專利名稱：治療糖尿病慢性并發(fā)癥的藥物組合物及有效成分的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療糖尿病慢性并發(fā)癥的藥物組合物，及其有效藥物成分中大黃總游離蒽醌的制備方法。
背景技術(shù)：
糖尿病是一種常見(jiàn)和多發(fā)性疾病，其對(duì)人體健康的危害主要表現(xiàn)在由其所導(dǎo)致的多種慢性并發(fā)癥上，如糖尿病腎病、糖尿病眼病及其它多種微血管病變就是其中較常見(jiàn)的一些慢性并發(fā)癥。以中藥大黃或其所含的某些成分作為治療藥物已有研究和報(bào)導(dǎo)。
大黃是一個(gè)重要和常用的中藥，具有瀉熱通腸，涼血解毒，逐瘀通經(jīng)等功能。已有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，其化學(xué)成分主要為鞣質(zhì)和蒽醌。其中的大黃蒽醌主要是以甙形式存在的結(jié)合蒽醌和少量的游離蒽醌。已有研究顯示，其中的大黃總游離蒽醌中可包括有大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素甲醚和蘆薈大黃素等多種游離的蒽醌類衍生物。目前已有以其中的大黃酸、大黃素等成分用于對(duì)糖尿病的腎臟損傷防治的報(bào)導(dǎo)，如，公開(kāi)號(hào)CN1178669A的中國(guó)專利文獻(xiàn)公開(kāi)了一種以大黃酸和大黃酸鹽作為治療糖尿病腎病的藥物。公開(kāi)號(hào)CN1324612A的中國(guó)專利文獻(xiàn)公開(kāi)了一種以大黃素和巰甲丙脯酸作為延緩慢性腎衰的藥物。公開(kāi)號(hào)CN1349966A的中國(guó)專利文獻(xiàn)公開(kāi)了一種對(duì)大黃總蒽醌的提取純化方法及其將其用于制備治療腎衰的藥品。此外，戴春筍等在“大黃酸治療STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠的遠(yuǎn)期實(shí)驗(yàn)研究”(《腎臟病與透析腎移植雜志》，1999，5)中提出了對(duì)長(zhǎng)期應(yīng)用大黃酸對(duì)糖尿病大鼠遠(yuǎn)期病變療效的觀察報(bào)告。劉棟等在“大黃酸抑制TGF-β1誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞肥大及細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生”(《腎臟病與透析腎移植雜志》，2001，10(2))中報(bào)導(dǎo)了大黃酸對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的近端腎小管上皮細(xì)胞肥大及細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)影響的觀察報(bào)告。
糖尿病可導(dǎo)致多種嚴(yán)重影響人體健康的慢性并發(fā)癥產(chǎn)生，上述文獻(xiàn)的內(nèi)容多只是針對(duì)其中腎病的研究和報(bào)告。
發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述情況，本發(fā)明將提供一種能具有更好的防治糖尿病慢性并發(fā)癥的藥物組合物，其中不僅在對(duì)糖尿病慢性腎病的防治上能具有更為理想和滿意的效果，而且對(duì)糖尿病眼病、糖尿病血管病變等多種糖尿病所致的慢性并發(fā)癥也能具有可靠和滿意的防治效果。
本發(fā)明治療糖尿病慢性并發(fā)癥的藥物組合物，是以大黃總游離蒽醌與黃芩苷為有效藥物成分，與藥物中可以接受的輔助添加成分組成，大黃總游離蒽醌/黃芩苷的重量比為1/1～1/5，其中尤以大黃總游離蒽醌/黃芩苷以1/2～1/3重量比時(shí)為佳。
在上述的藥物組合物中，所說(shuō)有效藥物成分中的大黃總游離蒽醌，是主要可包括大黃酸(I)、大黃素(II)、大黃酚(III)、大黃素甲醚(IV)和蘆薈大黃素(V)等多種游離蒽醌衍生物成分在內(nèi)的總游離蒽醌成分，這些成分的結(jié)構(gòu)形式分別如式(A)的I～V所示 R1R2I -COOH -HII -CH3-HIII -CH3-OHIV -CH3-OCH3V -CH2OH -H關(guān)于大黃總蒽醌的制備已有研究和報(bào)導(dǎo)。例如，公開(kāi)號(hào)CN1349966A的中國(guó)專利文獻(xiàn)提出了一種采用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行純化的大黃總蒽醌的提取方法。夏之寧等在“吸附脫附法提取分離大黃蒽醌甙成分”(《中成藥》1999，21(9)，478-9)，提出了利用聚酰胺的吸附活性對(duì)大黃中的蒽醌甙進(jìn)行提取分離的方法。這些方法的操作過(guò)程繁瑣，收率低，成本高，工業(yè)化生產(chǎn)可操作性差。鄭志華在“大黃蒽類衍生物提取工藝研究概述”(《廣東藥學(xué)》2002，12(3)，58-9)還分別對(duì)煎煮法、滲漉法、回流法、夾層蒸汽水煎煮法和水溫浸法；對(duì)醇提、滲漉和水提方式；以及對(duì)用纖維素酶處理、用超聲技術(shù)提取等不同提取方法的特點(diǎn)和優(yōu)劣進(jìn)行了比較和分析。這些報(bào)道都只涉及了對(duì)包括有游離蒽醌和以甙形式存在的結(jié)合蒽醌在內(nèi)的大黃總蒽醌的提取和制備方法。
