專利名稱：化橘紅中活性成分揮發(fā)油在制藥中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及化橘紅中活性成分揮發(fā)油的用途，尤其涉及在制藥中的用途。
背景技術：
化橘紅為蕓香科植物化州柚Citrus grandis‘Tomentosa’或柚Citrus grandis(L.)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外層果皮。前者習稱“毛橘紅”，后者習稱“光七爪”“光五爪”。具散寒，燥濕，利氣，消痰之功效。用于風寒咳嗽，喉癢痰多，食積傷酒，嘔惡痞悶。[1]化橘紅為廣東省名貴的地道藥材，其主要化學成分有揮發(fā)油、黃酮、多糖等，關于化橘紅止咳化痰的活性成分，說法不一至。周榮漢等認為，其黃酮類成分是消炎、止咳、平喘活性成分[2]；周博文等認為多糖是祛痰鎮(zhèn)咳作用的活性成分之一[3]；化橘紅揮發(fā)油含有51個成分，已鑒定出28個成分，其化學組成以單萜類及其衍生物為主體，含量較高的成分有D-檸檬烯(53.57％)、3-蒈烯(15.62％)、β-月桂烯(8.17％)、α-蒎烯(1.09％)、β-蒎烯(0.60％)、2-蒈烯(1.76％)等[4]。目前，對化橘紅揮發(fā)油的止咳化痰作用尚未有研究報導。為此，有必要對化橘紅的止咳化痰作用的活性成分進行進一步研究。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供化橘紅中活性成分揮發(fā)油的新用途，即在制藥中的新應用。
實際上，本發(fā)明涉及化橘紅中活性成分作為制備治療或預防止咳化痰藥中的應用。
同時，化橘紅中具有止咳化痰作用的必要活性成分是化橘紅揮發(fā)油。其可用于制成具有止咳化痰作用的單方或復方藥物。
為了更好地理解本發(fā)明的實質，下面將用化橘紅不同提取物的止咳化痰活性研究來說明其在制藥領域中的新用途。
1.氨水引咳法鎮(zhèn)咳試驗1.1試驗材料1.1.1受試藥物化橘紅揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物，化橘紅總黃酮，化橘紅多糖，本室自制；陽性對照藥金蕎麥片，批號021105，南通精華制藥有限公司；陰性對照藥0.5％CMC-Na溶液。
1.1.2揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物的制備稱取化橘紅藥材顆粒300g，加10倍量水浸泡過夜，在揮發(fā)油提取器中提取揮發(fā)油6小時，收集油水混合液，乙醚萃取，回收乙醚，得化橘紅揮發(fā)油0.4ml，用4gβ-環(huán)糊精進行包合，得化橘紅揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物4g。
1.1.3總黃酮及總多糖的制備將1.1.2項下水提液過濾，藥渣續(xù)用10倍量水提取1小時，過濾，合并濾液，減壓濃縮，得濃度為1g生藥/ml水液，上D101大孔樹脂柱，先用水洗脫至無色，收集合并水洗脫液，減壓濃縮至比重為1.05水液，用5倍量酒精醇沉，靜置24小時，抽濾，用95％乙醇洗滌，干燥，得化橘紅多糖35.4g。水洗脫盡多糖類成分后，改用70％乙醇進行洗脫，收集洗脫液，合并，濃縮，干燥，得化橘紅總黃酮粉末12g。
1.1.4其余試劑為市售分析純試劑。
1.1.5動物昆明種小鼠，雄性，18～22g。
1.2方法與結果小鼠隨機分為化橘紅揮發(fā)油、化橘紅總黃酮、化橘紅多糖、金蕎麥組和陰性對照組，分別灌胃給予小鼠化橘紅揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物0.9mg/kg，化橘紅總黃酮3mg/kg，化橘紅多糖10mg/kg和金蕎麥1.2片/kg及同體積空白溶媒。連續(xù)三天，每日一次，末次給藥前15小時給小鼠禁食，末次給藥后1hr將小白鼠置于500ml玻璃鐘罩內，通過空氣壓縮機連接玻璃噴霧頭，以400mmHg恒壓將濃氨水(25～28％氫氧化銨)均勻地噴入鐘罩內，持續(xù)5s，觀察并記錄小鼠的咳嗽潛伏期及兩分鐘內的咳嗽次數(shù)，作為指標。結果見表1。
表1.化橘紅提取物對小鼠氨水致咳作用的影響(n＝10)組別 劑量(mg/kg) 潛伏期(s) 咳嗽次數(shù)(次/2min)陰性對照-- 35.3±9.7 51.6±18.2化橘紅揮發(fā)油1.8 45.1±5.6*37.5±9.9*化橘紅總黃酮6.0 43.0±11.2 45.9±14.4化橘紅總多糖20.0 45.7±14.8 43.6±9.7金蕎麥片 0.004片/只 56.3±15.9*28.9±13.1**p＜0.05，與陰性對照組比注化橘紅各給藥組劑量均相當于0.2g生藥/kg小鼠。
