平，見(jiàn)表4。
表4 水提因素水平正交試驗(yàn)表

根據(jù)因素水平表4，選擇L9(34)正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行試驗(yàn)，將每1水平樣品配成1g生藥/ml濃度，再用無(wú)菌水稀釋成1∶30倍進(jìn)行試驗(yàn)，以抑菌試驗(yàn)直徑作為考察指標(biāo)，并分別對(duì)有關(guān)數(shù)據(jù)作分析，結(jié)果見(jiàn)表5。
表5水提正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

2、醇提正交試驗(yàn)以藥液相對(duì)密度(A)、乙醇終濃度(B)、提取時(shí)間C(h)為主要影響因素，每個(gè)因素選3個(gè)水平，見(jiàn)表6。
表6 醇提因素水平表

根據(jù)因素水平表6，選擇L9(34)正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行試驗(yàn)，以抑菌環(huán)直徑作為考察指標(biāo)，并分別對(duì)有關(guān)數(shù)據(jù)作分析，結(jié)果見(jiàn)表7。
表7醇提正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

五、藥效測(cè)試1、抑菌性能選取黃連按實(shí)施例1以及三批次的黃連和干姜藥材按實(shí)施例3進(jìn)行制備，取得4批制劑，抑菌作用采用紙片擴(kuò)散法，抑菌環(huán)直徑作為考察指標(biāo)，觀察制劑對(duì)蜜蜂蜂房球菌的抑制作用，見(jiàn)表8表8 不同批次制劑的抑菌作用(抑菌環(huán)直徑mm)測(cè)試結(jié)果表

2、最小抑菌濃度將上述批號(hào)3的制劑用肉湯培養(yǎng)基按1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1024倍比稀釋，再在每個(gè)稀釋度藥液中加入105～106個(gè)/ml菌液20μl，34℃，10％CO2培養(yǎng)72小時(shí)觀察結(jié)果，見(jiàn)表9。
表9 最小抑菌濃度(MIC)測(cè)試結(jié)果表

注澄清表示無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，混濁表示細(xì)菌生長(zhǎng)。
結(jié)果最小抑菌濃度為1∶128倍稀釋液，即7.8mg生藥/ml。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)1∶4、1∶8試驗(yàn)管中產(chǎn)生沉淀，可能由于黃連有效成份在肉湯培養(yǎng)基中發(fā)生沉淀而造成抑菌效果下降。
3、最小殺菌濃度試驗(yàn)(MBC)將上述批號(hào)3的制劑按試管稀釋法操作程序，將藥物作1∶16 1∶32 1∶641∶128倍稀釋，分裝于4試管中，經(jīng)接種菌液后，34℃，10％CO2培養(yǎng)18小時(shí)，分別取0.1ml，移種至不含藥的馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基平皿上，輕輕推開(kāi)藥液，置34℃，10％CO2培養(yǎng)72小時(shí)，觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，計(jì)數(shù)少于5個(gè)菌落者作為最低殺菌濃度(MBC)。結(jié)果表10。
表10最小殺菌濃度(MBC)測(cè)試結(jié)果表

結(jié)果最小殺菌濃度為1∶64倍稀釋液，即15.6mg生藥/ml4、藥物殺菌曲線實(shí)驗(yàn)將蜂房蜜蜂球菌接種肉湯培養(yǎng)基中，置34℃，10％CO2孵育18小時(shí)作為試驗(yàn)菌液，取菌液20μl分別接種于含批號(hào)3制劑的培養(yǎng)基中(10mg、33.3mg生藥/ml)及不含藥的肉湯培養(yǎng)基中，使試驗(yàn)管中細(xì)菌的最終濃度為105～106個(gè)/ml，然后將上述試驗(yàn)管在34℃，10％CO2中培養(yǎng)，分別在2、4、6、8、10、12小時(shí)分別吸取0.1ml培養(yǎng)液，接種馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基平皿，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，每個(gè)時(shí)間段接種3塊平皿，計(jì)算平均值，根據(jù)不同時(shí)間點(diǎn)的菌落計(jì)數(shù)繪制出殺菌曲線。結(jié)果見(jiàn)圖1、表11。
表11 殺菌效果-時(shí)間曲線實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