在公開(kāi)號(hào)CN1345597A的中國(guó)專利文獻(xiàn)中，公開(kāi)了一種從大黃中提取游離蒽醌的浸膏及制方法，采用常規(guī)方法以乙醇提取，經(jīng)酸水解得到大黃游離蒽醌浸膏，該方法所得的是游離蒽醌提取物含量＞50％的大黃蒽醌浸膏，其總游離蒽醌的含量低，純度差?！吨兴幫▓?bào)》1987，12(5)286-288報(bào)導(dǎo)了一種分離大黃總游離蒽醌的方法，但由于采用的是有機(jī)溶劑萃取，易燃易爆。作為改進(jìn)，公開(kāi)號(hào)CN1242355A的中國(guó)專利文獻(xiàn)提出了一種采用陰離子交換樹(shù)脂分離純化提取大黃總游離蒽醌的方法。公開(kāi)號(hào)CN128228A的中國(guó)專利文獻(xiàn)公開(kāi)了一種采用將大黃碎塊浸泡于數(shù)十倍的氨水溶液中，以提取大黃總游離蒽醌中的大黃酸的方法。袁倚盛等在“大黃游離蒽醌的制備與純化”(《中草藥》2000，31(7)，508-9)中介紹了采用乙醚提取或用大孔樹(shù)脂吸附處理的方式制備總游離蒽醌，并進(jìn)一步純化大黃酸和大黃素的方法。陳瓊?cè)A等在“中藥大黃的綜合研究”(《天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)》2001，13(3)，58-60)中介紹了采用20％硫酸和氯仿的混合液處理大黃藥材，并分離大黃總游離蒽醌中的大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素甲醚和蘆薈大黃素等成分的方法。本發(fā)明藥物組合物有效藥物成分中的大黃總游離蒽醌雖不排除也可以采用這些方法制備得到，但由于在這些方法中或需采用有機(jī)溶媒，或是需采用離子交換樹(shù)脂等方式處理，或是大黃總游離蒽醌的收率/含量較低，使其在操作的方便性、安全性和利于工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)方面都尚不能令人滿意。
為此，本發(fā)明提供一種更具有實(shí)施和實(shí)用價(jià)值，特別是更有利于工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)上使用的制備方法，是先按目前文獻(xiàn)已有報(bào)導(dǎo)多種以水或含醇量最高可達(dá)95％的乙醇水溶液對(duì)大黃藥材加熱回流后，過(guò)濾并除去濾液溶媒得到浸膏體，將浸膏體于溫度50℃-100℃和pH＜1的酸性條件下進(jìn)行水解后，將水解沉淀物置于pH＞14和體積含量為50％-80％的堿性乙醇水溶液中攪拌溶解，將除去沉淀后的該堿性含醇濾液再酸化至pH1-5，即可得到含大黃總游離蒽醌的重量≥80％的大黃提取物。
在上述制備方法中，對(duì)所說(shuō)的該大黃浸膏體在pH＜1條件下進(jìn)行酸水解時(shí)，可以采用按100g大黃藥材原料加重量體積比為1～10％的酸，一般以選用如鹽酸或硫酸等最常用的酸為方便，在50-100℃的溫度條件下處理1-10小時(shí)。
對(duì)水解產(chǎn)物用所說(shuō)的pH＞14的堿性乙醇水溶液處理時(shí)，一般情況下可以采用含有重量比為1-8％的氫氧化鈉或氫氧化鉀等最常見(jiàn)易得的堿金屬的乙醇溶液。處理后對(duì)所說(shuō)的堿性含醇濾液一般也可以采用鹽酸等常用的酸進(jìn)行酸化處理。
在上述的制備方法中，為減少所得產(chǎn)物中雜質(zhì)含量，可以對(duì)由酸化溶液中過(guò)濾得到的所說(shuō)的含有大黃游離總蒽醌的大黃提取物，可以用含量為50-95％的乙醇先進(jìn)行洗滌后，再進(jìn)行最后的常規(guī)干燥處理。
對(duì)于該大黃總游離蒽醌有效成分，除可使用上述單一形式的總游離蒽醌外，在上述的藥物組合物中，允許使用由大黃為原料經(jīng)水/乙醇提取得到的同時(shí)還包含有如鞣質(zhì)等允許存在的其它雜質(zhì)成分的大黃提取物替代，但在用于替代的大黃提取物中大黃總游離蒽醌的重量含量應(yīng)≥80％。
作為可供具體實(shí)施參考的一種基本的制備方法可以采用下述步驟進(jìn)行(a)大黃藥材原料用水或含水的乙醇加熱回流，其中以60～80％的乙醇水溶液為佳，不僅能提出結(jié)合蒽醌，而且能提取出其中較多的游離蒽醌。提取液過(guò)濾并回收溶媒，得到約1-3g大黃/ml形式的浸膏體。
(b)按常規(guī)方法進(jìn)行酸水解，例如可按以100g大黃藥材原料加鹽酸2-10ml或硫酸1-5ml的方式，在50℃～100℃溫度條件下水解1-10小時(shí)，使結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)化為游離蒽醌，大大提高游離蒽醌得率。提高溫度可縮短水解所需時(shí)間短。水解后，冷卻，過(guò)濾和水洗，得沉淀物。
(c)將上步的沉淀物粉碎，加入含1-8％氫氧化鈉或氫氧化鉀的50-80％乙醇溶液，充分?jǐn)嚢?，濾過(guò)，得堿醇溶液。用堿性乙醇進(jìn)行處理是盡量除去雜質(zhì)，是保證和提高大黃游離蒽醌的重要和關(guān)鍵操作，因?yàn)榇簏S鞣質(zhì)在堿性乙醇中幾乎不溶，可經(jīng)過(guò)濾被最大限度地除去，而大黃游離蒽醌則能被最大限度地溶解保留在堿性乙醇溶液中。
(d)將上步過(guò)濾的堿醇溶液加鹽酸酸化至pH1-5，析出大黃游離蒽醌沉淀，沉淀過(guò)濾并用50-95％乙醇溶液洗滌后干燥，即得到可作為藥效藥物成分的大黃總游離蒽醌含量≥80％(重量)的大黃提取物。
試驗(yàn)結(jié)果顯示，采用該方法能大大提高大黃總游離蒽醌提取物的含量和純度，明顯優(yōu)于上述已有報(bào)導(dǎo)的多種方法。
對(duì)所得提取物中的大黃總游離蒽醌按《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版一部18頁(yè)大黃項(xiàng)下高效液相色譜方法和條件，與大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚和蘆薈大黃素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)比分析，證明其主要化學(xué)成分為上述式(A)所示結(jié)構(gòu)I～V的大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚和蘆薈大黃素，其HPLC色譜圖可如圖1所示。
對(duì)所得提取物中的大黃總游離蒽醌的含量測(cè)定方法如下對(duì)照品溶液的制備精密稱取大黃素對(duì)照品10mg，置50ml量瓶中，加甲醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1ml，置25ml量瓶中，加混合堿溶液(10％氫氧化鈉溶液與4％氨溶液等量混合)至刻度，搖勻，在暗處避光放置30分鐘即得。