2.酚紅排泌法祛痰試驗2.1試驗材料。
2.1.1受試藥物同前2.1.2藥品及儀器酚紅，NaHCO3，NaOH，生理鹽水，752分光光度計，手術剪，眼科鑷，小試管2.1.3動物昆明種小鼠，雄性，18～22g2.2酚紅標準曲線的制備精密稱取酚紅5.2mg，置50ml容量瓶中，5％NaHCO3溶液定容至刻度，作為對照品溶液(104μg/ml)。量取對照品溶液1ml，置10ml容量瓶中，5％NaHCO3溶液定容至刻度，搖勻。再分別精密吸取1，2，3，4，5，6ml于5％NaHCO3溶液25ml中定容至刻度，搖勻，得濃度分別為1.664，3.328，4.992，6.656，8.320，9.984μg/ml酚紅溶液。以5％NaHCO3為空白，在558nm下測定A值，經(jīng)回歸得標準曲線方程A＝0.0748C-0.0002，r＝0.9998(Cμg/ml)，酚紅在1.664～9.984μg/ml范圍內線性良好。
2.3方法與結果小鼠隨機分組、給藥同1.2。末次給藥后30min每鼠ip5％酚紅生理鹽水溶液500mg/kg，30min后處死小鼠，分離氣管，取氣管一段，放入2ml5％NaHCO3溶液中浸泡，振搖，放置待沉淀后取上清液于558nm測定A值，帶入標準曲線方程計算酚紅濃度，為呼吸道分泌作用的指標。結果見表2。
表2.化橘紅提取物對小鼠呼吸道分泌的影響(n＝10)組別劑量(mg/kg)A酚紅濃度(μg/m)陰性對照 -- 0.1 94±0.0462.60±0.61化橘紅揮發(fā)油1.8 0.291±0.063***3.90±0.849***化橘紅總黃酮6.0 0.215±0.044 2.87±0.59化橘紅總多糖20.00.223±0.050 2.99±0.67金蕎麥片0.004片/只 0.247±0.023**3.30±0.31****p＜0.01，與陰性對照組比注化橘紅各給藥組劑量均相當于0.2g生藥/kg小鼠。
上述實驗結果表明，化橘紅揮發(fā)油具有良好的止咳化痰作用，是化橘紅中具有止咳化痰作用的必要活性成分。
具體實施例方式
實施例1化橘紅揮發(fā)油的制備稱取化橘紅藥材300g(粉碎成粗顆粒)，加10倍量水浸泡過夜，在揮發(fā)油提取器中提取揮發(fā)油6小時，收集油水混合液，乙醚萃取，回收乙醚，得化橘紅揮發(fā)油0.4ml。
實施例2化橘紅揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物的制備稱取β-環(huán)糊精6～12g，加入等量蒸餾水，用研棒順時針攪勻，將化橘紅揮發(fā)油1ml(已用0.8ml95％乙醇溶解)逐滴加入，邊加邊順時針攪拌，加完后繼續(xù)攪拌30min至近干，于40℃下真空干燥，得β-環(huán)糊精包合物6～12g。
實施例3化橘紅揮發(fā)油制劑取化橘紅揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物10g，加淀粉90g，混合均勻，制粒后真充膠囊或制成片劑。
實施例4化橘紅揮發(fā)油制劑取化橘紅揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物15g，加淀粉85g，混合均勻，制粒后真充膠囊或制成片劑。
實施例5化橘紅揮發(fā)油制劑取化橘紅揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物20g，加淀粉80g，混合均勻，制粒后真充膠囊或制成片劑。
實施例6化橘紅揮發(fā)油制劑取化橘紅揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物30g，加淀粉70g，混合均勻，制粒后真充膠囊或制成片劑。
參考文獻1、中華人民共和國藥典委員會.《中華人民共和國藥典》2000年版一部[S].北京化學工業(yè)出版社，200056-572、周榮漢，等.藥用植物化學分類學[S]，1988873、周博文，胡文雅，吳俊景.化州橘紅多糖的藥用研究.中國藥學雜志[J]；1993，28(3)135-1364、徐國鈞，徐珞珊，王崢濤主編.常用中藥材品種整理和質量研究南方協(xié)作組(第四冊)[S]，福州福建科學技術出版社，2001，437-46權利要求
1.化橘紅中活性成分揮發(fā)油在制備治療或預防止咳化痰藥中的應用。
全文摘要
本發(fā)明對化橘紅中主要成分揮發(fā)油、總黃酮、總多糖的止咳化痰作用進行了研究，結果表明揮發(fā)油是化橘紅中具有止咳化痰作用的必要活性成分，其可用于制成具有止咳化痰作用的單方或復方藥物。
文檔編號A61P11/14GK1559515SQ200410014069
公開日2005年1月5日 申請日期2004年2月16日 優(yōu)先權日2004年2月16日
發(fā)明者韋英杰, 舒斌, 蘇國強 申請人:江蘇省藥物研究所