由表11、圖1可見(jiàn)，本發(fā)明能使物以1∶30倍稀釋，對(duì)細(xì)菌作用6小時(shí)后，蜂房蜜蜂球菌均被殺死，接種在瓊脂平皿上無(wú)菌落生長(zhǎng)。
5、制劑存放按《新藥審批方法》規(guī)定和中國(guó)藥典2000年版一部中的方法進(jìn)行存放考察，本發(fā)明37□～40□溫度和75％相對(duì)濕度條件下保溫3個(gè)月，結(jié)果無(wú)明顯變化，質(zhì)量穩(wěn)定。
6、蜂群防治試驗(yàn)報(bào)告由于2004年春季出現(xiàn)了近年來(lái)少有的蜂群春繁好氣候，陰雨天氣少，氣溫比常年偏高，無(wú)“倒春寒”情況，因而蜜蜂幼蟲(chóng)病在浙江及周遍地區(qū)的蜂場(chǎng)幾乎沒(méi)有爆發(fā)和流行。為了檢測(cè)防治效果，不得不采用人工接種發(fā)病的方法，使蜂群發(fā)病，然后采用本發(fā)明提取液進(jìn)行防治，同時(shí)以農(nóng)業(yè)部《蜜蜂病蟲(chóng)害綜合防治規(guī)范》中規(guī)定使用的蜂病防治藥物(西藥)為陽(yáng)性對(duì)照，以檢測(cè)其防治效果。
(一)、試驗(yàn)材料(1)、意大利蜂60群，蜂群健康無(wú)病害，群勢(shì)中等。
(2)、人工發(fā)病用細(xì)菌菌種(蜂房蜜蜂球菌)由浙江省中醫(yī)藥研究院提供。
(3)、本發(fā)明上述批號(hào)3制劑1g生藥/ml濃度。
(4)、紅霉素(陽(yáng)性藥物)從藥店購(gòu)入。
(5)、試驗(yàn)用具量筒、燒杯、噴霧器等。
(二)、試驗(yàn)方法(1)、試驗(yàn)時(shí)間從2004年6月12日開(kāi)始至7月6日結(jié)束。此時(shí)，蜂場(chǎng)周?chē)鷽](méi)有蜜粉源；氣候處于“梅雨”季節(jié)，濕度高，溫度較高，多雨。
(2)、試驗(yàn)方法(a)將60群蜂均衡群勢(shì)，隨機(jī)分為3組，每組10群。這3組分別為本發(fā)明上述批號(hào)3制劑(A組)、紅霉素組(B組)和空白對(duì)照1組(C組)。
(b)本發(fā)明上述批號(hào)3制劑組、紅霉素組和空白對(duì)照1組這三組的30群蜂全部接種細(xì)菌菌種(蜂房蜜蜂球菌)，使蜂群發(fā)生幼蟲(chóng)腐臭病。
(c)在蜂群發(fā)病后的6月27日、6月30日和7月3日分別用本發(fā)明上述批號(hào)3制劑按1∶30稀釋后，噴霧蜜蜂和巢脾，用紅霉素噴霧致紅霉素組的蜜蜂和巢脾；空白對(duì)照1組的蜂群則未作任何處理。
(4)在防治前后對(duì)每群蜂的發(fā)病率(指患病幼蟲(chóng)房占子脾總數(shù)的百分比)進(jìn)行詳細(xì)的檢查，根據(jù)防治前后的發(fā)病率，計(jì)算出防治效果。
(三)、試驗(yàn)結(jié)果各組的發(fā)病率及防治效果如下
(1)A組