供試品溶液的制備精密稱取上述大黃總游離蒽醌提取物25mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取2ml，置分液漏斗中，加乙醚50ml，搖勻，乙醚液用水洗滌2次，每次10ml，棄去水層，乙醚液再用混合堿溶液分4次振搖提取(30ml、30ml、20ml、10ml)，合并提取液，置100ml量瓶中，加混合堿溶液至刻度，搖勻，在暗處避光放置30分鐘即得。
測(cè)定方法分別取供試品溶液和對(duì)照品溶液，照分光光度法(《中華人民共和國(guó)藥典》2000年版一部附錄VB)，在525nm波長(zhǎng)處立即測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得?？傻弥鲜龃簏S總游離蒽醌提取物以大黃素計(jì)，含大黃總游離蒽醌大于80％。
在本發(fā)明的藥物組合物中，有效藥物成分中除上述所說(shuō)的大黃總游離蒽醌外，另一個(gè)有效藥物成分是中藥原料黃芩中的重要成分之一的黃芩甙。黃芩則是一個(gè)具有清熱、瀉火、解毒功效的傳統(tǒng)中藥。有研究表明，黃芩中的主要有效成分為包括黃芩苷在內(nèi)的黃芩總苷。黃芩苷為淡黃色細(xì)針狀結(jié)晶，熔點(diǎn)為223℃～225℃，結(jié)構(gòu)如式(B)所示。其已知和常用的功效是具有抗感染和解熱鎮(zhèn)痛、抗變態(tài)反應(yīng)、抗菌、保肝利膽、降壓、利尿、鎮(zhèn)靜、解熱等方面的藥理作用，此外研究和報(bào)導(dǎo)其還具有抗凝血，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化和醛糖還原酶(AR)等方面的活性。
對(duì)于該黃芩苷成分，可由化學(xué)方式，例如通過(guò)直接化學(xué)合成或是由其它相關(guān)化合物經(jīng)化學(xué)修飾改造后得到，也可以主要為由天然藥用原料——除一般通常可直接采用的藥用原料黃芩外，還可以由同樣也含有黃芩苷成分的其它天然藥用原料，如并頭草的葉和根，紫葳科植物木蝴蝶的葉和莖皮，或是車前科植物大車前的葉等天然藥用原料，經(jīng)提取、分離而得到。與上述的大黃總游離蒽醌一樣，在采用由天然藥用原料提取物方式得到的黃芩苷成分時(shí)，除可采用純化后的單一形式化合物成分外，也可以用還包含有主要存在于其水提取物中的如黃芩素、漢黃芩素、漢黃芩苷及其它數(shù)十種黃酮化合物等成分，以及允許存在的其它雜質(zhì)成分的提取混合物，或是采用市售的商品黃芩總苷替換，但其中所含黃芩苷的重量均應(yīng)≥70％。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在本發(fā)明的上述藥物組合物中，采用大黃總游離蒽醌的重量含量≥80％的大黃提取物和/或黃芩苷的重量含量≥70％的黃芩總苷作為有效藥物成分，一般不會(huì)對(duì)本發(fā)明所說(shuō)藥物的藥效學(xué)作用產(chǎn)生明顯或難以接受的不利影響。
以上述組成形式的有效藥用成分，與藥物中可以接受的相應(yīng)藥用輔料或載體等輔助添加成分組合，并按相應(yīng)的制藥方法加工，可制成為相應(yīng)的劑型的藥物制劑。例如，與口服制劑中可以被接受的崩解劑、賦形劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、填充劑等常用的輔助添加成份混合后，按相應(yīng)的常規(guī)工藝方法處理，即可制成為片劑、丸劑、膠囊劑或適當(dāng)形式的緩釋劑、控釋劑等固體制劑形式的口服藥物；與常用的增溶劑、乳化劑、潤(rùn)濕劑、起泡或消泡劑等表面活性劑、稀釋劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、矯味劑、增稠劑等混合，按相應(yīng)的常規(guī)工藝方法處理，即可制成為水劑、糖漿等液體制劑形式的口服藥物。
進(jìn)一步的深入試驗(yàn)結(jié)果已充分顯示，本發(fā)明上述組成形式的藥物組合物，其有效成分明確，產(chǎn)品質(zhì)量也易于控制，在治療糖尿病慢性并發(fā)癥，特別是在對(duì)糖尿病慢性腎病，以及糖尿病眼病和糖尿病微循環(huán)病變等多種糖尿病所致慢性并發(fā)癥方面的療效確切，而且明顯表現(xiàn)出有協(xié)同增效的作用，且多數(shù)藥效指標(biāo)均優(yōu)于目前已有報(bào)導(dǎo)和使用的以單獨(dú)的大黃總游離蒽醌為有效成分的藥物及黃芩總苷的效果。
以下再通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)就此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。在不脫離本發(fā)明上述技術(shù)思想情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段做出的各種替換或變更的修改，均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
圖1是對(duì)用本發(fā)明方法制備的有效藥物成分中大黃總游離蒽醌成分的HPLC色譜分析圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1大黃藥材5kg，粉碎，加80％乙醇6倍量，加熱回流提取3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并提取液，回收溶媒，得浸膏相當(dāng)于約2.5g大黃/ml。攪拌下加入濃鹽酸200ml，在60℃水解5小時(shí)，冷卻，過(guò)濾、水洗至PH5-6，得沉淀。沉淀粉碎，加入含5％氫氧化鈉的50％乙醇溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?，濾過(guò)，得堿醇溶液。加鹽酸酸化至pH1-2，產(chǎn)生沉淀，放置過(guò)夜，過(guò)濾，用80％乙醇洗滌，干燥，即得含總游離蒽醌的大黃提取物。按上述方法進(jìn)行化學(xué)成分分析并測(cè)定總游離蒽醌的含量，其主要成分為大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚和蘆薈大黃素等蒽醌衍生物，總含量≥80％。
取該大黃總游離蒽醌提取物100g和黃芩苷重量含量≥70％的市售黃芩總苷200g，混合均勻，干壓制粒，裝制膠囊1000粒，即為所述的膠囊劑型藥物。
實(shí)施例2大黃藥材5kg，切片，加水10倍量，煎煮2次，每次0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并提取液，濃縮，得浸膏相當(dāng)于約1.5g大黃/ml。攪拌下加入濃硫酸150ml，在80℃水解3小時(shí)，冷卻，過(guò)濾、水洗至pH5-6，得沉淀。沉淀粉碎，加入含5％氫氧化鉀的70％乙醇溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?，濾過(guò)，得堿醇溶液。加鹽酸酸化至pH2-3，產(chǎn)生沉淀，放置過(guò)夜，過(guò)濾，用50％乙醇洗滌，干燥，即得含總游離蒽醌的大黃提取物。按上述方法進(jìn)行化學(xué)成分分析并測(cè)定總游離蒽醌的含量，其主要成分為大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚和蘆薈大黃素等蒽醌衍生物，總含量≥80％。
取該大黃總游離蒽醌提取物100g和黃芩苷重量含量≥70％的市售黃芩總苷300g，加藥用輔料適量，混合均勻，濕法制粒，壓制2000片，即為所述的片劑型藥物。
實(shí)施例3大黃藥材5kg，粉碎，加50％乙醇7倍量，加熱回流提取3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并提取液，回收溶媒，得浸膏相當(dāng)于約2g大黃/ml。攪拌下加入濃鹽酸300ml，在70℃水解4小時(shí)，冷卻，過(guò)濾、水洗至pH5-6，得沉淀。沉淀粉碎，加入含5％氫氧化鈉的60％乙醇溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?，濾過(guò)，得堿醇溶液。加鹽酸酸化至pH1-2，產(chǎn)生沉淀，放置過(guò)夜，過(guò)濾，用70％乙醇洗滌，干燥，即得含總游離蒽醌的大黃提取物。按上述方法進(jìn)行化學(xué)成分分析并測(cè)定總游離蒽醌的含量，其主要成分為大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚和蘆薈大黃素等蒽醌衍生物，其總含量≥80％。
取該大黃總游離蒽醌提取物100g和黃芩苷重量含量≥70％的市售黃芩總苷100g，加入乙醇中，加熱溶解，再加入到PEG-6000熔融液中，攪拌混合除去乙醇，待熔融液氣泡除盡，在滴丸機(jī)中制成5000滴丸，即為所述的丸劑型藥物。
以上述兩種有效藥物成分按不同比例組成形式的藥物組合物作為試驗(yàn)藥物，進(jìn)行了防治糖尿病不同慢性并發(fā)癥的藥效學(xué)試驗(yàn)。在試驗(yàn)藥物中，對(duì)大黃總游離蒽醌含量≥80％(重量)的大黃提取物(DH)/黃芩苷含量≥70％(重量)的黃芩總苷(HQ)的組成比例選擇分別為1/0、1/1、1/2、1/3、1/5、1/10和0/1。其中，DH/HQ組成比例中的1/0和0/1，分別相當(dāng)于以其中單一組分的大黃總游離蒽醌或黃芩苷作為有效藥物成分形式的試驗(yàn)藥物，其余各組則均為DH/HQ的混合物組。
1.對(duì)STZ糖尿病大鼠動(dòng)物模型所致腎臟病變的防治作用的試驗(yàn)取體重為200～240g的雄性大鼠，禁食不禁水24小時(shí)后，隨機(jī)分為兩組，即造型組和正常對(duì)照組。給造型組動(dòng)物一次性腹腔注射STZ(鏈尿佐菌素)65mg.kg-1(用0.1mmol.L-1，pH4.0的枸櫞酸緩沖液配制成適宜濃度)，給正常對(duì)照組動(dòng)物注射相同體積的緩沖液；在注射后72小時(shí)測(cè)定其非禁食血糖和尿糖水平，選擇血糖水平在16.7mmol.L-1、尿糖++++的動(dòng)物作為糖尿病腎病模型動(dòng)物；然后將造型成功的動(dòng)物根據(jù)血糖水平和體重隨機(jī)按表1分組灌胃給藥，陽(yáng)性藥組給糖適平20mg.kg-1+卡托普利20mg.kg-1(Glur+Cap)。模型組和對(duì)照組給予相同體積的0.5％CMC(羧甲基纖維素鈉)。每天灌胃給藥一次，連續(xù)8周。在給藥前和給藥后4周測(cè)所有動(dòng)物24小時(shí)的血糖、尿糖等；在給藥后4周測(cè)定所有動(dòng)物的尿微量白蛋白，同時(shí)每組隨機(jī)取5只動(dòng)物測(cè)定其血清肌酐、總蛋白、白蛋白含量等，處死動(dòng)物取腎臟稱重計(jì)算其臟器指數(shù)；同時(shí)用4％多聚甲醛PBS液固定腎組織以便做病理切片檢測(cè)，在給藥后8周時(shí)取各組剩余動(dòng)物進(jìn)行上述指標(biāo)的檢測(cè)。
1.1對(duì)STZ糖尿病大鼠動(dòng)物模型尿微量白蛋白的影響在給藥后4周和8周時(shí)，分別收集各大鼠24小時(shí)尿量，混勻后分別取樣用酶聯(lián)免疫(ELISA)法分別測(cè)定各大鼠的尿微量白蛋白。結(jié)果如表1所示。
表1 對(duì)STZ糖尿病腎病大鼠動(dòng)物模型尿微量白蛋白的影響(x±S)組別 劑量(mg/kg)尿微量白蛋白(μg/24h)(HQ+DH)(HQ/DH)給藥后4周8周Control 0+0 12.8±28***14.5±3.1***Model0+0 458.3±48.7 563.8±44.7HQDH 50+50(1/1) 434.9±36.5 494.7±33.8*HQDH 100+50(2/1) 315.7±31.2***356.3±37.3***HQDH 150+50(3/1) 364.7±28.4***385.7±35.4***HQDH 250+50(5/1) 444.8±49.5 514.3±56.8HQDH 500+50(10/1) 436.8±37.5 523.2±37.8HQDH 50+100(1/2) 478.2±37.1 513.2±39.6HQDH 0+50(0/1)428.3±37.2 531.3±31.7HQDH 0+100(0/2) 436.2±31.5 522.9±33.9HQDH 0+150(0/3) 413.2±41.8 535.7±44.3HQDH 50+0(1/0)448.9±39.7 524.2±34.2HQDH 100+0(2/0) 467.1±41.7 523.8±41.6HQDH 150+0(3/0) 437.9±37.8 513.7±44.1Glur+Cap 20+20324.8±35.9***338.7±30.1***注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表1的結(jié)果顯示，STZ糖尿病大鼠的尿微量白蛋白排出量明顯多于正常對(duì)照組(P＜0.01)，DH、HQ及DH/HQ混合物均可減少STZ糖尿病大鼠的尿微量白蛋白排出量。