(2)B組

(3)C組

上述結(jié)果表明，本發(fā)明組合物對(duì)幼蟲(chóng)腐臭病具有很好的防治效果，平均達(dá)96.86％，與陽(yáng)性對(duì)照(紅霉素)組的防治效果(97.67％)相比，無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
權(quán)利要求
1.一種預(yù)防和治療蜜蜂細(xì)菌病的中藥組合物，其特征在于它是由黃連作為原料的水和/或醇提取物作活性成分和藥學(xué)上可接受的附加劑組成的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于它是由下列原料的水和/或醇提取物作活性成分和藥學(xué)上可接受的附加劑組成黃連55-85重量份，干姜15-45重量份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物，其特征在于所述的組合物中還加有苯甲酸鈉0.4-0.5重量份。
4.一種制備預(yù)防和治療蜜蜂細(xì)菌病的中藥組合物的方法，它包括下列步驟(a)取黃連中藥材作原料；(b)加8-12倍量水浸泡1小時(shí)，水煎煮1-2小時(shí)，過(guò)濾，得濾液I；藥渣加入8-12倍量水煎煮1-2小時(shí)，過(guò)濾，得濾液II；藥渣再加入8-12倍量水煎煮1-2小時(shí)，過(guò)濾，得濾液III；將濾液I、II、III合并后濃縮；(c)濃縮液中加入95％乙醇，邊加邊攪拌，含醇量達(dá)60％-75％后，冷置8-24小時(shí)，過(guò)濾，棄雜質(zhì)沉淀物；(d)濾液經(jīng)回收乙醇后，加水至1g生藥/ml，再加入苯甲酸鈉0.4-0.5重量份，攪拌，100℃30分鐘蒸汽消毒，包裝成成品。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥組合物的制備方法，它包括下列步驟(a)取下列中藥材作原料黃連55-85重量份，干姜15-45重量份；(b)加8-12倍量水浸泡1小時(shí)，水煎煮1-2小時(shí)，過(guò)濾，得濾液I；藥渣加入8-12倍量水煎煮1-2小時(shí)，過(guò)濾，得濾液II；藥渣再加入8-12倍量水煎煮1-2小時(shí)，過(guò)濾，得濾液III；將濾液I、II、III合并后濃縮；(c)濃縮液中加入95％乙醇，邊加邊攪拌，含醇量達(dá)60％-75％后，冷置8-24小時(shí)，過(guò)濾，棄雜質(zhì)沉淀物；(d)濾液經(jīng)回收乙醇后，加水至1g生藥/ml，加入苯甲酸鈉0.4-0.5重量份，攪拌，100℃30分鐘蒸汽消毒，包裝成成品。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于所述的濃縮液在30℃下相對(duì)密度為1.02-1.20g/ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物在預(yù)防和治療蜜蜂細(xì)菌病中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物在預(yù)防蜜蜂細(xì)菌病中的應(yīng)用，其特征在于所述的中藥組合物在蜜蜂中的抑菌使用濃度為7.8mg-1g生藥/ml。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥組合物在治療蜜蜂細(xì)菌病中的應(yīng)用，其特征在于所述的中藥組合物在蜜蜂中的殺菌使用濃度為15.6mg-1g生藥/ml。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種預(yù)防和治療蜜蜂細(xì)菌病的中藥組合物，由黃連的水和/或醇提取物作活性成分和藥學(xué)上可接受的附加劑組成，也可由黃連55－85重量份，干姜15－45重量份作原料的水和/或醇提取物作活性成分和藥學(xué)上可接受的附加劑組成。本發(fā)明還公開(kāi)了制備上述組合物的生產(chǎn)工藝以及在預(yù)防和治療蜜蜂細(xì)菌病的應(yīng)用濃度。本發(fā)明制備的中藥組合物，選取黃連的提取液應(yīng)用于預(yù)防和治療蜜蜂細(xì)菌病，并以水煎醇沉的方法進(jìn)行提取，除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，提高抗菌效果，降低毒性。還通過(guò)一定的配比將黃連和干姜進(jìn)行復(fù)方處理，調(diào)和藥性，降低毒副作用。本發(fā)明為天然藥物制劑，低濃度使用時(shí)具有抑菌效果，高濃度使用時(shí)具有良好的殺菌效果，使用后蜂產(chǎn)品中無(wú)殘留，提高了蜂產(chǎn)品質(zhì)量。
文檔編號(hào)A61P31/04GK1748782SQ20041006639
公開(kāi)日2006年3月22日 申請(qǐng)日期2004年9月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月15日
發(fā)明者楊鋒, 戴關(guān)海, 胡福良, 王超敏, 南建博 申請(qǐng)人:浙江省中醫(yī)藥研究院, 江山天寶蜂業(yè)科技開(kāi)發(fā)有限公司