由DH和HQ單組分組的結(jié)果顯示，在各單組分組中，隨給藥量的增加，對(duì)STZ糖尿病大鼠的尿微量白蛋白排出量的減少并未產(chǎn)生明顯的變化和影響。但適當(dāng)比例形式的DH/HQ混合物組的作用(DH/HQ分別為1/1、1/2、1/3)則均分別優(yōu)于DH或HQ單用組，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，顯示DH和HQ以適當(dāng)形式組合后，在對(duì)減少STZ糖尿病大鼠的尿微量白蛋白排出量方面能具有增強(qiáng)協(xié)同作用。
1.2對(duì)STZ糖尿病大鼠動(dòng)物模型血清肌酐的影響在給藥后4周和8周時(shí)，分別取血清按試劑盒所給方法測(cè)定各大鼠血清肌酐水平，結(jié)果如表2所示。
表2的結(jié)果顯示STZ糖尿病大鼠的血肌酐水平明顯高于正常對(duì)照組，DH、HQ及DH/HQ混合物均可顯著減少STZ糖尿病腎病大鼠的血肌酐水平。由DH和HQ單組分組的結(jié)果顯示，在各單組分組中，隨給藥量的增加，對(duì)STZ糖尿病腎病大鼠的血表2對(duì)STZ糖尿病腎病大鼠動(dòng)物模型血清肌酐的影響(x±S，N＝5)組別 劑量(mg/kg) Crea(μmol.L-1)(HQ+DH)(HQ/DH)4周后8周后Control 0+0113.3±12.8***121.4±11.9***Model0+0294.8±38.5 260.2±15.4HQDH 50+50(1/1) 154.5±17.8***190.3±28.9***HQDH 100+50(2/1)140.3±16.4***175.2±20.2***HQDH 150+50(3/1)141.8±18.9***174.4±13.3***HQDH 250+50(5/1)205.3±27.8*213.7±27.8*HQDH 500+50(10/1) 213.2±19.8*224.8±31.2**HQDH 50+100(1/2)243.5±31.2 254.8±23.8*HQDH 0+50(0/1) 244.9±30.9*247.8±28.4*HQDH 0+100(0/2) 240.3±26.4*245.7±30.2*HQDH 0+150(0/3) 237.8±19.6*241.8±37.6*HQDH 50+0(1/0) 282.8±25.3 275.2±31.2HQDH 100+0(2/0) 273.6±20.1 255.3±21.2HQDH 150+0(3/0) 252.3±24.8 264.9±29.8Glur+Cap 20+20 151.7±21.4***175.9±40.9***注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
肌酐水平的減少并未產(chǎn)生明顯變化和影響。但適當(dāng)比例的DH/HQ混合物組的作用(DH/HQ分別為1/1、1/2、1/3)則均分別優(yōu)于DH或HQ單用組，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，顯示出DH和HQ以適當(dāng)形式組合后，對(duì)STZ糖尿病大鼠腎功能的改善能具有明顯的協(xié)同作用。
1.3對(duì)STZ糖尿病大鼠動(dòng)物模型腎臟指數(shù)的影響在給藥后4周和8周時(shí)，分別處死部分動(dòng)物，稱體重；解剖取腎臟稱濕重，并計(jì)算其臟器指數(shù)。結(jié)果如表3所示。
表3 對(duì)STZ糖尿病腎病大鼠動(dòng)物模型腎臟指數(shù)的影響(x±S，N＝5)組別劑量(mg/kg) 腎臟指數(shù)(g/100g)(HQ+DH)(HQ/DH)After 4Wafter 8WControl 0+0 0.62±0.05**0.67±0.09**Model 0+0 1.34±0.15 2.09±0.52HQDH 50+50(1/1) 1.15±0.14*1.41±0.55HQDH 100+50(2/1) 1.11±0.22*1.29±0.56**HQDH 150+50(3/1) 1.03±0.24*1.37±0.41**HQDH 250+50(5/1) 1.21±0.19 1.79±0.44HQDH 500+50(10/1)1.28±0.23 1.68±0.45HQDH 50+100(1/2) 1.31±0.22 1.69±0.59HQDH 0+50(0/1) 1.37±0.18 1.67±0.45HQDH 0+100(0/2) 1.28±0.20 1.34±0.37HQDH 0+150(0/3) 1.25±0.27 1.57±0.48HQDH 50+0(1/0) 1.34±0.25 1.75±0.38HQDH 100+0(2/0) 1.26±0.33 1.59±0.49HQDH 150+0(3/0) 1.27±0.28 1.66±0.52Glur+Cap20+20 0.92±0.17**1.18±0.32**注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表3結(jié)果顯示STZ糖尿病腎病大鼠的腎臟指數(shù)明顯高于正常對(duì)照組，DH、HQ及DH/HQ混合物和陽(yáng)性藥可顯著降低STZ糖尿病腎病大鼠的腎臟指數(shù)。由DH和HQ單組分組的結(jié)果顯示，在各單組分組中，隨給藥量的增加，對(duì)降低STZ糖尿病腎病大鼠的腎臟指數(shù)也并未產(chǎn)生明顯的影響。但適當(dāng)比例的DH/HQ混合物組的作用(DH/HQ分別為1/1、1/2、1/3)則均分別優(yōu)于DH或HQ單用組，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，顯示出DH和HQ以適當(dāng)形式組合后，在降低STZ糖尿病腎病大鼠的腎臟指數(shù)方面能具有協(xié)同作用。
1.4對(duì)STZ糖尿病大鼠動(dòng)物模型腎小球系膜面積的影響腎小球系膜面積的測(cè)定取給藥后2個(gè)月的大鼠腎臟，每組5只，用4％多聚甲醛固定后，切片，PAS、HE雙重染色后，組織切片在尼康E600顯微鏡下(400倍)，用SPOT Cool CCD攝像頭進(jìn)行圖象采集(每張切片采圖10個(gè)結(jié)構(gòu)完整的腎小球)，然后用image pro plus 4，10圖象分析軟件。測(cè)定各腎小球面積和系膜面積及其IOD值(IOD即積分光密度值，為被測(cè)物體面積與平均光密度的乘積)并計(jì)算其系膜面積/腎小球面積的比值，結(jié)果如表4所示。
表4 對(duì)STZ糖尿病腎病大鼠動(dòng)物模型腎小球系膜面積的影響(x±S，N＝5)組別 劑量(mg/kg) mesangium area IOD mesangium area(HQ+DH)(HQ/DH)(×103U)(×103U)glomerular areaControl 0+0 26.8±10.8***53.7±34.3*0.36±0.09***Model 0+0 47.1±18.2163.2±20.4 0.53±0.19HQDH50+50(1/1)39.4±14.5**61.3±32.2**0.45±0.13*HQDH100+50(2/1) 36.2±14.5**51.9±32.2**0.44±0.12**HQDH150+50(3/1) 37.7±13.2*54.3±28.7**0.42±0.12**HQDH250+50(5/1) 44.3±18.8149.8±45.1 0.49±0.19HQDH500+50(10/1) 43.6±16.9156.2±26.7 0.58±0.15HQDH50+100(1/2) 49.6±16.9172.1±28.1 0.58±0.15HQDH0+50(0/1) 46.2±15.8189.4±26.7 0.51±0.17HQDH0+100(0/2)41.2±17.9145.2±31.2 0.48±0.19HQDH0+150(0/3)39.8±29.4144.7±29.8 0.47±0.16HQDH50+0(1/0) 36.0±28.098.2±37.6 0.49±0.21HQDH100+0(2/0)41.3±17.6103.7±29.4 0.44±0.22HQ；DH150+0(3/0)39.7±21.597.6±35.1 0.58±0.21Glur+Cap 20+20 39.1±14.8*80.4±80.9**0.51±0.23注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表4的結(jié)果顯示，STZ糖尿病腎病大鼠的腎小球系膜面積及其IOD值以及系膜面積/腎小球面積的比值等均顯著增加。由DH和HQ單組分組的結(jié)果顯示，在各單組分組中，隨給藥量的增加，對(duì)減少STZ糖尿病腎病大鼠腎小球系膜面積及其IOD值以及系膜面積/腎小球面積并沒(méi)有產(chǎn)生顯著性的影響。但適當(dāng)比例的DH/HQ混合物組的作用(DH/HQ分別為1/1、1/2、1/3)則均分別優(yōu)于DH或HQ單用組，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，顯示DH和HQ以適當(dāng)形式組合后，在減少STZ糖尿病腎病大鼠腎小球系膜面積及其IOD值以及系膜面積/腎小球面積等方面能具有協(xié)同增強(qiáng)作用。
2.對(duì)STZ糖尿病大鼠動(dòng)物的死亡率和白內(nèi)障發(fā)生率的影響試驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)期間，仔細(xì)記錄各組動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)期間的死亡情況及眼白內(nèi)障的發(fā)生情況，結(jié)果如表5所示。
表5 對(duì)STZ糖尿病大鼠動(dòng)物死亡率、白內(nèi)障發(fā)生率的影響(x±S)劑量(mg/kg) 死亡情況白內(nèi)障發(fā)生組別(HQ+DH) N 動(dòng)物數(shù) 死亡率 動(dòng)物數(shù) 發(fā)生率(HQ/DH) (只)(％)(只) (％)Control 0+0 10 0*0*0*0*Model 0+0 22 12 54.5 12 54.5HQDH 50+50(1/1)20 5 25.0 315.0HQDH 100+50(2/1) 20 2*10.0*0**0**HQDH 150+50(3/1) 20 4*20.0*2*10.0*HQDH 250+50(5/1) 20 6 30.0 2*10.0*HQDH 500+50(10/1) 20 8 40.0 315.0HQDH 50+100(1/2) 20 8 40.0 525.0HQDH 0+50(0/1) 20 8 40.0 10 50.0HQDH 0+100(0/2)20 7 35.0 840.0HQDH 0+150(0/3)20 7 35.0 945.0HQDH 50+0(1/0) 20 1 55.0 735.0HQDH 100+0(2/0)20 10 50.0 630.0HQDH 150+0(3/0)20 10 50.0 525.0Glur+Cap20+20 20 4*20.0 2*10.0*注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表5的結(jié)果顯示，STZ糖尿病大鼠在實(shí)驗(yàn)期間的死亡發(fā)生率和白內(nèi)障的發(fā)生率等均顯著增加。由DH和HQ單組分組的結(jié)果顯示，在各單組分組中，隨給藥量的增加，在減少STZ糖尿病大鼠的死亡率和白內(nèi)障發(fā)生率方面均沒(méi)有能產(chǎn)生顯著性的改善影響。但適當(dāng)比例的DH/HQ混合物組的作用(DH/HQ分別為1/1、1/2、1/3)，則均分別優(yōu)于DH或HQ單用組，特別是其中HQ/DH＝2/1組的死亡率及白內(nèi)障發(fā)生率還均明顯低于其他組，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，提示DH與HQ以適當(dāng)形式組合后，對(duì)防治STZ糖尿病大鼠的死亡及白內(nèi)障的形成有明顯的協(xié)同和增強(qiáng)作用。
在上述試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，以本發(fā)明上述HQ/DH(2/1)組合形式的試驗(yàn)藥物進(jìn)一步進(jìn)行了以下的相關(guān)試驗(yàn)。
3.急性毒性試驗(yàn)對(duì)小鼠以灌胃方式給以試驗(yàn)藥物，測(cè)得其LD50大于6.5g/kg，但未測(cè)出其LD50。除動(dòng)物出現(xiàn)拉稀大便等不良反應(yīng)外，未見(jiàn)明顯其它的不良反應(yīng)。
4.對(duì)STZ糖尿病大鼠的部分其它主要藥效學(xué)指標(biāo)的影響試驗(yàn)取體重為200～240g的雄性大鼠，禁食不禁水24小時(shí)后，隨機(jī)分為兩組，即造型組和正常對(duì)照組。給造型組動(dòng)物一次性腹腔注射STZ 65mg.kg-1(用0.1mmol.L-1，pH4.0的枸櫞酸緩沖液配制成適宜濃度)，給正常對(duì)照組動(dòng)物注射相同體積的緩沖液；在注射后72小時(shí)測(cè)定其非禁食血糖和尿糖水平，選擇血糖水平在16.7mmol.L-1、尿糖++++的動(dòng)物作為糖尿病腎病模型動(dòng)物；然后將造型成功的動(dòng)物根據(jù)血糖水平和體重隨機(jī)按表5分組，分別灌胃試驗(yàn)藥物75mg/kg、150mg/kg、300mg/kg，陽(yáng)性藥組給糖適平20mg.kg-1+卡托普利20mg.kg-1。模型組和對(duì)照組給予相同體積的0.5％CMC。每天灌胃給藥一次，連續(xù)8周。在實(shí)驗(yàn)期間，記錄各組動(dòng)物的死亡數(shù)及動(dòng)物出現(xiàn)白內(nèi)障的時(shí)間，在給藥后8周測(cè)定所有動(dòng)物的尿微量白蛋白(μAlb)、尿肌酐(Crea)、血清肌酐(Crea)、血清尿素(BUN)、總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)含量及甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、極低密度脂蛋白(VLDL)、高密度脂蛋白(HDL)及低密度脂蛋白(LDL)等，處死動(dòng)物取腎臟稱重計(jì)算其臟器指數(shù)。結(jié)果如表6～表10所示。
表6 試驗(yàn)藥物對(duì)STZ糖尿病腎病大鼠動(dòng)物模型腎臟指數(shù)的影響(x±S)組別 劑量 N 腎臟指數(shù)(g/100g)(mg.kg-1)Control 100.60±0.03**Model101.33±0.32試驗(yàn)藥物 75 101.19±0.36試驗(yàn)藥物 150101.10±0.19*試驗(yàn)藥物 300101.05±0.21*Glur+Cap 20+20 101.03±0.18*注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表6的結(jié)果顯示，模型組動(dòng)物的腎臟指數(shù)明顯增加，與對(duì)照組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；試驗(yàn)藥物可顯著對(duì)抗糖尿病腎病大鼠的腎臟腫大，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；其作用與陽(yáng)性藥相似。
表7 試驗(yàn)藥物對(duì)STZ糖尿病大鼠尿蛋白排泄量的影響(x±S)組別劑量NTP TP/CreauAlb/Crea(mg.kg-1) (g/L)g/mmol ug/mmolControl 10 3.9±1.4**1.5±0.4**6.1±5.8*Model 10 8.6±2.8 18.2±9.7 51.8±52.9試驗(yàn)藥物75 10 6.2±3.8 12.4±9.2 40.8±35.9試驗(yàn)藥物150 10 8.5±2.3 16.3±8.8 44.2±36.1試驗(yàn)藥物300 10 5.3±2.4*9.3±7.6*10.1±10.0*Glur+Cap20+20 10 8.6±3.8 15.1±10.0 45.5±71.6注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表7的結(jié)果顯示試驗(yàn)藥物可顯著降低STZ糖尿病大鼠總蛋白排泄量及尿微量蛋白的排泄率，其作用明顯優(yōu)于陽(yáng)性藥。
表8 試驗(yàn)藥物對(duì)STZ糖尿病大鼠血脂的影響(N＝10，x±S)組別 劑量 TC HDLLDL VLDL TC/HDL(mg·kg-1) (mmol/L)(mmol/L) (mmol/L)(mmol/L)Control 1.8±0.5**0.8±0.1 0.3±0.4**1.5±0.2**2.4±0.5Model 3.6±1.70.9±0.3 1.3±1.12.4±0.5 6.6±8.2試驗(yàn)藥物 75 2.6±0.50.9±0.3 1.1±0.51.6±0.3**3.1±0.7試驗(yàn)藥物 150 3.4±1.80.8±0.2 1.0±1.02.3±0.9 5.8±7.0試驗(yàn)藥物 300 2.8±0.80.9±0.3 1.2±0.61.6±0.3**3.7±2.1Glur+Cap 20+203.1±1.20.8±0.1 1.0±0.72.0±0.7 3.9±1.5注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表8的結(jié)果顯示試驗(yàn)藥物可顯著降低STZ糖尿病大鼠血清極低密度脂蛋白(VLDL)水平，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其作用明顯優(yōu)于陽(yáng)性藥，。
表9 試驗(yàn)藥物對(duì)STZ糖尿病大鼠腎功能的影響(N＝10，x±S)組別劑量 血肌苷BUN BUN/Crea 內(nèi)生肌苷(mg.kg-1) (mmol/L) (mmol/L)清除率Control 0.12±0.01*8.5±1.1*73.6±13.5*8.8±2.3**Model0.13±0.0119.4±11.3 145.7±84.115.4±6.6試驗(yàn)藥物75 0.13±0.0110.9±6.480.7±42.2 22.2±38.2試驗(yàn)藥物150 0.14±0.039.2±2.3**66.0±14.7*15.1±8.1試驗(yàn)藥物300 0.13±0.037.9±0.3**60.8±22.6*22.6±31.7Glur+Cap20+200.13±0.0110.7±3.4*80.0±21.8*12.9±3.9注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表9的結(jié)果顯示試驗(yàn)藥物可顯著降低STZ糖尿病大鼠血清尿素水平及血清尿素與血清肌苷比值，其作用與陽(yáng)性藥的作用相似，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示試驗(yàn)藥物可顯著改善糖尿病大鼠的腎功能。
表10 試驗(yàn)藥物對(duì)STZ糖尿病大鼠的影響(x±S)組別劑量 N死亡數(shù) 死亡率 白內(nèi)障 白內(nèi)障發(fā)生率(mg.kg-1) (只) (％)(只)(％)Control 22 00 0 0Model 25 13 52 9 36試驗(yàn)藥物7521 419 2 9.5試驗(yàn)藥物150 20 420 1 5.0試驗(yàn)藥物300 22 418.2*0*0*Glur+Cap20+20 21 419.00*0*注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表10的結(jié)果顯示試驗(yàn)藥物可顯著降低STZ糖尿病大鼠的死亡率，降低其白內(nèi)障發(fā)生率，其作用與陽(yáng)性藥的作用相近。
上述試驗(yàn)結(jié)果均顯示以大黃總游離蒽醌(DH)與黃芩苷(HQ)為有效藥物成分的本發(fā)明藥物組合物，其毒性甚??；對(duì)STZ大鼠的死亡率有顯著的降低作用，并可顯著減少STZ大鼠白內(nèi)障的發(fā)生率；對(duì)STZ大鼠的尿微量蛋白排出量、尿總蛋白含量及尿總蛋白排泄率、血清尿素水平、BUN/Crea比值、血清VLDL水平、腎臟指數(shù)、腎小球面積等方面也均有顯著的改善作用，該兩類成分以適當(dāng)形式的組合，并可以產(chǎn)生顯著的增強(qiáng)協(xié)同作用，表明了本發(fā)明的藥物組合物在防治糖尿病的多種慢性并發(fā)癥，特別是在對(duì)如糖尿病微血管病變、糖尿病腎病及糖尿病眼病等方面，具有顯著的意義和價(jià)值。
權(quán)利要求
1.治療糖尿病慢性并發(fā)癥的藥物組合物，其特征是以大黃總游離蒽醌與黃芩苷為有效藥物成分，與藥物中可以接受的輔助添加成分組成，大黃總游離蒽醌/黃芩苷的重量比為1/1～1/5。
2.如權(quán)利要求1所述的治療糖尿病慢性并發(fā)癥的藥物組合物，其特征是所說(shuō)的有效藥物成分中大黃總游離蒽醌與黃芩苷的重量比為1/2～1/3。
3.如權(quán)利要求1所述的治療糖尿病慢性并發(fā)癥的藥物組合物，其特征是所說(shuō)有效藥物成分允許采用大黃總游離蒽醌的重量含量≥80％形式的大黃提取物和/或黃芩苷的重量含量≥70％形式的黃芩總苷。
4.如權(quán)利要求1至3之一所述的治療糖尿病慢性并發(fā)癥的藥物組合物，其特征是所說(shuō)的藥物為口服型制劑。
5制備權(quán)利要求1所述治療糖尿病慢性并發(fā)癥藥物組合物中有效藥物成分大黃總游離蒽醌的方法，其特征是將以含乙醇0-95％的水溶液對(duì)大黃藥材加熱回流提取后，過(guò)濾并除去濾液溶媒得到浸膏體，將浸膏體于溫度50℃-100℃和pH＜1的酸性條件下進(jìn)行水解后，將水解沉淀物置于pH＞14和體積含量為50％-80％的堿性乙醇水溶液中攪拌溶解，將除去沉淀后的該堿性含醇濾液再酸化至pH1-5，其沉淀物即為大黃總游離蒽醌的重量含量≥80％的大黃提取物。
6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征是所說(shuō)的對(duì)來(lái)自大黃藥材的浸膏體的水解采用按100g大黃藥材原料加重量體積比為1～10％的酸，在50-100℃條件下處理1-10小時(shí)。
7.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征是水解用的酸為鹽酸或硫酸。
8.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征是所說(shuō)的pH＞14的堿性乙醇水溶液為含有重量比為1-8％的氫氧化鈉或氫氧化鉀的乙醇溶液。
9.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征是對(duì)所說(shuō)的堿性含醇濾液用鹽酸進(jìn)行酸化。
10.如權(quán)利要求5至9之一所述的制備方法，其特征是對(duì)由酸化溶液中過(guò)濾得到所說(shuō)的含大黃總游離蒽醌的提取物后，再用含量為50-95％的乙醇進(jìn)行洗滌。
全文摘要
治療糖尿病慢性并發(fā)癥的藥物組合物，以大黃總游離蒽醌與黃芩苷為有效藥物成分，與藥物中可以接受的輔助添加成分組成，大黃總游離蒽醌/黃芩苷的重量比為1/1～1/5。其中有效藥物成分大黃總游離蒽醌的制備方法，是將以含乙醇0－95％的水溶液對(duì)大黃藥材加熱提取得到的浸膏體于50℃－100℃和pH＜1的酸性條件下進(jìn)行水解后，將其水解沉淀物置于體積含量為50％－80％的堿性乙醇水溶液中攪拌溶解，再將除去沉淀后的堿性含醇濾液再酸化至pH 1－5，沉淀物即為大黃總游離蒽醌的重量含量≥80％的大黃提取物。該藥物組合物可具有顯著防治包括糖尿病腎病、糖尿病眼病等多種糖尿病微血管病變所致的慢性并發(fā)癥。
文檔編號(hào)A61P3/00GK1589879SQ200410021828
公開(kāi)日2005年3月9日 申請(qǐng)日期2004年2月16日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月16日
發(fā)明者譚正懷, 易進(jìn)海 申請(qǐng)人:四川省中藥研究所